You are on page 1of 282

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS

Jos Benito Vives De Andris INVEMAR


Vinculado al Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial

Programa CALIDAD AMBIENTAL MARINA CAM

MANUAL DE TCNICAS
ANALTICAS PARA LA DETERMINACIN
DE PARMETROS FISICOQUMICOS
Y CONTAMINANTES MARINOS
(AGUAS, SEDIMENTOS Y ORGANISMOS)
PRESENTACIN

El progreso al que nos vemos abocados hoy, ha trado consigo cambios en el aspecto
de este planeta y efectos ambientales de diversas dimensiones y Colombia no ha sido
ajena a esta realidad. Muchas de las actividades que hacemos a diario deterioran los
recursos y son quizs, los ecosistemas marinos, los ms afectados.

Las ciudades costeras vierten a nuestros mares desechos y aguas residuales, las
industrias aportan materia orgnica, y sustancias como hidrocarburos y metales
pesados y por los ros escurren txicos, producto de la actividad agrcola. Ahora nos
vemos forzados a investigar las consecuencias ambientales de tales acciones: es
necesario monitorear y evaluar nuestro entorno.

El diseo del proyecto REDCAM, (Red de Vigilancia de la Calidad Ambiental Marina),


ha buscado tal fin; tomar, recopilar, sistematizar y analizar informacin sobre la
calidad de las aguas marinas y costeras, considerando una serie de variables
fisicoqumicas y contaminantes, las cuales permiten llegar a con-clusiones y
presentar o no alertas a la comunidad. De manera organizacional esta RED la
conforman 16 nodos (CAR costeras, DAMA e institutos), enlazados a un servidor
central en el INVEMAR, Santa Marta, muchos de ellos generadores de informacin
primaria proveniente de sus laboratorios.

Por esta razn, la multiplicidad de entidades y tcnicas analticas y en vista de la


poca existencia de textos actualizados en espaol, que contribuyan al conocimiento y
valoracin del entorno marino-costero; han llevado al INVEMAR por medio del
Programa de Calidad Ambiental Marina, ha generar este documento, para servir de
instruccin no slo al personal que desarrolla anlisis rutinarios de muestras
ambientales en los laboratorios del sistema REDCAM, sino, a otras instituciones,
estudiantes y tcnicos interesados en la investigacin cientfica marina.
Capitn de Navo FRANCISCO A.
ARIAS ISAZA
Director
General
INVEMA
R
4. Transparencia........................................
26

SLIDOS..........................................................
29

NDICE 1. Slidos totales a


103 - 105C.....................................................
30

2. Slidos totales en
suspensin (seco a
103 105 C).................................................
32
INTRODUCCIN
.......................................................................................................................
11 3. Slidos fijos y
voltiles totales a
550C..................................................................
34
TCNICAS DE MUESTREO
.......................................................................................................................
13

1. Recoleccin de muestras
13

2. Recipientes para muestras


16

3. Preservacin de muestras
18

Parmetros in situ
.......................................................................................................................
21

1. TEMPERATURA
21

2. pH
22

3. Salinidad
24
Instituto de Investigaciones Marinas y Costeras
Jos Benito Vives De Andris
INVEMAR
Vinculado al Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial

Director General
Capitn de Navo
Francisco A. Arias Isaza

Subdirector Coordinacin
de Investigaciones (SCI)
Jess Antonio Garay Tinoco

Subdirector de Recursos
y Apoyo a la Investigacin (SRAI)
Carlos Augusto Pinilla Gonzlez

Coordinador Programa Biodiversidad


y Ecosistemas Marinos (BEM)
Juan Manuel Daz Merlano

Coordinador (E) Programa


Valoracin y Aprovechamiento
de Recursos Marinos (VAR)
Roberto Federico Newmark U.

Coordinador (E) Programa


Calidad Ambiental Marina (CAM)
Jess Antonio Garay Tinoco

Coordinadora Programa de Investigacin


para la Gestin en Zonas Costeras (GEZ)
Paula Cristina Sierra Correa

Direccin general y edicin


Jess Garay Tinoco. Qumico, M.Sc. Gustavo Ramrez T. Qumico, M.Sc. Julin M. Betancourt P. Ing. Qumico, Esp.

Participantes
Bienvenido Marn S. Qumico, Dr.rer.nat.
Betty Cadavid. Qumica Farmacutica,
Cand. M.Sc.
Lorenzo Panizzo D. Qumico, M.Sc.
Luis Lesmes. Qumico, M.Sc.
Jorge E. Sanchez S. Ing. Qumico
Harold Lozano. Qumico
Andrs Franco. Bilogo Marino, Cand. M.Sc.

Diseo y diagramacin
Ed. Precolombi - David Reyes

Impreso por
Cargraphics - Impresin Digital

Santa Marta, DTCH Julio de 2003 www.invemar.org.co


4. Slidos sedimentables
35

5. Slidos disueltos totales a 180 C


37

NUTRIENTES MARINOS
........................................................................................................................
39

1. Determinacin de amonio (mtodo del azul de


indofenol)
................................................................................................................
40

2. Determinacin de nitritos
43

3. Determinacin de nitrato (reduccin con Cd)


46

4. Determinacin de nitrato por espectrometra


ultravioleta
................................................................................................................
50

5. Determinacin del fsforo reactivo


53

6. Determinacin de silicato (mtodo del metol)


56

7. Determinacin de silicato (mtodo de Koroleff)


59

8. Determinacin del nitrgeno total (NTK)


62

9. Determinacin del fsforo total


66

OXGENO DISUELTO Y CLOROFILAS


........................................................................................................................
71

1. Determinacin de oxgeno disuelto (mtodo


Winkler) .
71

2. Determinacin de clorofilas (mtodo Stricklan y


Parson)
................................................................................................................
75

3. Determinacin de clorofila a y feopigmentos


(mtodo de Lorenzen)
................................................................................................................
77

4. Determinacin fluoromtrica de clorofila a y


feopigmentos ............................................................
........

79
CONTENIDO DE MATERIA ORGNICA
.......................................................................................................................
83

1. Determinacin de la demanda bioqumica de


oxgeno
(DBOn)
................................................................................................................
84

2. Determinacin de la materia orgnica en agua de


mar
por oxidacin con permanganato en medio alcalino
................................................................................................................
87

3. Demanda qumica de oxgeno (DQO)


91

4. Materia orgnica en suelos y sedimentos, mtodo


de
oxidacin con dicromato (BS 1377:1975)
................................................................................................................
95

COMPUESTOS TXICOS QUMICOS


.......................................................................................................................
99

1. Hidrocarburos disueltos y dispersos en aguas


(CARIPOL, 1980)
................................................................................................................
99

2. Determinacin de hidrocarburos en sedimentos y


organismos marinos (UNESCO/IOCARIBE, 1986)
..............................................................................................................
105

3. Determinacin de plaguicidas organoclorados en


aguas (mtodo EPA, 1980)
..............................................................................................................
111

4. Determinacin de plaguicidas organoclorados en


sedimentos (metodo EPA, 1980)
..............................................................................................................
117

5. Determinacin de plaguicidas organoclorados en


organismos (mtodo EPA, 1980 )
..............................................................................................................
121

6. Determinacin de plaguicidas organoclorados


(mtodos referencia unesco, 1996)
..............................................................................................................
124

7. Determinacin de metales en aguas (EPA, 1980)


127

8. Determinacin de metales en sedimentos


132

9. Determinacin de metales en organismos


135
ANEXOS
.....................................................................................................................
139

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
.....................................................................................................................
147
INTRODUCCIN
niveles y valores de parmetros
ambientales, pues cuentan con sus
propios laboratorios para los anlisis
fisicoqumicos y microbiolgicos en las
aguas de su jurisdiccin.

Dentro del Instituto de Investigaciones


Marinas y Costeras, Jos Benito Vives
de Andris-INVEMAR, el Programa de
Calidad Ambiental Marina-CAM, es uno
de los ms recientes, pero quizs
tambin el de mayor proyeccin a nivel
nacional. Esta pro-yeccin se ha logrado,
gracias entre otros a la eje-cucin del
proyecto Diagnstico y evaluacin de la
calidad ambiental marina en el Caribe y
Pacfi-co colombiano. Red de vigilancia
para la conserva-cin y proteccin de las
aguas marinas y costeras de Colombia-
REDCAM, el cual se inici en Diciem-bre
de 2000 y con el tiempo se convirti en
una actividad permanente del Instituto,
consolidndose como el de mayor
impacto dentro de los ejecutados en los
ltimos cinco aos al interior del Sistema
Nacional Ambiental-SINA.

REDCAM es un sistema diseado para la


toma, recopilacin, sistematizacin y
anlisis de informa-cin sobre la calidad
de las aguas marinas y cos-teras,
conformado por 16 nodos (CAR costeras,
DAMA e Institutos), enlazados a una
sede central en el INVEMAR, Santa
Marta. En todos los nodos se genera
informacin secundaria y en algunos,
informacin primaria relacionada con
En desarrollo de estos estudios se
consideran una serie de variables, las
cuales permiten llegar a con-clusiones y
presentar o no alertas a la comunidad.
Por esta razn y confiando en desarrollar
Una parte importante de las
una fun-cin con un alto grado de
conclusiones emana-das del trabajo
aseguramiento de cali-dad, el Programa
cientfico y xito de REDCAM se
Calidad Ambiental Marina, ha generado
fundamenta en la calidad analtica de los
este documento, para servir de instruc-
resulta-dos; por consiguiente, la
cin no slo al personal que desarrolla
trazabilidad en la obten-cin de la
anlisis rutinarios de muestras
informacin es fundamental. La multi-
ambientales en los laborato-rios del
plicidad de organizaciones involucradas
INVEMAR, las CAR, los DAMA y los
en este proyecto, y el hecho de que para
institu-tos del SINA, sino a otras
la evaluacin de estos parmetros se
instituciones que desa-rrollan
disponga de numerosas tcni-cas que
investigacin cientfica marina.
usualmente estn basadas en los mismos
principios, hace necesario realizar
Si bien existen documentos como el
procesos de es-tandarizacin y/o
Standard Methods y normas como las
modificaciones para as cumplir con los
American Society for
requisitos de selectividad, sensibilidad y
precisin fijados en las normas
internacionales.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 11


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Testing & Materials (ASTM), U.S. Para quien es este libro


Environmental Protection Agency (EPA)
o UNESCO, expedidas por organismos Este libro esta pensado para ser usado
internacionales muy reconocidos en como tex-to de consulta y gua didctica
asuntos ambientales, en este manual se por el personal que realiza anlisis
retoman pero con modificaciones hechas ambientales en el pas, en es-pecial a las
para las condi-ciones fsicas y entidades que desarrollan estudios en
tecnolgicas con que cuentan los zonas costeras y aguas marinas, las CAR
laboratorios del pas. Se han adaptado costeras y los institutos de
siguiendo principalmente las investigaciones marinas, pero esto no
recomendaciones de Strickland y priva a estudiantes y tcnicos que
Parsons para el anlisis fisicoqumico de puedan acceder a su consulta.
aguas, as como los mtodos de
referencia para el estu-dio de la El manual presenta un esquema muy
contaminacin marina documentados por general, inicia con una breve
UNESCO, United Nations Environment introduccin en la cual se expone el
Programme (UNEP), Intergovernmental alcance y la aplicacin de cada mtodo,
Oceanographic Comi-sin (IOC), luego se listan los materiales, equipos y
International Atomic Energy Agency reactivos que son indispensables para la
(IAEA) y CARIPOL/IOCARIBE. ejecucin, adems de una descripcin en
forma de pasos y de diagrama de flujo
Parte de las tcnicas recopiladas en el sobre el procedimiento y algunas
presente documento fueron tomadas del recomen-daciones. Finalmente las
Manual de Tcni-cas Analticas de ecuaciones y los clculos que son
Parmetros Fsico-Qumicos y necesarios para cuantificar el parmetro
Contaminantes Marinos, publicado por el analizado. Si bien es cierto, que no
CIOH (Garay, et al, 1993), por lo cual se profundiza en el desarrollo terico y
convierte en una versin actualizada y cientfico de cada tcnica, esta razn lo
aumentada de la tercera edicin de dicho hace accesible a un mayor nmero de
manual. personas, que apenas se inician en el
campo de la qumica ambiental.
Este manual pretende apoyar a las
instituciones nacionales e
internacionales que trabajan en asun-tos Los lectores ya sean administradores de
marinos, suministrando una laborato-rios ambientales, tcnicos o
herramienta, que les permita estudiantes que se inician en este campo
estandarizar sus procedimientos y pro- lo encontraran bastante prc-tico y
tocolos para garantizar resultados y didctico, con ilustraciones y diagramas
datos confia-bles y seguros, y a la vez, de flujo que harn ms fcil la
realizar ejercicios de intercomparacin memorizacin, ejecu-cin y supervisin
con los dems laboratorios a ni-vel de las tcnicas en el laboratorio.
nacional e internacional.
Programa Calidad Ambiental
Gustavo Ramrez Marina-CAM
Triana, Msc. INVEMA
Coordinador Unidad de R
Laboratorios-ULAB

12 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


TCNICAS DE MUESTREO
recolectan muestras parciales cada 2
3 horas, cuyo volumen se obtiene
segn la siguiente relacin:

1. Recoleccin de muestras

1.1 Aguas

Las tcnicas de muestreo varan de


acuerdo con la situacin especfica y
segn los objetivos pre-vistos; algunos
estudios requieren solamente mues-tras
instantneas o simples, mientras que en
otros se necesita disponer de muestras
compuestas o an ms elaboradas en
tiempo y espacio. Muchas de las
generalidades referentes a las tcnicas
de muestreo y conservacin, se
encuentran plasma-das en las Normas
Tcnicas NTC-ISO 5667-2 y 5667-3.

1.1.1 Tipos de muestras

Muestras sencillas y compuestas: En


los estu-dios de caracterizacin
fisicoqumica de aguas naturales
generalmente se necesita recolectar
muestras sencillas, mientras que para
vertimien-tos domsticos e
industriales se aplican mues-tras
compuestas debido a la variacin
horaria de su caudal, por tal razn son
muy utilizadas en el monitoreo de ros,
vertimientos o procesos industriales
en lnea. Para su adquisicin se
nantes que llegan al mar, por tal motivo
es necesa-rio realizar muestreos
compuestos para lograr la correcta
caracterizacin de dichos afluentes (que
pueden ser ros o descargas de aguas
V residuales).
c

Vp = Qp x Muestras peridicas (o discontinuas):


NxQ
Cuando se realiza la toma a intervalos
de tiempo cons-tantes, se obtienen
Vp : Volumen de cada muestra muestras de iguales vol-menes, o
parcial (ml) Vc : Volumen de bien de volmenes diferentes, sien-do
muestra compuesta (ml) Qp : el volumen dependiente del flujo.
Caudal parcial del agua (m seg-1) Muestras continuas: La recoleccin se
Q : Caudal promedio (m seg-1) hace en forma continua y la velocidad
N : Nmero de muestras parciales
de flujo con que se toma puede ser fija
o variable dependiendo de si existe o
En algunos estudios de calidad ambiental
no variacin en el caudal del cuerpo
marina es necesario el monitoreo de
de agua que se estudia (tambin pue-
afluentes con el fin de conocer las
de ser un vertimiento).
descargas y el volumen de contami-

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 13


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

botellas Van Dorn y Niskin, por tener


capacidad de mayor volumen, son ideales
Las muestras peridicas y/o continuas para la obtencin de muestras en el
son muy utilizadas en el monitoreo de anlisis de pigmentos fotosintticos y
ros, vertimientos o procesos en lnea contaminantes (pesti-cidas, metales
para la industria. pesados, etc).

Muestras en serie:

De perfil profundo: muy aplicables


en ocea-nografa cuando el objetivo
es conocer la variacin vertical de
un parmetro, por ejem-plo, definir
la posicin de la capa termoha-lina,
de la picnoclina, etc.
De perfil de rea: serie de muestras
de agua tomadas a una profundidad
en particular, de una masa de agua
en diversas locacio-nes; muy
utilizadas para definir distribucio-
nes espaciales por capas.

1.1.2 Equipos de Muestreo

Cuando las muestras son superficiales


nicamen-te es necesario extremar la
limpieza del material y procurar
procedimientos que eviten la contami-
nacin. En muestras superficiales la
recoleccin se puede hacer
manualmente introduciendo la bo-tella
colectora bajo la superficie, procurando
siem-pre hacerlo a la misma profundidad
(c.a. 25 cm).

Cuando el objetivo es obtener muestras


de agua a profundidades determinadas,
se emplean botellas colectoras dotadas
de mecanismos de cierre para confinar la
masa de agua que se encuentra a la
profundidad de inters. En estudios
oceanogr-ficos, se emplean
normalmente botellas Nansen para el
anlisis de los parmetros
fisicoqumicos, pH, salinidad, oxgeno
disuelto y nutrientes inorgnicos. Las
mientras que las de funcionamiento
vertical permiten colectar mues-tras a
Hay que tener bastante precaucin mayores profundidades.
cuando se usan estas botellas en el
muestreo de aguas con alto contenido de La recoleccin de muestras para el
slidos sedimentables; su forma alar- anlisis de hi-drocarburos requiere un
gada y un flujo muy lento para extraer la equipo de muestreo espe-cial; la muestra
muestra por las llaves, facilitan la se debe recolectar en la misma botella de
sedimentacin de los slidos provocando almacenamiento (que debe ser de vidrio)
diferencia en este parmetro entre las y a una profundidad de un metro, por lo
primeras y las ltimas botellas recepto- cual no es posible utilizar ninguna de las
ras que se llenan. mencionadas anteriormente.

La botella Van Dorn horizontal es


adecuada para colectar muestras de En la siguiente tabla se detallan las
fondo en cuerpos de agua muy someros, botellas de muestreo ms utilizadas en
siendo muy apropiada para estu-dios de los estudios de calidad de agua,
estratificacin vertical, termoclinas y conjuntamente con sus especificaciones y
termo-halinas en lagunas costeras, aplicaciones ms generales.

14 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Tabla 1. Equipos utilizados para el muestreo de aguas1

Material de construc-
Equipo Aplicacin cin y de contacto Ventajas Desventajas
con la muestra
Botella Nansen Colecta de Metal/ recubierto con Se puede usar en Colecta poco volumen
fitoplancton capa de tefln serie de muestra
Compuestos qumicos PVC No genera contami- Capacidad fija, exis-
(*) nacin metlica ten de 0,4 a 15 litros
Botella Kemmerer Bacteriologa Latn / bronce Toxicidad debido
al metal
Zooplancton Acrlico / plstico No contamina con
metales
Compuestos qumicos
(*) No generan Capacidad fija,
Botellas Van Dorn Bacteriologa PVC contaminacin existen de 2 a 30
Fitoplancton metlica litros
Zooplancton
Compuestos qumicos No puede controlarse
Botellas comunes (*) y Vidrio Bajo costo la profundidad del
Bacteriologa muestreo
Compuestos qumicos Puede colectar gran- Existe la posibilidad de
(*) des volmenes en contaminacin met-
Bombas extractoras Fitoplancton Acero inoxidable forma continua, mues- lica y puede generar
Zooplancton trea la columna en dao a los microor-
sentido vertical ganismos
(*) Los compuestos contaminantes tipo plaguicidas, txicos metlicos y orgnicos prioritarios deben ser colectados con muestreadores que posean

materiales de contacto tales como tefln, vidrio u otros que no contaminen la muestra.

En las siguientes figuras se ilustran las


botellas tipo Van Dorn, que son las ms
utilizadas para recolectar aguas
superficiales continentales y ma-rinas,
destinadas a anlisis qumico, biolgico y
bacteriolgico.

1
Tomado de US. EPA.1982. Handbook for Sampling and Sample
Botellas de muestreo tipo Van Dorn
Preservation of Water and Wastewater
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 15
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Algunos implementos menos elaborados


como los corazonadores y el cono siguen
El volumen de muestra de agua a siendo muy utili-zados por su bajo costo
colectar depen-de de los requerimientos y facilidad de operacin.
del laboratorio con base en la cantidad
de parmetros a analizar: Para el anlisis
de compuestos orgnicos se deben utili-
zar filtros de fibra de vidrio (p.ej.
Whatman GF/ C), aceptndose por
convencin que el material retenido en
el filtro es la fraccin particulada o
suspendida, mientras que el filtrado
constituye la fraccin disuelta.

1.2 Sedimentos marinos y costeros

1.2.1 Equipos de muestreo

Dragas: Para la extraccin de


sedimentos exis-ten dragas con
caractersticas de diseo muy variadas
que incluyen modalidades de cierre de
mordaza, activadas mediante resorte o
el peso de la misma draga. La draga
para muestreo de sedimentos ms
popular es la de tipo Eckman,
ilustrada en la figura siguiente.

Draga para la recoleccin de sedimento tipo Eckman


La credibilidad de los datos generados
Corazonadores: Se utilizan en estudios
por cada laboratorio depende en gran
cuando la informacin relacionada con
medida de la calidad y estado de las
el perfil verti-cal de un sedimento es
muestras que ingresan al mismo, siendo
de inters. Salvo que la muestra
pertinente tomar todas las precauciones
obtenida tenga resistencia mecnica,
necesarias para evitar su mnimo
se debe tener cuidado al retirarla del
deterioro a par-tir del momento de su
ncleo, con el fin de preservar su
recoleccin. Los parme-tros de calidad
integridad longitu-dinal. Se puede
del agua que normalmente se ana-lizan
recurrir a congelar el ncleo para
se pueden dividir en los siguientes tres
facilitar tal labor, siempre y cuando no
gru-pos, de acuerdo con su mayor o
altere la composicin.
menor suscepti-bilidad de alteracin.

Para muestras superficiales y de terreno,


Conservativos. (Concentracin no
la utili-zacin de cucharas plsticas o de
vara con el tiempo)
acero inoxida-ble es suficiente. En
No conservativos/preservables.
estudios de metales pesados no se deben
(Concentra-cin cambia con el
utilizar equipos construidos de me-tal,
tiempo, pero pueden ser
deben emplearse cucharas o
estabilizados al menos por 24 horas)
corazonadores plsticos (por lo general
No conservativos. (Concentracin
de PVC).
vara r-pidamente con el tiempo y
no pueden ser preservados, como
temperatura, pH y ox-geno
disuelto).
2. Recipientes para muestras

16 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

En lo posible, es conveniente detectar los


El manejo de las muestras recolectadas errores sistemticos o al azar generados
en campo debe cumplir con las por una manipu-lacin deficiente de las
siguientes precauciones ge-nerales para muestras y/o contamina-cin de los
evitar al mnimo su contaminacin: envases de muestreo, desde la toma
hasta su determinacin en laboratorio.
Las medidas realizadas en campo se Para lo an-terior, antes de comenzar la
deben hacer en una submuestra recoleccin de las muestras se
separada, que se des-carta luego de la selecciona al azar uno de cada 10 frascos
determinacin. limpios para llenar con agua destilada,
Los recipientes para el envase de se preserva de la misma manera que las
muestras, nuevo o usado, deben muestras y
limpiarse siguiendo un protocolo de
lavado establecido, utilizando el
mismo recipiente para cada tipo de
parmetro.
Los recipientes de muestras se deben
almace-nar en ambientes limpios,
libres de polvo y suciedad, debindose
aplicar iguales precau-ciones durante
su transporte del campo al la-
boratorio.

Los derivados de petrleo (aceites,


gases de escape y combustibles de
lanchas y vehculos) son fuentes
potenciales de contaminacin de las
muestras. Es sabido que el humo de
cigarri-llo y los gases de escape
contaminan las mues-tras con plomo y
metales pesados.
NUNCA mida en campo o en el
laboratorio la conductividad en una
muestra de agua donde se haya
medido previamente el pH, debido a
que los electrodos de pH difunden KCl
y alte-ran el valor medido. Esto es
particularmente vlido para muestras
de agua dulce con nive-les bajos de
conductividad.
No deben exponerse las muestras a la
luz solar directa, por lo cual debe
procurarse arribar lo ms rpido al
laboratorio.
superficie de uno de vidrio se
pueden adsorber trazas de me-
se analiza con las mismas. El anlisis tales).
permitir detectar cualquier
contaminacin debida a los re-cipientes Reaccionar con ciertos
de muestreo utilizados. constituyentes de la muestra (por
ejemplo, fluoruros que reac-cionen
La seleccin y preparacin de un con el vidrio).
recipiente pue-de ser de gran
importancia, ms adelante en cada En el caso de muestras para la
anlisis se indicar el tipo de recipiente determinacin de parmetros
en el cual se debe recolectar y fisicoqumicos, una precaucin senci-lla
almacenar la muestra. En la Norma NTC- que, sin embargo, no es adecuada en
ISO 5667/2 se da orientacin sobre el todos los casos*, es llenar los frascos
tema. No obstante, se debe recordar que completamente y ta-parlos en tal forma
el re-cipiente en el cual se almacena la que no haya aire sobre la mues-tra. Esto
muestra y el tapn no deben: limita la interaccin con la fase gaseosa y
la agitacin durante el transporte
evitando as, las modificaciones en el
Ser causa de contaminacin (por contenido de CO2, y por con-siguiente,
ejemplo, los recipientes de vidrio de las variaciones en el pH; los hidrocarbo-
borosilicato pue-den incrementar el natos no se convierten en carbonatos
contenido de slice o sodio). precipitables; el hierro tiene menos
tendencia a ser oxidado, limitando as
Absorber o adsorber los variaciones de color, etc.
constituyentes que se deban
determinar (por ejemplo, en un *
No se recomiena llenar completamente los frascos cuando las
recipiente de polietileno se pueden muestras van a ser sometidas a congelamiento, porque la
dilatacin puede provocar la ruptura del envase.
absor-ber hidrocarburos; y en la

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 17


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Si las muestras van a ser congeladas, los 3.1 Aguas


frascos se deben llenar, pero no
completamente; el congelamiento (a Para la conservacin de muestras
o
20 C) permite en general un incremento lquidas se han propuesto diversos
en el perodo de almacenamiento. No componentes qumicos, a con-
obstante, es necesario controlar la centraciones variadas equitativamente.
tcnica de congelamiento y deshelado, Los ms uti-lizados son:
para retornar la mues-tra a su equilibrio
inicial; en este caso es muy cidos
recomendable usar recipientes plsticos. Soluciones bsicas
Biocidas
Reacciones particulares (fijacin)
3. Preservacin de muestras
y retardar la oxidacin y reduccin de los
Las tcnicas analticas son validas, es compo-nentes de inters. En general, los
decir, cum-plen con los requisitos de mtodos exis-tentes para la preservacin
precisin y exactitud siempre y cuando se limitan a un control de pH, la adicin
sean aplicadas a muestras re- de sustancias qumicas, la refri-geracin
cientemente tomadas. En muchos casos y la congelacin de las muestras.
los anli-sis no pueden ser realizados
inmediatamente en el sitio de
procedencia y se hace necesario un
procedimiento de preservacin de las
mismas que garantice la conservacin de
los analitos durante el transporte al
laboratorio y el tiempo necesario para
ejecutar el anlisis. Una buena tcnica
de preservacin debe retardar los
cambios qumicos y biolgicos que sufre
la muestra una vez ha sido removida de
su fuente.

Los diferentes procedimientos son


establecidos te-niendo en cuenta la
naturaleza de la muestra, la estabilidad
de los analitos, la reactividad de estos y
la matriz donde se encuentran. Las
funciones de los mtodos de
preservacin son retardar la ac-cin
biolgica y la hidrlisis de los
compuestos qumicos y sus complejos,
reducir la volatilidad de los
constituyentes y los efectos de absorcin
En la tabla 2 se presentan las
recomendaciones para preservacin de Cuando las muestras son de sedimentos,
muestras segn el tipo de constituyente la mejor forma de almacenar y preservar
y parmetro a evaluar. Otro punto la muestra es se-cndola; para esto el
indirecto de importancia es minimizar la mejor procedimiento es la liofilizacin
altera-cin que sufre la muestra una vez (secado a bajas temperaturas), y el
es tomada, por ello el contenedor debe almacenamiento en un medio exento de
evitar la contaminacin, ayudar a la hume-dad. Si el anlisis inmediato no es
preservacin de la muestra y prote-gerla posible, y tam-poco se cuenta con un
de la accin de la luz. equipo liofilizador, es con-veniente
secarla en estufa a 40 oC hasta que la
En la Norma NTC-ISO 5667/3 y el muestra est libre de humedad.
Standar Methods se pueden encontrar Posteriormente se almacena en bolsas
ms recomendaciones con respecto a la plsticas, si el anlisis es de metales
preservacin y almacenamiento de pesados; o en papel aluminio, si se
muestras lquidas. buscan residuos de pesticidas,
asegurndose de mantenerlas en un
desecador.
3.2 Sedimentos marinos

18 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Cuando se quieren determinar en los Es aconsejable realizar una


sedimentos parmetros como materia determinacin simul-tnea de humedad
orgnica, nitrgeno to-tal o fsforo total, para expresar los resultados en base
el congelamiento es suficiente. seca.

Tabla 2. Recomendaciones para la preservacin y almacenamiento de


muestras lquidas2
Parmetro por Tipo de recipiente Tcnica de Tiempo mximo de Comentarios
estudiar preservacin preservacin
recomendado antes
del anlisis
Temperatura P, V - De inmediato
Salinidad V, P sello hermtico De inmediato, o refri- 6 meses
gere sello hermtico
pH P, V - Analice de inmediato
Slidos P, V Refrigerar 7 das
Amonio P Congelar -20oC 7 das
Nitrito P Congelar -20oC 2 das Recomiendan que
sea de inmediato
Nitrato P Congelar -20oC 48 horas
Silicatos P Congelar -20oC 28 das
Nitrgeno total P, V Adicionar H2SO4 a 7 das
pH 2 y refrigerar
Fosfatos P, V enjuagado Filtrar y 48 horas
con cido congelar
Fsforo total P, V Adicionar H2SO4 a 28 das
pH 2 y refrigerar
Titulacin puede ser
Oxgeno disuelto V, botellas DBO demorada despus 8 horas
de la acidificacin
Clorofila P, V Filtradas, en la 28 das
oscuridad a 20oC
DBO P, V Refrigerar 6 horas No pasar 48 horas
DQO P, V Adicionar H2SO4 a 7 das
pH 2 y refrigerar
Pesticidas V, enjuagado con Refrigerar, adicionar 7 das
solvente 50 ml de solvente
Metales P, enjuagado con Adicionar HNO3 a 6 meses
cido pH 2 y refrigerar
Hidrocarburos di- V, enjuagado con Refrigerar, adicionar si Realizar la extraccin
sueltos dispersos solvente es posible el solvente al menor tiempo
de extraccin posible
Aceites y grasas V de boca ancha, Adicionar H2SO4 a 28 das
enjuagado con pH 2 y refrigerar
cido
P= Plstico, V =Vidrio

2
Adaptada del Standar Methods. 20Th Edition, y de la Norma NTC ISO-5667/3
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 19
PARMETROS IN SITU
+/- 0.1C, y equi-pos electrnicos con
sensores (termo-resistencias y
termocuplas), que permiten precisin de
+/-0.01C.

1. Temperatura

Las lecturas de temperatura son usadas


en opera-ciones generales de
laboratorio. En estudios limnolgicos, a
menudo se requiere el conocimien-to de
este parmetro como una funcin de la
pro-fundidad. Adems, las temperaturas
elevadas que resultan de descargas de
agua caliente pueden tener un impacto
ecolgico significativo.

Normalmente, las medidas pueden


hacerse con un termmetro Celsius
(centgrado) con columna de mercurio, el
cual mnimo debe tener escala marcada
cada 0.1C. Para prevenir rupturas en
labores de campo, se recomienda un
termmetro con cazoleta protectora. En
la actualidad se em-plean muchos
medidores electrnicos provistos con
sondas, los cuales poseen termocuplas o
termistores en su interior.

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a todo tipo de


aguas naturales, efluentes industriales y
domsticos. Su precisin viene dada por
el equipo utilizado para la
determinacin; existen termmetros de
mercu-rio que permiten mediciones con
Termmetro de mercurio
Termmetro invertido
Sonda con sensor de temperatura

1.1 Toma de muestra, almacenamiento y


1.3 Procedimiento
preservacin

Las muestras en campo deben medirse


La medicin de temperatura en muestras
ambien-tales debe ser una labor directa-mente en la columna de agua
realizada in situ, y no aplica por ello los introduciendo la sonda y procurando
procedimientos de almacena-miento y mantenerla siempre a la mis-ma
preservacin. El mejor mtodo para la profundidad (25 cm por debajo de la
lectura de este parmetro es introducir superfi-cie).
directa-mente los equipos de medicin
(termmetro o sonda) en el cuerpo de
agua. Para tomar la temperatura en el fondo de
la co-lumna de agua es conveniente el
uso de botellas que posean termmetros
invertidos, o el uso de
1.2 Materiales y equipos

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 21


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

naturales oscila entre 4 y 9 y la mayora


son lige-ramente bsicas debido a la
sondas que puedan bajar hasta el lugar presencia de bicarbonatos y carbonatos
donde se necesita leer. Si no se dispone de metales alcalinos y alcalinotrreos. El
de estos materiales, se toma la muestra pH del agua pura a 25C es de 7, neutro.
con una de las botellas de muestreo
(Nansen o Niskin) y se transfiere la ma-
yor cantidad de agua a un recipiente
grande (bal-de, con el fin de minimizar
los errores por la trans-ferencia de calor
con el ambiente), y se introduce la sonda
o termmetro, se mantiene una agitacin
constante con movimientos circulares y
se regis-tra el valor de temperatura; esta
operacin debe hacerse lo ms rpido
posible.

1.4 Calibracin

Con miras a los procesos de validacin y


certifica-cin de los laboratorios
ambientales, los term-metros y
sensores de temperatura deben
calibrarse al menos una vez al ao por
una institucin com-petente, o contra
termmetros certificados, siguien-do el
protocolo para cada equipo y/o
fabricante.

1.5 Bibliografa de consulta

Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

2. pH

La medicin del pH es uno de las


actividades ms importantes y de mayor
frecuencia en las pruebas qumicas del
agua. El rango de pH para aguas
En la actualidad la tcnica ms exacta,
usada para la medicin del pH es la
potenciomtrica, que se fundamenta en
la medida de la diferencia de po-tencial
experimentada en dos celdas electroqu-
micas (denominadas electrodos), se
emplea un electrodo combinado de
membrana de vidrio y uno de calomel
como referencia. Los equipos ac-tuales Equipo pHmetro WTW. Utilizado para medir el pH
combinan estas dos celdas electrolticas en laboratorio y en campo
en un mismo sensor, y poseen programas
electrni-cos internos que dan la medida
directa a partir de la diferencia de Alcance y aplicacin
potencial, facilitando la lectura de este
parmetro. Los medidores de pH Este mtodo es aplicable a todo tipo de
(pHmetro) modernos poseen un aguas naturales, efluentes industriales y
mecanismo electrnico que compensa domsticos. Su precisin viene dada por
automticamente la medida con res- el equipo utilizado para la
pecto a la temperatura, mostrando de determinacin; existen pHmetros que
esta forma el valor real de pH a la permiten mediciones con +/- 0.001
temperatura de medicin. unidades, y para su ca-libracin
requieren de cinco puntos o estndares.
Los ms utilizados dan una precisin de
+/- 0.01

22 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

unidades, y se calibran con tres puntos (pH 4.00 , Frasco lavador


7.00 y 10.00). Beaker grande (1000 ml)

2.1 Toma de muestra, almacenamiento y 2.3 Reactivos


preservacin
Soluciones Buffer, pH: 4.01, 7.00 y 10.01,
La medicin del pH en muestras de cual-quier marca certificada
ambientales tam-bin debe ser una labor disponible en el mercado.
realizada in situ. El mejor procedimiento
para medir este parmetro es in-troducir
el sensor en el cuerpo de agua; si esto no 2.4 Procedimiento
es posible (como para aguas profundas),
se pue-de recolectar la muestra con una Muestras en laboratorio:
de las botellas de muestreo (Nansen o
Niskin), trasferirla luego a una botella de Calibrar el equipo, tal como se
polietileno completamente llena (250 describe en el numeral 2.5
500 ml), taparla y almacenarla en la Enjuagar completamente el electrodo
oscuri-dad y a baja temperatura hasta el con agua destilada y luego con
momento de la lectura (WTW, 1997). Si muestra
la lectura no se puede realizar en el Traspasar una buena cantidad de
momento del muestreo se deben muestra (aprox. 50 ml) a un
mantener las botellas en la oscuridad, erlenmeyer previamente purgado
evitando el intercambio con la
atmsfera, sobre todo si se tra-ta de Colocar una barra magntica y
aguas de alta pureza o que no estaban mantener agita-cin suave para lograr
en equilibrio con esta. una medicin ms pre-cisa

Introducir el electrodo en la muestra


El tiempo de almacenamiento est Esperar a que estabilice la lectura en
condicionado a lo que demore el el display del equipo,
transporte de la muestra des-de el sitio aproximadamente 30 segundos, para
de muestreo al laboratorio; este tiempo registrar el pH de la muestra
debe ser el menor posible tratando de no Sacar el electrodo y enjuagarlo con
superar un par de horas. agua desti-lada y colocar su respectivo
protector del bul-bo.
Barras magnticas de agitacin,
2.2 Materiales y equipos recubiertas con tefln
Soporte
pH-metro metlico Agua
Electrodo destilada
Beakers de 50
ml
Unidad de agitacin magntica
por debajo de la superficie). Las
muestras ex-tradas del fondo de la
Muestras en campo: columna, se transfieren de la botella de
muestreo a un recipiente (beaker), se
Las muestras en campo pueden introduce la sonda, se mantiene una
medirse directa-mente en la columna agitacin
de agua procurando mante-ner siempre
la sonda a la misma profundidad (25 cm

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 23


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Se debe determinar el pH de las aguas in


constante con movimientos circulares y
situ, de modo que no se alteren los
se regis-tra el valor del pH; esta
equilibrios inicos debido al transporte o
operacin debe hacerse lo ms rpido
a una permanencia prolon-gada de las
posible.
muestras en los frascos.

2.5 Calibracin

El equipo debe calibrarse diariamente


antes de efectuar las mediciones, de la
siguiente manera:

Seleccionar dos buffers cuyo rango de


pH com-prenda el valor esperado del
pH de la muestra; el primero debe ser
cercano al punto isopotencial del
electrodo (pH 7) y el segun-do, al pH
esperado de la muestra (por ejemplo
pH 4 o pH 10)

Enjuagar el electrodo con agua


destilada y lue-go con solucin buffer
pH 7
Colocar el electrodo en el frasco que
contiene la solucin buffer pH 7
Introducir una barra magntica y
mantener agitacin suave
Esperar por lo menos 30 segundos y
proceder de acuerdo con el Manual de
Operacin del Equipo

Repetir los cuatro ltimos pasos, pero


utilizan-do el segundo buffer y operar
como se descri-be en el manual del
equipo
Si todas las etapas son realizadas
perfectamen-te, el valor de la
pendiente del equipo estar entre el
92 y 102% y se podr proceder a la
medicin de pH.

Recomendaciones
Martn Knudsen, en 1901, la defini
2.6 Bibliografa de consulta como el n-mero total de gramos de
material slido disuelto en un kilo de
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; agua de mar. Cuando el carbonato ha
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas sido convertido en xido, el bromo y el
analticas de parmetros fsico-qumicos yodo han sido reemplazados por cloro y
y contaminantes marinos. Centro de In- toda la mate-ria orgnica ha sido
vestigaciones Oceanogrficas e completamente oxidada, des-pus de
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993. secar la muestra a una temperatura de
480C (Margalef, 1982).
WTW - ORION. 1997. Manual de
instrucciones. WTW pHmeter 330.
La salinidad se puede calcular a partir de
la con-ductividad, el resultado es
numricamente menor que el residuo
3. Salinidad filtrable y se reporta usualmente como
gramos por Kg o partes por mil (psu
El conocimiento de la salinidad es ).
fundamental en estudios oceanogrficos,
pues es necesario para la determinacin
La mayor parte de las sales disueltas en
de corrientes y la identificacin de masas
el agua de mar estn en forma de
de aguas. En estudios ambientales es un
halogenuros, que, a ex-cepcin del flor,
factor importante porque puede
se determinan globalmente por
significar la pre-sencia o no de
argentimetra. La salinidad se puede
organismos y peces.
determinar a

24 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

coriente generada es proporcional a la


salinidad de la muestra, De esta manera
partir de la conductividad elctrica, se emplea dicha propiedad para medir la
gravedad es-pecfica o con equipos tales concentra-cin de sales disueltas en un
como el salinmetro de induccin o el lquido.
refractmetro; de todos, el me-nos
preciso es este ltimo. Alcance y aplicacin

Actualmente en la mayora de El mtodo conductimtrico es aplicable a


laboratorios se mide por medio de la todo tipo de aguas naturales,
conductividad, la cual se define como la especialmente de mar. Tam-
capacidad que tiene una sustancia de
transportar electrones (conducir
electricidad); en el agua, esta capacidad
se ve influenciada por la cantidad de
sales disueltas y la temperatura. Esto
significa que a mayor contenido de sales,
mayor conductividad; de esta forma, se
puede emplear esta propiedad para
medir el contenido de sales en una
muestra de agua.

Hoy en da existen equipos que miden la


conduc-tividad y la temperatura de una
muestra de agua, y calculan la salinidad
a travs de programas elec-trnicos
internos. Si no se dispone de un equipo
de estos, tambin se puede determinar
con un con-ductmetro, un termmetro y
haciendo uso del algoritmo reportado en
Standard Methods for the Examination
of Water and Wastewater. La ecua-cin
para la conductividad relativa a la
tempera-tura t (Rt) puede ser tomada de
Specific Conduc-tance: Theoretical
considerations and application to
analytical quality control por R.L.
Miller, W.L. Bradford, y N.E. Peters.

En los salinometros de induccin se


genera un campo elctrico que induce
una corriente elctri-ca a travs de una
bobina por la que circula el fluido; esta
sobrepasar los sie-te das de
almacenamiento.
bin es aplicable a efluentes industriales
y doms-ticos.
3.2 Materiales y equipos

Su precisin viene dada por el equipo Salinmetro conductmetro o


utilizado para la determinacin, salinmetro de in-duccin
generalmente salinmetros - Beakers
conductmetros, que permiten
mediciones con +/- 0.1. Existen
equipos como los salinmetros de 3.3 Reactivos
induccin que tienen una precisin de
+/-0.0003/oo. Agua estndar de mar de 35
Soluciones de KCl

3.1 Toma de muestra, almacenamiento y 3.4 Procedimiento


preservacin
Las muestras en campo pueden medirse
De la botella Nansen o Niskin la muestra directa-mente introduciendo la sonda en
se pasa a una botella de polietileno de la columna de agua y procurando
500 ml previamen-te purgada y se tapa sumergirla siempre a la misma
para prevenir la evapora-cin. La lectura profundidad (25 cm por debajo de la
se realiza una vez llegado al labo-ratorio, superficie).
si no es posible en el mismo da, la mues-
o
tra debe refrigerarse a 4 C sin

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 25


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Para muestras extradas del fondo de la Rt = Conductividad relativa a la


columna, temperatura de
se transfiere de la botella de muestreo a la muestra
una bote-
lla de polietileno; en el momento de Ce = Conductividad especfica a 25 oC
realizar la
lectura se introduce la sonda en la botella, C = Conductividad a la temperatura de
o
se man- la
tiene una agitacin constante con muestra
movimientos
circulares y se registra el valor de la
salinidad y la conductividad.
0.0000000010031*T4)

3.5 Calibracin Co= Ce*(1+0.0184*(T-25))

La calibracin se efecta a partir de


agua de mar estndar de 35 partes por
mil de salinidad, si el equipo es
conductmetro salinmetro; para la
calibracin se pueden emplear
estndares de conductividad comerciales
o soluciones de KCl de concentracin
conocida, siguiendo las indica-ciones del
manual del equipo.

3.6 Clculos

El salinmetro da directamente la
medida de la salinidad en psu; en el caso
de no contar con este equipo y disponer
slo de un conductmetro se recurre al
algoritmo reportado en Standard
Methods:

Salinidad=0.008-
0.1692*Rt0.5+25.3851*Rt+14.0941*Rt1
.5
-7.0261*Rt2+2.7081*Rt2.5+(T-15)
*(0.0005-0.0056*Rt0.5-0.0066*Rt-
0.0375*Rt1.5+0.0636*Rt2-0.0144*Rt2.5)/
(1+0.0162*(T-15))

Rt = Co/42914/
(0.6766097+0.0200564*T+0.0001
104259*T2-0.00000069698*T3+
3.7 Bibliografa de consulta
La transparencia puede ser medida in
APHA.1998. Standard Methods for the situ o en laboratorio. Para la medicin en
Examination of Water and Wastewater. el laboratorio, se determina la turbidez
Edicin 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-48 pp por medio de mtodos tales como el
nefelomtrico y el visual (APHA, 1981).
WTW-ORION. Manual de instrucciones. En condiciones de campo, un estimativo
Salinometer WTW-640 de la tur-bidez del agua es el obtenido
con la aplicacin del disco Sechi. En este
manual se har referencia unicamente a
este mtodo.
4. Transparencia

La turbidez en el agua es causada por 4.1 Materiales y equipos


material suspendido orgnico o
inorgnico como arcilla, arena, limos, Disco Sechi: disco de 20 cm de dimetro,
compuestos orgnicos solubles co- dividido en 4/4, dos de ellos de color
loreados, plancton y otros organismos negro y los otros dos blancos, en forma
microsc-picos. alternada
Peso o lastre

26 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.2 Procedimiento 4.3 Bibliografa de consulta

Sumergir el disco en el agua, mantenerlo Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


vertical con la ayuda de un peso, anotar Aguas natu-rales, aguas residuales y
el valor de pro-fundidad a la cual agua de mar. Ediciones Omega.
desaparece para el observador. La Barcelona-Espaa.
medicin se debe hacer lo ms
verticalmente posible, y es preferible
realizar las mediciones en-tre 10:00 am y
2:00 pm.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 27
SLIDOS
son definidos arbitra-riamente por el
tcnico al momento del anlisis, segn el
mtodo usado para su determinacin.

Los resultados para slidos totales,


voltiles y fijos estn sujetos a errores
El trmino slidos se refiere a la
considerables, por prdida
materia slida suspendida o disuelta en
el agua o en sus dese-chos. Los slidos
pueden afectar adversamente la calidad
de las aguas en varias formas: aguas con
alto contenido de slidos son menos
agradables para el gusto humano y
pueden inducir a una reaccin fisiolgica
desfavorable en el consumi-dor. Aguas
altamente mineralizadas tambin son
poco aptas para muchas aplicaciones
industriales, por estas razones un lmite
de 500 mg/l de slidos es deseable para
aguas potables. Las aguas alta-mente
mineralizadas son intiles para muchas
apli-caciones industriales; y las que
poseen altos con-tenidos de slidos
disueltos pueden ser esttica-mente
insatisfactorias para propsitos como el
bao (APHA, 1998).

Los slidos totales son el material


residual resul-tante en un recipiente
luego de la evaporacin de una muestra
y su subsecuente secamiento en un
horno a temperatura definida y
constante; es de-cir, representan la suma
de los slidos disueltos o no retenidos a
travs de un filtro y los slidos no
disueltos o retenibles por filtracin. Por
tal razn, los diferentes tipos de slidos
muestra. En cualquier caso deber
informarse la temperatura de secado.

Los envases plsticos son satisfactorios


para la pre-servacin de las muestras, las
cuales debern ser analizadas
de compuestos voltiles durante la
rpidamente para minimizar la posibi-
evaporacin de CO2 y minerales voltiles
lidad de cambios fsicos o qumicos
durante la calcina-cin. Los resultados
durante el almacenaje. Deben excluirse
de muestras que contengan aceites o
partculas no repre-sentativas tales como
grasas pueden ser de valores cuestiona-
restos de madera, organis-mos o
bles por la dificultad en el secado a peso
materiales fecales presentes en la
constan-te en un tiempo razonable. En
muestra.
aguas altamente mineralizadas con
significantes contenidos de cal-cio,
Alcance y aplicacin
magnesio, cloruros y/o sulfatos pueden
ser higroscpicos y requerir prolongados
Los mtodos que se describen a
tiempos de secado; con la desventaja de
continuacin son aplicables a todo tipo
ganar rpidamente peso durante la
de aguas naturales, efluentes
operacin de pesado.
industriales y domsticos; con los
inconvenientes expuestos anteriormente.
El analista debe seleccionar la
La precisin de los mis-
temperatura que mejor se ajuste a la

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 29


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

mos est relacionada con el proceso de 1.1 Toma de muestra, almacenamiento y


pesaje, por lo tanto, es aconsejable preservacin
utilizar una balanza analtica que de +/-
0.0001 g de precisin, aun-que en el De la botella Nansen o Niskin se llena un
mercado ya es fcil conseguirlas de +/- frasco de vidrio o polietileno con la
0.00001 g. muestra; de este mismo se puede extraer
submuestras para la de-terminacin de
todos los slidos (totales, suspen-didos y
voltiles); la cantidad recolectada debe
ser la suficiente para permitir tal fin. Hay
que te-ner precaucin en el muestreo de
aguas con alto contenido de slidos
sedimentables; la forma alar-gada de las
botellas muestreadoras y un flujo muy
lento para extraer la muestra por la
llave, facilitan la sedimentacin de los
slidos provocando dife-rencia en este
parmetro entre las primeras y las
ltimas botellas receptoras que se
llenan.
Balanza analtica empleada para la determinacin
de slidos en muestras de agua
La muestra debe transportarse
refrigerada al labo-ratorio a 4C. Si el
anlisis no se puede realizar de
inmediato se debe almacenar refrigerada
por un periodo no superior a siete das.
Antes de realizar el anlisis se debe
homogenizar la muestra agi-tndola
fuertemente.
1. Slidos totales a 103 - 105C
Anlisis por duplicado de 41 muestras de
Una muestra bien mezclada se evapora agua y aguas de desecho fueron hechas
en una cpsula secada a peso constante encontrndose una desviaciones
en una estufa a 103 - 105 C; el estndar de las diferencias de 6.0 mg/l
incremento de peso de la cpsula vaca (APHA, 1998).
representa el residuo total. Aunque en
mues-tras de aguas residuales los
resultados pueden no representar el
peso real de slidos disueltos y sus-
pendidos, esta es una determinacin til
en plan-tas de control.

Precisin del mtodo


Estufa de
secado
1.2 Materiales y equipos Desecador
Balanza analtica (+/- 0.0001g)
Cpsulas de porcelana de 100 ml
Mufla con rango de temperatura (T
ambiente - 1100C) 1.3 Procedimiento
Horno con rango de temperatura (T
ambiente - 250 +/- 5 C) Colocar una cpsula de porcelana
limpia en una mufla a ignicin a 550
C por una

30 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Enfriar, desecar, pesar y guardar la 1.4 Clculos


cpsula en un desecador hasta ser
utilizada. Los slidos totales se calculan como:
Transferir un volumen conocido de la
muestra a la cpsula (50 ml) y (A - B) x
evaporar a sequedad en un horno de 1000 Slidos (g/l) =
secado a una temperatura de 98 C -----
para evitar ebullicin y salpicaduras; ml (muestra)
elegir un volumen de muestra que
produzca un resi-duo mnimo de 25 a A = Peso cpsula ms la muestra (g)
250 mg. Este volumen puede B = Peso cpsula (g)
estimarse a partir de la conductividad;
si es necesario, se pueden adicionar Recomendaciones
cantida-des sucesivas de muestras a la
misma cpsula Se deben excluir partculas grandes
Mantener durante una hora a 103 - flotantes o aglomeradas sumergidas de
105 C una vez evaporada materiales no hetero-gneos en la
Enfriar el recipiente en un desecador muestra, y dispersar la grasa o el aceite
y poste-riormente pesar flotante visible con un agitador antes de
Repetir el ciclo de secado a 103 - 105 retirar una porcin de muestra para el
C, en-friando, desecando y pesando anlisis.
hasta obtener un peso constante o
hasta que la prdida de peso sea
menor que el 4% del peso previo

1.5 Diagrama de flujo

50 ml de agua

Preparar crisol Evaporar en


de porcelana o
horno a 98 C

Secar por 01
hora a 103-
o
105 C

Pesar

Peso NO

constante?
SI
Clculos

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 31


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

1.6 Bibliografa de consulta 2.2 Materiales y equipos

APHA. 1998. Standard Methods for the Filtro (Millipore) o de fibra de


Examination of Water and Wastewater. vidrio Equipo de filtracin
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-56 pp. Horno con rango de temperatura (T
ambiente - 250 +/- 5 C)
Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas. Estufa de
Aguas natu-rales, aguas residuales y secado
agua de mar. Ediciones Omega. Desecador
Barcelona-Espaa. Balanza analtica (+/- 0.0001g)

2.1 Toma de muestra, almacenamiento y


2. Slidos totales en suspensin (seco preservacin
a 103 105 C)
Ver numeral 1.1.
Los slidos totales en suspensin son el
material retenido sobre un filtro
estndar despus de la filtra-cin de una
muestra bien mezclada de agua. Estos
slidos son secados a 103 - 105 C. Si el
material suspendido se atasca en el filtro
prolongando el tiempo de filtracin,
puede ser necesario incremen-tar el
dimetro de los filtros o decrecer el
volumen de muestra. Para obtener un
estimativo de los slidos en suspensin
se puede calcular la diferencia entre los
slidos totales y los filtrables (disueltos)
totales.

Precisin del mtodo

En estudios hechos sobre dos analistas


en cuatro sets de 10 determinaciones
cada uno, la desviacin estndar fue 5.2
mg/l (coeficiente de variacin 33%) a 15
mg/l, 24 mg/l (10%) a 242 mg/l, y 13
mg/l (0.76%) a 1707 mg/l. As mismo, se
hicieron anli-sis por duplicado de 50
muestras de agua y aguas de desecho,
encontrndose una desviacin estn-dar
de las diferencias de 2.8 mg/l. (APHA,
1998).
Colocar en desecador durante 30
minutos
2.3 Reactivos Pesar el filtro antes de usarlo

Caoln Tratamiento de la muestra


Agua desionizada
Colocar el filtro en el equipo de
filtracin y pasar un volumen conocido
2.4 Procedimiento (ml) de muestra, aplicando vaco
Enjuagar el embudo y el filtro con
Preparacin del filtro agua desti-lada

Colocar el filtro en un equipo de Remover y secar el filtro en un horno a


filtracin y aplicar vaco 103 - 105 C
Lavar con 3 porciones sucesivas de 20 Llevarlo al desecador durante 30
ml de agua destilada minutos y pesar hasta alcanzar peso
Secar durante una hora a 103 - 105 C constante
hasta obtener peso constante

32 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Nota: Para muestras con altos 2.6 Clculos


contenidos de sales disueltas es
necesario enjuagar el filtro con agua El contenido de slidos suspendidos
destilada para evitar problemas durante totales se cal-cula como:
la pesada.
(A - B) x 106
SST en mg/l =
2.5 Calibracin -
ml (muestra)
Este mtodo es necesario validarlo con
miras a la acreditacin de los A = Peso filtro + residuo (g)
laboratorios ambientales, para tal fin se B = Peso filtro (g)
evala el porcentaje de recuperacin a
partir de muestras con concentracin
conocida de caoln.

2.7 Diagrama de flujo

Muestra de agua
(aprox. 500ml)

Preparacin del Equipo de filtracin


filtro al vaco

Filtrar - enjuagar filtro


con agua destilada

Secar por 1 hora


o
a 103-105 C

Pesar

Peso NO
constante?

SI

Clculos
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 33
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Mufla con rango de temperatura (T


ambiente 1100 C)
2.8 Bibliografa de consulta

APHA. 1998. Standard Methods for the


Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-57 pp.

Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

3. Slidos fijos y voltiles totales a 550C

Los componentes fijos y voltiles de los


slidos totales pueden ser determinados
por ignicin de la muestra a 550 +/- 25
C. Esta determinacin ofrece una
aproximacin de la cantidad de mate-ria
orgnica presente en la fraccin slida
del de-secho.

Precisin del mtodo

Los errores negativos pueden ser


producidos por prdida de materia
voltil durante el secado. En estudios
realizados por tres laboratorios sobre
cua-tro muestras y 10 replicas, la
desviacin estndar fue de 11 mg/l a 170
mg/l de slidos voltiles totales.

3.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numeral 1.1.

3.2 Materiales y equipos


Una vez enfriada, pesar. Reportar
como sli-dos voltiles el peso perdido,
Horno con rango de temperatura (T y como residuo fijo total el material
ambiente 250 +/- 5 C) presente en la cpsula
Balanza analtica (+/-
0.0001 g) Equipo de
filtracin 3.4 Clculos
Cpsulas de porcelana de
100 ml Desecador Los slidos voltiles se calculan como:

(A - B) x 106
3.3 Procedimiento Slidos voltiles (mg/l) =
-
Evaporar a 103 - 105 C en una ml (muestra)
cpsula de porcelana un volumen
conocido de muestra homogeneizada (B - C) x 106
(50 ml) Slidos fijos (mg/l) =
Someter a ignicin el residuo obtenido
hasta obtener peso constante en una ml (muestra)
mufla a 550 C entre 15 y 20 minutos
Dejar enfriar la cpsula parcialmente A = Peso de la cpsula mas residuo
en el aire hasta que la mayor parte del antes de ignicin (g)
calor se haya disi-pado y transfirala B = Peso de la cpsula mas residuo
al desecador para enfria-miento total despus de ignicin (g)
C = Peso de la cpsula vaca (g)

34 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.5 Diagrama de flujo

50 ml de agua

o
Preparar cpsula Secar a 103-105 C
de porcelana

o
Calcinar a 550 C
por 15 20 min.

Enfriar en
desecador

Pesar

Clculos

La precisin de este mtodo an no est


disponi-ble.
3.6 Bibliografa de consulta

APHA. 1998. Standard Methods for the


Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-58 pp.

Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

4. Slidos sedimentables

El material sedimentable en aguas


superficiales y salinas as como en
desechos domsticos e indus-triales,
puede determinarse y reportarse sobre
una base de volumen (ml/l) o de peso
(mg/l).

Precisin del mtodo


La prueba volumtrica requiere
nicamente un cono de Imhoff
4.1 Toma de muestra, almacenamiento y
Horno con rango de temperatura (T
preservacin
ambiente - 250 +/- 5 C)
Balanza analtica (+/- 0.0001g)
Ver numeral 1.1.
Filtro (Millipore) o de fibra de
vidrio Equipo de filtracin
Estufa de
4.2 Materiales y equipos
secado
Desecador

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 35


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.3 Procedimiento dimetro, usar una cantidad mnima


de un litro o lo suficiente para dar una
Por volumen profundidad de 20 cm
Dejar reposar por una hora y sin
Llenar el cono de Imhoff a la marca de remover el sedimento o el material
un litro con una muestra bien flotante, sifonear 250 ml del centro del
mezclada a fondo, dejar en reposo por contenido a un punto medio entre la
45 minutos. superficie del lodo sedimentado y la
Agitar ligeramente los lados del cono superficie del lquido.
con una barra, dejar 15 minutos ms y Determinar la materia suspendida en
registrar el volu-men de material mg/l en la porcin sobrenadante, como
sedimentado en el cono ml/l. se indica en el numeral 2.4
(determinacin de los slidos en
Nota: recuerde homogenizar bien la suspensin), esta es la materia no
muestra an-tes de proceder a llenar el sedimentable.
cono.
4.4 Clculos
Por peso
Slidos sedimentables (mg/l) = mg/l SS -
mg/l de
Determinar el contenido de slidos en SNS
suspen-
sin en mg/l para una submuestra (ver
nume-
ral 2.4) SS = Slidos en suspensin
Colocar la muestra bien mezclada en un SNS = Slidos no sedimentables
beaker
de vidrio (o probeta), de no menos de 9
cm de

4.5 Diagrama de flujo

Muestra de agua

Submuestra de
agua (500ml) Muestra de agua
(aprox. 1l)

Determinar slidos
suspendidos Dejar en reposo
(numeral 2.4)
por 1 hora

Sifonear la porcin
sobrenadante
Determinar suspendidos
slidos (numeral 2.4)

Clculos

36 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.6 Bibliografa de consulta Cpsulas de porcelana de 100 ml


Equipo de filtracin
APHA. 1998. Standard Methods for the Estufa de secado
Examination of Water and Wastewater. Desecador
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-59 pp.

Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas. 5.3 Procedimiento


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega. Preparacin del filtro
Barcelona-Espaa.
El filtro Millipore o fibra de vidrio, se
prepara igual que para los slidos en
suspensin. Ver numeral 2.4.
5. Slidos disueltos totales a 180 C Balanza analtica (+/- 0.0001
g) Filtro (Millipore) o de fibra
Los slidos disueltos son el material que de vidrio
pasa a travs de un filtro (de fibra de
vidrio o millipore) y que quedan despus
de la evaporacin y secado a peso
constante a 180 +/-2 C. El filtrado de los
slidos en suspensin (no filtrables)
puede ser usa-do para la determinacin
de los slidos disueltos.

Precisin del mtodo

Anlisis de 77 muestras de
concentracin conoci-da de 293 mg/l
fueron hechas encontrndose una
desviacin estndar de las diferencias de
21.20 mg/l (APHA, 1998).

5.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numeral 1.1.

5.2 Materiales y equipos

Horno con rango de temperatura (T


ambiente - 250 +/- 2 C)
Mufla con rango de temperatura (T
ambiente 1100 C)
succionar toda el agua que sea
Preparacin del recipiente para evaporacin posible.
Transferir 100 ml del filtrado a un
Colocar el recipiente limpio a ignicin a recipiente de evaporacin tarado, y
550 C por una hora, enfriarlo y evaporar a sequedad so-bre un bao
guardarlo en el deseca-dor hasta que se de vapor, secar la muestra evapo-rada
vaya a utilizar, pesar inmediata-mente al menos una hora en un horno a
antes de usarlo. 180C; enfriar en un desecador y
pesar. Repetir el ci-clo, secando hasta
Anlisis de muestra obtener un peso constante o hasta que
el peso vare en menos de 0.5 mg.
Usar una muestra que produzca no
ms de 200 mg de residuo filtrable
total (slidos) 5.4 Clculos
Filtrar 100 ml, o ms de la muestra
bien mez-clada al vaco a travs del (A - B) x 1000
filtro Slidos disueltos (g/l) =
Continuar la succin por cerca de tres
minutos despus de la filtracin hasta C

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 37


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

A = Peso recipiente ms residuo seco (g)


B = Peso del recipiente vaco (g)
C = Volumen de filtrado usado (ml)

5.5 Diagrama de flujo


Muestra de agua

(aprox. 100ml)
Preparacin

Equipo de
del filtro filtracin al vaco

Filtrar recoger
el filtrado

Preparacin de
Evaporar el filtrado la cpsula de
evaporacin

Secar por 1 hora


o
a 180 C

Pesar
NO
Peso

constante?
SI

Clculos

5.6 Bibliografa de consulta

APHA. 1998. Standard Methods for the


Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 2-56 pp.

Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.
38 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
NUTRIENTES MARINOS
inorgnicas (amonio, nitrito, nitrato). Sin
embargo, el nitrgeno molecular es
relativa-mente inerte y para ser utilizado
por los organis-mos debe estar en formas
disponibles (NH4+, NO2-, NO3-), los
nitratos representan la forma ms oxi-
El agua marina est constituida por
dada del nitrgeno inorgnico y los
diversos cons-tituyentes inorgnicos, los
nitritos son
principales cationes son: calcio(Ca+2),
magnesio (Mg+2), sodio (Na+) y
+
potasio(K ); los aniones principales son:
ion clo-ruro (Cl-), sulfato (SO4=),
carbonato (CO3-2) y bi-carbonato (HCO3-).
Algunos iones de los constitu-yentes
secundarios son los reconocidos con el
nombre de nutrientes, puesto que
pertenecen a algunas sales que son
utilizadas por los vegetales marinos,
(algas) para formar sus tejidos y tienen
una significacin biolgica especial.
Estos se pre-sentan en el agua de mar en
concentraciones va-riables, segn la
actividad biolgica, y entre ellos se
encuentran el fosfato (PO4)-3, nitrato
(NO3-), nitrito (NO2-), silicato [Si(OH)4] y
amonio (NH4+), (Margalef, 1982).

Los nutrientes estn presentes en


diferentes for-mas en los sistemas
acuticos y solamente las for-mas
inorgnicas disueltas se encuentran
disponi-bles para los productores
primarios.

El nitrgeno gaseoso en los ocanos es


aproxima-damente 30 veces ms
abundante que la suma de sus formas
las sustancias intermedias que se Espectrofotmetro UV-VIS Perkin Elmer-Lambda
presentan du-rante el proceso de 12, utilizado en la determinacin de nutrientes en
oxidacin del amonio a nitra-tos. Los muestras ambientales
niveles de amonio (NH3 + NH4+) se
deben a la actividad biolgica,
El enriquecimiento de nutrientes debido
principalmente (Carpenter, 1983).
a la en-trada de materia orgnica (MO),
eleva la produc-cin de algas, fenmeno
conocido como eutroficacin. Algunos
efectos de dicho fenme-no son el olor
desagradable del agua debido a la
abundancia de algas y el elevado
consumo de oxgeno disuelto por parte
de las bacterias en res-

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 39


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

La absorbancia de la solucin resultante


se mide espectrofotomtricamente a 640
puesta a la mayor concentracin de MO, nm.
afectan-do a las especies acuticas
(Kiely, 1999).

1. Determinacin de amonio (mto-do


del azul de indofenol)

El conocimiento del contenido de amonio


en agua marina es de valor considerable
para el estudio del ciclo del nitrgeno en
los ocanos. El amonio en el mar
proviene principalmente de las
excreciones de animales marinos y la
descompo-sicin de compuestos
orgnicos nitrogenados, provenientes a
su vez de organismos muertos. Diversos
seres fitoplanctnicos utilizan el amonio
y lo convierten nuevamente en
compuestos org-nicos nitrogenados,
tambin puede ser oxidado por accin
qumica, fotoqumica o bacteriana a
nitrito y luego a nitrato (Riley, 1953).

Aunque en la actualidad, existen


diversos mto-dos para determinacin de
amonio, el propuesto por Riley (1953) y
modificado por Strickland & Parsons
(1968 - 1972) es el de mayor uso y se
conoce muy ampliamente como el
mtodo del azul de indofenol.

El ion amonio presente en el agua de


mar reac-ciona en un medio citrato
alcalino con hipoclorito de sodio para
formar monocloroamina, la cual en
presencia de fenol y nitropruciato de
sodio, que acta como catalizador, forma
el azul de indofenol y un complejo de
citrato con los iones Ca y Mg, eliminando
as, la interferencia que estos puedan
causar al precipitarse durante el anlisis.
las interferencias por el mate-rial
suspendido. Es conveniente efectuar el
Alcance y aplicacin anli-sis inmediatamente despus de
realizada la colec-cin; pero si esto no es
El mtodo es especfico para ion amonio posible, se deben almace-nar en un sitio
y aplica-ble a todo tipo de aguas oscuro y congeladas a -20 C. Es
naturales. La mnima can-tidad de
preferible el uso de congelacin
amonio detectable en celda de 10 cm es
instantnea con CO2.
de 0.1 g.at.N-NH4/l.

1.1 Toma de muestra, almacenamiento y 1.2 Materiales y equipos


preservacin
Espectrofotmetro VIS con un rango de
La coleccin de muestras se realiza 400 - 900 nm
mediante el uso de botellas Niskin, Celdas de vidrio con 10 1 cm de paso
Nansen u otra apropiada. De stas, se ptico Viales de 40 ml
transfiere a una botella plstica de 500 Dosificadores o pipetas de 1 ml
ml, previamente lavada y purgada. Dosificadores o pipetas de 2 ml
Normal-mente, la cantidad colectada en Pipetas aforadas de 25, 10, 5, 2
la ltima botella, sirve para efectuar y 1 ml Probetas de 100 y 50 ml
todos los anlisis de nutrien-tes.
Matraces aforadas de diferentes
capacidades Vasos de precipitado de
100 y 50 ml
Antes de proceder al anlisis es
necesario filtrar la muestra para evitar

40 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

mantener la solucin tapada mientras no


est en uso.
1.3 Reactivos

Agua desionizada: Debe utilizarse agua Solucin estndar de amonio: Disolver


reciente-mente desionizada para la 0.0535 g de cloruro de amonio (NH 4Cl)
preparacin de reacti-vos, estndares y grado analtico (pre-viamente seco a 104
blancos, la cual debe almacenarse en o
C durante dos horas), en 100 ml de agua
recipiente de vidrio bien tapado. No desionizada. Adicionar 50 l de
cumplir esta precaucin, conduce cloroformo como preservante y
invariablemente a una cuantificacin almacenar refri-gerada; la solucin bien
deficiente del amonio. sellada es estable por

Solucin de fenol: Disolver 25 g de fenol


(C6H5OH) R.A. en 250 ml de etanol
(C2H5OH) al 95%, guar-dar la solucin
refrigerada en frasco mbar.

Solucin de nitropruciato de sodio


[Na2Fe(CN)5
NO.2H2O]: Disolver 0.5 g de
nitropruciato de sodio en 100 ml de agua
desionizada y completar a 500 ml,
guardar refrigerada en botella de color
mbar
(La solucin es estable durante 4
semanas).

Reactivo alcalino: Disolver 100 g de


citrato de sodio (C6H5Na3O7.2H2O) R.A. y
5 g de hidrxido de sodio (NaOH) en
agua desionizada y comple-tar a 500
ml. ). Almacenar en recipiente de vidrio
(La solucin es estable durante varios
meses).

Hipoclorito de sodio (NaClO): Usar una


solucin 1.5 N. En su defecto usar
hipoclorito de sodio comercial al 12%.

Solucin oxidante: Mezclar 60 ml del


reactivo alcalino y 15 ml de hipoclorito
de sodio. Esta mez-cla debe prepararse
nicamente el da que se va a utilizar, los
sobrantes deben descartarse. Es preci-so
Con cada conjunto de muestras se
debe mon-tar un blanco y una muestra
varios meses. La concentracin de esta patrn de 3.0 ug at/l (cuando se usa
solucin es de 10000 g.at /l. celda de 10 cm)

1.4 Procedimiento Determinacin del blanco

Filtrar la muestra de ser necesarioa Siga el mtodo descrito para la muestra


antes de proceder al anlisis usando 25 ml de agua desionizada.
Adicionar 25 ml de muestra en un vial
de 40 ml
1.5 Calibracin
Adicionar 1 ml de solucin de fenol,
agitar
Stock secundario. Medir 1 ml de la
Agreguar 1 ml de nitroprusiato de
solucin patrn y llevar a 100 ml con
sodio, agitar
agua desionizada; la concentracin de
Adicionar 2.5 ml de solucin oxidante
y agitar esta nueva solucin es de 100 mol/l
Mantener los viales cubiertos con Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 ml
papel alumi-nio o tapados y en la del stock secundario y completar a 25
obscuridad, en una habi-tacin con ml, con agua desionizada; las
temperatura entre 20 y 27 C duran-te concentraciones de estas solu-ciones
una hora son 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 y 5.0 ug.at.N/l
Leer la absorbancia a 640 nm para res-pectivamente, o seleccionar
todas las muestras concentraciones que estn en el rango
Calcular la concentracin de amonio de trabajo de las mues-tras

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 41


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Aplicar el proceso descrito para la Abs = Absorbancia de la muestra


muestra y el blanco corregida
(menos la absorbancia del
Deber aplicarse una regresin lineal a blanco)
los resul-tados y calcular la b = Intercepto
concentracin de la siguiente forma. m = Pendiente de la curva de
regresin
Determine la pendiente (m) y el
intercepto
Recomendaciones
(b) de la curva de calibracin. [Y =
mX+b].
Todo el material de vidrio a ser
Abs = C * m + b utilizado debe lavarse con cido
clorhdrico diluido al 5% y enjuagarse
Y = Abs = Valor de la absorbancia del con agua desionizada recientemen-te
estandar obtenida
X=C = Concentracin del estandar Bajo ninguna circunstancia se debe
( g.at.N/l) abrir un frasco que contenga
b = Intercepto amoniaco cuando se est efectuando el
anlisis de amonio
Nota: La boca de los viales debe cubrirse
La linealidad se mantiene hasta los 40 con papel de aluminio, o mantenerse
moles/l tapada para reducir la contaminacin
La calibracin tambin se puede de amoniaco atmosfrico
trabajar con soluciones patrn Se deben elaborar por lo menos dos
preparadas con agua de mar natural blancos de reactivos sobre agua
pobre en amonio desionizada, para ha-cer la correccin
correspondiente a las mues-tras

1.6 Clculos Es bueno mantener apartados los


materiales y pipetas que se utilizan
De la curva de calibracin se obtiene para esta prueba ya que fcilmente
directamen-te la concentracin de la pueden resultar contaminados con los
muestra, as: reactivos usados en otros anlisis
Todos los erlenmeyers deben
Abs - b protegerse de la luz para evitar
C = sobreproduccin del azul por alta
m intensidad lumnica
Diariamente debe leerse entre las
C = Concentracin de la muestra en
muestras un patrn de 3.0 g.at/l para
g.at.N/l
mantener estadsti-camente
controlado el mtodo mediante el re-
gistro en una carta de control.
42 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

1.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Medir 25 ml de
muestra

Montar patrn de Adicionar 1ml de Montar un blanco


3.0 ug.at/l Sln. de fenol de reactivos

Adicionar 1ml de Sln. de


nitroprusiato de sodio

Preparar la Sln. Adicionar 2.5 ml


Oxidantel de Sln. Oxidante

Esperar 1 hora

Leer absorbancia
a 640 nm

Clculos
Analysis. Fish. Res. Board of Canada.
Segunda Edicin. Otawa.

1.8 Bibliografa de consulta

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.

Riley, J.P. 1953. The Spectrophotometric


Determina-tion of amonia in natural
water with particular refe-rence to sea-
water Anal. Chim. Acta Vol 9: 575-589.

Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1968. A


Practical Handbook of Seawater
La mayora de los mtodos para la
evaluacin de iones nitrito se basan en la
clsica reaccin de Griess (1879)
2. Determinacin de nitritos modificada por Llosvay (1889), me-diante
la cual se convierte cido nitroso en una
Los nitritos representan una forma tintura fuertemente coloreada,
intermedia en el ciclo del nitrgeno; empleando una amina aromtica
pueden estar presentes en las aguas primaria para diazotar el ion nitrito,
como resultado de la degradacin acoplando posteriormente el ion diazo re-
biolgica de las protenas o provenir de sultante con otra amina aromtica en
otras fuen-tes. una reac-cin que lleva a la formacin de
un compuesto azo rosado, cuya
absorbancia es proporcional a la
cantidad de nitrito inicialmente presente.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 43


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

coloreadas. La reaccin colorimtrica es


especfica para iones nitrito, sin
Las combinaciones de aminas que embargo, pue-den causar interferencias
resultan en com-puestos azo con los iones Cu2+ en concen-traciones
absorbancias suficientemente al-tas para mayores de 0.5 mg/l y los iones sulfuro
permitir su aplicacin en el anlisis de en concentraciones superiores a 60 g
las cantidades traza en que se encuentra
de S=/l.
normalmen-te el nitrito en el agua de
mar, son muy pocas. Los procedimientos La mnima cantidad de nitrito detectable
empleados inicialmente consistan en por este mtodo, usando celda de 10 cm
modificaciones de Griess-Llosvay, donde es de 0.01 g.at.N-NO-2/l.
se uti-lizaba cido sulfanlico para la
diazotacin y la 1-naftilamina para el
acoplamiento. La ms apro-piada de
estas modificaciones es la indicada por
Barnes (1959), que se basa en el
procedimiento desarrollado por Rider &
Mellon (1946).

El uso de la anterior combinacin de


reactivos ha sido desechado para evitar
el riesgo de trabajar con la
potencialmente carcingena 1-
naftilamina por haberse encontrado el
mtodo de la sulfanila-mida y
diclorohidrato de N-(1-naftil)-
etilendiamina que da mejores resultados.
Este mtodo fue desa-rrollado por Shinn
(1941) y modificado por Bendschneider y
Robinson (1952); actualmente es el de
mayor aceptacin por la comunidad de
labo-ratorios oceanogrficos. En
principio el nitrito NO2-es determinado a
travs de la formacin de un compuesto
azo rojo producido a un pH de 2 a 2.5,
acoplando sulfanilamida diazotizada con
N-(1-naftil)etilendiamina dicloruro (NED
dicloruro). La absorbancia de la solucin
es medida a 543 nm para su posterior
cuantificacin.

Alcance y aplicacin

El mtodo es aplicable a todo tipo de


aguas, espe-cialmente de mar, pero
puede presentar problemas con aguas
25 ml de cido clor-hdrico concentrado y
aadir 150 ml de agua des-tilada,
2.1 Toma de muestra, almacenamiento y mezclar y completar a 250 ml, guardar
preservacin en un frasco mbar. Esta solucin es
estable por va-rias semanas en
Ver numeral 1.1. oscuridad.

Solucin de diclorhidrato de N-(1-


2.2 Materiales y equipos
naftil)etilen-diamina (C12H16Cl2N2):
Disolver 0.5 g de reactivo puro en agua
Espectrofotmetro VIS, con rango destilada y completar a 500 ml, alma-
espectral de 400-900 nm cenar en un frasco mbar. La solucin es
Celdas de 10 1 cm de paso estable por un mes. Debe renovarse
ptico Viales de 40 ml cuando desarrolle una coloracin caf.
Dosificadores o pipetas de 1 ml
Pipetas aforadas de 25, 10, 5, 2
y 1 ml Probetas de 100 y 50 ml Estndar de nitrito: Disolver 0.0690 g de
Matraces aforadas de diferentes nitrito de sodio (NaNO2) previamente
capacidades
seco a 105C por dos horas en agua
destilada y completar exac-tamente a
100 ml. Almacenar en botella oscura con
2.3 Reactivos
50 l de cloroformo como preservativo.
La concentracin de esta solucin es de
Solucin de sulfanilamida (C6H8N2O2S): 10000 g.at/l.
Disolver 2.5 g de sulfanilamida R.A. en

44 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Aplique una regresin lineal a los


resultados y calcule la concentracin de
2.4 Procedimiento la siguiente forma. De-

Depositar en los viales de reaccin, 25


ml de cada muestra de agua filtrada
Agregar a cada frasco 0.5 ml de la
solucin de sulfanilamida. Mezclar y
dejar en reposo entre 2 y 8 minutos
Adicionar 0.5 ml de solucin de N-(1-
naftiletilendiamina) y mezclar
Dejar en reposo mnimo 10 minutos
para em-pezar a medir la absorbancia
de las muestras a una longitud de
onda de 543 nm
Con cada conjunto de muestras se
debe montar un blanco y una muestra
patrn de 1.0 g.at/l (cuando se usa
celda de 10 cm)

Determinacin del blanco

Siga el mtodo descrito para la muestra


usando 25 ml de agua desionizada

2.5 Calibracin

Stock secundario: Medir 1.0 ml de la


solucin patrn y llevar a 100 ml con
agua desionizada, la concentracin de
esta nueva solucin es de 100 mol/l
Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 ml
de la solucin secundaria y completar
a 25 ml, con agua desionizada en
balones aforados; las con-centraciones
de estas soluciones son 1.0, 2.0, 3.0,
4.0 y 5.0 g.at.N/l respectivamente, o
selec-cionar concentraciones que
estn en el rango de trabajo de las
muestras
Aplicar el proceso descrito para la
muestra y el blanco.
C = Concentracin de la muestra en
termine la pendiente (m) y el intercepto g.at.N/l Abs = Absorbancia de la
(b) de la curva de calibracin. [Y = muestra corregida
mX+b]. (menos la absorbancia del
blanco) b = Intercepto
Abs = C * m + b m = Pendiente de la curva de
regresin
Y = Abs = Valor de la absorbancia de la
muestra Recomendaciones
X=C = Concentracin de los
estandare
Diariamente deber leerse un blanco
( g.at.N/l)
de reacti-vos y un patrn de 1.0 g.at/l
b = Intercepto
entre las mues-tras para mantener
estadsticamente controla-do el
mtodo mediante el registro en una
2.6 Clculos
carta de control

De la curva de calibracin se obtiene


Se recomienda mantener el ambiente
directamen-te la concentracin de la
en un rango de 15 - 25C
muestra, as:
El desarrollo de la coloracin se
completa a los 10 minutos y
Abs - b
permanece constante por lo me-nos
C=
dos horas, despus de los cuales

puede haber alteracin.
m

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 45


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

2.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Medir 25 ml de
muestra

Montar patrn Adicionar 0.5 ml de Montar un blanco


de 1.0 ug at/l Sln. de sulfanilamida de reactivos

Adicionar el 0.5 ml de Sln.


N-(1-Naftiletilendiamina)

Esperar mnimo
10 minutos

Leer absorbancia
a 543 nm

Clculos

2.8 Bibliografa 3. Determinacin de nitrato (reduc-cin


con Cd)
Bendschneider, K, Robinson, R. 1952. A
New Spec-trophotometric Method for the La mayor parte del nitrgeno en el mar
Determination of Nitrite in Sea Water. se halla en forma de iones nitrato, su
Journal of Marine Research 11:87 - 96. concentracin nor-malmente vara entre
25 - 500 g de N-NO3/l (Morris y Riley,
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; 1963).
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos Los principales mtodos para evaluacin
y contaminantes marinos. Centro de In- de iones nitrato, en agua de mar se
vestigaciones Oceanogrficas e basan: (a) En la reduc-cin a iones
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993. nitrito, y la subsecuente evaluacin de
stos por mtodos colorimtricos. (b) En
Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas. la reaccin colorimtrica como resultado
Aguas natu-rales, aguas residuales y de las pro-piedades oxidantes del cido
agua de mar. Ediciones Omega. sulfrico. (c) En de-terminacin
Barcelona-Espaa. polarogrfica; y (d) por espectrometra
ultravioleta.
Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A
practical handbook of seawater analysis.
Fish. Res. Board of Canada. Segunda El mtodo descrito por Strickland &
Edicin. Otawa. Parsons (1972), se basa en el de Morris y
Riley (1963), incluyendo el uso de
cloruro de amonio como activante,

46 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

descrito por Grasshoff (1964) y columnas Viales de 40 ml


empaca-das con amalgama de Cd - Cu Balones aforadas de diferentes
(Wood, et. al., 1967). capacidades Probetas de 100 y 25
ml
El ion nitrato de agua de mar se reduce Dosificadoras o pipetas de
cuantitativa-mente a ion nitrito, cuando 1 ml Frasco lavador
la muestra se hace fluir a travs de una
columna que contiene cadmio recu-
bierto con cobre coloidal. Como la 3.3 Reactivos
reduccin debe realizarse a un pH
cercano a 8.5 antes de pasar la muestra Solucin concentrada de cloruro de
por la columna, se la trata con solucin amonio
de cloruro de amonio, que acta como (NH4Cl): Disolver 125 g de cloruro de
Buffer y a la vez da origen a complejos amonio en 500 ml de agua desionizada.
de cadmio y otros iones eliminando de Guardar en botella plstica o de vidrio
esta forma las interferencias que ellos bajo refrigeracin. La solucin es estable
varias semanas.
pueden causar al precipitarse durante el
anlisis. El ion nitrito resultante de la
Solucin diluida de cloruro de amonio:
reduccin, se determina de acuerdo con
Diluir 25 ml de la solucin concentrada a
el mtodo descrito para ello.
1000 ml con agua desionizada. Guardar
Alcance y aplicacin la solucin en botella pls-tica o vidrio
bajo refrigeracin. La solucin es es-
Es aplicable a todo tipo de aguas, la table varias semanas.
eficiencia de reduccin est alrededor
del 95%. Los cambios de temperatura
entre 10 y 35C no tienen efecto so-bre Solucin de sulfanilamida (C6H8N2O2S):
la reduccin. Disolver 2.5 g de sulfanilamida en 25 ml
de cido clorhdri-co concentrado y
La cantidad mnima detectable usando aadir 150 ml de agua destila-da,
celdas de 10 cm es de 0.05 g.at. N- mezclar y completar a 250 ml, guardar
en un frasco mbar. Esta solucin es
NO3/l. Las absorbancias obedecen la ley
estable por varias semanas en oscuridad.
de Lambert Beer hasta los 50 mo-les/l,
lo que permite una determinacin
Solucin de diclorhidrato de N-(1-
directa en todo el rango de naftil)etilendiami-
concentraciones que se en-cuentra en el
na (C12H16Cl2N2): Disolver 0.5 g de
agua de mar.
reactivo puro en agua destilada y
completar a 500 ml, almacenar en un
frasco mbar. La solucin es estable por
3.1 Toma de muestra, almacenamiento y
un mes y de-be renovarse cuando
preservacin desarrolle una coloracin caf.

Ver numeral 1.1.


Solucin de cido clorhdrico 2N (HCl):
Diluir 170 ml de cido clorhdrico
concentrado con agua desionizada y
completar un litro.
3.2 Materiales y equipos
Solucin de sulfato de cobre
Espectrofotmetro VIS con rango pentahidratado al 2%
espectral de 400-900 nm (CuSO4.5H2O): Disolver 10 g de sulfato
Celdas de vidrio de 1 10 cm de paso en 500 ml de agua desionizada.
ptico Columnas de vidrio para la
reduccin Cadmio (Cd) metlico granulado.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 47


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Solucin estndar de nitrato: Disolver Activar la columna con una solucin de


0.1011 g de Nitrato de Potasio (KNO 3) un es-
calidad reactivo (pre-viamente seco a tndar de nitratos de 20 g.at. N-NO-
104oC durante dos horas), en 100 ml de 3/l y pro-ceder luego a lavarla varias
agua destilada. La concentracin de esta veces con solucin de cloruro de
solucin es de 10000 g.at/l. La solucin amonio diluido
es gene-ralmente estable en ausencia de Cuando las columnas no se usen, se
evaporacin. deben dejar con solucin de cloruro de
amonio diluido y tapadas con papel
aluminio para evitar que se sequen
3.4 Procedimiento Graduar la velocidad de flujo a una
razn de 10 ml por minuto. Si el flujo
Preparacin de la columna es menor, la co-lumna debe ser
reempacada
Seleccionar, utilizando un tamiz, las Lavar completamente la columna
limaduras de cadmio que se haciendo fluir dos porciones de 50 ml
emplearn para rellenar las columnas de cloruro de amonio diluido. Luego,
(tamao entre 0.5 y 2.0 mm). Te-ner dejar en reposo 24 horas y an-tes de
precaucin de no inhalar el polvo de usar, lavar de 3 a 4 veces con cloruro
cadmio de amonio diluido
Lavar aproximadamente 100 g de las
limaduras de cadmio seleccionadas
(suficiente para 5 co-lumnas) con la
solucin de HCl en un embudo de
separacin y luego enjuagar
perfectamente con agua desionizada
Tratar el cadmio con 500 ml de
solucin de sulfato de cobre en un
erlenmeyer y agitar. Este tratamiento
se contina hasta que todo el co-lor
azul haya desaparecido de la solucin
y las partculas de cobre
semicoloidales, comiencen a aparecer
en el lquido sobrante
Enjuagar las limaduras con suficiente
agua desionizada; a partir de este
momento el cadmio no debe entrar en
contacto con el aire
Empacar la columna con las limaduras
de Cd-Cu hasta alcanzar una altura
aproximada de 20 cm. Se debe tener
cuidado de no dejar espa-cios sobre el
lecho Cd - Cu
Sin permitir que se seque la columna,
Tratamiento de muestras empezar a depositar la muestra
siguiente, a la cual pre-viamente se ha
En erlenmeyer de 100 ml, depositar adicionado 1 ml de cloruro de amonio
50 ml de muestra filtrada y adicionar 1 concentrado, aplicando igualmente los
ml de cloruro de amonio concentrado pasos anteriores
y mezclar Una vez reducidas todas las muestras
Depositar la muestra en la columna de de agua, aplicar este procedimiento a
reduc-cin. Recibir los primeros 20 ml 25 ml de una so-lucin patrn de 1.0
en una probe-ta graduada de 25ml y g-at/l
desecharlos A los 25 ml de muestra, agregar 0.5 ml
Sin suspender el flujo, reemplazar de la solucin de sulfanilamida.
rpidamen-te la probeta por el frasco Mezclar y dejar en reposo entre 2 y 8
de reaccin y conti-nuar recibiendo la minutos
solucin hasta obtener 25 ml de Adicionar 0.5 ml de solucin de N-(1-
muestra reducida. Tapar el frasco naftile-tilendiamina) y mezclar
Dejar drenar el resto de muestra y Dejar en reposo mnimo 10 minutos
descartarla para em-pezar a medir la absorbancia
Enjuagar la columna con de las muestras a una longitud de
aproximadamente 25 ml de cloruro de onda de 543 nm
amonio diluido Con cada conjunto de muestras se
debe montar un blanco y una muestra
patrn de 1.0 g at/l

48 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Determinacin del blanco Abs - b


C=
Llevar a cabo el proceso de anlisis
usando 50 ml de cloruro de amonio m
diluido en lugar de mues-tra. Medir la
absorbancia, usando la misma celda que C =
Concentracin de nitratos y
para las muestras y restar el valor del nitritos en la muestra en g.at.N/l
blanco para cada absorbancia de Abs = Absorbancia de la muestra
muestra. corregida
(menos la absorbancia del blanco)
b = Intercepto
3.5 Calibracin m = Pendiente de la curva de
regresin
Stock secundario: Medir 1.0 ml de la
solucin patrn y llevar a 100 ml con
agua desionizada, la concentracin de Para obtener la concentracin real de
esta nueva solucin es de 100 mol/l nitratos es necesario restarle al valor
Tomar 0.25 ml de la solucin obtenido la concentra-cin inicial de
secundaria y com-pletar a 25 ml con nitritos, tal como se obtuvo en el
agua desionizada en baln aforado; la numeral 2.6.
concentracin de esta solucin es 1.0
Recomendaciones
g.at.N/l y se utilizar como patrn
diario, con el fin de mantener
El rendimiento o eficiencia de los
estadsticamente controlado el mtodo
reductores (columnas) se chequea
mediante el registro en una carta de
control y evaluar la eficiencia de los diariamente con la muestra patrn, si
reductores el rendimiento es inferior a 0.8 se
debe regenerar la columna
Las limaduras de Cd-Cu deben ser
Despus de aplicar el procedimiento reactivadas despus de uso
descrito an-teriormente en la muestra se continuado. La eficiencia de las
obtienen son nitritos, por tal razn para columnas deben determinarse por lo
la cuantificacin se emplea la curva de me-nos cada 30 muestras; cuando la
calibracin que se obtuvo para estos prdida de eficiencia es significativa
com-puestos, ver numerales 2.5 y 2.6. debern regenerarse las columnas

3.6 Clculos

De la curva de calibracin se obtiene


directamen-te la concentracin de
nitratos y nitritos en la mues-tra, as:
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 49
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra
Preparar columnas
de reduccin Medir 50 ml de
muestra

Seleccionar
limaduras de Cd Adicionar 1.0 ml de cloruro
de amonio concentrado
Montar un patrn
Enjuagar con HCL de 1.0 ug.at/l
Agregar la muestra a la
columna de reduccin
Montar un blanco
Reaccionar con
Obtener 25 ml de de reactivos
sulfato de cobre
muestra reducida

Enjuagar con
Adicionar 0.5 ml de
agua desionizada
Sln. de sulfanilamida
Armar las
columnas Adicionar 0.5 ml de Sln.
N-(1- Naftiletilendiamina)

Activar el Cadmio,
dejar 24 horas Esperar mnimo
10 minutos

Leer absorbancia
a 543nm

Clculos
Analysis. Fish. Res. Board of Canada.
Segunda Edicin. Otawa.

3.8 Bibliografa de consulta

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.

Morris, A.W. y J.P. Riley. The


Determination of Nitrate in Sea Water.
Anal. Chim. Act 29: 272-279.

Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A


Practical Handbook of Seawater
usada para corregir el valor de NO3-. La
extensin de esta correccin em-prica
est relacionada con la naturaleza y la
4. Determinacin de nitrato por con-centracin de la materia orgnica
espectrometra ultravioleta (MO) y puede variar de un agua a otra.
Consecuentemente, este mtodo no es
La medida de la absorcin UV a 220 nm recomendable si se requiere una
permite una rpida determinacin de correccin significante en la absorbancia
NO3-. Como la mate-ria orgnica tambin por MO, pero puede ser til en el
puede absorber a 220 nm y NO 3- no monitoreo de NO3- en cuerpos de agua
absorbe a 275 nm, una segunda con un tipo de materia orgnica
medicin hecha a 275 nm puede ser constante.

50 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Espectrofotmetro UV- VIS para usar a


220 y 275 nm Celdas de cuarzo de 1 10
Los factores de correccin para MO cm de paso ptico Viales de 40 ml
pueden ser establecidos por el mtodo Balones aforadas de diferentes
de adicin en combi-nacin con el capacidades Probetas de 100 y 25
anlisis del contenido de NO3- origi-nal ml
por otro mtodo. La filtracin de la Dosificadoras o pipetas de 1 ml
muestra se requiere para evitar
interferencias con partculas
suspendidas. La acidificacin con HCl 1N
es dise-ada para prevenir las
interferencias de concen-traciones de
hidrxido o carbonato superiores a los
1000 mg CaCO3/l, los cloruros no tiene
efecto sobre la determinacin.

Adicional a la materia orgnica disuelta,


los surfactantes, NO2-, y Cr6 y varios
iones inorgnicos que normalmente no
se encuentran en el agua natural como
los cloritos y cloratos pueden cau-sar
interferencias.

Alcance y aplicacin

Esta tcnica es til slo para muestras


que tienen bajos contenidos de materia
orgnica, por ejemplo, aguas naturales
sin contaminacin y suministros de agua
potable. Las curvas de calibracin de
NO3- siguen la ley de Beer hasta los 11
mg N/l (APHA, 1998).

La precisin del mtodo an no est


disponible.

4.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numeral 1.1.

4.2 Materiales y equipos


Frasco lavador 4.4 Procedimiento

Tratamiento de muestras
4.3 Reactivos
En un erlenmeyer de 100 ml, depositar
Agua libre de nitratos: Usar agua 50 ml de muestra filtrada y adicionar 1
bidestilada, o desionizada de alta pureza ml de HCl y agitar vigorosamente
para preparar todas las soluciones y Leer las absorbancias de las muestras
diluciones requeridas. contra una celda con agua bidestilada.
Usar la longi-tud de onda de 220 nm
Solucin de cido clorhdrico 1N (HCl): para obtener la lectura
Diluir 85 ml de cido clorhdrico de NO3- y a 275 nm para determinar
concentrado con agua desionizada y las interfe-rencias debidas a materia
completar un litro. orgnica disuelta
Con cada conjunto de muestras se
Solucin estndar de nitrato: Disolver debe mon-tar un blanco y una muestra
0.7218 g de Nitrato de Potasio (KNO3) patrn de 3 mg.NO3--N/l
calidad reactivo (pre-viamente seco a
104oC durante 24 horas), en 1000 ml de
agua destilada; 1.00 ml = 100 g NO3- - Determinacin del blanco
N. Preservar con 2 ml de CHCl 3. La
solucin es gene-ralmente estable en Llevar a cabo el proceso de anlisis
ausencia de evaporacin por lo menos 6 usando 50 ml de agua bidestilada en
meses. lugar de muestra. Medir las

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 51


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

absorbancias usando la misma celda que Abs220 = Absorbancia leda a 220


para las muestras y restar el valor del nm
blanco para cada concentracin de Abs275 = Absorbancia leda a 275
muestra. nm
Y = AbsCOR = Valor de la absorbancia
corregida
para el estandar
4.5 Calibracin
X=C = Concentracin del
estandar en mg
Stock secundario. Medir 100.0 ml de
NO3- - N/l
la solu-cin patrn y llevar a 1000 ml b = Intercepto
con agua bidestilada; la concentracin
de esta nueva so-
lucin es de 10.0 ug NO3- - N/l. 4.6 Clculos
Preservar con 2 ml de CHCl3
Preparar una curva de calibracin De la curva de calibracin se obtiene
entre el ran-
directamen-te la concentracin de la
go de 0 7 mg NO 3- - N/l ; diluyendo a muestra, usando las absorbancias
50 ml los siguientes volmenes de corregidas de las mismas.
solucin stock se-cundario: 0, 1.0, 2.0,
4.0, 7.0, 35.0 ml
AbsCOR - b
Tratar los estndares de NO3- de la C = -
misma ma-nera que las muestras
m

Aplicar una regresin lineal a los


C = Concentracin de la muestra en
resultados y cal-cular la concentracin
mg NO3- - N/l
de la siguiente forma: De-terminar la
AbsCOR = Absorbancia de la muestra
pendiente (m) y el intercepto (b) de la
corregida
curva de calibracin [Y = mX+b] y
(Abs220 2 *
corregir la absorbancia de los estndares Abs275) b = Intercepto
restando dos veces la absorbancia leda m = Pendiente de la curva de
a 275 nm a la lectura de absorbancia de regresin
220 nm.
Recomendaciones

AbsCOR = C * m + b Si el valor de correccin es 10% mayor


que la lectura a 220 nm no utilice este
AbsCOR = Abs220 2 * Abs275 mtodo.
52 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Montar un blanco Medir 50 ml de Montar patrn de


de reactivos muestra 1.0 ug.at/l

Adicionar 1.0 ml
de HCL 1N

Agitar

Leer absorbancia
a 220 nm

Leer absorbancia
a 275 nm

Clculos

espectrofotomtricamente. La diferencia
entre los diferentes mtodos se basa en
4.8 Bibliografa de consulta la utili-zacin del reactivo reductor,
algunos autores utili-
APHA. 1998. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 4-114
pp.

5. Determinacin del fsforo reactivo

El fsforo se encuentra en el agua en


una diversi-dad de formas disueltas y
particuladas. En el mar, los iones fosfato
junto con los nitritos, son factor limitante
para el crecimiento del plancton en los
ocanos.

Todos los mtodos para evaluacin de


iones fosfato en agua de mar dependen
de la formacin de un complejo de
fosfomolibdato y de la subsiguiente
reduccin a un compuesto azul, cuya
intensidad se mide
Los iones fosfato del agua de mar se
zan solucin de cloruro estaoso y otros hacen reac-cionar con una solucin
cido ascrbico. compuesta que contiene cido molbdico,
cido ascrbico y antimonio trivalente
El mtodo del cido ascrbico fue que acta como catalizador, en condi-
desarrollado por Murphy y Riley (1952) y ciones tales que se obtiene un pH cido
es el recomendado por Strickland & donde no hay posibilidades de formacin
Parsons (1972) y FAO (1975). Este del complejo silicomolibdato, eliminando
mtodo es superior al del cloruro as esta interferencia. El heteropolicido
estaoso por-que el error por la salinidad complejo resultante se reduce in situ
es insignificante y el color desarrollado para dar una coloracin azul, cuya
por el complejo es ms estable y ha sido absorbancia se mide
adoptado por la mayora de laboratorios espectrofotomtricamente a 885 nm en
oceanogrficos. celda de 10 mm.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 53


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Alcance y aplicacin Solucin de cido sulfrico (H2SO4):


Mezclar 70 ml de cido sulfrico
Este mtodo puede ser aplicado a aguas concentrado (d=1.82 g/ml) con 450 ml de
natura-les, salinas, como tambin a las agua destilada. Dejar enfriar y al-
de origen doms-tico e industrial. Con un macenar en recipiente de vidrio.
buen espectrofotmetro y bajos blancos
puede discriminarse una absorbancia de Solucin de cido ascrbico (C6H8O6):
0.002, lo que implica que la canti-dad Disolver 10.8 gramos de cido ascrbico
ms pequea de fosfato que se puede en 200 ml de agua desionizada.
detec-tar en forma directa es de 0.03 Almacenar la solucin en recipiente
moles/l (usando celda de 10 cm). Las plstico protegido de la luz y congelar.
absorbancias mantienen pro- Descongelar para uso y recongelar
porcionalidad respecto de la nuevamente. En estas con-diciones la
concentracin hasta los 28 moles/l, lo solucin es estable durante semanas.
que equivale a una absorbancia neta de
aproximadamente 0.630 en una celda de Solucin de tartrato de potasio
1 cm. El rango usual de concentracin de antmonilo
fosfato en el agua de mar es de 0.03 a 5 (C4H4KO7Sb): Disolver 0.34 g de reactivo
moles/l. analti-co en 250 ml de agua destilada. Si
es necesario, calentar moderadamente
en plancha. Almacenar bajo refrigeracin
5.1 Toma de muestra, almacenamiento y en recipiente de plstico o vi-drio. La
preservacin solucin es estable durante meses.

Ver numeral 1.1. Reactivo mixto: Mezclar en su orden 20


ml de so-lucin de molibdato, 50 ml de
solucin de cido sulfrico, 20 ml de
5.2 Materiales y equipos solucin de cido ascrbico y 10 ml de
solucin de tartrato de Sb-K; esta solu-
Espectrofotmetro VIS con rango cin se prepara diariamente, es estable
espectral de 400-900 nm por cuatro horas.
Celdas de vidrio de 1 10 cm de paso
ptico Viales de 40 ml
Dosificadoras o pipetas de 1 y Solucin estndar de fosfato. Disolver
2 ml Probetas de 100 y 50 ml 0.1361 g de dihidrgeno fosfato de
Vasos de precipitado de 200 y 50 ml potasio (KH2PO4) (previa-mente seco a
Balones aforadas de diferentes 104oC por dos horas), en 100 ml de agua
capacidades destilada almacenar en una botella
oscura con 50 l de cloroformo. Esta
solucin tiene una concentracin de
10000 g.at/l y es estable por varios
meses.
5.3 Reactivos
Solucin heptamolibdato de amonio
[(NH4)6 Mo7 O24
.4H2O]: Disolver 15 g de heptamolibdato 5.4 Procedimiento
de amonio grado analtico en agua
destilada y completar a 500 ml, Depositar en los viales de reaccin, 25
almacenar en botella plstica o de vidrio ml de cada muestra de agua filtrada
lejos de luz. La solucin es estable por Recordar que con cada conjunto de
varias semanas. muestras se debe montar un blanco y
una muestra es-tndar de 3.0 g at P/l

54 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

pendiente (m) y el intercepto (b) de la


curva de calibracin. [Y = mX+b].
Agregar a cada vial 2.5 ml del reactivo
mixto. Mezclar para que se verifique
la reaccin, y cubrir el erlenmeyer con
papel aluminio para evitar
contaminacin
Dejar en reposo 5 minutos
Seleccionar la longitud de onda 885
nm
Seguidamente, registrar la
absorbancia de cada una de las
muestras, el estndar de trabajo y el
blanco de reactivos

Determinacin del blanco

Usar agua destilada en lugar de muestra


y llevar a cabo los pasos descritos
anteriormente para obte-ner la
absorbancia del blanco de reactivos.

5.5 Calibracin

Stock secundario. Medir 1.0 ml de la


solucin estndar y llevar a 100 ml
con agua desionizada; la
concentracin de esta nueva solucin
es de 100 mol/l.
Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 ml
de la solucin secundaria y completar
a 25 ml, con agua desionizada en
balones aforados; las con-centraciones
de estas soluciones son 1.0 , 2.0, 3.0,
4.0 y 5.0 g.at.P/l respectivamente, o
se-leccionar concentraciones que
estn en el ran-go de trabajo de las
muestras.
Aplicar el proceso descrito para la
muestra y el blanco

Aplique una regresin lineal a los


resultados y calcule la concentracin de
la siguiente forma. De-termine la
C = Concentracin de la muestra en
g.at.P/l Abs = Absorbancia de la
Abs = C * m + b muestra corregida
(menos la absorbancia del
Y = Abs = Valor de la absorbancia del blanco) b = Intercepto
estandar m = Pendiente de la curva de
X=C = Concentracin del estandar regresin
en g.at P/l
b = Intercepto Recomendaciones

Leer entre 10 y 30 minutos despus de


5.6 Clculos haber adi-cionado el reactivo. Corregir la
absorbancia con el blanco de reactivos
De la curva de calibracin se obtiene (medir la turbidez, si es necesario).
directamen-te la concentracin de la
muestra, as:
La limpieza de los recipientes de vidrio
Abs - b es muy importante. No deben utilizarse
C= detergentes co-merciales que contengan
fosfatos. Lavar el mate-rial con cido
m clorhdrico diluido al 5% y enjuagar
varias veces con agua destilada.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 55


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

5.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Montar patrn de Medir 25 ml de Montar un blanco


3.0 ug.at p/l muestra de reactivos

Preparar el reactivo Adicionar el 2.5 ml


mixto de reactivo mixto

Esperar 5 minutos

Leer absorbancia
a 885nm

Clculos

5.8 Bibliografa de consulta 6. Determinacin de silicato (mtodo del


metol)
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas El agua de mar contiene un amplio
analticas de parmetros fsico-qumicos espectro de materiales silceos muy
y contaminantes marinos. Centro de In- pequeos en suspensin; muchos de ellos
vestigaciones Oceanogrficas e se han producido a partir de ac-tividades
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993. geolgicas y son transportados al mar
por los ros o por el viento. En general, el
Murphy, J. y J.P. Riley. 1952. A Modified slice puede estar tanto en solucin como
Single Solution Method for the en forma particulada.
Examination on Phosphate in Natural
Water. Anal. Chim. Acta.
Todos los mtodos para evaluacin de
Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas. iones silicato dependen de la produccin
Aguas natu-rales, aguas residuales y del complejo silicomolibdato y su
agua de mar. Ediciones Omega. posterior reduccin a un com-puesto
Barcelona-Espaa. azul, cuya intensidad es medida
espectrofotomtricamente. La diferencia
Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A radica en la utilizacin del reactivo
Practical Handbook of Seawater reductor.
Analysis. Fish. Res. Board of Canada.
Segunda Edicin. Otawa. El mtodo del metol fue desarrollado por
Mulln & Riley (1955), y modificado por
Strickland & Parsons (1972). En la
actualidad es el ms utiliza-do, porque el complejo resultante es estable en el
tiempo, y adems es econmico.

56 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Celdas de vidrio de 1 10 cm de paso


ptico Balones aforados de diferentes
Los iones silicato del agua de mar se capacidades pre-feriblemente plsticos
hacen reac-cionar con molibdato de Viales plsticos de 40 ml con
amonio, de tal manera que se forman los tapa Dosificadores o pipetas de
complejos silicomolibdato, 1, 2 y 5 ml
fosfomolibdato y arsenomolibdato. A la
solucin resultante se le agrega metol (p-
metil-amino-fenol-sulfato) y cido
oxlico, los cuales reducen el com-plejo
silicomolibdato dando como resultado un
compuesto azul que simultneamente
descompo-ne cualquier fosfomolibdato o
arsenomolibdato, de manera que se
eliminan las interferencias por fosfatos y
arsenatos. La absorbancia de la solu-cin
resultante se mide por
espectrofotometra a 810 nm en celda de
10 mm.

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a silicato


reactivo en todo tipo de aguas naturales,
especialmente de mar, tambin para
desechos domsticos e indus-triales.

La mnima concentracin de silicatos ,


expresada como Si, que se puede
detectar utilizando celda de 10 mm es de
0.05 g-at/L, que es equivalente a 1.4
g/L de Si.

6.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numeral 1.1.

6.2 Materiales y equipos

Espectrofotmetro VIS con rango


espectral de 400-900 nm
Vasos de precipitado de 100 y 50 ml Solucin de heptamolibdato de amonio
Probetas de 100 y 50 ml [(NH4)6
Mo7O24.4H2O]: Disolver 4.0 g de reactivo
analtico en 300 ml de agua destilada,
6.3 Reactivos adicionar 12 ml de HCl concentrado y
completar a 500 ml. Almace-nar en
Solucin de metol-sulfito: Disolver 6.0 g recipiente plstico y lejos de la luz.
de sulfito de sodio anhidro (NA2SO3) en Descar-tar la solucin cuando se observe
500 ml de agua destilada y aadir 10 g formacin de precipitado blanco. La
de metol (p- metil-amonio-fenol-sulfato - solucin es estable duran-te varias
C14H20N2O6S), disolver y filtrar la semanas.
solucin en papel Whatman # 1; guardar
en fras-co plstico.
Reactivo reductor: Mezclar 100 ml de
solucin de metol-sulfito, 60 ml de
Solucin de cido oxlico (C2H2O4): solucin de cido oxlico, 60 ml de cido
Disolver 50 g de cido oxlico (C2H2O4) sulfrico y completar a 300 ml con agua
R.A. en 500 ml de agua destilada. destilada. Este reactivo se prepara dia-
Almacenar en frasco plstico, dejando riamente.
decantar los cristales. La solucin es
estable por varios meses.
Solucin estndar de silicatos: Pesar
Acido sulfrico 50%: Mezclar 250 ml de 0.1880 g de silico-fluoruro de sodio
cido sul-frico concentrado con 250 ml (Na2SiF6), previamente se-cado a 105 C,
de agua destilada. Dejar enfriar y disolver en 100 ml de agua
almacenar en recipiente de polieti-leno.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 57


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

estn en el rango de trabajo de las


muestras
desionizada y completar a un litro.
Inmediatamen-te, trasvase en botellas de
polietileno, la solucin es estable por
varios meses y contiene 10000 g.at.Si/l.

6.4 Procedimiento

Adicionar 10 ml de solucin de
molibdato a un erlenmeyer
Agregar 25 ml de muestra filtrada y
mezclar bien, dejar en reposo durante
15 minutos
Adicionar 15 ml de la mezcla
reductora y agitar inmediatamente
Dejar la solucin en reposo durante 2
horas para total reduccin
Medir la absorbancia a 810 nm de
cada una de las muestras, el estndar
de trabajo de 10.0 g.at Si/l y el
blanco de reactivos

Determinacin del blanco

Usar agua desionizada que haya sido


colectada en botellas de polietileno en
lugar de las muestras para determinar la
absorbancia del blanco.

6.5 Calibracin

Stock secundario: Diluir 1.0 ml de la


solucin estndar a 100 ml en agua
desionizada. Su con-centracin
equivale a 100 moles/l
Medir 0.25, 1.25, 2.50, 3.75 y 5.00 ml
de la so-lucin secundaria y completar
a 25 ml con agua desionizada en
balones aforados; las concen-traciones
de estas soluciones son 1.0, 5.0, 10.0,
15.0 y 20.0 g.at.Si/l respectivamente,
o selec-cionar concentraciones que
De la curva de calibracin se obtiene
directamen-te la concentracin de la
Aplicar el proceso descrito para la muestra, as:
muestra y el blanco
Abs - b
Aplicar una regresin lineal a los C =
resultados y cal-cular la concentracin m
de la siguiente forma: De-terminar la
pendiente (m) y el intercepto (b) de la C = Concentracin de la muestra en
curva de calibracin. [Y = mX+b]. g.at.Si/l Abs = Absorbancia de la
muestra corregida
Abs = C * m + b (menos la absorbancia del
blanco) b = Intercepto
Y = Abs = Valor de la absorbancia del m = Pendiente de la curva de
estandar regresin
X=C = Concentracin del estandar
en Recomendaciones
g.at Si/l
b = Intercepto Normalmente la reaccin se completa en
1 hora, excepto cuando se encuentran
altos valores de silicatos. Las soluciones
6.6 Clculos pueden medirse hasta en 6 horas.

58 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

6.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Adicionar 10 ml de Sln.
Medir 25 ml de de Heptamolibdato Montar patrn
muestra de 10.0 ug.at/l
Vial plstico

Montar un blanco
de reactivos
Agitar y dejar en
reposo 10-30 min.

Preparar sln. Adicionar 15 ml


reductora de Sln. reductora

Dejar en reposo
por 2 horas

Leer absorbancia
a 810 nm

Clculos
Analysis. Fish. Res. Board of Canada.
Segunda Edicin. Otawa.

6.8 Bibliografa de consulta

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.

Mullin, J.B. y J.P. Riley. 1955. The


Colorimetric Determination of Silicate
with Special Refference to sea and
Natural Water. Anal. Chem. Acta 12: 162-
176.

Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A


Practical Handbook of Seawater
los iones silicatos presentes en la
muestra de agua filtrada se hacen
reaccionar con molibdato de amonio,
7. Determinacin de silicato (mtodo de formndose complejos ama-rillos de
Koroleff) silicomolibdato, fosfomolibdato y
arsenomolibdato. Seguidamente se
En el Instituto de Investigaciones elimina la in-terferencia debida a los dos
Marinas y Costeras - INVEMAR para la ltimos complejos y finalmente se reduce
determinacin de silicatos se sigue con cido ascrbico el com-plejo
actualmente una modificacin del silicomolibdato, a un complejo azul, cuya
mtodo del Metol (ver numeral 6); la absorbancia se mide a 810 nm utilizando
modifi-cacin dada por Koroleff (1971), celda de 10 mm para aguas costeras y
utiliza en el pro-ceso analtico cido estuarinas y celda de 100 mm para aguas
ascrbico como reductor. Bsicamente, de mar abierto.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 59


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Alcance y aplicacin Solucin de cido ascrbico: Disolver


4.375 gra-mos del reactivo en 250 ml de
Este mtodo es aplicable a silicato agua desionizada. Almacenar congelado
reactivo en todo tipo de aguas naturales, en recipiente de polietileno. Descongelar
especialmente marinas, tambin para solamente al momento de uso. La
desechos domsticos e industriales. solucin es til mientras permanezca
ligeramente amarilla.
La mnima concentracin de silicatos,
expresada como Si, que se puede
detectar utilizando celda de 10 mm es Reactivo Mixto: Agregar directamente en
1.0 g-at/L, que es equivalente a 1.4 un reci-piente plstico, 50 ml de solucin
g/L de Si. de heptamolib-dato a 50 ml de cido
sulfrico 7.2 N (no agregar el cido al
molibdato). La solucin es estable du-
rante varios meses.
7.1 Toma de muestra, almacenamiento y La solucin es estable durante varias
preservacin semanas.

Ver numeral 1.1. Solucin de cido oxlico (C2H2O4):


Disolver 25 gramos del reactivo puro en
250 ml de agua desionizada. Almacenar
7.2 Materiales y equipos en recipiente plstico. La solucin es
estable durante varios meses.
Ver numeral 6.2.

7.3 Reactivos

Acido sulfrico 7.2 N: A 200 ml de agua


desioni-zada agregar con cuidado 50 ml
del cido con-centrado. Dejar enfriar y
almacenar en recipiente de polietileno

Solucin de heptamolibdato de
amonio
[(NH4)6Mo7O24.4H2O]: Disolver 50 gramos
del reactivo en 100 ml de agua
desionizada, luego diluir a 250 ml con
agua desionizada y almacenar en
recipiente plstico protegido de luz
directa. Descartar la solucin cuando se
observe formacin de precipitado blan-co.
Agregar 0.7 ml de cido oxlico y
Solucin estndar de silicatos: Pesar agitar
0.1880 g de silico-fluoruro de sodio Agregar 0.7 ml de cido ascrbico,
(Na2SiF6), previamente se-cado a 105 C, mezclar bien y dejar en reposo 30
disolver en 100 ml de agua desionizada y minutos
completar a un litro. Inmediatamen-te, Seleccionar una longitud de onda de
trasvasar en botellas de polietileno. La 810 nm en el espectrofotmetro
solu-cin es estable y contiene 10000 Seguidamente, registrar la
g.at Si/l. absorbancia de cada una de las
muestras, el estndar de trabajo de
10.0 g.at Si/l y el blanco de reactivos
7.4 Procedimiento
Determinacin del blanco
Depositar en los viales plsticos, 25 ml
de la muestra de agua filtrada Usar agua desionizada que haya sido
Adicionar 0.7 ml del reactivo mixto, colectada en botellas de polietileno en
mezclar y dejar en reposo entre 10 y lugar de las muestras y llevar a cabo el
20 minutos procedimiento.

60 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

7.5 Calibracin C = Concentracin de la muestra en


g.at.Si/l Abs = Absorbancia de la
El proceso de calibracin es idntico al muestra corregida
descrito en el numeral 6.5. (menos la absorbancia del
blanco) b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de
regresin

7.6 Clculos
Recomendaciones
De la curva de calibracin se obtiene
directamen-te la concentracin de la Normalmente la reaccin se completa en
muestra, as: una hora, excepto cuando se encuentra
altos valores de silicatos. Las soluciones
Abs = C * m + b pueden medirse hasta en 6 horas.

7.7 Diagrama de flujo

Filtrar la muestra

Medir 25 ml de
muestra

Montar patrn de Adicionar 0.7 ml de reactivo Montar un blanco


10,0 ug.at/l mixto, reposo 10-20 min. de reactivos

Adicionar 0.7 ml
de cido oxlico

Adicionar 0.7 ml de
cido ascrbico

Dejar en reposo
30 minutos

Leer absorbancia
a 810 nm

Clculos
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 61
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

cobre (CuSO4), como catalizador),


convierten el nitrgeno amino de cual-
7.8 Bibliografa quier material orgnico a amonio. El
amoniaco liberado tambin es convertido
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; a amonio, despus se adiciona base y el
Snchez, J. 1993. Manual de tcnicas amoniaco es destilado del medio alcalino
analticas de parmetros fsi-co-qumicos y absorbido en cido brico o sul-
y contaminantes marinos. Centro de
Investigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena.

Grasshoff, Klaus, et al. 1976. Methods of


Seawater Analysis. Verlag Chemie,
Weinheim. New York. 149 pp.

8. Determinacin del nitrgeno total


(NTK)

El nitrgeno Kjeldahl es definido como la


suma de amonio libre y compuestos
orgnicos nitroge-nados que son
convertidos a una sal de amonio
(NH4)2SO4, despus de la digestin de la
muestra en medio cido y en presencia
de un catalizador. El amonio es destilado
en medio alcalino y recu-perado
nuevamente para su cuantificacin.

El nitrgeno Kjeldahl orgnico es la


diferencia ob-tenida substrayendo el
amonio libre del valor del nitrgeno
Kjeldahl total. El origen del nitrgeno
orgnico puede ser natural o industrial
como de-sechos alimenticios,
farmacuticos de productos peptdicos,
colorantes, etc. Para la ingeniera sa-
nitaria es muy importante el contenido
de nitr-geno de origen orgnico, ya que
indica el grado de contaminacin de la
masa de agua.

En principio la presencia de H2SO4,


sulfato de potasio (K2SO4), y sulfato de
presente una gran cantidad de materia
or-gnica, se consumir gran parte del
frico. El amonio liberado puede ser cido, incre-mentando la relacin de sal
determinado colorimtricamente, por a cido, con el consi-guiente incremento
electrodo amonio-selec-tivo o por de la temperatura de diges-tin y si el
titulacin con una solucin estndar de contenido es muy elevado, la tempera-
cido (APHA, 1998). tura puede ascender sobre 400oC,
resultando en la prdida piroltica del
Una de las interferencias que presenta el nitrgeno.
proceso de digestin es el contenido de
sales y slidos inorgnicos en la muestra. Alcance y aplicacin
El contenido de cido y sal del reactivo
de digestin Kjeldahl tienen la intensin Este mtodo es aplicable a todo tipo de
de producir una temperatura cercana a aguas, teniendo en cuenta las
380oC. Si la muestra contiene una interferencias que se men-cionaban
cantidad muy grande de sales o slidos anteriormente. Tambin se puede utili-
inorgnicos que se di-suelvan durante la zar para la determinacin en sedimentos
digestin, la temperatura pue-de y orga-nismos.
elevarse sobre 400oC, punto en el cual
empie-za a presentarse una prdida
piroltica de nitrge-no. Para prevenir Parte de la precisin del mtodo est
una temperatura de digestin excesiva muy relacio-nada con la determinacin
se debe mantener el balance cido - sal. final del amonio. La sensibilidad de los
mtodos colorimtricos los hace
El contenido de materia orgnica (MO) particularmente tiles para determinar
tambin puede provocar interferencias; niveles de nitrgeno orgnico inferiores
durante la diges-tin el cido sulfrico a 5 mg/l. La titula-
oxida la MO a CO2 y agua. Si est

62 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Agua destilada y desionizada: Exenta de


amonio (recin obtenida).
cin y los mtodos de electrodo selectivo
para la medicin del amonio son Reactivo de digestin: Disolver 134 g de
utilizados en un rango ms amplio de K2SO4 y 7.3 g de CuSO4 en cerca de 800
concentracin de nitrgeno org-nico. ml de agua. Cui-

8.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

En muestras de sedimento la recoleccin


se hace con draga o corazonador, se
transfiere con cucha-ra de hierro
inoxidable o plstica a un contenedor
hecho de papel aluminio. Si el anlisis no
se rea-liza inmediatamente, es preciso
congelar la mues-tra a una temperatura
de -20oC.

Para muestras de agua se sigue el


procedimiento dado en el numeral 1.1
pero sin filtrarla; los resul-tados son ms
significativos en muestras frescas, si no
es posible el anlisis inmediato
preservarla acidificando a pH menor a 2
con H2SO4 concen-trado y almacenar
refrigerada a 4oC.

8.2 Materiales y equipos

Equipo de digestin con sistema de


recoleccin de gases
Equipo de destilacin con flujo de
vapor Equipo titulador
pH-metro
Erlenmeyers de
250 ml Vasos de
precipitado

8.3 Reactivos
Solucin de cido brico (H3BO3):
Disolver 20 g de reactivo analtico en
dadosamente agregar 134 ml de H2SO4 agua, y diluir a 1 l.
concentra-do. Cuando se haya enfriado
hasta temperatura ambiente, diluir la Solucin indicadora de cido brico:
solucin a 1 L con agua. Mez-clar bien y Disolver 20 g de H3BO3 en agua, agregar
mantener a una temperatura cercana a 10 ml de la solucin indicadora mixta y
20oC para prevenir la cristalizacin. diluir a 1 l. Preparar mensual-mente.

En el mercado se consiguen tabletas de Solucin indicadora mixta: Disolver 200


digestin Kjeldahl, si se utilizan estas mg de indicador rojo de metilo en 100 ml
tabletas el reactivo de digestin es de alcohol etlico del 95%. Disolver 100
reemplazado y a la muestra se le agrega mg de azul de metileno en 50 ml de
slo 15-20 ml de H2SO4 concentrado y 1 alcohol etlico del 95%. Com-binar las
2 tabletas. soluciones. Preparar mensualmente.

Hidrxido de sodio 6N: Diluir 240 g en Solucin titulante de cido sulfrico


agua y completar 1 l. 0,02N: Pre-parar una solucin de H2SO4
0.1N diluyendo 3 ml de H 2SO4
Solucin tampn de borato: Agregar 88 concentrado a 1 l con agua destilada
ml de so-lucin de NaOH 0,1 N a 500 ml libre de CO2. Diluir 200 ml de esta
de solucin de tetraborato de sodio solucin a 1l con agua destilada.
(Na2B4O7) aproximadamente 0,025 M Estandarizar el cido 0,02N contra una
(9.5 g Na2B4O7.10H2O/l) y diluir a 1 litro. solucin de Na2CO3 0,0200 N (1,060 g de
Na2CO3 anhidro secado a 140 oC, diluido
a 1000 ml con agua destilada).

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 63


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

calentamiento en el aparato de diges-


tin Kjeldahl
8.4 Procedimiento Calentar bajo una campana de
extraccin o con equipo de remocin
Seleccionar el volumen de muestra de la de gases
tabla si-guiente: Continuar la ebullicin vigorosa hasta
que la
Nitrgeno orgnico en Volumen de
la muestra, mg/l muestra, ml
4-40 50.0
8-80 25.0
20-200 10.0
40-400 5.0

Para muestras de lodos y sedimentos,


pesar una porcin de muestra hmeda
que contenga entre 0.2 y 2 mg de
nitrgeno orgnico en un crisol o en un
pesasustancias. Transferir la muestra al
tubo de digestin diluyendo y
enjuagando el recipien-te de pesaje
varias veces con pequeas cantida-des
de agua. Hacer esta operacin con la
canti-dad ms pequea posible de agua,
sin exceder un volumen de 50 ml.

Determinar a una submuestra el


contenido de hu-medad.

Digestin

Cuidadosamente agregar 10 ml de
reactivo de digestin al baln Kjeldahl
que contiene la muestra

En muestras marinas el contenido de


sal pue-de afectar negativamente el
anlisis, por lo cual es recomendable
la adicin de cido extra (aprox. 10
ml)
Agregar 4 perlas de ebullicin para
prevenir sacudidas durante la
digestin. Ajustar cada uni-dad de
mente sumergida dentro del cido
brico
solucin se haga transparente y verde Destilar la muestra hasta obtener un
plida y se observen copiosos vapores volumen de 150 a 200 ml
Calentar al mximo y digerir por 30 aproximadamente. La presen-cia de
minutos adicionales amoniaco cambia el color de la
solucin de cido brico de azul a
Destilacin verde, cuando se ha empleado el
indicador
Enfriar y transferir el tubo con la
muestra dige-rida al equipo de
destilacin Determinacin del amoniaco
Diluir la muestra digerida con agua
destilada hasta aproximadamente 50 Mtodo acidimtrico o titulomtrico:
ml de volumen total
Adicionar solucin de hidrxido de Ajustar el volumen del destilado a 250
sodio para neutralizar la muestra ml
digerida hasta obtener un viraje de Titular el amoniaco en el destilado con
color claro a oscuro (50 ml son el es-
suficientes) tndar de H2SO4 0.02N hasta que el
En un erlenmeyer medir entre 50 y 75 indicador cambie a un color lavanda
ml de solucin de cido brico y si plido
desea, adicionar 2 3 gotas de
indicador mixto. Colocar el Mtodo del indofenol:
erlenmeyer en el destilador de
nitrgeno por debajo del tubo de La determinacin del amoniaco destilado
salida del destilado. Asegu-rar que la tambin se puede realizar mediante el
punta del condensador est total- mtodo del azul de

64 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

indofenol (ver numeral 1), pero el Muestras slidas (sedimentos,


destilado se debe recoger sobre una organismos, lodos):
solucin diluida de cido sulfrico; este
mtodo es aplicable para concen- (A B) * 280
traciones por debajo de 1 mg N/l. mg N /kg = -
g muestra seca

8.5 Calibracin A = Volumen de H2SO4 0.02 N


gastado en la titulacin de la
Durante todo el proceso se debe llevar muestra (ml)
un blanco de reactivos y un estndar de B = Volumen de H2SO4 0.02 N
concentracin co-nocida de fenilamina gastado en la titulacin del
blanco (ml)
para determinar el rendi-miento y
porcentaje de recuperacin del mtodo.
Recomendaciones
Si la cuantificacin final del amoniaco se
hace por el mtodo del indofenol, se
El proceso convierte los componentes
debe seguir el proce-dimiento descrito
nitrogenados de origen biolgico tales
en el numeral 1.5.
como aminocidos, protenas y
pptidos a amonio, ms no convierte
8.6 Clculos los compuestos nitrogenados de
algunos desechos industriales como
nitro-compuestos, hidrazas, oximas,
Si la cuantificacin final del amoniaco se
semicarbazonas y algunas aminas
hace por el mtodo del indofenol, se
terciarias
debe seguir el proce-dimiento descrito
en el numeral 1.6. Si se sigue el mtodo El mtodo es muy susceptible a la
titulomtrico o acidomtrico (aplicable contamina-cin, la digestin,
para concentraciones superiores a 1 mg destilacin y anlisis de amonio deben
N/l), la concentracin de nitrgeno se ser hechos en un ambiente exen-to de
obtiene como: vapores amoniacales
Durante la destilacin es preciso
Muestras lquidas: controlar la rata de generacin de
vapor para ebullir el con-tenido de
(A B) * 280 destilacin de tal manera que no
mg N /l = ocurra escape de vapor en la salida del
ml muestra con-densador ni tampoco burbujeo del
contenido del erlenmeyer receptor

Mantener la relacin sal - cido en el


tubo de digestin para prevenir la
prdida de nitrgeno por el
sobrecalentamiento (superior a 400oC)
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 65
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

8.7 Diagrama de flujo

Montar estndar
de 20mg de Medir Vol. o g de Montar un blanco
fenilamina muestra de reactivos

Diluir a 50 ml
Tubo de digestin

Adicionar a 50 ml
Adicionar 10 ml de de Sln. de NaOH
Reac. de digestin

Recoger el destilado
Digestin de Adicionar perlas de sobre 50-75 ml Ac. Destilacin del
la muestra ebullicin Brico NH3

Ebullir hasta que la Destilar hasta obtener


Sln. se torne clara 150-200 ml

Calentar al mximo
por 30 min. ms. Medir el NH3
destilado

Enfriar, transferir al
Eq. de destilacin
Mtodo Mtodo del azul de
titulomtrico Indofenol, numeral 1.4

Clculos
En los sistemas riparios la mayor parte
de este se encuentra en

8.8 Bibliografa de consulta

APHA, 1998. Standard Methods for the


Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 4-124
pp.

ASTM,1994. American Society for


Testing and Materials. Method D3590.
Philadelphia.

9. Determinacin del fsforo total

El fsforo es un nutriente esencial para


la produc-tividad de un sistema acutico.
Como el fsforo se presenta en
combinacin con la materia orgnica,
debe disponerse de un mto-do de
digestin que garantice la liberacin del
forma particulada, el cual al contacto
fsforo como ortofosfato para permitir la
con el agua marina y debido a los
cuantifi-cacin del fsforo total. Existen
cambios qumicos que se generan, se
tres mtodos de digestin: (a) Con cido
precipita quedando slo la fraccin
perclrico, (b) Con cido sulfrico
disuelta para ser utilizada por los
cido ntrico y (c) Con persulfato. De
organismos vi-vos (Kiely, 1999).
estos mtodos la digestin con cido
perclrico es la ms fuerte, por lo cual es
la que ha adoptado el INVEMAR.

66 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Adems de los reactivos utilizados para


Alcances y aplicacin
la deter-minacin de fosfatos (ver
numeral 5.3.), se requie-ren los
Este mtodo es aplicable a todo tipo de
siguientes:
aguas naturales, en especial a las
marinas. Su precisin viene dada por el
mtodo empleado para la de-terminacin
de la concentracin de iones PO 43-
liberados.

9.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Para muestras de agua se sigue el


procedimiento dado en el numeral 1.1,
pero sin filtrarla.

9.2 Materiales y equipos

Espectrofotmetro VIS con rango


espectral de 400-900 nm
Celdas de vidrio de 1 10 cm de paso
ptico Viales de 40 ml
Dosificadoras o pipetas de 1 y
2 ml Probetas de 100 y 50 ml.
Plancha de
calentamiento
Campana de
extraccin
Vasos de precipitado de 200 y
50 ml Balones aforados de 50
ml Erlenmeyers de 125 ml
Vidrios de reloj
Autoclave con capacidad de desarrollar
98 a 137 KPa

Cuchara de vidrio o esptula de


porcelana para la adicin de cristales de
persulfato

9.3 Reactivos
Acido perclrico concentrado (70%) 9.4 Procedimiento

Acido clorhdrico concentrado 9.4.1 Digestin con cido perclrico

Solucin de hidrxido de sodio 4N: Adicionar a un erlenmeyer de 125 ml,


Disolver 40.0 g en 100 ml de agua 50 ml de muestra sin filtrar
desionizada, dejar enfriar y completar a Agregar 3 ml de cido perclrico
250 ml. concentrado y agitar
Someter a calentamiento en una
Solucin indicadora de fenolftaleina al plancha para llevar a cabo la digestin
1%: Pesar 1.0 g de fenolftaleina y de la materia orgnica
disolver a 100 ml con agua desionizada. Cuando se desprendan vapores
blancos del cido perclrico, disminuir
la temperatura y cu-brir con un vidrio
Solucin de hidrxido de sodio 1 N. de reloj, dejar por 10 minu-tos en
estas condiciones
Solucin de cido sulfrico: Disminuir la temperatura y dejar
Cuidadosamente adi-cionar 30 ml de enfriar
H2SO4 concentrado a aproxima-damente Agregar 3 ml de cido clorhdrico y
600 ml de agua desionizada y completar calentar nuevamente
a 1000 ml. Cuando queden aproximadamente 5
ml de muestra, apagar la plancha y
dejar enfriar
Persulfato de amonio (NH4)2S2O8, o
persulfato de potasio K2S2O8 en cristales.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 67


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

A la muestra fra, agregar 2 gotas de Ajustar el volumen de la muestra a


solucin indicadora de fenolftaleina 100 ml y proceder a la determinacin
Neutralizar la solucin mediante la de los fosfatos si-guiendo el
adicin de NaOH 4N, llevar hasta una procedimiento del numeral 5.4
coloracin ligera-mente rosada
Ajustar el volumen de la muestra a 25
ml y proceder a la determinacin de 9.5 Calibracin
los fosfatos si-guiendo el
procedimiento del numeral 5.4 La calibracin del mtodo para la
Es necesario montar con cada set de determinacin de los fosfatos liberados
muestras un blanco de reactivos y un durante la digestin se hace de acuerdo
estndar de 1.5 g.at P/l con el numeral 5.5.

Es necesario verificar el proceso de


9.4.2 Digestin con persulfato digestin y cuan-tificacin de la muestra,
para ello se utiliza una solu-cin estndar
Un procedimiento alternativo a la de fosfato de concentracin conocida
digestin con cido perclrico y muy (1.5 g.at P/l), la cual se somete a todos
fcil de aplicar es el si-guiente: los pasos del proceso y se determina la
concentracin. Este mismo estndar
sirve para controlar el mtodo, lle-vando
Agitar fuertemente y tomar 50 ml de el registro a travs de cartas de control.
muestra sin filtrar
Adicionar 0.05 ml (1 gota) de solucin
indi-cadora de fenolftaleina, si aparece 9.6 Clculos
un color rojo
adicionar gota a gota solucin de La determinacin de fsforo total como
H2SO4 hasta que desaparezca g.at P/l se hace de la lectura final de
Agregar 1 ml de solucin de H 2SO4 y iones fosfatos libera-dos despus de
0.4 g de (NH4)2S2O8, 0.5 g de K2S2O8 haber sometido la muestra a un proceso
Someter a calentamiento por 30 de digestin. Por esta razn, para calcu-
minutos en un autoclave a 98 - 137 lar la concentracin de fsforo se sigue
Kpa el proce-dimiento descrito en el numeral
Enfriar y agregar una gota de solucin 5.6.
indi-cadora de fenolftaleina y
neutralizar mediante la adicin de Es necesario recordar que, si se llev a
NaOH 1N, llevar hasta una colo-racin digestin una muestra de 50 ml y para la
ligeramente rosada determinacin de los fosfatos se ajust el
volumen a 25 ml, se debe dividir la
concentracin obtenida por dos.
68 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

9.7 Diagrama de flujo

Montar patrn de Medir 50 ml de Montar un blanco


1.5 ug.at/l muestra sin filtrar de reactivos

Adicionar 3ml de Ajustar volumen


a 25 ml
Ac. Perclrico
Calentar hasta Determinar los

fostatos segn
vapores blancos numeral 5.4
Cubrir y mantener Clculos

por 10 min.
Digestin de Enfriar
la muestra
Adicionar 3 ml

de HCl
Calentar y secar

a 5 ml
Neutralizar

9.8 Bibliografa de consulta

APHA. 1998. Standard Methods for the Examination Rodier, J.1981. Anlisis de
las aguas. Aguas natu-
of Water and Wastewater. Edition 20. APHA/rales, aguas residuales y agua de mar.
Ediciones
AWWA/WPCF. 4-142 pp. Omega. Barcelona-Espaa.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 69
OXGENO DISUELTO Y CLOROFILAS
La evaluacin del oxgeno disuelto (OD)
en todo sistema de agua natural, es de
importancia funda-mental para conocer
la distribucin de organis-mos en los
ocanos, para los estudios de descom-
posicin de materia orgnica y para la de
1. Determinacin de oxgeno disuelto
produc-tividad de los mismos.
(mtodo Winkler)

El oxgeno (O2) procedente de la


atmsfera se disuelve directamente en
las aguas superficiales, o se genera
mediante la fotosntesis en las capas
superiores iluminadas. Con el aumento
de la profundidad, el O2 disminuye, en
parte, al ser con-sumido por la
respiracin de microorganismos y de
otro lado, por la descomposicin
microbiana de los detritos orgnicos y
por el fenmeno de absorcin. Su ndice
de saturacin en el agua de mar con una
salinidad de 27.1 , temperatura de
25C y presin de 1 atmsfera, es de
7.08 mg/l (4.96 ml/l). (Ver anexo. Tabla
de solubilidad del oxgeno disuelto en
agua).

La vida, el crecimiento de
microorganismos y el desarrollo de sus
actividades metablicas espec-ficas,
dependen de la disponibilidad de oxgeno
molecular. Algunos procesos tienen lugar
solamen-te bajo condiciones aerobias,
otros en cambio, son estrictamente
anaerobios.
Se han desarrollado varios mtodos
analticos para su estimacin. Los
volumtricos, gasomtricos y la
cromatografa de gases han sido
utilizados en primera instancia. En los
ltimos aos se ha avan-zado mucho en
equipos electrnicos para la
determinacin del OD con electrodos de
mem-brana.

El Mtodo Volumtrico de Winkler (1888)


revisa-do por Carpenter (1966), sigue
siendo el de ms utilizacin por parte de
la comunidad de labora-torios debido a
su sensibilidad, precisin y relati-va
Bureta digital automtica utilizada para la determi- sencillez. Una muestra de agua se hace
nacin de oxgeno disuelto por el Mtodo Winkler reac-cionar con una solucin de iones
manganosos y

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 71


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

dos veces con la misma agua. La muestra


se trasiega lentamente, introduciendo la
una solucin yoduro-alcalina, la cual manguera de caucho hasta el fondo de la
lleva incor-porado azida de sodio cuya bote-lla y dejando que el agua reboce.
funcin es la de eli-minar interferencias Luego la man-guera se saca lentamente.
debidas a iones oxidantes como nitritos y
materia orgnica presente; al mis-mo
tiempo que se le protege del aire para
evitar la oxigenacin.

Alcance y aplicacin

El mtodo es aplicable a todo tipo de


aguas natu-rales, residuales domsticas
e industriales, con es-pecial referencia al
agua de mar. La exactitud glo-bal del
Mtodo Winkler es determinada por la
estequiometra de la secuencia de
reacciones, as como por las exactitudes
de cada uno de los tra-tamientos y
manipulaciones de las muestras. As
mismo, la calibracin de los aparatos
volumtricos utilizados es esencial para
alcanzar una alta exac-titud, existen
buretas digitales que proporcionan +/-
0.01 ml de precisin.

La precisin del mtodo, numricamente


expre-sada por la desviacin estndar es
de +/-0.02 mg/ l para mediciones hechas
sobre agua destilada; y cerca de +/- 0.06
mg/l en muestras de aguas de desecho y
efluentes residuales (APHA, 1998).

1.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

La muestra para determinacin de


oxgeno disuelto debe ser tomada de la
botella muestreadora antes que
cualquier otra, usando una manguera de
cau-cho y evitando introducir burbujas
de aire. La botella Winkler en la cual se
colecta, debe enjua-garse por lo menos
Cuando se trata de muestras de Las muestras se almacenan en un lugar
superficie toma-das con un balde, se fresco y preferiblemente oscuro,
sumerge la botella Winkler en el balde procedindose a su tras-lado al
sostenindola en forma oblicua, de-jando laboratorio para el anlisis respectivo, el
que el agua escurra suavemente por las cual debe realizarse en un tiempo no
paredes y evitando las turbulencias. mayor de 12 horas. Si se emplean
matraces con un embudo, que permiten
En forma rpida se agregan primero 2 un sello de agua entorno al tapn,
ml de solu-cin de sulfato de manganeso, tomando adems las precauciones
colocando la pun-ta del dosificador o mencionadas, se pueden almacenar por
pipeta bajo la superficie, de modo que la varios das (Riley, 1975). Los errores
salida del reactivo se ubique cerca de la observados son menores que 0.5%.
base del cuello de la botella, luego 2 ml
de solucin yoduro-alcalina. Al agregar
el segundo reactivo a la muestra, la 1.2 Materiales y equipos
punta del dosificador o pipeta no debe
introducirse en el lquido, sino justo Bureta electrnica o
sobre la superficie cerca del borde del digital Botellas
ma-traz, para evitar contaminacin con Winkler de 300 ml
ion manga-noso. Si esta contaminacin Erlenmeyers de 125
ocurriera, el manga-neso (II) transferido ml
a la botella de yoduro alcalino Pipetas aforadas de 1, 2 y 10 ml
determinara la formacin de precipitado Balones aforados de 50, 100, 250, 500 y
que obli-gara a desechar el reactivo. 1000 ml Beaker de 1000 ml
Posteriormente se tapa y se agita
fuertemente.

72 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Mangueras de caucho 1.4 Procedimiento


Balde plstico de 10 l
Balanza analtica (+/- 0.0001g) Fijar el oxgeno de la muestra con 2 ml
de so-lucin de sulfato de manganeso,
y luego 2 ml de solucin yoduro-
1.3 Reactivos alcalina, agitar fuertemen-te y dejar en
reposo por 15 minutos
Sulfato de manganeso (MnSO4): Disolver Agitar fuertemente y adicionar 2 ml de
182.5 g de sulfato de manganeso en solu-cin de cido sulfrico, mezclar
agua destilada y com-pletar a 500 ml. hasta la diso-lucin del precipitado.
Dejar en reposo por 10 minutos,
Solucin yoduro-alcalina: Disolver 125.0 manteniendo la botella en la oscuri-
g de hi-drxido de sodio (NaOH) en 125 dad
ml de agua des-tilada. Disolver 75.0 g de
yoduro de potasio (KI) en 100 ml de agua Tomar alcuotas de 50 ml por
destilada. Una vez fras, mez-clar las dos duplicado. Titu-lar con solucin de
soluciones y agregarle 2.5 g de azida de tiosulfato 0.01N hasta obte-ner color
sodio disuelta en 10 ml de agua amarillo plido. Adicionar dos gotas de
destilada, com-pletar a 500 ml. solucin de almidn. Seguir titulando
hasta desaparicin del color azul.
Anotar los vol-menes de tiosulfato y
Acido sulfrico (70%): Mezclar 350 ml de promediar
cido sulfrico concentrado con 150 ml
de agua destila-da.
1.5 Calibracin

Solucin de almidn 3%: Disolver 3.0 g Pipetear 2 alcuotas de 10 ml de


de almi-dn soluble en 100 ml de yodato de potasio 0.01N en
glicerina, calentar hasta disolucin total. erlenmeyers de 125 ml
Adicionar 40 ml de agua destilada a
Tiosulfato de sodio 1N (Na2S2O3.5H2O): cada uno y agitar
Disolver 62.045 g tiosulfato de sodio en Adicionar 2 ml de solucin de cido
agua destilada, pre-viamente hervida y sulfrico y agitar
completar 250 ml. Agregarle 0.5 ml de Adicionar 2 ml de solucin yoduro-
disulfuro de carbono (CS2) como pre- alcalina y agitar
servativo. A partir de sta se prepara la
de 0.01 N. Guardar en botella mbar. Dejar en reposo por 15 minutos
Titular con tiosulfato 0.01N, anotar los
Solucin estndar de yodato de potasio vol-menes y obtener el promedio de
0.01 N ellos (V2)
(KIO3): Pesar exactamente 0.3567 g de Determinar la verdadera normalidad
yodato de potasio, previamente secado, del tiosulfato por:
disolver en agua des-tilada y completar a
1.0 l en un matraz aforado. 10 ml x N KIO3
Nt = N KIO3= Normalidad del yodato de
V2 potasio (0.01N).

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 73


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

1.6 Clculos Donde:


V = Volumen del frasco (300 ml)
La concentracin de oxgeno disuelto en V1 = Volumen de tiosulfato 0.01N
las mues-tras, puede calcularse a partir gastado para
de la ecuacin: titular la muestra
Vm = Volumen de la alcuota tomada (50
ml)
mg OD/l = 8000 x ( V1) x V x Nt Nt = Normalidad del tiosulfato de sodio
- V -4 = Volumen corregido, teniendo en
cuenta la
(V -4) x Vm
adicin de los dos primeros
reactivos
Nota: Para pasar la concentracin a ml/l
divida la concentracin en mg/l por
1.4285.

1.7 Diagrama de flujo

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Valorar el tiosulfato
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
de sodio
analticas de parmetros fsico-

Pipetear 10 ml de
KlO3 0.01 N

Adicionar 40
ml de agua

2 ml de Ac
sulfrico

2 ml de sln.
yoduro-alcalina

Reposar 15 minutos

Titular con el
tiosulfato de sodio

1.8 Bibliografa de consulta

APHA. 1998. Standard Methods for the


Examination of Water and Wastewater.
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 4-131
pp.
Titular con
tiosulfato de sodio
Tomar la muestra
en botella
Winkler
Clculos

Fijar el oxgeno: 2 ml
sulfato de manganeso
2ml sln. yoduro-alcalina

qumicos y contaminantes marinos.


Reposar 15 minutos
Centro de In-vestigaciones
Oceanogrficas e Hidrogrficas, CIOH.
Adicionar 2 ml
Ac. Sulfrico. Cartagena, 1993.

Obtener 2 Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas.


alicuotas de 50 Aguas natu-rales, aguas residuales y
ml de sln
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

74 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

2. Determinacin de clorofilas (mto-do


2.1 Toma de muestra, almacenamiento y
Stricklan y Parson)
preservacin
El mtodo qumico ms til para
La coleccin de muestras se realiza
determinar la cantidad de fitoplancton
mediante el uso de botellas
en agua de mar es esti-mar la cantidad
muestreadoras (Niskin, Nansen),
de clorofila (usualmente clorofila a).
Estas sustancias son pigmentos que se
encuen-tran en las plantas superiores,
algas, bacterias y organismos capaces de
llevar a cabo fotosntesis. Las presentes
en la naturaleza y que a la fecha han sido
registradas y descritas son: clorofilas a,
b, c, d, e.

La tcnica ha sido obtenida con base en


modifica-ciones hechas al mtodo inicial
formulado por Richards y Thompson
(1952). Un volumen de agua de mar es
filtrado en un filtro sinttico o en uno de
fibra de vidrio; los pigmentos son
extrados en acetona al 90% y su
concentracin es estimada
espectrofotomtricamente. Para alcanzar
comple-ta extraccin de los pigmentos,
es necesario des-truir las clulas
mecnicamente.

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a la estimacin


de los pigmentos en aguas naturales,
especialmente ma-rinas y continentales.
El lmite de deteccin de los pigmentos
vegetales en agua de mar no puede ser
expresado porque depende de la
cantidad de muestra filtrada. La
precisin del mtodo es del 90.0%, pero
cuando la concentracin de clorofilas es
menor de 0.2 mg/m3 (celda 1 cm)
disminuye apreciablemente.
Espectrofotmetro VIS
Celdas de 1 10 cm de paso
las cuales se transfieren a un frasco ptico Set de filtros con sus
plstico de 1000 ml, si es agua accesorios
proveniente de zonas costeras, o a una Filtro Millipore RAWP 0.47 m, 47 mm o
botella de 4.0 a 5.0 litros, si es agua de fibra de vidrio
ocenica. Balones aforados de
100 ml Homegenizador
Centrfuga
A medida que la muestra est siendo
filtrada, se adicionan unas pocas gotas
de suspensin de car-bonato de 2.3 Reactivos
magnesio para evitar la acidificacin del
filtro. Una vez ha pasado toda la muestra Suspensin de carbonato de magnesio:
a travs del filtro, este se retira. Si el Pesar 1.0 g de carbonato de magnesio
anlisis no puede realizarse reactivo analtico y vertirlo en 100 ml de
inmediatamente, el filtro se colo-ca en un agua destilada. Agitar fuerte-mente antes
desecador a -20 C hasta por 30 das. Los de usarlo y dispensar unas pocas go-tas
filtros pueden ser doblados a la mitad, desde un frasco lavador de 100 ml.
cubiertos con papel y asegurados con un
gancho para su almacenamiento. Solucin de acetona al 90%: Agregar a
20 ml de agua a 180 ml de acetona grado
reactivo para an-lisis. El reactivo puede
ser convenientemente al-macenado en
2.2 Materiales y equipos una botella de vidrio.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 75


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

2.4 Procedimiento cin para turbidez. Sustraer esta


lectura de cada uno de los valores de
Preparacin de la muestra densidad ptica de las otras longitudes
de onda antes de usarlos en las
Filtrar la muestra y adicionar unas ecuaciones de clculo
pocas gotas de suspensin de
carbonato de magnesio para evitar la
acidificacin del filtro 2.5 Clculos
Almacenar en refrigerador a 20C
Calcular la cantidad de clorofila a en
Tratamiento de la muestra cada extrac-to utilizando los valores de
OD corregidos en la siguiente ecuacin:
Colocar el filtro en un vial, cubrirlo
con 2 - 3 ml de solucin acuosa de Clorofila a = Cla = 11.64(DO663) -
acetona al 90% y macerar con el 2.16(DO645) + 0.10(DO630)
homogenizador
Enjuagar el homogenizador y ajustar La concentracin de Cla en el agua de
el volumen total a un nivel constante, mar se determina por medio de la
5 - 10 ml. Mantener las muestras toda siguiente frmula:
la noche en la oscuridad
Clarificar el extracto centrifugando los Cla x Volumen del extracto
tubos tapa-dos por 10 minutos a 1000 (ml)
rpm. Decantar el ex-tracto clarificado [Cla], mg/m3 = ___________________________________________________
a un tubo de centrfuga limpio de 15 Volumen de muestra (l)
ml y medir el volumen total del
extracto Recomendaciones
Transferir el extracto a una celda de 1
cm y medir la densidad ptica (DO) a Almacenar los filtros de las muestras
750, 663, 645 y 630 nm. Seleccionar congelados en un desecador y en la
una dilucin que d a 663 nm una DO oscuridad, en caso de no poder realizar
mayor que 0.2 y menor que 1.0. Las la extraccin inmediatamente. Usar
lecturas a 663, 645 y 630 nm tambin vidriera limpia y libre de cidos.
sirven para la determinacin de
clorofilas b y c. La lectura a 750 nm
sirve como una correc-

2.6 Diagrama de flujo


Macerar con
acetona 90%
Preparacin de la
muestra
Dejar 24 horas en
oscuridad

Filtrar suficiente
cantidad de muestra Centrifugar y ajustar
volumen
Adicionar 2 gotas de Leer las
carbonato de absorbancias a
magnesio al filtro 750, 663, 645 y
630 nm

Almacenar refrigerado
Clculos

76 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.2 Materiales y equipos

2.7 Bibliografa de consulta


Espectrofotmetro VIS
Celdas de 1 10 cm de paso ptico
Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.
Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A


Practical Handbook of Seawater
Analysis. Fish. Res. Board of Canada.
Segunda Edicin. Otawa.

3. Determinacin de clorofila a y
feopigmentos (mtodo de Lorenzen)

Los pigmentos fotosintticos presentes


en el agua se extraen con acetona
acuosa (90%) y se registra su
absorbancia a 665 nm, antes y despus
de aci-dificar la muestra. Este
procedimiento tiene la ven-taja de ser
mas rpido por requerir menos lectu-ras
en el espectrofotmetro.

Alcance y aplicacin

El mtodo es aplicable a la estimacin de


los pigmentos en aguas naturales,
especialmente ma-rinas y continentales.
El lmite de deteccin de-pende del
volumen de muestra de agua filtrada. En
todos los casos, los registros de
absorbancia del extracto final deben ser
mayor a 0.2.

3.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numeral 2.1.


Filtrar al vaco un volumen de agua
Set de filtros con sus accesorios
acorde con la cantidad de pigmentos
Filtro Millipore RAWP 0.47 m, 47 mm o
cloroflicos espera-dos y adicionar
de fibra de vidrio
unas pocas gotas de suspen-sin de
Balones aforados de
carbonato de magnesio
100 ml Homegenizador
Secar los filtros mediante la succin y
Centrfuga
con ayu-da de una pinza depositarlos
en tubos de cen-trfuga aforados de 5
ml
3.3 Reactivos
Almacenar refrigerado a 20C

Acetona 90%: En un frasco de vidrio


Tratamiento de la muestra
mbar de 250 ml mezclar 20 ml de
acetona con 180 ml de agua desionizada.
Agregar a cada tubo 3 ml de acetona
90% y extraer durante 2 minutos con
Acido clorhdrico: En frasco de vidrio de
ayuda de un tubo homogenizador
200 ml, mezclar 50 ml de cido con 50
Diluir el homogenizado con acetona
ml de agua desionizada.
90% has-ta completar 5 ml exactos.
Dejar en reposo 24 horas en la
oscuridad
3.4 Procedimiento Centrifugar los tubos a 4000 rpm
durante 10 minutos
Preparacin de la muestra

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 77


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Ajustar si es necesario el volumen a 5 3.5 Clculos


ml con acetona 90%
Con pipeta Pasteur, transferir el La concentracin de Clorofila a en g/l
sobrenadante a la celda se deter-mina por medio de la expresin
espectrofotomtrica de 10 mm siguiente:
Seleccionar la longitud de onda 665
nm, y re-gistrar la absorbancia de 27.63 (665o - 665a) (VA)
cada una de las mues-tras Clorofila a =

Seleccionar la longitud de onda 750 VM x L
nm y ajus-tar nuevamente el 0 de
absorbancia con la cel-da de La concentracin de feopigmentos en
g/l se de-termina por medio de la
referencia conteniendo acetona 90%
expresin siguiente:
Registrar la absorbancia de cada una
de las muestras
26.7 [ 1.7 (665a ) - 665o ]
Remover la celda de la muestra, con
(VA ) Feopigmentos =
un gotero adicionar 2 gotas de la

solucin de cido clor-hdrico, tapar la
VM x L
boca de la celda con aluminio y
mezclar el contenido invirtindola 5
665o : = Absorbancia a 665 antes de
veces
acidificar
Registrar nuevamente la absorbancia 665a = Absorbancia a 665 despus de
de las muestras, a 665 y 750 nm acidificar
VA = Volumen de acetona para la
extraccin (ml)
VM = Volumen de agua filtrada (l)
L = Longitud de la celda fotomtrica
(cm)

3.6 Diagrama de flujo

Macerar con acetona


Preparacin de la 90%
muestra
Dejar 24 horas en
oscuridad

Filtrar suficiente
cantidad de muestra Centrifugar y ajustar
volumen

Adicionar 2 gotas de Leer las absorbancias


carbonato de a 665 y 750 nm
magnesio al filtro

Adicionar 2 gotas de
HCl
Almacenar refrigerado
Leer las absorbancias
a 665 y 750 nm

Clculos

78 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.7 Bibliografa de consulta Alcance y aplicacin

Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972. A Este mtodo es aplicable a la estimacin


practical handbook of seawater analysis. de los pigmentos en aguas naturales,
Fish. Res. Board of Canada. Segunda especialmente ma-rinas y continentales.
Edicin. Otawa. El lmite de deteccin de-pende del
volumen de agua filtrado y la sensibili-
dad del fluormetro.
una disminucin aparente de la clo-rofila
4. Determinacin fluoromtrica de a.
clorofila a y feopigmentos

Este mtodo permite la deteccin de la


cantidad de fitoplancton en el agua de
mar como una medi-da de la
concentracin de clorofila a y
feopigmento a. As mismo, puede llegar a
cuantificarse la canti-dad de biomasa
total de una macroalga utilizando un
factor o la cantidad de fitoplancton
ingerido por invertebrados planctnicos
marinos (i.e. coppodos).

El extracto de clorofila a en acetona al


90 % es medido en un fluormetro, el
cual, mediante una longitud de onda
corta de excitacin, eleva los niveles de
energa de las molculas de clorofila a;
estas a su vez, al regresar a su nivel
inicial de energa, liberan calor y
fluorescencia que es cuan-tificada por el
equipo a una longitud de onda larga de
emisin.

El mtodo puede tener como


interferencias la presencia de
compuestos fluorescentes que se exciten
a la misma longitud de onda de la clorofi-
la a, como es el caso de astaxantinas
presentes en el cuerpo de los coppodos.
Tambin, la presen-cia de una relacin
clorofila b:a mayor a 0.2 podra causar
de vidrio tipo GF/F, cuyo tamao de poro
En trminos generales, el mtodo es de 5 es entre 0.5 - 0.8 mm, por lo cual,
a 10 veces ms sensible que el permite una determinacin de un amplio
espectrofotomtrico, pero podra ser espectro del fitoplancton incluyendo
menos exacto. Pueden llegar a obtenerse desde el picofitoplancton hasta el
precisiones de hasta el 10% en rplicas microfitoplancton.
de una misma muestra. Dada su alta
sensibilidad, pueden llegar a ser Para el caso de invertebrados
obtenidos valores de hasta 0.1 ng planctnicos, es ne-cesario capturar los
clorofila a /l. individuos a partir de muestras
narcotizadas en campo con solucin de
bicarbo-nato de sodio (i.e. soda) en
proporcin 1:10 v/v y congeladas a 20
4.1 Toma de muestra, almacenamiento y C. La preservacin de los indi-viduos
preservacin debe hacerse en fro y con la menor
canti-dad de luz para evitar la
Filtrar entre 500 ml y 10 l de agua de degradacin de los pigmentos
mar, o en su defecto al menos 10 fotosintticos.
coppodos a travs de un filtro de fibra

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 79


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Clorofila pura: Homogenizar 1.0 mg de


clorofila pura en grado analtico en 1 l de
Los filtros deben estar previamente agua de mar, la cual ha sido filtrada a
lavados en go-tas de MgCO3 para travs de un filtro GF/F de 47 mm de
prevenir una acidificacin de la muestra. dimetro y pasada por luz ultravioleta.
Posteriormente, pueden ser doblados y
depositados en un desecador a 20C y
dejados en oscuridad hasta por 30 das,
si los anlisis no se van a realizar
inmediatamente.

4.2 Materiales y equipos

Fluormetro tipo Shimadzu RF-5301 PC


con lmpa-ra de Xenn de amplio
espectro de longitud de onda

Equipo de filtracin para filtros de 47


mm de di-metro
Centrfuga para tubos de ensayo entre
10 y 15 ml de capacidad
Homogenizador de tejidos motorizado

4.3 Reactivos

Acetona al 90%: Pipetear 100 ml de agua


destila-da y depositar en una botella
volumtrica de 1 l que contenga 1000 ml
de acetona de grado anal-tico. Se
recomienda guardar el reactivo en un lu-
gar fresco y en oscuridad.

Carbonato de magnesio: Adicionar 1.0 g


de MgCO3 a 100 ml de agua destilada.
Homogenizar durante 20 min y depositar
en goteros de vidrio de 100 ml. Antes de
usar debe ser agitado fuertemente.

Acido clorhdrico: Diluir 10 ml de cido


clorhdri-co fumeante al 37% de grado
analtico en 100 ml de agua destilada.
Depositarlo en una botella mbar de 1 l y
guardar en un lugar fresco y oscuro.
homogenizacin, lavar el pistilo del
homogenizador y las paredes internas
Extraer una muestra de la solucin y del tubo de ensayo con 5 ml de
preparar un extracto en acetona al 90% acetona
como se explica en el mtodo Centrifugar las muestras entre 20 y 30
espectrofotomtrico (ver numeral 2.4) minutos, dependiendo del modelo de
la centrfuga
Extraer el sobrenadante y pasarlo a
4.4 Procedimiento una celda cua-drada de cuarzo no
fluorescente de 1 cm de paso
Lecturas de muestras
Ajustar el equipo a las ex y .em
descritas pos-teriormente y la mejor
Filtrar las muestras siguiendo el amplitud de rendija en-contrado
procedimiento descrito en el manejo
Leer la fluorescencia de la muestra
de muestras y preserva-cin, numeral
antes y des-pus de ser acidificada.
4.1
Realizar la acidifica-cin adicionando 2
Introducir el filtro en un tubo de
gotas HCl diluido; esperar 30
ensayo plsti-co de polipropileno con
segundos y volver a leer la
tapa y adicionar 5 ml de acetona al
fluorescencia emitida
90% y dejar a 0 C y en oscuri-dad
durante 12 a 18 horas
Homogenizar el filtro durante 30
segundos a 1 min, con un 4.5 Calibracin
homogenizador motorizado. Ha-cer el
procedimiento en fro y oscuridad para El equipo requiere ser calibrado en los
evitar la evaporacin potencial de la siguientes parmetros, antes de iniciar
acetona por efecto de la rotacin del las lecturas de muestras:
aparato. Finaliza-da la

80 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Factor de amplitud de la rendija (Fd): Usar el Fd ms apropiado, establecido


como aquel que presenta una mejor
Extraer cerca de 50 ml de un sensibilidad en la estimacin de la
monocultivo de microalgas en fase concentracin de la clorofi-la a y
exponencial de crecimiento consistencia para cada una de las dilu-
Estimar la concentracin de clorofila a ciones
(Ca) mediante el mtodo
espectrofotomtrico, ex-
presada en mg.ml-1 y medir la Razn Rsin ac. / Racid.: Corresponde al
fluorescencia de la misma muestra en cociente entre la fluorescencia de una
una celda cuadrada de cuarzo no muestra de clorofila pura antes de
fluorescente de 1 cm de paso, para un acidificar (Rsin ac.) y despus de ser
ancho de rendija de 1 nm (F1) acidificada con solucin de HCl (Racid.).
Ajustar la longitud de onda de
excitacin (ex) en 436 nm y la Usar el extracto de acetona con
longitud de onda de emisin clorofila pura y cuantificar la
(.em) en 660 nm. El factor de amplitud fluorescencia emitida usando
se cal-cula a partir de la frmula: las ex y .em descritas anteriormente y
la mejor amplitud de rendija
Fd = Ca / F1 encontrada
F1 = Ancho de rendija en nm Acidificar la muestra con 2 gotas HCl
Fd = Factor de amplitud diluido. Es-perar 30 s y volver a leer la
fluorescencia emitida
Repetir el mismo procedimiento para
anchos de rendija de 2, 3, 4 y 5 nm. Nota: Dependiendo del equipo de
Posteriormente, diluir la muestra de fluorometra a utilizar, la calibracin de
microalgas en un factor de 2 y 10 y este puede tener modifi-caciones. En
volver a repetir el procedimiento caso de usar un fluormetro tipo Turner
Model III, puede remitirse al proceso de
calibracin propuesto por Parsons et al
(1984).

4.6 Clculos

La cantidad de clorofila a y feopigmento a se calcula a partir de la


ecuacin:
F
mac.

(R /R ) v
sin ac. acid.
mg clorofila a l-1 = F x x (F F ) x
d msina ma
c. c.
{(R / R )-1} V
sin ac. acid
(R /R ) v
sin ac. acid.
mg feopigmento a l-1 = F x xsin x /R ) msina }x
{( Rac. F F c.
d mac. acid.
{(R /R )- V
sin ac. acid

1}

Fmsinac. = Fluorescencia de la muestra sin acidificar


= Fluorescencia de la muestra acidificada
= Volumen de acetona utilizada en la extraccin en ml
V = Volumen de agua de mar filtrada en l o en su defecto el nmero de
invertebrados planctnicos usados en la extraccin

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 81


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.7 Diagrama de flujo

En tubo de ensayo
adicionar 5 ml de acetona
Preparacin de
la muestra
Macerar con acetona
90%

Filtrar suficiente Dejar 12 18 horas


cantidad de muestra en oscuridad

Centrifugar y ajustar
Adicionar 2 gotas volumen
de carbonato de
magnesio al filtro
Leer la fluorescencia Calibracin del
de las muestras fluormetro
Almacenar refrigerado

Adicionar 2 gotas
de HCl

Leer la fluorescencia
de las muestras

Clculos

4.8 Bibliografa de consulta Salamanca, M. 1996. Laboratorio de


Qumica Ma-rina. Curso de Qumica
Parsons, T.R., Maita, Y. and C.M. Lalli. Marina y Gua de Trabajos Prcticos.
1984. A Manual of Chemical and Departamento de Oceanografa. Facul-
Biological Methods for Seawater tad de Ciencias Naturales y
Analysis. Pergamon Press. 173 pp. Oceanogrficas. Uni-versidad de
Concepcin. Concepcin. 68 pp.
82 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
CONTENIDO DE MATERIA ORGNICA

La materia orgnica es toda clase de De estos anlisis el que requiere menos


sustancia que involucra dentro de su tiempo y sofisticacin es el ensayo de la
estructura molecular el car-bono, en el DQO. El ensayo del COT mide todo el
estudio ambiental hace referencia a dos carbono total como CO2 en mg/l y por lo
tipos: a) la de origen viviente, que tanto, el carbono inorgnico (HCO3, CO2
compren-de todos los residuos y y CO32-, etc.) debe eliminarse antes del
desechos provenientes de organismos mis-mo. El mtodo usado para eliminar el
vivos, incluso los mismos organismos; y carbono inorgnico es la acidificacin y
b) la de origen antrpico, en la que la aireacin. Este ensayo puede
entran todas las sustancia sintetizadas realizarse mediante la oxidacin del
por el hombre a travs de procesos carbono orgnico a CO2, a temperaturas
industriales. de 950 oC (calcinacin), en presencia de
un catalizador y lue-go determinarse el
La determinacin del contenido orgnico dixido de carbono por
del agua puede ser por: espectrofotometra mediante absorcin
infrarroja (Kiely, 1999).

Ensayos especficos para medir las concen-


traciones de compuestos especficos; yEn algunos estudios investigativos el
anlisis de
Ensayos no especficos para medir la con- materia orgnica determinado por
va qumica es
centracin total del contenido importante, por ejemplo, pensando en la
orgnico realiza-cin de un modelo matemtico, ya
que permite correlacionar con un mtodo
Entre los ensayos para la concentracin qumico los resulta-dos de la DBO (que
total es-tn: es otro indicador del conteni-do de
materia orgnica en el agua), pero que
se
Demanda biolgica de oxgeno (DBO, en- constituye en un parmetro biolgico.
Por eso en sayo bioqumico que utiliza microorganis- este documento se hace
mencin a otro anlisis
mos) (oxidacin con KMnO4 en medio bsico),
que ha
Demanda qumica de oxgeno (DQO, ensa- tenido menos divulgacin, pero que
ataca las in-
yo qumico) terferencias causadas por las sales del
agua de
Carbono orgnico total (COT, ensayo ins- mar y se convierte en un mtodo muy
prctico
trumental) para la determinacin del contenido de
materia
orgnica por va qumica en aguas
salobres.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 83


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

de DBO son usados para criterio de


ingeniera en proyectos de desarrollo y
1. Determinacin de la demanda en control de plantas de tratamiento de
bioqumica de oxgeno (DBOn) aguas residuales. Las determinaciones
de DBO solamente deben hacerse cuando
La demanda bioqumica de oxgeno en el agua a investigar estn ausentes
(DBO) de un afluente domstico o sus-tancias txicas.
industrial, es la cantidad de oxgeno
disuelto que puede ser consumido por
oxidacin bioqumica de materia
orgnica degradable, bajo condiciones
especficas.

La DBO es solamente un ndice general,


cualitati-vo o semicuantitativo de los
compuestos orgni-cos susceptibles de
ser degradados en un corto perodo de
tiempo. El valor de la DBO, es con
frecuencia incorrectamente usado como
equiva-lente a la carga orgnica del agua
o aguas de de-secho, sin considerar la
presencia de compuestos orgnicos no
degradables.

Dependiendo del agua a investigar, el


mtodo in-cluye o no, la dilucin de
ciertas porciones de muestra con agua
saturada de oxgeno e inocula-cin de un
cultivo de microorganismos. El oxge-no
disuelto se analiza en muestras por
separado, al principio y al final del
tiempo de incubacin, normalmente 5
7 das (DBO5 o DBO7) a 20C. El
contenido de oxgeno disuelto se mide
por titula-cin, utilizando el Mtodo de
Winkler o por uso de electrodos de
membrana sensibles al oxgeno.

Las pruebas de DBO se aplican para


calcular el efecto que producen los
efluentes domsticos o industriales,
sobre el contenido de oxgeno en los
cuerpos de agua receptoras y para
evaluar su ca-pacidad para asimilar
descargas. En consecuen-cia, los datos
control de plantas depuradoras,
caracterizacin de cuer-pos de agua y
calibracin de modelos matemti-cos;
Muchas de estas tcnicas se basan en
mto-dos respiromtricos; existen
respirmetros manomtricos,
volumtricos y electrolticos, tam-bin se
ha avanzado gracias al desarrollo de los
sensores de membrana para la
determinacin del oxgeno disuelto.

Alcance y aplicacin
Equipo para la determinacin de la DBO por el
Mto-do Manomtrico La determinacin de la DBO por Winkler,
sin di-lucin, es aplicable para aguas
naturales, espe-cialmente marinas y de
ros con bajo niveles de materia
Se han desarrollado varias tcnicas para
orgnica. En muestras salobres (25 psu)
la deter-minacin de la DBO, en vista de
se puede determinar DBO hasta de 6
su gran aplica-cin y la necesidad de
mg/l, des-pus de saturar la muestra (la
mtodos menos dispen-diosos (cuando se
concentracin de saturacin de oxgeno
trata de muestras que requie-ren
dilucin); en proyectos de ingeniera, de una muestra de agua a 25 psu y 20 oC
a nivel del mar es de 7.83 mg/l).

84 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Varilla de vidrio

1.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin 1.3 Reactivos

La coleccin de las muestras se hace en Adicional a los reactivos utilizados para


botella de vidrio, de un litro de la deter-minacin del oxgeno disuelto
capacidad, con boca y tapa esmeriladas. por el Mtodo
En el sitio de muestreo, se llenan las
botellas con el agua en estudio, hasta
que rebo-sen y se cierran sin dejar
burbujas.

Las muestras estriles, de efluentes con


alta de-manda de oxgeno y otras
propiedades (tales como un alto o bajo
pH) que inhiban los procesos
bioqumicos, pueden ser almacenadas de
1 a 4 das despus del muestreo,
preferiblemente a 4C. Las muestras no
estriles (procedentes de facto-ras de
produccin de papel, procesamiento de
alimentos y descargas domsticas),
deben ser ana-lizadas tan pronto como
sea posible despus del muestreo. El
retardo por transporte u otra causa no
puede exceder el da y debern
conservarse a una temperatura de 4C.

1.2 Materiales y equipos

Incubadora capaz de mantener una


temperatura de 20 +/- 1oC
Bureta
automtica
Agitador
magntico
Botellas DBO (preferiblemente de color
mbar) Balones aforados de 1 l
Pipetas de 20, 10, 5, 2 y
1 ml Pipetas
automticas de 2 ml
Vasos de precipitado
Erlenmeyers
decidir si se incluye o no en la prueba. Si
se le incluye, deber homogenizarse la
Winkler (ver numeral 1.3 del captulo muestra en un mezcla-dor o en caso
Oxgeno disuelto y clorofilas), es contrario removerla por sedimenta-cin.
necesario: El cloro activo se fija por adicin de una
cantidad equivalente de sulfito de sodio.
Solucin de yoduro de potasio: Disolver
10.0 g de Kl, en agua desionizada y Para muestras con cloro libre
diluir a 100 ml.
Tomar 100 ml de muestra y aada 10
Solucin de sulfito de sodio, 0.0125M: ml de solucin de yoduro de potasio,
Disolver 1.6 g de Na2SO3 en agua 10 ml de cido actico y una gotas de
desionizada y diluir en un litro. Preparar indicador de almidn. Si aparece un
cada da.
color azul, titule con sulfito de sodio
0.0125 M justo hasta que el color azul
Acido actico, 8.7 M: Adicionar 250 ml
desaparezca (anote el volumen del
de cido actico en 250 ml de agua
sulfito de sodio gastado como a ml).
desionizada.
Tome otros 100 ml de muestra y
aadir 10 ml solucin de sulfito.
Despus de 10 minutos, agregar 10 ml
1.4 Procedimiento
de yoduro de potasio, 10 ml de cido
actico y unas gotas de indicador de
Las aguas de DBO reducidas (aguas
al-midn. Si la solucin se vuelve azul,
superficiales como ros, lagos, etc.)
titular con ms solucin de sulfito de
pueden trabajarse sin dilu-cin si son
sodio hasta que el color desaparezca
enriquecidas con oxgeno. Si la mues-tra
(anotar este volumen como
contiene materia suspendida, se debe

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 85


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

b ml). Finalmente, adicionar a la 1.5 Calibracin


muestra (a + b) ml de solucin de
sulfito por cada 100 ml. Este volumen Realizar la estandarizacin del tiosulfato
debe tenerse en cuenta para el clculo de sodio 0.01 N en cada una de las
del factor de dilucin. determinaciones de la concentracin de
oxgeno, Co y C5, de acuerdo con el
Procedimiento general numeral 1.5 del captulo Otros
Constituyentes.
Saturar la muestra con oxgeno
utilizando una bomba durante unos 10
a 15 minutos elevan-do su contenido 1.6 Clculos
de oxgeno a 8 - 10 mg/l a 20 C. Si el
agua contiene sustancias que consu- Para el clculo de Co y C5 aplicar la
men oxgeno, incluso sin la misma ecua-cin descrita para el clculo
colaboracin de microorganismos, de oxgeno disuelto (numeral 1.6 captulo
dejar en reposo durante dos horas Otros Constituyentes). Cal-cular la DBO
antes de realizar la determinacin. a partir de la ecuacin:
Llenar hasta el borde tres botellas
DBO con muestra tratada aplicando DBO (mg O2/l) = d [(Co - Cn) - (Bo -
un sistema de sifn para evitar la Bn)]
introduccin de burbujas de aire.
Cerrar inmediatamente dos de las d = Factor de dilucin (razn de
botellas y colocarlas en un incubador volumen de muestra diluida al de
a una temperatura constante de 20 +/- original)
1C durante 5 das. Bo = Contenido de oxgeno disuelto del
blanco de reactivos inicial
Determinar inmediatamente el
Bn = Contenido de oxgeno disuelto del
contenido de oxgeno disuelto de la
botella restante segn el Mtodo blanco de reactivo despus de n
Winkler y registrar el valor como Co das de incubacin
Despus de 5 das +/- 6 horas,
determinar el contenido de oxgeno Co = Contenido de oxgeno disuelto
en la muestra para el da cero
disuelto de las botellas incubadas y
Cn = Contenido de oxgeno disuelto
registrar su promedio como C5
en la muestra para el da n
(n=5)

En el procedimiento sin dilucin, cuando


la mues-tra no es tratada, el factor de
dilucin es igual a 1.
86 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

1.7 Diagrama de flujo

Muestra
SI
Cloro

Preparacin de la Montar un blanco


libre? muestra de reactivos
NO

Airear por 15 min.

Leer el OD final,
Mtodo Winkler
Reposar 15 min.
Valorar el
Clculos
tiosulfato de sodio
Llenar con muestra
3 botellas DBO

Leer OD a una
botella, Mtodo
Winkler

Incubar las 2
o
restantes a 20 C
por 5 das

1.8 Bibliografa de consulta contenido de cloruros, esto hace


imprctico el uso de las tcnicas
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; tradicionales para tal fin como son la
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas DQO por los mtodos de reflujo abierto o
analticas de parmetros fsico-qumicos micro.
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e El valor de la oxidacin caracteriza el
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993. contenido de las sustancias que pueden
oxidarse en el agua de mar. Debido a una
Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas. gran diversidad y relativa-mente poco
Aguas natu-rales, aguas residuales y contenido de sustancias orgnicas en
agua de mar. Ediciones Omega. dichas aguas, su indicacin y
Barcelona-Espaa. determinacin es una tarea muy
complicada; por esta razn, la de-
terminacin directa de estas sustancias
se evala solamente para los casos de
2. Determinacin de la materia org- estudios especiales, como en el estudio
nica en agua de mar por oxidacin con de procesos y el desarrollo de modelos
permanganato en medio alcalino de ecosistema.

La determinacin de materia orgnica


por va qu-mica en el agua de mar se Para soluciones de problemas prcticos,
dificulta por su alto se utiliza una metodologa ms simple e
indirecta, la cual nos permite identificar aguas de mar, es la determinacin de la
la presencia de las sustan-cias orgnicas oxida-
en el agua. Un mtodo sencillo para las

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 87


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

cin por permanganato, segn B. A. Alcance y aplicacin


Skopinzev, bajo las condiciones del
medio neutral. El princi-pio del mtodo Este mtodo es aplicable a todo tipo de
se basa en la oxidacin de aguas naturales, especialmente marinas
reintegradores (recuperadores) y de ros, con bajos niveles de materia
orgnicos, los cua-les estn en las aguas, orgnica.
bajo condiciones especia-les por
oxidadores qumicos activos. El valor de La precisin del mtodo an est por
la oxidacin se determina por la cantidad establecerse.
del oxidante gastado y se expresa por el
nmero de miligramos de oxgeno, el
cual es necesario para oxidar las 2.1 Toma de muestra, almacenamiento y
sustancias en un litro de agua (mg O/l). preservacin

La coleccin de las muestras se hace en


Uno de los oxidantes que sirve para la
botella de vidrio con boca y tapa
determina-cin de la oxidacin del agua,
esmeriladas preferiblemente, de 500 ml
es la solucin de Permanganato de
de capacidad. Las botellas con el agua en
potasio (KMnO4). La reaccin de
estudio se llenan en el sitio de muestreo,
oxidacin por permanganato puede ser
hasta que rebosen y se cierran sin dejar
en medio cido, bsico o neutro. La
burbujas.
reaccin total ocurre en medio cido,
pero si el agua analizada contiene
Es necesario realizar el anlisis cuanto
muchos cloruros, este no puede ser apli-
antes; sin embargo, si esto no es posible,
cado, debido a que en estas condiciones
las botellas se de-ben guardar
los cloruros se oxidan acompaados de
la liberacin del cloro. Por esta razn, la congeladas a 20oC.
oxidacin de aguas con concentraciones
de cloruros mayores de 0.3 g/Kg se
realiza en medio neutro o bsico.
orgnica en la muestra, se calcula por la
Para determinar la oxidacin, la muestra diferencia de los volmenes de la
se trata con la solucin de permanganato solucin de tiosulfato (A), gastado en la
de potasio hir-vindola durante 10 titulacin de todo el volumen de KMnO4
minutos. Los restos del permanganato de y del tiosulfato (B) gastado en la
potasio, despus de la oxida-cin de la titulacin del KMnO4 restante despus
materia orgnica, se determinan por de la oxidacin de la materia orgnica.
titulacin inversa, eliminando el resto
del permanganato con el yoduro de
potasio; la canti-dad de yodo libre que se
libera y que equivale a KMnO4, se titula
con la solucin de tiosulfato. As, la
cantidad del permanganato (en
equivalentes de oxgeno), que se ha
gastado para la oxidacin de materia
2.2 Materiales y equipos Titulador o bureta graduada
Digestor de seis puestos
Pipetas aforadas de 2, 5 y 10 ml Vitrina de extraccin
Balones fondo redondo de 500 ml
Matraces aforados de 1 l
Refrigerantes 2.3 Reactivos
Probetas de 100 ml
Balanza Permanganato de potasio 0.01 N: Pesar
Pipeta graduada de 5 ml 0.32 g de reactivo analtico y diluir en
agua bidestilada; com-pletar a un litro.

88 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Solucin de soda custica al 33% Agitar bien y titular separando el yodo


(NaOH): Diluir 50 g del lcali con la solucin de tiosulfato 0.01N
qumicamente puro en 100 ml de agua hasta obtener un color amarillo claro
bidestilada. Aadir 2 gotas de solucin de almidn
y conti-nuar la titulacin de la solucin
Acido sulfrico (1:3): Preparar apartir azulada hasta decoloracin total. La
del cido sulfrico concentrado, determinacin se realiza dos veces y si
adicionando 100 ml de ci-do a 300 ml la diferencia en las lecturas no supera
de agua bidestilada. los 0.05 ml, se toma la media
aritmtica
Solucin de tiosulfato de sodio 0.01N: (A)
Para su con-servacin se prepara una
solucin de 1 N, de la cual se diluye lo Determinacin de la oxidacin en las muestras
necesario con agua destilada
obtenindose la concentracin requerida Despus de determinar la correlacin,
(0.01 N) para los anlisis. Para una se pasa a la determinacin de las
mejor conservacin de la solucin, muestras
aadir 1 ml de cloroformo. Esta solu-cin En un baln redondo de 250 ml vertir
debe valorarse antes de ser utilizada. 100 ml de la muestra
Aadir 3 ml de soda custica y 10 ml
Solucin estndar de yodato de potasio de permanganato de potasio 0.01N y
0.01 N agregar 3 perlas de ebullicin
(KIO3): Pesar exactamente 0.3567 g de Colocar en el digestor con sus
yodato de potasio, previamente secado; respectivos refrigerantes y calentar
disolver en agua des-tilada y completar a por espacio de 10 minu-tos, contados a
1 l en un matraz aforado. partir de la ebullicin. Al termi-nar de
hervir las muestras dejar reposar unos
Yoduro de potasio al 10% (KI): Disolver treinta minutos hasta lograr la
25.0 g de KI y ajustar el volumen a 250 temperatura ambiente
ml con agua bidesti-lada.
Aadir 3.6 ml de cido sulfrico 1:3,
agitar y agregar 5 ml de solucin de
Solucin de almidn 3%: Disolver por yoduro de potasio
calentamien-to 3.0 g de almidn soluble Adicionar 3 ml ms de cido sulfrico
en 100.0 g de glicerina. 1:3
Titular con la solucin de tiosulfato de
Agua de mar sinttica: Disolver 25.0 g de sodio 0.01 N hasta que la muestra
NaCl y 4.0 g de MgSO4 en agua tome un color ama-rillo claro, agregar
bidestilada y llevar a 1000 ml. 2 gotas de almidn y seguir la
titulacin hasta decoloracin total
2.4 Procedimiento
En un beaker de 250 ml colocar 5 ml
Determinacin de la correlacin de las solucio- de la solucin de yoduro de potasio,
nes de permanganato de potasio y tiosulfato aadir 100 ml de agua destilada y 2 ml
de cido sulfrico 1:3, agregar 10 ml
de solucin de permanganato de
potasio 0.01 N 2.5 Calibracin

Diariamente, antes de la titulacin es


necesario comprobar la verdadera
normalidad de la solu-cin de tiosulfato
como se nuestra a continua-cin, ya que
con el transcurso del tiempo esta
cambia.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 89


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

8 * (A-B) * Nt * 1000
Colocar 10 ml de la solucin de yoduro Oxid.mg O/l =
de potasio al 10% y se diluirla en 50 -
ml de agua destilada V

Agregar 10.0 ml exactos de KIO3 0.01


N y 2 ml de cido sulfrico y agitar
Titular con la solucin de tiosulfato de
sodio 0.01 N hasta obtener un color
amarillo claro
Aadir 2 gotas de solucin de almidn
y conti-nuar la titulacin de la solucin
azulada hasta decoloracin total
Para la valoracin se realizan de 2 a 3
titulaciones paralelas y si la diferencia
de las lecturas entre las buretas no
supera los 0.05 ml, se toma la media
aritmtica como resulta-do final (V2)

Determinar la verdadera normalidad del


tiosulfato por:

10 ml x N KIO3
Nt =
V
2

N KIO3= Normalidad del yodato de


potasio (0.01N)

La diferencia ms significativa de las


determina-ciones paralelas se presenta
debido a que las so-luciones de trabajo
se mezclan mal o los reactivos utilizados
no estan lo suficientemente puros. En
estos casos es necesario encontrar y
eliminar las causas del error y realizar
nuevamente los clculos.

2.6 Clculos

La oxidacin de las muestras se calcula


por la fr-mula:
permanganato aa-dido se consumi en
la oxidacin. En este caso se repite la
A = Volumen de tiosulfato muestra tomando menor cantidad (50,
gastado en la correlacin con 25, 10 o 5 ml) y se diluye en agua
el permanganato bidestilada hasta 100 ml.
B = Volumen de tiosulfato gastado
en la titulacin de las muestras
despus de Junto con cada set de muestras debe
la digestin montarse un blanco de reactivos,
Nt = Normalidad del tiosulfato de utilizando para ello agua de mar
sodio V = Volumen de la muestra sinttica; el valor obtenido en este
(100 ml)
blanco debe utilizarse para corregir el de
las muestras.

Recomendaciones
Antes de iniciar el anlisis toda la
vidriera debe lavarse bien y ponerse a
Durante el tiempo de coccin y
hervir 5 minutos con una solucin fuerte
enfriamiento las muestras debern
de permanganato de potasio.
conservar un color azul-violeta (color
exceso de permanganato). Si el color de
Despus de la titulacin se lavan bien los
las muestras cambia a pardo, se indica
balones con agua destilada para
que el exceso de permanganato
continuar con las otras muestras. Una
desapareci, mostrando el au-mento del
vez terminado el anlisis, toda la
contenido de sustancias orgnicas, pues-
cristalera se lava cuidadosamente y se
to que todo el contenido del
pone a se-car.

90 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

2.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco Medir 100 ml de


de reactivos la muestra

Adicionar 3.6 ml
de ac. Sulfrico
Adicionar 3 ml
de Sln. NaOH Adicionar 5 ml
de Sln. Kl
Adicionar 10 ml
de Sln. KMnO4 Adicionar 3.0 ml

Digestin de de ac. Sulfrico


la muestra Montar a digestar,
reflujo abierto Titular con
Ebullicin por 10 tiosulfato
Valorar el tiosulfato
minutos
de sodio
Clculos
Correlacin del
Dejar enfriar KMnO4
aplicabilidad a una gran variedad de
muestras y fcil manipulacin.

2.8 Bibliografa de consulta

Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas.


Aguas natu-rales, aguas residuales y
agua de mar. Ediciones Omega.
Barcelona-Espaa.

3. Demanda qumica de oxgeno (DQO)

La demanda qumica de oxgeno es la


medida del equivalente en oxgeno del
contenido de materia orgnica de una
muestra que es susceptible de oxidacin
por un oxidante qumico fuerte. Para
muestras de una fuente especfica, la
DQO puede relacionarse empricamente
con la DBO, carbono orgnico o
contenido de materia orgnica. El m-
todo de reflujo con dicromato es el ms
aceptado para su determinacin debido a
su mayor capaci-dad oxidativa,
Los compuestos alifticos de cadena
larga no muy oxidable, se oxidan ms
fcilmente en presencia de un
La mayora de materiales orgnicos son
catalizador como el sulfato de plata. Sin
oxidables por una mezcla en ebullicin
embargo, esto slo funciona con haluros
de cidos crmico y sulfrico. Una
que al ser oxidados parcialmente son
muestra es colocada en reflujo en una
precipitados; esto puede causar
solucin fuertemente cida con un
dificultades en el anlisis, las cuales
exceso co-nocido de dicromato de
pueden ser subsanadas aplicando sulfato
potasio, despus de la digestin, el
de mer-curio antes del proceso de
dicromato que no se ha reducido es
reflujo. La prueba no debe aplicarse en
titulado con sulfato ferroso amoniacal
muestras que contengan ms de 2000
(FAS). La cantidad de dicromato
mg de cloruros/l.
consumido y la cantidad de materia
orgnica oxidable se determina en tr-
minos de equivalentes oxgeno.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 91


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Los nitritos, eventualmente causan Condensador


interferencias que pueden eliminarse Placa de calentamiento
adicionando 10 ml de ci-do sulfmico Pipetas graduadas de 5 ml
por cada mg NO-2 presente en el baln Titulador o bureta graduada
de reflujo. Adicionar la misma cantidad
de cido sulfmico al blanco de agua
destilada. 3.3 Reactivos

Alcance y aplicacin Solucin estndar de dicromato de


potasio 0.250 N
Este mtodo es aplicable a aguas (K2Cr2O7): Disolver 12.258 g de
residuales in-dustriales y domesticas; dicromato grado estndar primario,
puede ser usado en aguas marinas previamente secado a 103 C por dos
siempre y cuando el contenido de horas en agua destilada y diluya a 1000
cloruros no supere los 2000 mg Cl -/l en ml.
la muestra.

Un conjunto de muestras sintticas de Sulfato de plata grado tcnico o reactivo


ftalato ci-do de potasio y NaCl fueron en crista-les o polvo.
probadas en 74 labo-ratorios. Para una
Acido sulfrico concentrado.
DQO de 200 mg O2/l en ausen-cia de
cloruros, la desviacin estndar fue +/-
13 mg/l (coeficiente de variacin de Solucin indicadora ferroina: Disolver
1.485 g de 1,10 - monohidrato de
6.5%). Para una DQO de 160 mg O2/l y
fenantrolina y 695 mg de sulfato de
100 mg Cl-/l, la desviacin estndar fue
hierro en agua destilada y diluir a 100
de +/- 14 mg/l (coeficiente de varia-cin
ml. Esta solucin puede comprarse ya
10.8%). (APHA, 1998).
preparada.
3.1 Toma de muestra, almacenamiento y 3.2 Materiales y equipos
preservacin
Digestor de seis puestos
Las muestras deben recolectarse en Vitrina de extraccin
botellas de vidrio preferiblemente mbar. Baln de 250 ml de boca esmerilada
Si el anlisis no se puede realizar de
inmediato, es necesario dismi-nuir el pH
de la muestra por debajo de 2 unida-des
para evitar el crecimiento bacteriano,
general-mente 2 ml de cido sulfrico
concentrado por litro son suficientes
para lograrlo. La muestra debe
guardarse refrigerada y protegida de la
luz por un periodo no superior a 7 das.
Acido sulfmico: Requerido slo si se
Sulfato ferroso amoniacal (FAS) 0.25 necesita eli-minar la interferencia por
N nitritos.
[Fe(NH4)2(SO4)2]: Disolver 24.5 g de
sulfato ferroso amoniacal en agua Estndar de ftalato cido de potasio
destilada. Adicionar 5 ml de cido (C8H5KO4): Triturar suavemente y luego
sulfrico, enfriar y diluir a 250 ml. secar el reactivo a peso constante a 120
C. Disolver 425.5 mg en agua destilada
Sulfato de mercurio en cristales o polvo. y diluir a 1000 ml, esta solucin tiene
una DQO terica de 500 +/- 15 mg. O 2/l
(1.0 mg de ftalato cido tiene una
demanda total de oxgeno de 1.176 mg).

92 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Mantener el reflujo por dos horas.


Cubrir la abertura del condensador
3.4 Procedimiento con un beaker para evitar el ingreso
de sustancias extraas. Enfriar y lavar
3.4.1 Muestras con DQO mayor 50 mg/l el condensador con agua destilada
Desconectar el condensador de reflujo
Colocar 50 ml de muestra (para y diluir la muestra a casi el doble de
muestras con DQO mayor a 900 mg su volumen con agua destilada.
DQO/l, usar una por-cin ms pequea Enfriar a temperatura ambiente y
y diluir a 50 ml) en un ba-ln de 500 titular los excesos de dicromato con
ml FAS, usan-
Adicionar un gramo de sulfato de plata
(Ag2SO4), varios cuerpos de ebullicin
y muy lentamente agregar 5.0 ml de
cido sulfrico agitando para disolver
el sulfato de plata, en-friar mientras se
mezcla para evitar prdidas de
componentes voltiles
Adicionar 25 ml de solucin de
dicromato 0.250 N y mezclar. Unir el
baln al condensador y poner a
circular el agua refrigerante.
Adicionar el resto de cido sulfrico
(60 ml) por el extre-mo abierto del
condensador. Continuar agitan-do
mientras se adiciona el cido
Precaucin: Agitar la mezcla de reflujo
antes de aplicar calor para evitar
calentamiento local del fondo del
baln y una posible explosin de sus
contenidos
Usar 1.0 g de sulfato de mercurio (con
una muestra de 50.0 ml) para
complejar un mxi-mo de 100 mg de
cloruros; para muestras ms pequeas
usar menos sulfato de mercurio. De
acuerdo con la cantidad de cloruros,
mantener
una relacin 10:1 de HgSO 4:Cl-. Un
ligero pre-cipitado no afecta
negativamente la determi-nacin.
Generalmente, en muestras con ms
de 2 g/l de cloruros no es posible la
medida exacta
Si se requiere mayor sensibilidad,
do 0.10 - 0.15 ml (2 a 3 gotas) de concentrar un mayor volumen de
indicador ferroina. Aunque la cantidad muestra antes de digerir en el reflujo,
de ferroina no es crtica, usar la adicionando todos los reactivos a una
misma para todas las titulaciones. muestra mayor que 50 ml y
Tomar como el punto final de la reduciendo a 50 ml por ebullicin en el
titulacin el primer cambio baln de reflujo abier-to a la atmsfera
pronunciado de color desde azul sin condensador adherido
verdoso a pardo rojizo. El azul verdoso Computar la cantidad de sulfato de
puede reaparecer mercurio adicionado (antes de la
Someter a reflujo y titular de la misma concentracin) con base
manera el blanco de agua destilada en una razn de 10:1 HgSO4:Cl-,
que contiene los mismos volmenes de usando la can-tidad de cloruro
reactivo aplicado a las muestras presente en el volumen origi-nal de
muestra
Llevar a cabo un blanco aplicando el
3.4.2 Muestras con baja DQO mismo procedimiento

Se sigue el mismo proceso descrito Esta tcnica tiene la ventaja de


anterior-mente, pero usando solucin concentrar la mues-tra sin prdidas
estndar de dicromato 0.025 N y significativas de materiales volti-les
titulando con FAS 0.025 N. Es fcilmente digeribles. Materiales de
necesario tener especial cuidado con difcil di-gestin como cidos voltiles se
este proceso debido a que an una pierden, pero se obtiene una ventaja
traza de mate-ria orgnica en la sobre los mtodos corrientes de
vidriera o de la atmsfera puede concentracin evaporativa.
causar gran error

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 93


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.5 Calibracin VFAS = Volumen de solucin FAS


utilizado en la
La solucin de sulfato ferroso amoniacal titulacin (ml)
(FAS) debe estandarizarse diariamente
contra la solucin de dicromato, as: Con el conjunto de muestras tambin
debe montar-se una solucin estndar de
Diluir 10.0 ml de solucin estndar de ftalato cido de pota-sio, teniendo en
dicromato hasta aproximadamente cuenta que 1.0 mg de ftalato cido tiene
100 ml una demanda total de oxgeno de 1.176
Adicionar 30 ml de cido sulfrico mg.
concentra-do y enfriar
Titular con FAS, usando 0.10 a 0.15 ml
(2 a 3 gotas) de indicador ferroina 3.6 Clculos

VD La demanda qumica de oxgeno se


N = x 0.25 determina como:
V
FAS

(A - B) x N x 8000
N = Normalidad de la solucin FAS
mg DQO/l =
VD = Volumen de solucin de
ml muestra
dicromato 0.25 N titulado
(ml)
A = Volumen de FAS usado para el
blanco (ml) B = Volumen de FAS usado
para la muestra (ml) N = Normalidad
del FAS

3.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco Medir 50 ml de Montar estndar


de reactivos la muestra de ftalato

Someter a reflujo

Adicionar 1.0 g por 2 horas


de Ag2SO4
5 ml H2SO4
Adicionar 1.9 g de

Hg2SO4
Muestra a reflujo Adicionar 25 ml de

Dicromato de K
Agregar 60 ml de

H2SO4
Enjuagar el
condensador

Dejar enfriar Titular con


solucin FAS

Clculos Valorar la solucin


FAS

94 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

3.8 Bibliografa de consulta de hierro inoxidable o plstica a un


contenedor hecho de papel aluminio. Si
APHA.1998. Standard Methods for the el anlisis no se rea-liza inmediatamente,
Examination of Water and Wastewater. es preciso congelar la mues-tra a una
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 5-14 pp. temperatura de -20oC.

4.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin
4. Materia orgnica en suelos y sedi-
mentos, mtodo de oxidacin con En muestras de sedimento la recoleccin
dicromato (BS 1377:1975) se hace con draga o corazonador, se
transfiere con cuchara
Existen tres procedimientos para la
determinacin del contenido orgnico en
suelos, estos son:

Prdida por ignicin


Oxidacin con perxido de
hidrgeno
Oxidacin con dicromato

El Mtodo del Dicromato es uno de los


recomenda-dos en la BS1377:1975, como
el procedimiento estndar para suelos.
Fue introducido primeramen-te por
Walkley en 1935. Se ha encontrado que
da resultados reproducibles y aunque la
exactitud no es absoluta, es suficiente
para propsitos de inge-niera. En suelos
que contienen sulfuros o cloruros da
resultados altos. Si estas sustancias
estn presen-tes, deben ser removidas
de la muestra en la etapa de preparacin
mediante un tratamiento qumico
adecuado, como se describe en el
procedimiento.

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a todo tipo de


sedimento de origen marino o
continental. La exactitud no es ab-soluta
pero es suficiente para propsitos de
ingeniera.
destilada y completar a un litro de
4.2 Materiales y equipos solucin.

Balanza con una precisin de +/- Solucin de cido sulfrico 0.5N:


0.001g Horno de secado (105- Adicionar 14 ml de H2SO4 concentrado
110C) en agua destilada y com-pletar a un litro
Dos frascos volumtricos de solucin.
de 1 l Dos buretas,
graduadas a 0.1 ml Pipetas cido sulfrico concentrado (Gravedad
de 1 y 10 ml especfi-ca 1.84).
Dos erlenmeyers de 500
ml Una probeta de 200 ml
y 20 ml Un pesasales Solucin de sulfato ferroso de
aproximadamente 0.5N: Disolver 140.0 g
Tamices, de 10 mm y 425 m de tamao
de malla Mortero y mango de sulfato ferroso en cido sulfrico 0.5N
Desecador y completar a un litro de solucin. Esta
solucin es inestable al aire; por lo cual,
debe mantenerse hermticamente
4.3 Reactivos tapada. Semanalmen-te debe ser
estandarizada con solucin de dicromato
Solucin de dicromato de potasio 1N: de potasio.
Disolver 49.035 g de K2Cr207 en agua

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 95


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

los clururos tambin pueden producir


cido fosfrico al 85% (Gravedad
resultados altos. Para removerlos, lavar
especfica 1.70-1.75).
el suelo con agua destilada, hasta que
ninguna turbidez sea ob-servada cuando
una gota del agua de lavado es
Solucin indicadora: Disolver 0.25 g de
difenilamina sulfonato de sodio en 100
ml de agua destilada. En su defecto
puede utilizarse solucin indicadora de
ferroina (ver numeral 3.3).

4.4 Procedimiento

Preparacin de la muestra

Slo se requiere una pequea muestra


para el an-lisis, pero se debe
homogeneizar correctamente para que
sea representativa.

La muestra es secada en un horno a


105 110C, enfriada en un desecador
y pesada con una exactitud de 0.1%
(m1)
Pasar a travs de un tamiz de 10 mm
Pesar la masa que pas con una
exactitud de
0.1% (m2). Tener cuidado de no perder
cual-quier partcula fina
Reducir la muestra por divisiones
sucesivas hasta aproximadamente 100
g

Muestras que contienen sulfuros

Los sulfuros pueden interferir en los


resultados, dando valores altos. Para
eliminarlos, adicionar cido sulfrico
diluido (2N) hasta que no ocurra ninguna
emanacin de sulfuro de hidrgeno, lue-
go lavar con agua. Secar en un horno
antes de proceder a la prxima etapa.

Suelos que contengan cloruros


orgnica, hasta 0.2 g para sue-los muy
ricos.
probada con solucin de nitrato de plata.
Secar en un horno antes de proceder con
la siguiente etapa. Determinacin de la materia orgnica:

Pesar la muestra a tratar (1.0 g) y


Pulverizar la muestra con mango y colocarla en un recipiente cnico
mortero, de tal forma que pase a (erlenmeyer de 500 ml es suficiente)
travs de un tamiz de 425 micras Vertir 10 ml de dicromato de potasio a
la mues-tra
Subdividir la muestra hasta que pese
5.0 g aproximadamente. Mezclar Adicionar con una probeta,
completamente cuidadosamente, 20 ml de cido
Colocar la muestra en un recipiente de sulfrico concentrado
pesaje y secar en un horno a 105- Mezclar y agitar por 1 minuto, dejar
110C reposar por 30 minutos sobre una
Enfriar en un desecador y pesar con base de asbesto o madera mientras se
una preci-sin de +/-0.001g (m3) enfra y ocurre el proceso de oxidacin
Transferir una pequea cantidad para de la materia orgnica. Proteger el
el anli-sis a un erlenmeyer limpio de recipiente de rupturas
500 ml, sin pr-dida alguna de Adicionar 200 ml de agua destilada
material Adicionar 10 ml de cido fosfrico, 1
ml de indicador y agitar
completamente. Si el indica-dor es
La cantidad a ser transferida estar en el absorbido por el sedimento adicionar 1
rango de aproximadamente 5.0 g para ml ms de indicador y agitar
suelos de bajo con-tenido de materia

96 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Realizar la titulacin del exceso de verde, registrar el volumen de


dicromato, adicionando sulfato ferroso solucin de sulfato ferroso utilizado
con incrementos de 0.5 ml y agitar el
recipiente, hasta que se produzca un
cambio de coloracin de azul a verde 4.6 Clculos
(con difenilamina sulfonato de sodio
como indicador) Calcular el volumen, en ml (V), de
dicromato de potasio usado, para oxidar
la materia orgnica en el sedimento a
partir de la siguiente ecuacin:
4.5 Calibracin
V = 10 ( 1- Y/X )
Junto con las muestras llevar a cabo un
blanco de reactivos siguiendo el mismo Y = Volumen de sulfato ferroso usado
procedimiento que en la muestra, en la titulacin de la muestra
utilizando 1.0 ml de agua destilada. X = Volumen usado en la
estandarizacin
Es necesario realizar la estandarizacin
del sulfato ferroso cada vez que se vaya Expresado como porcentaje el clculo de
a emplear, de acuer-do con el siguiente materia orgnica presente con base a
procedimiento: peso seco de mues-tra es:

Medir 10 ml de solucin 1N de
dicromato de potasio y transferirlo V
hacia un erlenmeyer Porcentaje de M.O.(%) = 0.67 x m2 x
Adicionar cuidadosamente 20 ml de
cido sul-frico concentrado. Agitar la m 1 x m3
mezcla y dejar en-friar, colocar en una
superficie aislante m1 = Peso de muestra antes de
tamizar
Adicionar 200 ml de agua destilada
m2 = Peso de muestra que pasa a
Adicionar 10 ml de cido fosfrico y 1 travs del
ml de indicador, y mezclar tamiz de 10 mm
completamente m3 = Peso de sedimento usado en el
Adicionar sulfato ferroso desde una anlisis
bureta con incrementos de 0.5 ml,
agitar el frasco hasta que se produzca
un cambio de color de azul a
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 97
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

4.7 Diagrama de flujo

Preparar la muestra

Eliminar Eliminar
sulfuros cloruros

Secar y tamizar
la muestra

Montar un blanco Utilizar 0.2 5 g


de reactivos de muestra

Adicionar 10 ml
de dicromato de
K
Adicionar indicador

Adicionar 20 ml
de H2SO4

Titular con solucin Valorar la solucin


Agitar x 1 min, y dejar
FAS FAS
en reposo 30 min.

Adicionar 200 ml
de agua des.
Clculos

Adicionar 10 ml
de H3PO4

4.8 Bibliografa de consulta

FAO. 1984. Mtodos Fsicos y Qumicos


de Anli-sis de Suelos y Aguas. Boletn
de suelos de la FAO.
98 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

COMPUESTOS TXICOS QUMICOS


La cromatografa de gases es una tcnica
en la cual se usa una fase mvil (un gas
de arrastre) y una estacionaria o
adsorbente para separar los compuestos
individuales; en ella, una pequea

1. Hidrocarburos disueltos y dispersos


en aguas (CARIPOL, 1980)

El petrleo est constituido


principalmente por hi-drocarburos que
se pueden dividir en dos gran-des
grupos: alifticos y aromticos; entre
estos, los aromticos resultan ser los
ms txicos dado su efecto cancergeno.

Los mtodos que permiten determinar la


concen-tracin de hidrocarburos en
aguas, sedimentos y organismos, se
fundamentan en la utilizacin de
instrumental especializado para ello. Tal
es el caso de la cromatografa de gases y
la espectrofluoro-metra. Como la
fluorescencia se presenta slo en los
hidrocarburos aromticos, esta tcnica
es apli-cable para la determinacin de
hidrocarburos di-sueltos y dispersos en
aguas.

En la fluorescencia, el material es
irradiado con una longitud de onda dada,
el extracto o la mate-ria absorbe esta
energa y luego, despus de un tiempo,
la irradia en otra longitud de onda, la
cual es analizada por medio de un
sistema ptico y un fotodetector.
hidrocarbu-ros. Debido a que el FID
tambien responde a va-rios compuestos,
estas sustancias deben ser re-movidas
por un proceso de separacin y limpieza
con silica-gel y/o almina. Ambas tienen
la capa-cidad de absorber los materiales
fraccin del orden de microlitros de
polares. Si una solucin de hidrocarburos
muestra es inyectada a la columna con
y materiales grasos es mezclada con
una microjeringa y los hidrocarburos son
estas, los cidos grasos son
vaporizados y movidos a travs de la
selectivamente removidos de la solucin;
columna por el gas de arrastre. Ellos
el mate-rial no eliminado por absorcin
viajan a diferentes ratas dependiendo de
se considera como hidrocarburos (APHA,
la dife-rencia entre los coeficientes de
1998).
particin de las fases mvil y
estacionaria. Cada componente es
observado como un pico en la carta de
El fluormetro determina la
registro.
concentracin de hi-drocarburos
disueltos y dispersos en el agua me-
El tiempo de retencin es caracterstico
diante la medicin de un extracto de
del hidro-carburo en particular y el
ellos. Los hidrocarburos aromticos
rea /altura del pico es proporcional a su
tienen la propiedad de fluorecer. La
cantidad. El detector usado en estos intensidad de fluorescencia se mide
anlisis es un Detector de Ionizacin de
Lla-ma (FID) que es muy sensible a los

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 99


Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

en una celda de slice o cuarzo de 1 cm 1.1 Toma de muestra, almacenamiento y


de paso ptico usando una longitud de preservacin
onda de excita-cin de 310 nm y una de
emisin de 360 nm. Para la toma de las muestras se
recomienda el uso de un dispositivo, el
Se usan estndares de criseno disuelto cual consta de un soporte metlico en el
en hexano. La eficiencia fluorescente de que se sujeta una botella de vidrio mbar
los petrleos vara y es por lo general, de 2.5 l. La botella debe tener una boca
mucho menor para el petrleo que para pequea (+/-3 cm) de tal modo que se
el criseno. Sin embargo, es importante llene len-tamente.
tener resultados comparativos con
estndares de petrleo, ms que con los
de criseno. Antes de su uso, la botella debe ser
lavada con detergente y tratada con
Alcance y aplicacin sulfocrmica, enjuagada con agua de
llave, agua destilada y preextraida con
Este mtodo es aplicable para aguas de hexano, seguida de metanol, acetona y
desperdi-cio de refineras, efluentes de final-mente hexano. Una vez limpia,
sentinas en los bu-ques, y aguas entre la tapa y la botella se coloca un
aledaas a los terminales de carga y pedazo de papel aluminio lavado con
descarga de oleoductos. Tambin se hexano y despus tratado trmicamente
aplica para aguas de intenso trfico (300C). El dispositivo con la botella se
fluvial o martimo. ata a un flotador de 1 metro de distancia,
se destapa, se lanza al agua y una vez
El alcance de este mtodo se limita al llena se recoge con un segundo cordel de
agua com-prendida entre la superficie y recuperacin. Esta primera muestra,
una profundidad de 1 m. A utilizada como enjuague, se desecha y se
profundidades mayores, la concentracin lanza nuevamente la botella. De la
de los hidrocarburos disueltos o segunda recogida, se desechan 10 ml de
dispersos se hace muy pequea, siendo agua para permi-tir la expansin. Se tapa
difcil de detectar por me-dio de esta del mismo modo que despus de lavada y
tcnica. se rotula para posterior ex-traccin. La
extraccin se debe hacer en el menor
tiempo posible y el extracto debe
mantenerse en la oscuridad.

Espectrofluormetro Shimadzu 5301-PC utilizado


para la determinacin de Hidrocarburos Aromticos
Totales (HAT)
revestido de una fase lquida (HP-5 o
similar)

Espectrofotmetro de fluorescencia con


1.2 Materiales y equipos registra-dor de datos
Centrfuga
Cromatgrafo de gases con columna Hojas de aluminio
capilar de slice fundido de 30 m de Frasco de vidrio de 5 ml para los
longitud x 0.25 mm dimetro interno extractos

100 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Erlenmeyer de 150 ml 1.4 Procedimiento


Balanza analtica (+/-
0.0001 g) Rotavapor Extraccin - procedimiento del mtodo de la
Balones aforados de 10, 25 y 50 ml pipeta
Embudo de decantacin de 250 ml con
vlvula y tapa de tefln Medir el volumen exacto de la muestra
Pipeta Pasteur con una probeta y hacer la extraccin
Microjeringa de 5 con hexano
10 l Usar 100 ml de hexano en dos
extracciones sucesivas y combinar los
extractos
1.3 Reactivos Separar aproximadamente 80 ml de la
muestra en un erlemeyer limpio
Metanol Agregar 50 ml de hexano a la muestra
Hidrxido de en la botella se tapa la botella, junto
potasio Hexano con el papel aluminio, y agitar
Acetona vigorosamente
Acido sulfrico Despus de unos segundos, aflojar la
concentrado Oxido de tapa para que salgan los vapores de
aluminio (almina) Lana hexano y se repite el proceso por 5
de vidrio minutos
Dicromato de potasio Colocar la botella boca arriba para
Diclorometano para anlisis de residuos separa la fase de hexano. Esta fase
Estndares de hidrocarburos aromticos debe llegar hasta el cuello de la
y alifticos certificados botella, si no es as se lleva a ese nivel
agregando la muestra que se haba
separado
Almina desactivada 5%: Se activa Con una pipeta previamente
calentando a 300 C durante 8 horas y se enjuagada con hexano, extraer la fase
desactiva con agua destilada al 5% de su hexnica y transferir a un erlenmeyer
peso. el cual debe tener tapa de vi-drio

Slica gel desactivada 5%: Se activa con El proceso se repite con otros 50 ml
un proce-so similar al anterior pero el de hexano y se rotula el erlenmeyer
calentamiento es slo a 120 C. Agregar un poco de sulfato de sodio
anhidro al extracto para remover el
Estndar de criseno: Pesar 10 mg de exceso de agua, se tapa y almacena
criseno (pu-reza mayor al 98%) en para el anlisis
balanza analtica, disolver con n-hexano,
completar a 50 ml. Esta solucin tiene Concentracin
una concentracin de 200 g/ml. Se
debe mantener refrigerada y protegida Los extractos hexnicos se someten a
de la luz (reali-zar la correccin de concentra-cin en un equipo rotavapor
concentracin con la pureza). hasta un volumen de 0.5 ml. Se trasladan
a viales y se guardan hasta el siguiente
paso.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 101
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Se reconstituye el extracto en 50 l de
hexano y se inyectan 1-2 l al
Purificacin cromatgrafo previa ca-libracin de
las condiciones del equipo
En una columna rellena de silicagel,
pasar el extracto para eliminar
sustancias fluorescen-tes que
intervienen en la medicin fluorom-
trica

La elucin por la columna se realiza


con hexano
El extracto final se concentra en
rotavapor has-ta 2 ml
aproximadamente y se deposita con
pipeta Pasteur en viales pequeos,
para su pos-terior cuantificacin

Cuantificacin

La cuantificacin fluoromtrica del


extracto per-mite slo la determinacin
de los hidrocarburos aromticos totales:

Tomar los viales de las fracciones


aromticas de las muestras y el blanco
que deben estar a sequedad

Reconstituir los extractos a 2.5 ml o


ms, si es necesario
Hacer la lectura en el fluormetro
usando como blanco de lectura n-
Hexano
Si se desea la cuantificacin de la
fraccin aliftica se debe emplear la
tcnica de cromatografa de gases,
para ello el extracto debe ser
sometido a un proceso de limpieza y
fraccionamiento con almina, ms
adelante, en el numeral 2.4.1
(Procedimiento para la deter-minacin
de hidrocarburos en sedimentos), se
amplia este proceso. Luego se procede
a la cuantificacin de la fraccin
aliftica (F1) y de la aromtica (F2 y
F3) para esto:
llevar a 25 ml con hexano, la
concentracin de esta nueva solu-cin
1.5 Calibracin es de 10 g/ml.

Fluorometra
Tomar 100, 300, 500, 700 y 900 l del
stock secundario y completar a 10 ml,
El instrumental se calibra de acuerdo con hexano; las concentraciones de
con las ins-trucciones del fabricante para estas soluciones son 0.1, 0.3, 0.5, 0.7 y
lograr la sensibili-dad deseada, 0.9 g/ml respectivamente.
seleccionando longitud de onda de
excitacin de 310 nm y de emisin de Leer la fluorescencia a cada solucin y
360 nm y los slit de banda. aplicar una regresin lineal a los
resultados y determinar la pendiente (m)
y el intercepto (b) de la curva de
Tomar una muestra de hexano para calibracin (Y = mX+b).
determi-nar el blanco de reactivos
Realizar una curva de calibracin Flu = C * m + b
usando criseno como estndar. La
preparacin de los estndares se Y = Flu = Unidades de fluorescencia
realiza de la siguiente manera: de la muestra
X = C = Concentracin del extracto
Preparar un stock secundario: tomar (ug/ml) b = Intercepto
1250 l del estndar de criseno y

102 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Cromatografa Para la determinacin del Mezcla


Compleja no Re-suelta (UCM) de
El cromatgrafo debe ser calibrado para hidrocarburos petrolgenos se toma la
obtener su mxima sensibilidad, de lnea de base del patrn de alcanos. El
acuerdo con las espe-cificaciones del rea se calcula con un planmetro para
fabricante. En general se busca adecuar dicha cuan-tificacin se utiliza como
los flujos de hidrgeno y aire para la patrn el rea del pico de uno de los
mayor sensibilidad. estndares.

Si se requiere la cuantificacin individual El INVEMAR cuenta con un


de cada hidrocarburo (por lo general los Cromatgrafo Perkin
alcanos norma-les del C10 al C34, y Elmer modelo Sigma 300 con detector
algunos aromticos de inte-rs como los FID, el cual opera bajo las siguientes
pirenos, naftalenos, antracenos), se condiciones para el anlisis de
deben elaborar curvas de calibracin hidrocarburos alifticos.
para cada uno, para lo cual es necesario:
Columna empacada 3% OV 101 3 ft
Inyectar soluciones de cada Flujo del gas arrastre (N2): 20
compuesto para determinar sus ml/min
tiempos de retencin Presin del hidrgeno 18 psi
Presin del aire 36 psi
Preparar una solucin que contenga
Temperatura del inyector: 220 C
todos los compuestos de inters; esta
Temperatura del detector: 310 C
solucin ser el stock primario y
contendr una concentracin Temperatura del horno:
relativamente alta de cada Inicial 80C (1 min)
compuesto Final 290 C (7 min)
Rata: 6C/min
A partir del stock primario, preparar
solucio-nes de menor concentracin
(que estn dentro del rango lineal de
respuesta del detector), se preparan
tantas soluciones como puntos de ca-
libracin vayan a tener las curvas

Inyectar cada solucion en el


cromatografo y con los reportes del
equipo elaborar las curvas de ca-
libracin para cada compuesto. Aplicar
una re-gresin lineal para los resultados
y determinar la pendiente (m) y el
intercepto (b) de la curva de calibracin
para el compuesto i (Y = mX+b).

rea = Ci * m + b
Y= = rea del pico reportado por el 1.6 Clculos
rea
cromatograma
X = Ci = Concentracin del compuesto Fluorometra
i en
la solucin (ng/ul)
b = Intercepto El clculo de concentracin en la
muestra se efec-
tan as:

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 103
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

X = Ci = Concentracin de la
sustancia i en
Con la curva de calibracin segn el el extracto (ng/ l)
numeral 1.5 se obtiene la concentracin b = Intercepto
del extracto en g/ml. m = Pendiente de la curva de
regresin

Flu - b
C =
m

C = Concentracin del extracto en


g/ml Flu = Fluorescencia del
extracto
b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de
regresin

La concentracin en la muestra sera:

M x Ve x 1000
ng/l = -
V

M = Concentracin del extracto de


muestra ( g/ml)
Ve = Volumen final del extracto (ml)
V = Volumen de muestra sometida a
anlisis
(l)

Cromatografa

Identificados los picos del


cromatograma, con las reas reportadas
se procede a calcular la concen-tracin
en el extracto, as:

reai - b
Ci = -
m

Y = reai = rea del pico reportado


por el
cromatograma
Para obtener la concentracin por litro
La concentracin de la sustancia i en la de mues-tra se aplica la siguiente
muestra sera: ecuacin:

P(UCM) x Ve
Ci x Ve UCM =
ng/l = - V
V
UCM = Concentracin de UCM
Ci = Concentracin de la sustancia i (ng/l)
en el P(UCM) = Concentracin en el extracto
extracto de muestra (ng/ l)
Ve = Volumen final del extracto ( l) Ve = Volumen final del extracto
V = Volumen de muestra sometida a ( l), o
anlisis disolucin en el vial (50 l)
(l) V = Volumen de muestra (l)

La concentracin de los hidrocarburos Recomendaciones


no resuel-tos (UCM) se calcula utilizando
un factor de res-puesta de un compuesto El material de vidrio utilizado tanto en
aliftico del cromato-grama del stock de la toma de muestras como en los
estndares. Este pico debe estar bien anlisis, debe lavarse con mezcla
definido y localizado en el centro del sulfocrmica, agua corriente, agua
cromatograma. destilada y preextrada, metanol y
finalmente, se lava con hexano

104 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Recordar montar un blanco de que no tenga lugar en la celda de


reactivos por cada conjunto de cuarzo el efecto Quenchee el cual
muestra produce grandes erro-res
Durante el anlisis fluoromtrico
cerciorarse de

1.7 Diagrama de flujo

2.5 L de muestra

Acidificacin

Extraccin hexano Montar un blanco


x 2 veces de reactivos

Fase acuosa Separacin


NO SI

Determinar

alifticos?
Purificacin y
Purificacin en
columna de silica fraccionamiento en
columna de almina

Fluorometra Cromatografa
GC FID

Clculos

1.8 Bibliografa de consulta vestigaciones Oceanogrficas e


Hidrogrficas,
CIOH. Cartagena, 1993.
APHA. 1998. Standard Methods for the analticas de parmetros fsico-qumicos
Examination of Water and Wastewater. y contaminantes marinos. Centro de In-
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 6-79 pp.

CARIPOL. 1980. Manual para la


vigilancia de la contaminacin por
petrleo. IOCARIBE/CARIPOL, pp 12-22.

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
El presente mtodo es utilizado para la
determi-nacin de hidrocarburos
2. Determinacin de hidrocarburos en adsorbidos en sedimen-tos marinos y
sedimentos y organismos marinos estuarinos.
(UNESCO/IOCARIBE, 1986)

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 105
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Las muestras pueden abarcar tanto el que pueden contaminarlas. Tambin es


subsuelo marino, como las playas. Si se importan-te abstenerse de usar
requiere un estu-dio ms detallado, se productos bloqueadores o bronceadores
debe separar las muestras en dos para la piel pues suelen contener
fracciones, mayor y menor a 63 m. hidrocarburos y sustancias que
fluorecen.
Alcance y aplicacin
Por lo general, ostras y peces deben
Este mtodo es aplicable a todo tipo de transportarse congelados y protegidos en
sedimento de origen marino, continental bolsas plsticas hasta el laboratorio, en
o estuarino y a todo ti-po de organismo, donde el sedimento adherido a las valvas
en especial a los marinos filtradores. se remueve con cepillo y agua. Una vez
limpios los organismos, se abren y con la
La precisin del mtodo est muy ayuda de cuchillos de acero inoxidable se
relacionada con la tcnica final extraen las partes que se sometern a
(fluorometra o cromatografa), anlisis: msculo, vsce-ras, tejido graso,
empleada para la cuantificacin de los etc. Si el anlisis no es realizado de
hidrocar-buros. inmediato, deben guardarse congeladas
(-10 a 20 oC), preferiblemente en
frascos de vidrio, ta-pados con papel
aluminio.
proceso la muestra hme-da y tomar una
submuestra para el clculo de la
2.1 Toma de muestra, almacenamiento y humedad; si es necesario, se deben
preservacin eliminar to-dos los organismos presentes
a travs de una maya de 250 mm antes
Con una draga metlica tipo Van Veen y de analizar la muestra.
con ayuda de esptulas de acero
inoxidable o plsti-cas enjuagadas con Debe tenerse especial cuidado en la
hexano, se recogen las mues-tras de manipulacin de las muestras en el
sedimentos en bolsas plsticas de sello interior de la embarcacin porque suele
hermtico, aunque es ms aconsejable el haber gasolina y aceite lubricante
uso de recipientes de vidrio tapados con
papel aluminio, y se congelan hasta el
momento del anlisis.

Si la muestra es hmeda deber ser


congelada, pero si es seca, se puede
almacenar indefinida-mente. Durante el
secado no se deben sobrepasar los 60C,
para evitar la prdida de los componen-
tes ms voltiles. Es mejor secar las
muestras por liofilizacin o someter al
ml de metanol. Al-macenar refrigerado.
Esta solucin tiende a sellar los tapones
esmerilados, por lo cual es aconseja-ble
2.2 Materiales y equipos utilizar frascos con tapones de plstico.

Ver numeral 1.2. Solucin de hidrxido de potasio 6N:


Disolver 120 g de KOH en 500 ml de
agua destilada. Almace-nar en un frasco
2.3 Reactivos con tapa plstica.

Adicional a los reactivos del numeral 1.3.


se re-quiere: 2.4 Procedimiento

2.4.1 Sedimentos
Solucin de KOH metanlico: Disolver
30.0 g de hidrxido de potasio en 1000

106 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Purificacin y fraccionamiento

Digestin

En un matraz limpio y seco, de fondo


redondo, pesar aproximadamente 30.0
g del sedimento hmedo
Adicionar 100 ml de KOH/MeOH al
3%, 20 ml de agua destilada y cuerpos
slidos de ebulli-cin previamente
lavados con n-hexano
Someter el sedimento a una
saponificacin mediante reflujo
durante 1 hora y media
De cada set de muestras, una de ellas
se debe trabajar por duplicado, y se
dopar con 100 l de
un estndar interno n-C22 100 g/ml,
lo cual per-mitir determinar el
porcentaje de recuperacin

Extraccin

Enfriar el extracto matanlico a


temperatura ambiente, decantar y
transferir el sobrenadante a un matraz
Lavar dos veces con 30 ml de MeOH,
juntando los lavados metanlicos
sobrenadantes en el mismo
erlenmeyer; stos son previamente
centrifugados a 3000 rpm durante
cinco minu-tos en tubos de 47 ml con
tapa rosca y tefln.
Transferir los extractos metanlicos a
un em-budo de decantacin y extraer
dos veces con 25 ml de hexano

Concentracin

Rotavaporar la fase hexnica


reduciendo el volumen a 0.5 ml.
Desechar la fase metanlica
Transferir cuantitativamente a un vial
limpio y seco el extracto hexnico que
contiene los hi-drocarburos y lpidos
no saponificables
Cuantificacin
Lavar tres veces la columna con 2 ml
de hexano y sembrar el extracto de la La fraccin F1 se analiza por
muestra en la columna cromatografa gaseosa para la
Proceder a realizar el fraccionamiento determinacin de hidrocarbu-ros
utilizan-do los siguientes eluyentes: alifticos
Si el objetivo es determinar
Eluyente Fraccin Volumen Sustancias hidrocarburos aro-mticos totales
separadas (HAT), las fracciones F2 y F3 se
Hexano F1 4 ml Hid. alifticos pueden combinar y la resultante se
Hexano 4 ml Solvente analiza por espectrofluorometra.
Hexano: Aromticos Si se desea realizar una cuantificacin
diclorome- F2 4 ml mono y di nu- de arom-ticos individuales es mejor
tano 7:3 cleares trabajar e inyectar cada extracto por
Dicloro- F3 4 ml Aromticos separado en el cromatgrafo. Ver
metano polinucleares
numerales 1.4 y 1.5 para ms detalles

Los extractos de cada fraccin se


dejan secar para su posterior 2.4.2 Organismos
cuantificacin.
Digestin

Preparar una pipeta Pasteur con lecho Pesar 10 g de muestra en un


de lana de vidrio lavada con hexano y erlenmeyer y agregar 25 ml de
rellenar con Al-mina (120 - 230 solucion de hidrxido de potasio 6N
mesh), hasta cinco centmetros de Inyectar a una de las muestras que se
altura trata por duplicado 100 l de estndar
interno n-C20

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 107
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

fraccin (alifticos) aadir 20 ml de


hexano. Esta se recoge en un matraz
(eicosano) con concentracin de 260 La segunda fraccin se obtiene
ug/ml y dejar a 30C durante 18 horas agregando 20 ml de 10% de
aproximadamente
diclorometano en hexano y la tercera
fraccin con 40 ml al 20%
Extraccin
diclorometano en hexano, de acuerdo
con el siguiente cuadro:
Luego de completada la digestin del
organismo se procede a la extraccin de
los hidrocarburos petrognicos:

Agregar 15 ml de ter etlico, agitar y


centrifugar a 5000 rpm durante 5
minutos
Separar la capa sobrenadante
absorbindola con una pipeta Pasteur.
Transferir este extracto a un matraz y
repetir el proceso tres veces

Concentracin

Secar el extracto final dentro del


baln, aproxi-madamente 45 ml en
rotavapor hasta concen-trarlo a unos
0.5 ml

Purificacin y cromatografa

Armar la columna para la purificacin


del extrac-to de la siguiente manera:

Agregar 8 g de slica seguidos por 8 g


de al-mina

Lavar la columna mediante unos 20 ml


de hexano. La columna debe
compactarse bien y no contener
burbujas de aire; esto se consigue
golpeandola levemente con un objeto
flexible mientras se va agregando la
almina y slica, respectivamente

Una vez lavada la columna, agregar el


extracto de 0.5 ml contenido en el
baln. Para obtener la primera
Para la determinacin de
hidrocarburos alifticos, la fraccin F1
Eluyente Fraccin Volumen Sustancias
se analiza por cromatografa de gases
separadas Las fracciones F2 y F3 se pueden
Hexano F1 20 ml Hid. alifticos analizar por espectrofluorometra. Ver
10% diclo- Aromticos numerales 1.4 y 1.5 para ms detalles
rometano F2 20 ml mono y di
en hexano nucleares
20% diclo- Aromticos 2.5 Calibracin
rometano F3 40 ml polinucleares
en hexano Para la calibracin de los dos mtodos
(fluoro-mtrico o cromatogrfico), seguir
Todas las fracciones recogidas en el procedimien-to descrito en el numeral
matraces son rotaevaporadas hasta 0.5 1.5.
ml para luego ser trans-feridas a sus
respectivos viales. El extracto del vial
2.6 Clculos
deber tener unos 4 ml.
Fluorometra
Cuantificacin
El clculo de concentracin en la
Una vez recogidos, se pueden
muestra se efec-ta as:
evaporar a se-quedad con nitrgeno
gaseoso, para su poste-rior anlisis La curva de calibracin segn el numeral
instrumental 1.5 da la concentracin del extracto en
g/ml.

108 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

se procede a calcular la concen-tracin


en el extracto, as:
Flu - b
C =
m

C = Concentracin del extracto


( g/ml) Flu = Fluorescencia del
extracto
b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de
regresin

La concentracin en la muestra
(sedimento u or-ganismos), sera:

M x Ve
g/g =
W

M = Concentracin del extracto de


muestra ( g/ml)
Ve = Volumen final del extracto (ml)
W = Peso de muestra seca sometida a
anlisis (g)

Cromatgrafo de gases Perkin Elmer Sigma 300 con


detector FID, utilizado para la identificacin y cuantifi-
cacin de hidrocarburos alifticos y aromticos

Cromatografa

Identificados los picos del


cromatograma, con las reas reportadas
La concentracin de los hidrocarburos no
rea - b resuel-tos (UCM) se calcula utilizando un
Ci = factor de res-puesta de un compuesto
m aliftico del cromatogra-ma del stock de
estndares. Este pico debe ser bien
Y = rea= rea del pico reportado por
resuelto y estar localizado en el centro
el
del cromatograma.
cromatograma
X = Ci = Concentracin de la
sustancia i en
Para obtener la concentracin por gramo
el extracto (ng/ l)
de mues-tra se aplica la siguiente
b = Intercepto
ecuacin:
m = Pendiente de la curva de
regresin
P(UCM) x Ve x 0.001
UCM = -
La concentracin de la sustancia i en la
muestra sera: W

UCM = Concentracin de UCM ( g/g)


Ci x Ve x 0.001 P(UCM) = Concentracin en el
extracto
ug/g =
(ng/ l)
W
Ve = Volumen final del extracto ( l),
Ci = Concentracin de la sustancia o disolucin en el vial (50 l)
i en el extracto de muestra W = Peso de muestra seca
(ng/ l) (sedimento u
Ve = Volumen final del extracto ( l) organismo, g)
W = Peso de muestra seca sometida a
anlisis (g)

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 109
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

2.7 Diagrama de flujo


HIDROCARBUROS EN SEDIMENTOS

Montar un blanco 30.0 g de muestra

de reactivos Concentracin
Purificacin
Adicionar 100 ml cromatogrfica
de columna
de KOH/MeOH
Digestin
F1 F2 F3
Ebullicin por 1.5 8 ml Hexano 4 ml Hexano: 4 ml
horas Diclorometano 7:3 Diclorometano
Enjuagar el Concentrar

sedimento con 30
ml de MeOH
Extraccin X 2 veces Cuantificar
Separacin con
centrifuga
Combinar F2 y F3
Extraccin con 25 F1 - Cromatografa
Fase acuosa GC FID
ml hexano 2
Fluorometra
veces
Clculos

HIDROCARBUROS EN ORGANISMOS

Montar un blanco 10.0 g de muestra

de reactivos
Purificacin
Adicionar 25 ml cromatogrfica
de columna
de KOH 6N
Digestin
F1 F2 F3
Reposar por 18 20 ml 20 ml Hexano: 40 ml Hexano:
horas Hexano Diclorometanor 9:1 Diclorometanor 8:2
Extraccin Adicionar 15 ml Concentrar

eter etlico,
agitar
X 3 veces Cuantificar
Centrifugar y
Fase acuosa
separar
Combinar F2 y f3
F1 - Cromatografa
Concentracin GC FID
Fluorometra
Clculos
110 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

stas pro-ducen seales o causan


envenenamiento del mis-mo, por lo cual,
2.8 Bibliografa de consulta se recomienda su eliminacin de la
muestra antes de analizar. Para tal fin, se
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; apli-can tcnicas de limpieza como el uso
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas de colum-nas de silicato de magnesio
analticas de parmetros fsico-qumicos (Florisil) y procesos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.

3. Determinacin de plaguicidas
organoclorados en aguas (mtodo EPA,
1980)

La aplicacin a gran escala de pesticidas


en reas agrcolas contribuye a la
presencia de estas sus-tancias txicas en
la superficie terrestre y final-mente en
suplementos de agua. El transporte de
las mismas desde sus fuentes hasta
cuerpos de agua, puede efectuarse por
drenaje de terrenos aledaos,
precipitacin atmosfrica, derrames ac-
cidentales en un rea o por un sistema
de distri-bucin.

Para su determinacin se aplica la


cromatografa de gases. En este proceso
estas sustancias son ex-tradas con una
mezcla de solvente, dietileter/ hexano o
metilencloruro/hexano. El extracto es
concentrado por evaporacin y si es
necesario, limpiado por columna de
absorcin. Posteriormen-te, puede
realizarse el anlisis cromatogrfico pro-
piamente dicho.

El sistema de deteccin para la


determinacin cromatogrfica de este
tipo de sustancias es un detector de
captura de electrones (ECD). Sin em-
bargo, algunas sustancias diferentes a
El rango ptimo de trabajo es 10-9-10-12
g, dado por la linealidad del detector. La
de separacin. Usualmente las aguas mnima concentracin que puede ser
potables no requieren el tratamiento de detectada es de 10-12 g y los siguien-tes
limpieza. compuestos pueden determinarse por
este m-todo: Clordano, -BHC, -BHC,
Algunos pesticidas son sustancias muy Lindano, Heptaclo-ro, Epoxido, p,p, -
inestables, por tal razn la validez de los DDE, o,p, - DDE, Dieldrin, Endrin, p,p-
resultados analti-cos depende del DDD, o,p-DDD, p,p-DDT, y o,p-DDT.
muestreo y del manejo de la muestra. El
mtodo aqu descrito se fundamenta en
extraccin sucesiva de la muestra con 3.1 Toma de muestra, almacenamiento y
mezclas de ter-hexano. El extracto preservacin
obtenido se concentra y se pasa por una
columna empacada con florisil para ser Las botellas de muestreo, y todo el
fraccionado mediante la elucin con material de vidrio empleado en el
ter-hexano en diferentes proporciones. anlisis debe ser lavado con agua y
Los extractos son luego concentrados y detergente, enjuagado con metanol
analizados por cromatografa de gases seguido por n-Hexano, luego secado en
usando detector ECD. un hor-no a 250C. Todo el material de
vidrio debe ser almacenado en cabinas
Alcance y aplicacin libres de polvo y cubierto con papel
aluminio hasta su uso. Es necesario re-
Este mtodo es aplicable a todo tipo de mover todo residuo orgnico del material
aguas naturales, efluentes industriales y mante-nindolo por lo menos dos horas
domsticos. en solucin sulfocrmica.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 111
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Precaucin: Se debe tener mucho 3.2 Materiales y equipos


cuidado para evitar contacto con la piel o
inhalacin del cido sulfocrmico. Cromatgrafo de gases equipado con
Detector de Captura Electrnica (ECD)
Las muestras de agua a diversas Rotavaporador
profundidades son colectadas en botellas Concentrador Kuderna Danish
Nansen o Niskin y al-macenadas en Balanza con precisin +/-
botella de 1 litro de capacidad. En aguas 0.00001 g Horno para secado
limpias es preciso tomar una mayor Sistema de vaco
canti-dad (2.5 l). Cuando las muestras Beakers de 100, 150, 200 y 1000
son superficiales pueden ser tomadas ml Probeta graduadas de 50,
directamente en la botella de vidrio a 100 y 250 ml Erlenmeyers de
unos 25 cm por debajo de la superficie, 125 y 250 ml
para evitar la adhesin de pelculas de Tubos de centrfuga de 50 ml
aceite o materiales extraos. Columnas de vidrio de 25 cm de largo x 1
cm de dimetro interno con llave de
Tefln
Mximo dos horas despus de haber sido Embudos de separacin
toma-das deben ser llevadas al de 2 l Pipetas Pasteur
laboratorio y analizadas. Si el anlisis no Pipetas volumtricas de 1, 2, 5, y
se realiza inmediatamente, las muestras 10 ml Matraz aforado de 25, 50 y
deben ser refrigeradas entre 2 a 4 C, sin 100 ml Pinzas y esptulas de
que pasen ms de 15 das, si el anlisis acero inoxidable Microjeringas
es de organoclorados o siete, si el de 10 l
estudio es para organofosforados. Es Desecadores
conveniente agregarles el solvente de Viales de 2 ml con tapa rosca de tefln
extraccin.

3.3 Reactivos

Gas nitrgeno (N2)


grado 4.5 n-Hexano
calidad pesticida n-
Decano
Eter
etlico
Acetona
Metanol calidad
pesticida Florisil P.R,
Cromatgrafo de gases Perkin Elmer Auto System
60 - 100 Mesh
con detector ECD, utilizado para la identificacin y
Acido sulfrico concentrado, libre de
cuantificacin de compuestos organoclorados
hidrocarbu-ros clorados (HC)
Sulfato de sodio Estndares puros de pesticidas
anhidro Dicromato (hidrocarburos clo-rados): alfa-
de potasio hexaclorociclohexano (-BHC), -BHC, (-
BHC o Lindano, Aldrn, p,p
Diclorodifenil-

112 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

hexano puro, agitar por 2 min y repitir


el segundo paso depositndolo en un
dicloroetano (DDD), p,p-Diclorodifenil- erlenmeyer aparte. Los PCBs
diclo-roetileno (DDE), p,p intervienen seve-ramente en la
Diclorodifeniltricloroetano (DDT), cromatografa de los plaguicidas
Dieldrin, entre otros, todos de 100 ng/ l. organoclorados
Las soluciones de trabajo son preparadas
por dilu-ciones sucesivas con solvente. Agitar la mezcla de los dos extractos y
concen-trar en rotavapor al vaco
Precaucin: Los compuestos estndares hasta un volumen de 2 ml
son alta-mente txicos y deben ser aproximadamente
manejados con extre-mo cuidado para
evitar contacto con la piel o in-halacin.

3.4 Procedimiento

Extraccin

Depositar la muestra en un embudo de


separa-cin de 2 l; la extraccin
tambin se puede realizar en la misma
botella de la muestra
Adicionar 75 ml de eter al 15% en
hexano y agitar vigorosamente
durante 2 minutos
Dejar en reposo para separar las dos
fases
Transferir la fase orgnica a un
erlenmeyer con-
teniendo 0.5 1.0 g de Na 2SO4
anhidro; si la extraccin se realiza en
la misma botella, utili-zar una pipeta
de 25 ml para transferir la fase
orgnica o extracto
Tapar el erlenmeyer con papel
aluminio
Adicionar al embudo de separacin 50
ml de eter al 6 % en hexano, agitar
durante 2 min. y repetir el paso
anterior reuniendo el extracto con el
anterior en el mismo erlenmeyer
Si se desea determinar PCBs en la
muestra, adicionar a la misma en el
embudo de separa-cin 50 ml de
Percolar el extracto en una columna
de Florisil
Preparacin de la columna de Florisil Eluir con 200 ml de ter en hexano al
6%
La cromatografa de columna se Eluir con 200 ml de ter en hexano al
prepara em-pleando una columna de 15%
vidrio de 25 cm de alto y de 1.0 cm de Reunir los dos eluidos anteriores en
dimetro interno un erlenmeyer de 100 ml.
Enjuagar con acetona las columnas Eluir con 200 ml de ter en hexano al
para frac-cionar y colocarlas en la 50%. Recibir en otro erlenmeyer
estufa a 110oC Colocar alambre de cobre o mercurio
Fijar una pieza de lana de vidrio en el metlico para la desulfuracin, hasta
extremo inferior para retener el que no se aprecie la precipitacin de
adsorbente los sulfuros sobre el metal.
Mezclar 16 g de Florisil con 30 o 40 Concentrar en rotavapor hasta 2 ml
ml de n-hexano los cuales son vertidos Almacenar el extracto en un vial de
a la columna vidrio de 5 ml para su anlisis final por
Adicionar 1.0 cm de sulfato de sodio cromatografa de gases
sobre el nivel de Florisil, para evitar
disturbios en la pri-mera capa cuando
los solventes son vertidos a la columna Purificacin con cido sulfrico concentrado
Eluir 50 ml de n-hexano como lavado
Concentrar el extracto en bao Mara
Purificacin en columna de Florisil hasta 0.5 ml

Concentrar el extracto en Kuderna Transvasar el extracto a un tubo de 10


Danish o bao Mara hasta 0.5 ml ml con tapa rosca

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 113
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

los flujos de nitrgeno para una mayor


sensibilidad, se deben establecer los
Adicionar 1 ml de H2SO4 concentrado, flujos de make-up y de arrastre en la
agitar vigorosamente por 30 segundos columna. Si el equipo posee un sistema
Dejar en reposo hasta la separacin de split, tambin se debe definir el tiempo
las fa-ses durante el cual permanece abierta la vl-
vula y las razones de flujo de la purga y
Enjuagar con 20 ml de n-hexano
el split.
Retirar con una pipeta Pasteur la fase
cida. Repetir el proceso hasta que la
fase orgnica sea clara y
completamente traslcida
Lavar el extracto con agua
desionizada, agitar y retirar la fase
acuosa
Adicionar suficiente cobre o mercurio
metlico para desulfurar el extracto
Adicionar 0.5 g de Na2SO4 anhidro
para secar el extracto
Almacenar el extracto en un vial de
vidrio de 5 ml para su anlisis final
por cromatografa de gases

Si el anlisis cromatogrfico no se
realiza in-mediatamente, mantener
refrigerados los ex-tractos a +/- 2 oC y
protegidos de la luz

Cuantificacin

La cuantificacin de cada pesticida se


realiza a travs de un anlisis por
cromatografa de gases, los extractos
secos de las muestras, se reconstituyen
con 25 - 100 l de n-Decano (nC10), y se
inyecta 0.5 l en el cromatgrafo de
gases con detector ECD.

3.5 Calibracin

Ajustar el cromatgrafo para obtener su


mxima sensibilidad; ayuda mucho tener
en cuenta las es-pecificaciones del
fabricante. Esto se consigue, ade-cuando
Stock primario: Preparar una solucin
Diariamente, antes de iniciar el anlisis que conten-ga todo los compuestos de
de las mues-tras, se debe hacer el inters. Esta solucin ser el stock
background del equipo y correr un primario y contendr una concentra-cin
cromatogrma en blanco o lnea base, relativamente alta de cada compuesto.
nicamente solvente (n-C10), y otro con Una solucin con 100 ng/ l de cada
una mez-cla de referencia de compuesto es su-ficiente (pesar 5.00 mg
plaguicidas. Esto con el obje-to de de cada organoclorado y llevar a 50 ml
evaluar la seal del instrumento antes de en baln aforado con hexano).
cualquier medida y tambin conocer los
tiempos de retencin (tR) de los Comercialmente tambin se consiguen
compuestos de referencia de la mezcla a mezclas de varios pesticidas, con
las condiciones de funcionamiento del concentraciones certificadas; su empleo
equipo. puede ahorrar mucho tiempo y mejo-rar
la precisin de las curvas.

La identificacin y cuantificacin A partir del stock primario se preparan


individual de cada hidrocarburo clorado soluciones de menor concentracin (que
requiere de la elaboracin de curvas de estn dentro del ran-go lineal de
calibracin para cada compuesto. Es respuesta del detector), tantas como
necesario la preparacin de soluciones puntos de calibracin vayan a tener las
de cada uno de ellos a concentraciones curvas. (se puede trabajar elaborando
que estn dentro del rango lineal del mezclas que estn entre el rango de 10
detector, estas soluciones de patrones 300 pg/ l en concentracin para cada
individuales se inyectan para determinar compuesto). Estas soluciones que van a
los tiempos de retencin de cada ser inyectadas al cromatgrafo deben
compuesto. utilizar nC10 como solvente.

114 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Con los reportes del equipo emplear una 3.6 Clculos


regre-sin lineal para determine la
pendiente (m) y el intercepto (b) de la Identificados los picos del
curva de calibracin para el compuesto i. cromatograma, con las reas reportadas
(Y = mX+b). se procede a calcular la concen-tracin
del compuesto i en el extracto, de la si-
rea = Ci * m + b guiente forma:

Y = rea = rea del pico reportado rea - b


por el cromatograma Ci =
X = Ci = Concentracin del compuesto m
i en el extracto (pg/ l)
b = Intercepto Y = rea = rea del pico reportado por
el
El INVEMAR cuenta con un cromatograma
cromatgrafo de gases Perkin Elmer X = Ci = Concentracin de la
sustancia i en
modelo Auto System con detector ECD,
el extracto (pg/ l)
el cual opera bajo las siguientes
b = Intercepto
condicio-nes cromatogrficas para el
m = Pendiente de la curva de
anlisis de compues-tos organoclorados:
regresin

Columna capilar SPB-1.


Temperatura del inyector: 220 C
La concentracin de la sustancia i en la
Temperatura del detector: 310 C
muestra sera:
Flujo del gas auxiliar (N2): 60
ml/min
Flujo del gas de arrastre: 1.5 ml/min
Ci x Ve x 0.001
Temperatura del horno:
ng/l = -
Inicial: 150C (4 min)
V
Final: 290 C (5 min)
Rata: 7C/min
Ci = Concentracin de la sustancia i en
el
extracto de muestra (pg/ l)
Ve = Volumen final del extracto (25 l)
V = Volumen de muestra sometida a
anlisis
(l)

Recomendaciones

Algunas consideraciones que se deben


tener con las mezclas de referencias son:
No debe haber ningn compuesto est por fuera del ran-go de linearidad
presente con una concentracin, que del detector de captura de electrones

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 115
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Se debe usar una balanza de alta Todo material de vidrio a utilizar, debe
precisin y papel aluminio como enju-garse con los solventes y secarse
pesasustancias, suficien-temente seco perfectamente.
y limpio Las mezclas estndares se pueden
Al pesar los estndares se debe tener transvasar del matraz volumtrico a
en cuen-ta su pureza, la cual viene recipientes de vidrio adecuados para
certificada; y al final se realizarn las su almacenamiento
correcciones pertinentes con dicho Las mezclas estndar deben guardarse
valor refrige-radas y perfectamente selladas
Se debe tener cuidado en la disolucin Las mezclas no pueden pasar un
y trasvasado de los estndares periodo mxi-mo de seis meses y los
primarios, puesto que cualquier estndares stock con-centrados de
prdida ocasiona grandes errores nueve

3.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco Medir el volumen Cromatografa


de reactivos de columna

200 ml de eter 6%
75 ml de eter en hexano
15% en hexano
200 ml de eter
50 ml de eter 15% en hexano
Extraccin 6% en hexano
200 ml de eter
50 ml de hexano 50% en hexano

Desulfuracin
Fase acuosa Separacin

Cromatografa
Concentracin GC ECD

Clculos
ICA. 1991. Manejo de muestras y
tcnicas de anlisis para la
3.8 Bibliografa de consulta determinacin de residuos

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.
US. EPA. 1980. Manual of Analytical
de plaguicidas. Supervisin y control de Methods for the Analysis of Pesticides in
calidad de pesticidas. Ministerio de Human and Environ-mental Samples.
Agricultura/ICA Tibaitata. Environmental Protection Agency, EPA-
600/8-80-038, Health Effects Research
Lab. Research Triangle Park, NC.

116 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

dado por la linealidad del detector. La


mnima concentracin que puede ser
4. Determinacin de plaguicidas detectada es de 10-12 g y los siguientes
organoclorados en sedimentos compuestos pueden determinarse por
(metodo EPA, 1980) este mtodo: Clordano, -BHC, -BHC,
Lindano, Heptacloro, Epoxido, p,p, - DDE,
Este mtodo describe la determinacin o,p, - DDE, Dieldrin, Endrin, o,pDDD,
de DDTs y PCBs en organismos y o,p-DDD, o,p-DDT.
sedimentos marinos por medio de
Cromatografa de Gases (CG). Otros pes-
ticidas halogenados y compuestos
orgnicos que capturen electrones,
pueden estar presentes en estas
muestras y muchos de estos podran ser
de-terminados por este mtodo, sin
embargo, no to-dos los residuos son
estables al procedimiento de limpieza
aplicado al anlisis de PCBs y DDTs.

Es utilizado para la determinacin de


plaguicidas organoclorados absorbidos
en sedimentos mari-nos y estuarinos; las
muestras pueden abarcar tanto el
subsuelo marino, como las playas. Si se
requie-re un estudio ms detallado, se
debe separar las muestras en dos
fracciones, mayor y menor a 63 m.

El mtodo se fundamenta en una


extraccin sli-do - liquido continua de
los plaguicidas con hexano-acetona (1:1).
El extracto obtenido se concentra y se
pasa por una columna empacada con
Florisil para ser fraccionado mediante la
elu-cin con ter - hexano en diferentes
proporciones. Los extractos son luego
concentrados y analizados por
cromatografa de gases usando detector
ECD.

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a todo tipo de


sedimen-tos marinos o continentales. El
rango ptimo de trabajo es 10-9 10-12 g,
dentro de bolsas plsticas por un periodo
no mayor a 15 das.
4.1 Toma de muestra, almacenamiento y
preservacin

Las muestras se recolectan con una 4.2 Materiales y equipos


draga metli-ca tipo Van Veen, conos o
cucharas, de donde se empacan en Cromatgrafo de gases equipado con
bolsas plsticas para ser transporta-das Detector de Captura Electrnica (ECD)
al laboratorio. La mejor forma de Equipo de extraccin
almacenar y preservar la muestra es Soxhlet Rotavaporador
secndola; y para esto el mejor Concentrador Kuderna Danish
procedimiento es la liofilizacin (secado
Balanza analtica precisin +/-
a bajas temperaturas), y el 0.00001 g Horno para secado
almacenamiento en un medio exento de
Plancha de calentamiento
humedad. Si el anlisis inmedia-to no es
Beakers de Pyrex de 100, 150, 200 y
posible, y tampoco se cuenta con un
1000 ml Probetas graduadas de 50,
equipo liofilizador, es conveniente
100 y 250 ml Erlenmeyers de 125 y
secarla en es-tufa a 40 oC hasta que la 250 ml
muestra est libre de humedad. Columna de vidrio 25 cm de largo x 1 cm
Posteriormente, se almacena en bolsas de di-metro interno con llave de tefln
plsticas o en papel aluminio, Pipetas Pasteur
asegurndose de mantenerlas en un
Pipetas volumtricas de 1, 2, 5, y
desecador. Otra alternativa muy eficaz es
10 ml Matraz aforado de 25, 50 y
mantener congeladas las muestras a
100 ml Microjeringas de 10 l
-20oC, envueltas en papel aluminio

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 117
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Colocar en el baln del equipo soxhlet


150 ml de una mezcla de acetona - n-
Desecadores hexano (1:1), y unos cuerpos de
Viales de 2 o 5 ml con tapa rosca de ebullicin
tefln
Extraer en el aparato soxhlet por 8
horas, a una razn de 4 5 veces de
vaciado por hora
4.3 Reactivos
Extraer la misma cantidad de sulfato
de sodio, para el seguimiento del
Gas nitrgeno (N2) blanco de reactivos
grado 4.5 n-Hexano
calidad pesticida n-
Decano, R.A
Eter etlico,
R.A Acetona,
R.A
Metanol calidad
pesticida Florisil PR,
60 - 100 Mesh
Acido sulfrico concentrado, libre de
Hidrocarbu-ros clorados (HC)
Sulfato de sodio
anhidro Dicromato
de potasio
Estndares de pesticidas (Hidrocarburos
clorados)

Precaucin. Los compuestos estndares


son alta-mente txicos y deben ser
manejados con extre-mo cuidado para
evitar contacto con la piel o in-halacin.

4.4 Procedimiento

Extraccin

Si la muestra es hmeda pesar de 5 a


7 g (sedi-mento hmedo), y mezclar
con tres veces su peso de sulfato de
sodio anhidro, hasta que parezca estar
seca; transferir la mezcla al vaso del
soxhlet
vidrio de 25 cm de alto y de 1.0 cm de
dimetro interno
Trasvasar a un embudo de separacin Enjuagar las columnas para fraccionar
de 250 ml,agregar 150 ml de agua con acetona y colocar en la estufa a
desionizada y agitar fuertemente para 110oC
retirar la acetona En el extremo inferior, fijar una pieza
Separar las fases, desechar la capa de lana de vidrio, para retener el
inferior (acetona - agua) y conservar la adsorbente
de hexano Mezclar 16 g de Florisil con 30 40 ml
Lavar la capa hexnica con 150 ml de de n-hexano los cuales son vertidos a
una so-lucin de sulfato de sodio 2%. la columna, adicionar 1.0 cm de
Retirar la fase acuosa sulfato de sodio sobre el nivel de
Florisil, para evitar disturbios en la
Colocar la fase orgnica en un primera capa cuando los solventes son
erlenmeyer de 125 ml, agregar 0.5 g verti-dos a la columna. Terminado
de sulfato de sodio anhidro y dejar en esto, eluir 50 ml de n-hexano como
reposo para retirar la humedad lavado
Concentrar el extracto en rotavapor
hasta 2 ml aproximadamente y
depositarlo con pipeta Pasteur en Purificacin en columna de Florisil
viales pequeos (2 5 ml)
Especialmente en muestras de
sedimentos y orga-nismos, es necesario
Preparacin de la columna de Florisil purificar el extracto antes de proceder
con el anlisis. La limpieza y separacin
La cromatografa de columna se son logrados por medio de cromatografa
prepara em-pleando una columna de de par-ticin, como sigue:

118 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Adicionar suficiente cobre o mercurio


metlico para desulfurar el extracto
Concentrar el extracto en Kuderna Adicionar 0.5 g de Na2SO4 anhidro
Danish o bao Mara hasta 0.5 ml para secar el extracto
Percolar el extracto en una columna Almacenar el extracto en un vial de
de Florisil.
vidrio de 5 ml para su anlisis final por
Eluir con 200 ml de ter en hexano al
6% cromatografa de gases
Eluir con 200 ml de ter en hexano al
15%
Reunir los dos eluidos anteriores en
un erlenmeyer de 100 ml
Eluir con 200 ml de ter en hexano al
50%. Recibir en otro erlenmeyer
Colocar alambre de cobre o mercurio
metlico para la desulfuracin, hasta
que no se aprecie la precipitacin de
los sulfuros sobre el metal
Concentrar en rotavapor hasta 2 ml
Almacenar el extracto en un vial de
vidrio de 5 ml para su anlisis final
por cromatografa de gases

Purificacin con cido sulfrico concentrado

Concentrar el extracto en bao Mara


hasta 0.5 ml

Transvasar el extracto a un tubo de 10


ml con tapa rosca
Adicionar 1 ml de H2SO4 concentrado,
agitar vigorosamente por 30 segundos
Dejar en reposo hasta la separacin de
las fa-ses

Enjuagar con 20 ml de n-hexano


Retirar con una pipeta Pasteur la fase
cida. Repetir el proceso hasta que la
fase orgnica sea clara y
completamente traslcida
Lavar el extracto con agua
desionizada, agitar y retirar la fase
acuosa
4.6 Clculos

Si el anlisis cromatogrfico no se Identificados los picos del


realiza inme-diatamente, mantener cromatograma, con las reas reportadas
refrigerados los extractos a +/- 2oC y se procede a calcular la concen-tracin
protegidos de la luz. del compuesto i en el extracto, de la si-
guiente forma:

Cuantificacin
rea - b
Ci = -
La cuantificacin de cada pesticida se
m
realiza a travs de un anlisis por
cromatografa de gases, los ex-tractos
Y = rea = rea del pico reportado por
secos de las muestras, se reconstituyen el
con 25 - 100 l de n- Decano (nC10) y se cromatograma
inyecta 0.5 l en el cromatgrafo de X = Ci = Concentracin de la
gases con detector ECD. sustancia i en
el extracto pg/ l
b = Intercepto
4.5 Calibracin m = Pendiente de la curva de
regresin
El proceso de calibracin es idntico al
descrito en el numeral 3.5. La concentracin de la sustancia i en la
muestra sera:

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 119
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Ci x Ve x 0.001 Recomendaciones
ng/g = -
W Son vlidas de igual forma las
recomendaciones dadas en el numeral
Ci = Concentracin de la sustancia 3.6.
i en el extracto de muestra
(pg/ l) Es necesario llevar un blanco de
Ve = Volumen final del extracto (50 l) reactivos a travs de todos los pasos del
W = Peso de muestra seca sometida a mtodo.
anlisis (g)

4.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco 5.0 g de muestra Cromatografa de


de reactivos columna

200 ml de eter
Extraccin Soxhlet 6% en hexano
Extraccin Acetona : Hexano
8 horas 1:1, 150 ml 200 ml de eter
15% en hexano

200 ml de eter
Aadir 150 ml de 50% en hexano
agua destilada

Fase: acetona

agua Separacin Desulfuracin

Lavar con: 150 ml Cromatografa


Na2SO4 2% GC ECD

Clculos
Fase acuosa Separacin

4.8 Bibliografa de consulta Concentracin

US. EPA. 1980. Manual of Analytical ICA. 1991. Manejo de muestras y


Methods for the Analysis of Pesticides in tcnicas de anlisis para la
Human and Environ-mental Samples. determinacin de residuos de
Environmental Protection Agency, EPA- plaguicidas. Supervisin y control de
600/8-80-038, Health Effects Research calidad de pesticidas. Ministerio de
Lab. Research Triangle Park, NC. Agricultura/ICA Ti-baitata.
120 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

5. Determinacin de plaguicidas almacenarse congeladas entre -10 y 20


organoclorados en organismos (m- C, por un periodo no mayor de 60 das.
todo EPA, 1980 ) Las muestras no deben ser almacenadas
en lugares que estn guar-dando
estndares para evitar la contaminacin.
El mtodo consiste en una extraccin
slido - lqui-do contnua de los
plaguicidas con acetonitrilo a 5.2 Materiales y equipos
temperatura ambiente y agitacin
constante. El extracto obtenido se Cromatgrafo de gases equipado con
concentra y se purifica con Florisil o con Detector de Captura Electrnica (ECD)
cido sulfrico concentrado, para luego Balanza analtica precisin +/-
ser concentrado y analizado por 0.00001 g Centrifuga
cromatogra-fa de gases usando detector Rotavaporador
ECD. Concentrador Kuderna
Danish Horno para
Alcance y aplicacin secado
Plancha de calentamiento
El mtodo es aplicable para la mayora Beakers de Pyrex de 100, 150, 200 y
de las mues-tras de biopsias y tejidos de 1000 ml Probetas graduadas de 50,
vida salvaje (peces, aves y animales 100 y 250 ml Erlenmeyers de 125 y
pequeos). Se pueden analizar tejidos y 250 ml
rganos como el hgado, tejido muscu- Tubos de centrfuga de 50 ml
lar, rin, tejido suprarrenal y gnadas. Columna de vidrio 25 cm de largo x 1 cm
de di-metro interno con llave de tefln
El rango ptimo de trabajo es 10 -9 10-12 Pipetas Pasteur
g, dado por la linealidad del detector. La Pipetas volumtricas de 1, 2, 5, y
mnima concen-tracin que puede ser 10 ml Matraz aforado de 25, 50 y
detectada es de 10-12 g y los siguientes 100 ml Microjeringas de 10 l
compuestos pueden determinarse por Desecadores
este mtodo: Clordano, -BHC, -BHC, Viales de 2 5 ml con tapa rosca de
Lindano, Heptacloro, Epoxido, p,p , - tefln.
DDE, o,p, - DDE, Diel-drin, Endrin, o,p
DDD, o,p-DDD, o,p-DDT.
en bolsas limpias de polietileno. El
material orgnico se debe transportar
5.1 Toma de muestra, almacenamiento y refrigerado al laboratorio.
preservacin
Si el anlisis no se realiza
Las muestras se toman con una red inmediatamente, las muestras deben
mediante arras-tre por un tiempo envolverse en papel aluminio y
determinado o con redes y an-zuelos a
bordo de una embarcacin. Los ejempla-
res capturados se clasifican y empacan
Eter etlico, R.A.
Acetona R.A.
5.3 Reactivos Acetonitrilo R.A.
Metanol calidad
Gas nitrgeno (N2) pesticida Florisil PR,
grado 4.5 n-Hexano 60 - 100 Mesh
calidad pesticida n-
Decano R.A. Acido sulfrico concentrado, libre de
Hidrocarbu-ros clorados (HC)

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 121
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

adicionar Na2SO4 anhidro. Agitar y


dejar en reposo
Sulfato de sodio anhidro Concentrar el extracto en rotavapor
Estndares de pesticidas (Hidrocarburos hasta 2 ml aproximadamente y
clorados)
depositarlo con pipeta Pasteur en
viales pequeos
Precaucin. Los compuestos estndares
son alta-mente txicos y deben ser
manejados con extre-mo cuidado para
evitar contacto con la piel o in-halacin.

5.4 Procedimiento

Extraccin

Si el material orgnico ha sido


congelado se debe descongelar y
esperar a que alcance la temperatura
ambiente
Pesar exactamente entre 2 5 g de
muestra
Tomar una submuestra para la
determinacin de humedad
Extraer la misma cantidad de sulfato
de sodio, para el seguimiento de
blanco de reactivos
Colocar en una licuadora con 20 ml de
acetonitrilo y homogenizar por 5 min
Poner en agitacin constante a
temperatura ambiente por 3 minutos
Centrifugar la muestra y recuperar el
extracto
Repetir la extraccin dos veces ms,
colectan-do los sobrenadantes en un
erlenmeyer
Transvasar el extracto a un embudo
de separa-cin de 250 ml
Agregar 250 ml de solucin acuosa de
Na2SO4 al 2%, agitar fuertemente y
dejar en reposo por 10 minutos
Extraer la mezcla de acetonitrilo
acuoso con una porcin de 50 y dos de
20 ml de hexano. Combinar los
extractos en un erlenmeyer,
Una vez est fra la columna de
Preparacin de la columna de Florisil
fraccionamien-to, prehumedecerla con
10 ml de hexano. Este hexano se
La cromatografa de columna se
desecha
prepara em-pleando una columna de
Transferir el extracto concentrado a la
vidrio de 25 cm de alto y de 1.0 cm de
parte superior de la columna de
dimetro interno
Florisil con la ayuda de una pipeta
Enjuagar las columnas para fraccionar
Pasteur. Simultneamente, co-menzar
con acetona y colocar en la estufa a
a recoger el eluyente en un
110oC
erlenmeyer
En el extremo inferior, fijar una pieza
Enjuagar el vial donde estaba el
de lana de vidrio, para retener el
extracto con hexano y agregar los
adsorbente
enjuagues a la columna; repetir este
Agregar 16 g de Florisil y adicionar
procedimiento dos veces
1.0 cm de sulfato de sodio sobre el
Eluir utilizando 12 ml de hexano
nivel de Florisil
seguido por 12 ml de metanol al 1% en
Lavar la columna haciendo pasar 50
hexano. Estos 24 ml representan la
ml de n-hexano, seguido de 50 ml de
fraccin F1 y contendrn: hepta-
metanol
Dejar secar a temperatura ambiente cloro, aldrin, p,p, - DDE, o,p-DDT, y
por una p,p-DDT; tambin pueden aparecer en
hora, y calentarlas en horno a 130 oC pequeas canti-dades: p,pDDD y a-
por una noche antes de utilizarlas BHC
Despus de 12 horas sacar las Colectar una segunda fraccin F2, por
columnas y de-jarlas reposar a elucin de otros 12 ml de metanol al
temperatura ambiente 1% en hexano. Esta fraccin
contendr: a-BHC, lindano, hepta-cloro
Purificacin en columna de Florisil epoxido, dieldrin, endrin y p,pDDD

122 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Concentrar cada fraccin en rotavapor Y = rea = rea del pico reportado


hasta 2 ml aproximadamente y por el cromatograma
depositar con pipeta Pasteur en viales X = Ci = Concentracin de la sustancia
pequeos i en el extracto (pg/ l)
Adicionar suficiente cobre o mercurio m = Pendiente de la curva de regresin
metlico para desulfurar el extracto b = Intercepto

Cuantificacin La concentracin de la sustancia i en la


muestra sera:
La cuantificacin de cada pesticida se
realiza a travs de un anlisis por
cromatografa de gases; los ex-tractos Ci x Ve x 0.001
secos de las muestras, se reconstituyen ng/g = -
con 25 - 100 l de n-Decano (nC10), y se W
inyecta 0.5 l en el cromatgrafo de
gases con detector ECD. Ci = Concentracin de la sustancia i en
el
extracto de muestra (pg/ l)
5.5 Calibracin Ve = Volumen final del extracto (50 l)
W = Peso de muestra seca sometida a
anlisis
El proceso de calibracin es idntico al
(g)
descrito en el numeral 3.5.

5.6 Clculos Recomendaciones

Identificados los picos del Son validas de igual forma las


cromatograma, con las reas reportadas recomendaciones dadas en el numeral
se procede a calcular la concen-tracin 3.6
del compuesto i en el extracto, de la si-
guiente forma: Se debe llevar un blanco de reactivos a
travs de todos los pasos del mtodo.
rea - b
Ci =
-
m
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 123
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

5.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco Cromatografa


5.0 g de muestra
de reactivos de columna

Extraccin en fro 20 Humedecer 10


ml de acetonitrilo ml hexano
X 3 veces 12 ml hexano 12
ml MeOH 1% en F1
hexano
Centrifugar
12 ml MeOH 1% F2
Recolectar los en hexano
extractos

Desulfurar
Lavar con: 250 ml
Na2SO4 2%
Cromatografa
GC ECD
Extraer con hexano

Fase: acetonitrilo
Clculos
Separar
agua

Concentrar
calidad de pesticidas. Ministerio de
Agricultura/ICA Tibaitata.

5.8 Bibliografa de consulta

Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
analticas de parmetros fsico-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de In-
vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.

US. EPA. 1980. Manual of Analytical


Methods for the Analysis of Pesticides in
Human and Environ-mental Samples.
Environmental Protection Agency, EPA-
600/8-80-038, Health Effects Research
Lab. Research Triangle Park, NC.

ICA. 1991. Manejo de muestras y


tcnicas de an-lisis para la
determinacin de residuos de
plaguicidas. Supervisin y control de
inters, con solventes orgnicos, uno de
concentracin del ex-tracto, uno de
limpieza por cromatografa de co-lumna;
6. Determinacin de plaguicidas y uno extra de desulfuracin para mues-
organoclorados (mtodos referencia tras de sedimentos.
unesco, 1996)

La metodologa propuesta por la Bsicamente la metodologa de


UNESCO para la determinacin de recoleccin de muestras, materiales,
residuos de pesticidas organoclorados se equipos y reactivos estable-cidos, son los
basa en los mismos principios descritos mismos que se enunciaron en los
en el numeral 3. Se lleva a cabo un pro- numerales 3, 4 y 5. Las diferencias de
ceso de extraccin de los analitos de esta meto-

124 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

F2: 200 ml de
diclorometano/pentano 1 : 1
dologa por la propuesta por la EPA
radican en que emplean el mtodo de
estndar interno que se utiliza para la
cuantificacin final, y en las ano-taciones
que se dan a continuacin.

6.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin

Ver numerales 3.1, 4.1 y 5.1.

6.2 Materiales y equipos

Ver numerales 3.2, 4.2 y 5.2.

6.3 Reactivos

Ver numerales 3.3, 4.3 y 5.3.

6.4 Procedimiento

6.4.1 Aguas

Extraccin: Se lleva a cabo una


extraccin lqui-do lquido de la
muestra, empleando como sol-vente
diclorometano puro con un volumen de
120 ml de solvente por litro de muestra.
Este proceso de extraccin se repite tres
veces.

Purificacin: La purificacin se realiza


con co-lumnas cromatogrficas de
silicagel/almina (10 g de almina y 20 g
de slica gel). Los eluyentes empleados
son:

F1: 50 ml de pentano
ml de diclorometano puro, durante un
periodo de 3 minutos, se cen-trifuga la
6.4.2 Sedimentos muestra y el extracto sobrenadante se
recolecta. Este procedimiento se repite
Extraccin: Se realiza una extraccin tres veces.
Soxhlet del sedimento con 200 ml de
diclorometano puro, du-rante un periodo Purificacin: La purificacin se lleva a
de 4 12 horas. cabo con columnas cromatogrficas de
silicagel/almina (10 g de almina y 20 g
Purificacin: La purificacin se efecta de slica gel).
con co-lumnas cromatogrficas de
silicagel/almina (10 g de almina y 20 g Los eluyentes empleados son:
de slica gel); en el tope de la columna se
adiciona cobre activado con HCl para la F1: 50 ml de pentano
desulfuracin de la muestra. F2: 200 ml de
diclorometano/pentano 1 : 1
Los eluyentes empleados son:

F1: 50 ml de pentano 6.5 Calibracin


F2: 200 ml de
diclorometano/pentano 1 : 1 Ver numeral 3.5.

6.4.3 Organismos
6.6 Clculos
Extraccin: Los analitos de inters se
extraen ma-cerando la muestra con 100

Ver numerales 3.6, 4.6


y 5.6.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 125
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

6.7 Diagramas de flujo

ORGANOCLORADOS EN AGUAS UNESCO

Montar un blanco Medir el volumen


de reactivos

Acidificar

Adicionar estndar interno

Extraer
120 ml, CH2Cl2 (3 veces)

Separar Fase acuosa

Concentrar

Cromatografa
de columna

Cromatografa
GC ECD

ORGANOCLORADOS EN SEDIMENTOS UNESCO

Montar un blanco Liofilizar


de reactivos

Homogenizar Determinar
humedad
Submuestra

Adicionar estndar interno

Extraer en Soxhlet,
5 g de muestra
200 ml, CH2Cl2 4-8 horas

Concentrar

Desulfurar

Cromatografa
de columna

Cromatografa
GC ECD
126 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

ORGANOCLORADOS EN ORGANISMOS UNESCO


Montar un blanco Liofilizar
de reactivos

Determinar
Homogenizar humedad
Submuestra

Adicionar estndar interno

Extraer en Soxhlet,
5 g de muestra

100 ml, CH2Cl2 (3 veces)

Centrifugar

Concentrar

Cromatografa
de columna

Cromatografa
GC ECD

6.8 Bibliografa de consulta En el ambiente acutico, los metales se


encuentran ya sea en forma de especies
UNESCO. 1996. Use of Standards and solubles (iones hidratados o complejos
Reference Materials in the Measurement metlicos con ligandos orgnicos) o en
of Chlorinated Hydrocarbon Residues, forma de material particulado in-soluble
Chemistry Workbook. Intergovernmental (material coloidal o complejos metlicos
Oceanographic Commission. Technical absorbidos por material en suspensin).
series. En estas condiciones, es obvio que su
estado qumico tenga una marcada
influencia sobre el procedimiento
analtico. Pueden determinarse
7. Determinacin de metales en aguas adecuadamente por mtodos
(EPA, 1980) instrumentales o colorimtricos. Exis-te
una mayor aceptacin por los mtodos
De acuerdo con su concentracin, los instru-mentales debido a que son rpidos
efectos de los metales en aguas y los efectos matrices a menudo son
naturales y residuales varan desde controlables sin muchos procesos de
beneficiosos hasta peligrosamente separacin. Para cualquier mtodo que
txicos. Algunos metales son esenciales, se aplique, se recomienda el
otros afectan ad-versamente a los pretratamiento espe-cfico de las
consumidores del agua, a los sistemas de muestras, de acuerdo con los resulta-dos
tratamiento y a las aguas receptoras. que se quiera alcanzar a travs de la
determi-nacin.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 127
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

la concentracin del elemento en la


muestra sobre un limitado rango de
Las extracciones con metil isobutil concentracin.
cetona (MIBK) y ditiocarbamato de
pirrolidn amonio (APDC) son En la espectroscopia de emisin atmica
particularmente usadas cuando hay inductivamente acoplada ICPS, la
interferencias de una matriz salina, por muestra es ato-
ejemplo, en el agua de mar. Este
procedimiento tambin concentra la
muestra hasta los lmites de deteccin
que son requeridos (APHA, 1998).

En la cuantificacin final de cada metal


se em-plean dos tcnicas analticas: la
espectrofotometra de absorcin y la de
emisin atmica.

Equipo de emisin atmica ICP, Spectro Flame Modu-la,


utilizado para la determinacin de metales pesados

La espectrofotometra de absorcin
atmica por lla-ma, cuyo principio es el
paso de un haz de luz a travs de una
llama a un monocromador y a un
detector que mide la cantidad de luz
absorbida por el elemento atomizado en
la llama. Debido a que cada metal tiene
su longitud de onda caracterstica a la
cual absorbe, se usan lmparas
compuestas del elemento que se esta
midiendo; esto hace el mto-do
relativamente libre de interferencias
espectrales. La cantidad de energa
absorbida en la llama es proporcional a
mizada dentro de una antorcha de argn,
que con ayuda de un campo magntico, 7.1 Toma de muestra, almacenamiento y
induce a la absor-cin y posterior preservacin
emisin de energa por los metales en
estado inico. La radiacin es analizada Antes de colectar una muestra, debe
con un sistema ptico y fotodiodos. La conocerse la fraccin de metal a analizar,
intensidad de la energa emitida es pues de ello depen-de el tratamiento que
proporcional a la cantidad de metal en la se le da a la muestra.
muestra, adems, esta tcnica per-mite
la determinacin simultnea de varios Durante el muestreo puede haber
elemen-tos ya que se establecen las contaminacin por el instrumental
diferentes longitudes de ondas de utilizado, presencia de resi-duos de
lectura para los distintos metales muestreos previos en los recipientes de
presentes. muestreo y/o prdida de metales por
absorcin y/o precipitacin por falta de
acidificacin de las muestras en el
Alcance y aplicacin momento oportuno. Los mejores
contenedores son recipientes hechos de
Este mtodo permite la extraccin de cuarzo; pero debido a su alto costo, se
cobre, cad-mio, hierro, zinc, plomo, recomienda el uso de recipientes de
manganeso, plata y cromo +6. Es polietileno con tapas del mismo material.
aplicable a todo tipo de aguas, en Debe evitarse el uso de vidriera comn y
especial las marinas, y permite detectar corriente para muestras que contienen
en el extracto con-centraciones del orden metales en el rango de g/l.
6
de 10 a 10-7 g/l del metal en cuestin.

128 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Inmediatamente colectadas, las muestras Botellas plsticas de policarbonato,


deben acidificarse con cido ntrico polipropileno
concentrado a pH 2 (usualmente 1.5 ml o polietileno
de cido ntrico concentrado por litro de
muestra son suficientes) para preser-
vacin a corto plazo. Para muestras con 7.3 Reactivos
alta capa-cidad amortiguadora, deber
aumentarse la canti-dad de cido Agua libre de metales: Preparar
(pueden ser necesarios hasta 5 ml para desionizando el agua o dependiendo de
muestras muy alcalinas). Utilizar cido la concentracin de me-tal en la muestra,
de alta pureza disponible en el mercado. por destilacin y/o bidestilacin. Debe
chequearse para verificar la ausencia del
Despus de acidificar las muestras, elemento de inters en esta agua.
deben almacenarse en un refrigerador a
aproximadamen-te 4 C para evitar cido ntrico 4N: Diluir 251 ml de cido
ntrico concentrado a 1 l con agua
cambios de volumen debido a la
desionizada.
evaporacin. Bajo estas condiciones,
muestras con concentraciones de varios
Solucin de ditiocarbamato de pirrolidn
miligramos son estables durante 6 meses
amonio
(excepto el mercurio, cuyo lmite es 38
al 1% (APDC; C5H12N2S2): Disolver 10.0
das en vidrio y 14 en plstico).
g de APDC en 600 ml de agua, completar
1 l y guardar refri-
Las muestras que contienen partculas o gerado.
material orgnico requieren un
tratamiento antes del an-lisis. El Hidrxido de amonio
anlisis de metales totales incluye todos cido clorhdrico concentrado
los metales tanto inorgnicos como cido ntrico concentrado
orgnicamente unidos y tanto disueltos Metilisobutilcetona (MIBK;
como particulados. En caso de hacer C6H12O) Argn ultrapuro
esta determinacin, debe digerirse la grado 5.0 (ICP) Acetileno y
muestra sin previa filtracin. aire (absorcin atmica)
Soluciones de referencia para cada metal
(1 g/l)
7.2 Materiales y equipos Embudos de separacin de 500 y
2000 ml Beakers de 50, 100 y 250
Espectrofotmetro de absorcin atmica ml
o espectrmetro de emisin atmica con Erlenmeyers de 125 ml
plasma aco-plado inductivamente ICPS Pipetas de 2, 5, 10 y 20
pH-metro ml Balones aforados de
Desionizador de 100 ml Balanza
agua analtica
Agitador magntico
Botellas colectoras plsticas (Niskin,
Nansen)
Colocar 5 ml de APDC 1% en un
embudo de separacin 1l
7.4 Procedimiento Agregar la muestra al embudo de
separacin (500 ml) y agitar durante
Medir 500 ml de muestra en un vaso 30 segundos
de preci-pitado Adicionar 20 ml de MIBK y agitar por
3 minutos
Ajustar el pH en 4.0 + 0.1 con NH 3
Dejar reposar hasta observar la
25%, NH4OH (10%) y HNO3 (10%)
separacin com-pleta de las fases

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 129
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

formular ins-trucciones para el manejo


de cada equipo, por lo tanto, se deber
Desechar la fase acuosa y transferir la remitir al manual de operaciones
fase or-gnica a un embudo de suministrado por el fabricante. En forma
separacin de 100 ml general, la calibracin de uno u otro
Adicionar al extracto orgnico 12.5 ml requiere de la elabo-racin de curvas de
de HNO3 4N y agitar nuevamente calibracin para cada metal que se desea
durante 2 minutos
analizar.
Despus de que las fases hayan
separado, des-echar la fase orgnica y
conservar en frascos plsticos la fase
cida hasta posterior anlisis
Realizar el mismo procedimiento a por
lo me-nos a un blanco de reactivos
Efectuar la cuantificacin de cada
metal por absorcin atmica o por
espectroscopa de emi-sin atmica
Inductivamente acoplada

7.4.1 Mtodo de la adicin de un patrn

Este mtodo se utiliza ampliamente en


espectros-copa de absorcin atmica y
consiste en:

Transferir dos o ms alcuotas de la


muestra a matraces aforados
Diluir una de las muestras al volumen
previsto y obtener la absorbancia de la
solucin
Agregar a la segunda alcuota una
cantidad conocida del analito y luego
de diluir al mismo volumen que la
anterior, medir su absorbancia.
Tambin se pueden obtener datos para
otras adiciones de concentraciones
conocidas de analito

7.5 Calibracin

Debido a las diferencias entre


manufacturas y mo-delos de
espectrofotmetro de absorcin, y de
emisin atmica (ICPS), es imposible
Vm = Volumen de muestra (ml)
V = Volumen del extracto (ml)
A partir de un patrn primario, por e

ejemplo, de 1000 ppm, preparar


soluciones de cada metal, de diferentes 7.6.1 Mtodo de la adicin de un patrn
concentraciones para realizar una cur-va
de calibracin; siguiendo el Obtenidos los resultados de absorbancia,
procedimiento an-tes descrito, las si existe una relacin lineal entre la
soluciones de calibracin deben absorbancia y la con-centracin, se
prepararse en HNO3 4N, para el caso de aplica la siguiente ecuacin:
aguas.
Ax
Cx = Cs-
7.6 Clculos (At - Ax)

Determinar la concentracin de cada Cx, = Concentracin del analito en la


metal, en miligramo por litro, muestra diluida
refirindose a la curva de ca-libracin
correspondiente. Cs = Contribucin del analito agregado
como patrn
Ce x Ve
Cm = - Ax , At = Absorbancias medidas
V
m
Si se realizan varias adiciones, se puede
C = Concentracin de la muestra (mg/l
m graficar At en funcin de Cs. La recta
o ppm)
resultante se puede
Ce = Concentracin del extracto ( g/ml)

130 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

extrapolar a At = 0. La sustitucin de El mtodo de la adicin del patrn tiene


este valor en la ecuacin anterior revela la venta-ja que tiende a compensar las
que en la interseccin Cx = -Cs. variaciones debidas a las interferencias
fsicas y qumicas en la solu-cin de la
muestra.

7.7 Diagrama de flujo

500 ml de muestra Montar un blanco


de reactivos

Ajustar pH a 4 +/-
0.1 unidades

En embudo de separacin
adicionar 5 ml APDC 1%

Agitar por 30 seg. Ajustar vol. de la fase


Adicionar 20 ml MlBK acuosa con HNO3 4N

Agitar por 3 minutos

Espectrometra ICP, o Curvas de


Fase acuosa Separar absorcin atmica calibracin

Adicionar 12.5 ml
de HNO3 4N
Clculos
Agitar por 2 minutos

Fase orgnica Separar

7.8 Bibliografa de consulta Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;


Snchez, J. Ma-nual de tcnicas
APHA. 1998. Standard Methods for the analticas de parmetros fsico-qumicos
Examination of Water and Wastewater. y contaminantes marinos. Centro de In-
Edition 20. APHA/ AWWA/WPCF. 3-1 pp. vestigaciones Oceanogrficas e
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993.
FAO. 1975. Manual of Methods in
Aquatic Environment Research. Parte 1. US. EPA. 1980. Methods for Chemical
FAO fish. Teach. Paper No. 137. Analysis of Water and Wastes.
Environmental Protection Agency, EPA-
600. Cincinati, Ohio.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 131
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Las muestras de sedimento, segn las


facilidades con que cuente el laboratorio
8. Determinacin de metales en sedi- se colectan con cono o corazonadores
mentos plsticos y se transfieren luego a bolsas
de polietileno convenientemente
Los metales asociados a la materia rotuladas. Si slo se dispone de dragas,
orgnica deben convertirse a una forma la muestra debe co-lectarse usando
en la que puedan leerse por cucharas plsticas y tomando de
espectroscopa. Para esta digestin
puede usar-se cido ntrico, cido
sulfrico o cido ntrico - perclrico,
pero deber reportarse la tcnica de
digestin aplicada.

En los sedimentos los metales pueden


constituir varias fracciones, por tal
motivo el anlisis de la muestra puede
realizarse por duplicado: una di-gestin
dbil en la fraccin total del sedimento
con el fin de obtener los metales
biodisponibles y una extraccin fuerte
para determinar el conteni-do total en el
grano.

El mtodo aqu descrito involucra una


extraccin con HCl 0.1N; agitacin por
24 horas y determi-nacin cuantitativa
por una tcnica espectromtrica
(Absorcin o Emisin Atmica
Inductivamente Acoplada - ICPS).

Alcance y aplicacin

Este mtodo es aplicable a todo tipo de


sedimen-to marino o continental y
permite detectar en el extracto
concentraciones del orden de 10 6 a 10-7
g/l del metal en cuestin.

8.1 Toma de muestra, almacenamiento y


preservacin
8.2 Materiales y equipos
la parte central el sedimento que no ha
tenido contacto con las paredes de
Espectrofotmetro de absorcin atmica
metal.
o espectrmetro de emisin atmica con
plasma aco-plado inductivamente ICPS
Las muestras se deben transportar al
pH-metro
laboratorio bajo refrigeracin.
Sistema de secado al vaco
(liofilizador) Desionizador de
La mejor forma de almacenar y
agua
preservar la muestra es secndola en
liofilizador y almacenarla en un medio Sistema para tamizado, tamiz de
exento de humedad. Si el anlisis 63 m Embudos de separacin de
inmediato no es posible, y tampoco se 500 y 2000 ml Beakers de 50, 100
cuenta con un equipo liofilizador es y 250 ml
conveniente homogenizar la muestra y Erlenmeyers de 125 ml
colocarla en cajas petri tratadas con Pipetas de 2, 5, 10 y 20
HNO3 10% y secar a 60C hasta peso ml Balones aforados de
constante. Estando la muestra libre de 100 ml Balanza
humedad, se almacena en bolsas analtica
plsticas. Previamente se tamizan a Agitador
travs de una malla de 63 m. Slo la magntico Cajas
de petri
fraccin menor a 63 m se utiliza para
Cucharas
estudios ambientales.
plsticas
Sistema de secado al vaco
Para el anlisis de Hg, As y Pb se seca la
(liofilizador) Papel filtro
muestra slo con liofilizador.
Wathman # 40

132 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Adicionar 1 ml de HClO4 concentrado


Dejar reaccionar y calentar a 100oC
8.3 Reactivos por 16 ho-ras. en plancha de
calentamiento
Agua libre de metales Filtrar en membranas Wathman # 40 o
cido clorhdrico centri-fugar
concentrado cido
ntrico concentrado
cido Perclrico concentrado HClO4:
usar gra-do suprapuro o analtico
Hidrxido de amonio
Argn ultrapuro grado 5.0
(ICP) Acetileno y aire
(Absorcin atmica)
Soluciones de referencia para cada metal
(1g/l)

8.4 Procedimiento

8.4.1 Metal biodisponible (Extraccin dbil)

Pesar entre 1 y 3 g de muestra


aproximadamente y transferirla a un
erlenmeyer limpio y seco
Agregar por cada gramo de muestra,
15 ml de solucin de HCl 0.1 N
Colocar en agitacin por 24 horas
Filtrar la muestra con embudos de
plstico o vidrio y papel filtro
Wathman # 40
Colectar el filtrado en balones
volumtricos
Completar el volumen con solucin de
HCl 0.1
N
Preparar un blanco reactivo de igual
manera que la muestra
Cuantificar por espectrometra

8.4.2 Metales totales (Extraccin fuerte)

Pesar 0.4 g de sedimento seco y


tamizado
Agregar 3.0 ml de HNO3 concentrado
(usar c-mara de extraccin)
Fraccin intercambiable

Recuperar el filtrado en balones Extraer en un tubo de ensayo un


aforados de 10 ml gramo (1.0 g)
de muestra con 10 ml de solucin 1 N
Completar a volumen con HCl 0.1N de MgCl2 a pH 7.0 a temperatura
Preparar un blanco reactivo de igual ambiente
manera que la muestra Mantener agitacin continua por 10
Cuantificar por Espectrometra de minutos
Absorcin o de Emisin Atmica (ICP) Centrifugar a alta velocidad,
preferiblemente 5000 rpm
8.4.3 Procedimiento para las extracciones Analizar el contenido de metales
secuenciales de A. Tessier asociados a esta fraccin en el lquido
sobrenadante
Este procedimiento busca diferenciar el
contenido de metales en cada una de las Metales asociados a carbonatos
fracciones de asocia-das al sedimento, a
travs, de pasos que se ejecutan Tratar durante 5 horas el residuo
secuencialmente (de all el nombre); con sedimentable obtenido durante la
ellos se busca transferir los metales extraccin anterior con 10 ml de
presentes en el sedi-mento (slido) a una solucin de acetato de sodio 1 M
fase lquida a fin de efectuar su Ajustar el pH a 5.0 con cido actico
cuantificacin. Para que los resultados Mantener agitacin permanente
sean satisfactorios todo el procedimiento durante el tiem-po que dure la
debe realizarse el mismo da. extraccin
Centrifugar y separar la fase lquida

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 133
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Determinar el contenido de metales a Agregar otros 2 ml de HClO4 y


la solu-cin, los cuales representan los evaporar hasta la aparicin de humos
asociados a carbonatos blancos
Disolver con HCl 3 N y llevar a 20 ml
Determinar el contenido de metales a
Fraccin de metales asociados a xidos de esta so-lucin la cual representa la
hierros y manganeso fraccin residual

Extraer el residuo anterior con 20 ml


de solucin 8.5 Calibracin
de clorhidrato de hidroxilamina
(NH2OH.HCl) 0.04 M en cido actico Ver numeral 7.5.
al 25% (v/v)
Calentar a 96 +/-3C durante dos Las soluciones de estndares deben ser
horas agitan-do ocasionalmente preparadas empleando HCl 0.1N en el
Centrifugar y separar la fase lquida caso de sedimentos.
Realizar la cuantificacin de los
metales en el lquido
8.6 Clculos
Metales asociados a materia orgnica
Determinar la concentracin de cada
Adicionar 3 ml de cido ntrico (HNO3) metal, en microgramos por gramo,
0.02 M y 5 ml de perxido de refirindose a la curva de calibracin
hidrgeno (H2O2) al 30% al residuo de correspondiente.
la operacin anterior
Ajustar el pH a 2.0 con cido ntrico Ce x Ve
Calentar progresivamente hasta 85 +/- Cm =
2C y mantener esta temperatura W
durante 2 horas con agitacin *f m

ocasional Cm = Concentracin de la muestra


Dejar enfriar y adicionar 5 ml de ( g/g) Ce = Concentracin del
acetato de amonio 3.2 M en cido extracto ( g/ml)
ntrico al 20 % (v/v)
Wm = Peso de la muestra seca utilizada
Completar a 20 ml con agua para el
desionizada, agi-tar 30 minutos y anlisis (g)
separa por centrifugacin Ve = Volumen del extracto
(ml)
Determinar el contenido de metales en
f = Factor de dilucin
el l-quido, el cual representa el
contenido ligado a la materia orgnica

Fraccin residual Recomendaciones


Verter el residuo slido anterior a un
vaso de tefln con 12 ml de una
mezcla 2:1 de cidos
fluorhdrico (HF) y perclrico (HClO 4)
concen-trados y calentar casi hasta Si los valores de las muestras se
sequedad
encuentran por encima del rango de los
Adicionar 2 ml de HClO 4 y 5 ml de HF, estndares (curva de ca-libracin), diluir
calentar a sequedad
la muestra con solucin de HCl. 0.1 N,
volver a analizar en el espectro y aplicar
el factor de dilucin apropiado en los
clculos.

134 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

8.7 Diagrama de flujo

EXTRACCIN FUERTE EXTRACCIN DBIL

Montar un blanco Montar un blanco


0.4 g de muestra 1-3 g de muestra
de reactivos de reactivos

Adicionar 3 ml HNO3 1 g de muestra adicxionar


+ 1.0 ml HClO4 conc. 15 ml HCl 0.1N

o
Digerir a 100 C por Agitar por 24 horas
16 horas

Dejar enfriar Filtrar (filtro Wathman


# 40)

Filtrar o centrifugar Colectar y completar


vol con HCl 0.1N
Ajustar vol. 10 ml con
HCl 0.1 N Cuantificar por
espectrometra
Espectrometra ICP, o Curvas de
absorcin atmica calibracin

Clculos

8.8 Bibliografa de consulta 9. Determinacin de metales en orga-


nismos
FAO. 1975. Manual of Methods in
Aquatic Environment Research. Parte 1. La muestra de tejidos orgnicos se
FAO fish. Teach. Paper No. 137. digiere cuidado-samente con una mezcla
de cidos que asegura la extraccin
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; completa de los metales y la destruccin
Snchez, J. Ma-nual de tcnicas total del material orgnico. El residuo
analticas de parmetros fsico-qumicos seco, se redisuelve en una solucin de
y contaminantes marinos. Centro de In- cido ntrico, se filtra o centrifuga si es
vestigaciones Oceanogrficas e necesario y se lleva para su lectura al
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena, 1993. espectrmetro. El mtodo aqu descrito
involucra una digestin cida completa
Tessier, A., Cambell, P., Bisson, M. 1979. de los tejidos, una posterior filtracin y
Sequential extraction procedure for the ajuste del volu-men extrado; finalmente,
speciation of particu-late trace metal. se realiza la cuantifi-cacin por una
Analytical Chemistry, 51: 844-851. tcnica espectromtrica de Absor-cin o
Emisin Atmica Inductivamente Acopla-
Tessier, A., Cambell, P., Bisson, M. 1980. da (ICPS).
Trace metal speciation of USGS
reference sample MAG-1. Geostandards
Newsletter 4, No. 2, 145-148.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 135
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Alcance y aplicacin tomando el peso fresco de cada


individuo. Con un cuchillo plstico se
Este mtodo es aplicable a una gran corta el msculo, se saca una
variedad de tejidos biolgicos, y permite submuestra y el resto se coloca en cajas
detectar en el extrac-to concentraciones petri y se seca en estufa 60oC, se
del orden de 10 6 a 10-7 g/l del metal en pulveriza y se almace-na en recipientes
cuestin. de plstico o vidrio hasta su anlisis.
Para el anlisis de Hg, As y Pb se seca la
muestra con liofilizador a fin de evitar
prdidas por evaporacin.

9.1 Toma de muestra, almacenamiento y Los moluscos se colocan en acuarios con


preservacin agua del lugar (previamente filtrada en
filtros Wathman
Las muestras se colectan en bolsas # 40) y suficiente aireacin durante 24
plsticas. Para obtener una muestra horas. Se abren las conchas con un
representativa es necesario establecer cuchillo inoxidable, se retira todo el
de antemano las especies, el genero de msculo y se coloca en cajas petri
los individuos, talla, edad o peso, y el
tipo de teji-do que se analizar (msculo,
hgado, tejido graso, etc.); para el caso
de peces, 10 individuos son suficientes.

Cuando se analizan moluscos: se


colectan ostras entre 5 y 6 cm y almejas
entre 5 y 4.5 cm, junto con una muestra
de agua del lugar.Con un bistur de
cuchilla nueva, se desprende la piel y se
retira el msculo con un cuchillo plstico
previamente tratado con HNO3 10% (en
esta operacin se pue-den emplear
trozos de vidrio roto como cuchi-llos).
Guardar en cajas de petri.

La porcin que ser empleada para el


anlisis de los dems metales se seca en
estufa a 60oC. Una vez seca la muestra,
se macera en mortero de por-celana y se
almacena en frascos de vidrio, en un
lugar fresco y oscuro hasta el anlisis.
Para el an-lisis de Hg se debe tomar
una submuestra aparte la cual es
conservada bajo refrigeracin.
Sistema de secado al vaco
(liofilizador) Papel filtro
Wathman # 40
9.2 Materiales y equipos Cuchillos plsticos
blancos Embudos
Espectrofotmetro de absorcin atmica plsticos
o espectrmetro de emisin atmica con
plasma aco-plado inductivamente ICPS.
Desionizador de agua 9.3 Reactivos
Embudos de separacin de 500 y
2000 ml Beakers de 50, 100 y 250 Agua libre de metales
ml cido clorhdrico
Erlenmeyers de 125 ml concentrado cido
Pipetas de 2, 5, 10 y 20 ntrico concentrado
ml Balones aforados de cido Perclrico concentrado HClO4:
100 ml Balanza usar gra-do suprapuro o analtico
analtica Argn ultrapuro grado 5.0
Agitador (ICP) Acetileno y aire
magntico (Absorcin atmica)
Cajas de petri Soluciones de referencia para cada metal
Cucharas (1g/l)
plsticas

136 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

9.4 Procedimiento 9.6 Clculos

Pesar 0.5 g de muestra seca Determinar la concentracin de cada


directamente en el tubo de digestin metal en microgramos por gramo,
Agregar 3 ml de HNO3 concentrado. y refirindose a la curva de calibracin
1.5 ml de HCl concentrado correspondiente.
Colocar en el digestor a una
temperatura de 180-190 C (mximo Ce x Ve
200 C) durante 3 horas Cm =
Dejar enfriar la muestra y filtrar o * f Wm
centrifugar
Colectar el filtrado en balones Cm = Concentracin de la muestra
volumtricos de 25 ml y completar ( g/g) Ce = Concentracin del
volumen con HCl 0.1N extracto en g/ml
Realizar la lectura o cuantificacin del Wm = Peso de la muestra seca utilizada
extracto por espectroscopa para el
(Absorcin o Emisin at-mica, ICPS). anlisis en g
Ve = Volumen del extracto
en ml
f = Factor de dilucin
9.5 Calibracin
Recomendaciones
Ver numeral 7.5. Las soluciones de
estndares de-ben ser preparadas Son aplicables las mismas
empleando HCl 0.1N en el caso de recomendaciones da-das en el numeral
organismos. 8.6. Si los valores de las mues-tras se
encuentran por encima del rango de los
estndares (curva de calibracin), diluir
la mues-tra con solucin de HCl. 0.1 N y
volver a analizar en el espectro. Aplicar
el factor de dilucin apro-piado en los
clculos.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 137
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

9.7 Diagrama de flujo

Montar un blanco
0.5 g de muestra
de reactivos

Adicionar 3 ml HNO3
+ 1.5 ml HCl conc.

Digerir a 180 - 190


C. por 3 horas

Dejar enfriar

Filtrar o centrifugar

Ajustar vol. 25 ml
con HCl 0.1 N

Espectrometra ICP, o Curvas de


absorcin atmica calibracin

Clculos

9.8 Bibliografa de consulta


FAO. 1975. Manual of Methods in
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.; Aquatic Environ-ment Research. Parte 1.
Snchez, J. 1993. Manual de tcnicas FAO fish. Teach. Paper No. 137.
analticas de parmetros fsi-co-qumicos
y contaminantes marinos. Centro de Berghof, Maassen. 1995. Operating
Investigaciones Oceanogrficas e Instructions Pressure Digestion Systems
Hidrogrficas, CIOH. Cartagena. DAB II+III. Germany.
138 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
ANEXOS

SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES - SI

Unidades SI bsicas

Cantidad fsica Nombre de la unidad SI Smbolo


Longitud Metro m
Masa Kilogramo kg
Tiempo Segundo s
Corriente elctrica Amperio A
Temperatura termodinmica Kelvin K
Intensidad lumnica Candela cd
Cantidad de sustancia Mol mol

Unidades SI derivadas expresadas en trminos de unidades bsicas

Cantidad Unidad SI
Nombre Smbolo
rea metro cuadrado m2
Volumen metro cbico m3
Velocidad metro por segundo m/s
Aceleracin metro por segundo cuadrado m/s2
Nmero de onda 1 por metro m1
Densidad kilogramo por metro cbico kg/m3
Densidad de corriente amperio por metro cuadrado A/m2
Fuerza de campo magntico amperio por metro A/m
Concentracin de cantidad de sustancia mol por metro cbico mol/m3
Volumen especfico metro cbico por kilogramo m3/kg
Luminancia candela por metro cuadrado cd/m2

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 139
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Algunas unidades SI derivadas con nombres especiales

Cantidad Nombre Smbolo Expresin en trminos Expresin en


de otras unidades trminos de unidades
SI bsicas
Frecuencia hertz Hz
s1
Fuerza newton N m.kg.s2
Presin, tensin pascal Pa N/m2 m1.kg.s2
Energa, trabajo, cantidad de calor julio J N.m m2.kg.s2
Potencia, flujo radiante watio W J/s m2.kg.s3
Cantidad de electricidad,
carga elctrica culombio C s.A
Potencial elctrico, diferencia
de potencial, fuerza electromotriz voltio V W/A m2.kg.s3.A1
Capacitancia faradio F C/V m2.kg1.s4.A2
Resistencia elctrica ohmio W V/A m2.kg.s3.A2
Conductancia siemens S A/V m2.kg1.s3.A2
Temperatura Celsius (1) grado celsius C K
Flujo luminoso lumen lm cd.sr
Iluminancia lux lx lm/m2 m2.cd.sr
(1)
Se utiliza cuando no es necesario considerar temperaturas termodinmicas (a partir del cero absoluto).

Ejemplos de unidades SI derivadas expresadas por medio de una asociacin de


nombres especiales y unidades bsicas

Cantidad Nombre Smbolo Expresin en trminos


de unidades SI bsicas
Viscosidad dinmica pascal segundo Pa.s m1.kg.s1
Momento de fuerza metro newton N.m m2.kg.s2
Tensin superficial newton por metro N/m kg.s2
Densidad de flujo de calor, irradiancia vatio por metro cuadrado W/m2 kg.s3
Capacidad calorfica, entropa julio por kelvin J/K m2.kg.s2.K1
Capacidad de calor especfico julio por kilogramo kelvin J/(kg.K) m2.s2.K1
Conductividad trmica vatio por metro kelvin W/(m.K) m.kg.s3.K1
Fuerza de campo elctrico voltio por metro V/m m.kg.s3.A1
Densidad de carga elctrica culombio por metro cbico C/m3 m3.s.A
Permitividad faradio por metro F/m m3.kg1.s4.A2
Permeabilidad henry por metro H/m m.kg.s2.A2
Energa molar julio por mol J/mol m2.kg.s2.mol1

140 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Prefijos de mltiplos y submltiplos decimales de las unidades SI

Submltiplo Prefijo Smbolo Mltiplo Prefijo Smbolo


deci d 1 deca D
101 10
102 centi c 102 hecto h
103 mili m 10 3 kilo k
106 micro m 10 6 mega M
109 nano n 109 giga G
1012 pico p 1012 tera T
femto f 15 peta P
1015 10
ato a 18 exa E
10
1018

Unidades usadas con el SI

Cantidad fsica Unidad Smbolo Valor en unidades SI


(1) Minuto min 1 min = 60 s
Tiempo
Hora h 1 h = 60 min = 3 600 s
Da d 1 d = 86 400 s
ngulo plano, arco (2) grado 1 = (p/180) rad
minuto 1 = (1/60) = (p/10 800) rad
segundo 1 = (1/60) = (p/648 000)
rad
(3)
Masa tonelada t 1 t = 103 kg
unidad de masa atmica unificada (4) u 1 u = 1,660 57 1027 kg
aproximadamente
Volumen litro l 1 l = 1 dm3 = 103 m3
Concentracin mol por litro mol/l 1 mol/l = 1 mol/dm3

(1)
A estas tres unidades de tiempo, se pueden agregar las unidades semana, mes, ao y siglo, pero stas no tienen definiciones precisas. Su uso debe

evitarse en lo posible, pero puede ser conveniente en ciertas circunstancias, p. ej., para medir duraciones geolgicas. La International Standard

Organization (ISO) ha atribuido al ao el smbolo a (no y ni yr); para una mayor precisin, ste smbolo debe estar seguido por un subndice que

especifique el tipo de ao concerniente, por ejemplo, a trop para un ao tropical (1 atrop = 365,242 20d aproximadamente). En general, si en un texto se

usan unidades tales como semana, mes, siglo, se recomienda no usar smbolos sino ms bien el nombre completo de tales unidades, o una abreviacin

establecida en el texto.
(2)
Para fracciones de ngulos o arcos menores que el segundo, se usan las fracciones decimales de segundo.
(3)
En algunos pases de habla inglesa, esta unidad se llama tonelada mtrica.
(4)
La unidad de masa atmica unificada es igual a la fraccin 1/12 de la masa de un tomo del nclido 12C. Su valor, en kilogramos, se obtiene experimentalmente.
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 141
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Algunas unidades que pueden ser usadas temporalmente con el SI

Cantidad fsica Unidad Smbolo Valor en unidades SI


Presin bar bar 1 bar = 105 Pa exactamente
Aceleracin de cada libre gal (galileo) (1) Gal 1 Gal = 102 m.s2
Actividad de radionclidos (2) Ci 1 Ci = 3,7 1010 Bq
curie
= 3,7 1010 s1

(1)
El gal es una unidad especial usada en geodesia y geofsica para expresar la aceleracin debida a la gravedad.
(2)
El curie es una unidad especial usada en fsica nuclear para expresar la actividad de radionclidos.

Algunas unidades cuyo uso no es recomendado

Cantidad fsica Unidad Smbolo Valor en unidades SI


(1)
Longitud micra m (1) 1 m = 1 mm = 106 m
rea hectrea ha 1 ha = 104 m2
Fuerza kilogramo-fuerza kgf 1 kgf = 9,806 65 N
Presin atmsfera, atm 1 atm = 101 325
atmsfera estndar (2) Pa exactamente
torr (3) - 1 torr = (101 325/760)
milmetro de mercurio Pa = 133,322 368 Pa aprox.
convencional (4) mmHg 1 mmHg = 13,595 1 9,806 65
Pa = 133,322 387 Pa
Energa (5) cal
calora
Densidad de
flujo magntico gama g 1 g = 109 T

(1)
Esta unidad y su smbolo, m, fueron sacadas del SI en la 13 CGPM, en 1967. Para la misma unidad de longitud, el nombre y
smbolo son ahora micrmetro y mm respectivamente.
(2)
Se recomienda que atmsfera estndar o atmsfera no se usen ms como unidades de presin. ste trmino puede
conservarse para representar el valor estndar de 101325 Pa. Es muy conveniente por ejemplo decir que un determinado dato ha
sido reducido a la presin de una atmsfera estndar (101325 Pa).
(3)
Se puede tomar : 1 torr = 1 mmHg = 133,322 4 Pa
(4)
Esta unidad (smbolo mmHg, no mm Hg) es conveniente cuando se usa un barmetro de mercurio para leer una presin. Sin
embargo, se recomienda que los resultados finales se den en pascales.
(5)
Se han empleado varias caloras :

- una calora designada a 15 C : 1 cal15 = 4,185 5 J (valor adoptado por la CGPM en 1950);
- una calora designada IT (Tabla Internacional) : 1 calIT = 4,186 8 J ;
- una calora designada termoqumica : 1 calth = 4,184 J.

142 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

ABREVIATURAS

% Porcentaje
C Grados Celsius
0
/00 Partes por mil
UV Ultravioleta 180 a 550 nm
VIS Visible 500 a 750 nm
Abs Absorbancia
v/v Volumen a volumen
N Normalidad

FACTORES DE CONVERSIN

CONSTANTES

R = 8.3143 J/mol K = 0.082054 at . l/mol.K. = 1.98717 cal/K mol


L = 6.02205 X1023 molculas/mol
H = 6.62618 X10-34 J.s
G= 6.6720 X10-11 Nm2/Kg
c = 2.997925 m/s
LONGITUD

1m = 100 cm = 39.37 pulg

1 pulg. = 2.540 cm
1A = 10-8 cm
1 milla = 5280 pies = 1.609 km
1 pie = 0.3048 m
1 yarda = 0.9144 m
MASA

1 kg = 2.205 lb

1 lb = 453.6 g
1 uma = 1.6604 X 10-27 kg
1 onza = 28.35 g.
VOLUMEN

1l = 61.0237 pul3

1 m3 = 103 l 1 pie3 = 28.32 l


INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 143
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

FUERZA
1N = 105 dinas = 0.2248 lbf = 0.102 kgf

PRESIN

1 N/m2 = 9.265x10-6 atm. = 1.450 X10-4 lbf/pul2 = 1 pascal = 10 dinas/cm2

1 atm = 14.7 lbf/pul = 14.7 psia

2
1 bar = 6 2
10 dina/cm

1 mmHg = 133.322 N/m2


1 torr = 1 atm/ 760

TEMPERATURA

K = 273.15 + C F =
9/5C + 32

ENERGA

1 J = 107 erg = 0.239 cal


1eV = -19
1.602182 X 10 J
1BTU = 3.968320 Kcal
1 Hp = 2544.43 BTU-hora
POTENCIA

1 W = 1.341 X10-3 hp

1 BTU-hora = 3412.14 KW

CORRIENTE ELCTRICA

Conductancia = G (Siemens) = 1/ R (Resistencia ohmnica)


Conductividad = K (S. cm-1) = 1 / p (Resistividad)
DENSIDADES (Relativas al agua)

Fe = 7.86 H2O(4c) = 1.000

Hg = 13.59 EtOH = 0.791


He = 1.7847 X 10-4 O = 1.42904 x 10-3
2
N 2 = 1.25055 X 10-3 Gasolina = 0.67
Aire = 1.2922 X10-3 H = 8.988 X 10-5
2
144 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

Tabla de solubilidad del oxgeno disuelto en el agua, en equilibrio con aire seco a 1 atm
(mg O2/l) *
Temperatura Salinidad Salinidad Salinidad Salinidad Salinidad
C 0 psu 9 psu 18.1 psu 27.1 psu 36.1 psu
0 14.62 13.73 12.89 12.1 11.36
1 14.22 13.36 12.55 11.78 11.07
2 13.83 13.00 12.22 11.48 10.79
3 13.46 12.66 11.91 11.2 10.53
4 13.11 12.34 11.61 10.92 10.27
5 12.77 12.02 11.32 10.66 10.03
6 12.45 11.73 11.05 10.4 9.8
7 12.14 11.44 10.78 10.16 9.58
8 11.84 11.17 10.53 9.93 9.36
9 11.56 10.91 10.29 9.71 9.16
10 11.29 10.66 10.06 9.49 8.96
11 11.03 10.42 9.84 9.29 8.77
12 10.78 10.18 9.62 9.09 8.59
13 10.54 9.96 9.42 8.9 8.41
14 10.31 9.75 9.22 8.72 8.24
15 10.08 9.54 9.03 8.54 8.08
16 9.87 9.34 8.84 8.37 7.92
17 9.67 9.15 8.67 8.21 7.77
18 9.47 8.97 8.5 8.05 7.62
19 9.28 8.79 8.33 7.9 7.48
20 9.09 8.62 8.17 7.75 7.35
21 8.92 8.46 8.02 7.61 7.21
22 8.74 8.30 7.87 7.47 7.09
23 8.58 8.14 7.73 7.34 6.96
24 8.42 7.99 7.59 7.21 6.84
25 8.26 7.85 7.46 7.08 6.73
26 8.11 7.71 7.33 6.96 6.62
27 7.97 7.58 7.2 6.85 6.51
28 7.83 7.44 7.08 6.73 6.4
29 7.69 7.32 6.96 6.62 6.3
30 7.56 7.19 6.85 6.51 6.2
31 7.43 7.07 6.73 6.41 6.1
32 7.31 6.96 6.62 6.31 6.01
33 7.18 6.84 6.52 6.21 5.91
34 7.07 6.73 6.42 6.11 5.82
35 6.95 6.62 6.31 6.02 5.73
36 6.84 6.52 6.22 5.93 5.65
37 6.73 6.42 6.12 5.84 5.56
38 6.62 6.32 6.03 5.75 5.48
39 6.52 6.22 5.93 5.66 5.4
40 6.41 6.12 5.84 5.58 5.32
41 6.31 6.03 5.75 5.49 5.24
42 6.21 5.93 5.67 5.41 5.17
43 6.12 5.84 5.58 5.33 5.09
44 6.02 5.75 5.5 5.25 5.02
45 5.93 5.67 5.41 5.17 4.94

*Tomado de Rodier, J.1981. Anlisis de las Aguas. Aguas naturales, aguas residuales y agua de mar.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 145
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
FAO. 1975. Manual of Methods in
Aquatic Environment Research. Parte
1. FAO fish. Teach. paper No. 137.
FAO. 1984. Mtodos Fsicos y
Qumicos de Anlisis de Suelos y
Aguas. Boletn de suelos de la FAO.
APHA. 1998. Standard Methods for
Fell, J.W., I.M. Master y R.G. Wiegert.
the Exami-nation of Water and
1984. Litter descomposition and
Wastewater. Edition 20.
nutrient enrichment. En the
APHA/AWWA/WPCF. 1134 pp.
ASTM,1994. American Society for
Testing and Materials. Method D3590.
Philadelphia.
Bendschneider, K. y T.R. Parsons.
1972. A Practical Handbook of Sea
Water Analysis. Fish. Res. Board of
Canada. Edicin Otawa.
Berghof, Maassen. 1995. Operating
Instructions Pressure Digestion
Systems DAB II+III. Ger-many.
Brown, M.S. 1984. Mangrove litter
production and dynamics. En the
mangrove ecosystems: research
methods; editado por S.C. snedaker y
J. E. Snedaker. UNESCO, Paris. 231
251 pp.
CARIPOL. 1980. Manual para la
vigilancia de la contaminacin por
petrleo. IOCARIBE/ CARIPOL, pp 12-
22.
Informe del curso regional sobre
determina-cin analtica de
plaguicidas organoclorados y PCBS
en biota y sedimentos marinos, Lima,
Per, 23 de enero al 05 de de febrero
de 1995.
Oceanogrficas e Hidrogrficas, CIOH.
Cartagena.
Grasshoff, K, et al. 1976. Methods of
Seawater Analysis. Verlag Chemie,
Weinheim. New York. 149 pp.
ICA. 1991. Manejo de muestras y
mangrove ecosystem: Research and
tcnicas de anlisis para la
methods. Editado por S.C. Snedaker y
determinacin de residuos de
J.G. Snedaker. UNESCO. Paris.
plaguicidas. Supervisin y control de
Franco, A. 2001. Estrategias de
calidad de pesticidas. Ministerio de
ingestin de Eucalanus spp en dos
Agricultura/ICA Tibaitata.
ambientes oceanogr-ficos del Caribe
ICONTEC, 1995. Norma Tcnica
central colombiano. Informe final
Colombiana NTC-ISO 5667-2. Gestin
Proyecto Facultad de Biologa Marina
ambiental. calidad del agua. Muestreo.
Centro de Investigaciones
Tcnicas generales de muestreo.
Cientficas. Univer-sidad Jorge Tadeo
Bogot.
Lozano. Santa Marta. 79 pp.
ICONTEC, 1995. Norma Tcnica
Garay, J.; Panizzo, L.; Ramrez, G.;
Colombiana NTC-ISO 5667-3. Gestin
Snchez, J. 1993. Manual de tcnicas
ambiental. calidad del agua. Muestreo.
analticas de parme-tros fsico-
Directrices para la conserva-cin y
qumicos y contaminantes marinos.
manejo de las muestras. Bogot.
Centro de Investigaciones

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR 147
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos y contaminantes marinos

KIELY, G. 1999. Ingenieria Ambiental. Salamanca, M. 1996. Laboratorio de


Funda-mentos, entornos, tecnologas y Qumica Marina. Curso de Qumica
sistemas de gestin. Mc. Graw Hill. Marina y Gua de Trabajos Prcticos.
Espaa. Departamento de Oceano-grafa.
Morris, A.W. y J.P. Riley. The Facultad de Ciencias Naturales y
determination of nitrate in sea water. Ocea-nogrficas. Universidad de
Anal. Chim. Act 29: 272-279. Concepcin. Con-cepcin. 68 pp.
Strickland, J.D.H. y T.R. Parsons. 1972.
Mullin, J.B. y J.P. Riley. 1955. The A practical handbook of seawater
colorimetric determination of silicate analysis. Fish. Res. Board of Canada.
with special refference to sea and Segunda Edicin. Otawa.
natural Water. Anal. Chim. Acta 12: UNESCO. 1996. Use of Standards and
162-176. Reference Materials in the
Murphy, J. y J.P. Riley. 1952. A Measurement of Chlorinated
modified single solution method for Hydrocarbon Residues, Chemistry
the examination on phosphate in Workbook. Intergovernmental
natural Water. Anal. Chim. Acta. Oceanographic Commission. Technical
Parsons, T.R., Maita, Y. and C.M. Lalli. series.
1984. A Manual of Chemical and US. EPA. 1980. Manual of Analytical
Biological Methods for Seawater Methods for the Analysis of Pesticides
Analysis. Pergamon Press. 173 pp. in Human and Environmental
Riley, J.P. 1953. The Samples. Environmental Protec-tion
Spectrophotometric determination of Agency, EPA-600/8-80-038, Health
amonia in natural water with Effects Research Lab. Research
particular reference to sea-Water Triangle Park, NC.
Anal. Chim. Acta Vol 9: 575-589. US. EPA. 1980. Methods for Chemical
Rodier, J.1981. Anlisis de las aguas. Analysis of Water and Wastes.
Aguas na-turales, aguas residuales y Environmental Protection Agency,
agua de mar. Edi-ciones Omega. EPA-600. Cincinati, Ohio.
Barcelona-Espaa. WTW - ORION. 1997. Manual de
instrucciones. WTW pHmeter 330.
148 INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS Jos Benito Vives de Andris INVEMAR