Ingeniera en Sistemas Biolgicos-Prcticas

de Fisicoqumica

Universidad de Guadalajara-Centro Universitario del

Sur

PRCTICA 1

USO Y MANEJO DEL POTENCIMETRO: EFECTO DEL PH SOBRE LA

SOLUBILIDAD DE LAS PROTENAS.

APLICACIN: 08 MARZO-2017

OBJETIVO GENERAL

Conocer el uso y manejo del potencimetro, a travs de la medicin del

efecto del pH sobre la solubilidad de las protenas.

OBJETIVO(S) ESPECFICO(S)

Conocer el uso del potencimetro.

Medir el efecto del pH sobre la solubilidad de diferentes protenas.

PRINCIPIOS TERICOS DE LA PRCTICA

El potencimetro:

La medicin de un pH en medio acuoso usando un potencimetro, es

una operacin muy frecuente en Qumica Analtica. Este mtodo
determina el pH midiendo el potencial generado (en milivolts) por un
electrodo indicador de membrana de vidrio, el cual se compara contra
un electrodo de referencia de potencial constante e independiente del
pH. Los electrodos de referencia ms utilizados son el de plata con
cloruro de plata o bien el de calomel, ambos saturados con cloruro de
potasio. Este par de electrodos puede presentarse como dos electrodos
fsicamente separados, o bien como un sistema combinado.

Dr. en C. Luis Alberto Reyes Nava

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Sur

Las protenas:

Las protenas estn formadas por aminocidos unidos por enlaces

peptdicos y aunque presentan propiedades fisicoqumicas y biolgicas
caractersticas, estas son reflejo de las de los aminocidos que las
constituyen. La mayora de las protenas tienen su punto isoelctrico a
un pH de 4.5, es decir, su mxima insolubilidad se localiza en ese punto.
Sin embargo, existen algunas protenas de origen vegetal que pueden
presentar distintos puntos isoelctricos, en otras palabras, presentan
diferentes comportamientos frente a distintos pHs.

Existen diferentes reactivos para determinar la concentracin de

protenas en una muestra, ya sea de forma cuantitativa o cualitativa.
Para esta ltima, existen reactivos como el de Biuret (CuSO4) que es
utilizado como prueba general para detectar presencia o ausencia de
protena en una muestra. Su mecanismo consiste en hacer reaccionar
una solucin protenica con sulfato de cobre en una solucin alcalina, lo
que produce un color caracterstico prpura o violeta. La reaccin es
positiva para cadenas mayores de tres aminocidos.

EQUIPO Y MATERIAL NECESARIO

DESCRIPCION (por equipo) MATERIAL QUE MATERIAL QUE

DEBE TRAER EL PROPORCIONA EL
ALUMNO LABORATORIO
5 Vasos de precipitados 50 o 100 X
mL X
1 vaso de precipitados de 250 mL X
1 Probetas de 50 o 100 mL X
1 Potencimetro X
cido clorhdrico 1N o concentrado X
Hidrxido de sodio 1N o el reactivo X
en polvo X
Centrfuga X
6 tubos para centrfuga X

Dr. en C. Luis Alberto Reyes Nava

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Placa con agitacin o agitador de X
vidrio X
Charolas para pesar X
4 tubos de ensayo X
Gradilla para tubos X
1 pipeta de 5 mL X
1 pipeta de 1 mL
Perilla para pipeta X
Reactivo de Biuret X

50 g de leche en polvo X
50 g de protena de suero
lcteo
50 g de grenetina (polvo sin
sabor para preparar gelatina)

PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA

Parte A. Efecto del pH sobre la solubilidad de las protenas.

Se emplear el mtodo de Kabirullah y Wills (1982), con una

modificacin en la metodologa; se preparar una dispersin al 2% de
protena en agua destilada y se ajustar el pH seleccionado, se
manejaran muestras a pH 3, 5, 7, 9 y 11; mediante la adicin de HCl 0.1
N o NaOH 0.1 N en agitacin constante. Las muestras sern
centrifugadas a 6000 rpm por 10 min. Se realizarn las anotaciones
sobre el tamao del precipitado obtenido por centrifugacin en cada uno
de los pHs y al sobrenadante se le determinar protena por el mtodo
de Biuret.

Parte B. Determinacin de protena por el mtodo de Biuret

Prepare una serie de 4 tubos con 2 mL de las soluciones problema.

Adicione 1 mL de NaOH y mezcle bien.

Agregue a cada tubo, 1 gota de sulfato de cobre (reactivo de Biuret) y

observe si se forma un anillo violeta. Si no es as, aada ms gotas
(hasta diez). La aparicin de un anillo color violeta indica que la reaccin

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es positiva. Se observar comparativamente como aumenta o disminuye el
tamao del anillo color violeta en los distintos pHs probados, con respecto a la
muestra original (sin cambio de pH).

REPORTE DE LA PRCTICA
El reporte de la prctica deber entregarse a los 8 das de haberse realizado
con el siguiente formato:

Portada:
Con el logotipo del CUSur centrado
Ttulo y nmero de la prctica
Nombre completo de integrantes del equipo
Nombre completo del profesor de la materia
Fecha de entrega
Contenido:
Introduccin acerca del tema de la prctica (utilizar la
informacin que contiene la prctica y ampliarla con media a
una cuartilla ms) justificado
Objetivo de la prctica
Material utilizado
Desarrollo de la prctica con imgenes y explicacin en cada
una de ellas de lo que acontece
Discusin de los resultados
Conclusin en base a lo que se obtuvo
Referencias de libros, artculos o pginas web

Dr. en C. Luis Alberto Reyes Nava