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Ingeniera en Biotecnologa
Presentacin
La presente Gua para Prcticas de Laboratorio ha sido desarrollada para que los
estudiantes de la asignatura de Procedimientos de Biologa Molecular dispongan
de la informacin necesaria para la realizacin de las prcticas correspondientes
de acuerdo a los temas, objetivos y resultados de aprendizaje definidos. En este
documento se incluye el proceso en el laboratorio de experimentacin e
investigacin, con los respectivos recursos y resultados esperados, para que el
estudiante pueda desarrollar su prctica-taller y la elaboracin de sus respectivos
informes o cualquier otra evidencia de aprendizaje, que sern evaluadas con las
rbricas que constan en los anexos.
1.- OBJETIVO
Materiales:
Reactivos
Equipos
- Juego de Micropipetas
- Termobloque
- Incubadora
- Microcentrfuga
- Congelador -20C
- Vortex
Fuente de DNA:
4.- METODOLOGA
Antes de empezar:
- Diluir las soluciones de lavado Wash 1 y Wash 2 con etanol absoluto de acuerdo a las
especificaciones del envase (Preparado por el profesor)
Extraccin de DNA.
Descripcin de la actividad:
Extraccin de DNA genmico de dos fuentes diferentes: Sangre humana y bacterias
Green M.R. and Sambrook J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th ed.), Three-
volume set. New York. U.S.A.: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Life sciences, (2007), Inv Purelink Genomic DNA Kits. User Manual.
1.- OBJETIVO
- Aprender las tcnicas bsicas para la cuantificacin de ADN usando diversas tcnicas
disponibles.
- Microtubos de 1.5 mL
- Caja para microtubos de 0.2 mL
- Marcador de punta fina
- Tubos Qubit
- Cajas con puntas de 10, 100 y 1000 uL
- Microtubos de 1,5 mL
Reactivos:
- Juego de Micropipetas
- Fluormetro Qubit
4.- METODOLOGA
- Definir el nmero de muestras a cuantificarse incluidos los estndares. El kit utiliza dos
estndares para la cuantificacin. Etiquetar los tubos Qubit
- Preparar la solucin de trabajo diluyendo el reactivo Qubit dsDNA BR reagent 1:200 en la
Buffer Qubit. El volumen de mezcla para cada muestra debe ser 200 uL. El volumen de
mezcla para cada uno de los estndares son 190 uL de mezcla y 10 de estndar. El
volumen para cada muestra puede ir de 180 uL a 199 uL dependiendo de la cantidad de
DNA que supone que tenga. Calcular precisamente el volumen demuestra
- Colocar 190 uL de la solucin de trabajo en los tubos etiquetados como estndares. Aadir
10 uL de cada estndar en los tubos etiquetados para ello hasta completar 200 uL de
volumen total. Agitar 2 o 3 segundos en el vrtex
- Colocar de 180 a 199 uL de la solucin de trabajo en los tubos etiquetados para las
muestras y colocar entre de 20 a 1 uL de la muestra de DNA extrado hasta completar un
volumen total de 200 uL. Agitar 2 o 3 segundos en el vrtex
- Incubar los tubos a temperatura ambiente por 2 minutos
- En la pantalla del Fluormetro Qubit, seleccionar dsDNA BR como tipo de ensayo. En la
pantalla estndar, escogemos Nueva Calibracin
- Insertar el estndar 1 y presionar Read, cuando solicite el estndar 2, insertar el
estndar 2 y presionar Read.
- Una vez que este calibrado, colocar cada una de las muestras y presionar Read. Repetir 2
veces la lectura de las muestras para determinar si efectivamente los valores se
mantienen. Promediar las tres lecturas para obtener una concetracin estndar.
- Calcular la concentracin de los stocks con la siguiente frmula.
1.- OBJETIVO
Materiales:
Reactivos
- Agarosa
- Agua Destilada
- Tris-HCl
- cido Brico
- Na2EDTA
- SYBR Green
- DNA obtenido previamente
- Track-it
Equipos
- Cmara de Electroforesis
- Juegos de Micropipetas
4.- METODOLOGA
1) Preparar un gel de agarosa al 1% p/v en buffer TBE 1X. Fundir la agarosa en el microondas y
agitar hasta que se enfre.
2) Una vez que alcance una temperatura de unos 60 grados, aadir 1 uL de SYBR Safe por cada
100 mL de gel. Agitar hasta que se homogenice la muestra.
3) Dispensar el gel lquido con el SYBR Safe en la cmara de electroforesis y colocar los peines
en el extremo superior. Esperar a que se solidifique y retirar los peines
4) Llenar con TBE 1X la cmara de electroforesis con el gel incluido hasta cubrir completamente
el gel con el Buffer.
5) Preparar la muestra a cargarse con 8 uL de DNA y 2 uL de buffer de carga 6X, colocar con la
micropipeta en cada pocillo, empezando por el track it en el primer carril y continuar as hasta
cargar todas las muestras. Procurar que la muestra de ADN caiga en el pocillo y no fuera de
el. Verificar que no se rompa el pocillo con la punta.
6) Conectar la fuente de poder y correr la electroforesis a 100 voltios durante 30 minutos
7) Visualizar el gel bajo la luz UV del transiluminador. Fotodocumentar
Descripcin de la actividad:
Electroforesis de DNA
Green M.R. and Sambrook J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th ed.), Three-
volume set. New York. U.S.A.: Cold Spring Harbor Laboratory Press.