SIEMBRA DE CULTIVO DE

AJO IN VITRO

El ajo (Allium sativum, famlia Amaryllidaceae) es una monocotilednea,

originaria de Asia. El bulbo, o cabeza de ajo, est formado por bulbillos o
dientes de ajo.

Debido a las propiedades aromticas conferidas por la alicina, dichos

bulbillos resultan un condimento indispensable en la cocina de varios
pueblos. Con algunas propiedades antimicrobianas, el ajo tambin es
utilizado en la medicina popular para el control de la presin sangunea,
del colesterol, de las enfermedades coronarias y de la ateroesclerosis. La
propagacin es asexuada, a partir de los bulbillos. En el ajo-semilla, se
consigue eliminar los virus por cultivo in vitro de los meristemas
prximos al disco caulinar basal. Existen diversas estrategias de
mejoramiento gentico, basadas en la informacin existente en los
Bancos de Germoplasma.

Los cultivares de ajo generalmente se clasifican por el color del bulbo, el

tamao, la forma, el porte vegetativo y el nmero, forma y color de los
dientes (Heredia y Delgadillo, 2000).

Dentro del proceso de micro propagacin se pueden diferenciar varias

fases o etapas:

desinfeccin de las yemas de la planta y/o desinfeccin de semillas

Introduccin del material seleccionado in vitro
Multiplicacin de brotes
Enraizamiento
Aclimatacin

CULTIVO IN VITRO DE MERISTEMAS DE AJO

Debido a las propiedades aromticas conferidas por la alicina, dichos bulbillos

resultan un condimento indispensable en la cocina de varios pueblos. Con
algunas propiedades antimicrobianas, el ajo tambin es utilizado en la
medicina popular para el control de la presin sangunea, del colesterol, de las
enfermedades coronarias y de la ateroesclerosis. La propagacin es asexual, a
partir de los bulbillos. En el ajo semilla, se consigue eliminar los virus por
cultivo in vitro de los meristemos prximos al disco caulinar basal. Existen
diversas estrategias de mejoramiento gentico, basadas en la informacin
existente en los bancos de germoplasma.

MTERIALES

Un diente de ajo
Bistur o cuchillo afilado
Frasco desinfectante con agua sanitaria diluida al medio
Pinzas
Hoja autoclavada
Frascos con medio nutritivo estril
Alcohol 70
Mechero Bunsen (opcional).
El medio nutritivo es una solucin de sales minerales a las que se
adiciona sacarosa (1 a 5%), agar (0,7%)

PROCEDIMIENTO
1. SEPARACIN DE LOS EXPLANTES: pelar el bulbillo (diente de ajo)
y cortar justo en la parte seca de la base, como se observa en la figura
de abajo.

Desinfeccin del explante

Las cabezas de ajo se separaron en

dientes para su desinfeccin.
Seguidamente, a los dientes de ajo
se les elimin la envoltura
protectora externa. En la
contaminacin de los explantes in
vitro intervienen diversos factores,
desde la edad del material vegetal
hasta la procedencia, las soluciones
desinfectantes, la forma de trabajar
en la cmara de flujo laminar por
parte del operario y la asepsia del
cuarto de crecimiento.
 Pelado de ajo

2. DESINFECCIN DE LA SUPERFICIE DE LOS EXPLANTES: Esterilizar

el bulbillo con una gota de detergente.

Se colocaron en una solucin durante 45 minutos. Transcurrido ese

tiempo y dentro de una cmara de una botella de vidrio se les
realizaron tres lavados con agua bidestilada estril. El primer lavado
se efectu rpidamente para eliminar restos del desinfectante y as
evitar daos en los tejidos. Para el segundo y tercer lavado, los
explantes permanecieron por tres minutos en el beaker con el agua
bidestilada estril. Luego, se procedi a extraer los pices caulinares
de los dientes de ajo.

El ajo (Allium sativum). Arriba: Extraccin del pice del

cabeza de ajo; en el medio: corte de diente de ajo.
la cabeza de ajo; abajo: corte
longitudinal de un diente de ajo,
mostrando el disco caulinar basal.
 3. LAVADOS EN AGUA DESTILADA
ESTRIL

Area de autoclavado
Area de lavado de
medios DEL CULTIVO
4. ESTABLECIMIENTO

En condiciones aspticas, poner los

dientes de ajo en una placa de petri
que contiene papel toalla estril.
Con un bistur afilado, separar una
lmina de 2 mm del disco basal y
cortarlo al medio.
Transferir los dos explantes al frasco
con medio de cultivo estril,
manteniendo la polaridad de uno de
los fragmentos e invirtiendo la del
otro.
Camara de siembra

5. CUARTO DE CRECIMIENTO

Con un dimetro de 0,2 cm un largo de 0,5 cm aproximadamente, en

frascos pequeos, conteniendo el medio de cultivo Murashige y Skoog,
conocido como M&S, complementado con diferentes reguladores de
crecimiento (6-bencilaminopurina, 2-isopenteniladenina y Kinetina).
Adicionalmente, se le agreg reguladores de crecimiento, de acuerdo
con el tratamiento que se evalu.

Finalmente, los pices cultivados se incubaron en un cuarto de

 Lugar de crecimiento. Crecimiento de las plantas
ya establecidas en el medio
de cultivo.

Conclusin
La ventaja de comenzar con la esterilizacin del diente de ajo reside en
conseguir eliminar los contaminantes. A pesar de que el proceso daa
los tejidos externos, esto no parece afectar la lmina caulinar basal que
est dentro del bulbillo. Esta actividad exige tiempo de preparacin,
porque demanda bastante material estril, pero el resultado es
excelente. Luego de algunas semanas, observamos el crecimiento de los
explantes de ajo, a partir de la regin meristemtica del disco basal del
bulbillo

Observar semanalmente el crecimiento de los explantes

Explantes de disco caulinar basal de bulbillos
de ajo cultivados in vitro.