INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLGICAS

Laboratorio de Microbiologa

Licenciatura en Biologa

Prctica No. 9
Microbiologa del Ciclo del Nitrgeno.

2OV2

Equipo 1
Cuellar Crdenas Jorge Daniel
Serrano Monroy Diego Ivn
Objetivo

Analizar la importancia de los microorganismos en el reciclaje del nitrgeno.

Resultados

Tabla 1. Nmero de microorganismos (UFC/g) proteolticos en una muestra

de suelo.

Estaci % de Dilucin N de UFC/g UFC/g

n Humeda colonia BH BS
d s
1 7 10-3 10 1x105 1.07x10
5

-2 3
2 2 10 1 1x10 1.02x10
3

-4 4
3 12 10 75 7.5x10 8.5x104
4 3 10-2 2 2x103 2.06x10
3

5 5 10-2 65 6.5x103 6.8x103

6 29 10-3 11 1.1x105 1.54x10
5

-3 4
7 5 10 9.5 9.5x10 1x105

Tabla 2. Cuantificacin por la tcnica del Nmero Ms Probable (NMP/g) de

Bacterias nitrificadoras en una muestra de suelo (Nitrificacin).

Estacin Tubos positivos por Nmero NMP/g NMP/g

dilucin caracterstico Suelo (B.S) Suelo (B.H)
10-1 10-2 10-3
1 2 2 3 2-2-3 42 45.16

2 3 2 3 3-2-3 290 2,9x102

3 2 3 3 2-3-3 53 60.22

4 2 2 3 2-2-3 42 43.3

5 0 3 0 0-3-0 9.4 9.89

6 3 3 1 3-3-1 460 6.47x102

7 3 3 1 3-3-1 460 4.84x102

Tabla 3. Cuantificacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP/g) de

Bacterias que participan en la Amonificacin en una muestra de suelo.

Estacin Tubos positivos por Nmero NMP/g NMP/g

dilucin caracterstico Suelo (B.S) Suelo (B.H)
10-1 10-2 10-3
1 3 3 3 3-3-3 >1100 >1182.79

2 3 3 2 3-3-2 1100 1122.44

3 3 3 3 3-3-3 >1100 >1250

4 3 3 2 3-3-2 1100 1134.02

5 3 3 3 3-3-3 >1100 >1157.89

6 3 3 3 3-3-3 >1100 >1549.29

7 3 3 3 3-3-3 >1100 >1157,89

Tabla 4. Cuantificacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP/g) de

bacterias que participan en la Desnitrificacin en una muestra de suelo.

Estacin Tubos positivos por Nmero NMP/g NMP/g

dilucin caracterstico Suelo (B.S) Suelo (B.H)
10-3 10-4 10-5
1 3 3 3 3-3-3 >1.1x105 >1.18x105

2 0 0 0 0-0-0 <300 <3.06x102

3 3 3 3 3-3-3 >1.1x105 >2.25x105

4 1 0 0 1-0-0 3.6x102 3.73x102

5 0 0 0 0-0-0 <300 <3.15x102

 6 3 3 1 3-3-1 4.6x104 6.47x104

7 3 3 2 3-3-2 1.1x105 1.15x105

Discusin.

- Nitrificacin. Solamente existen dos formas de nitrgeno que son asimilables

por las plantas, el nitrato (NO3-) y el amonio (NH4+). Las races pueden absorber
ambas formas, aunque pocas especies prefieren absorber nitratos que amoniaco.
El amonio es convertido a nitrato gracias a los microorganismos por medio de la
nitrificacin. La modificacin de NH4+ a NO3- depende de la temperatura del
suelo. La transformacin, es decir, la conversin se da ms rpida cuando la
temperatura est arriba de los 10 C y el pH est entre los 5.5-6.5; asimismo, este
proceso se ve completado entre dos a cuatro semanas.
Esta fase es realizada en dos pasos por diferentes bacterias: primero, las
bacterias del suelo Nitrosomonas y Nitrococcus convierten el amonio en nitrito
(NO2-), luego otra bacteria del suelo, Nitrobacter, oxida el nitrito en nitrato. La
nitrificacin les entrega energa a las bacterias.

En la Nitritacin se inocularon con 0.5 mL de las diluciones 10 -1, 10-2 y 10-3 a cada
tubo con medio inorgnico con amonio, incubando a 28 C durante 14-21 das,
posterior a la incubacin se agregaron cinco gotas de los reactivos de Griess a
cada tubo, una prueba positiva es la coloracin rosa intenso o rosa en el medio.
Las estaciones 6 y 7 presentaron los valores ms altos de NMP/g Suelo B.H.; la
temperatura, al ser un factor determinante para que se lleve a cabo ms
rpidamente la oxidacin del amonio, se observa que, efectivamente, la
temperatura de las estaciones 6 y 7 est por arriba de los 10 C, as mismo el pH
que tambin afecta la velocidad de la conversin, se encuentra en el rango de 5.5-
6.5 en el caso de la estacin 6 (5.95) que es la estacin con el valor ms alto de
NMP/g Suelo B.H.

- Amonificacin. Los compuestos proteicos y otros similares, que son los

constitutivos en mayor medida de la materia nitrogenada aportada al suelo, son de
poco valor para las plantas cuando se aaden de manera directa. As, cuando los
organismos producen desechos que contienen nitrgeno como la orina (urea), los
desechos de las aves (cido rico), as como de los organismos muertos, stos
son descompuestos por bacterias presentes en el suelo y en el agua, liberando el
nitrgeno al medio, bajo la forma de amonio (NH3). En este nuevo proceso de
integracin de nitrgeno al ciclo, las bacterias fijadoras llevan a cabo la digestin
enzimtica, por lo que el amonio se degrada a compuestos aminados, como
proteosas, peptonas y al final, en aminocidos. Es por esta razn que el proceso
se llama aminificacin o aminizacin.
Una prueba positiva se da cuando los tubos con medio Stuart incoculados con 0.5
mL de las diluciones 10-1, 10-2 y 10-3 que fueron incubados a 28 C durante 7 das
cambian de un color del medio de rojo a rosa intenso, se observ que en las
estaciones 1 y 6 los valores de NMP/g Suelo B.H. son los ms altos, esto puede
indicar una mayor actividad de digestin enzimtica por parte de las bacterias
fijadoras al haber ms desechos que contienen nitrgeno en dichas estaciones.
- Desnitrificacin. La reduccin de los nitratos (NO3-) a nitrgeno gaseoso (N2),
y amonio (NH4+) a amoniaco (NH3), se llama desnitrificacin, y es llevado a cabo
por las bacterias desnitrificadoras que revierten la accin de las fijadoras de
nitrgeno, regresando el nitrgeno a la atmsfera en forma gaseosa. Este proceso
ocasiona una prdida de nitrgeno para el ecosistema; ocurre donde existe un
exceso de materia orgnica y las condiciones son anaerobias, adems de que hay
poca disponibilidad de agua y un alto pH, aunado a los escurrimientos de los
fertilizantes al suelo. El fenmeno de la desnitrificacin se debe, a que en
condiciones de mucha humedad en el suelo, la falta de oxgeno obliga a ciertos
microorganismos a emplear nitrato en vez de oxgeno en su respiracin.

Se inoculo a cada tubo conteniendo medio para desnitrificadores con 0.5 mL de

las diluciones 10-3, 10-4 y 10-5, se incubaron a 28 C durante una semana, una
prueba positiva se da cuando se observa produccin de gas en la campana de
Durham, en este caso las estaciones 1 y 3 registraron los valores ms altos de
NMP/g Suelo B.H., esto nos indica una mayor presencia de materia orgnica en
estas estaciones, igualmente al ser la humedad otro factor determinante para que
este proceso se lleve a cabo, se observa que, al menos para la estacin 3, este
dato coincide al tener un porcentaje de humedad del suelo de 12%, solo por
debajo de la estacin 6 (29%), que igualmente es de los valores ms altos de
NMP/g Suelo B.H.

Conclusiones.

Se logr realizar la cuantificacin de microorganismos presentes en las

muestras de suelo recolectadas en la prctica de campo, que participan en
el ciclo del nitrgeno.
Se observ que la estacin 6 presenta una mayor actividad del reciclaje del
nitrgeno por la alta cantidad de microorganismos asociados a dicho ciclo.

Cuestionario.

1) Para cada una de las fases del ciclo del nitrgeno d un ejemplo de un
microorganismo que participe en ella.

Proteolisis Clostridium prenfingens

 Nitritacin Nitrosomonas europaea
Nitratacin Nitrobacter winogradskyi
Amonificacin Azotobacter vinelandii
Desnitrificacin Achromobacter xylosoxidans
Fijacin Bradyrizobium japonicum

2) De acuerdo con la fuente de nitrgeno empleada en cada proceso, escribir

las reacciones que se llevan a cabo.

Bibliografa

Richards, B.N. 1974. Introduction to the soil ecosystem. Longman Group

Limited, Londres.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/429/organismos.pdf
consultado 26 de abril de 2017.