UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERA QUMICA

CARRERA DE INGENIERA QUMICA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA

PRCTICA N2:
SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Integrantes: - Carlosama Alejandra

- Hidalgo Daro

Ayudante de Ctedra: Christian Cruz

Quito, Ecuador, 2017

 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERA QUMICA
Laboratorio de Biotecnologa

RESUMEN

Realizacin de un conteo de UFC, obtenidas luego de un proceso de

cultivo microbiano mediante una tcnica especfica. Se estableci dos
medios de nutrientes diferentes, se prepar la solucin madre y las
diluciones respectivas en un equipo especializado libre de
contaminacin, luego se coloc las diluciones segn la tcnica de
cultivo ya establecida, trasladndolas al medio de incubacin a
condiciones requeridas; varios das despus se observ el crecimiento
microbiano en las zonas y medios nutritivos. Se concluy que el
crecimiento fue el adecuado en ambos medios, sin embargo la
presencia de acumulaciones de colonias bacterianas no permiti hacer
un conteo preciso para llevarlo a comparacin.

PALABRAS CLAVE:

UFC/ CULTIVO_MICROBIANO/ MEDIOS_DE_NUTRIENTES/

SOLUCIN_MADRE/ COLONIAS_BACTERIANAS

Ayudante de Ctedra:
Christian Cruz
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Laboratorio de Biotecnologa

1. OBJETIVOS
1.1. Adquirir conocimientos bsicos tericos y prcticos de la siembra y aislamiento de
bacterias.
1.2. Realizar el conteo de UFC, obtenidas luego del proceso de siembra.
2. TEORA
2.1. Siembra de Microorganismos: El cultivo de microorganismos consiste en
proporcionarles las condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan
multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos lquidos y
slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en
funcin de la disponibilidad de nutrientes en el medio. (Naghili, H., 2013)
2.2. Tcnicas de Siembra
2.2.1. Siembra en un medio de cultivo lquido
- Con el asa de siembra: tomando directamente una colonia, introduciremos el asa en el
tubo con el lquido. Golpearemos con el asa de siembra contra las paredes para depositar
todas las bacterias (normalmente esto lo haremos cerca del mechero, que nos
proporcionar unas condiciones de asepsia).
- Realizando una suspensin bacteriana y tratndola como muestra lquida: Para la
suspensin se tomarn una o ms colonias que se depositarn en un tubo con agua
destilada o suero fisiolgico.
2.2.2. Desde una muestra slida
- Con el asa de siembra. En placa Petri o en tubo de agar inclinado, tomando una colonia
inoculando mediante estras muy juntas.
- Con el hilo de siembra: se tomar una o ms colonias con el hilo de siembra y se
sembrar en picadura, despus se harn estras.
- Realizando una suspensin bacteriana y tratndola como una muestra lquida. (Pascual,
M.,1999)
2.3. Dilucin Seriada: En muchos casos se necesita preparar disoluciones con
concentraciones extremadamente bajas de un soluto, hasta un punto que es difcil o
imposible en la prctica medir la cantidad necesaria de producto slido o el volumen de
solucin madre. En esas situaciones es necesario preparar una solucin de mayor

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concentracin (solucin de stock o solucin madre) y hacer diluciones sucesivas a partir de

sta hasta alcanzar la concentracin deseada. (Holwell, J., 1967)
2.4. Termoresistencia de las Bacterias Esporuladas: La termoresistencia de las
endosporas es una de sus principales caractersticas. Mientras que las bacterias o las formas
vegetativas de las bacterias esporuladoras sometidas a 80C durante diez minutos
(pasteurizacin) mueren, las endosporas sobreviven e incluso soportan un calentamiento
superior. Para eliminarlas son necesarias tcnicas de esterilizacin. Esta caracterstica
permite un fcil mtodo de aislamiento de las bacterias esporuladas, calentando el material
donde se supone que existen esporas a 100C durante 10 minutos mueren todas las bacterias
y, seguidamente, las esporas sobrevivientes se hacen germinar y crecer en el medio de
cultivo adecuado. (Naghili, H., 2013)
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1. Asa de Cultivo
3.1.2. Cajas Petri
3.1.3. Cabina de Flujo Laminar
3.1.4. Incubadora
3.1.5. Contador de Colonias
3.2. Sustancias y Reactivos
3.2.1. Medio de Cultivo.
3.2.2. Cepa Bacteriana.
3.3. Procedimiento
3.1. Tomar la cepa indicada con el asa de cultivo.
3.2. Realizar la siembra sobre la superficie del medio usando drop platting.
3.3. Incubar la caja Petri a la temperatura y tiempo indicados.
3.4. Realizar el conteo de microorganismos.

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4. PROCESAMIENTO DE DATOS
Tabla 4.4-1
Observaciones
Medio de Cultivo Observaciones
Medio de Cultivo slido, Agar, de color
amarillo ligeramente oscuro, despus de 48
horas de haber realizado el cultivo del
AN microorganismo, se observ que en ningn
cuadrante se puede realizar el conteo de las
UFC, ya que se encuentran todas muy
aglomeradas
Medio de Cultivo slido, Agar, de color
ligeramente amarillo, despus de 48 horas
de haber cultivado el microorganismo, se
SAB
observ que en ningn cuadrante no se
puede realizar el conteo de las UFC, ya que
se encuentran todas muy aglomeradas

5. RESULTADOS
Tabla 5.1.

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Recuento de UFC
NUFC formadas por
Medio de Observaciones
Cuadricula
Cultivo
Dilucin N UFC
No se pudo contar las UFC. Pero se cont
cuantas aglomeraciones de colonias
10-1 Incontables
formaron los microorganismos y estas
fueron 9
No se pudo contar las UFC. Pero se cont
cuantas aglomeraciones de colonias
10-2 Incontables
formaron los microorganismos y estas
fueron 10
No se logro contar las UFC. Pero se conto
AN cuantas aglomeraciones de colonias
Agar formaron los microorganismos y estas
10-3 Incontables
fueron 13. Sin embargo en esta disolucin
se puede observar que la separacion entre
las colonias es mayor.
No se logr contar las UFC. Pero se cont
cuantas aglomeraciones de colonias
formaron los microorganismos y estas
10-4 Incontables
fueron 6. Sin embargo en esta disolucin se
puede observar una mejor separacin entre
las colonias que la disolucin 10-3.
SAB No se logra observar con claridad las UFC.
Agar 1 Incontables Pero se cuenta las aglomeraciones que se
form en el medio de cultivo y fueron 9
2 Incontables Se observa una masa ms abundante, por lo
que no se puede contar las UFC. Pero se
comto la aglomeracin de colonias y estas
fueron 7

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No se identifica de manera correcta y se

3 Incontables
observa una solo aglomeracin de colonias
No se puede realizar el conteo de UFC, pero
4 Incontables se realiz un conteo a la aglomeracin de
colonias y fueron 10

7. DISCUSION
La metodologa de cultivo Drop Platting tiene caractersticas que permiten visualizar el
crecimiento de las colonias en tiempos cortos.
La presencia de errores sistemticos se observaron al momento de trabajar con equipos
nuevos, porque las medidas de las cantidades exactas en la preparacin de la solucin
madre y de las soluciones diluidas no produjeron resultados diferenciales en las colonias,
como se observa en la tabla 5.1 y en el anexo 2. La variacin para los crecimientos en dos
medios de nutrientes no es relativamente apreciable en los cuatro sectores, pues el conteo
de las aglomeraciones es aproximadamente entre 6 y 13 independientemente de la dilucin.
Las colonias se agruparon de forma que fue difcil establecer el conteo entre ellas, esto es
debido a errores aleatorios relacionados con la preparacin de los nutrientes, el medio de
incubacin y el tiempo de incubacin.
Se recomienda realizar un seguimiento continuo del crecimiento bacteriano, pudiendo as
establecer una relacin entre el crecimiento en distintas diluciones en funcin del tiempo.

8. CONCLUSIONES
- Observando los cultivos en las dos cajas petris, se infiere que el microorganismo cultivado
es una bacteria, sin embargo, el microorganismo creci en ambas cajas
- La presencia de nutrientes (peptona, agar, glucosa (SBA), levadura (AN)), permiti que la
bacteria creciera y formara colonias en ambos medios.
- Debido a que el microorganismo fue incubado un rango de 20 -35 C se deduce que este
microorganismo es una bacteria mesfila.

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- El tiempo de incubacin fue demasiado para este microorganismo por lo que al momento
del conteo, este no se lo pudo realizar, debido a que las bacterias ya haban formado
colonias aglomeradas.

9. RECOMENDACIONES
- Debido a que el microorganismo forma colonias muy grandes se podra utilizar otras
tcnicas de siembra como la tcnica de extensin o tcnica de vertido.
- Se si se trabaja con la tcnica de siembra Drop Platting para este microorganismo se
puede incubar menos tiempo, para poder observar de mejor manera las UFC.
- Para obtener mejores resultados y observar de mejor manera las UFC se puede realizar
ms diluciones para as obtener menor cantidad de microorganismo al realizar la siembra.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

10.1. Citas Bibliogrficas
Naghili, H. (2013). Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by
parametric and nonparametric test. Urmia: Faculty of Veterinary Medicine, Urmia
University. p.1
Holwell, J. (1967) An account of the manner of inoculating for the small pox in the
East Indies : with some observations on the practice and mode of treating that
disease in those parts. London: T. Becket. p.10
Pascual, M. (1999). Microbiologa Alimentaria: Metodologa Analtica para
Alimentos y Bebidas. Mxico: Ediciones Daz de Santos. p.45
10.2. Bibliografa
Naghili, H. (2013). Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by
parametric and nonparametric test. Urmia: Faculty of Veterinary Medicine, Urmia
University
Holwell, J. (1967) An account of the manner of inoculating for the small pox in the
East Indies : with some observations on the practice and mode of treating that
disease in those parts. London: T. Becket
Pascual, M. (1999). Microbiologa Alimentaria: Metodologa Analtica para
Alimentos y Bebidas. Mxico: Ediciones Daz de Santos.

Ayudante de Ctedra:
Christian Cruz
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11. Cuestionario
11.1. Cul es el objetivo de la siembra por Drop Platting?
La tcnica de Drop Platting tiene una prioridad y preferencia en comparacin con el
procedimiento de extensin en placa, debido al menor el tiempo, la cantidad de medios
de comunicacin, requisito esfuerzo, poco espacio de la incubadora, y menos mano de
obra. (Naghili, 2013)
11.2. Con qu objeto se realiza un depsito de inculo?
Un inculo es un microorganismo o sus partes capaces de provocar infeccin o
simbiosis, los depsitos de inculo o inoculacin se los realiza con el fin de estudiar
una sustancia antgena para dar inmunidad ante estos microorganismos patgenos.
(Howell, 1767)
11.3. En qu consiste la termoresistencia de las bacterias esporuladas?
La termoresistencia es una de sus principales caractersticas. A diferencia de las
bacterias que mueren a 80C por pasteurizacin, las bacterias esporuladas dejan
esporas que germinan luego de que mueran las dems bacterias, permitiendo un cultivo
especializado. (Pascual, 1999)
ANEXOS
11.1. Diagrama del Equipo (Ver Anexo 1)
11.2. Reporte fotogrfico del cultivo (Ver Anexo 2)

Ayudante de Ctedra:
Christian Cruz
11. ANEXOS
11.1. Diagrama del Equipo
ANEXO 1
Figura 11.1-1
Diagrama del equipo

Fuente: Laboratorio de Biotecnologa. Facultad de Ingeniera Qumica. Universidad Central

11.2. Reporte fotogrfico

ANEXO 2

Figura 11.2-1
Siembra de microorganismos en el medio AN

Fuente: Laboratorio de Biotecnologa. Facultad de Ingeniera Qumica. Universidad Central

Figura 11.2-2
Siembra de microorganismos en el medio SAB

Fuente: Laboratorio de Biotecnologa. Facultad de Ingeniera Qumica. Universidad Central

Nombres Fecha
Daro Hidalgo 02/05/201 Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Alejandra Carlosama 7 Facultad de Ingeniera Qumica
03/05/201 Escuela de Ingeniera Qumica
Revisa: Christian Cruz
7
TEMA: SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Lmina
DE MICROORGANISMOS
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