CHRISTOPHER MEDINA- T-03-02

CROMATOGRAFA
La cromatografa es un mtodo de separacin que involucra la transferencia
reversible de un compuesto que esta adsorbido en una fase estacionaria
(adsorbente) a una fase mvil (disolvente) que fluye a travs de la fase estacionaria.
La clave de la separacin en cromatografa es que la velocidad con la que se mueve
cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de
distribucin). En general, los componentes ms afines a la fase estacionaria
avanzan lentamente (ms retenidos) mientras que los ms afines a la fase mvil
(menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio
cromatografico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la
velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla, logrando as su separacin
y mediante el uso de un detector, su caracterizacin qumica.

Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar los
mtodos cromatograficos segn el estado fsico de la fase mvil:

Cromatografa lquida.
Cromatografa de gases.

TIPOS DE CROMATOGRAFA

Cromatografa en papel: es un proceso muy utilizado en los laboratorios para

realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica potente no requiere
de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria esta constituida simplemente
por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando
pequeas gotas de la disolucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente
empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. La separacin se
realiza en funcin de la afinidad de los solutos con las dos fases, las ms solubles
en agua se quedarn cerca del punto donde se aplic la muestra, y las menos
solubles en agua y ms solubles en el disolvente llegarn ms lejos. Las sustancias
separadas se identifican mediante diversos procedimientos fsicos o qumicos.

Cromatografa en capa fina: se basa en la preparacin de una capa, uniforme, de

un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. La fase mvil es
lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La fase estacionaria sera un
componente polar y el eluyente sera por lo general menos polar que la fase
estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad
sern los menos polares.

Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente:

hidrocarburos < olefinas < fluor < cloro < nitro < aldehdo aldehdo < ester < alcohol
< cetonas < aminas < acidos < amidas

La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros mtodos
cromatograficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el utillaje que
precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones
es mucho menor y la separacin es generalmente mejor.

Cromatografa de permeacion en gel: tambin conocida como cromatografa de

exclusin, es una variante de la HPLC que consiste en una columna cromatogrfica
empacada de tal manera que las partculas de dicho empacamiento tienen
diferentes tamaos de poros o de redes de poros con el fin de que las molculas de
soluto sean retenidas o excluidas basndose en su forma y tamao y no en el peso
molecular. Bajo este entendido, las molculas de mayor tamao no caben dentro de
los poros y son arrastrados alrededor de la fase estacionaria, por lo que son
excluidas y eluyen en el volumen de cama de vaco de la fase mvil. Por el
contrario, las partculas de menor tamao eluyen hasta el final porque tiene ms
espacio de columna que recorrer debido a un fenmeno de difusin hacia los poros
que tienen accesibles. Las molculas de tamaos intermedios tardan diferentes
tiempos en eluir, debido a la cantidad de poros por los que puedan pasar.

Existen distintos tipos de empacamientos columna. Entre ellos estn los polmeros
macromoleculares semirrgidos, los entrecruzados, las slices rgidas las de poro
controlado. Los materiales semirrgidos se hinchan ligeramente se debe tener cierto
cuidado en su uso ya que se limitan a una presin de 300psi. Las cuentas de
poliestireno parcialmente sulfonado que tienen un tamao usual de 5m, son
buenas para usarse con sistemas acuosos mientras los no sulfonados son
compatibles con sistemas no acosos. Otro tipo de empacamiento hidrofilico poroso
es preparado mediante una polimerizacin por suspensin de metacrilato de 2-
hidroxietilo con dimetacrilato de etileno. Estos empacamientos resisten presiones
de hasta 3000psi y pueden ser usados con sistemas acuosos y una amplia gama
de disolventes orgnicos polares.

Cromatografa de exclusin de iones : Se tienen separaciones que dependen de

factores como tamao de partcula de la resina, forma inica e incluso distribucin
de ismeros. Esto permite separar especies que de otra forma eluiran al mismo
tiempo. Las separaciones se llevan a cabo en resinas de intercambio con base en
poliestireno de alta capacidad como eluyentes, cidos minerales diluidos. Mucho
del trabajo en la industria de alimentos y bebidas (vino, cerveza, jugo de frutas, etc.)
o de muestras fisiolgicas en donde la mayora de los cidos del ciclo de Krebs
estn presentes, puede ser hecho fcilmente mediante el uso de una columna de
exclusin aninica.
Cromatografa de intercambio inico: se lleva a cabo con empaques de columna
que tiene grupos funcionales cargados unidos a una matriz polimrica. Los grupos
funcionales enlazados permanentemente y asociados con contra iones de carga
opuesta. El mecanismo de retencin ms comn es el intercambio simple de los
iones de la muestra y de la fase mvil con el grupo cargado de la fase estacionaria.
En el caso de empaques cargados negativamente sirven para intercambiar especies
catinicas. Los ms comunes son los sulfnicos, los cuales son fuertemente cidos
y tiene las propiedades de los cidos fuertes cuando esta en la forma H. Los
empaques cargados positivamente se utilizan para el intercambio con especies
aninicas. Los ms comunes son las aminas cuaternarias, las cuales son
fuertemente bsicas y su forma OH presentan las propiedades de una base fuerte.

Cromatografa de afinidad: separa las protenas (analitos) en funcin de su

especificidad de fijacin de ligandos. Los ligandos de afinidad son molculas
polimricas que sirven de soporte porque estn unidas covalentemente sobre la
columna cromatogrfica o matriz inerte que debe de tener una estructura de poro
abierta y estabilidad en condiciones de cambio de pH, detergentes y agentes
disociantes, para as, retener y adsorber especficamente a las protenas, la fase
estacionaria es slida. Cuando las protenas no especficas se han lavado a travs
de la columna, se eluye la protena ligada con solucin que contiene ligando libre.
Despus se introduce una nueva fase mvil que se desactiva, generalmente por el
acoplamiento o alteracin de los sitios activos inhibidor-ligando, para que esto
pueda ser posible, se necesita un cambio en el pH, la fuerza inica o la polaridad,
debido a que estas condiciones modifican las caractersticas de los sitios activos, la
finalidad de este proceso es hacer fluir a la protena para continuar con la
regeneracin de la columna cromatogrfica. La cromatografa de afinidad tiene la
ventaja de ser altamente selectiva para la retencin de protenas afines a la
columna, para ello, emplea sistemas de baja presin, columnas cortas y un campo
restringido para la separacin.

HPLC: La cromatografa de lquidos de alta eficiencia es la tcnica analtica de

separacin ms ampliamente utilizada. Las razones son la sensibilidad, su fcil
adaptacin a las determinaciones cuantitativas exactas, es ideal para la separacin
de especies no voltiles o termolbiles y por su gran aplicabilidad a sustancias que
son de inters en la industria. Algunos ejemplos son: aminocidos, protenas, cidos
nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, frmacos, terpenoides, plaguicidas,
antibiticos, esteroides, especies organometalicas y gran variedad de sustancias
inorgnicas. La fase mvil es un lquido y la fase estacionaria es una columna que
puede ser de acero inoxidable.

Los adsorbentes ms utilizados son el gel de slice (SiO2) y almina (Al2O3). La

efectividad de una fase mvil para eluir o desplazar un componente a lo largo de la
fase estacionaria depende del adsorbente, de la mezcla y del disolvente (as como
de otras variables, como la temperatura, la superficie y el caudal). La polaridad de
la muestra, el disolvente y las fases en conjunto son el factor importante.
Cuanto ms polar sea el compuesto de la muestra, ms firmemente se unir a la
fase estacionaria. Inversamente, cuanto ms polar sea la fase slida, ms
fuertemente se unir a un compuesto de la fase mvil. Por consiguiente, cuanto
mayor sea la polaridad del disolvente, mayor ser su capacidad para desalojar y
desplazar un compuesto polar de la superficie estacionaria. El efecto resultante de
estas fuerzas es una competencia por el compuesto entre la fase estacionaria y la
fase mvil. Podra esperarse que una muestra permaneciera ms tiempo en aquella
superficie o en aquel medio al que se parezca ms en polaridad.

El orden en el que se eluirn los compuestos de la slice o de la almina es inverso

a la capacidad del compuesto para unirse con el adsorbente. La fuerza de unin
disminuye en el orden siguiente.

Fuerza de unin: Sales >cidos orgnicos >aminas > alcoholes >compuestos

carboxlicos >arenos > haluros de alquilo >teres >alquenos >alcanos.

El poder eluyente de los disolventes es paralelo a este orden. En otras palabras, los
disolventes ms dbiles son los de los alcanos y los disolventes ms poderosos son
los cidos orgnicos o las sales acuosas.

REFERENCIAS:

Durst, H., & Gokel, G. (2007). Qumica orgnica experimental. Barcelona,

Espaa: Revert.
http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa001.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/HPLC1_26118.pdf