SEGMENTACIN

SC 2.1. LOS COMPORTAMIENTOS CELULARES DE LA

SEGMENTACIN SE HALLAN TEMPORAL Y ESPACIALMENTE
ORGANIZADOS. V. Flores

La segmentacin implica, en todas las especies conocidas, la

operacin temporoespacialmente organizada de varios CCD. En
muchas especies, los primeros planos de segmentacin tienen
posicin constante. El eje del primer huso mittico es perpendicular
al eje animal-vegetativo (A-V) y el primer plano de segmentacin es
meridional (contiene al eje A-V). El segundo plano de segmentacin
tambin es meridional pero perpendicular al anterior y se produce
simultneamente en las dos primeras blastmeras indicando que
estn sincronizadas. El tercer plano de segmentacin es ecuatorial,
en consecuencia, perpendicular a los dos primeros y tambin al eje
A-V y se forma simultneamente en las cuatro blastmeras. Ello
revela que siguen sincronizadas. Esta forma de segmentacin
posibilita que cada blastmera contenga una porcin caracterstica
del citoplasma de la CH original.

En los mamferos, que poseen CH de regulacin, este tipo de

control estricto de las posiciones relativas de las blastmeras no
parece ser una necesidad fundamental. En los mamferos pueden
ocurrir varios modos de segmentacin diferentes que conducen,
todos, al desarrollo normal. En los mamferos, en las etapas
tempranas, lo esencial es que las blastmeras se organicen en un
MCI y un MCE y, en relacin con dicha disposicin, se determinen
diferentemente.

El control espacial de los procesos de cariocinesis y citocinesis

depende de macromolculas informativas involucradas en la
organizacin del citoesqueleto. La ubicacin de los steres, la
orientacin del eje del huso mittico y la orientacin en el espacio
de los planos de segmentacin deben estar adecuadamente
integrados para que la divisin celular se produzca normalmente.
Se postula que estos procesos se encuentran tempranamente bajo
control gentico materno.
Los steres desempean un papel primordial a) en el control del
ensamblado del huso mittico, necesario para la cariocinesis y b) en
la determinacin de la posicin espacial del anillo contrctil
responsable de la citocinesis.
Datos de observacin y resultados experimentales apoyan lo
expuesto:

1) El espermatozoide aporta un centrolo a la CH y ste genera los

steres que organizan el aparato mittico. La segmentacin normal
requiere la penetracin de un espermatozoide y la operacin de
slo un par de steres.

2) La penetracin de ms de un espermatozoide genera una

segmentacin anormal con nmeros de husos mitticos y de surcos
de segmentacin acordes con el nmero de steres presentes. Los
surcos de segmentacin se ubican caractersticamente en el punto
medio de la distancia entre dos steres adyacentes.

3) Si en la CH, por compresin mecnica, se modifica la posicin de

los steres y del huso mittico, la posicin en el espacio del surco
de segmentacin se modifica de acuerdo con la nueva posicin de
los steres.

4) Si en la CH se desplaza mecnicamente el huso mittico a la

periferia y se impide la progresin del surco de segmentacin (Fig.
SC 2-1-1), se produce una situacin similar a la segmentacin
meroblstica de los huevos telolecticos. Se genera una clula
binucleada, con forma de herradura, con los ncleos ubicados en
los extremos de las ramas de la herradura (Fig. SC 2-1-1 C). En la
siguiente segmentacin, en cada rama de la herradura se forman un
par de steres y el huso mittico correspondiente a la cariocinesis
de cada ncleo. A continuacin, en cada brazo de la herradura, a
mitad de camino entre los dos steres en la zona media de cada
huso mittico, se genera un surco de segmentacin. Lo
significativo de estos experimentos es que en la zona curva de la
herradura (Fig. SC 2-1-1 E), en donde no existe ningn huso
mittico, tambin se genera un surco de segmentacin que se ubica
en un punto equidistante entre dos steres adyacentes. Este surco
de segmentacin no est asociado ni a la cariocinesis ni a la
formacin de un huso mittico. El resultado indica que no es el huso
mittico, sino la ubicacin de los steres el fenmeno que instala en
el citoesqueleto la referencia que determina la ubicacin espacial
del anillo contrctil de la citocinesis. La ubicacin de los steres por
un lado determina la posicin del eje del huso mittico y, por otro,
sealizaran probablemente por medio de los microtbulos que a
partir de l se extienden radialmente hacia la periferia celular la
orientacin en el espacio de los planos divisin de la segmentacin.

Fig. SC 2-1-1. El experimento ilustra el papel de los steres en la

determinacin de la posicin del anillo contrctil de la citocinesis. La
compresin de la clula huevo con una pequea esfera de vidrio
interrumpe el progreso del primer plano de clivaje. A. Con una
esfera de vidrio se comprime la CH y se desplaza el huso mittico a
la periferia. B-C. Cuando se produce la citocinesis, el plano de
clivaje se ubica a mitad de camino entre ambos steres. La esfera
de vidrio impide el progreso (profundizacin) del surco. D-E.
Durante la segunda segmentacin se forman los surcos de
segmentacin correspondientes a los dos husos mitticos. Adems,
en la zona inferior, pese a que no hay un huso mittico y no
corresponde a una clula que se est dividiendo, se forma un surco
de segmentacin extra (cabeza de flecha gris).

SC 2.2. PAPEL DE LA ADHESIVIDAD CELULAR DURANTE LA

SEGMENTACIN. LA POLARIZACIN Y COMPACTACIN DE
LAS BLASTMERAS Y LA FORMACIN DE LA MRULA. V.
Flores

Algunos eventos morfogenticos de la segmentacin estn

mediados por cambios en la intensidad de fuerzas interfaciales
clula-clula (Fif c-c). Los cambios en la intensidad de dichas
fuerzas estn involucrados tanto en lacompactacin de las
blastmeras que conduce a la mrula como tambin en
lacavitacin que lo transforma en blstula.
Los cambios en la intensidad de las Fif c-c son resultado de
cambios en la organizacin qumica de superficie de las
blastmeras. Estos cambios dependen de modificaciones en el
patrn de sntesis de molculas de adhesin celular o Cam
(Cell adhession molecules). Desde los E2c-E4c, las blastmeras
cambian la expresin de algunas protenas de superficie celular.
stas, sin embargo, ejercern su efecto compactante slo ms
adelante. Hasta el E4c, algunas glicoprotenas de superficie celular
se encuentran uniformemente distribuidas, al azar, en la superficie
de las blastmeras. Desde el E4c en adelante, como modificacin
preparatoria para la compactacin y formacin de la mrula, las
blastmeras experimentan una redistribucin y localizacin
asimtrica o polarizacin de algunas protenas de membrana.
stas se localizan en regiones particulares de la superficie de las
blastmeras. Algunas protenas se concentran en la zona ms
externa de las blastmeras (el polo opuesto al centro del embrin)
en tanto que otras se localizan internamente, en la zona donde las
blastmeras toman contacto entre s. La protena de adhesin
celular L-Cam, por ejemplo, se ubica preferencialmente en las
zonas de contacto intercelular en donde aparece alta intensidad de
Fif c-c. El incremento de las Cam en las zonas de contacto
intercelular y el incremento en la intensidad de la Fif c-c hacen que
las clulas se unan ms fuertemente, disminuya el espacio entre
ellas, se compacten y, en conjunto, formen una masa celular maciza
o mrula.
Se sabe que el fenmeno de polarizacin depende de interacciones
entre blastmeras adyacentes. Diversas experiencias de disociacin
y reasociacin de blastmeras muestran que las blastmeras
aisladas no sufren polarizacin; las protenas de membrana se
distribuyen homogneamente en el plano de la membrana. Cuando
se las asocia de a pares, la polarizacin reaparece.

La protena L-Cam constituye un ejemplo de glicoprotena de

superficie que cumple un papel especfico en la compactacin. La
incubacin de embriones en presencia de anticuerpos anti-L-Cam
produce una rpida descompactacin de la mrula. Existen
experimentos que sugieren que uno de los sistemas de
transduccin de seales, la va de sealizacin del fosfatidilinositol,
est involucrado en la compactacin. La enzima protena-quinasa
C, de un modo no dilucidado an, actuara sobre la localizacin de
la L-Cam. Este hecho iniciara la compactacin.

El citoesqueleto submembranoso y las protenas de la membrana

plasmtica desempean un papel importante en la compactacin.
Es precisamente en la interface entre las membranas de
blastmeras en contacto donde operan las Fif c-c que producen su
compactacin. Las membranas de las blastmeras
correspondientes a las zonas de contacto generan pliegues o
microvellosidades con gran cantidad de microfilamentos. Se piensa
que stas contribuyen a aumentar la superficie de contacto.

La organizacin de la mrula compactada es rpidamente

estabilizada por el desarrollo de complejos de unin, especialmente
znulas occludens entre las clulas superficiales de la mrula.
Estas uniones, por un lado, cumplen una funcin estructural
estabilizadora porque mantienen cohesionadas a las clulas y las
hacen resistentes a tensiones mecnicas. Por otro, dada su
capacidad de restringir el pasaje de molculas a travs de la va
paracelular, contribuyen a definir un medioambiente
bioqumicamente definido en el interior de la mrula. Esto genera la
condicin necesaria para la ocurrencia del primer evento de
determinacin durante el desarrollo de los mamferos (SC 2.17. La
primera determinacin. La expresin de combinatorias de
factores de transcripcin especficas de tipo celular en la
mrula y el blastocisto).

SC 2.3. PROCESOS DE DIFERENCIACIN CELULAR DURANTE

EL PERODO DE SEGMENTACIN. CMO SE GENERA
DIVERSIDAD CELULAR DURANTE LA SEGMENTACIN?. V.
Flores

Existen muchos momentos tpicos del desarrollo en los que a partir

de una poblacin homognea (formada por un nico tipo celular con
una potencia dada) se generan dos o ms tipos celulares con
diferentes caractersticas y potencias evolutivas. ste es uno de los
procesos involucrados en la gnesis de la complejidad pluricelular.
El inicio de la segmentacin implica la generacin de una cierta
cantidad de blastmeras, morfolgicamente similares y
equipotentes. Al final de la segmentacin, la organizacin del
blastocisto depende de los fenmenos que operaron en sta. El tipo
de segmentacin, a su vez, depende de la organizacin
citoplasmtica original de la CH. En los mamferos, al final de la
segmentacin existen dos tipos celulares: a) clulas que forman el
embrioblasto (originarn tejidos embrionarios y algunos no
embrionarios) y b) clulas que forman el trofoblasto (originarn
tejidos de la placenta encargados de la nutricin del embrin).

Las blastmeras se forman por mitosis a partir de la CH. La mitosis

mantiene la similitud de la informacin gentica que se transfiere de
clula madre a clulas hijas. Cada blastmera posee un citoplasma
que corresponde a una fraccin del citoplasma de la CH
proveniente del ovocito II y un ncleo con informacin gentica
similar a la de la CH original. El inters por conocer cmo a partir de
una clula que se divide por mitosis pueden originarse dos o ms
tipos celulares diferentes ha generado muchos e ingeniosos
experimentos.

Papel de las seales externas y de las interacciones ncleo-

citoplasmticas [Int n-c] en la especificacin de tipo celular. La
informacin gentica reside en el ncleo, pero los procesos
fisicoqumicos por medio de los cuales se ejecutan CCD y que
confieren caractersticas morfolgicas y/o funcionales tpicas a las
clulas ya diferenciadas ocurren mayoritariamente en el citoplasma.
Las Int n-c constituyen la base de la diferenciacin celular.
Numerosas evidencias sobre la importancia de las Int n-c para el
mantenimiento de la estructura y funcin de las clulas de cualquier
organismo provienen de las clsicas experiencias de extirpacin del
ncleo en clulas de vida libre: la extirpacin del ncleo de una
ameba no interrumpe sus funciones vitales inmediatamente. Una
ameba sin ncleo puede sobrevivir un tiempo pero, finalmente,
muere. Si, antes de un cierto tiempo crtico, se reintroduce el ncleo
en el citoplasma de la ameba, sta recupera sus caractersticas
normales y sobrevive.
De modo similar, una CH enucleada puede iniciar el desarrollo. Se
inicia la segmentacin, se desarrollan parcialmente blstulas, pero
el desarrollo se detiene antes de que se observen signos
importantes de diferenciacin. Esto indica que la eliminacin del
material gentico, con la consiguiente ausencia de Int n-c, detiene
el desarrollo.
La prosecucin transitoria del desarrollo luego de la eliminacin del
ncleo no implica que el citoplasma acte con prescindencia de
aqul. Slo se debe a que el citoplasma posee almacenados los
productos de Int n-c realizadas antes de la eliminacin del ncleo,
durante la ovognesis, y que explican el fenmeno denominado
control gennico materno de la embriognesis temprana (SC 2.4 El
concepto control gentico materno (CGM) de la embriognesis
temprana).
Si en algn momento las blastmeras empiezan a expresar CCD
diferentes, puede suponerse que en ellas se estn realizando
diferentes Int n-c. Desde el punto de vista terico, esta situacin
podra darse si las blastmeras:
(a) poseyeran informacin gentica diferente, o si...
(b) poseyeran composiciones citoplasmticas diferentes. Existe
acuerdo con respecto a que la primera condicin no se cumple en
mamferos. La segunda situacin podra darse si:
(b1) durante la segmentacin las blastmeras recibieran de la CH
porciones de citoplasma con factores determinantes citoplasmticos
diferentes, o si
(b2) durante la segmentacin las blastmeras sufrieran cambios
citoplasmticos debidos a la recepcin de estmulos ambientales
diferentes y la consiguiente activacin de vas de sealizacin con
diferentes efectos de desarrollo.
En favor del punto (a) del prrafo anterior alguna vez se argument
que la informacin gentica podra modificarse durante el
desarrollo. El cambio en la composicin del ADN podra explicar que
las Int n-c sean diferentes y as podra explicarse que las
blastmeras expresen diferentes CCD y originen poblaciones
celulares diferentes.
Algunas experiencias clsicas de trasplante nuclear permitieron
descartar la opcin (a). La experiencia consisti en transferir
ncleos de distintos tipos de clulas, que ya han iniciado su
diferenciacin, a CH previamente enucleadas. El objetivo consista
en contrastar si los ncleos de clulas diferenciadas o en
diferenciacin, trasplantados, son capaces de promover un
desarrollo normal. El fundamento se bas en la idea de que, si las
CH ncleo-trasplantadas originaran individuos normales, ello
implicara que la informacin gentica de los ncleos diferenciados
o en diferenciacin es similar a la de la CH.
Las experiencias de Briggs y King (1959) consistieron en el
trasplante de ncleos de clulas embrionarias somticas (2n)
(blastmeras del hemisferio animal de blstulas avanzadas de
rana Pipiens) a vulos enucleados. Un porcentaje de estas CH
ncleo-trasplantadas se segmentaron y desarrollaron normalmente
hasta etapas larvarias avanzadas sugiriendo que la informacin
gentica de los ncleos de blastmeras de blstulas avanzadas es
similar a la de la CH que les dio origen. Diversos resultados
obtenidos en la dcada del 60 por Gurdon, Laskey y otros, en la
rana Xenopus Laevis permitieron aceptar, en general, la idea de
que la informacin gentica de las clulas somticas permanece sin
cambios cualitativos significativos a lo largo del desarrollo. En
consecuencia, desde el punto de vista cualitativo, la informacin
gentica es bsicamente similar en todas las clulas del organismo.
Gurdon y cols. trasplantaron ncleos de clulas somticas
diferenciadas (2n) a ovocitos enucleados. El desarrollo de stos dio
origen a renacuajos normales y hasta algunos ejemplares adultos.
Todos estos resultados sugieren que el ADN del ncleo diferenciado
trasplantado, una vez en el citoplasma de la CH, es liberado de los
procesos de activacin y represin gnica sufridos durante el
proceso de diferenciacin. El trasplante tendra el efecto de revertir
la condicin en la que se encuentra el ADN del ncleo de la clula
somtica diferenciada a la condicin original que posee en el ncleo
de la CH.

Los resultados clsicos han sido interpretados en el sentido de que

el ncleo de cada tipo particular de clula somtica posee una
combinacin tpica de genes activados y reprimidos que es
caracterstica para cada tipo celular. Sin embargo, el ncleo de una
clula ya diferenciada, puesto en el citoplasma de la CH pasa a
comportarse como el ncleo de la CH. Sufre una reversin de los
cambios (activacin y represin selectiva) ocurridos durante el
desarrollo. Estas ideas son la base de la clonacin que en la
actualidad se pueden realizar en diversas especies, incluso en
mamferos. Las experiencias de trasplante nuclear, primero
iniciadas en protozoarios y luego en CH de anfibios, se han podido
aplicar con xito en mamferos y hoy se sabe que los ncleos de
clulas somticas, aun de organismos adultos, cuando son
trasplantados a CH enucleadas son capaces de promover el
desarrollo hasta el estado adulto, aunque todava no han sido
exhaustivamente analizadas todas las consecuencias perjudiciales
que pueden traer aparejadas las experiencias de trasplante nuclear.
Todos estos resultados experimentales muestran que la actividad
nuclear es regulada por molculas que transitoriamente residen en
el citoplasma y que, o son generados en respuesta a molculas
seal provenientes del medio (seales determinantes o permisivas)
(SC 0.5. El concepto de determinacin. Potencia y significado
evolutivos; SC El concepto de diferenciacin celular. Criterios
que definen el grado de diferenciacin) o tambin productos
gnicos de la propia clula (factores de transcripcin y otras
molculas que regula la expresin gnica). La operacin de los
CCD, en consecuencia, depende de la informacin gentica propia
y de componentes del medioambiente con sentido biolgico
(seales).
De acuerdo con los datos considerados, el origen de la diversidad o
diferenciacin celular durante la ontogenia se centra en el
punto (b) las diferencias citoplasmticas entre las blastmeras. El
mecanismo principal por medio del cual se introduce diversidad
celular en el desarrollo temprano posee modalidades diferentes
segn se trate de (b1) CH de organizacin determinada mosaico
o de(b2) CH de organizacin lbil o regulativa. A esta segunda
categora pertenecen los huevos de mamferos, entre ellos el
hombre (vase SC 2.5. Los mamferos poseen CH de regulacin.
La importancia de la polaridad A-V en los experimentos de
merotoma de la CH).

SC 2.4.EL CONCEPTO CONTROL GENTICO MATERNO (CGM)

DE LA EMBRIOGNESIS TEMPRANA. V. Flores

La clula huevo (CH) constituye un sistema de desarrollo que

posee a) informacin gentica cigtica, aportada por ambos
progenitores, que se halla en un estado apto para ser utilizada
como inicio de un programa gentico de desarrollo y b)informacin
citoplasmtica ovocitaria representada por molculas informativas
(diferentes tipos de ARN, protenas, ribosomas, etc.) sintetizadas y
almacenadas durante la ovognesis. La informacin citoplasmtica
que posee la CH le es transferida por el ovocito II y fue elaborada
exclusivamente con la utilizacin del genoma materno. Ambos
conjuntos informativos son importantes pero el control de los CCD
durante la embriognesis temprana, incluida la segmentacin,
depende principalmente de la informacin citoplasmtica de la CH,
por ello se dice que se halla fundamentalmente bajo CGM. El
concepto no implica que los elementos informativos que aporta el
espermatozoide no influyan en absoluto en la organizacin de los
CCD, slo enfatiza la importancia que poseen los que aporta el
ovocito. El CGM posee gran influencia en algunas especies y menor
en otras (mamferos).
En las especies en las que existe un CGM riguroso se cumplen las
siguientes condiciones:

a) Varios CCD incluidos en la segmentacin requieren protenas y

ARNm sintetizados durante la ovognesis y almacenados en el
citoplasma del ovocito.
b) El genoma cigtico no se expresa durante el clivaje temprano.
Recin lo hace en la fase final de la segmentacin o al principio de
la gastrulacin.
c) El cambio entre ambos tipos de control gentico (CGM a CGC)
es bastante brusco, se denomina transicin y ocurre en un
momento tpico del desarrollo.
El momento en el que se produce la transicin (activacin del CGC)
para el caso de algunos genes o algunos CCD puede ser detectado
con precisin y ser modificado experimentalmente.

1) Existen especies en las que el CGM de la proliferacin se

manifiesta por una curva tpica de incremento en el nmero de
clulas en funcin del tiempo o en funcin del nmero de ciclos
celulares cumplidos (Fig.SC 2-4-1). Cuando se pasa al CGC, la
pendiente de la curva se modifica tpicamente. A dicho punto se
denominatransicin del control de la proliferacin y ocurre en un
nmero tpico de ciclos celulares.
2) Aumentando experimentalmente la cantidad de cromatina del
ncleo de la CH y, en consecuencia la de las blastmeras
resultantes, se puede adelantar el momento en que se produce la
transicin. Si se aumenta al doble la cantidad de cromatina, la
transicin ocurre un ciclo ms temprano.

3) Si se disminuye la cantidad de cromatina a la mitad, la transicin

ocurre un ciclo ms tarde.

4) Otros experimentos muestran que, modificando el volumen

citoplasmtico y dejando constante la cantidad de cromatina, se
produce tambin un desplazamiento en el momento de la transicin.

Fig. SC 2-4-1. Evolucin de la duracin del ciclo celular y de su

variabilidad en funcin del nmero de ciclos medido en clulas
disociadas de embriones de Xenopus. Los primeros ciclos celulares
estn sincronizados y poseen una duracin tpica de 35 minutos.
Luego de la transicin del control de la proliferacin (flecha), los
ciclos celulares se alargan y pierden sincronizacin. La lnea negra
representa la duracin media del ciclo celular. Las lneas azules
representan el rango de dispersin del valor medio o variabilidad.
Ntese que luego de la transicin tambin aumenta la variabilidad.

Por estos resultados, se considera que la transicin depende del

cambio en larelacin volumen nuclear/volumen
citoplasmtico (R vN/vC) que ocurre durante la segmentacin. En
sentido estricto, no se considera que el cambio en la relacin
volumen N/C es el fenmeno desencadenante de la transicin sino
que depende de cambios en la relacin concentracin de
cromatina/disponibilidad de factores inhibitorios luego de cada
ciclo.
Ntese que, en ausencia de actividad biosinttica, con cada
citocinesis la cantidad de factores inhibitorios que poseen las
clulas se reduce a la mitad. Sin embargo, dado que en cada ciclo,
en el perodo S se duplica la cantidad de ADN, en sucesivos ciclos
se produce una dilucin de factores inhibitorios en relacin con la
cantidad de ADN por clula. Luego de un cierto nmero de ciclos
proliferativos, la cantidad de factores inhibitorios puede haberse
diluido hasta el punto en que ya no ejerce su efecto inhibitorio y los
genes cigticos se activan.

Los mamferos poseen CH pequeas que no almacenan grandes

cantidades de molculas informativas. En estos casos el control
gentico materno es menos importante o duradero: a) existe menor
cantidad de molculas informativas acumuladas en el ovocito, b) el
genoma cigtico empieza a activarse ya durante la segmentacin
temprana para producir las molculas que participan en la
segmentacin y c) con excepcin de la adhesividad celular, no
existe una transicin neta en otros CCD. El control materno es
reemplazado desde temprano y, al parecer, gradualmente por el
cigtico.

SC 2.5. LOS MAMFEROS POSEEN CH DE REGULACIN. LA

IMPORTANCIA DE LA POLARIDAD A-V EN LOS
EXPERIMENTOS DE MEROTOMA DE LA CH. V. Flores

Dos conceptos clsicos aluden a diferentes comportamientos

exhibidos por los sistemas de desarrollo cuando son sometidos a
experimentos en los que una parte de ste es eliminado. En
algunos casos, el desarrollo se altera, falta aquella parte que
hubiera sido formada por la porcin eliminada. En otros, se forma
una estructura completa y armnica. Este diferente comportamiento,
que clsicamente ha recibido diferentes designaciones y diferentes
interpretaciones, depende del carcter determinado o indeterminado
del sistema en cuestin en el momento en que se realiza el
experimento de ablacin (SC 0.5. El concepto de determinacin.
Potencia y significado evolutivos).
Todo CCD involucra la operacin previa de diversas interacciones
ncleo-citoplasmticas. La expresin de la informacin gentica
durante el desarrollo embrionario puede depender de seales
externas (provenientes de otras clulas o del ambiente) que actan
en un momento dado y/o de molculas propias o endgenas que
pudieron haber sido sintetizadas con mucha anterioridad,
almacenadas en el citoplasma y que actan tiempo despus.

Clsicamente se denomin factores determinantes citoplasmticos

a sustancias no identificadas que, estando almacenadas en el
citoplasma de una clula en desarrollo determinan su modo de
desarrollo y su destino evolutivo; vale decir, determinan qu
derivados originarn. En tales sistemas de desarrollo puede ocurrir
que determinantes citoplasmticos almacenados en la CH se
repartan diferencialmente durante la segmentacin de la CH de
modo que, dependiendo del tipo de determinantes citoplasmticos
que quedan en diferentes blastmeras, ellas originan diferentes
derivados. En tales situaciones, la eliminacin de alguna
blastmera, o incluso de alguna porcin del citoplasma de la CH,
puede dar lugar a la falta de aquella porcin del embrin que
hubiera derivado de la blastmera eliminada. Algunas especies
(moluscos, helmintos, ascidias y otras) poseen CH con regiones
citoplasmticas determinadas a formar slo ciertas regiones del
embrin y no otras. La eliminacin de dichas regiones
citoplasmticas ocasiona la produccin de embriones incompletos.
Estos sistemas de desarrollo fueron concebidos clsicamente como
un mosaico de regiones diferentemente determinadas, vale decir,
con diferente potencia evolutiva. Tambin se los ha denominado
con organizacin rgida o determinada o sistemas heterogneos
aludiendo a que diferentes regiones citoplasmticas poseen
diferentes elementos informativos y propiedades de desarrollo.
Existen modos de programacin del desarrollo ms plsticas en las
que los procesos de determinacin se suceden gradualmente en
funcin del tiempo. En estos casos las seales determinantes o
directrices van producindose gradual y progresivamente (de lo
general a lo particular) dependiendo del estado de desarrollo. En
tales sistemas las blastmeras que se forman durante la
segmentacin se mantienen indeterminadas por perodos ms
prolongados, pues el ingreso a diversas vas de desarrollo no
depende de determinantes citoplasmticos almacenados tiempo
antes, sino de fenmenos interactivos que se van sucediendo en
funcin del estado de desarrollo alcanzado. Dado que en tales
sistemas las blastmeras no estn determinadas, la eliminacin de
algunas de ellas puede no comprometer el desarrollo global ya que,
si las restantes poseen potencia evolutiva amplia, pueden compartir
la potencia de la blastmera eliminada y, en consecuencia, pueden
suplirla o reemplazarla. Estos sistemas fueron concebidos
clsicamente como poseedores de la capacidad de regular los
dficits o excesos y se denominaron sistemas con capacidad
regulativa o simplemente de regulacin. Tambin se los ha
denominado sistemas no determinados, plsticos o lbiles
implicando estos trminos que poseen una organizacin que puede
ser recompuesta (reorganizada) luego de la eliminacin de parte del
embrin y que las diferentes blastmeras, o regiones
citoplasmticas, no tienen un destino evolutivo fijo sino que pueden
modificar sus destinos en funcin de las interacciones que puedan
realizar durante el desarrollo. Estos sistemas tambin fueron
denominados clsicamente homogneos en el sentido de que las
propiedades de desarrollo podran estar uniformemente distribuidas
en el citoplasma de la CH y de las primeras blastmeras.
Existen experiencias que muestran que esto ltimo no
necesariamente se cumple. Los experimentos clsicos que llevaron
a los conceptos de regulacin y mosaicoconsistieron en la
separacin experimental de las dos primeras blastmeras y su
desarrollo en forma aislada. En estas circunstancias, en las
especies con CH de regulacin se forman dos embriones ms
pequeos, pero con plan anatmico normal (completo). En el caso
de las CH en mosaico el experimento da lugar a dos embriones
incompletos (carecen de porciones del organismo).
Algunos experimentos ulteriores sobre el desarrollo de partes
aisladas de sistemas de regulacin CH o embriones en
segmentacin pusieron tambin de manifiesto la importancia de la
organizacin espacial del citoplasma y de la polaridad A-V. Los
experimentos de separacin de partes de CH o blastmeras y su
desarrollo en forma aislada deben respetar ciertas referencias
espaciales para que la capacidad regulativa efectivamente se ponga
de manifiesto.

1) En los huevos de anfibios las dos primeras blastmeras, una vez

aisladas, pueden generar embriones completos, slo cuando el
primer plano de clivaje es meridional (contiene el eje A-V) y ambas
blastmeras poseen componentes de la semiluna gris (Fig. SC 2-5-
1). Si una de las blastmeras aisladas carece de tales
componentes, no desarrolla un embrin.
Fig. SC 2-5-1. Experiencias de separacin de la dos primeras
blastmeras y capacidad regulativa de la CH de anfibio. A. La
primera divisin es meridional y ambas blastmeras contienen
material de la semiluna gris. B. Slo una de las blastmeras posee
material de la semiluna gris y es capaz de formar un embrin
completo.

2) Por otro lado, si se separan las mitades animal y vegetativa de

CH o de embriones en segmentacin, y tales mitades son cultivadas
en forma aislada, ninguna de ambas mitades posee capacidad para
formar un embrin completo (Fig. SC 2-5-2). El conjunto de
blastmeras correspondientes al hemisferio animal exhibe
tendencia a desarrollar estructuras de tipo ectodrmico y las de la
mitad vegetativa originan clulas de tipo endodrmico. En ambos
casos, el desarrollo se detiene rpido y las estructuras formadas
terminan muriendo. Por otro lado, ninguna de ambas origina clulas
mesodrmicas.
Normalmente, las clulas mesodrmicas se forman a partir de la
zona ecuatorial del casquete animal, pero su formacin requiere
que los hemisferios animal y vegetativo se encuentren juntos. La
capacidad o competencia para formar clulas mesodrmicas que
posee el casquete animal requiere una accin directriz por parte del
casquete vegetativo. As, estas evidencias experimentales de
existencia de polaridad A-V fueron interpretadas en trminos de que
los hemisferios animal y vegetativo poseen diferencias en su
potencia de desarrollo y que tales potencias se ponen de manifiesto
parcialmente aun cuando estn aisladas. La formacin del
mesodermo, sin embargo, es un proceso epigentico, vale decir,
dependiente de acciones de unas clulas sobre otras.

Fig. SC 2-5-2. Experiencias de separacin de los hemisferios

animal y vegetativo de CH de anfibios. Las blastmeras del
hemisferio animal reciben del hemisferio vegetativo seales que les
permiten determinarse en sentido mesodrmico. Las blastmeras
del hemisferio animal aisladas no originan mesodermo. Cuando
ambos hemisferios pueden interactuar, las blastmeras ecuatoriales
del hemisferio animal reciben estmulos (flechas) del hemisferio
vegetativo que les permiten diferenciarse en mesodermo.
SC 2.6. COMPORTAMIENTOS CELULARES INVOLUCRADOS EN
LA PRIMERA DETERMINACIN. EN LOS MAMFEROS CON
SLO TRES CLULAS SE CONSTITUIRA EL EMBRIOBLASTO.
V. Flores

El primer fenmeno de determinacin en los mamferos parece

depender de la instalacin de una asimetra o polaridad interior-
exterior que se instala en el estado de mrula (embrin
compactado). Tal polaridad consistira en diferencias en la
composicin molecular entre los medios externo e interno de la
mrula y diferencias entre las blastmeras que quedan
perifricamente distribuidas y que poseen parte de la superficie
primaria del ovocito versus clulas que quedan ubicadas
internamente y pierden los componentes relacionados con la
superficie primaria del ovocito. El externo est definido por las
secreciones de las clulas del tracto genital femenino y el interno
por la actividad biosinttica propia de las clulas de la mrula.
La organizacin espacial de las clulas de la mrula, resultante de
la compactacin, se estabiliza por medio de znulas occludens y
desmosomas desarrollados entre las blastmeras perifricas.
Durante la compactacin se forman tambin uniones nexo, aunque
la sntesis de sus protenas constituyentes conexinas se inicia ya
desde el E4c. Aparte de su funcin cohesiva las znulas
occludens cumplen otras dos funciones importantes para el
desarrollo. Por un lado, a) constituyen una barrera a la difusin
lateral de las protenas en el plano de la membrana plasmtica y
ello permite definir dos dominios en la membrana: uno apical y otro
basolateral. Esto contribuye a estabilizar la organizacin de la
mrula y el estado polarizado de las blastmeras externas. Por otro
lado, b) las znulas occludens sellan el espacio entre clulas
adyacentes restringiendo el pasaje de macromolculas a travs de
la va paracelular. Esto permite delimitar y mantener un medio
interno embrionario bioqumicamente definido por las propias
clulas embrionarias.
Los embriones de mamferos son sistemas regulables (SC 2.5 Los
mamferos poseen CH de regulacin. La importancia de la
polaridad A-V en los experimentos de merotoma de la CH) y
existen datos experimentales que permitieron postular que entre los
E2c y E8c las blastmeras son equipotentes. Ello significa que
todas pueden determinarse y diferenciarse en embrioblasto o
trofoblasto. Entre los E8c y E16c aparecen diferencias en la
potencia evolutiva de las blastmeras. Estas diferencias surgen, al
parecer, como consecuencia de diferencias en las interacciones
clula-medioambiente. Luego de la compactacin y formacin de
znulas occludens, las clulas centrales de la mrula interactan
con un medioambiente diferente del medio externo del embrin. Las
clulas perifricas sin embargo pueden interactuar con el medio
externo. As, la determinacin y el tipo de diferenciacin que
experimentar una blastmera es dependiente de posicin (interna
o externa dentro de la mrula). Las clulas centrales se determinan
en MCI o embrioblasto y las perifricas en MCE o trofoblasto.
En trminos de CMD ello implica que, debido a su diferente
posicin, las clulas externas e internas pueden estar sometidas a
diferentes conjuntos de molculas seal. stas, por medio de
diversas vas de transduccin intracelular, pueden desencadenar
diferentes tipos de reprogramacin de la informacin gentica de las
blastmeras. Se piensa que las reprogramaciones estables e
irreversibles involucradas en fenmenos de determinacin pueden
implicar tanto el ingreso en, o el egreso de, un estado apto para la
transcripcin de genes de desarrollo y es sabido que, luego de la
determinacin, las blastmeras internas y externas no expresan los
mismos conjuntos de factores de transcripcin.

Dado que el desarrollo es interactivo, muchos fenmenos del

desarrollo dependen de una masa o un nmero crtico de clulas
que garanticen su ocurrencia. En un embrin de E16c, la mayor
parte de las clulas posee ubicacin perifrica. Muy pocas poseen
posicin central y, en consecuencia, probabilidad de integrar el
embrioblasto. Con cuntas clulas se constituye el embrioblasto
ms joven?
Aunque las blastmeras no se determinan hasta luego de la
compactacin y formacin de la mrula, ya en el E2c se puede
identificar a la precursora de la mayora de las clulas que
constituirn el embrioblasto; es la blastmera que exhibe ventaja
proliferativa. En los mamferos existe un breve E3c pues una de las
blastmeras del E2c se divide un poco antes que la otra (ventaja
proliferativa). Las descendientes mantienen dicha ventaja
proliferativa y de una de ellas deriva el primer par de blastmeras
que ingresa en el E8c. Las descendientes de estas ltimas poseen
mayor probabilidad que las restantes de ubicarse en la zona central
de la mrula. As, del comportamiento proliferativo de las
blastmeras y de sus caractersticas adhesivas surgira una mayor
probabilidad, para la clula que se divide primero en el E2c, de
originar a aquellas que constituirn el MCI. Ello no implica que tal
clula ya se encuentre determinada a formar el embrioblasto.
Existen indicios de que la determinacin en sentido embrioblstico
se inicia entre E8c y E16c. Ello no implica que las clulas externas
se determinen en sentido trofoblstico al mismo tiempo.

Por medio de experimentos de construccin de embriones

quimricos (formados por clulas de individuos de diferentes cepas)
se ha podido estimar cuntas clulas constituyen el embrioblasto
ms joven. Si las blastmeras de dos embriones de ratn (E4c), uno
proveniente de una cepa negra y otro de una blanca, son
reasociadas, se puede constituir un embrin quimrico de 8 clulas.
ste puede ser implantado en una madre que los geste hasta el
nacimiento. Desde el punto de vista estadstico, cuanto mayor sea
el nmero de clulas implicadas en la formacin del MCI, menor
ser la proporcin de ratones puros (de la cepa blanca o negra)
obtenibles por este mtodo, y mayor ser la proporcin de
descendientes con clulas de ambas cepas (manchados). Si el MCI
se constituyera con a) una sola clula, los ratones tendran que ser
blancos o negros; existira 50% de probabilidades de ser blanco y
50% de ser negro y la probabilidad de ser manchado (mezcla de
blanco y negro) sera 0%. Si el MCI se constituyera con b)dos
clulas, habra 50% de probabilidades de ser puro (25% de
probabilidades de ser blanco + 25% de ser negro) y 50% de
probabilidades de ser manchado. Si el MCI se constituyera con 3
clulas slo 2/8 de los descendientes (25%) seran puros (12,5%
blancos y 12,5% negros) y 6/8 de los descendientes (75%) seran
manchados. Los resultados de este tipo de experimentos indican
que 3 es el nmero de clulas que, probablemente, se determinan
en sentido embrioblstico y constituyen el MCI.

SC 2.7. LA MORFOLOGA Y LA POLARIDAD DE LAS CLULAS

HUEVOS. V. Flores

Comparadas con otras especies, las CH de mamferos exhiben

pocas evidencias estructurales de polaridad animal-vegativa (A-V).
Existen especies en las que la importancia de la polaridad A-V
radica en que los hemisferios A y V poseen diferentes potencias de
desarrollo, y el desarrollo normal requiere la interaccin entre
ambos hemisferios. Si en tales especies se separan los hemisferios
A y V (en el estado de CH o de blstula), se puede demostrar que
ambas evolucionan diferentemente (SC 2.5. Los mamferos
poseen CH de regulacin. La importancia de la polaridad A-V
en los experimentos de merotoma de la CH).
Las caractersticas de la CH dependen principalmente de las de la
gameta femenina (ovocito II) que aporta la mayor parte de su
estructura. La gameta femenina constituye un sistema de desarrollo
en latencia. Su complejidad se expresa, ms que por su estructura,
por a) la dinmica de la redistribucin de elementos citoplasmticos
que sufre luego de la fecundacin, b) por los procesos involucrados
en su activacin (SC La activacin del ovocito y la activacin del
programa de la embriognesis temprana. El contacto
espermatozoide-ovocito como seal para el inicio de vas de
sealizacin intracelular) y por c) la organizacin temporal y
espacial de los CMyCD que ocurren durante la segmentacin
(SC Los comportamientos celulares de la segmentacin se
hallan temporal y espacialmente organizados; SC El concepto
control gentico materno (CGM) de la embriognesis
temprana).
La morfologa de las CH vara en distintas especies (diferentes
tamaos, distribucin de elementos citoplasmticos, cantidad y
distribucin de vitelo, etc.). A estas diferencias se agregan las
diferentes formas de segmentacin que ellas realizan, que son
resultado de adaptaciones evolutivas diferentes. En el hombre, que
posee placenta y el embrin se nutre a partir del medio interno
materno, la CH posee escasa cantidad de vitelo (oligolectico).

La CH posee estructura aparentemente simple. Deca C. W.

Bodemer, en su clsicaEmbriologa Moderna, que las CH no
poseen una organizacin que permita suponer la complejidad
estructural del animal que de l deriva; [] que su apariencia es tan
simple que decepciona. Sin embargo, posee la informacin y
organizacin necesarias para alcanzar tal complejidad. Las CH
poseen cifrada, en trminos de molculas con valor informativo, la
informacin necesaria para el inicio y prosecucin de secuencias de
eventos que conducen a la elaboracin de los diferentes fenotipos
que exhiben los organismos pluricelulares.
Un indicio claro de la existencia de organizacin es la posesin de
la propiedad, ya mencionada, denominada polaridad. sta posee
tanto manifestaciones estructurales como conductuales. Todos los
ovocitos tienen estructura polarizada: poseen un polo A y un polo V
que definen una entidad informativa, el eje A-V que, desde el punto
de vista terico, puede asimilarse a una entidad vectorial. Algunos
autores sin embargo coinciden en proponer que para el caso de los
mamferos el eje A-V no posee el mismo valor informativo que en
los animales inferiores. En los mamferos su importancia estara
restringida a la organizacin espacial de la CH necesaria para la
realizacin de una meiosis espacialmente organizada y se ha
propuesto la designacin de eje meitico. Con respecto a la
importancia del concepto de polaridad y las evidencias
experimentales de su existencia, vase SCPolaridad de la CH y
organizacin citoplasmtica. Evidencias experimentales y SC
2.9. La no equivalencia de las blastmeras del E4c de los
mamferos. En general, la existencia del eje A-V es revelada
estructuralmente por a) la distribucin organoides, b) la distribucin
de inclusiones subcelulares, c) las diferencias regionales en la
corteza y d) la distribucin asimtrica de diversos productos
gnicos.
Si bien existen muchas observaciones e ideas acerca de la
instalacin de la polaridad, no existe una explicacin universal
satisfactoria sobre su gnesis en las CH. No queda claro si es la
distribucin asimtrica de los elementos mencionados lo que instala
la polaridad o si, por el contrario, tal distribucin es la manifestacin
de una polaridad instalada por factores organizativos an no
detectados.

Existen experiencias clsicas sobre estas preguntas:

1) En los erizos de mar, que poseen CH grandes, la centrifugacin

de ovocitos permite alterar la organizacin espacial del citoplasma
desplazando los organoides e inclusiones citoplasmticos de sus
posiciones normales. El procedimiento hace que los elementos
citoplasmticos se desordenen y estratifiquen.

2) Si se deja el ovocito en reposo, durante un cierto tiempo, los

elementos citoplasmticos se reordenan y vuelven a sus posiciones
originales. El resultado sugiere que la disposicin de los organoides
e inclusiones citoplasmticos depende de algn elemento o
elementos que no fueron afectados por la centrifugacin.

3) Si el vulo de erizo de mar es centrifugado y a continuacin

fecundado, con sus elementos citoplasmticos desordenados, el
desarrollo embrionario no se altera. Este resultado indica que el
patrn de organizacin del ovocito, necesario para dirigir el
desarrollo normal, no se altera aun cuando sus organoides e
inclusiones hayan sido desplazados de su ubicacin normal.

4) La centrifugacin no modifica la posicin de los grnulos y

vesculas que se encuentran en la corteza, lo que ha hecho postular
que la organizacin del vulo podra depender de molculas
asociadas a la organizacin del citoesqueleto cortical que es la
regin del ovocito que posee la estructura y configuracin ms
estable.

SC 2.8. Es la segmentacin rotacional de las CH de mamferos

esencial para el desarrollo normal? V. Flores

En muchos mamferos, a diferencia de la mayora de las otras

especies de vertebrados, la segmentacin es holoblstica y
rotacional. El primer trmino alude a que la CH y las siguientes
blastmeras realizan citocinesis completa. El trmino rotacional
alude al modo como se orienta en el espacio el segundo plano de
clivaje; vale decir el plano de divisin de las dos primeras
blastmeras. En la primera divisin el plano de clivaje es meridional
(contiene al eje meitico). En la segunda divisin, el plano de
clivaje es meridional en una de las blastmeras pero es
ecuatorial en la otra. Existe una inclinacin de 90 entre dichos
planos y a dicha caracterstica se ha denominado rotacional.
La posicin del primer plano de clivaje depende de dos puntos de
referencia, la ubicacin del segundo glbulo polar que se mantiene
comunicado con la CH por un puente citoplasmtico y la posicin
del cono de fertilizacin que queda en la corteza de la CH en el sitio
a travs del cual penetra el espermatozoide. En un porcentaje alto
de casos (75%), el primer plano de segmentacin pasa cerca de
estos dos elementos. Con frecuencia ocurre que estos dos
elementos quedan en una de las blastmeras. Se ha mostrado que
la blastmera que posee el cono de fertilizacin que contiene
elementos que se hallaban en la membrana del espermatozoide, y
quizs otros elementos o la mayor parte de ste posee
ciclosproliferativos ms breves y se divide antes que la otra. A
dicho fenmeno se ha denominado ventaja proliferativa. Por otro
lado, dicha blastmera posee los elementos de referencia que
condicionan la posicin del plano de clivaje y, con alta frecuencia,
se divide nuevamente segn un plano de clivaje meridional. La
otra blastmera, la que se divide ms tarde, en general lo hace
segn un plano de segmentacin ecuatorial. A este tipo de patrn
de segmentacin se ha denominado ME (primero Meridional-
segundo Ecuatorial) y tiene como caracterstica que el embrin del
E4c es tetradico.

Fig. SC 2-8-1. Embriones de E4c resultantes de las tres

modalidades de segmentacin. A. La modalidad ME origina dos
blastmeras AV, una blastmera A (animal) y una V (vegetativa). B.
La modalidad MM origina cuatro blastmeras AV. C. La modalidad
EE origina dos blastmeras A y dos V. Descripcin en el texto.

Aparte de estas diferencias entre las dos primeras blastmeras,

existen otras que permiten considerar que no son exactamente
equivalentes (SC 2-9. La no equivalencia de las blastmeras del
E4c de los mamferos), lo que hace suponer que tales elementos
no slo instalan un sistema de referencia para los planos de clivaje
sino que tambin constituyen un sistema de referencia necesario
para la correcta organizacin de ciertos eventos del desarrollo. Esta
no equivalencia slo es puesta de manifiesto cuando las diferentes
blastmeras son puestas a desarrollar unas independientemente de
las otras. Cuando las cuatro primeras blastmeras estn juntas
conformando un sistema de desarrollo con capacidad regulativa, no
se advierten diferencias significativas en su capacidad de desarrollo
hasta el momento de la primera determinacin.
Pese a que la posicin de unas blastmeras respecto de otras
parece ser un factor fundamental para el desarrollo, dichas
posiciones relativas no son un factor esencial, en tanto las
blastmeras se hallen juntas. Tanto es as que, en las especies que
poseen segmentacin rotacional, no necesariamente todas las CH
efectivamente se segmentan rotacionalmente. En el ratn, que
posee segmentacin rotacional, slo un 81% de las CH segmentan
segn dicha modalidad. Existe un 11% de casos en los que las dos
primeras blastmeras se dividen segn un plano de clivaje
meridional (patrn denominado MM) y un 8% de casos en los que
ambas se dividen segn planos ecuatoriales (patrn EE). En los tres
casos, las posiciones relativas de las cuatro primeras blastmeras
son diferentes. Sin embargo, en todos los casos, el desarrollo
puede ser normal aunque existen diferencias estadsticas
significativas en la viabilidad de los embriones originados segn
estos tres tipos diferentes de patrones de segmentacin. Este
hecho no sorprende si se considera que los embriones tempranos
de mamferos, hasta el momento de la primera determinacin,
constituyen sistemas con capacidad regulativa. Es probable que, en
tanto alguna o algunas de las blastmeras presentes operen como
sistema de referencia para las otras, el sistema posea la capacidad
de organizarse y desarrollar normalmente. De todos modos,
estadsticamente puede mostrarse que el tipo de segmentacin EE
compromete el desarrollo ya que un porcentaje significativamente
menor de estos embriones llega al final del desarrollo.

Estos experimentos sugieren que existe una tendencia,

representada por una mayor probabilidad de ocurrencia, a la
produccin del tipo de segmentacin ME y EM, pero que tales
patrones no estn rigurosamente definidos. Los resultados tambin
sugieren que la formacin del embrin de E4c tetradrico no es
indispensable ya que los embriones resultantes de los otros tipos de
segmentacin tambin pueden desarrollarse normalmente hasta el
final. Sin embargo, los embriones tienen diferencias representadas
por la diferente probabilidad de llegar al final del desarrollo y
producir un individuo normal. Diversos estudios estadsticos
muestran que el 91% de los embriones tetradricos (patrones de
segmentacin ME y EM) se desarrollan hasta el final y originan
embriones normales. Una proporcin menor, pero alta, (85%) de los
embriones resultantes de segmentaciones MM llegan al final del
desarrollo. Sin embargo, una proporcin significativamente menor,
de slo 35%, de los embriones resultantes de segmentaciones del
tipo EE llega al final del desarrollo.

SC 2.9. La no equivalencia de las blastmeras del E4c de los

mamferos. V. Flores, M. Rapacioli

En erizos de mar, anfibios y otros vertebrados, la manifestacin ms

clara de polaridad animal-vegetativa (A-V) es la diferencia en las
tendencias de desarrollo exhibidas por las blastmeras de los
hemisferios A y V. Cuando los hemisferios A y V son separados y
cultivados en forma aislada, las blastmeras del hemisferio A
tienden a generar tejidos ectodrmicos, en tanto que las del V
tejidos endodrmicos. Adems ninguno de ambos conjuntos de
blastmeras es capaz de completar el desarrollo (SC 2.5. Los
mamferos poseen CH de regulacin. La importancia de la
polaridad A-V en los experimentos de merotoma de la CH).
Experimentos de disociacin y reasociacin de blastmeras de
embriones de ratn realizados en el E4c muestran que, aunque el
embrin posea capacidad regulativa, las cuatro blastmeras no son
equivalentes desde el punto de vista de sus comportamientos de
desarrollo y quiz desde el punto de vista de sus capacidades para
organizar el desarrollo de las dems.
Las blastmeras de embriones de E4c resultantes de
segmentaciones rotacionales se disponen en el espacio como se
ilustra en la figura SC 2-9-1. Las blastmeras ubicadas en las
posiciones 1 y 2 de dicha figura son hijas de la blastmera que en el
E2c posee ventaja proliferativa y se divide meridionalmente, vale
decir, la blastmera que luego de la divisin de la CH retiene los
elementos que sirven de referencia para la segmentacin: el 2.
glbulo polar y el cono de fertilizacin. Las blastmeras ubicadas en
las posiciones 3 y 4 son las hijas de la blastmera que perdi dichos
elementos de referencia. Una de ellas (3) tiene cierta relacin de
cercana con el polo meitico (lugar por donde se eliminan los
glbulos polares) en tanto que la otra (4) pierde toda vinculacin
con dicho polo.
Dado que las blastmeras conforman un embrin con capacidad
regulativa, durante el desarrollo normal no se advierten diferencias
en la potencia evolutiva de las blastmeras hasta que ocurre la
primera determinacin. Sin embargo, las experiencias de
disociacin y reagregacin de blastmeras ofrecen indicios de que,
al menos desde el punto de vista informativo u organizativo, no son
equivalentes. Esta no equivalencia slo es puesta de manifiesto
cuando las blastmeras que se hallan diferentemente posicionadas
son puestas a desarrollar independientemente de las otras.

Los experimentos de disociacin y reasociacin de blastmeras

muestran que al menos existen tres tipos diferentes de blastmeras
desde el punto de vista de sus capacidades para promover el
desarrollo normal:

a) Si se generan embriones quimricos reasociando tres

blastmeras de tipo 1 o 2 (blastmeras A-V) y se los deja
evolucionar, originan blastocistos normales que, cuando son
transferidos al tero de ratones hembra en estado apropiado para la
implantacin, la mayora de ellos (70-90%) llegan al final del
desarrollo.
b) Si se generan embriones quimricos reasociando blastmeras de
tipo 3 (blastmeras A), estos embriones slo llegan hasta el estado
de mrula o tardan ms tiempo en llegar al estado de blastocisto y
poseen un nmero escaso de clulas. Una vez transferidos al tero,
slo un 27% llega al final del desarrollo.
c) La generacin de embriones quimricos reasociando
blastmeras de tipo 4 (blastmeras V) lleva a un peor resultado. En
su mayora detienen su desarrollo en estado de mrula u originan
blastocistos con un nmero inferior de clulas y de desarrollo ms
lento. Luego de ser transferidos al tero, ninguno alcanza el final del
desarrollo.
Fig. SC 2-9-1. Ilustra la generacin y evolucin de embriones
quimricos originados por medio de la reasociacin de un nico tipo
de blastmeras (AV, A o V) obtenidas a partir de la disociacin de
embriones de E4c tetradricos. Modificado de Zernicka-Goetz,
2005.

Es importante remarcar que las diferencias mencionadas entre las

blastmeras 1 y 2, por un lado, y la 3 y la 4 por otro, no se refieren a
diferencias en las potencias citogenticas entre ellas. Esto se
muestra por el hecho de que todas poseen la capacidad de
determinarse en sentido embrioblstico y trofoblstico y que tal
determinacin ocurre recin entre los E8c y E16c.

La no equivalencia puede ser interpretada en trminos de

diferencias en la capacidad informativa de las blastmeras. Es
probable que las blastmeras que retienen elementos que sirven de
referencia poseen mayor capacidad informativa (mayor capacidad
de organizar los CCD de las blastmeras del embrin) que las
blastmeras que pierden dichos elementos.

La no equivalencia podra poseer un papel en el establecimiento de

la polaridad cfalo-caudal del embrioblasto. Sobre todo si se
considera que, mayoritariamente, las clulas que lo integran derivan
de la blastmera que en el E2c posee los elementos de referencia
(2. glbulo polar y cono de fertilizacin). Vale decir, derivan de la
blastmera que posee ventaja proliferativa y se divide
meridionalmente.

Se han hallado diferencias en el nivel molecular entre las

blastmeras del E4c resultantes de segmentaciones rotacionales de
ambos tipos (casos ME y EM) que podran explicar, al menos en
parte, estas diferencias. Las blastmeras del E4c que originan las
clulas del polo embrionario poseen mayores niveles de metilacin
de argininas de la histona H3 (SC Son las blastmeras del
embrin del E4c diferentes desde el punto de vista de su
potencia citogentica? Muchos resultados conflictivos y una
hiptesis conciliadora). Tambin se observ que la
sobreexpresin de la enzima metiltransferasa especfica de
argininas de la histona H3 en una blastmera dirige a las clulas
derivadas de ella en sentido embrioblstico y genera un incremento
en la expresin de los factores de transcripcin Nanog y Sox2.

GASTRULACIN
SC 2.10. Concepto de territorio presuntivo. Su base
experimental. Consideraciones tericas. V. Flores

Es ste un concepto clsico que surgi a raz de a) observaciones

realizadas por medio de marcaciones supravitales (*) de clulas de
diferentes regiones del epiblasto pregastrular con el objeto de
construir mapas de destinos de stas y b)resultados de trasplantes
de clulas de un lugar a otro del epiblasto pregastrular de
embriones de pollo.
La marcacin de clulas de diferentes regiones del epiblasto
pregastrular con colorantes supravitales permite ver que las clulas
se desplazan, de modo tpico y constante, desde sus sitios
originales (sitios en los que fue puesta la marca) a otras regiones
embrionarias. Resultados similares se obtuvieron en muchas
especies.

Estos resultados revelan la existencia de diferentes patrones tpicos

de desplazamientos propios de diferentes regiones del epiblasto
pregastrular. En consecuencia, permiten identificar, antes de la
gastrulacin, territorios que se distinguen slo por los patrones de
desplazamiento que exhiben durante la gastrulacin las clulas que
los ocupan.

Dependen las diferencias en los patrones de migracin de

diferencias intrnsecas, sin manifestacin morfolgica, entre las
clulas? Se hallan las clulas de diferentes regiones determinadas
a migrar diferentemente? Se hallan las clulas de las diferentes
regiones determinadas a formar los derivados que originan? Vale
decir, poseen diferente potencia las clulas de diferentes
regiones? Diversas experiencias de trasplante de clulas, de una
regin a otra del epiblasto, muestran que las clulas trasplantadas
exhiben el comportamiento migratorio correspondiente a la regin a
la cual son trasplantadas. Es decir, se comportan de un modo
acorde con su nueva posicin. Por ejemplo, si las clulas del
territorio presuntivo (TP) del ectodermo epidrmico son
trasplantadas al TP del mesodermo, ellas migran como las clulas
de su nueva regin, pasan a ubicarse en la hoja media del
embrin y en esa ubicacin se diferencian en clulas
mesodrmicas. Vale decir, adquieren un modo de evolucin,
dependiente de su nueva posicin, que no hubieran podido exhibir
en su ubicacin original. Estos resultados muestran que las clulas
de diferentes regiones, aunque poseen diferentes destinos,
comparten parte de su potencia evolutiva.

Las regiones identificadas en el epiblasto fueron denominadas

territorios presuntivos con la idea de enfatizar que no es en las
clulas donde radican las diferencias que las llevan a migrar
diferentemente, sino en los lugares que ocupan dentro del epiblasto.

Este tipo de resultados ha permitido postular que:

a) El comportamiento migratorio de las clulas epiblsticas es una

propiedad dependiente de posicin y no de diferencias intrnsecas
entre clulas. Vale decir, las diferencias radican en el lugar que
ocupan las clulas.
b) Las clulas de algunos TP son equipotentes. Es decir, no estn
determinadas a originar los derivados tpicos del TP que ocupan
sino que comparten su potencia con clulas de otros territorios.
c) El hecho de que las clulas de un TP originen tpicamente ciertos
derivados se debera a que, al ocupar un cierto TP, realizan los
desplazamientos tpicos de ste, finalizan la gastrulacin en un
cierto lugar y all se determinan en relacin con los estmulos que
reciban. Cuando las clulas son trasplantadas a otro TP, siguen otro
camino, se detienen en otro sitio, reciben estmulos determinantes
distintos y se diferencian en los tejidos embrionarios
correspondientes al TP al cual fueron trasplantadas.
La nocin de equipotencia de los TP, extrada de las experiencias
de trasplante de clulas de TP, es aplicable slo a aquellas
poblaciones celulares cuya funcin es estructural. Se trata de la
potencia para originar diferentes tipos celulares. Cuando se trata de
TP de estructuras axiles, como el TP de la notocorda, cuyo papel es
de carcter informativo y sirve como sistema de referencia que
organiza en torno suyo a los dems tejidos embrionarios, las
conclusiones de los experimentos de trasplante no son
comparables. El ndulo de Hensen, dado su carcter de
organizador, cumple dicha funcin en cualquier lugar en se halle.

Desde el punto de vista terico podra decirse que la notocorda no

puede ser cambiada de lugar pues, ejerciendo sus clulas el rol de
sistema de referencia para todas las dems, cualquiera sea el lugar
que ocupe opera como organizador y punto de referencia que
especifica el lugar de los restantes territorios.

As, el concepto de TP enfatiza la idea de propiedad dependiente de

posicin; jerarquiza la idea de lugar o dominio que ocupan las
clulas, antes que las clulas mismas. De ah la designacin de
territorio de en lugar de poblacin celular precursora de.
Los desplazamientos, y otros CCD, que realizan las clulas durante
la gastrulacin dependen de fenmenos de control que operan, por
un lado, en el dominio del tiempo y, por otro, en el del espacio.
stos ltimos dependen de las caractersticas de la matriz
extracelular que rodea a las clulas y de las seales que a travs de
ella difunden desde las poblaciones celulares organizadoras.

La hiptesis ms aceptada para explicar la asimetra en la fuerza

interfacial clula-sustrato (Fif c-s) necesaria para toda migracin
celular dirigida es la distribucin asimtrica (en forma de gradientes
temporales y/o espaciales) de los componentes macromoleculares
de la matriz extracelular que median la adhesin (SC
2.11. Comportamientos moleculares involucrados en la
migracin celular dirigida; SCEl concepto de migracin celular
dirigida. Papel de desarrollo. El concepto de haptotaxis. Papel
del citoesqueleto y de la fuerzas interfaciales clula-sustrato
(Fif c-s); SCCaractersticas de la clula migratoria. Los sitios de
adhesin clula-sustrato son tambin dispositivos para sensar
el ambiente; SC 0.20. La intensidad de la fuerza interfacial
clula-matriz extracelular participa en la regulacin de la forma
celular y la migracin celular).
Con respecto a cmo podra controlarse la gastrulacin en el
dominio del tiempo, se ha postulado que el proceso estara regulado
por un control temporal de (a) la aparicin de la capacidad
migratoria y (b) la aparicin de molculas de adhesin en la matriz
extracelular:
(a) Lo primero se basa en que, en algunas especies (anfibios), se
ha visto que las clulas embrionarias disociadas y cultivadas desde
antes de que se inicie la gastrulacin (estado pregastrular) se
mantienen inmviles hasta el momento que correspondera al inicio
de la gastrulacin. En ese momento, las clulas disociadas y
cultivadas adquieren capacidad migratoria. Este resultado sugiere
que en el estado pregastrular las clulas ya estaban
programadas para iniciar desplazamientos en el momento de la
gastrulacin. En dichas condiciones experimentales, los
desplazamientos que realizan las clulas son desorganizados pues
se encuentran en un medio de cultivo en el que no existe una
organizacin espacial definida del sustrato.
(b) Lo segundo est avalado por el hecho de que observaciones
realizadas en embriones de diversas especies muestran una
distribucin regional caracterstica de molculas de la matriz
extracelular respecto de las cuales las clulas poseen en general
alta afinidad (laminina, fibronectina, etc.). La distribucin que
algunas de ellas exhiben sugiere que existen variaciones
temporales y espaciales que podran instalar los gradientes en la
intensidad de las Fif c-s de adhesin necesarios para guiar los
movimientos celulares. Por otro lado, adems de encontrarse en el
lugar adecuado, aparecen y desaparecen de esas regiones segn
patrones cronolgicos coherentes con los de los movimientos
celulares. As, se ha postulado que las clulas seguiran
corredores marcados por las molculas de la matriz extracelular.
Los avances biotecnolgicos permiten en la actualidad generar
medios de cultivo con sustratos de composicin qumica definida y
distribuidos en el espacio en forma de corredores. En estas
condiciones se constata que las clulas migratorias transitan
preferentemente a travs de los corredores ocupados por
macromolculas que estimulan la migracin.
Pese a la dificultad en compatibilizar todos los datos presentados,
desde el punto de vista didctico, podra elaborarse un concepto de
TP que integre las siguientes pautas:

Un territorio presuntivo
a) Corresponde a un dominio o lugar del epiblasto pregastrular
b) ocupado o integrado por clulas con capacidad migratoria
c) Los TP son equipotentes desde el punto de vista citogentico e
histogentico,
d) vale decir, poseen grados de determinacin similares
e) Los TP realizan desplazamientos en forma integrada:
sincronizados en el tiempo y ordenados en el espacio y
f) exhiben patrones de desplazamiento tpicos y constantes para
cada especie y para cada TP, por lo cual,
g) concluyen sus desplazamientos en diferentes regiones del
embrin postgastrular
h) En sus lugares definitivos en el embrin trilaminar sufren
diferentes fenmenos de determinacin dependientes de las
seales determinantes que reciben en cada una de dichas regiones.
Estas seales pueden ser molculas solubles, componentes de la
matriz extracelular, o molculas expuestas en la superficie de otras
clulas.

(*) Se denomina marcacin o tincin supravital al procedimiento que

permite marcar y visualizar a una clula sin comprometer su
sobrevida ni su comportamiento de desarrollo. Permiten el
seguimiento de clulas embrionarias o sus descendientes en
funcin del espacio y/o del tiempo.

SC 2.11. Comportamientos moleculares involucrados en la

migracin celular dirigida. V. Flores

Se denominan procesos de migracin celular dirigidos aquellos en

los que las clulas se desplazan siguiendo trayectos preferenciales
instalados por las condiciones fisicoqumicas del medio en el que se
desplazan. En este tipo de migracin celular, los vectores de
desplazamiento instantneos correspondientes a las diferentes
direcciones del espacio no poseen la misma probabilidad y ello se
debe a que el medio se encuentra espacialmente organizado. Tal
organizacin, en general, consiste en la distribucin asimtrica de
molculas que influyen sobre el desplazamiento.

Como en el caso de cualquier proceso de migracin se

requieren a) molculas del citoesqueleto con capacidad de generar
fuerzas mecnicas que produzcan deformaciones de la superficie
celular como, por ejemplo, filamentos de actina, protenas
asociadas para generar fascculos paralelos separados por una
distancia ptima, miosina-II, etc. La emisin de seudopodios,
filipodios o membranas ondulantes constituye una deformacin y
requiere la operacin de fuerzas.
Las bicapas lipdicas de la membrana plasmtica no poseen la
capacidad de producir presiones ni generar tensiones que puedan
producir deformaciones de la clula y menos an desplazamientos
pues, desde el punto de vista fsico, constituyen un fluido. En
consecuencia, las clulas migrantes poseen sitios de membrana
especializados que consisten en grandes b) complejos
macromoleculares denominados contactos focales. En los
contactos focales, las fuerzas generadas internamente pueden ser
transmitidas al exterior puesto que poseen, entre sus
componentes, c) algunas protenas (vinculina, -actinina, talina,
filamina) que los vinculan fuertemente con el citoesqueleto
y d) protenas que poseen alta afinidad por componentes de la
matriz extracelular (integrinas). As, los contactos focales se
anclan, por un lado, al citoesqueleto y, por otro, a la matriz
extracelular y operan como puntos de apoyo para la operacin de
fuerzas de traccin. Las clulas migratorias tambin poseen en su
superficie e) protenas receptor (FGFR, PDGFR, VEGFR, etc.) que
los habilitan a detectar protenas sealdel medio que estimulan o
regulan la migracin (como factores quimiotcticos, factores de
crecimiento, etc.) y, adems, f) protenas asociadas a
receptores(quinasa de adhesin focal (FAK), quinasa Src), que
inician las vas de sealizacin intracelular involucradas en las
remodelaciones del citoesqueleto necesarios para la migracin.
Con respecto a las molculas del entorno involucradas en el control
de la direccin del movimiento, habitualmente existen g) molculas
que son componentes fijos de la matriz extracelular; estas
molculas conforman una fase slida capaz de operar como puntos
de apoyo para las fuerzas de traccin necesarias para el
desplazamiento; las zonas del embrin que expresan estas
molculas son fcilmente invadidas por ciertas clulas migrantes.
Tambin existen h) molculas de la matriz extracelular y de las
clulas que producen el efecto inverso, vale decir, molculas que
evitan que las clulas puedan adherirse a la matriz extracelular y
que esta pueda servir de apoyo para la migracin. Las zonas del
embrin en las que estas molculas se expresan no pueden
funcionar como sustrato para la migracin y, en consecuencia, las
clulas no ingresan en ellas. Sirven como molculas de exclusin
de ciertos tipos celulares migratorios.
Tambin existen molculas intracelulares que participan en la
reorganizacin del citoesqueleto necesarias para la migracin,
como por ejemplo las protenas nucleadoras que integran el
complejo Arp2/3 (Actin Related Proteins); las protenas que se
unen a las subunidades libres de actina como las protenas
timosina y profilina; protenas que se unen lateralmente a los
filamentos de actina y modifican su estabilidad, como la protena
gelsolina y otras que regulan el ensamblado del citoesqueleto de
actina.
Los procesos de migracin celular habitualmente se acompaan de
proliferacin celular que permite la amplificacin de la poblacin
celular migratoria. Ello se debe a que normalmente, durante el
proceso de migracin, el sistema global se expande y el nmero de
clulas migratorias que parten de un cierto sitio no necesariamente
es similar al nmero de clulas que llegan a destino. Generalmente,
cuando se trata de largos recorridos, las clulas migratorias que
llegan a destino no son las que partieron sino descendientes de
ellas. Este proceso de amplificacin de clulas migrantes tambin
est sometido a control. En general existen molculas seal que
operan como i) factores de mantenimiento o j)factores que
estimulan la proliferacin (factores de crecimiento) a lo largo de
las vas migratorias con sentido biolgico para una cierta poblacin
celular. De esta forma las clulas que van por el camino correcto
son mantenidas y amplificadas. Por el contrario, las que equivocan
el camino no son estimuladas a proliferar ni mantenidas. Ingresan a
la va apopttica y desaparecen. Otro mecanismo tendiente a
garantizar que la mayor parte de las clulas migratorias llegue a
destino y/o no equivoquen el camino es la secrecin
de k) protenas seal quimiotctica. Si las clulas localizadas en
la zona de destino final de las clulas migratorias secretan una
seal quimiotctica, ello genera una mayor probabilidad de que las
clulas lleguen al destino correcto.
Por otro lado, una poblacin celular migratoria no necesariamente
mantiene sus propiedades o capacidades de desarrollo a lo largo de
todo el proceso migratorio. Frecuentemente a lo largo de la va
migratoria que recorren realizan Int c-c con otras poblaciones
celulares y stas pueden modificar sus propiedades de desarrollo.
Tanto es as que existen ejemplos de cambios en el grado de
determinacin de las clulas migratorias que ocurren entre el
momento en que salen del punto de partida y el momento en que
llegan a destino. Tambin existen ejemplos, aunque distintos, que
ilustran el mismo concepto. Hay clulas migratorias que, poseyendo
un punto de partida comn, en el momento de partir poseen similar
grado de determinacin. Pero si esas clulas poseen dos vas
migratorias posibles, las que siguen una de ellas sufren una
determinacin diferente de la que sufren las que siguen la otra va.
Todos estos hechos muestran que la migracin celular, al igual que
otros CCD, se ejecuta y regula epigenticamente, (interactivamente)
y que en buena medida depende de las condiciones fisicoqumicas
del ambiente en el que las clulas se hallen. Estas caractersticas
pueden cambiar en funcin del tiempo, para el caso de las clulas
no migratorias, pero tambin cambian en funcin del espacio (o de
la posicin que ocupan en cada momento) para el caso de las
poblaciones celulares migratorias.

SC 2.12. El concepto de migracin celular dirigida. Papel de

desarrollo. El concepto de haptotaxis. Papel del citoesqueleto y
de las fuerzas interfaciales clula-sustrato (Fif c-s). V. Flores

La migracin celular dirigida es un CCD que se ejecuta

interactivamente con la matriz extracelular y seales difusibles.
Consiste en un desplazamiento o cambio de posicin a) activo
mediado por la operacin de fuerzas generadas por las clulas
migratorias y fuerzas de adhesin interfaciales entre clulas y matriz
extracelular o sustrato (Fif c-s) en el que b) las posibles
direcciones de los vectores instantneos de desplazamiento no
poseen similar probabilidad. La funcin de densidad de
probabilidades de los valores de los ngulos que definen las
direcciones de los vectores de desplazamientos instantneos no
corresponde a una distribucin uniforme ni gaussiana y las series
numricas temporales que representan los cambios de posicin no
corresponden a movimiento browniano estndar sino a otro tipo de
procesos estocsticos denominados correlacionados o con
memoria. Esto significa que existen factores que instalan
correlaciones entre dichos valores y hacen que el proceso no sea
de tipo browniano estndar.
Desde el punto de vista terico, el nico modo de definir la
migracin es como cambio de posicin y ste slo puede ser
registrado con precisin cuando se establece un sistema de
referencia formal. En el caso concreto de poblaciones celulares que
se desplazan en el interior de un sistema de desarrollo pluricelular,
la migracin de una poblacin celular puede implicar muchos
cambios de posicin relativos simultneos con respecto a otras
clulas del sistema. Alguno(s) de tales cambios relativos puede(n)
poseer significado biolgico y otros no. As, adems del cambio de
posicin, la migracin celular puede poseer otros papeles de
desarrollo.

La gastrulacin es uno de los eventos del desarrollo que ms

claramente revela los diferentes roles de desarrollo que puede
poseer la migracin celular. Ilustra cmo los desplazamientos
celulares pueden a) poseer rol morfogentico produciendo cambios
de forma, b) modificar la organizacin espacial de un
sistema, c) facilitar la ocurrencia de Int c-c y cmo stas, a su vez,
pueden d)incrementar la complejidad introduciendo mayor
diversidad celular.
La migracin celular consiste, esencialmente, en el movimiento de
una clula sobre un material biolgico suficientemente rgido como
para actuar como apoyo o sustrato para la operacin de fuerzas. Al
respecto, es posible plantear dos generalizaciones bsicas
aplicables a toda clula con capacidad migratoria:

a) Debe poseer actividad contrctil y ser capaz de realizar

cambios de forma con la produccin de prolongaciones celulares
(aplanadas: lamelipodios; o cilndricas: seudopodios, filipodios).
Estas dos caractersticas dependen de modo fundamental de la
capacidad de remodelar rpidamente el citoesqueleto y generar
fuerzas de intensidad suficiente para producir el cambio de forma
celular y para el movimiento.
b) Debe ser capaz de adherirse al sustrato sobre el cual
migra. Esta capacidad debe ser regulada o modulada. La clula
debe ser capaz de adherirse pero adems de despegarse y volver a
adherirse en algn punto que se encuentra ms adelante en la
direccin del movimiento (SC El concepto de migracin celular
dirigida. Papel de desarrollo. El concepto de haptotaxis. Papel
del citoesqueleto y de la fuerzas interfaciales clula-sustrato
[Fif c-s]).
Para el caso de los movimientos celulares con papel morfogentico,
a estas dos generalizaciones cabra agregar una tercera referida a
que aqullos deben cumplirse integradamente con otros
fenmenos. Vale decir, deben estar sujetos a algn tipo de control
temporal y espacial. Se han descrito muchos CMD involucrados en
la regulacin de la migracin celular dirigida (SC
2.11Comportamientos moleculares involucrados en la
migracin celular dirigida). La mayora de estos CMD
corresponden a interacciones denominadas genricamente
interacciones clula-matriz extracelular (Int c-mec) o clula-sustrato
(Int c-s) que poseen como base molecular a) la interaccin entre
componentes macromoleculares pertenecientes a las dos
superficies interactuantes (la superficie externa de la membrana
plasmtica y la matriz extracelular) y b) las protenas difusibles que
operan como seal (agentes quimiotcticos), o como factores de
crecimiento y mantenimiento para las clulas migratorias, protenas
enzimticas (sus activadores e inhibidores) que procesan la matriz
extracelular y que pueden estar tanto en forma libre o adheridos a
las superficies mencionadas.
La idea de que la migracin celular puede ser resultado de la accin
de fuerzas interfaciales entre la clula y el sustrato (Fif c-s),
fenmeno llamado haptotaxis, data de muchos aos. Esta nocin
proviene de la Fsica pero ha sido modificada y enriquecida a partir
de estudios sobre la dinmica de la membrana plasmtica durante
la migracin, la estructura del citoesqueleto y la composicin
macromolecular de la superficie celular y de la matriz extracelular.
La idea bsica del concepto de haptotaxis se bas en la hiptesis
de que la energa necesaria para producir el movimiento es
resultado de la operacin de Fif c-s de atraccin. De acuerdo con
esta concepcin, el desplazamiento real de una clula sera un
fenmeno fundamentalmente pasivo.
Diversos estudios sobre migracin dirigida permiten plantear el
concepto de haptotaxis de un modo ms amplio. Se sabe que las
clulas migratorias se adhieren al sustrato y que desarrollan
respecto de ste una Fif c-s medible experimentalmente. La
intensidad de la Fif c-s depende de la existencia, en la superficie de
la membrana plasmtica, de molculas especficas que poseen
fuerte afinidad por componentes macromoleculares especficos de
la matriz extracelular. La Fif c-s de atraccin puede ser
biolgicamente definida como resultado de afinidades especficas
entre grupos moleculares pertenecientes a ambas superficies. Sin
embargo, no se considera que la Fif c-s genere la fuerza necesaria
para el movimiento.
Numerosos estudios de la dinmica de la membrana plasmtica del
frente de avance de clulas migratorias muestran una intensa
actividad con produccin de prolongaciones celulares (lamelipodios,
seudopodios, filipodios), a veces muy ramificadas, que se
extienden, realizan movimientos exploratorios de barrido sobre el
sustrato, se fijan a ciertos puntos de ste y se adhieren o, por el
contrario, no se fijan y se retraen. Varios estudios ultraestructurales
y moleculares sobre la dinmica del citoesqueleto indican que ste
es el elemento responsable tanto de la emisin como de la
retraccin de las prolongaciones celulares.

Con el objeto de ilustrar qu papel corresponde al citoesqueleto

(emisin y retraccin de seudopodios y contractilidad
citoplasmtica) y qu papel corresponde a la Fif c-s (adhesividad
por el sustrato), analicemos un ejemplo simplificado (Fig. SC 2-12-
1). Consideremos una clula migratoria ubicada en la regin 2 que
tiene la posibilidad de emitir seudopodios distribuidos al azar sobre
las regiones circundantes 1 y 3. Desde el punto de vista terico,
esto implica que los valores de los ngulos (respecto del eje x) de
las rectas que unen el centro de la clula con los puntos extremos
de los seudopodios poseern una funcin de densidad de
probabilidades uniforme. Vale decir, los puntos de emisin y los
ejes de crecimiento de seudopodios tendrn distribucin isotrpica
(similar probabilidad en todas las direcciones del espacio).
Supongamos a continuacin que la intensidad de la Fif c-s es
mayor en la regin 3 que en las regiones 1 y 2. Cuando los
seudopodios que hayan tomado contactos en dichas regiones se
retraigan, aun cuando las fuerzas generadas por la retraccin de los
seudopodios posean una distribucin isomtrica, la clula tender a
despegarse de las regiones 1 y 2 y tender a desplazarse hacia la
regin 3.

Fig.SC 2-12-1. Modelo simplificado que ilustra cmo la asimetra

espacial en la intensidad de la Fif clula-sustrato puede dirigir el
movimiento celular, aun cuando la probabilidad de emitir
seudopdos est uniformemente distribuida en el espacio.
(Descripcin en el texto).

SC 2.13. El papel de la polaridad planar y de la intercalacin

celular en la formacin de la lnea primitiva. N. Fosser
La lnea primitiva es un conglomerado de clulas epiblsticas y el
primer signo del inicio de la gastrulacin. Aparece en la zona caudal
del disco embrionario y luego incrementa su longitud en sentido
ceflico.

En el blastodermo de pollo, previamente al inicio de la formacin de

la lnea primitiva, las clulas realizan extensivos movimientos
conocidos como de polonesa (SC 2.14 La transformacin de
ejes desde la fase pregastrular a la organizacin del embrin
cilndrico). Estos movimientos son interpretados como
reorganizaciones celulares en el contexto de un tejido epitelial con
polaridad celular planar (PCP). Entre las consecuencias de estos
movimientos pregastrulares se encuentra la formacin de la lnea
primitiva. Sin embargo, poco se sabe sobre los comportamientos
celulares involucrados en su formacin. Las hiptesis propuestas
para explicar la morfognesis de la lnea primitiva se centraban en
la proliferacin celular y el reclutamiento por quimiotaxis. Sin
embargo, la duracin de los ciclos celulares es mayor que el tiempo
que insume la formacin de la lnea primitiva. Con respecto a los
factores quimiotcticos que podran guiar a las clulas, no se ha
encontrado an ninguno que permita explicar acabadamente los
fenmenos que llevan a la aparicin de la lnea primitiva.
Recientemente, el uso de tcnicas que permiten seguir a clulas
individuales ha permitido registrar sus cambios de posicin y sus
trayectorias en el epiblasto durante los instantes previos al inicio de
la gastrulacin. Durante la polonesa epiblstica, las clulas
convergen hacia la lnea media en la zona caudal del disco (Fig. SC
2-13-1). En la zona medial donde se origina la lnea primitiva, las
clulas que convergen desde las mitades derecha e izquierda del
disco se intercalan unas con otras, mientras que las que se
encuentran por fuera de esta zona, no presentan este
comportamiento. Esta intercalacin de clulas epiblsticas explica la
extensin por convergencia de la lnea primitiva en sus orgenes. La
zona del epiblasto donde estos comportamientos celulares se
inician coincide con la zona de la hoja inferior en donde se inicia la
formacin del hipoblasto.
Fig. SC 2-13-1. Convergencia e intercalacin de clulas epiblsticas
durante la formacin de la lnea primitiva. A. Movimientos
pregastrulares (polonesa) de clulas epiblsticas. B. Ilustra la
convergencia e intercalacin de clulas que deriva en la formacin
de la lnea primitiva. C-E. Detalle que muestra cmo se produce la
intercalacin de clulas en la lnea media.

Los experimentos de rotacin planar del hipoblasto (rotacin en el

plano de la hoja sin invertir la posicin de sus caras dorsal y
ventral) producen alteraciones morfolgicas de la lnea primitiva y
expresin ectpica de molculas relacionadas con las vas de
sealizacin involucradas en la PCP. Para comprobar si estas vas
son importantes en la intercalacin observada durante la formacin
de la lnea primitiva, se realizaron experimentos de prdida de
funcin. Los resultados mostraron que estas vas son esenciales
para la formacin de la lnea primitiva, por lo que se concluye que la
PCP es requerida para los movimientos de polonesa y los
movimientos de intercalacin que dan origen a la lnea primitiva.
SC 2.14. La transformacin de ejes desde la fase pregastrular a
la organizacin del embrin cilndrico. N. Fosser

Previamente a la formacin de la lnea primitiva, las clulas del

epiblasto de los embriones amniotas realizan movimientos
conocidos como polonesa o pregastrulares. stos pueden
descomponerse, a su vez, en dos: a) el primero lo realizan clulas
que convergen hacia la lnea media, siguiendo el borde posterior del
disco bilaminar; y recorren un camino adyacente a la hoz de
Koller; b) el segundo es un movimiento de elongacin hacia el
extremo ceflico, a lo largo de la zona medial del disco embrionario;
este movimiento es realizado por las clulas que, luego de
converger, llegan a la zona medial. Un movimiento similar realizan
las clulas de la hoja ventral del disco, el hipoblasto. Este segundo
movimiento coincide con el surgimiento y extensin de la lnea
primitiva.
Numerosos estudios han permitido la construccin de mapas de
especificacin y de destino de las clulas epiblsticas que muestran
aspectos llamativos de su organizacin previa a la formacin de la
lnea primitiva. As pudo definirse que las clulas que originalmente
se encuentran en la zona ceflica y lateral del disco quedan en
posicin posterior y medial al trmino de los movimientos de
polonesa. Por otra parte, las clulas que lideran el movimiento de
elongacin a lo largo de la zona medial tendrn como lugar
definitivo una posicin ceflica al extremo anterior de la lnea
primitiva y tendrn destino dorsal (placa neural, ectodermo
epidrmico, organizador y sus derivados). Las rezagadas que
siguen a las lderes, pero quedan en posiciones caudales a las
primeras tendrn un destino ventral (meso-endodermo) (Fig. SC
2-14-1).
Fig. SC 2-14-1. Esquemas que ilustran la ubicacin aproximada de
los diferentes territorios presuntivos de poblaciones celulares
mesodrmicas (rosa) y neurales (gris) en embriones pregastrulares
de edad creciente. Al finalizar los movimientos pregastrulares, los
territorios de poblaciones celulares que luego de la gastrulacin
ocuparn posiciones dorsales se hallan en posicin ceflica al
organizador; los territorios de poblaciones celulares que luego de la
gastrulacin ocuparn regiones ventrales se hallan en posicin
caudal. El asterisco (*) marca la posicin del extremo ceflico de
la lnea primitiva.

Estos resultados muestran que la descripcin de la organizacin del

embrin bilaminar pregastrular, en trminos de una hoja dorsal y
una ventral, no describe fielmente el destino futuro de las clulas
que lo componen. Las clulas que luego de la gastrulacin
adoptarn posiciones dorsales y ventrales se hallan todas en el
plano del epiblasto: las futuras clulas dorsales, en posicin
ceflica al futuro organizador, y las futuras clulas ventrales,
caudales a l.

As, en el caso del embrin bilaminar, el uso de los trminos dorsal

y ventral, para aludir a sus dos hojas, no tiene el mismo sentido que
cuando se los usa para describir la organizacin anatmica bsica
que se alcanza ms tarde. Resulta claro que las poblaciones
celulares que conformarn estos ejes embrionarios no se
encuentran presentes sino hasta que se haya avanzado en los
movimientos gastrulares y luego, durante la regresin caudal de la
lnea primitiva y el nodo.

Incluso luego del plegamiento embrionario, las poblaciones

celulares mencionadas como dorsales y ventrales no dan
encarnadura al eje dorso-ventral anatmico, sino a la polaridad
representada por los tejidos que actan en la vida vegetativa
(internos, endo, dentro) y los de vida de relacin (externos, ecto,
fuera).

SC 2.15. El papel del hipoblasto en la gastrulacin y en la

induccin neural. N. Fosser

El hipoblasto es la hoja ventral (o inferior, de ah el uso del prefijo

hipo en su designacin) del disco embrionario bilaminar
pregastrular de las aves. La mayora de sus clulas tienen un
destino extraembrionario. Es considerada una poblacin celular
homloga al endodermo visceral de los embriones de ratones y
roedores.

Las interacciones recprocas entre el epiblasto y el hipoblasto han

sido investigadas desde hace largo tiempo. En el ao 1933, C.
Waddington inform que la rotacin planar del hipoblasto (rotacin
en el plano de la hoja sin invertir la posicin de sus caras dorsal y
ventral) produca alteraciones morfolgicas de la lnea primitiva.

Ms recientemente se observ que a) la eliminacin del hipoblasto

tiene como resultado la formacin de varias lneas primitivas;
adems, b) durante el desarrollo, el hipoblasto es reemplazado,
desde el extremo caudal hacia el ceflico del disco embrionario,
por otro tejido extraembrionario conocido como endoblasto o
hipoblasto secundario. El desplazamiento, en sentido ceflico, de
las clulas hipoblsticas, debido a la ocupacin de la regin caudal
de la hoja ventral por el endoblasto, coincide temporal y
espacialmente con la aparicin de la lnea primitiva en el epiblasto.
Los dos hechos mencionados sugieren que el hipoblasto tiene un
efecto inhibitorio sobre la formacin de la lnea primitiva.

Algunos estudios en los que se silencia o sobreexpresa en forma

ectpica la protena de secrecin Cerberus (un antagonista de la
protena seal Nodal, expresada en el epiblasto) sugieren que la
protena Cerberus producida por el hipoblasto est involucrada en la
inhibicin de la formacin del surco primitivo. El desplazamiento en
sentido ceflico del hipoblasto por parte del endoblasto libera al
epiblasto de esta accin inhibitoria y, adems, provee un control
temporoespacial del proceso de formacin de la lnea
primitiva/surco primitivo. La protena Cerberus tiene tres sitios de
unin o cabezas (de ah su designacin Cerberus) con papeles
de desarrollo que antagonizan a las protenas seal Nodal, Wnt y
Bmp. Estos sitios de unin fijan a las tres protenas, impiden la
unin a sus respectivos receptores e inhiben sus correspondientes
vas de sealizacin. Las molculas sealadas participan en
general, entre otros procesos, en estimular la formacin del surco
primitivo, de la notocorda y otras poblaciones que participan en el
desarrollo de las regiones caudales del tubo neural (cerebro
posterior y mdula) y del tronco. As, la expresin de la protena
Cerberus contribuye a inhibir el desarrollo de estructuras troncales y
estimular el desarrollo de estructuras ceflicas. Todos estos
fenmenos ocurren tempranamente, durante la gastrulacin (Fig.
SC 2-15-1).
Fig. SC 2-15-1. Modelo de interacciones celulares durante las
etapas tempranas de la gastrulacin. Se ilustra la mitad izquierda
de discos embrionarios de edades crecientes. Caudal a la derecha.
A. En estados tempranos, el hipoblasto secreta Fgf8, que promueve
la expresin transitoria de los factores de transcripcin proneurales
Erni y Sox3, y Cerberus, que inhibe la accin de Nodal, que se
secreta en el epiblasto caudal. B. El hipoblasto comienza a ser
desplazado por el endoblasto desde la regin caudal. En la regin
del epiblasto suprayacente, Nodal acta sinrgicamente con Fgf8 y
promueve la expresin de Brachyury (Bra) y Tbx6l, que promueven
la formacin de la lnea primitiva. C. La estimulacin del epiblasto
por Fgf8 por un tiempo prolongado promueve la expresin de
Churchill en el epiblasto. D. Churchill promueve la expresin de
Sip1, que inhibe la expresin de Bra y Tbx6L en la regin ceflica
del surco primitivo inhibiendo el ingreso. Las clulas epiblsticas
adyacentes al organizador formarn la placa del piso.

La gastrulacin consiste, bsicamente, en una reorganizacin de las

clulas del embrin. Durante su desarrollo, parte de ellas abandona
la hoja dorsal merced a una T e-m y ulterior migracin. Si la T e-m
no estuviera sometida a regulacin, el desarrollo podra alterarse
por la excesiva prdida de clulas epiblsticas, necesarias tambin
para la generacin del sistema nervioso.

El desplazamiento del hipoblasto hacia el extremo ceflico del disco

embrionario permite la generacin de dos zonas en el epiblasto: una
caudal donde la Te-m es posible (surco primitivo) y otra ceflica
donde conserva su morfologa epitelial. En esta ltima zona, el
hipoblasto, a travs de la secrecin de la protena seal FGF,
promueve la expresin temprana y transitoria de ciertas protenas
factores de transcripcin preneurales Erni, Sox3, Otx2 y otras que
llevan al tejido a un estado precerebro anterior (preprosenceflico).

La induccin neural es un proceso multipasos en el que el

hipoblasto tiene un papel destacado mediado por la estimulacin de
la expresin transitoria de las protenas mencionadas
anteriormente. La adquisicin del carcter neural requiere, adems,
acciones ulteriores que tienen carcter de estabilizantes,
provenientes de poblaciones celulares nodales y sus derivados
(mesodermo precordal, notocorda).

SC 2.16. La secuencia de polaridades que aparecen desde la

fecundacin al embrin posgastrular. La importancia de tales
polaridades en la organizacin espacial de tipos celulares
emergentes. V. Flores

El progreso del desarrollo embrionario desde la formacin de la CH

hasta la formacin del embrin trilaminar posgastrular,
denominado perodo presomtico, implica una sucesin ordenada
de eventos que conducen al establecimiento de a)sucesivas
asimetras o polaridades que sirven como marco de referencia
para el establecimiento de b) varias lneas celulares determinadas
y espacialmente organizadas con respecto a los ejes de las
polaridades mencionadas. Ambos fenmenos (a: aparicin de
nuevos ejes de referencia y b: aparicin de nuevos tipos celulares)
derivan epigenticamente de la polaridad original impresa en, o
representada por, la organizacin espacial de las molculas
informativas presentes en la clula huevo. Ambos fenmenos
resultan de una sucesin temporal y espacialmente organizada de
CCD y CMD. La figura SC 2-16-1, ilustra las diversas polaridades
(a veces denominadas ejes) que aparecen durante el perodo de
tiempo considerado.
Fig. SC 2-16-1. Representacin esquemtica de la morfologa de
las diferentes etapas del desarrollo temprano del embrin de ratn
desde la fecundacin hasta la formacin del cilindro embrionario
(embrin de inicio de gastrulacin). Las flechas representan las
sucesivas polaridades que aparecen durante este perodo del
desarrollo. Entre parntesis se especfica la edad de desarrollo
(DD: das de desarrollo embrionario). En la barra de colores (parte
inferior del panel) se presenta el cdigo de colores con el que se
representa la derivacin de tipos celulares a partir de la CH y las
blastmeras indeterminadas.

Los eventos del desarrollo temprano ocurren diferentemente en

especies de diferente complejidad. En invertebrados y vertebrados
inferiores, la polaridad inicial (eje animal-vegetativo) y la
aparicin de los primeros tipos celulares estn ya establecidas
en la organizacin del ovocito. ste contiene determinantes
citoplasmticos cuyas distribuciones espaciales asimtricas
(polaridad) especifican los ejes o direcciones del espacio a lo largo
de los cuales se organizan los tipos celulares que inicialmente
derivan de la clula huevo. El resto del desarrollo ocurre como
consecuencia de interacciones epigenticas entre los tipos celulares
tempranamente formados.
En los mamferos, sin embargo, el desarrollo es ms plstico, y no
est definitivamente aceptado que a) la posicin del segundo
cuerpo polar (tomado como indicio estructural que marca la
posicin del polo meitico) y b) el sitio de entrada del
espermatozoide condicionen, o determinen, el comportamiento
proliferativo o el destino de las blastmeras resultantes de la
segmentacin. Algunas experiencias realizadas en embriones de
ratn tienen resultados no siempre compatibles (SC Requiere la
emergencia de la polaridad interior-exterrior de la mrula o la
generacin del eje embrionario-abembrionario una
organizacin previa (prepattern) de la CH?) y no existe consenso
acerca de la existencia de relaciones causales en la siguiente
sucesin de hechos:
1) Si (a) la polaridad inicial del ovocito o eje meitico (homlogo
al eje animal-vegetativo de los invertebrados y vertebrados
inferiores) tiene un efecto directivo sobre el establecimiento del eje
embrionario-abembrionario del blastocisto.
2) Si (b) la existencia de un eje meitico tiene un efecto
determinante con respecto a la asimetra estructural y molecular
del embrioblasto.
3) Si (c) la asimetra estructural y/o molecular del embrioblasto
determinan lapolaridad del endodermo visceral del polo distal
(endodermo visceral distal: Dve) en el embrin pregastrular.
4) Si (d) la asimetra del Dve determina su desplazamiento hacia el
futuro extremo ceflico y su transformacin en Ave en el inicio de la
gastrulacin.
5) Si (e) la polaridad instalada por el desplazamiento del
Ave finalmente determina la polaridad cfalo-caudal del embrin
trilaminar posgastrular.
La idea de la existencia de una organizacin citoplasmtica
preestablecida (prepattern) de la que podra derivar la sucesin
de hechos mencionados, sumada a la idea de una distribucin
asimtrica de tendencias de desarrollo en las dos primeras
blastmeras, es cuestionada por quienes enfatizan el carcter
plstico y altamente regulativo del desarrollo temprano de los
mamferos. As, algunos consideran aventurado establecer una
relacin lineal entre asimetras observables en el ovocito y el
establecimiento de los ejes que definen el plan estructural del
embrin trilaminar posgastrular. Se argumenta que este ltimo es, a
todas luces, bastante ms complejo de lo que podra especificarse
por medio del eje meitico de un huevo de regulacin.
Esta objecin, sin embargo, es dbil en el contexto de la
embriologa moderna que plantea que la derivacin de formas de
organizacin complejas a partir de otras ms simples es,
precisamente, la clave de la epignesis.

En general existe acuerdo con respecto a la idea de que, en

embriones de ave y de ratn, la polaridad que precede, y de la que
deriva, el eje cfalo-caudal es establecida epigenticamente, en
etapa pregastrular. Existe consenso acerca de que tal polaridad es
instalada mediante seales generadas por clulas
extraembrionarias que poseen una ubicacin excntrica respecto
del disco embrionario (hoz de Kller en el pollo y ectodermo
extraembrionario cono ectoplacentario en el ratn). Algunos
consideran que tal asimetra se instala tempranamente y posee
manifestaciones estructurales ya durante la maduracin del
blastocisto (SC La transicin entre la aparicin del eje
embrionario-abembrionario del blastocisto y la instalacin de la
polaridad cfalo-caudal del embrin gastrular). Vale decir, ya
existira una asimetra, precursora de la polaridad ceflo-caudal, en
el blastocisto preimplantatorio.
El problema de la sucesin de los cinco hechos arriba mencionados
se divide en dos aspectos centrales ms generales: 1) cmo se
llega de una clula huevo con organizacin aparentemente
simtrica (esfrica o, al menos, radiada) a una mrula con
una polaridad exterior-interior y cmo se pasa de esta
organizacin a la del blastocisto maduro que expresa una polaridad
embrionaria-abembrionaria y 2) cmo la evolucin del
embrioblasto lleva a la constitucin de un disco bilaminar con
una polaridad epihipoblstica y una polaridad precursora de
la polaridad cfalo-caudal del embrin posgastrular (SC La
emergencia de polaridades desde la formacin de la CH hasta
la organizacin del embrin posgastrular. Manifestaciones
estructurales y moleculares de organizacin asimtrica).
Con respecto al primer punto, existen modelos que proponen cmo
se podran establecer las diferencias moleculares que explican la
aparicin de dos vas evolutivas diferentes en la mrula: a) la va de
las clulas externas que lleva a la formacin del trofoblasto y b) la
va evolutiva de las clulas internas que lleva a la formacin del
embrioblasto.
Algunas revisiones crticas de conjuntos de datos colectados en las
ltimas dcadas permiten proponer un modelo aleatorio de
especificacin de tipos celulares dependiente de a) la posicin de
las clulas en la mrula y de b) interacciones entre clulas. Algunos
proponen que, pese a que puedan existir tendencias de desarrollo
asimtricamente distribuidas en las dos primeras blastmeras, stas
pueden ser anuladas debido a las influencias de la posicin y de las
interacciones celulares.
Clsicamente se ha considerado que las blastmeras del embrin
de ratn son citogenticamente equipotentes hasta el E8c y que
durante los siguientes ciclo de segmentacin 4. y 5. ciclo se
produce la primera determinacin de vas evolutivas: la lnea de
clulas externas (trofoblasto) y la de clulas internas (embrioblasto)
(SC 2.3. Procesos de diferenciacin celular durante el perodo
de segmentacin. Cmo se genera diversidad celular durante
la segmentacin?; SC 2.6.Comportamientos celulares
involucrados en la primera determinacin. En los mamferos
con slo tres clulas se constituira el embrioblasto). A
continuacin, las clulas del embrioblasto, en una segunda
bifurcacin, se determinarn en epiblasto e hipoblasto (endodermo
primitivo) (SC La segunda determinacin en los embriones de
mamferos).
De estas tres poblaciones celulares, slo la epiblstica retiene
potencia para originar un embrin. Las otras originan tejidos no
embrionarios pero desempean un papel importante en la
generacin de seales espacialmente organizadas que inician
el patterning del disco embrionario pregastrular.
La segregacin de los dos tipos celulares mencionados es seguida
de la organizacin de dichos tipos celulares en un blastocisto con
asimetra estructural embrionaria-abembronaria. Ciertas
experiencias destinadas a caracterizar los tipos celulares presentes
en el blastocisto maduro permiten identificar clulas troncales
embrionarias pluripotentes (las que abundan luego en el epiblasto),
clulas troncales trofoblsticas y clulas troncales de endodermo
primitivo (poseen caractersticas de endodermo primitivo o
hipoblasto). Es interesante que las clulas troncales embrionarias
pluripotentes tienen potencia suficiente para originar a las otras dos
cuando son manipuladas experimentalmente de modo que alteren
la expresin de algunos factores de transcripcin.

SC 2.17. La primera determinacin. La expresin de

combinatorias de factores de transcripcin especficas de tipo
celular en la mrula y el blastocisto. V. Flores

Se sabe que la expresin de la homeoprotena factor de

transcripcin Cdx2 est involucrada en la
determinacin/diferenciacin en sentido trofoblstico. La
estimulacin experimental de la expresin de Cdx2 en clulas
troncales embrionarias pluripotentes las lleva a determinarse en las
clulas troncales trofoblsticas.
El factor Cdx2 empieza a expresarse en las blastmeras ya en el
E8c y luego, gradualmente, queda restringido a las clulas externas
de la mrula ya antes de la formacin del blastocisto.

El anlisis del efecto de mutaciones de diversos factores de

transcripcin permite proponer una sucesin temporal definida de
expresin de factores de transcripcin:

-- los embriones mutantes para el factor Cdx2 pueden realizar la

segmentacin pero, cuando las clulas deben organizarse formando
un blastocisto, las clulas externas pierden sus caractersticas
epiteliales y no se diferencian y organizan en un trofoblasto. En
estos embriones se reduce la expresin del factor de
transcripcin con caja T, Eomes.
-- los embriones mutantes para el factor de transcripcin con caja T,
Eomes, tambin sufren alteraciones en el trofoblasto pero un poco
ms tarde que los mutantes para Cdx2. En estos embriones no se
altera la expresin del factor Cdx2. Esto indicara una secuencia
temporal Cdx2 Eomes.

En ambas mutaciones, el desarrollo del trofoblasto se inicia pero

luego se altera. Ello sugiere que otros factores participan en los
pasos previos, entre mrula y blastocisto.

-- se ha mostrado que el factor de transcripcin Tead4 se expresa

antes que el Cdx2 y que es necesario para la expresin de este
ltimo y para la formacin de clulas troncales trofoblsticas. As, el
factor Tead4 precedera a los anteriores factores en la sucesin de
eventos que llevan a la diferenciacin del trofoblasto. La sucesin
ms probable sera: Tead4 Cdx2 Eomes etctera.
En los mamferos, el factor Tead4 slo puede producir su efecto
sobre la transcripcin con la participacin del coactivador Yap (yes
associated protein).
La disponibilidad de Yap sera tambin un paso limitante en la
formacin del trofoblasto y en la especificacin del linaje
trofoblstico y, en consecuencia, en la formacin del trofoblasto.

stos son slo algunos de los factores identificados de una red,

seguramente ms compleja, de factores de transcripcin necesarios
para la programacin del linaje celular trofoblstico.

No slo los factores mencionados (Tead4, Cdx2, Eomes), que son

especficos-de-clulas troncales trofoblsticas, se expresan
tempranamente en la mrula. Los factores de transcripcin
especficos-de-clulas troncales embrionarias (embrioblasto) tales
como por ejemplo Oct4, Sox, Nanog, Gata y otros, tambin son
expresados, al principio de la segmentacin de la CH, en
prcticamente todas las blastmeras,
Luego, durante la blastulacin, se instala una expresin espacial
diferencial de los factores mencionados de modo que los factores
Cdx2 y Eomes quedan restringidos y, con alta expresin, a las
clulas polarizadas externas de la mrula (futuro trofoblasto), en
tanto que Oct4, Sox, Nanog, Gata, etc. quedan restringidos a las
clulas no polarizadas internas (futuro embrioblasto). Esto lleva a la
formacin de clulas que ocupan diferentes posiciones y que
expresan diferentes combinatorias especficas de factores de
transcripcin.

La instalacin de la expresin espacial diferencial de los factores de

transcripcin resulta del hecho de que los factores de transcripcin
especficos-de-trofoblasto y especficos-de-embrioblasto interactan
entre ellos de modo que se inhiben recprocamente. Debido a ello,
precisamente, se segregan en dos lneas celulares con diferentes
potencias de desarrollo. Por ejemplo, en embriones mutantes para
el factor Cdx2, especfico de trofoblasto, dichas diferencias
regionales no se producen y los factores Oct4, Sox2, Nanog,
especficos de embrioblasto, se expresan tambin en las clulas
externas.

As, la constitucin de los dos primeros linajes celulares pasa por

una etapa inicial en la que las clulas expresan tanto factores
especficos-de-trofoblasto y como factores especficos-de-
embrioblasto. Luego, la expresin de Cdx2 queda restringida al
exterior y, como Cdx2 inhibe la expresin de factores especficos-
de-embrioblasto, la expresin de stos queda restringida a las
clulas internas.

La represin recproca de factores especficos-de-trofoblasto por

parte de los factores Oct4/Sox2/Nanog en los linajes pluripotentes
combinada con la autorregulacin positiva de Oct4 consolida o
refuerza el mantenimiento de las diferencias en las combinatorias
de factores de transcripcin expresadas por clulas externas
(trofoblasto) e internas (embrioblasto).
Todas las clulas pluripotentes de la mrula poseen inicialmente la
capacidad de expresar estos factores de transcripcin. Las
diferencias se establecen luego dependiendo de cmo las
blastmeras adquieren diferentes posiciones (y posibilidades de
interaccin) respecto del medio y respecto de las otras blastmeras.
Algunos hechos relevantes que generan diferentes posibilidades de
interaccin son a) la polarizacin de las blastmeras, b) la
compactacin de la mrula, c) el desarrollo de uniones oclusivas
entre clulas superficiales, d) el desarrollo de un medio intramrula
bioqumicamente definido por las propias clulas del embrin (SC
2.6. Comportamientos celulares involucrados en la primera
determinacin. En los mamferos con slo tres clulas se
constituira el embrioblasto) y, considerando los eventos
intracelulares, e) la existencia de interacciones positivas y negativas
en la red de interacciones entre factores de transcripcin que rigen
este estado temprano del desarrollo.

SC 2.18. La segunda determinacin. La determinacin de los

linajes celulares epiblsticos e hipoblsticos y su organizacin
espacial en el embrin bilaminar. V. Flores

En general existe acuerdo sobre el hecho de que en la primera

determinacin bifurcacin de linajes celulares embrioblstico y
trofoblstico a partir de la mrula la va celular programada
depende, en parte, de la posicin de las blastmeras. Vale decir, la
existencia de diferencias posicionales precede a, y es una condicin
para, la existencia de determinaciones diferentes.

En el caso de la segunda determinacin bifurcacin de los linajes

epiblstico e hipoblstico a partir del embrioblasto se ha planteado
que puede existir una situacin inversa: primero se producira la
determinacin de los linajes celulares y luego, dependiendo de las
propiedades de las clulas, se producira una distribucin espacial
diferencial de stas. Vale decir, la posicin definitiva de las clulas
dependera del tipo de determinacin realizada. El embrin
bilaminar sera el resultado de un proceso de determinacin celular
seguido de un proceso desorting out (segregacin espacial) que
llevara a las clulas a organizarse en dos capas (Fig. 2-18-1 A-C).
Esta postulacin posee an numerosas objeciones y, en opinin de
algunos investigadores, requiere evidencias ms claras y directas.
La idea clsica, predominante hasta la actualidad, considera que el
embrioblasto es una poblacin celular homognea, integrada por
clulas citogenticamente equipotentes (similarmente
determinadas), vale decir, sin restriccin de linaje en sentido
epiblstico o hipoblstico (Fig. SC 2-18-1 B). La concepcin clsica
propona que la segunda determinacin, al igual que la primera,
podra ser un fenmeno dependiente de la posicin: las clulas de
ubicacin dorsal (adyacentes al trofoblasto polar) se determinaran
en epiblasto y las de ubicacin ventral (limitantes con el blastocele)
se determinaran en hipoblasto.
Se sabe, en la actualidad, que las clulas embrioblsticas,
consideradas individualmente, expresan protenas especficas-
de-linaje epiblstico (como el factor de transcripcin Nanog) o,
por el contrario, protenas especficas-de-linaje trofoblstico
como los factores de transcripcin Gata4 y Gata6. Estas clulas
se distribuyen en el embrioblasto con una distribucin
supuestamente aleatoria, vagamente precisada y denominada
patrn salt and pipper. Tal designacin, en realidad, slo pone de
manifiesto la incapacidad de los observadores para precisar la
distribucin espacial. De todos modos, independientemente de que
las clulas ya estn determinadas o no, la existencia de clulas que
expresan marcadores epiblsticos o hipoblsticos precede a la
formacin de las capas epiblsticas e hipoblsticas del embrin
bilaminar.
Algunos estudios de seguimiento de clulas derivadas de las
clulas embrioblsticas (precursoras de los linajes celulares
epiblsticos e hipoblsticos) sugieren que estas ltimas se hallan ya
determinadas antes de la formacin de las dos capas del embrin
bilaminar. Tales resultados permiten proponer un modelo de
segregacin de linaje celular basado dos etapas:
a) una primera etapa de determinacin celular aleatoria que lleva a
la formacin de un embrioblasto con una organizacin en mosaico.
Este mosaico consiste en una mezcla de clulas precursoras
epiblsticas e hipoblsticas ya determinadas distribuidas
espacialmente al azar (Fig. SC 2-18-1 B) y
b) una segunda fase de sorting-out (segregacin en dos grupos)
selectivo de stas que conduce a la segregacin de los dos tipos
celulares y su organizacin en las dos capas celulares conocidas
(Fig. SC 2-18-1 C).

Fig. SC 2-18-1. Ilustra un modelo de determinaciones durante la

morulacin y blastulacin. A. En el estado de mrula en forma
dependiente de posicin (polaridad interior-exterior) se determinan
las clulas del embrioblasto y trofoblasto. B. Durante la blastulacin
se produce una determinacin en sentido epiblstico o hipoblstico
pero con organizacin espacial aleatoria. C. Luego de la
determinacin en sentido epiblstico o hipoblstico, las clulas
sufriran un proceso de reorganizacin y clulas ya determinadas se
organizaran formando el embrin bilaminar con polaridad
epiblstica-hipoblstica. DD: das de desarrollo embrionario.

Ciertos estudios ulteriores de expresin gentica global (GWA)

apoyan tal visin ya que muestran que las clulas del embrioblasto
corresponden a una de dos categoras: a) clulas que expresan
preferentemente protenas del epiblasto o b) clulas que expresan
protenas del hipoblasto.
Una de las protenas tpicas de las clulas precursoras hipoblsticas
es la protena receptor tipo del factor de crecimiento derivado
de plaqueta o Pdgfra (platelet-derived growth factor receptor ).
Siguiendo la expresin del constructo Pdgfra-H2B-Gfp resultante
de la fusin de los genes codificantes de las protenas Pdgfra, la
histona H2B y la protena fluorescente verde Gfp (Gfp; green
fluorescent protein) se ha podido determinar la ubicacin
temprana y ulterior reubicacin de clulas precursoras
hipoblsticas.
Estos experimentos muestran que las clulas del embrioblasto, que
durante la blastulacin temprana expresan el constructo
mencionado, expresan tambin el factor de transcripcin Nanog
(especfico de epiblasto). Sin embargo, en la blstula madura, las
clulas del embrioblasto ya no coexpresan protenas especficas de
epiblasto e hipoblasto sino slo uno de ambos conjuntos. Algunos
estudios de videomicroscopia, que permiten seguir la evolucin de
estas clulas en funcin del tiempo, muestran que las clulas
Pdgfra (+) que se hallan delimitando el blastocele permanecen en
dicho lugar. Sin embargo, las que se hallan en el seno del
embrioblasto sufren una reubicacin hacia la superficie (sorting-
out) o son eliminadas por apoptosis. Esto lleva a la separacin
espacial de ambos tipos celulares, con la consiguiente formacin de
epiblasto e hipoblasto en las posiciones habituales dentro del
blastocisto maduro.