OBTENCIN, RECONOCIMIENTO Y CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA DE

PIGMENTOS VEGETALES
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
ESCUELA DE QUMICA
1
Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, Facultad de ciencias bsicas,
Escuela de Qumica, III semestre.

1. RESUMEN

La cromatografa de capa fina (CCF) es una forma de adsorcin slido lquido que
constituye una de las tcnicas ms importantes de la qumica orgnica para la
separacin de especies qumicas a partir de la afinidad que poseen estas con las
diferentes fases de la cromatografa. Esta tcnica consta de una fase estacionaria
(Slido) y una fase mvil (Liquido) cuya afinidad vara segn la polaridad que poseen
las especies qumicas de inters, ya que gracias a esta propiedad se establece la afinidad
de las molculas con las diferentes fases que componen la cromatografa, determinando
as la separacin de las especies qumicas que constituyen una muestra. Con el fin de
estudiar las caractersticas bsicas de esta tcnica, se pretende realizar una
cromatografa en capa fina para separar los pigmentos contenidos en la espinaca
extrados, a su vez se busca determinar la proporcin de la fase mvil (ter de petrleo
Vs Acetona) que propicie una mejor separacin de los pigmentos con diferentes
muestras pre-tratadas.

2. PALABRAS CLAVES

Pigmento, Cromatografa, Afinidad.

3. ABSTRACT

Thin layer chromatography (TLC) is a form of solid - liquid adsorption which is one of
the most important techniques of organic chemistry for the separation of chemical
species from the affinity they have with the different phases of the chromatography.
This technique consists of a stationary phase (Solid) and a mobile phase (Liquid) whose
affinity varies according to the polarity of the chemical species of interest, because
thanks to this property establishes the affinity of the molecules with the different phases
that make up The chromatography, thus determining the separation of the chemical
species that constitute a sample. In order to study the basic characteristics of this
technique, thin layer chromatography is intended to separate the pigments contained in
the spinach extracted. In turn, it is sought to determine the proportion of the mobile
phase (Acetone Vs. Ether) which Favor a better separation of the pigments with
different pre-treated samples.

4. KEYWORDS

Pigments, Chromatography, Affinity.

5. INTRODUCCIN
Los pigmentos vegetales tienen como funcin principal la fotosntesis, que utiliza la
clorofila, pigmento verde junto con varios pigmentos rojos y amarillos los que ayudan a
captar la mayor cantidad de energa de luz como sea posible. Otras funciones de los
pigmentos en las plantas incluyen la atraccin de los insectos a las flores que fomentan
la polinizacin. Los pigmentos vegetales incluyen una variedad de diferentes tipos de
molculas, incluyendo porfirinas, carotenoides, antocianinas y betalanas. Entre los
caracteres ms externos de los vegetales, el ms notables es el color., el cual adems
tiene unos pigmentos que lo condicionan estn estrechamente ligados a las actividades
fisiolgicas del propio vegetal. En el reino vegetal se pueden encontrar matices y
combinaciones de los colores del espectro, predominando generalmente: el verde,
amarillo, rojo y azul, los cuales se confieren a los vegetales por los pigmentos.

El color de un pigmento depende de la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda

de la luz y de la reflexin de otras. Constituyen el sustrato fisicoqumico donde se
asienta la fotosntesis. Un tipo de pigmento es la clorofila la cual da color verde a los
vegetales y absorbe la luz necesaria para la fotosntesis.

La separacin de mezclas complejas de productos y el aislamiento y purificacin de los

componentes individuales es de gran importancia en la qumica orgnica. La
cromatografa constituye una importante herramienta, existen actualmente diversas
tcnicas como: Cromatografa de capa fina, cromatografa de columna, cromatografa de
gases, cromatografa de lquidos y HCPL, entre otras. Para esta prctica se usa la
cromatografa de capa fina la cual necesita una fase mvil (eluyente) y una fase
estacionaria (adsorbente).

6. OBJETIVOS

6.1. OBJETIVO GENERAL

Obtener y reconocer los tipos de pigmentos que se pueden extraer de las hojas de
espinaca, y a la vez realizar cromatografa de los pigmentos

6.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Analizar los pigmentos extrados de la espinaca.

Observar la coloracin de las fases y verificar el solvente ideal para la placa

cromatogrfica.

Identificar cual es el adsorbente y eluyente ms adecuado.

7. RESULTADOS Y DISCUSIN.
EXTRACCIN DE PIGMENTOS:
Los colores que presentan determinados vegetales se deben a los pigmentos contenidos
en la estructura de estos, debido al predominio de uno u otro o la combinacin de ellos
adems de algunos compuestos que condicionan el color, los pigmentos de un vegetal
estn estratgicamente ligados a las actividades biolgicas de este.
El color que presenta determinado pigmento se da gracias a la luz que incide en l y en
la estructura molecular del pigmento, depende de la absorcin selectiva de ciertas
longitudes de onda y el reflejo de otras, por ejemplo, el color verde en los vegetales se
debe a la presencia de los pigmentos, clorofila A y la clorofila B, existen tambin en las
en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarillos anaranjados, qu son
xantfilos y carotenos.
Los pigmentos cloroflicos son de carcter orgnico son insolubles en agua, pero
solubles en solventes orgnicos, existen solventes orgnicos que son capaces de
remover simultneamente todos los pigmentos y se les conoce como extractores, tales
como el alcohol y acetona, y aquellos que presentan afinidad por un pigmento en
particular se conocen cmo separadores, tales como el ter de petrleo.
A los 5 gramos de espinacas previamente lavadas se les realiz una extraccin con
etanol, que siendo un solvente extractante, permite retirar todos los pigmentos en una
solucin etanlica y dejar por medio de una filtracin los slidos restantes para posterior
a ello trabajar con el etanol y el extracto.
La solucin etanlica junto con los pigmentos extrados se le adicionan ter de petrleo,
algunos carotenos y las clorofilas son solubles en este por lo que quedan disueltos, al
agitar vigorosamente se separa la fase inferior que contena etanol y agua por diferencia
de polaridades.
Se realiza un lavado con agua para su purificacin, a la capa superior se adiciona
alcohol metlico las xantofilas dihidroxilados quedan en la fase metanlica, que se
encuentra en la capa inferior y se procede a decantar. La presencia de grupos OH en las
xantofilas dihidroxiladas le confiere cierta polaridad que la hace afn al metanol, por lo
que estas se separan con el metanol de la solucin de ter de petrleo, estas fases se
separan pos sus diferencias de densidad.
A la capa metanlica previamente extrada se le adiciono ter etlico por lo que al llevar
a cabo la separacin se separa en la capa del ter las xantofilas monohidroxilados. Esta
separacin depende de una mnima diferencia existente en las polaridades de los
pigmentos.

Posteriormente se tom la capa superior de ter de petrleo con el fin de separar la

clorofila y sus pigmentos por medio de una saponificacin, que es aquella reaccin que
tiene lugar entre un cido graso o un portador de este y una base, obtenindose como
producto la sal del respectivo cido, en la estructura de la clorofila A se encuentra en
una parte llamada Fitol que funciona como cido graso y reacciona con la base en este
caso KOH en metanol, esta reaccin genera un precipitado blanco en el que se
encuentra la clorofila A y arriba de este est una solucin amarilla que corresponde a los
carotenos.
Cambiando el solvente, mdiate la adicin de pequeas porciones de agua, se somete
nuevamente un proceso de saponificacin dando como resultado sales de la clorofila B
por solucin metanlica de KOH formando una capa verde clara correspondiente a la
clorofila B.

PIGMENTO EXTRACCIN
Xantofilas dihidroxilados Alcohol metlico
Xantofilas monohidroxilados ter etlico
Carotenos ter de petrleo
Clorofila A Saponificacin en medio ter etlico con
KOH en metanol
Clorofila B Saponificacin en agua con KOH en
metanol

CROMATOGRAFA:

En este caso para la cromatografa de capa fina realizada se debe tener en cuenta la
polaridad de los pigmentos de la espinaca como la de los solventes utilizados para la
fase mvil.

Figura 1: Ensayo de polaridad de los solventes a diferentes proporciones

Cmo se puede observar en la figura 1 se utilizaron diferentes proporciones de solvente

acetona y ter variando la polaridad de la mezcla a medida que disminuye la polaridad
de la mezcla aumentaba la separacin debido a que a mayor polaridad del solvente
mayor es la velocidad de elusin, a medida que se aumentaba la porcin de ter en la
mezcla de la fase mvil, bajaba la polaridad de esta, al final se decide utilizar la
proporcin de acetona ter 20-80 respectivamente, ya que es en la que se observa mejor
separacin de los compuestos.
Con base a la fase mvil escogida se procedi a llevar acabo la separacin de pigmentos
en diferentes fases de la extraccin y separacin de pigmentos de espinaca, de esta
forma se presenta la figura 2.

Se logra observar cmo se separan los pigmentos

fotosintticos dependiendo de la polaridad de cada uno
y su afinidad con el solvente, teniendo en cuenta que
la fase mvil tiene una polaridad baja el pigmento de
mayor afinidad debe ser el menos polar entre los
extrados de la espinaca, los que cumplen con esta
condicin son los carotenos que son amarillos,
despus de los carotenos se encuentran los otros
pigmentos organizados del menos polar al ms polar
debido a la afinidad con la fase mvil y por supuesto
cierta afinidad presente con la fase estacionaria de
SIO2.

Figura 2: Separacin de pigmentos en diferentes fases de la extraccin de pigmentos de

espinaca.

Es importante realizar el clculo se la contante RF (Ratio of Front) que ayuda a dar una
idea de la posicin de los compuestos y adems de eso mide la retencin o la afinidad
de estos, siendo as en este caso, entre mayor sea el RF menor va a ser la polaridad del
compuesto, para el clculo de a contante RF se utiliza la siguiente formula:

Distancia del compuesto desde el origen

RF=
Distancia de la fase movil desde elorigen

La distancia total recorrida por la fase mvil desde el origen fue de 3,1cm.

Tabla 1: descripcin de las separaciones en cada fase de la extraccin de pigmentos y

clculo de la constante RF.

1 (En la figura 2) 2 (En la figura 2) 3 (En la figura 2) 4 (En la figura 2)

Fase metanlica Fase metanlica Fase inicial de Fase final de ter
(con carotenos y (con Xantofilas ter de petrleo de petrleo
Xantofilas dihidroxiladas) (con todos los (con carotenos)
Monohidroxiladas) pigmentos)
Color Amarillo naranjado Amarillo Amarillo naranjado Amarillo naranjado
Distanci 3,0 cm 2,4 cm 3,0 cm 3,0 cm
a
RF 0,968 0,774 0,968 0,968
Color Amarillo Amarillo
Distanci 2,7 cm 2,4 cm
a
RF 0,871 0,774
Color Verde claro
Distanci 2,2 cm
a
RF 0,710
Color Verde oscuro
Distanci 1,9 cm
a
RF 0,613

Para la fase metanlica 1 se observa la separacin de dos compuestos uno color amarillo
naranja caracterstico de los carotenos y otro amarillo caracterstico de las xantofilas en
que este caso se trata de las monohidroxiladas, los carotenos recorrieron una mayor
distancia por que son los menos polares, por lo que tiene una mayor afinidad con la fase
mvil.

Para la fase metanlica 2 se observ la presencia de solo un compuesto de color

amarillo, ya que ac se encuentran las Xantofilas dihidroxiladas.

En la Fase inicial de ter de petrleo se encuentran todos los pigmentos (Carotenos,

Xantofilos mono y dihidroxilados, Clorofila A y Clorofila B) La separacin depende de
cual es ms o menos polar, tal y como se ve en la Tabla 1, los carotenos (de color
amarillo naranjado) tienen una constante RF de 0,968 por lo que se dice que son los
menos polares y ms afines con la fase mvil, le siguen las xantofilas (de color
amarillo) con una constante RF de 0,774, despus va la clorofila A (de color verde
claro) con una constante RF de 0,710 y por ltimo se encuentra la clorofila B (de color
verde oscuro) con una constante RF de 0,613, esta es la de menor constate RF por lo
tanto es la de mayor polaridad, es decir que tiene menor afinidad con la fase mvil, y
por ello se queda en la fase estacionaria primero que todos los otros pigmentos.

En la fase final de ter de petrleo solo se observa un pigmento de color amarillo

naranjado, que corresponde a los carotenos, ya que en esta fase son los nicos
pigmentos presentes.

8. CONCLUSIONES

En la prctica se obtuvieron los pigmentos fotosintticos de la clorofila, las cules se

sabes que dan origen a la coloracin de las hojas de las plantas, ya que la fotosntesis es
un proceso que convierte la materia inorgnica en materia orgnica gracias a la energa
aportada por la luz, esta se desarrolla en las hojas y tallos, los cuales son los que captan
la energa lumnica.
9. REFERENCIAS

Garca JL .Experiencias bsicas en la enseanza de las ciencias de la

naturaleza II .Instituto de la educacin Universidad de Santander. 1980.