BIOPROCESOS En este capitulo se daré una definicién de bioproceso y se describiran los dos tipos de bioprocesos que existen. Defini El proceso de fermentacién es un proceso unitario que consiste en la descomposicion de aicares contenidos en sustancias llamadas sustrato por medio de enzimas que son producidas por microorganismes, obteniéndose uno 0 varios productos, dependiendo del rmicroorgunistnv que s¢ utilice; generalmente esto sucede en condiciones anaerdbiens (coma cen el caso de levaduras para produccién de alcohol} Sin embargo, en los afos recientes, estas reacciones se han dado también en condiciones aerdbicas (como en la produccién de antbi6ticos), por lo que ahora, para describir este proceso, es més utiizada Ia palabra Bioproceso. ‘Tipos de Operaciones de un Bioproceso _Existen dos tipos de operaciones para bioprocesos: a) Operacién por lotes b) Operacién continua: = Sistema de reeipiente nico = Sistema de recipientes miltples. En la industria. el sistema més utiizado es el de operacién por lotes, que consisteen un bioreactor que es alimentado al principio del proceso con sustancias nuritivas y con los, ‘microorganismos que nos interesan, permitiendo el crecimiento de estos por el tiempo necesatio, hasta obtener el producto deseado, sin agregar o extraer material del biorreactor, ‘La composicién de la mezela y la velocidad de reaccidn cambian con respecto al tiempo. El reactor generalmente consiste de un tanque agitado. El recipiente debe estar bien mezelado para que las composiciones sean las mismas en cualquier parte del reactor aun4 tiempo determinado, La operacién por lotes tiene un tiempo muerto para realizar limpieza ¥ esterilizacion y un retraso prolongado antes de que les microorganismos entren a una fase de productividad elevada, . La operacién continua consiste en alimentar un biorresctor con sustancias nutitvas contintuamente tratando de controlar el periodo de desaimiento o muerte celular, Ademés, se deben remover los productos en forma simultinea y continua, La composicién de la ‘mezela varia con la posicién del equipo y a cada posicién le corresponde una composicién ‘que es constante si el equipo se opera bajo condiciones de: alimentacién constante, ‘extraccién constante de productos, remocién constante de calor, La operacién continua tiene muchas ventajas tebricas pero son de mayor peso las ‘grandes dificultades que se tienen para el mantenimiento de la pureza del cultivo cuando se ‘manejan volmenes muy grandes, También es posible que en las operaciones continuas, los cutivos microbianos se deterioren al producirse generaciones sucesivas de células y que no den el rendimiento esperado. Sin embargo, la cerveza, la levadura de pan y el vinagre se. hhan producido en cultivos continuos a gran escalaFORMULACION DEL MODELO MATEMATICO ‘Aqui veremos los pasos a seguir para resolver un problema utilizando modelos ‘matemiéticos. Estos pasos son la base de la modelacién matemitica, Ademés, también veremos la descripeién de las ecuaciones que se deben establecer. *Metodologia La metodologis para abordar los problemas en ingenieria utilizando modelos iateusdticus es 1. FORMULACION. Consiste en pasar la informacién verbal del problema a lenguaje ‘matemitico. Los modelos matematicos por lo general se basan en las leyes de la fisica, ‘como la conservacién de la masa y Ia energfa y se dan en la forma: Acumulacién intrada ~ Salida 2. RESOLUCION. Se realizan las operaciones matemiticas apropiadas para obtener educciones légicas del modelo matematico. 3. INTERPRETACION. Encontrar el significado de los sesultados mateméticos en el ‘mundo real. 4. REFINAMIENTO. Este término se refiere a la reutilizacién de la metodologia para obtener predicciones que se acerquen més a la realidad (Hoerl, 1992). Ecuaciones en un Modelo Matemitico A continuacién se describirén una serie de ecuaciones que nos servirin de base para kg/m? : concentraciOn de sustrato > kg/m? volumen del medio. <> m* 1,0 condiciones de entrada y salida respectivamente Figura 1. Diagrama de un bioproceso (Sinclair, 1987).Cantidad total de sustrato Entrada: Flujo de entrada = FS, Salida: Flujo de salida = F,$, Consumo = 1,7 Sustituyendo en la ecuacién de balance, obtenemés 2ECUACIONES DE VELOCIDAD ‘Aqui veremos expresiones cinéticas que relacionan Ia velocidad de generacién 0 Velocidad de consumo de especies quimicas o biolégicas con las concentraciones de anutrgntes y otter parimetroe, (Cinética de Crecimiento El crecimiento microbiano es autocatalitico, es decir, el crecimiento se da en forma exponencial. Si tomamos.x como la densidad celular (g/m’), entonces: KP Dy P bi P Bry Pv Py El intervalo de tiempo en que 1as células se duplican se lama tiempo de duplicacién (a). El mimero de duplicaciones m después del tiempo t esté dado por: neatly @ ‘Como sabemos que cada cierto tiempo clu de las eélulas se dividen en dos y habiemos ‘mencionado que el crecimiento se da en forma exponencial,entonces: XR a ert “ Reacomodands y tomando logaritmos, tenemos: 6) Desarrollando: In? _ 0.693 uo ©3 EI primer término de la ecuacién anterior representa la definicién de una deriveda, centonces: dns) _ 0.693 ay o ‘Si multiplicamos el primer término de ta ecuacién anterior por dx/dx, vamos a bree ® Como : ns) 1 ox) © dx (o odes exci, ssitiyendolceutib en cea dies) 1 de & 10 dt dt “o ‘Aor, utinyendo a euain 10 en a cuca 7: (ay Donde . «) Tgulano as ecuciones 1 y 12, tenemos: path a) ax4 La ecuacién anterior es la ecuacién de crecimiento, donde es la velocidad especifica de crecimiento definida como la velocidad de acumulacién de biomasa por unidad de biomasa y tiene Ia unidad de (tiempo)'. Efecto de algunos Factores sobre la Velocidad de Crecimiento Los principales factores que afectan la velocidad de crecimiento son: la concentracién de sustrato, la temperatura, el pH y la inhibicién por sustrato, Efecto de la concentracién de sustrato ‘Monod realizé investigaciones para ver el efecto de la concentracién de sustrato sobre la velocidad de crecimiento; para introducimos al tema vamos a considerar el fenémeno del crecimiento microbiano, Conocemos cierta informacién sobre esto: ‘+ Elcrecimiento microbiolégico ocurre autocataliticamente (2, 4, 8, 16, ‘© Enausencia de sustrato nd ocure crecimiento, © Con un ineremento en la concentracién de sustrato, la velocidad de crecimiento se increments. ‘* Si se incrementa un poco mas la concentracién de sustrato, la velocidad de crecimiento alcanza un méximo, ‘Todos estos puntos se refieren a velocidad de crecimiento. Esta informacién verbal la ‘vamos a representar en forma matematica; para eso necesitamos el concepto de velocidad ‘especifica de crecimiento de biomasa £, que ya se mencioné con anterioridad, donde: a4)13 Como dxidt nos indica velocidad de cambio, se define como velocidad de acumulacién o velocidad de crecimiento celular r,entonces tenemos: RIB ay Sustituyendo esta ecuacién en la ecuacién 14, obtenemos (16) Como en esta seccién nos interesa conocer una relacién entre wy S (S concentracién de sustrato), veremos que Monod, en sus experimentos encontré que cuando se inocula medio de cultivo nuevo con glucosa como tinica fuente de earbono, en el ciclo de-crecimiento, js es constante durante la fase exponencial; luego tiende a cero durante la fase de desaceleracin, done la concentracién de suetrato no esti en execso, es deci sn s saturante. a velocidad de crecimiento especifica de un microorganismo esta relacionada con la concentracién de sustrato por medio de una funcién hiperbdlica (esta funcién representa, luna curva de saturacién) dela siguiente manera: a7) La Beuacién de Monod (ecuacién 17) esti representada en la Figura 216 EI siguiente paso es determinar la sensitividad del parimetro. En este caso, necesitamos saber que tan sensitivo es yu aS. + alta S (S>k,) 4 no es influido por k, (a partir de la ecuacién 17, vemas que se aproxima a 4m). Esto sucede en la fase de crecimiento exponencial. k, representa la afinidad de los microorganismos por el sustrato. Hoos 2 concentracién de sustrato que hace que la velocidad especifica de crecimiento sea la + SiS = ky Ia velocidad de crecimiento expecitica es y= Bs decir, k es la ‘mitad de la velocidad especifica maxima, + sine (ek) Pa op nee Scape ag s vemos que 4s se aproxima a “=, es deci, la velocidad de crecimiento especifica k 8 aproximadamente proporcional a la concentracién de sustrato limitante S, ya que Hoe os constante. k, Esto quiere decir que a altas concentraciones de sustrato solo es importante ‘determinar 41 pax Ya que k, no influye. A bajas concentraciones de sustrato se necesita et parimetro 4S, Para valores intermedios de $ se necesitan ambos. Generalmente los valores de ky son muy bajos. En la Tabla 1 aparecen valores de k, para algunos smicroorganismos en diferentes sustratos, ‘Ahora, i multiplicamos Ia ecuacién 16 por, obtenemos: bx «syTabla 1, Constante de saturacién k,, valores para organismos cultivados sobre diferentes sustratos Organismo Substrate Ke Gag) E.coli Glucosa ~ |6.8x107 Manito! 20 Lactosa 20.0 PO,? 16 |E. coli (auxétrofo) Triptéfano 11x10 Aspergillus niger Glucosa 5.0 |A. niger (auxdtrofo) Arginina 05 Candida utilis Glicerol 45 O 0.45 Saccharomyces cerevisiae Glucosa 25.0 Pseudomonas sp Metanol 07 Metano 04 Klebsiella aerogenes CO; 04 Mg” 0.56 K 039 $0.7 27 (Marison, 1996).Si-se sustituye la ecuacién 17 en ésta, vamos a ten: ay Observando la Figura 2 seve que a baja S, 4 cambia répidamente con el incremento de'S. SiS se incrementa més entonces 4 cambia més lentamente, Efecto de la temperatura ‘Al igual que en cualquier reaccién quimica, la femperatura afecta las reacciones que ‘curren dentro de las eélulas. Dependiendo de la temperatura éptima para su crecimiento, Jos mieroorganismos se dividen en: * Psicrfilos (20°C) * Meséfilos (20.37) * Terméfilos (38°C) En la Figura 3 se observa'como afecta la temperatura ala velocidad de erecimiento de Jos microorganismas. A temperaturas muy altas hay un decaimiento debido a que ‘aumenta la mértalidad de los microorganismos. Elcrecimiento de los organismos se describe por: ae Sux kr 20) at 20) ‘De aqui podemos deducir la ecuacién que nos describe la muerte celular naka, en19 Ena Figura 2. Efecto de la concentracién de sustrato sobre la velocidad de to (Hetjnen, 1992) 1. Psicrdfilos. 2. Meséfilos. 3. Terméfilos. ‘Temperatura (°C) Figura3. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de crecimiento. (Marison, 1996).20 La ecuacién 20 describe un balance entre crecimiento y mortalidad, aunque por lo ‘general, debido a las condiciones de operacién, la velocidad especifica de crecimiento es ‘mucho mayor que la ky por lo que esta ttima se puede despreciar. Pero como tanto al crecimiento como la mortalidad dependen de la temperatura podemos utilizar la relacién de Arthenius para describiros. @2) 23) El aumento de la velocidad de mortalidad y por consecuencia la disminucién de la roduccién de células a altas temperaturas, se debe principalmente a la desnaturalizacién 4e las proveinas, Ia cual provoca un aumentd en el requerimiento de energia de ‘mantenimiento celular para mecanismos de reparacién, A temperaturas bajas, los tmecanismos de regutacin de las células se ven afeetados, ademés de que se dificulta el transporte de sustrato hacia y dentro de la célula. Esto quiere decir, que el crecimiento celular decae a temperaturas extremes. La temperatura éptima es resultado de la interaccién de los dos efectos. Este efecto de la temperatura sobre el crecimiento ‘icrobiano es aprovechado en la industria de la conservacién de alimentos, Efecto del pH El pH en un bioproceso tiene menos efecto sobre la actividad biolégica de los ‘microorganismos que la temperatura (Figura 4), ya que pueden cambiar su metabolismo como resultado de un pequetio cambio en el pH (1-1.5 unidades de pH). Frecuentemente las bacterias crecen en un intervalo de pH de 4 ~ 8, las levaduras de 3 ~6 y los mohos de 3 ~ 7, Esto también es aprovechado en Ia industria, Por ejemplo, las fermentaciones de levaduras generalmente operan a un pH tan bajo como sea posible para reducir la contaminacién por bacterias,1.00 07s # | 050 ay 028 Figura’, Efecto del pH en la velocidad dé crecimiento especifica (Sinclair, 1987),2 Las curvas de velocidad dé crecimiento contra pH pueden ser modeladas por cexpresiones usadas en cinética enzimtica, por ejemplo: Mp) = ea) Efecto de una alta concentracién de sustrato o de producto Si se aumenta la concentracién inicial de sustrato a niveles altos la velocidad de crecimiento puede disminuir debido a la inhibicién por sustrato. Para sustratos como la slucosa u otros carbohidratos, la mayoria de los mieroorganismos son capaces de crecer a concentraciones de 100-150 git, pero muy pocos erecerin & 300-500 g/t. Es decir, a altas concentraciones de aziicar 0 sal se observa la inhibieién por deshidratacién de los microorganismos debido al fenémeno de dsmosis que se da’ en las células, lo cual es aprovechado por Ia industria de conservacién de alimentos, Existen sustratos que a concentraciones bajas favorecen el crecimiento de algunos microorganismos, pero que a-altas concentraciones se vuelven inhibidores para los mismos, tales como el fenol, formaldchido o el metanol. Lajinhibicién por sustrato generalmente se expresa de la siguiente forma: oe as "Easy ° Los microorganismos tambi inhibicin del crecimiento. pueden producir productos finales que provocan la23 Formacién de Producto Los productos formados por microorganismos pueden clasificarse de varias maneras; tuna de ellas es In que relaciona a la formacién de productos con Ia velocidad de crecimiento, de la siguiente forma: 4) Formacién de producto asociado al crecimiento r, = ar, 26) b) Formacién de producto no asaciado al crecimiento r, = Bx en «¢) Formacién de producto parcialmente asociado al crecimiento ar, +Bx (28) El primer tipo generalmente se da en el crecimiento anaerébico y los productos son el resultado de la energia de metabotismo, La formacién de productos no asociada al «crecimiento no esta relacionada con la energia del metabolismo, Un ejemplo de estos es la produccién de antibisticos (que se da en cultivos aerdbicos). Se dice que la formacién de lun producto esti parcialmente asociado al crecimiento cuando empieza a producirse después de cierto tiempo. Consumo de Sustrato Los microorganisms necesitan sustato para: + Producirbiomasa. + Producircompuestos exraeluleres, + Proporcionar Ii enérgia necesaria par: a) Conducir las reacciones sintéticas. ‘b) Mantener concentraciones de materiales dentro de la célula. ©) Conducir rciclajes de reacciones dentro dela cuts (Sinelar, 1987).24 Consumo de sustrato para produccidn de biomasa El consumo de sustrato esté relacionada con la velocidad de crecimiento celular de la siguiente manera: 9) G0) ‘Consumo ae sustrato para form: on de productos Como se ha mencionado con anterioridad también es nevesario que los ‘microorganismos consuman sustrato para formar productos derivados del metabolismo. La velocidad de consumo de sustrato para formacion de producto esta dada por: en En las ecuaciones para consumo de sustrato, tanto para produccién de masa eelular, como para formacién de producto interviene una constante que nos indica rendimiento Estas constantes se definirin a continuacién. ‘Rendimiento de biomasa y producto. Los coeficientes de rendimientos de biomasa (is) y de producto (Yps) representan la eficiencia de conversin de sustrato en biomasa y producto formado respectivamente, Se efinen como la masa de biomasa o producto formado por unidad de masa de sustrato consumido. Para obtener los valores de estos coeficientes de rendimientos se mide la cantidad de ‘biomasa o producto formado y sustrato consumido en un periodo y caleular:25 Estos son los coeficientes de rendimiento observados y pueden representar ef rendimiento global, que es la biomasa o el producto formado con respecto al sustrato consumido en el ciclo completo de crecimiento, 0 puede medirse en cualquier tiempo en eleico de eresimiento. Teércamente se puede determinar el eoeficinte de rendimiento conociendo la woguometin de Ia scusién quimice; or cjempl, cn la ecuacidn que describe Ia formacién de etanol a partir del bioproceso de la glycosa: Cia = 2. C3H.OH + 2 ‘Tenemos que el coeficiente de rendimiento tebrico maximo seri de 0.S1gr etanaligr slucoss. ‘Consumo de sustrato para energia de mantenimiento La energia de-mantenimiento es la energia que se usa para mantener la célula en un estado viable, no para producir material celular 0 productos. La expresién cinética que se utiliza para descrbirla energia de mantenimiento es mx, 2 ‘También podemos escribir la ecuscién anterior en términos de ATP, como sigue: Taare = Mare, G3)6 Bajo condiciones constantes de crecimiento, la cantidad de energia de mantenimiento es baja, pero cuando el crecimiento se detiene o cuando las células se estin adaptando a ‘cambios de sustrato 0 a condiciones de crecimiento, entonces ésta llega a ser més significative, Los valores de m son muy pequetios como se puede observar en la Tabla 2, ‘Tabla 2. Requerimientos de energia para el mantenimiento de algunos organtsmos. Organismo m | ( de sustrato’g de cétulasn) Aspergillus nidulans 0.029 | Aerobacter aerogenes (aekdbico) | 0.094 A. aerogenes (anaersbico) oars (Marison, 1996).