DEM Laboratório de Bioquímica Ompletoooooooooooooooooooo

Apresentao
Este manual composto por Normas e Rotinas Operacionais em conjunto com

os Procedimentos Operacionais padronizados POPs que so adotados nas
atividades desenvolvidas no Laboratrio de Bioqumica do Departamento de
Medicina e Enfermagem da Universidade Federal de Viosa.
A produo do modelo impresso iniciou-se em 2014 com a elaborao de vrias
normas e POPs pelo corpo tcnico do laboratrio. Nesse perodo foi definido o layout
do documento em relao sua estrutura de informaes e competncia tcnica
para a execuo do conjunto de atividades.
As normas e rotinas operacionais servem para definir regras mnimas de
segurana e qualidade das atividades desenvolvidas nos laboratrios, exigindo
compromisso e disciplina por parte de todos os usurios.
Os POPs foram criados com a finalidade de padronizar e minimizar a ocorrncia
de desvios na execuo de procedimentos fundamentais da prtica diria, buscando
melhorar a qualidade do ensino. Sendo assim, descrevem cada passo crtico e
sequencial, de modo a garantir o resultado esperado de um mesmo procedimento
realizado por pessoas diferentes.
A sistemtica da reviso deste conjunto se dar a cada dois anos pela
necessidade de atualizao das tcnicas.
Coordenao Geral
Luciana Moreira Lima
Coordenao Tcnica de Elaborao do Manual:

Adriana Lopes Gouveia
Coordenao Tcnica de Reviso:

Adriana Aparecida Bhering Fialho
Marcos Rodrigo de Oliveira
Adriano Simes Barbosa Castro
Projeto Grfico
Rodrigo Batista Teixeira
SUMRIO
NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS 1

PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRONIZADOS POPs 9
POP 001 - Acesso ao laboratrio de bioqumica 11
POP 002 - Biossegurana em laboratrio 14
POP 003 - Lavagem e higienizao das mos 18
POP 004 - Preparo de soluo alcolica 70% 22
POP 005 - Coleta de sangue 25
POP 006 - Realizao dos exames de hematologia 28
POP 007 - Realizao do exame de tipagem sangunea 36
POP 008 - Realizao do coombs direto 39
POP 009 - Realizao do coombs indireto e pesquisa do antgeno Du 42
POP 010 - Realizao do EAS 47
POP 011 - Realizao do exame de VHS 50
POP 012 - Realizao dos exames de hematria e piria 53
POP 013 - Testes confirmatrios de urianlise 56
POP 014 - Realizao dos exames de coagulograma 62
POP 015 - Realizao dos exames de imunologia 73
POP 016 - Realizao de exame micolgico direto 80
POP 017 - Tcnica de eletroforese em gel de agarose 83
POP 018 - Operao e limpeza do microscpio 88
POP 019 - Operao e limpeza da centrfuga 92
POP 020 - Operao e limpeza do banho maria 95
POP 021 - Operao e limpeza do espectrofotmetro 98
POP 022 - Operao e limpeza do espectrofotmetro semi-automtico 103
POP 023 - Operao e limpeza do agitador magntico 107
POP 024 - Operao e limpeza do agitador de tubos (vrtex) 110
POP 025 - Operao e limpeza da estufa de secagem e esterilizao 113
POP 026 - Procedimentos em casos de acidentes com perfurocortantes 116
POP 027 gua par o laboratrio clnico 119
POP 028 - Limpeza e organizao do laboratrio 122
POP 029 - Descarte de resduos do laboratrio 124
POP 030 - Limpeza das vidrarias e acessrios utilizados no laboratrio 127
POP 031 - Monitoramento de temperatura e limpeza das geladeiras 130
POP 032 - Controle de pragas e vetores 133
POP 033 - Atividades de campo 136
Universidade Federal de Viosa
Centro de Cincias Biolgicas e da Sade
Departamento de Medicina e Enfermagem
NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS
LABORATRIO DE BIOQUMICA
Viosa - MG
2014
SUMRIO
1. Apresentao ........................................................................................................................ 3
2. Objetivos ............................................................................................................................... 3
3. reas de conhecimento......................................................................................................... 3
4. Horrio de funcionamento ..................................................................................................... 3
5. Normas gerais para acesso e permanncia no laboratrio .................................................... 4
6. Deveres e responsabilidades ................................................................................................ 4
6.1 Referentes ao coordenador do laboratrio...................................................................... 4
6.2 Referentes ao corpo docente.......................................................................................... 4
6.3 Referentes ao corpo tcnico ........................................................................................... 5
6.4 Referentes ao corpo discente ......................................................................................... 5
6.5 Referentes aos visitantes ............................................................................................... 5
7. Regras gerais de segurana.................................................................................................. 6
7.1 Descarte de resduos...................................................................................................... 7
7.2 Procedimentos adotados em casos de acidentes com perfurocortantes......................... 7
7.3 Procedimentos adotados em caso de derramamento de produtos qumicos .................. 8
3
1. APRESENTAO
O Laboratrio de Bioqumica do Departamento de Medicina e Enfermagem da Universidade

Federal de Viosa (DEM-UFV) iniciou suas atividades no segundo semestre de 2013. Ele est
localizado no 3 andar, sala 320 do Departamento. Possui uma rea fsica de 116m 2 equipada
com aparelhos e materiais para o atendimento das necessidades dos docentes, discentes e outros
usurios.
Suas atividades so desenvolvidas baseadas nos Procedimentos Operacionais Padronizados
(POPs) e o seu corpo tcnico composto por farmacuticos bioqumicos, tcnicos e assistentes
de laboratrio.
Para a realizao de suas atividades, o laboratrio dispe de vrios equipamentos, dentre os
quais: estufa de secagem e esterilizao, contador de colnia, centrfuga para tubos, banho maria,
deionizador, agitador de tubos, coagulograma, placa aquecedora, aparelho de eletroforese, espec-
trofotmetro semiautomtico, espectrofotmetro manual, freezer vertical, geladeira, microscpio
binocular, phametro, cadeira para coleta de sangue, entre outros. Possui tambm vidrarias como,
erlenmeyer, bquer, provetas, entre outras, e materiais de uso contnuo, como seringas e agulhas,
lminas para microscopia, tubos de coleta sangunea, etc...
Com esta estrutura fsica e pessoal qualificado, o Laboratrio de Bioqumica visa dar suporte
na aprendizagem prtica dos alunos, possibilitando o exerccio de conhecimentos tericos de ma-
neira prtica. Alm disso, auxilia os alunos no desenvolvimento de habilidades, destreza e agilida-
de para realizao de tcnicas bioqumicas, capacitando-os para a prtica profissional. Outro obje-
tivo do laboratrio servir docentes e outros pesquisadores no desenvolvimento de pesquisas
bsicas na rea de bioqumica, imunologia, hematologia e outras reas correlatas.
2. OBJETIVOS
Orientar docentes, discentes, tcnicos e demais usurios sobre as normas bsicas definidas
institucionalmente para o acesso ao laboratrio e andamento de aulas prticas e pesquisas.
Com isso pretende-se melhorar a eficincia nas prticas laboratoriais e tambm minimizar ris-
cos, informando comunidade acadmica sobre a postura e principais procedimentos a se adotar
no laboratrio para a preveno de acidentes.
Alm disso, este manual visa promover a facilitao dos trabalhos dos professores, alunos e
pessoal tcnico, por meio da especificao de suas respectivas atribuies.
3. REAS DE CONHECIMENTO
Enfoque nas reas de Hematologia, Urianlise, Bioqumica, Imunologia.
4. HORRIO DE FUNCIONAMENTO
O laboratrio funciona de segunda a sexta-feira, de 07:30h s 12:00h e das 14:00h s 18:00h,

exceto em feriados e recessos dispostos no calendrio acadmico.
Em casos excepcionais o horrio de funcionamento poder ser estendido at s 20:30h.
4
5. NORMAS GERAIS PARA ACESSO E PERMANNCIA NO LABORATRIO
I. As aulas prticas devem ser agendadas no incio de cada perodo e este horrio deve ser
cumprido pelo professor responsvel pela disciplina;
II. obrigatrio o uso de vestimentas adequadas: cala comprida, calado fechado e cabelos
presos;
III. Os Equipamentos de Proteo Individual, como por exemplo, jaleco, luvas, mscara e
culos de proteo (dependendo da prtica a ser realizada) tambm so de uso
obrigatrio;
IV. No permitida a entrada no laboratrio portando brincos longos, colares, pulseiras,

relgios, anis e outros adornos;
V. No permitido alimentar-se ou levar qualquer tipo de alimento para dentro do laboratrio;
VI. No permitido o uso de celulares ou outros equipamentos eletrnicos.
6. DEVERES E RESPONSABILIDADES
Para um bom andamento e execuo das atividades do Laboratrio, foram definidas algumas
responsabilidades e deveres:
6.1 Referentes ao Coordenador do Laboratrio
I. Planejar, acompanhar e avaliar as atividades desenvolvidas no laboratrio;

II. Convocar reunies e encontro com professores e tcnicos para promover a organiza-
o de atividades, quando necessrio;
III. Zelar pelo bom funcionamento do laboratrio, pela segurana dos seus usurios, pela
preservao do seu patrimnio e pelo atendimento das necessidades das disciplinas
usurias;
IV. Dirimir dvidas e buscar solues para problemas que venham ocorrer no ambiente;
V. Prestar contas de suas funes chefia do Departamento de Medicina e Enfermagem;
VI. Mediar conflitos entre os recursos humanos que atuam no laboratrio;
VII. Desempenhar demais atribuies decorrentes da funo.
6.2 Referentes ao Corpo Docente
I. Supervisionar direta e constantemente todas as atividades executadas no laboratrio;
II. Orientar os alunos sobre a forma de execuo das atividades no laboratrio, minimi-
zando a ansiedade dos alunos e evitando tumulto ou desordem;
III. No permitir o ingresso no laboratrio de qualquer aluno que no esteja adequada-

mente trajado e sem EPI para as atividades;
IV. Instruir e motivas os alunos a manterem o laboratrio em ordem aps o trmino das
atividades;
5
V. No fornecer a chave do laboratrio aos alunos e/ou permitir que estes permaneam
no recinto sem sua presena;
VI. Orientar os alunos quanto ao descarte correto de materiais;
VII. Em caso de acidente envolvendo material perfuro-cortante e fluido orgnico, acalmar

os envolvidos, prestando-lhes cuidados conforme descrito neste manual;
VIII. Zelar pelos materiais e equipamentos do laboratrio, orientando os alunos quanto ao

seu uso correto, evitando desperdcios e/ou danos;
IX. Comunicar aos tcnicos do laboratrio sobre qualquer dano a equipamentos ou materiais.
6.3 Referentes ao Corpo Tcnico
I. Garantir a manuteno das boas condies de trabalho no laboratrio;
II. Seguir as normas e prticas de segurana contidas neste manual;
III. Utilizar EPI de acordo com as instrues do laboratrio;
IV. Zelar para que professores e alunos tambm faam uso dos EPIs;
V. Manter o material e espao fsico do laboratrio devidamente organizado e higienizado

para utilizao posterior;
VI. Dar apoio tcnico aos professores nas aulas prticas e pesquisas efetuadas no labora-
trio;
VII. Estar com o carto de vacinas completo (especialmente contra as seguintes doenas:
Hepatite B, Tuberculose, vrus Influenza A), e usar o crach de identificao.
6.4 Referentes ao Corpo Discente
I. Entrar no laboratrio apenas portando, caderno, lpis e caneta. Outros materiais pes-
soais, como livros bolsas e demais objetos, devem ser guardados nos armrios que se
encontram do lado externo do laboratrio;
II. Manusear qualquer material ou equipamento sempre com o apoio da equipe tcnica
do laboratrio ou professor da disciplina;
III. Zelar pelos materiais e equipamentos do laboratrio;
IV. Manter o laboratrio em ordem logo aps o trmino das atividades.
6.5 Referentes aos Visitantes
I. Permanecer no laboratrio apenas na presena de algum tcnico ou professor;
II. Seguir as orientaes dos tcnicos ou professores para evitar a ocorrncia de danos
ou acidentes.
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7. REGRAS GERAIS DE SEGURANA
I. Qualquer procedimento deve ser realizado com o uso de jaleco de manga comprida, ms-
cara, luvas e calados fechados;
II. necessrio sempre ser cauteloso, organizado e planejar o trabalho a ser realizado;
III. Utilize os Equipamentos de Proteo Individual (EPIs) apropriados nas operaes que
apresentarem riscos potenciais;
IV. No permitido colocar materiais do laboratrio em armrios ou gavetas pessoais;
V. necessria ateno e conhecimento da periculosidade quando estiver trabalhando com produ-
tos qumicos ou biolgicos para no se contaminar levando as mos boca ou aos olhos;
VI. Sempre usar luvas adequadas aos procedimentos efetuados e estar consciente do que es-
tiver sendo feito, em qualquer momento;
VII. Mantenha as bancadas sempre limpas e livres de materiais estranhos ao trabalho, assim
como equipamentos;
VIII. Mantenha as paredes e pisos sempre limpos e secos;
IX. Verifique os equipamentos antes de us-los, para se ter certeza das condies adequadas
de uso;
X. Qualquer material disponvel ou preparado deve ser rotulado;
XI. Verifique a localizao das chaves gerais de eletricidade, existentes no ambiente de trabalho;
XII. Mantenha-se informado, sempre, dos telefones dos bombeiros, da diviso de sade e ou-
tros que possam ser teis em casos de urgncia;
XIII. Nunca faa improvisaes, utilize sempre materiais adequados;
XIV. Materiais de vidro trincados ou com a borda quebrada no devem ser utilizados;
XV. Quando for utilizar tubos de vidro ou termmetros, lubrifique-os antes de inseri-los em pra;
XVI. Utilize recipientes de vidro com resistncia comprovada em trabalhos especiais;
XVII. Aps o uso, os frascos devem ser limpos adequadamente para usos futuros;
XVIII. Todos os equipamentos eltricos do laboratrio devem estar com a identificao de volta-
gem visvel;
XIX. Somente opere equipamentos eltricos quando: fios, tomadas e plugs estiverem em perfei-
tas condies e o fio terra estiver ligado;
XX. Tenha certeza da voltagem compatvel entre equipamentos e circuitos;
XXI. Nunca instale nem opere equipamentos eltricos sobre superfcies midas;
XXII. Verifique periodicamente a temperatura do conjunto plug-tomada;
XXIII. Caso esteja anormal, desligue e comunique para realizao de manuteno;
XXIV. Antes de realizar limpeza no equipamento, verifique se o mesmo est desligado da tomada;
XXV. No deixe equipamentos eltricos ligados no laboratrio fora do expediente, exceto os que
ficam no Standby;
XXVI. Remova frascos de substncias inflamveis do local onde ir usar equipamentos eltricos
ou fonte de calor;
7
XXVII. Enxugue qualquer lquido derramado no cho antes de operar equipamentos eltricos;
XXVIII. Nunca tente consertar equipamentos eltricos, entre em comunicao com a assistncia
adequada;
7.1 Descarte de Resduos

I. No descarte nenhum tipo de resduo sem antes verificar o local adequado para faz-lo;
II. Resduos biolgicos devem ser acondicionados em lixeiras brancas, em sacos bran-
cos leitosos, com smbolo infectante (abaixo):
III. Resduos biolgicos que sejam perfurocortantes devem ser acondicionados em recipien-
tes especficos (DESCARPACK), resistentes, tambm com smbolo infectante;
IV. Resduos qumicos (vencidos) devem ser recolhidos, acondicionados em embalagens

adequadas, considerando-se a especificidade de cada substncia qumica;
V. Papis diversos (incluindo papis toalhas), copos descartveis, luvas sem contaminao,
devem ser descartados em lixeiras comuns, com sacos pretos;
VI. Havendo possibilidade, segregue papis, plsticos, lixos orgnicos, lmpadas, pilhas, vi-
dros e metais para reciclagem;
VII. Caso haja contaminao do papel (e outros resduos comuns) com resduos qumicos,
este resduo dever ser descartado como tal;
VIII. Caso haja contaminao do papel (e outros resduos comuns) com resduos biolgicos,
este resduo dever ser descartado como tal.
7.2 Procedimentos adotados em casos de acidentes com perfurocortantes

I. Mantenha a calma;
II. Fale com um dos responsveis pelo laboratrio;
III. No provoque sangramento espremendo a leso, pois pode haver aumento da

exposio de sangue com o material contaminado;
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IV. Leses decorrentes de acidentes com materiais perfurocortantes, como agulhas,

bisturis e tesouras potencialmente contaminados, devem ser, imediatamente, lavadas
com gua e sabo ou soluo antissptica detergente (PVPI, Clorexidina);
V. As membranas mucosas e a pele devem ser lavadas com gua corrente em

abundncia, soro fisiolgico 0,9% ou gua boricada, repetindo a operao vrias
vezes;
VI. Deve-se evitar o uso de substncias custicas (como hipoclorito de sdio), pois estas
aumentam a rea lesada e, consequentemente, a exposio ao material infectante;
VII. Em determinados casos, coletar sangue do acidentado para realizar os exames de

Anti-HCV, HbsAg, e Anti-HIV;
VIII. Encaminhar para Diviso de Sade-UFV;
IX. Ser preciso entrar em contato com a Vigilncia Epidemiolgica de Viosa atravs do
telefone 3899-5123, para solicitar a medicao;
X. Caso no haja retorno da Vigilncia Epidemiolgica, encaminhar o acidentado para o

Hospital So Sebastio. Ele tem at 2 horas aps o acidente para tomar este
medicamento;
XI. Em caso de resultado negativo para HIV do paciente, o acidentado liberado para as
atividades.
7.3 Procedimentos adotados em caso de derramamento de produtos qumicos (txi-

cos, inflamveis e corrosivos)
I. Pare o trabalho e isole a rea;
II. Advirta as pessoas prximas sobre o ocorrido;
III. S efetue limpeza aps consultar a ficha de emergncia do produto;
IV. Alerte os farmacuticos sobre a ocorrncia;
V. Verifique e corrija a causa do problema;
VI. No caso de envolvimento de pessoas, lave o local atingido em gua corrente e procure
ajuda mdica (Diviso de Sade-UFV).
Centro de Cincias Biolgicas e da Sade
PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS
PADRONIZADOS POPs
LABORATRIO DE BIOQUMICA
Elaborao:
Adriana Lopes Gouveia
Reviso:
Adriana Aparecida Bhering Fialho
Marcos Rodrigo de Oliveira
Aprovao:
Adriano Simes Barbosa Castro
Viosa MG
2014
SUMRIO
POP 001 - Acesso ao laboratrio de bioqumica 11

POP 002 - Biossegurana em laboratrio 14
POP 003 - Lavagem e higienizao das mos 18
POP 004 - Preparo de soluo alcolica 70% 22
POP 005 - Coleta de sangue 25
POP 006 - Realizao dos exames de hematologia 28
POP 007 - Realizao do exame de tipagem sangunea 36
POP 008 - Realizao do coombs direto 39
POP 009 - Realizao do coombs indireto e pesquisa do antgeno Du 42
POP 010 - Realizao do EAS 47
POP 011 - Realizao do exame de VHS 50
POP 012 - Realizao dos exames de hematria e piria 53
POP 013 - Testes confirmatrios de urianlise 56
POP 014 - Realizao dos exames de coagulograma 62
POP 015 - Realizao dos exames de imunologia 73
POP 016 - Realizao de exame micolgico direto 80
POP 017 - Tcnica de eletroforese em gel de agarose 83
POP 018 - Operao e limpeza do microscpio 88
POP 019 - Operao e limpeza da centrfuga 92
POP 020 - Operao e limpeza do banho maria 95
POP 021 - Operao e limpeza do espectrofotmetro 98
POP 022 - Operao e limpeza do espectrofotmetro semi-automtico 103
POP 023 - Operao e limpeza do agitador magntico 107
POP 024 - Operao e limpeza do agitador de tubos (vrtex) 110
POP 025 - Operao e limpeza da estufa de secagem e esterilizao 113
POP 026 - Procedimentos em casos de acidentes com perfurocortantes 116
POP 027 gua par o laboratrio clnico 119
POP 028 - Limpeza e organizao do laboratrio 122
POP 029 - Descarte de resduos do laboratrio 124
POP 030 - Limpeza das vidrarias e acessrios utilizados no laboratrio 127
POP 031 - Monitoramento de temperatura e limpeza das geladeiras 130
POP 032 - Controle de pragas e vetores 133
POP 033 - Atividades de campo 136
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Laboratrio de Bioqumica
Procedimento Operacional Padro (POP)
Assunto: ACESSO AO LABORATRIO DE BIOQUMICA
Cdigo: 07.001 POP n: 001 Pgina: 1 de 03
Verso: 001 Reviso: 000 Validade: 2 anos
1. OBJETIVO(S):
Normatizar o acesso de servidores, alunos, professores e visitantes ao Laboratrio de

Bioqumica do Departamento de Medicina e Enfermagem DEM-UFV.
2. ALCANCE:
Docentes, Discentes e Tcnicos do Laboratrio de Bioqumica DEM-UFV.
3. RESPONSABILIDADE:
3.1. Tcnicos do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

procedimento.
3.2. Tcnicos revisores deste procedimento: Elaborao e reviso deste procedimento.
3.3. Responsveis pelo laboratrio: Superviso, orientao e treinamento dos envolvidos
quanto rotina estabelecida neste procedimento. Reviso final, aprovao, emisso e
controle deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Chegue ao setor devidamente limpo e vestido de acordo com as normas (cala comprida,
calado fechado, cabelos presos).
4.2. Paramente-se com Equipamentos de Proteo Individual de uso obrigatrio nesta rea
(jaleco, luvas, mscara e culos de proteo).
4.3. proibida a entrada de pessoas de setores externos ao laboratrio sem a devida
paramentao.
4.4. proibida a entrada no laboratrio portando brincos longos, colares, pulseiras,
relgios, anis e outros adornos.
4.5. proibido alimentar-se ou levar qualquer tipo de alimento para dentro do laboratrio.
4.6. Somente entre na rea tcnica aps estar paramentado e com crach de identificao.
4.7. Ao sair do laboratrio, retire os paramentos complementares obrigatrios e EPIs.
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4.8. Ao voltar para o laboratrio repita novamente todo o procedimento descrito

anteriormente.
4.9. Todos os servidores do laboratrio devem estar com o carto de vacinas completo
(especialmente contra as seguintes doenas: Hepatite B, Tuberculose, vrus Influenza A).
5. REFERNCIAS:
Desenvolvimento interno.
ANVISA- Resoluo RDC n 302, de 13 de outubro de 2005.

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6. HISTRICO DE REVISO:
Histrico de Alteraes realizadas no POP

Verso do
Data da Reviso Descrio da alterao Responsvel
POP
Elaborao Reviso Reviso Aprovao
Adriana Lopes Gouveia Marcos Rodrigo de Oliveira Adriana Aparecida Bhering Adriano Simes Barbosa
Fialho Castro
04/02/2015 09/02/2015 09/02/2015 23/02/2015
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Assunto: BIOSSEGURANCA EM LABORATRIO
1. OBJETIVO (S):
As exposies laboratoriais podem causar acidentes, mas a existncia de medidas eficazes

de tratamento e preveno limita os riscos. Por isso, focar a questo da Biossegurana torna-
se uma questo importante.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
CLASSIFICAO:
*Classe de risco 2: Risco individual moderado e risco limitado para a comunidade.
4.1. Primeiramente, somente pessoas TREINAD AS E AUTORIZADAS podero manipular
amostras neste laboratrio.
4.2. Utilize Equipamentos de Proteo Individual (EPIs). Este uso obrigatrio.
4.2.1. Utilize mscara e culos de proteo na realizao de procedimentos em que haja
possibilidade de respingos de sangue ou outros fluidos corpreos, nas mucosas da boca,
nariz e olhos.
4.2.2. O uso de luvas deve ser constante e os jalecos utilizados devem ser de manga
longa.
4.2.3. Os calados devem ser fechados e de boa aderncia ao solo.
4.2.4. Os cabelos e bigode devem estar sempre bem aparados.
15

4.2.5. As unhas devem estar sempre limpas e em tamanho adequado.

4.3. Realize os procedimentos com ateno mxima.
4.4. Nunca pipete com a boca.
4.5. No laboratrio proibido comer, beber, fumar, guardar alimentos ou aplicar produtos
cosmticos.
4.6. proibido levar quaisquer materiais boca e lngua.
4.7. Mantenha as reas de trabalho limpas, organizadas e livre de materiais que no so
usados durante a atividade em execuo.
4.8. obrigatrio lavar as mos antes e aps cada manuseio de material qumico e biolgico,
bem como antes de sarem do laboratrio.
4.9. Durante o trabalho no laboratrio, a equipe usar jalecos prprios, de uso restrito nestas
reas.
4.10. A indumentria para proteo dentro do laboratrio no pode ser guardada no mesmo
armrio com objetos e vesturio pessoais.
4.11. Os culos de segurana e os protetores de face (visores), assim como outros
dispositivos de proteo, devem ser usados sempre que forem indicados para a proteo de
olhos e face contra os salpicos ou contra o impacto de objetos.
4.12. Durante o trabalho, as portas destas reas permanecero fechadas. O acesso de
crianas e animais proibido.
4.13. Luvas adequadas ao trabalho sero usadas em todas as atividades que possam resultar
em contato direto com material biolgico e qumico. Depois de usadas, as luvas sero
removidas em condies asspticas e descartadas em lixo especial (biolgico). Em seguida,
lavar as mos e realizar desinfeco das mesmas com lcool 70%.
4.14. Todo e qualquer derramamento de material, acidente, exposio efetiva ou possvel a
materiais infecciosos precisam ser levados imediatamente ao conhecimento do responsvel
pelo laboratrio.
4.15. As reas de trabalho e armazenamento precisam ser adequadas para acesso a
materiais de modo a evitar o congestionamento de mobilirio, equipamentos e objetos.
4.16. proibida a colocao de vasos de plantas ornamentais nestes ambientes.
4.17. Todo e qualquer agente desinfetante e antissptico utilizado precisa ser registrado na
ANVISA e conferido quanto data de validade.
4.18. As superfcies de trabalho devem passar por desinfeco, ao menos uma vez ao dia ou
sempre que ocorrer derramamento de material potencialmente infectante.
16

4.19. Alunos de graduao que utilizem o laboratrio precisam ter treinamento tcnico
especfico no manejo de agentes patognicos e ser supervisionados por profissionais de
competncia tcnica.
4.20. Procedimentos nos quais exista possibilidade de formao de aerossis infecciosos
devem ser conduzidos em cabines de segurana biolgica ou outro equipamento de
conteno fsica.
4.21. O responsvel tem o dever de limitar o acesso ao laboratrio. Cabe a ele a
responsabilidade de avaliar cada situao de risco e autorizar quem poder ter acesso s
reas de acesso restrito.
4.22. O acesso ao laboratrio limitado e restrito, de acordo com a definio do responsvel.
Para utilizao, necessrio que seja pedida autorizao ao responsvel, explicitando o
motivo, como ser a utilizao, para qual tipo de pesquisa/ aula ser utilizado.
4.23. Todo o resduo do laboratrio deve ser adequadamente destinado.
4.24. Todo resduo biolgico segue para descarte especfico (Vide POP relacionado).
4.25. Materiais perfurocortantes: Todo material perfurocortante, mesmo que estril, deve
ser desprezado em recipientes resistentes perfurao com tampa (Exemplo: Descartex).
5. REFERNCIAS:
HIRATA, M. H.; MANCINI FILHO, J. Manual de Biossegurana. So Paulo : Manole, 2002.

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Verso do
POP
Fialho Castro
04/02/2015 09/02/2015 09/02/2015 23/02/2015
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Assunto: LAVAGEM E HIGIENIZACAO DAS MOS
1. OBJETIVO(S):
Realizar a correta assepsia das mos, a fim de evitar a contaminao prpria e de outros.
2. ALCANCE:
3.1. Tcnicos do laboratrio e demais profissionais: Execuo das atividades conforme

estabelecido neste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. A lavagem das mos deve acontecer nos seguintes casos:

4.1.1. Antes da entrada no setor, ao incio do trabalho;
4.1.2. Ao iniciar um novo servio ou ao trocar de atividade;
4.1.3. Aps utilizar o sanitrio, tossir, espirrar ou assoar o nariz;
4.1.4. Aps utilizar panos ou materiais de limpeza;
4.1.5. Aps recolhimento do lixo e outros resduos;
4.1.6. Na coleta de sangue: A cada aula, aluno, utilizar um novo par de luvas. Para isso,
realizar uma nova lavagem e assepsia das mos.
4.2. Abra a torneira e molhe as mos, evitando encostar-se pia.
4.3. Aplique na palma da mo quantidade suficiente de sabo lquido para cobrir toda a
superfcie das mos (palma, dorso das mos, espao interdigital, polegares, articulaes,
unhas e punhos).
4.4. Ensaboe as palmas das mos, friccionando-as entre si.
19

4.5. Esfregue a palma da mo direita contra o dorso da mo esquerda entrelaando os dedos

e vice-versa.
4.6. Entrelace os dedos e friccionar os espaos interdigitais.
4.7. Esfregue o dorso dos dedos de uma mo com a palma da mo oposta, segurando os
dedos, com movimento de vai-e-vem e vice-versa.
4.8. Esfregue o polegar direito, com o auxlio da palma da mo esquerda, utilizando-se
movimento circular e vice-versa.
4.9. Friccione as polpas digitais e unhas da mo esquerda contra a palma da mo direita,
fechada em concha, fazendo movimento circular e vice-versa.
4.10. Esfregue o punho esquerdo, com o auxlio da palma da mo direita, utilizando
movimentos circulares e vice-versa.
4.11. Fique atento aos locais de difcil limpeza, conforme desenho a seguir.
20

4.12. Enxague as mos, retirando os resduos de sabo. Evite o contato direto das mos
ensaboadas com a torneira. Para isso, feche a torneira utilizando um papel absorvente,
para que no haja contaminao das mos recentemente lavadas e higienizadas.
4.13. Seque as mos com papel-toalha descartvel, iniciando pelas mos e seguindo pelos
punhos. Despreze o papel-toalha na lixeira para resduos comuns.
4.14. Realize desinfeco com lcool 70INPM, deixando-o secar nas mos.
5. REFERNCIAS:
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Higienizao das mos em servios de

sade/ Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia : ANVISA, 2007.
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Assunto: PREPARO DE SOLUO ALCOLICA 70INPM

1. OBJETIVO (S):
Padronizar a preparao da soluo alcolica 70INPM.
2. ALCANCE:
Assistentes do Laboratrio de Bioqumica DEM-UFV.
3.1. Assistente do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Separe os materiais a serem utilizados: Proveta graduada, alcometro, basto,

calculadora, lcool 92,8% ou 96% e gua destilada.
4.2. Coloque em uma proveta graduada certa quantidade de lcool (de acordo com a
quantidade que se deseja preparar) e gua destilada ou deionizada, utilizando um basto para
homogeneizar.
4.3. Deixe a soluo alcolica em repouso at que haja acomodao das molculas
(eliminao das bolhas).
4.4. Mergulhe o alcometro na soluo e aguardar 1 minuto.
4.5. O alcometro dever flutuar livremente na proveta, sem tocar no fundo ou aderir s
paredes da proveta.
4.6. Para que o alcometro atinja o equilbrio, adicionar gua destilada ou lcool conforme a
necessidade do sistema.
23

4.7. Quando o alcometro atingir a posio de equilbrio (deixar de oscilar), verificar o ponto
de afloramento da haste e ler o no da graduao na parte inferior do menisco e conferir se o
grau alcolico desejado foi obtido.
4.8. O processo de diluio pode ser feito ainda, seguindo-se a seguinte frmula:
Cf Vf = Ci Vi
Exemplo: Concentrao desejada = 70%

Volume desejado = 1 litros (1000 mL)
Concentrao de lcool na soluo pura = 96%
70% X 1000 = 729,16

96%
Assim, o volume de lcool puro a ser utilizado ser de 729,16 mL, completando-se o
volume com gua destilada at atingir 1000 mL, isto , acrescentar 270,83 mL de gua
destilada.
4.9. Armazenamento: Rotular o recipiente com data de fabricao, validade e nome do
responsvel pelo procedimento e guard-lo em local apropriado.
5. REFERNCIAS:
BRAATHEN, P. C. Qumica Geral. 3ed. CRQ- MG.

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Assunto: COLETA DE SANGUE

1. OBJETIVO (S):
Padronizar a coleta de sangue, reduzindo o risco de acidentes com materiais prfuro-cortantes

para os profissionais e alunos do laboratrio.
2. ALCANCE:
3.1. Tcnicos, alunos e professores do laboratrio: Execuo das atividades conforme

estabelecido neste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. IDENTIFICAO
4.1.1. De acordo com a necessidade da aula, selecione os tubos de sangue a serem
utilizados na coleta.
4.1.2. Identific-los corretamente. Esta identificao deve conter as iniciais do aluno e a
data da coleta.
4.2. ASSEPSIA
4.2.1. Com uma gaze embebida em lcool 70INPM, limpe a cadeira de coleta, o garrote e
a bancada mvel.
4.2.2. Lave as mos e higienize-as de acordo com o POP especfico.
4.3. ALUNO
4.3.1. Chame o aluno pelo nome completo.
4.3.2. Recepcione-o profissionalmente, pedindo ao mesmo para sentar-se na cadeira.
26

4.3.3. Observe a posio do aluno na cadeira, se necessrio ajust-la para que seja
melhorada a eficincia da coleta. Posicione o brao do aluno, inclinando-o para baixo, a
partir da altura do ombro, abaixo da linha do corao. Indague-o quanto alergia ao ltex
do torniquete.
4.3.4. Realize desinfeco das mos com lcool 70INPM e aps este procedimento,
calce as luvas. Este procedimento deve ser realizado na PRESENA dos alunos.
4.3.5. Deixe a seringa, agulha, algodo e o material de coleta restante preparado. Tome o
cuidado de retirar a agulha da embalagem na presena dos alunos.
4.3.6. Com auxlio do garrote, observe qual a melhor veia a ser puncionada.
4.3.7. Realize a desinfeco do local onde ser realizada a coleta com lcool 70INPM.
Este procedimento deve ser realizado em movimentos circulares, de dentro para fora.
4.3.8. Realize a puno.
4.3.9. Ao final da coleta, retire o torniquete.
4.3.10. Nunca reencape as agulhas com as mos. Utilize as pinas removedoras de
agulhas. Descarte a agulha no recipiente especfico para perfurocortantes e realize a
distribuio do material pelos tubos. Homogeneize bem os tubos (observar os tempos
para cada teste).
4.3.11. Confira se no h mais extravazamento de sangue no local de coleta e coloque o
Blood Stop no local onde foi realizada a puno.
4.3.12. Da mesma maneira que o aluno foi recebido, libere-o.
5. REFERNCIAS:
Guia de coleta de sangue, SBPC, 2 edio, Ed. Manole, 2009.
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Assunto: REALIZAO DOS EXAMES DE HEMATOLOGIA

1. OBJETIVO (S):
Padronizar os exames de Hematologia.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Confeco do esfregao:

4.1.1. Homogeneize o tubo da amostra.
4.1.2. Coloque 5L de sangue em uma lmina. O esfregao deve ficar delgado e bem
homogneo, logo, no h necessidade de grande quantidade de amostra na lmina.
4.1.3. Com o auxlio de uma outra lmina ou extensor, com um ngulo de 45, distenda o
sangue na lmina. O esfregao deve ser feito em velocidade constante, adequada a permitir o
espalhamento uniforme da amostra.
4.1.4. Deixe a lmina secar.
4.1.5. Com lpis dermogrfico, identifique as lminas com letra legvel e facilmente visvel.
4.2. Realizao do hemograma: Homogeneize o tubo no homogeneizador de tubos ou
manualmente. Esta homogeneizao deve ser lenta para preservao das clulas sanguneas
na amostra. Leve a amostra ao aparelho Coulter. O equipamento ir liberar o resultado do
29

hemograma, exceto contagem especfica de leuccitos. Caso este resultado contenha valores
fora da faixa de referncia, deve-se repetir o processo deste tpico.
4.3. Hemograma realizado manualmente: Em casos onde o equipamento apresenta
problemas, podemos realizar o hemograma manualmente, conforme descrito abaixo.
4.3.1. Realizao do Hematcrito:
4.3.1.1. Encha um tubo capilar com sangue do paciente, at cerca de 2/3 do seu
comprimento.
4.3.1.2. Limpe as paredes do tubo com algodo.
4.3.1.3. Vede a extremidade vazia do tubo com massa apropriada ou em chama de
lamparina a lcool.
4.3.1.4. Coloque o tubo capilar na centrfuga de microhematcrito/ comum. Caso
trate-se de uma centrfuga comum, insira o capilar no interior de um tubo e inseri-lo na
centrfuga, mantendo o equilbrio com outro tubo.
4.3.1.5. Tampe convenientemente a centrfuga e centrifugue por 5 minutos. No caso
de centrfuga comum, centrifugar por 20 minutos.
4.3.1.6. Realize a leitura no carto de hematcrito.
4.3.1.7. O menisco inferior (hemcias) deve coincidir com a linha zero e o menisco
superior (plasma) deve coincidir com a linha 100. A leitura feita onde ocorre a separao
entre a capa de leuccitos e as hemcias sedimentadas.
4.3.2. Realizao da hematimetria

4.3.2.1. Em um tubo ou frasco pequeno pipetar 4 mL de lquido diluidor (lquido de
Gower ou soluo salina 0,9%).
4.3.2.2. Pipetar 0,02 mL de sangue e transferir para o frasco acima.
4.3.2.3. Aguardar 5 minutos e homogeneizar.
30

4.3.2.4. Com o auxlio de uma pipeta, prencher a cmara de Neubauer, tomando o

cuidado de homogeneizar antes da pipetagem, evitando o excesso de lquido e formao de
bolhas de ar.
4.3.2.5. Levar a cmara de Neubauer ao microscpio para efetuar a contagem.
Utilizar o aumento de 400X, utilizando o retculo central da lmina.
4.3.2.6. Ler as quadrculas laterais e central e aps, somar as parcelas.
4.3.2.7. Multiplicar o resultado por 10000.
4.3.2.8. Emitir o resultado em hemcias p/ mm 3 de sangue.
4.3.2.9. Clculos:
0,02 mL sangue ............................. 4 ml lquido diluidor

1 mL sangue ................................. x
Portanto a diluio usada para contagem de hemcias 1:200
Resultado: x hemcias p/ mm3 de sangue
4.3.3. Dosagem de hemoglobina

4.3.3.1. Em um tubo de ensaio adicionar 5 mL de reagente de cor (cianeto de
hemoglobina) e 0,02 mL de sangue total (amostra). Homogeneizar e aguardar 5 minutos.
4.3.3.2. Repetir o mesmo passo anterior para o padro.
4.3.3.3. Determinar a absorbncia do teste em comprimento de onda 540 nm,
acertando o zero com o reagente de cor ou com gua destilada/deionizada.
4.3.3.4. Obter o valor da concentrao sangunea de hemoglobina (em g/dL)
utilizando o valor obtido com o padro de hemoglobina, atravs de regra de trs simples.
Padro de hemoglobina -------- Absorvncia determinada

Concentrao de hemoglobina na amostra (X) ------ Absorvncia obtida
4.3.4. Realizao da leucometria global:

4.3.4.1. Em um tubo de hemlise pipetar 0,4 mL do lquido diluidor (preparao no
item 4.4.4.6)
4.3.4.2. Aps homogeneizar o sangue, colhido com EDTA, pipetar 0,02 mL do
mesmo, e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor.
4.3.4.3. Homogeneizar e aguardar 20 minutos para que haja destruio das
hemcias.
31

4.3.4.4. Com o auxlio de uma pipeta, encher o retculo da cmara de Neubauer,

evitando o excesso de lquido e bolhas de ar.
4.3.4.5. Levar a cmara de Neubauer ao microscpio, focalizando no aumento de
100X ou 400X (caso haja necessidade), usando para contagem os quatro retculos laterais da
cmara.
4.3.4.6. Preparao do lquido diluidor:
cido actico glacial ..................................................... 2,0 mL
Azul de metileno a 1% .................................................. 1,0 mL
gua destilada .............................................................. 100 mL
*Diluio para realizao da leucometria global:
0,02 mL de sangue ........................ 0,4 mL de lquido diluidor

1 mL sangue ................................ x
X = 20 (diluio utilizada para a contagem de leuccitos de 1/20)
*Clculos:
rea do retculo lateral = 1 mm2
rea usada para contagem = 1 mm2 x 4 = 4 mm2
Altura entre a cmara e a lamnula = 0,1 mm
Diluio utilizada = 1/20
Ento temos: 4 mm2 x 0,1 mm = 0,4 mm3
0,4 mm3 .................. y leuccitos

1,0 mm3 .................. x leuccitos
X = 2,5 y
X = 2,5 x 20 x y
X = 50 y
*Resultados: Expressos em x leuccitos p/ mm3.
4.4.5. Contagem de plaquetas: Pode ser realizada atravs de duas metodologias (mtodo
direto e indireto).
32

4.4.5.1. Mtodo Indireto (mtodo de Fnio):

4.4.5.1.1. Colher o sangue total com EDTA e realizar extenso e colorao
do mesmo modo utilizado para contagem diferencial de leuccitos.
4.4.5.1.2. Contar as plaquetas existentes em 10 campos e fazer uma mdia
do somatrio das plaquetas encontradas nestes campos. Verificar campos que contenham
aproximadamente 200 eritrcitos / campo para que a qualidade da contagem seja garantida.
4.4.5.1.3. Multiplicar o resultado por 10000 obtendo assim o nmero de
plaquetas/mm3 de sangue. Observar o clculo alternativo embaixo.
Por exemplo: em 10 campos de aproximadamente 200 eritrcitos (portando em 2.000
eritrcitos) contaram-se 75 plaquetas. O nmero de eritrcitos do paciente era de
5.000.000/mm3, assim o nmero de plaquetas/mm3 ser:
75 plaquetas .................................... 2000 eritrcitos

x = ....................................... 5.000.000/mm3 (eritrcitos)
x = 375.000 plaquetas/mm3
4.4.5.2. Mtodo Direto: A amostra a ser examinada diluda e a contagem

realizada em cmara de Neubauer (mtodo Rees-Ecker).
4.4.5.2.1. Utilizar a amostra colhida em EDTA, deixando-a em repouso no
tubo, sedimentando os elementos figurados.
4.4.5.2.2. Adicionar 20 L de plasma em um tubo j contendo 1mL de
soluo salina. Homogeneizar e inserir no retculo da cmara de Neubauer quantidade
suficiente, da diluio preparada, necessria para ench-la. Deixar em repouso por 30
minutos.
4.4.5.2.3. Levar a cmara ao microscpio e efetuar a contagem das
plaquetas no retculo central (nos 25 quadrados: rea total de contagem= 1 mm 2). Nesta
tcnica, as plaquetas apresentam-se coradas em azul e refringentes.
4.4.5.2.4. Calcular nmero de plaquetas atravs da equao de Rees-Ecker.
4.5. Colorao e contagem especfica de leuccitos:
4.5.1. Colocar a lmina com o esfregao sanguneo sobre um suporte especial para
colorao.
4.5.2. Cobrir a lmina com o corante May-Grunwald e aguardar 3 minutos.
4.5.3. Desprezar este corante lavando com gua corrente.
33

4.5.4. Cobrir a lmina com o corante Giemsa e aguardar 12 minutos.

4.5.5. Desprezar o corante, lavando com gua corrente.
4.5.6. Deixar secar e realizar a contagem especfica com objetiva de imerso (100X).
4.5.7. Esta colorao pode ser feita atravs dos corantes rpidos (pantico). Neste caso,
aguarda-se aproximadamente 10 segundos a cada etapa. Primeiramente inserir a lmina em
frasco com lcool (fixador), aps inserir a lmina nas duas solues corantes. Primeiramente
na soluo laranja (corante acidoflico) e posteriormente no corante roxo (corante
basoflico). Ao final, lavar a lmina em gua corrente e deixar secar.
4.5.8. Realizar a contagem diferencial de leuccitos. As pores mdia e final do esfregao
so os locais adequados para o estudo morfolgico e para a contagem das clulas.
4.6. Contagem diferencial de leuccitos:
4.6.1. Focalizar o local do esfregao para iniciar a contagem.
4.6.2. Com a objetiva de imerso contar 100 clulas (leuccitos), fazendo a diferenciao
entre os diferentes tipos.
4.6.3. Anotar os diferentes tipos de leuccitos e os valores encontrados na contagem em
%, utilizando o contador eletrnico. Ao completar as 100 clulas, o equipamento emitir um
som, no havendo necessidade de contagem manual.
4.6.4. Baseando-se na contagem global de leuccitos e nos valores percentuais na
contagem diferencial, os valores absolutos para cada tipo de leuccito so calculados. O
resultado dever ser expresso em nmeros relativos e absolutos. Nosso programa de
emisso de laudos j realiza esta atividade automaticamente.
Exemplo:
Contagem global de leuccitos = 10000 p/mm3
Contagem diferencial de leuccitos Valor absoluto
Neutrfilos Bastonetes 2% 200 p/mm 3
Neutrfilos Segmentados 60% 6000 p/mm 3
Eosinfilos 4% 400 p/mm 3
Moncitos 5% 500 p/mm 3
Linfcitos 28% 2800 p/mm 3
Total 100% 10000 p/mm3
Se em 100 Leuccitos ................................................ 2 Neutrfilos Bastonetes

Em 10000 Leuccitos .................................................. X Bastonetes
X = 200 Neutrfilos Bastonetes p/mm 3 de sangue
34

4.7. Padronizao interna para liberao das alteraes dos ndices hematimtricos em
hemogramas: Em nosso laboratrio, utilizamos esta padronizao (para adultos) para
que no haja variaes em leituras de diferentes tcnicos e farmacuticos.
RDW
*15,0 15,9: Anisocitose discreta
*16,0 19,0: Anisocitose moderada
*Acima de 19,0: Anisocitose intensa
MICROCITOSE:
*75-80 fL: Microcitose discreta
*68- 74 fL: Microcitose moderada
*Abaixo de 68 fL: Microcitose intensa
MACROCITOSE:
*99 - 102 fL: Macrocitose discreta
*103-110 fL: Macrocitose moderada
*Acima de 110 fL: Macrocitose intensa
POIQUILOCITOSES:
*Discreta: Poucas hemcias alteradas em alguns campos.
*Moderada: Todos os campos possuem hemcias alteradas, em pequena quantidade.
*Intensa: Todos os campos possuem hemcias alteradas, em grande quantidade.
4.8. Contagem de reticulcitos (hemcias jovens):
4.8.1. Colocar 0,5 mL de sangue colhido em EDTA em tubo de ensaio.
4.8.2. Adicionar 0,5 mL de azul de cresil brilhante.
4.8.3. Colocar em banho-maria a 37 C por 15 minutos.
4.8.4. Homogeneizar, fazer esfregao fino e focalizar com objetiva de imerso.
4.8.5. Contar, no mnimo 500 hemcias, anotando os reticulcitos encontrados nestes
campos. Prefira campos com clulas isoladas para facilitar a contagem.
4.8.6. Dividir o resultado por cinco e express-lo em %.
4.8.7. Se for solicitado o quantitativo numrico por unidade de volume, realizar o clculo
por regra de trs empregando a hematimetria obtida do equipamento.
4.9. Realizao do teste de afoiamento: Colocar uma gota de sangue (colhido em EDTA)
numa lmina. Colocar uma lamnula e vedar com parafina ou esmalte. TOMAR CUIDADO
PARA QUE NO HAJA BOLHAS. Aps 24 horas, observar em microscpio, com luz reduzida
e aumento de 40X, verificando se as hemcias ficaram alteradas, em forma de foice.
35

5. REFERNCIAS:
HENRY, J. B. Diagnsticos clnicos e tratamento por mtodos laboratoriais. 20 ed. So

Paulo: Manole, 2008. Captulo 24.

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Assunto: REALIZAO DO EXAME DE TIPAGEM SANGUNEA

1. OBJETIVO (S):
Determinar o tipo sanguneo (Sistema ABO e fator Rh).
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Utilize as normas de Biossegurana, conforme POP especfico.

4.2. Colete o sangue em um tubo com anticoagulante (EDTA).
4.3. Homogeneize bem a amostra.
4.4. Coloque duas gotas de sangue em uma lmina de vidro (lado a lado- para fator ABO).
4.5. Coloque uma gota de sangue em outra lmina (Fator RH). Espalhe bem sobre a lmina
para facilitar a visualizao da aglutinao, caso exista.
4.6. Na Lmina 1, sobre uma gota de sangue, coloque o soro anti- A.
4.7. Na Lmina 1, sobre a outra gota de sangue, coloque o soro anti-B.
4.8. Na Lmina 2, coloque sobre a gota de sangue o soro anti-Rh.
4.9. Observe a presena ou ausncia de aglutinao. Caso no haja aglutinao na presena
de Anti-RH, ou seja, tratar-se de paciente RH negativo, recomendvel a realizao da
confirmao do teste (antgeno DU).
37

4.10. Descarte o material utilizado adequadamente, de acordo com POP referido, realize a
limpeza e assepsia da bancada.
4.11. Em caso de ocorrncia de aglutinao com soro anti-A, mas sem aglutinao com soro
anti-B, conclui-se que o tipo sanguneo A.
4.12. Em caso de ocorrncia de aglutinao com soro anti-B, mas sem aglutinao com soro
anti-A, conclui-se que o tipo sanguneo B.
4.13. Em caso de ocorrncia de aglutinao com soro anti-A e anti-B, conclui-se que o tipo
sanguneo AB.
4.14. Quanto ao fator RH (anti-D), a amostra ser RH positivo quando houver aglutinao com
anti-D, caso contrrio, trata-se de uma amostra de sangue RH negativo.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: REALIZAO DO EXAME DE COOMBS DIRETO

1. OBJETIVO (S):
Padronizar a realizao do Teste de Coombs Direto.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
Primeiramente, preparar uma suspenso de hemcias a 5% a partir do sangue teste

(amostra) colhido com EDTA, em soluo salina;
4.1. Preparao do concentrado de hemcias:
4.1.1. Escolher uma amostra de sangue O Rh+ com hematcrito acima de 44%;
4.1.2. Adicionar 3 mL de soluo salina em 1 mL do sangue O Rh+;
4.1.3. Centrifugar por 15 minutos a 3000 rpm e retirar o sobrenadante;
4.1.4. Adicionar novamente 3 mL de soluo salina, centrifugar e retirar o sobrenadante;
4.1.5. Repetir as etapas anteriores at completar 3 lavagens;
4.1.6. Est formado o concentrado de hemcias.
4.2. Preparo da soluo 5% de hemcias O Rh+:
4.2.1. Em um tubo de ensaio, colocar 50 L do concentrado de hemcias preparado
anteriormente;
4.2.2. No mesmo tubo, colocar 950 L de soluo salina.
40

4.3. Realizao do Teste de Coombs Direto:

4.3.1. Tomar 3 tubos e numer-los de 1 a 3 [tubo 1 (amostra), tubo 2 (controle positivo) e
tubo 3 (controle negativo)]. Proceder de acordo com o quadro abaixo:
Quadro: Demonstrativo dos tubos
REAGENTES/TUBOS A CP (CONTROLE CN (CONTROLE

(AMOSTRA) POSITIVO) NEGATIVO)
Hemcias do paciente 1 gota ---------- ----------

(5%)
Hemcias O Rh+ a 5% ---------- 1 gota 1 gota
Soro Anti-D 1 gota 1 gota ----------
4.3.2. Incubar os trs tubos em banho-maria a 37C por 15 minutos;

4.3.3. Lavar o mesmo 3 vezes com soluo salina. A lavagem realizada com 1mL de
soluo fisiolgica em cada tubo.
4.3.4. Centrifugar a 3000 rpm por 10 minutos.
4.3.5. Desprezar o sobrenadante.
4.3.6. Repetir os passos 4.5 e 4.6 por mais duas vezes para completar as trs lavagens.
4.3.7. Colocar 2 gotas de soro de Coombs em cada um dos tubos;
4.3.8. Homogeneizar bem;
4.3.9. Centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos;
4.3.10. Realizar a leitura, agitando delicadamente o sedimento de hemcias para verificar
se existe aglutinao.
4.4 INTERPRETAO:
4.4.1. Coombs direto positivo: Se houver aglutinao.
4.4.2. Coombs direto negativo: Se no houver aglutinao.
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5. REFERNCIAS:

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Assunto: REALIZAO DO EXAME DE COOMBS INDIRETO E
PESQUISA DO ANTGENO Du
1. OBJETIVO (S):
Padronizar a realizao do Teste de Coombs indireto e pesquisa do antgeno Du.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Preparao do concentrado de hemcias:

4.1.1. Escolher uma amostra de sangue O Rh+ com hematcrito acima de 44%;
4.1.2. Adicionar 3 mL de soluo salina em 1 mL do sangue O Rh+;
4.1.4. Adicionar novamente 3 mL de soluo salina, centrifugar e retirar o sobrenadante;
4.1.5. Repetir as etapas anteriores at completar 3 lavagens;
4.1.6. Est formado o concentrado de hemcias.
4.2. Preparo da soluo 5% de hemcias O Rh+:
4.2.1. Em um tubo de ensaio, colocar 50 L do concentrado de hemcias preparado
anteriormente;
4.2.2. No mesmo tubo, colocar 950 L de soluo salina.
4.3. Realizao do Teste de Coombs Indireto:
4.3.1. Deixar o soro do paciente em banho-maria a 57C durante 30 minutos;
43

4.3.2. Em 3 tubos previamente identificados (A amostra do paciente, CP controle

positivo, CN controle negativo), acrescentar 100 L (2 gotas) de sangue O Rh + 5%;
4.3.3. No tubo A, adicionar 100 L (2 gotas) de soro do paciente;
4.3.4. No tubo CP, adicionar 100 L (2 gotas) de soro Anti-D;
Quadro 1: Demonstrativo dos tubos:
A (AMOSTRA) CP (CONTROLE CN (CONTROLE NEGATIVO)

POSITIVO)
Soro 2 gotas ---------- ----------
Hemcias O Rh+ 2 gotas 2 gotas 2 gotas

5%
Soro Anti-D ---------- 2 gotas ----------
4.3.5. Incubar os tubos a 37C durante 1 hora;

4.3.6. Adicionar 0,5 mL de soluo salina em cada um dos tubos;
4.3.8. Adicionar novamente 0,5 mL de soluo salina, centrifugar e retirar o sobrenadante;
4.3.9. Repetir esta etapa mais uma vez ( at completar as 3 lavagens);
4.3.10. Posterior s lavagens, acrescentar 100 L de soro de Coombs nos 3 tubos;
4.3.11. Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto e fazer a leitura.
4.4 INTERPRETAO:
4.4.1. Coombs indireto positivo: Se houver aglutinao.
4.4.2. Coombs indireto negativo: Se no houver aglutinao.
44

4.5. ANTGENO DU:

4.5.1. Preparao do concentrado de hemcias:
4.5.1.1. Escolher uma amostra de sangue O Rh+ com hematcrito acima de 44%.
Preparar, tambm, um concentrado de hemcias com o sangue do paciente. A
diferena deste teste para o Coombs indireto a preparao conjunta de concentrado
de hemcias do paciente.
+
4.5.1.2. Adicionar 3 mL de soluo salina em 1 mL do sangue O Rh e do paciente;
4.5.1.3. Centrifugar por 15 minutos a 3000 rpm e retirar o sobrenadante;
4.5.1.4. Adicionar novamente 3 mL de soluo salina, centrifugar e retirar o
sobrenadante;
4.5.1.5. Repetir as etapas anteriores at completar 3 lavagens;
4.5.1.6. Est formado o concentrado de hemcias.
4.5.2. Preparo da soluo 5% de hemcias O Rh+ e do paciente:
4.5.2.1. Em um tubo de ensaio, colocar 50 L do concentrado de hemcias preparado
anteriormente;
4.5.2.2. No mesmo tubo, colocar 950 L de soluo salina.
4.5.3. Realizao da pesquisa do antgeno Du:
4.5.3.1. Em 3 tubos previamente identificados (A amostra do paciente, CP controle
positivo, CN controle negativo), acrescentar hemcias 5% e soro Anti-D de acordo
com quadro seguinte.
45

Quadro 1: Demonstrativo dos tubos:
A (AMOSTRA) CP (CONTROLE CN (CONTROLE

POSITIVO) NEGATIVO)
HEMCIAS 5% DO 2 gotas ---------- 2 gotas

PACIENTE
Hemcias O Rh+ 5% ---------- 2 gotas ----------
Soro Anti-D 2 gotas 2 gotas ----------
4.5.3.2. Incubar os tubos a 37C durante 1 hora;

4.5.3.3. Adicionar 0,5 mL de soluo salina em cada um dos tubos;
4.5.3.4. Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm e retirar o sobrenadante;
4.5.3.5. Adicionar novamente 0,5 mL de soluo salina, centrifugar e retirar o
sobrenadante;
4.5.3.6. Repetir esta etapa mais uma vez ( at completar as 3 lavagens);
4.5.3.7. Posterior s lavagens, acrescentar 100 L de soro de Coombs nos 3 tubos;
4.5.3.8. Centrifugar a 3000 rpm por 1 minuto e fazer a leitura.
4.5.4 INTERPRETAO:
4.5.4.1. Antgeno Du positivo: Se houver aglutinao.
4.5.4.2. Antgeno Du negativo: Se no houver aglutinao.
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5. REFERNCIAS:

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Assunto: REALIZACO DO EXAME DE ELEMENTOS ANORMAIS NO
SEDIMENTO (EAS)
1. OBJETIVO (S):
Detectar e identificar elementos fsicos e qumicos do Sedimento Urinrio.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Realizao do exame:

4.1.1. Identifique o tubo cnico com o nmero do protocolo e as iniciais do aluno;
4.1.2. Homogeneize bem a urina;
4.1.3. Verta no tubo cnico 10 mL de urina e preserve o restante da amostra;
4.1.4. Organize as amostras de acordo com a ordenao dada;
4.1.5. Anote o volume total da urina (10 mL do tubo cnico mais o volume restante no
recipiente), a colorao e o aspecto;
4.1.6. Mergulhe a fita na urina e aguarde 1 minuto para fazer a leitura, comparando os
padres na embalagem da fita;
4.1.7. Anote os resultados das pesquisas fsica e qumica;
4.1.8. Centrifugue a amostra contida no tubo cnico por 5 minutos a 1500 rpm;
4.1.9. Guarde as amostras de urina restante, na geladeira;
4.1.10. Aps a centrifugao, despreze o sobrenadante na pia e preserve o sedimento;
48

SEDIMENTO (EAS)
4.1.11. Homogeneze o sedimento e com auxlio de uma micropipeta, coloque 20 uL do

sedimento numa lmina, coloque uma lamnula e analise o sedimento no microscpio
ptico;
4.1.12. No aumento de 100x (objetiva de 10x) pesquise a presena de cilindros e
elementos anormais;
4.1.13. No aumento de 400x (objetiva de 40x) pesquise cristais, picitos, hemcias e
clulas descamativas:
4.1.14. Conte 10 campos e faa a mdia. Os cilindros podem ser quantificados em
valores observados por lmina;
4.1.15. Cristais: Descreva os resultados em cruzes (+);
4.1.16. Flora bacteriana: Descreva o resultado em raras bactrias, moderadamente
aumentada e aumentada;
4.1.17. Demais elementos como corpos leveduriformes, Trichomonas sp, ovos de
helmintos, devero ser descritos ao final do exame.
4.1.18. NO DEVER SER UTILIZADA A OBJETIVA DE 100X (AUMENTO DE 1000X)
em nenhum momento do exame;
4.1.19. Anote, cuidadosamente, o resultado obtido.
5. REFERNCIAS:
ROCHE DIAGNOSTICS GMBH - Combur Teste.

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SEDIMENTO (EAS)

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POP
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Assunto: REALIZAO DO EXAME DE VELOCIDADE DE
HEMOSSEDIMENTACAO (VHS)
1. OBJETIVO (S):
Determinar a velocidade (VHS) com que as hemcias se separam do plasma na unidade de

tempo em mm/hora. um teste que auxilia o diagnstico e o acompanhamento de enfermidades
infecciosas, inflamatrias e neoplsicas.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Utilize as normas de Biossegurana, conforme POP especfico.

4.2. Colete o sangue em um tubo com anticoagulante (EDTA). Deve-se evitar apertar
demasiadamente o garrote evitando a estase venosa, podendo haver liberao de diversas
protenas para o plasma.
4.3. Homogeneize bem a amostra.
4.4. Insira a pipeta de Westergreen no tubo de coleta, aspirando o sangue at a marca zero.
Insira a pipeta no suporte, de modo a permanecer na posio vertical.
4.5. Cronometre uma hora.
4.6. Faa a leitura em mm aps decorrer 1 hora, medindo-se o nvel de separao entre o
sangue e o plasma.
51

4.7. Caso haja necessidade de correo (abaixo ou acima de 10mm), ou seja, em casos que o
hematcrito (HTC) do paciente estiver acima do padro (homens: 45 / mulheres:42), usar a
frmula para ajuste:
VHS = VHS- [(HTC padro- HTC Verdadeiro) x 1,75]
4.8. Descarte o material utilizado adequadamente, de acordo com POP referido, realize a
limpeza e assepsia da bancada.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: REALIZAO DOS EXAMES DE HEMATRIA E PIRIA

1. OBJETIVO (S):
Quantificar a presena de hemcias e picitos (leuccitos) na urina.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Realizao do exame:

4.1.1. Identifique o tubo cnico graduado;
4.1.2. Homogeneze bem a urina;
4.1.3. Verta no tubo cnico 10 mL de urina e preserve o restante da amostra;
4.1.4. Centrifugue a amostra contida no tubo cnico por 5 minutos 2500 rpm;
4.1.5. Guarde as amostras de urina restante, na geladeira;
4.1.6. Aps a centrifugao, despreze o sobrenadante na pia deixando 1 ml da urina no
tubo ou ajuste o volume final com soro fisiolgico;
4.1.7. Ajuste a lamnula na cmara de Neubauer;
4.1.8. Homogeneze o sedimento e com auxlio de uma micropipeta, coloque o sedimento
na cmara, preenchendo-a completamente;
54

4.1.9. No microscpio ptico, com utilizao da objetiva de 10X, verifique a

homogeneidade por toda a cmara;
4.1.10. Efetue a contagem dos elementos nos retculos dos quatro quadrantes laterais da
cmara utilizando a objetiva de 40X.
Clculo: N de elementos/ml = 250 x n
n corresponde ao nmero de picitos/ hemcias contados nos quatro

quadrantes.
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5. REFERNCIAS:

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Assunto: REALIZAO DE TESTES CONFIRMATRIOS DE URIANLISE

1. OBJETIVO (S):
Padronizar a execuo dos testes confirmatrios (Urianlise).
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. PROTENAS
Reao de cido forte + sal de metal pesado.
4.1.1. Preparao do Reativo de Robert:
4.1.1.1. Dissolva, a quente, 100 g de sulfato de magnsio em 372 mL de gua
destilada. Para cada 50 mL desta soluo saturada, adicione 10 mL de cido ntrico
concentrado. (Sem necessidade de usar cido PA).
4.1.2. Execuo do teste:
4.1.2.1. Filtre ou centrifugue a urina;
4.1.2.2. Coloque 2 mL de urina em um tubo de ensaio. Adicione o Reativo de
Robert lentamente, no fundo do tubo onde a urina est contida, com auxlio de uma pipeta,
de modo a formar duas camadas;
4.1.2.3 Efetue a leitura. Em caso positivo haver formao de anel branco na
superfcie de separao. Cada mm de espessura indicar uma cruz de positividade.
57

4.2. GLICOSE
A glicose urinria reduz o reativo alcalino de sulfato de cobre a um precipitado

avermelhado de xido cuproso.
4.2.1. Preparao do Reativo de Benedict:
4.2.1.1. Dissolva 17,3 g de sulfato de cobre pentaidratado em 100 mL de gua
destilada quente. Dissolva em outro frasco de 2 L, 173g de citrato de sdio e 100 g
de carbonato de sdio anidro em cerca de 800 mL de gua destilada, com
aquecimento. Deixe esfriar e adicione a primeira soluo a esta ltima, com
agitao constante. Complete com gua destilada at um volume final de 1000 mL.
4.2.2.1. Em um tubo de ensaio, pipete 2,5 mL de reativo de Benedict e quatro gotas
de urina. Homogeneize e leve ebulio por 2 minutos na chama direta ou por 3
minutos em banho de gua fervente.
4.2.2.2. Retire do aquecimento e efetue a leitura imediatamente.
4.2.2.3. Das substncias redutoras, somente a glicose gera reao positiva com o
Reativo de Benedict. Vitamina C pode gerar falso negativo.
4.3. CORPOS CETNICOS
Originrios do metabolismo incompleto de cidos graxos/ aminocidos. Neste teste,

acetona e cido acetoactico reagem com o nitroprussiato de sdio, em meio alcalino,
formando complexo de cor roxa.
4.3.1. Preparao do Reativo de Rothera:
4.3.1.1 Triture 1 g de nitroprussiato de sdio e 100 g de sulfato de amnia.
Conserve em vidro mbar, bem fechado.
4.3.2.1. Coloque cerca de 2 mL de urina em um tubo de ensaio e adicione o Reativo
de Rothera at a saturao (presena de depsito).
4.3.2.2. Adicione pelas paredes do tubo algumas gotas de amnia.
4.3.2.3. Efetue a leitura.
4.3.2.4. A reao positiva indicada pelo aparecimento de anel de cor roxa, cuja
intensidade proporcional concentrao de corpos cetnicos. Um anel marrom no
significa reao positiva.
58

4.4. PIGMENTOS BILIARES
A agitao da urina formando uma espuma amarelada ou amarelo-esverdeada, assim

como a cor mbar so fortes indcios para pesquisa positiva. Usa-se o mtodo de Fouchet,
onde ocorre uma co-precipitao pelo cloreto de brio e uma oxidao biliverdina, pelo
cloreto frrico.
4.4.1. Preparao do Reativo de Fouchet:
4.4.1.1. Cloreto de Brio a 10%: Dissolva 10 g de cloreto de brio diidratado, em
gua destilada, at completar 100 mL.
4.4.1.2. Reativo de Fouchet: Dissolva 25 g de cido tricloroactico em 100 mL de
gua destilada. Em outro frasco, dissolva 1 g de cloreto frrico hexaidratado em 10
mL de gua destilada e adicione esta soluo anterior. Homogeneize e guarde
em frasco escuro.
4.4.2.1. Em um tubo de ensaio coloque 5 mL de urina e 2 mL de cloreto de brio
10%. Agite e filtre.
4.4.2.2. Sobre o precipitado retido no papel de filtro, pingue 2 gotas do reativo de
Fouchet.
4.4.2.3. Efetue a leitura. O resultado positivo quando aparecer cor verde/ azul. Na
reao negativa podem aparecer outras cores devido a pigmentos da urina,
medicamentos, etc.
4.4.2.4. As amostras no devem ser deixadas em temperatura ambiente ou em
contato direto com luz, pois bilirrubina instvel. Ela estvel para um dia, quando
a urina refrigerada e guardada no escuro. A sensibilidade da prova de 0,05 a
0,1 mg/dL de bilirrubina.
4.5. UROBILINOGNIO
Derivado da bilirrubina pela ao da flora intestinal. Aumenta em casos de ictercias

hemolticas, cirrose heptica, constipao, etc. Para identific-lo, realizar prova de Erlich,
onde o urobilinognio reage com p-dimetilaminobenzaldedo, formando colorao
vermelho-cereja.
4.5.1. Preparao do Reativo de Erlich:
Dissolva 10g de p-dimetilaminobenzaldedo em 75mL de cido clordrico concentrado e
75mL de gua destilada.
59


4.5.2.1. Em um tubo de ensaio, coloque 5 mL de urina e 0,5mL do reativo de Erlich.
4.5.2.2. Agite, vigorosamente, deixe em repouso (5min) e efetue a leitura.
4.5.2.3. Caso o urobilinognio esteja em concentraes maiores que o normal,
aparecer uma colorao vermelho- cereja. Uma colorao levemente rosada pode
aparecer na urina normal.
4.5.2.4. Caso a reao seja positiva, dilua a urina 1/10, 1/20, 1/30.
4.5.2.5. Realize, novamente, o ensaio usando 5 mL da urina diluda com 0,5mL de
reativo. Homogeneize e deixe 5 minutos em repouso. Efetue a leitura, anotando,
como ttulo, a mxima diluio onde ainda aparece um tinto rosado. Normalmente,
a reao poder ser positiva at 1/20.
4.5.2.6. A prova gera resultado falso positivo em presena de porfobilinognio e
cido aminossaliclico.
4.5.2.7. Caso a urina apresente pigmentos biliares, adicione 5mL de soluo de
cloreto de clcio 10% a 20mL de urina. Misture, filtre e use o filtrado para o teste.
4.6. PORFOBILINOGNIO
Este pigmento ocorre em presena de hepatites, carcinomas, etc.

4.6.1. Preparao do Reativo de Erlich:
Dissolva 0,7g de p-dimetilaminobenzaldedo em 150 mL de cido clordrico concentrado e
100 mL de gua destilada. Guarde em frasco escuro com tampa esmerilhada, estvel por 6
meses.
4.6.2. Outros reativos necessrios:
Soluo saturada de acetato de sdio em gua deionizada, clorofrmio e butanol.
4.6.3.1. Adicione a 3 mL de urina, 3 mL do reativo Erlich. Homogeneze por
inverso e adicione, imediatamente, 6mL de soluo saturada de acetato de sdio.
Homogeneize por inverso. Uma cor rosa/ vermelha indica positividade. Divida em
duas pores o preparado.
4.6.3.2. Adicione um pouco de clorofrmio em uma das pores e agitar
vigorosamente. Espere a separao de fases. Note se houve extrao total da cor
para a fase clorofrmica. Caso necessrio, extraia mais uma vez. Se a cor passar
para a fase clorofrmica (inferior) ser urobilinognio. Se for devido a
60

porfobilinognio e outros compostos tambm reagentes, a cor permanecer na fase

aquosa.
4.6.3.3. Se a cor no for extrada pelo clorofrmio, adicione um pouco de butanol a
outra poro. Misture vigorosamente e aguarde a separao de fases. O butanol s
no extrair a colorao devida ao porfobilinognio. Assim, sero extrados o
urobilinognio e outros compostos reagentes. Caso haja extrao parcial, reextraia
com butanol e verifique a separao de fases.
4.6.3.4. A urina deve estar em temperatura ambiente, pois a urina recm emitida
contm cromgenos que reagem com Erlich temperatura corporal.
4.7. HEMOGLOBINA
Atravs da presena de hemoglobina, h decomposio da gua oxigenada com liberao

de oxignio. A fenolftalena que est presente na forma reduzida, devido a presena de
zinco, oxidada (forma ftlica). Como o meio alcalino, aparece cor caracterstica.
4.7.1. Preparao do Reativo de Johanessenn:
Junte 2g de fenolftalena, 50g de hidrxido de potssio, 20g de zinco em p, em um frasco
de 500mL e adicione 200mL de gua destilada. Leve ebulio at que a soluo fique
incolor. Deixe esfriar e coloque igual volume de lcool absoluto. Transfira para um frasco
mbar, adicionando cerca de 30mL de parafina lquida. No tampe com rolha esmerilhada
e conserve em local fresco.
4.7.2.1. Centrifugue cerca de 10mL de urina e despreze o sobrenadante (o teste
realizado com o sedimento).
4.7.2.2. Adicione 20 gotas do reativo de Johanessenn ao sedimento e agite bem.
Adicione 10 gotas de gua oxigenada (10V). Na reao negativa, no h
aparecimento de cor.
4.7.2.3. Na reao fracamente positiva, indicada por traos, aparece uma tnue
colorao rsea. Nas reaes positivas, de uma a quatro cruzes, as cores vo do
rseo intenso ao vermelho.
5. REFERNCIAS:
MOURA, R. A. et al. Tcnicas de laboratrio. Ed. Atheneu. 3 edio, 2004.

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Assunto: REALIZAO DOS EXAMES DE COAGULOGRAMA

1. OBJETIVO (S):
Padronizar os exames de coagulao.
2. ALCANCE:

procedimento.
quanto rotina estabelecida neste procedimento. Reviso final, aprovao, emisso e controle
deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. REALIZAO DOS EXAMES

4.1.1. Flebotomistas: Observe os tipos de exames a serem realizados. Colete sangue e
utilize o tubo contendo citrato como anticoagulante.
4.1.2. Tempo de sangramento ou sangria
4.1.2.1. Lancete o dedo do paciente;
4.1.2.2. Acione cronmetro;
4.1.2.3. Encoste, sem realizar presso, papel filtro de 15 em 15 segundos no local
onde houve a fissura. No momento onde o papel filtro no se suja, registre o tempo,
que ser o tempo de sangramento do paciente;
4.1.2.4. Registre este resultado.
4.1.3. Tempo de coagulao
4.1.3.1. Na coleta, marque o tempo, com o cronmetro, desde o momento em que o
sangue sai da veia e vai para o tubo.
63

4.1.3.2. Coloque o tubo em banho-maria, 37C e quando o cronmetro marcar 5

minutos, observe se houve, ou no, a coagulao.
4.1.3.3. Se houve coagulao, marque 5 minutos. Se a coagulao ainda no
ocorreu, monitore esta presena da coagulao de 30 em 30s e anote o resultado
obtido.
4.1.4. Tempos de protrombina e tromboplastina parcial (TP e TTPa)
4.1.4.1. Operao do equipamento
4.1.4.1.1. Ligue o aparelho em tomada 110V. O boto LIGA-DESLIGA encontrado

na parte traseira do equipamento;
4.1.4.1.2. Aguarde a temperatura do visor estabilizar (37C);
4.1.4.1.3. Coloque no aparelho as cubetas prprias, identificadas com o nmero de

protocolo do paciente, juntamente aos agitadores magnticos (barrinha metlica-
interior das cubetas). As cubetas devem estar ntegras e no deve conter
arranhes;
64

4.1.4.1.4. Para o teste TP, pipete 50 l de plasma citratado (para a cubeta), assim
como para o teste de TTPa. Evite a formao de bolhas e a aderncia de plasma s
paredes da cubeta. Para cada amostra, incube duas cubetas (duplicata) para casos
de necessidade de repetio.
4.1.4.1.5. No caso do teste TTPa, acrescente ainda 50 l de ativador de contato
antes da incubao (Kit Wiener);
4.1.4.1.6. Incube pressionando a tecla INCUB;
4.1.4.1.7. O tempo de incubao de 3 minutos, assim, pressione a tecla INCUB e
aps acionar a incubao, pressione TEMPO e acerte com as setas o tempo de 3
minutos. Digite ENTER;
4.1.4.1.8. LEITURA: Selecione o teste que deseja realizar (TP ou TTPa). Para isto,
pressione TEST, aps SELEC, caso trate-se do teste desejado. No visor aparecer
INSIRA CUBETA. Aps, levante a tampa do poo de leitura e coloque a cubeta,
previamente incubada (onde j est a amostra com o reagente).
65

4.1.4.1.9. TP: Pipete o reagente na quantidade indicada (100 L) e antes de

dispens-lo na cubeta, centralize bem a pipeta no poo de leitura, a fim de evitar
que o material escorra nas paredes da cubeta.
4.1.4.1.10. O cronmetro do aparelho ser automaticamente disparado aps a

pipetagem.
4.1.4.1.11. O resultado ser mostrado no visor e impresso a seguir. Os valores de
TP so liberados em % de atividade de protrombina, RNI e tempo, todos calculados
automaticamente pela curva do aparelho. Para resultados de TP, deve ser realizada
uma curva de calibrao diria para estabelecimento do valor de referncia. Em
casos de reduzidas rotinas, esta calibrao no necessita ser diria, mas mensal.
4.1.4.1.12. TTPa: Pipete o reagente na quantidade indicada (50l) e antes de
dispens-lo na cubeta, centralize bem a pipeta no poo de leitura, a fim de evitar
que o material escorra nas paredes da cubeta.
4.1.4.1.13. O cronmetro do aparelho ser automaticamente disparado aps a
pipetagem.
4.1.4.1.14. O resultado ser mostrado no visor e impresso assim que o
equipamento realizar a leitura.
4.1.4.1.15. Registre o resultado, observando se est no intervalo de referncia
utilizado. Caso no esteja, repeta a duplicata que foi incubada.
4.1.4.1.16. Aps finalizar o teste, retire a cubeta do equipamento, guarde os
materiais utilizados e organize a bancada.
66

4.2. REALIZAO DA CURVA DE CALIBRAO

4.2.1. Preparao das amostras
4.2.1.1. Planeje pela manh, a coleta de TRS plasmas, teoricamente, normais
(pessoas jovens, que estejam realizando exames de rotina).
4.2.1.2. Partindo dos plasmas coletados na rotina (manh), realize pool (mistura
destes trs plasmas). Aps, prepare pelo menos trs diluies 1/1, 1/2 e 1/3, sendo
que o Quick-Timer aceita, no mnimo, duas e, no mximo, dez diluies. Faa
quatro diluies, conforme tabela abaixo. Prepare trs amostras de cada diluio,
tirando a mdia dos valores obtidos, de forma a obter maior preciso na determinao da curva.
Para as diluies, utilize gua deionizada, soluo fisiolgica ou tampo apropriado, conforme a
orientao da bula do kit utilizado.
1/1 (100%) 1/2 (50%) 1/3 (33,3%) 1/4 (25%)
PLASMA 250L 150 L 150 L 100 L
SOLUO -------- 150 L 300 L 300 L

FISIOLGICA
4.2.2. CURVA
4.2.2.1. A partir do menu principal, pressione a tecla CURVA;
4.2.2.2. Selecione TP;

67

4.2.2.3. Digite o fator ISI (Internacional Sensitivity Index), que encontrado na bula
do kit. O fator ISI um ndice de Normalizao necessria para a emisso de
resultados no formato INR.
4.2.2.4. Selecione a forma de determinao da curva. O Quick-Timer permite a

determinao da curva de duas formas distintas, digitada ou dosada. A forma
dosada (preferencial) a mais precisa, j que a curva determinada a partir de
dosagens de padres. Na forma digitada, os valores da curva so digitados a partir
da tabela ou curva fornecida pela bula do kit, valores estes s vezes no
perfeitamente compatveis para o Quick-Timer.
4.2.2.5. CURVA DOSADA

4.2.2.5.1. Leitura das amostras para determinao da curva: Depois de
pressionada a tecla dosar o visor exibe mensagens como DILUIO?,
assim como a concentrao desejada.
68

4.2.2.5.2. Informe a diluio adequada atravs das setas (para cima e para
baixo) e pressione OK. Na sequncia, o Quick-Timer vai solicitar a
insero da primeira amostra da diluio informada.
4.2.2.5.3. Coloque a primeira amostra no poo de leitura e pipete o reagente
para iniciar a leitura. Ao final da leitura, o aparelho exibir no visor o tempo
em segundos desta primeira amostra.
4.2.2.5.4. Se pressionada a tecla PROX., o Quick-Timer pedir uma
segunda amostra da mesma diluio.
4.2.2.5.5. Aps a leitura, o visor exibir tambm o resultado em segundos

desta segunda amostra. Se houver uma terceira amostra desta mesma
diluio, pressione a tecla PROX. Com a cubeta no poo de leitura,
pressionar a tecla FIM. Aps, o aparelho indicar a retirada da cubeta,
passando para a dosagem da prxima diluio.
4.2.2.5.6. A seguir, o aparelho solicita a primeira amostra da prxima

diluio.
69

4.2.2.5.7. Aps a leitura, o visor exibir tambm o resultado (em segundos)

desta segunda amostra. Se houver uma terceira amostra desta mesma
diluio, pressione a tecla PROX.. Com a cubeta no poo de leitura,
pressionar a tecla FIM. Aps, o aparelho indicar a retirada da cubeta,
passando para a dosagem da prxima diluio.
4.2.2.5.8. A seguir, o aparelho solicita a primeira amostra da prxima

diluio. A mesma sequncia de operaes deve ser realizada.
4.2.2.5.9. Armazenamento da curva: Somente com os dois pontos

determinados j so possveis o armazenamento da curva pelo aparelho, de
forma que, se no desejar dosar uma terceira diluio, pressione a tecla
FIM. Para dosar o terceiro ponto, basta pressionar a tecla OK e proceder
conforme anteriormente.
4.2.2.5.10. Se pressionada a tecla FIM, a seguinte mensagem aparecer
no visor:
70

4.2.2.5.11. Digitando-se SIM, a curva ser armazenada na memria do

aparelho (o aparelho efetua o clculo da mdia das leituras efetuadas),
optando-se pela tecla NO, a curva recm criada ser cancelada.
4.2.2.6. CURVA DIGITADA
4.2.2.6.1. Selecione a forma digitada, atravs da tecla DIG.
4.2.2.6.2. Digite o tempo equivalente a 100 % de atividade de protrombina.

Este tempo deve ser obtido na bula do kit utilizado. Para introduzi-lo no
aparelho utilize as teclas de seta.
4.2.2.6.3. Digite o tempo equivalente a 50 % de atividade de protrombina.

Introduza este valor no equipamento da mesma forma anterior.
71

4.2.2.6.4. Confirme os dados digitados, aceitando a curva, pressionando a

tecla SIM ou cancele-os, pressionando NO.
5. MANUTENO PREVENTIVA:
5.1 Limpe o equipamento com pano mido aps o uso.

5.2 Se necessrio, utilize um detergente neutro. No utilize lcool ou solventes, pois estes
produtos podem danificar a pintura e manchar o bloco de alumnio do aparelho.
5.3 Cubetas: No devem estar riscadas, devem estar limpas e secas.
5.4 Pipetas: Verifique se as pipetas utilizadas esto funcionando com a preciso
adequada.
5.5 Reagentes: Verifique o prazo de validade e procure conserv-los refrigerados
conforme recomendao do fabricante. Os reagentes aps reconstitudos devem ser
consumidos de preferncia no mesmo dia e guardados em refrigerador quando no em
uso. Na reconstituio dos reagentes, utilize gua deionizada de boa qualidade, seguindo
a orientao da bula do produto. Alguns reagentes utilizados nas determinaes atravs de
tcnica manual no funcionam em equipamentos com detector tico, verifique se no
esta a causa do problema.
6. REFERNCIAS:
Manual do coagulmetro Drake.

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Assunto: REALIZAO DOS EXAMES DE IMUNOLOGIA

1. OBJETIVO(S):
Padronizar os exames de Imunologia.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. PROTENA C REATIVA (PCR)

A protena C Reativa um til indicador de processo inflamatrio em atividade, quer seja
de origem infecciosa ou no infecciosa.
4.1.1. Antes da realizao do teste, deixe os reagentes e amostras atingirem a
temperatura ambiente, a amostra estvel 2 dias entre 2-8C.
4.1.2. No utilize soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir aglutinao
inespecfica.
4.1.3. Coloque sobre a bancada somente os materiais que sero utilizados para a
realizao do exame (luvas descartveis, estante, tubos de ensaio, placa de fundo escuro,
recipiente pra descarte do material, ponteiras, soluo fisiolgica, pipetas de 50L e 20L,
cronmetro, reagente e agitador mecnico ou manual).
4.1.4. Pipete 50L de soluo fisiolgica e distribua pelos tubos 2, 3 e 4, pois no tubo 1 o
ser o soro do paciente, sem diluio.
74

4.1.5. Pipete 50L da amostra colocando-a somente no segundo tubo (Diluio 1:2).
4.1.6. Homogeneze o preparado diludo, retirando 50L do primeiro tubo passando para o
segundo e descarte 50L no final da ltima diluio.
4.1.7. Coloque em cada crculo da placa 20L da diluio final (de cada um dos quatro
tubos).
4.1.8. Homogeneze bem o reagente e pipete 20L do mesmo, colocando junto com a
diluio na placa. Tome os devidos cuidados com a ponteira, sempre procurando
descartar as utilizadas, para que no haja contaminao do reagente.
4.1.9. Misture o reagente e o soro diludo, com auxlio de um palito descartvel ou
ponteira, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior do crculo.
Empregue palitos ou ponteiras distintos para cada amostra.
4.1.10. Agite a placa 100rpm durante 2 minutos ou incline-a para frente e para trs, com
movimentos oscilatrios, por 2 minutos e imediatamente verifique a presena ou no de
aglutinao macroscpica.
4.1.11. RESULTADOS:
4.1.11.1. POSITIVO: Ntida aglutinao.
4.1.11.2. NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).
4.2. ANTIESTREPTOLISINA O (ASLO)
Este exame importante na confirmao de infeco recente ou em andamento por
estreptococos beta-hemolticos.
4.2.1. Antes da realizao do teste, deixe os reagentes e amostras atingirem a
temperatura ambiente, a amostra estvel 2 dias entre 2-8C.
inespecfica.
4.2.3. Coloque sobre a bancada os materiais que sero utilizados para a realizao do
exame (estante, tubos de ensaio, placa de fundo escuro, recipiente pra descarte do
material, ponteiras, soluo fisiolgica, pipetas de 50L e 20L, cronmetro, reagente e
agitador mecnico ou manual).
4.2.4. Pipete 50L de soluo fisiolgica e distribua pelos tubos 1, 2, 3, 4 e 5.
75

4.2.5. Pipete 50L da amostra colocando-a diretamente no primeiro tubo (Diluio 1:2).
4.2.6. Homogeneze o preparado diludo, retirando 50L do primeiro tubo, passando para
o segundo e descarte 50L no final da ltima diluio.
4.2.7. Coloque em cada crculo da placa 20L da diluio final.

4.2.8. Homogeneize bem o reagente e pipetar 20L do mesmo, colocando junto com
a diluio na placa. Tome os devidos cuidados com a ponteira, sempre procurando
4.2.10. Agite a placa 100rpm durante 2 minutos ou incline-a para frente e para trs,
com movimentos oscilatrios, por 2 minutos e imediatamente verifique a presena
ou no de aglutinao macroscpica.
4.2.11. RESULTADOS:
4.3. FATOR REUMATIDE (LATEX FR)
O ltex um teste sorolgico que tem como funo identificar a presena do fator
reumatide (FR) em indivduos, visando o processo de identificao para tratamento
prvio da Artrite Reumatide (AR).
4.3.1. Antes da realizao do teste, deixe os reagentes e amostras atingir a temperatura
ambiente, a amostra estvel 2 dias entre 2-8C.
inespecfica.
exame (estantes tubos de ensaio, placa de fundo escuro, recipiente pra descarte do
material, ponteiras, soluo fisiolgica, pipetas de 50L e 20L, cronmetro, reagente e
agitador mecnico ou manual).
76

4.3.4. Pipete 50L de soluo fisiolgica e distribua pelos tubos 1, 2, 3, 4 e 5.

4.3.5. Pipete 50L da amostra colocando-a diretamente no primeiro tubo (Diluio 1:2).
4.3.6. Homogeneze o preparado diludo, retirando 50l do primeiro tubo passando para o
segundo e descarte 50L no final da ltima diluio.
4.3.7. Coloque em cada crculo da placa 20L da diluio final.

4.3.8. Homogeneze bem o reagente e pipete 20L do mesmo, colocando junto com a
diluio na placa. Tome os devidos cuidados com a ponteira, sempre procurando
4.3.10. Agite a placa 100rpm durante 2 minutos ou incline-a para frente e para trs,
com movimentos oscilatrios, por 2 minutos e imediatamente verifique a presena
ou no de aglutinao macroscpica.
4.3.11. RESULTADOS:
4.4. VDRL
um mtodo indicado para teste de triagem na deteco de anticorpos (reaginas) da
sfilis no soro, plasma ou lquido cefalorraquidiano (LCR).
4.4.1. Antes da realizao do teste, deixe os reagentes e amostras atingir a temperatura
ambiente, a amostra estvel 5 dias entre 2-8C.
inespecfica.
exame (placa escavada, recipiente para descarte do material, ponteiras, soluo
fisiolgica, pipetas de 50l e 20l, cronmetro, microscpio, reagente e agitador
mecnico/Kline ou manual).
77

4.4.4. Pipete 50L de soluo fisiolgica e distribua pelas cavidades da placa escavada (4
diluies sero realizadas inicialmente).
4.4.5. Pipete 50L da amostra colocando-a somente na primeira cavidade (Primeira
cavidade: Diluio 1:2).
4.4.6. Homogeneze o preparado diludo, retirando 50L da primeira cavidade passando-a
para as demais e descarte 50L no final da ltima diluio.
4.4.7. Homogeneze bem o reagente e pipetar 20L do mesmo, colocando em cada uma
das cavidades da placa junto com a diluio final. Tome os devidos cuidados com a
ponteira, sempre procurando descartar as utilizadas, para que no haja contaminao do
reagente.
4.4.8. No necessrio misturar esses dois componentes.
4.4.9. Agite a placa 180rpm durante 4 minutos ou fazer movimentos circulares
manualmente por 4 minutos e imediatamente observe ao microscpio na objetiva de 10X.
4.4.10. RESULTADOS:
4.4.10.1. POSITIVO Reativo: Ocorre floculao com formao de grumos de
tamanhos variveis suspenso de aspecto heterogneo.
4.4.10.2. NEGATIVO No reativo: Ausncia de floculao, suspenso de
aspecto homogneo.
4.5. GONADOTROFINA CORINICA HUMANA (BHCG)
um mtodo imunocromatogrfico para determinao rpida e qualitativa de
Gonadotrofina Corinica Humana (hCG).
4.5.1. Antes de iniciar o teste a amostra deve estar em temperatura entre 15 e 30C.
4.5.2. A amostra estvel por 10 dias entre 2-8C e por 3 meses a -10C.
4.5.3. No utilize soros hemolisados ou lipmicos, pois podem causar um resultado falso
positivo.
exame (estante, tubo de ensaio, recipiente para descarte do material, ponteiras, pipeta de
500L, cronmetro, tira reativa e luvas descartveis).
4.5.5. Pipete 500L da amostra e transfera para os tubos, retire a tira reativa da
embalagem protetora colocando a ponta absorvente da tira em contato com a amostra
(soro ou urina) por 10 segundos.
4.5.6. Assim que toda a poro cromatogrfica da fita estiver em contato com o soro do
paciente, retire a fita e verifique o resultado de acordo com a bula do fabricante.
78

5. REFERNCIAS:
BIOCLIN: BIOLTEX ASO. QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Belo Horizonte, 2013.
Instrues de uso.
BIOCLIN: BIOLTEX FR. QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Belo Horizonte, 2012. Instrues
de uso.
BIOCLIN: BIOLTEX PCR. QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Belo Horizonte, 2013.
Instrues de uso.
BIOCLIN: VDRL Pronto para Uso. QUIBASA QUMICA BSICA Ltda. Belo Horizonte, 2013.
Instrues de uso.
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Assunto: REALIZAO DE EXAME MICOLGICO DIRETO

1. OBJETIVO (S):
Coletar corretamente e obter amostras de qualidade no exame micolgico direto.
2. ALCANCE:
3.1 Tcnicos do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

procedimento.
3.2 Tcnicos revisores deste procedimento: Elaborao e reviso deste procedimento.
3.3 Responsveis pelo laboratrio: Superviso, orientao e treinamento dos envolvidos
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Certifique-se que a pessoa no est utilizando nenhuma medicao anti-fngica

(pomadas, xampus, loes tpicas ou medicao via oral), ou seja, a medicao antifngica
tpica no pode ter sido utilizada 15 dias antes, entretanto, se for de uso sistmico, necessita
haver abstinncia de um ms. Instru-la a no utilizar cosmticos ou qualquer outro produto na
rea lesionada, assim como esmaltes comuns ou medicamentosos sobre a unha lesionada.
4.2. A coleta realizada de acordo com o local da regio infectada.
4.3 COLETA:
4.3.1. Separe lmina de bisturi estril, lcool 70%p/v e algodo;
4.3.2. Lave o local da leso com gua e sabo;
4.3.3. Faa assepsia do local da coleta com lcool 70o;
4.3.4. Raspe a leso com a lmina de bisturi perpendicular, sobre uma placa de Petri at
obter material suficiente para a realizao do exame;
81

4.3.5. O material dever ser colocado sobre uma lmina nova. Coloque uma lamnula
sobre esse conjunto e visualize-o em soluo de KOH (Hidrxido de potssio) 20%;
4.3.6. A lmina dever ser levada ao microscpio e dever ser feita a pesquisa nas
objetivas de 10 e 40X, com aumentos de 100 e 400X, respectivamente.
5. REFERNCIAS:
KONEMAM, E.W., ROBERTS, G.D. Micologia: Practica de laboratorio. 3a edio. Buenos Aires:
Editora Panamericana, 1992.
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Assunto: TCNICA DE ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE

1. OBJETIVO (S):
Padronizar a utilizao do sistema de eletroforese em gel de agarose.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Separe os componentes do sistema de eletroforese.

4.2. Certifique-se que todos os componentes esto limpos.
4.3. Prepare o gel de agarose conforme exposto a seguir:
4.3.1. Constituio do gel:
TAE 50X
Tris base 242 g
cido Actico 57,1 mL
EDTA 0,5M pH: 8,0 100 ml
gua miliQ q.s.p. 1000 mL
TAE 1X
TBE 5X 20 mL
gua miliQ 980 mL
84

4.3.2. Gel de agarose 2%

4.3.2.1. 2g de Agarose .............100mL de TAE 1x.
4.3.2.2. Aquea o sistema no forno microondas at completa dissoluo da agarose
(cuidado ao agitar para no transbordar; tampar o erlemeyer com plstico filme e
fazer furos no plstico para evitar que transborde no interior do microondas).
4.3.2.3. Tempo gasto: Em torno de 7-10 min na potncia 5.
4.3.2.4. Adicionar 3L de GelRed Biotium para cada 100 mL de gel (acrescentar
quando retirar o gel do microondas).
4.3.2.5. Esperar esfriar um pouco para verter na cuba (No deixar esfriar demais).
4.3.2.6. Quando adquirir uma caracterstica opaca, o gel estar pronto para
aplicao.
4.3.2.7. Para aplicao em gel, utilizar 5L do produto amplificado (no caso de
PCR) e 1L de Loading Dye Buffer 6X Fermentas (0,25% de azul de
bromofenol, 15% de Ficol tipo 400).
4.3.3. Gel para eletroforese de hemoglobina
4.3.3.1. Tampo Tris-Glicina: pH 8,6
Tris-hidroximetil-aminimetano......7,05 g
Glicina ..........................................11,30 g
gua destilada q.s.p. .......................1000 mL
4.3.3.2. Saponina 1%
Saponina ......................................1,0 g
gua destilada q.s.p. ......................100 mL

85

4.3.3.3. Soluo corante
Ponceau S ......................................0,5 g
cido Tricloroactico ........................5,0 g
Etanol ..............................................50 mL
gua destilada q.s.p. ..........................100 mL
4.3.3.4. Soluo Descorante
Metanol ..............................................40 mL
cido Actico Glacial ...........................80 mL
gua destilada q.s.p. ...........................920mL
4.4. Monte o suporte do gel, certifique-se que as espumas da base estejam bem encaixadas.
4.5. Coloque aproximadamente 20 mL do gel de agarose sobre a bandeja do suporte,
observando se est havendo vazamento.
4.6. Encaixe o pente do dente contido no suporte.
4.7. Espere o gel esfriar at que haja total gelificao da agarose.
4.8. Corrida eletrofortica:
4.8.1. Coloque tampo de eletroforese na cuba at cobrir o degrau presente na parte
interna da mesma.
4.8.2. Com cuidado, retire a bandeja do suporte.
4.8.3. Coloque a bandeja dentro da cuba, em cima do degrau interno, ficando esta com as
abas para fora da cuba.
4.8.4. Complete a rea interna com tampo de eletroforese.
4.8.5. Retire o pente e aplique as amostras j diludas em tampo de carregamento.
4.8.6. Tampe o sistema de forma que o lead vermelho, positivo, fique na parte superior do
gel e o lead preto, negativo, fique na parte inferior do gel.
4.8.7. Conecte os leads na fonte.
4.8.8. Certifique-se que os leads foram colocados corretamente.
86

4.8.9. Acerte os parmetros de corrida: 100V, de 400mA e de 1 hora.

4.8.10. Inicie a eletroforese, acompanhe a entrada das amostras no gel (o tempo da
corrida pode variar conforme a amostra).
4.9. Cuidados especiais:
4.9.1. O sistema de eletroforese deve ser lavado com gua destilada imediatamente aps
o uso, no utilize solventes orgnicos.
4.9.2. A temperatura do tampo de corrida influencia na resoluo das bandas. No utilize
tampo quente, acima de 50C. O gel deve ser moldado em uma superfcie nivelada.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DO MICROSCPIO

1. OBJETIVO (S):
Padronizar os procedimentos de pr, operao e ps-operao, manuteno geral e

preservao do microscpio.
2. ALCANCE:
3.1. Tcnicos de Laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

procedimento.
3.2. Tcnico Revisor deste procedimento: Reviso deste procedimento.
3.3. Responsveis pelo Laboratrio: Superviso, orientao e treinamento dos envolvidos
quanto rotina estabelecida neste procedimento. Reviso geral e reviso final,
aprovao, emisso e controle deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. PR-OPERAO
4.1.1. Retire a capa protetora do microscpio;
4.1.2. Verifique a voltagem do equipamento;
4.1.3. Conecte o aparelho na tomada;
4.2. OPERAO
4.2.1. Acione a chave liga-desliga;
4.2.2. Ajuste a intensidade da fonte de iluminao;
4.2.3. Ajuste o diafragma do cardiide;
4.2.4. Ajuste a distncia do cardiide mesa porta-lminas;
4.2.5. Ajuste a distncia interpupilar.
4.2.6. Coloque o material a ser analisado;
4.2.7. Selecione e posicione a objetiva adequada ao exame;
89

4.2.8. Focalize e examine a amostra;

4.2.9. Retire o material analisado;
4.2.10. Reduza ao mnimo a intensidade da luz e aps, desligue a chave de alimentao
do equipamento.
4.3. PS-OPERAO
4.3.1. Retire o cabo de alimentao da tomada de fora eltrica.
4.3.1. Realize a limpeza das lentes objetivas e oculares com gaze seca ou solvente
apropriado.
4.3.1. Recoloque a capa de proteo.
4.4. LIMPEZA
4.4.1. Chassi e base do revlver:
4.4.1.1. Frequncia diria: Retirada de poeira e gordura com auxlio de solvente
orgnico (e.g. lcool etlico).
4.4.2. Lentes e demais partes pticas:
4.4.2.1. Frequncia diria ou sempre que necessrio: Retirada de poeira e de
resduos de leos e gorduras com papel de limpeza para lentes ou gaze;
90

4.4.2.2. Frequncia semanal: Limpeza com solvente orgnico adequado (e.g.
xileno).
5. MANUTENO PREVENTIVA:
5.1. Superfcies pticas: Verificao peridica de umidade e de formao de biofilmes;

5.2. Superfcies deslizantes: Verificao peridica de peas deslizantes, observando a
existncia de folgas, travamentos ou rangidos metlicos;
Para ambas as situaes, comunique ao responsvel tcnico do Laboratrio para
providncias junto mo-de-obra especializada da Oficina de Manuteno da Universidade
Federal de Viosa.
6. REFERNCIAS:
CORMACK, David H., Introduction to histology, J.P.Lippincott Company, Philadelphia, USA, 1984,
p. 4-7.
OMS-Genve, Metodos Basicos de Laboratorio en Parasitologia Medica, Graficas Reunidas,
Madrid, Espaa, 1992, p. 7-8.
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DA CENTRFUGA

1. OBJETIVO (S):
Estabelecer os procedimentos para a utilizao e limpeza da centrfuga.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Separe a amostra a ser centrifugada, utilizando luvas de procedimento.

4.2. Coloque a amostra em tubos adequados para o seu volume.
4.3. Calibre os tubos para que fiquem com o mesmo peso.
4.4. Para o processo de calibrao utilize um tubo igual ao que foi coletada a amostra, com
mesmo volume de lquido. Caso seja necessrio, complete com gua at o mesmo nvel
do volume do tubo que contm a amostra.
4.5. Coloque os tubos dentro dos suportes, de forma simtrica, sendo que estes tubos
devem ficar frente a frente.
4.6. Certifique-se que todos os suportes e tubos esto nas posies corretas.
4.7. Feche a tampa da centrfuga.
4.8. Certifique-se da voltagem da tomada antes de ligar a centrfuga (127V/ 60Hz).
4.9. Acione a chave liga-desliga.
93

4.10. Ajuste o tempo de centrifugao e em seguida a velocidade em RPM segundo os

dados a seguir.
Amostra Rotao (RPM) Tempo (minutos)
Soro 3500 10
Urina 1500 5
Plasma citratado 2500 15
4.11. Ao trmino da centrifugao, volte o boto da velocidade para a posio inicial e

desligue a centrfuga.
4.12. Retire os tubos da centrfuga e desligue o plug da tomada.
4.13. Certifique-se de que no haja tubos quebrados no interior da centrfuga e respingos
de material biolgico.
4.14. Realize a limpeza da centrfuga com lcool 70 INPM.
4.15. Semanalmente ou de acordo com a necessidade, lave os compartimentos dos tubos
da centrfuga com gua e sabo e realize desinfeco com lcool 70 INPM.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DO BANHO MARIA

1. OBJETIVO (S):
Estabelecer os procedimentos para utilizao do Banho Maria.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Especificaes tcnicas: Banho Maria Digital, modelo SL150/10, marca SOLAB.
Temperatura de trabalho 20 a 110 C.
4.2. Utilizao:
4.2.1. Antes de utilizar o aparelho, certifique-se que a cuba esteja cheia de gua.
4.2.2. Abastea o banho-maria sempre com gua destilada at 2 cm da borda.
4.2.3. Antes de ligar o aparelho rede eltrica, certifique-se de que a chave geral esteja
desligada.
4.2.4. Verifique a voltagem do aparelho (110V) e a rede de alimentao.
4.2.5. Aps verificao, conecte o cabo de alimentao na tomada.
4.2.6. Ligue o boto liga/desliga.
4.2.7. Na parte inferior do painel eletrnico aparecer em qual temperatura est
programado o banho-maria.
4.2.8. Caso queira mudar a temperatura:
96

4.2.8.1. Pressione a tecla ajuste da temperatura desejada (aumenta a

temperatura) e (diminui a temperatura).
4.2.8.2. Espere aproximadamente 10 minutos para que o equipamento atinja a
temperatura desejada (verificar na parte superior do painel eletrnico).
4.2.8.3. Aps o uso, desligue o boto liga/desliga e retire o plug da tomada.
4.2.8.4. Aps desligado, realize a limpeza do equipamento. Nunca realize a limpeza
com o equipamento ligado.
4.2.8.5. Lavar semanalmente o equipamento com sabo neutro e lcool a 70%.
4.3 MANUTENO PREVENTIVA:
Para toda tipo de manuteno, procure sempre a assistncia tcnica SOLAB.
5. REFERNCIAS:
Manual do usurio.
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DO ESPECTROFOTMETRO

1. OBJETIVO (S):
Fornecer orientaes gerais sobre como realizar dosagens no espectrofotmetro.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. DESCRICO DO EQUIPAMENTO

Na figura a seguir, esto representados os principais componentes do painel frontal do
equipamento:
1: Display digital.
2: Teclado de comando.
3: Tampa do compartimento de amostra.
4: Puxador para troca da cubeta.
5: Led para indicao de problema na lmpada de Deutrio.
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4.2. OPERACIONALIZAO
4.2.1. Ligue o equipamento, atravs da chave no painel traseiro. O equipamento
bivolt, logo pode ser ligado em 110V ou 220V.
4.2.2. Prepare as amostras biolgicas a serem dosadas. Tambm o branco e a
amostra padro.
4.2.3. O display ir exibir uma mensagem com o modelo do equipamento e em
seguida uma de Aguarde.... Aguarde a finalizao do processo de inicializao que
poder levar alguns segundos dependendo da condio inicial do equipamento.
4.2.4. Quando estiver pronto o display (1) exibir a leitura em %T e o comprimento de
onda em nm.
4.2.5. Para fazer leituras em Absorvncia, tecle A. O display, ento, passar a
exibir o valor equivalente em Abs.
100

4.2.6. Para fazer leituras em Concentrao, tecle C. O display ir exibir

momentaneamente o nmero da curva de calibrao selecionada e, em seguida,
passar a exibir o valor equivalente em concentrao e sua unidade, a
absorvncia e o comprimento de onda.
4.2.7. Para fazer leituras em Transmitncia novamente, tecle T. O display, ento,
passar a exibir o valor equivalente em %T.
4.2.8. IMPORTANTE: Aguarde alguns minutos antes de comear a fazer medidas. o
tempo necessrio para que todo o sistema eletrnico entre em regime estvel
(estabilizao da temperatura interna dos componentes).
4.2.9. Coloque numa cubeta a sua soluo branco e faa uma leitura do mesmo.
Para calibr-lo como 100%T (ou 0,000 Abs.) pressione Cal. O display ir exibir a
mensagem calibrando.... Ao trmino do processo voltar a fazer as leituras
normalmente.
4.2.10. Para trocar de comprimento de onda tecle . Digite o comprimento de onda
desejado e tecle Entra. Aguarde o sistema posicionar no novo comprimento de
onda.
4.2.11. Caso seja selecionado um comprimento de onda na faixa de operao da
lmpada de Deutrio e esta se encontrar desligada (condio inicial do equipamento)
a mesma ser acionada e ser feita a troca de lmpadas.
4.2.12. Calibre o 100%T e estar pronto para leitura novamente.
4.2.13. IMPORTANTE: Quando acionar a lmpada de Deutrio aguarde alguns
minutos antes de comear a fazer medidas. o tempo necessrio para que todo o
sistema eletrnico e a lmpada entrem em regime estvel.
4.2.14. Para preparao de curvas de calibrao, troca de lmpadas ou qualquer outra
programao ou dvidas, consulte o manual do aparelho que encontra-se na gaveta
de manuais do laboratrio (CD).
4.2.15. Aps o uso, desligue o aparelho na chave Liga/Desliga.
4.2.16. Sempre desconectar o aparelho da tomada antes de iniciar a limpeza ou a
troca de fusveis.
4.2.17. Para a limpeza do gabinete branco, utilize somente flanela ligeiramente
umedecida com etanol ou cera de polir automveis.
4.2.18. Para a limpeza da tampa do compartimento de amostras, utilize somente
flanela com cera de polir automveis.
101

4.2.19. Para a limpeza da membrana do painel frontal, utilize flanela ligeiramente

umedecida com gua.
4.2.20. Para a limpeza do compartimento de amostras: Caso ocorra queda de
lquidos, seque bem com leno de papel. Em seguida, utilize leno de papel
ligeiramente umedecido com gua. O uso de secadores tipo para cabelo ideal
para eliminar o risco de umidade. Se no houver secador disponvel, deixe o
equipamento ligado cerca de duas horas com a tampa do compartimento de
amostras aberto.
4.2.21. Para limpar as cubetas, use somente uma haste com algodo umedecido
com sabo neutro e gua destilada. No usar lcool, nem qualquer substncia
corrosiva. Quando no estiverem em uso, as cubetas devem ser tampadas e
guardadas no estojo prprio para no entrarem em contato com poeira.
5. MANUTENO:
5.1 Manter a renovao de ar limpo. Laboratrios sem a ventilao adequada e com a
presena de gases corrosivos so a principal causa de danos na parte tica e terminais
das placas.
5.2 Opere o equipamento com as mos limpas e secas, o que aumentar bastante a vida
til do equipamento.
5.3 Limpar e secar bem as cubetas antes de coloc-las no compartimento de amostras,
procedimento este necessrio para a qualidade dos resultados e que evita manutenes
desnecessrias.
5.4 Enviar, em caso de necessidade, o equipamento ao fabricante para reviso e/ou
Certificao: FEMTO Indstria e Comrcio de Instrumentos Ltda. Rua Jaguar, 12
Bosque da Sade- CEP 04137-080 So Paulo SP Brasil. Site: www.femto.com.br e
email: femto@femto.com.br. Tel.: (11)5581-4713 / 5589-6964 / 5072-8237 e Fax.: (11)
5584-0379
5.5 Consulte testes de reprodutibilidade, estabilidade, linearidade, comprimento de onda
e teste cintico, luz espria no manual.
6. REFERNCIAS:
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SEMIAUTOMTICO
1. OBJETIVO (S):
Fornecer orientaes gerais sobre como realizar dosagens no aparelho de Espectrofotometria

semi-automtico.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO/ MANUTENO:
4.1. DESCRIO DO EQUIPAMENTO:

4.1.1. O laboratrio possui um aparelho de espectrofotometria semi-automtico da marca
BIO PLUS que realiza testes bioqumicos por mtodos colorimtricos, enzimticos ou
cinticos e de turbidimetria, padro, fator ou curva de padres.
4.1.2. H possibilidade de 90 programaes para diferentes reagentes.
4.1.3. Sua faixa de leitura de -0,100 a 3,000 Abs., de forma monocromtica e
bicromtica.
4.1.4. Monocromador com 6 filtros: 405, 505, 546, 578, 620 e 670 nm.
4.1.5. Banda de passagem 06 nm. Luz espria: < 0,01%T.
4.1.6. Leituras em absorbncia, ponto final, diferencial. Leituras com padro, multipadro
e fator.
104

SEMIAUTOMTICO
4.2. OPERACIONALIZAO:
4.2.1. Verifique a voltagem do aparelho 110, 127, 220, 240 Volts 35 VA para lig-lo
tomada correspondente.
4.2.2. Ligue o Instrumento na chave Liga/Desliga.
4.2.3. Aperte a tecla F1 (TEST).
4.2.4. Pressione a tecla PRINT para ver os testes programados no aparelho.
4.2.5. Pressione a tecla F2 (INC) ou F1 (DEC) para incrementar ou decrementar o cursor
no nome do teste que se deseja executar.
4.2.6. Pressione a tecla F4 (SEL) para selecionar o teste.
4.2.7. Pressione F2 (INC) para avanar para a prxima etapa.
4.2.8. Para dosagem de uma nica leitura de amostra, selecione atravs da tecla F4 (<)
se deseja dosar a amostra com leituras em duplicatas ou triplicatas.
4.2.9. Selecione PADRO (SIM) e o BIO-200 solicitar durante o teste o padro e
calcular o fator, que ser memorizado e poder ser utilizado em outras dosagens.
4.2.10. Caso deseje digitar o fator ou utilizar o fator calculado anteriormente, selecione
com a tecla F4 (>) para PADRO (NO) e pressione a tecla F2 (INC) e o BIO-200
mostrar o fator anteriormente memorizado.
4.2.11. Pressione F2 (INC) para avanar para a prxima etapa.
4.2.12. Pressione F4 (ENT) para iniciar as dosagens.
4.2.13. Insira gua pela mangueira para calibrar o ganho eletrnico.
4.2.14. Insira blank para dosar a leitura e solicitar a confirmao para o ajuste do blank do
reativo.
4.2.15. Insira o padro e confirmar com a tecla F3 (SIM).
4.2.16. Aps confirmado o padro, o BIO-200 calcular o fator e o memorizar, e ento
solicitar as amostras.
4.2.17. Insira as amostras conforme solicitado no display.
4.2.18. Caso haja a necessidade de repetir a amostra, pressione a tecla F1 (REP) e
continue.
4.2.19. Aps o trmino das dosagens das amostras, pressione a tecla F3 (ANTE) por 2
vezes.
4.2.20. Insira gua deionizada na entrada da cubeta e pressione a tecla F4 (LAVA) aps a
lavagem, pressione a tecla F3 (ANTE) para sair do teste.
105

SEMIAUTOMTICO
4.2.21. Selecione outro teste que deseje efetuar as dosagens ou pressione novamente a
tecla F3 (ANTE) para por o BIO-200 em repouso.
4.2.22. Para qualquer outra programao ou dvidas, procure pelo manual do aparelho na
gaveta de manuais do laboratrio.
4.2.23. Aps o uso, desligue o aparelho na chave Liga/Desliga.
4.2.24. Sempre desconectar o aparelho da tomada antes de iniciar a limpeza ou a troca
de fusveis.
4.2.25. Limpar a parte externa do aparelho utilizando um pano levemente umedecido com
uma soluo de limpeza pouco concentrada.
4.2.26. Para a desinfeco do aparelho, usar um pano umedecido com soluo de etanol
70%.
4.2.27. No deixar que nenhum lquido penetre no aparelho.
4.2.28. No utilizar qualquer substncia corrosiva.
5. REFERNCIAS:
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SEMIAUTOMTICO

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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DO AGITADOR MAGNTICO

1. OBJETIVO (S):
Estabelecer os procedimentos para a utilizao e limpeza do agitador magntico.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Mantenha sempre o equipamento em superfcie plana e firme.

4.2. Separe o material a ser agitado/ homogeneizado, utilizando luvas de procedimento.
4.3. Coloque as solues em vidrarias adequadas para o seu volume, ocupando no mximo
do mesmo. O volume mximo de agitao 2000 mL, assim utilize vidraria adequada,
preferencialmente bqueres.
4.4. No interior do bquer ou recipiente de vidro resistente onde esteja o lquido de interesse,
coloque o im de agitao para que a mesma ocorra de maneira uniforme.
4.5. Certifique-se da voltagem da tomada antes de ligar o agitador (220V).
4.6. Acione a chave liga-desliga (parte traseira do aparelho).
4.7. Fique bastante atento para no tocar diretamente a chapa do equipamento, pois a mesma
ficar aquecida, o que pode gerar acidentes.
4.8. Ajuste a velocidade da agitao (0-1250 rpm), tempo (0-999 min) e temperatura de
trabalho (0 400 C) desejados utilizando os botes adequados no painel principal do aparelho.
108

Tome os devidos cuidados com esta regulagem, pois o lquido estar quente e pode ser
projetado no operador, causando graves acidentes.
4.9. Para controle automtico de temperatura conecte a sonda de temperatura e coloque-a no
recipiente de vidro a ser agitado para medir e manter a temperatura da soluo.
4.10. Ao trmino da agitao necessria, retorne o boto da velocidade para a posio inicial
e desligue o equipamento.
4.11. Desligue o plug da tomada.
4.12. Certifique-se de que no haja respingos de material biolgico em todo o equipamento.
4.13. Realize a desinfeco do equipamento com lcool 70 INPM.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DO AGITADOR DE TUBOS (VRTEX)

1. OBJETIVO (S):
Estabelecer os procedimentos para a utilizao e limpeza do agitador de tubos tipo vrtex.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Mantenha sempre o equipamento em superfcie plana e firme.

4.2. Separe a amostra a ser agitada, utilizando luvas de procedimento.
4.3. Coloque a amostra em tubos adequados para o seu volume, ocupando no mximo do
mesmo.
4.4. O tubo deve estar tampado para no haver formao de aerosol.
4.5. Este equipamento bivolt, logo ligue em tenso 110V ou 220V.
4.6. Acione a chave liga-desliga (lado esquerda do aparelho).
4.7. Posicione o tubo firmemente na borracha neoprene (receptculo de borracha sinttica) do
equipamento. aceitvel que os tubos tenham dimetro de at 25 mm.
4.8. Ajuste a velocidade da agitao utilizando o boto direito do equipamento (limite mximo
de 3400 rpm).
4.9. Ao trmino da agitao necessria volte o boto da velocidade para a posio inicial e
desligue o equipamento.
111

4.10. Desligue o plug da tomada.

4.11. Certifique-se de que no haja respingos de material biolgico em todo o equipamento.
4.12. Realize a desinfeco do equipamento com lcool 70 INPM.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: OPERAO E LIMPEZA DA ESTUFA DE SECAGEM E
ESTERILIZAO
1. OBJETIVO (S):
Estabelecer os procedimentos para utilizao da estufa de secagem e esterilizao.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. ESPECIFICAES TCNICAS: Estufa de secagem e esterilizao, modelo SL100/42/A,

marca SOLAB. Temperatura de trabalho at 200 C.
4.2. FUNCIONAMENTO DO APARELHO
4.2.1. Antes de ligar o aparelho rede eltrica, certifique-se de que a chave geral esteja
desligada.
4.2.2. Verifique a voltagem do aparelho (220V) e a rede de alimentao.
4.2.3. Aps verificao, conecte o cabo de alimentao na tomada.
4.2.4. Ligue o boto liga/desliga.
4.2.5. Para verificar qual a temperatura em que est programada a estufa aperte a tecla F
e aparecer no painel eletrnico a temperatura programada.
4.2.6. Caso queira mudar a temperatura, siga as seguintes instrues:
4.2.6.1. Pressione a tecla F e a seguir ajuste a temperatura desejada apertando
as teclas (aumenta a temperatura) e (diminui a temperatura).
114

ESTERILIZAO
4.2.6.2. Pressione novamente a tecla F por aproximadamente 5 segundos at

voltar ao menu principal e assim est gravada a temperatura de trabalho.
4.2.7. Aps o uso, desligue o boto liga/desliga e retire o plug da tomada.
4.2.8. Aps desligado, realize a limpeza do equipamento. Nunca realize a limpeza com o
equipamento ligado.
4.2.8.1. O equipamento deve ser limpo com flanela mida embebida em sabo
neutro e gua morna. Aps, utilizar gaze com lcool a 70% para desinfeco.
4.3. MANUTENO PREVENTIVA
Para a manuteno, procure sempre uma assistncia tcnica SOLAB.
5. REFERNCIAS:
115

ESTERILIZAO

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Assunto: PROCEDIMENTOS ADOTADOS EM CASOS DE ACIDENTES
COM PERFUROCORTANTES
1. OBJETIVO (S):
Fornecer orientaes gerais e evidenciar as primeiras aes diante de um acidente com

materiais perfurocortantes dentro do Laboratrio de Bioqumica DEM - UFV.
2. ALCANCE:
3.1. Tcnicos e assistentes do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido

neste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Manter a calma.

4.2. Falar com um dos responsveis pelo laboratrio.
4.3. No provocar sangramento espremendo a leso, pois pode haver aumento da exposio
de sangue com o material contaminado. Leses decorrentes de acidentes com materiais
perfurocortantes, como agulhas, bisturis e tesouras potencialmente contaminados, devem ser,
imediatamente, lavadas com gua e sabo ou soluo anti-sptica detergente (PVPI,
Clorexidina). As membranas mucosas e a pele devem ser lavadas com gua corrente em
abundncia, soro fisiolgico 0,9% ou gua boricada, repetindo a operao vrias vezes. Deve-
se evitar o uso de substncias custicas (como hipoclorito de sdio), pois estas aumentam a
rea lesada e, conseqentemente, a exposio ao material infectante.
117

4.4. Em determinados casos, coletar sangue do acidentado para realizar os exames de Anti-
HCV, HbsAg, e Anti-HIV. Encaminhar para Diviso de Sade-UFV.
4.5. Fazer o quanto antes um teste rpido de HIV no sangue do paciente e do acidentado.
4.6. Em caso de resultado positivo para HIV no paciente, o acidentado precisa tomar a
medicao preventiva (quimioprofilaxia). Ser preciso entrar em contato com a Vigilncia
Epidemiolgica de Viosa atravs do telefone 3899-5123, para solicitar a medicao. Caso
no haja retorno da Vigilncia Epidemiolgica, encaminhar o acidentado para o Hospital So
Sebastio. Ele tem at 2 horas aps o acidente para tomar este medicamento. Pelo fato de a
quimioprofilaxia apresentar potencial de toxicidade, o seu uso no justificado em exposies
com baixo risco de transmisso do HIV.
4.7. Em caso de resultado negativo para HIV do paciente, o acidentado liberado para as
atividades.
5. REFERNCIAS:
Xavier, R. M.; Albuquerque, G. C.; Barros, E. Laboratrio na prtica clnica. Porto Alegre:
Artmed, 2006.
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Assunto: GUA PARA O LABORATRIO CLNICO

1. OBJETIVO (S):
Fornecer orientaes gerais sobre a utilizao do aparelho deionizador para a obteno de

gua deionizada com qualidade.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO/ MANUTENO:
4.1. GUA PARA LABORATRIO CLNICO

4.1.1. A gua utilizada em laboratrios clnicos de classificao Reagente Tipo II, de
baixa condutividade eltrica.
4.2. DESCRIO DO EQUIPAMENTO DEIONIZADOR
4.2.1. O Laboratrio possui um aparelho deionizador de gua da marca VEXER;
4.2.2. A Vazo de gua tratada do aparelho de 50 ou 100 l/h.
4.2.3. Utilizar resina de troca inica catinica e aninica, dispostas na mesma coluna
(leito-misto). Esta resina ir reter as impurezas e sais minerais presentes na gua na
forma ionizada trocando-as por ons H+ e OH-.
4.2.4. O condutivmetro funcionar em rede de 110V ou 220V (bivolt);
120

4.2.6. No condutivmetro h um sensor luminoso. Observar a luz indicadora da

condutividade. A luz verde indica condutividade < 4,0 S/cm (ideal) e a luz vermelha
indica condutividade > 5,5 S/cm.
4.2.7. O condutmetro com a luz vermelha acesa sinaliza a saturao da resina de troca
inica e necessidade de substituio da coluna.
4.2.8. A substituio da coluna deve ser feita atravs de um revendedor especializado.
Contactar o fabricante caso isto ocorra.
4.3. OPERAO DO EQUIPAMENTO
4.3.1. Conecte a tomada do condutivmetro na rede eltrica;
4.3.2. Abra a torneira de gua acoplada ao condutivmetro;
4.3.3. Abra a torneira de gua canalizada;
4.3.4. Ligue o interruptor do condutivmetro;
4.3.5. Aguarde at que a luz verde do condutivmetro acenda para poder utilizar a gua;
4.3.6. Feche a torneira de gua canalizada;
4.3.7. Feche a torneira de gua prxima ao condutivmetro;
4.3.8. Desligue o interruptor do condutivmetro.
5. REFERNCIAS:
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Assunto: LIMPEZA E ORGANIZAO DO LABORATRIO

1. OBJETIVO (S):
Manter o ambiente de trabalho limpo e em condies apropriadas de trabalho.
2. ALCANCE:
Assistente e tcnicos de laboratrio.
3.1. Assistente e tcnicos do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido

neste procedimento.
deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. LIMPEZA
4.1.1. A limpeza deve ser realizada diariamente pelas funcionrias da limpeza.
4.1.2. O recolhimento do lixo deve ser realizado uma vez ao dia.
4.1.3. A limpeza deve ser sempre realizada com um pano mido e depois com um semi-
seco.
4.1.4. A limpeza deve ser finalizada com pano embebido em lcool 70GL. Este deve
entrar em contato com todas as cadeiras, mesas e bancadas do laboratrio.
4.2. ORGANIZAO
4.2.1. As mesas devem estar sempre limpas e organizadas. S devem ser mantido os
materiais que forem estritamente necessrios em sua superfcie.
4.2.2. Todos os materiais utilizados devem ser guardados nos devidos armrios, os quais
encontram-se identificados.
123
Assunto: LIMPEZA E ORGANIZAO DO LABORATRIO

5. REFERNCIAS:

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Assunto: DESCARTE DE RESDUOS DO LABORATRIO

1. OBJETIVO (S):
Descartar corretamente resduos e insumos do laboratrio.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. RESDUOS BIOLGICOS (CLASSE A e E, de acordo com RDC n304/ ANVISA)

4.1.1. Resduos biolgicos devem ser acondicionados em lixeiras brancas, em
sacos brancos leitosos, com smbolo infectante (abaixo).
4.1.2. Resduos biolgicos que sejam perfuro-cortantes (CLASSE E) devem ser

acondicionados em recipientes especficos, resistentes, tambm com smbolo
infectante.
125

4.1.3. Tente minimizar e segregar corretamente estes resduos para que a sade
dos profissionais de sade e o meio ambiente sejam preservados.
4.1.4. Somente do recipiente de acondicionamento deve estar ocupado.
4.2. RESDUOS QUMICOS (CLASSE B)
4.2.1. Resduos qumicos (vencidos) devem ser recolhidos, acondicionados em
embalagens adequadas, considerando-se a especificidade de cada substncia
qumica.
4.2.2. Nunca descarte simultaneamente, no recipiente de escolha, diferentes
substncias qumicas.
4.3. RESDUOS COMUNS (CLASSE D)
4.3.1. Papis diversos (incluindo papis toalhas), copos descartveis, luvas sem
contaminao, devem ser descartados em lixeiras comuns, com sacos pretos.
4.3.2. Havendo possibilidade, segregue papis, plsticos, lixos orgnicos,
lmpadas, pilhas, vidros e metais para reciclagem.
4.3.3. Caso haja contaminao do papel (e outros resduos comuns) com resduos
qumicos, este resduo passar a ser descartado como B, ou seja, dever ser
descartado como tal.
4.3.4. Caso haja contaminao do papel (e outros resduos comuns) com resduos
biolgicos, este resduo passar a ser descartado como A, ou seja, dever ser
descartado como tal.
4.4. COLETA DOS RESDUOS
4.4.1. A coleta dos resduos comuns e biolgicos so de responsabilidade dos
assistentes do laboratrio. Para a coleta e encaminhamento ao abrigo externo de
resduos, utilizar sempre luvas, mscaras e jaleco.
4.4.2. A coleta dos resduos qumicos realizada pelo corpo de Bombeiros da UFV.
Quando houver necessidade de descarte, entrar em contato com ramal 2199.
5. REFERNCIAS:
RESOLUO DE DIRETORIA COLEGIADA, n 306. 07 de dezembro de 2004. Regulamento
tcnico para gerenciamento de resduos de servios de sade. ANVISA.
126


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Assunto: LIMPEZA DAS VIDRARIAS E ACESSRIOS UTILIZADOS NO
LABORATRIO
1. OBJETIVO (S):
Padronizar a correta limpeza das vidrarias e acessrios do laboratrio.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Todos os materiais, sejam de plstico ou vidro, devem ser lavados aps o uso. Caso esta
lavagem no seja imediata, retire o material contido nas vidrarias, enxge com gua corrente
e deixe sobre a pia, no local destinado a vidrarias sujas. Este procedimento facilitar a
remoo posterior dos resduos.
4.2. Para todo material de vidro, que estiver sujo, embaado, impregnado com resduos de
materiais orgnicos, utilize soluo de NaOH 1M para limp-los. Deixe as vidrarias embebidas
nesta soluo por um dia.
4.3. Para remoo de substncias gordurosas nos materiais de vidro, utilize lcool etlico
96GL ou Acetona PA para remover o resduo.
4.4. Os materiais de vidro devem ficar de molho, em soluo de detergente prpria para
laboratrio, por 15 minutos (mnimo). Aps este perodo, realizar a lavagem direta com
128

Assunto: LIMPEZA DAS VIDRARIAS E ACESSRIOS UTILIZADOS NO
LABORATRIO
soluo detergente e gua corrente. Enxgue as vidrarias, externa e interiormente, por

cinco vezes, no mnimo.
4.5. Rinsar gua deionizada nos materiais e deix-los secando em estufa. Tomar cuidado
com materiais de polipropileno, polietileno, vidrarias volumtricas (pipetas, bales,
provetas), que no podero ir estufa, ou seja, devem secar a temperatura ambiente. Na
estufa, deixar, se possvel, materiais e vidrarias para secar com as bocas voltadas para
baixo.
4.6. Condicionar as vidrarias e materiais limpos em locais apropriados e isentos de poeira,
obedecendo a identificao dos armrios e gavetas.
5. REFERNCIAS:
129

Assunto: LIMPEZA DAS VIDRARIAS E ACESSRIOS
UTILIZADOS NO LABORATRIO

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Assunto: MONITORAMENTO DE TEMPERATURA E LIMPEZA DE
GELADEIRAS
1. OBJETIVO (S):
Manter o controle da temperatura e a limpeza das geladeiras.
2. ALCANCE:
Assistentes do Laboratrio de Bioqumica DEM-UFV.
3.1. Assistente de Laboratrio: Fazer o controle da temperatura e a limpeza das geladeiras.

deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. Controle da temperatura:

4.1.1. Diariamente:
4.1.1.1. Pela manh, olhe a temperatura do termmetro que se encontra dentro das
geladeiras;
4.1.1.2. Anote a temperatura mnima na tabela de controle que fica ao lado de cada
geladeira;
4.2. Limpeza:
4.2.1. Mensalmente:
4.2.1.1. Descongele a geladeira degelo automtico, apenas apertando o boto do
degelo para que descongele e seja feita a limpeza;
4.2.1.2. No caso da geladeira Frost Free, apenas desligue o plug da tomada para
que seja feita a limpeza.
4.2.1.3. Retire os materiais que se encontram dentro das mesmas para que possa
ser realizada a limpeza.
131

GELADEIRAS
4.2.1.4. Realize a limpeza com um pano umedecido em gua e detergente;

4.2.1.5. Higienize o pano utilizado e limpar novamente para retirada dos resduos de
detergente.
4.2.1.6. Realize a desinfeco utilizando gaze embebida em lcool 70%.
4.2.1.7. Deixe o lcool secar e ligue novamente as geladeiras na tomada.
5. REFERNCIAS:
132

GELADEIRAS

Verso do
POP
Fialho Castro
04/02/2015 09/02/2015 09/02/2015 23/02/2015
133

Assunto: CONTROLE DE PRAGAS E VETORES

1. OBJETIVO (S):
Proporcionar um ambiente saudvel ao trabalho e servios, atravs do Controle Integrado de

Pragas, com respeito ao meio ambiente.
2. ALCANCE:
Departamento de Medicina e Enfermagem.

procedimento.
deste procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. O controle de pragas no Departamento de Medicina e Enfermagem deve ser realizado
semestralmente.
4.2. Os tcnicos operacionais esto autorizados a realizar a desinsetizao e desratizao
somente quando o ambiente estiver devidamente preparado, oferecendo segurana. Portanto,
antes de qualquer tratamento qumico, os tcnicos realizaro a inspeo inicial para
identificar as pragas alvo, pontos crticos de infestao, a causa da infestao e a segurana
do ambiente.
4.3. A desinsetizao e desratizao so apenas complementos no controle de pragas.
4.4. Aps a inspeo sero escolhidos as tcnicas de controle e os produtos a serem
utilizados.
4.5. A empresa terceirizada e deve emitir um certificado de controle de servio, que deve
conter:
134

Razo social;
Responsvel pelo controle de pragas no Departamento de Medicina e Enfermagem (DEM);
Nome fantasia do estabelecimento;
Endereo, telefone e CNPJ;
Vetores e pragas encontrados durante o combate (baratas, roedores, cupim, formiga,
aranha, mosca, carrapato, lacraia, traa, pulga, escorpio, broca);
Nvel de infestao;
Produtos domissanitrios empregados;
Tipo de atividade;
Situao encontrada no local;
Servios realizados;
Data realizada;
Horrio de incio e trmino do procedimento;
5. REFERNCIAS:
Certificados de controle de servio.
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Verso do
POP
Fialho Castro
04/02/2015 09/02/2015 09/02/2015 23/02/2015
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Assunto: ATIVIDADES DE CAMPO

1. OBJETIVO (S):
Fornecer orientaes para auxiliar a preparao do material para realizao de atividades de

campo.
2. ALCANCE:

procedimento.
4. PROCEDIMENTO:
4.1. ORGANIZAO DO MATERIAL

4.1.1. No dia anterior atividade de campo, separe o material para realizao das
atividades que sero desenvolvidas.
4.1.2. Para realizao da tipagem sangunea e dosagem de glicemia capilar separe:
reagentes (Soros Anti-A, Anti-B e Anti-D); lancetas; lcool; gazes; lminas; canudos; sacos
de lixo; descarpack; cartes de resultado do teste para os pacientes; glicosmetro; fitas
para medio da glicemia capilar.
4.1.3. Outros materiais para a realizao de atividades como: aferimento de presso;
pesagem; medio da circunferncia abdominal; promoo da sade da mulher e
conscientizao sobre Doenas Sexualmente Transmissveis (DST); sade bucal e
atividades ldicas sero organizados pela Unidade Bsica de Sude da Famlia (UBSF).
137

4.2. PROCEDIMENTO PARA TIPAGEM SANGUNEA

4.2.1. Separe o material: lminas, lanceta descartvel, luva descartvel, algodo embebido
em lcool a 70% (antissptico), algodo seco e soros Anti-A, Anti-B e Anti-D.
4.2.2. Preencha o carto de resultado com dados do paciente.
4.2.3. Explique ao paciente o procedimento.
4.2.4. Calce as luvas.
4.2.5. Com um pedao de algodo embebido de lcool, faa a assepsia da polpa digital em
um dos dedos do paciente.
4.2.6. Puncione a polpa digital do paciente. Procure fazer a puno na regio lateral da
polpa digital, pois o fluxo de sangue maior e a dor minimizada.
4.2.7. Coloque duas gotas de sangue em uma lmina de vidro (lado a lado- para fator
ABO).
4.2.8. Coloque uma gota de sangue em outra lmina (Fator RH). Com um pedao de
canudo, espalhe bem a gota de sangue sobre a lmina para facilitar a visualizao da
aglutinao, caso exista.
4.2.9. Na Lmina 1, sobre uma gota de sangue, coloque o soro anti- A.
4.2.10. Na Lmina 1, sobre a outra gota de sangue, coloque o soro anti-B.
4.2.11. Na Lmina 2, coloque sobre a gota de sangue o soro anti-Rh.
4.2.12. Observe a presena ou ausncia de aglutinao. Caso no haja aglutinao na
presena de Anti-RH, ou seja, tratar-se de paciente RH negativo, recomendvel a
realizao da confirmao do teste (antgeno DU).
4.2.13. Retire as luvas e descarte-as.
4.2.14. Registre o resultado observado no carto do paciente.
4.3. PROCEDIMENTO PARA DOSAGEM DE GLICEMIA CAPILAR
4.3.1. Separe o material: aparelho de glicosimetro, lanceta descartvel, fita de glicemia
capilar, luvas, algodo embebido em lcool a 70% (antissptico) e algodo seco.
4.3.2. Preencha a ficha com dados do paciente.
4.3.3. Explique ao paciente o procedimento.
4.3.4. Calce as luvas.
4.3.5. Ligue o glicosmetro e insira uma fita de glicemia capilar no aparelho.
4.3.6. Com um pedao de algodo embebido de lcool, faa a assepsia da polpa digital em
um dos dedos do paciente.
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4.3.7. Puncione a polpa digital do paciente. Procure fazer a puno na regio lateral da
polpa digital, pois o fluxo de sangue maior e a dor minimizada.
4.3.8. Coloque uma gota de sangue na fita e enxugue o excesso com um algodo seco no
dedo do paciente.
4.3.9. Proteja a polpa digital do paciente com o algodo, orientando-o a fazer uma leve
presso no local da puno.
4.3.10. Observe o resultado liberado pelo aparelho.
4.3.11. Despreze a fita de glicemia capilar e a lanceta no descarpack.
4.3.12. Retire as luvas e descarte-as.
4.3.13. Registre o resultado observado no carto do paciente.
5. REFERNCIAS:
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Verso do
POP
Fialho Castro
04/02/2015 09/02/2015 09/02/2015 23/02/2015

DEM Laboratório de Bioquímica Ompletoooooooooooooooooooo

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Apresentao

Este manual composto por Normas e Rotinas Operacionais em conjunto com

Coordenao Tcnica de Elaborao do Manual:

Coordenao Tcnica de Reviso:

NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS 1

NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS

O Laboratrio de Bioqumica do Departamento de Medicina e Enfermagem da Universidade

Enfoque nas reas de Hematologia, Urianlise, Bioqumica, Imunologia.

O laboratrio funciona de segunda a sexta-feira, de 07:30h s 12:00h e das 14:00h s 18:00h,

5. NORMAS GERAIS PARA ACESSO E PERMANNCIA NO LABORATRIO

IV. No permitida a entrada no laboratrio portando brincos longos, colares, pulseiras,

V. No permitido alimentar-se ou levar qualquer tipo de alimento para dentro do laboratrio;

VI. No permitido o uso de celulares ou outros equipamentos eletrnicos.

6.1 Referentes ao Coordenador do Laboratrio

I. Planejar, acompanhar e avaliar as atividades desenvolvidas no laboratrio;

6.2 Referentes ao Corpo Docente

I. Supervisionar direta e constantemente todas as atividades executadas no laboratrio;

III. No permitir o ingresso no laboratrio de qualquer aluno que no esteja adequada-

VI. Orientar os alunos quanto ao descarte correto de materiais;

VII. Em caso de acidente envolvendo material perfuro-cortante e fluido orgnico, acalmar

VIII. Zelar pelos materiais e equipamentos do laboratrio, orientando os alunos quanto ao

6.3 Referentes ao Corpo Tcnico

I. Garantir a manuteno das boas condies de trabalho no laboratrio;

II. Seguir as normas e prticas de segurana contidas neste manual;

III. Utilizar EPI de acordo com as instrues do laboratrio;

V. Manter o material e espao fsico do laboratrio devidamente organizado e higienizado

6.4 Referentes ao Corpo Discente

III. Zelar pelos materiais e equipamentos do laboratrio;

IV. Manter o laboratrio em ordem logo aps o trmino das atividades.

6.5 Referentes aos Visitantes

I. Permanecer no laboratrio apenas na presena de algum tcnico ou professor;

7. REGRAS GERAIS DE SEGURANA

7.1 Descarte de Resduos

IV. Resduos qumicos (vencidos) devem ser recolhidos, acondicionados em embalagens

7.2 Procedimentos adotados em casos de acidentes com perfurocortantes

II. Fale com um dos responsveis pelo laboratrio;

III. No provoque sangramento espremendo a leso, pois pode haver aumento da

IV. Leses decorrentes de acidentes com materiais perfurocortantes, como agulhas,

V. As membranas mucosas e a pele devem ser lavadas com gua corrente em

VII. Em determinados casos, coletar sangue do acidentado para realizar os exames de

VIII. Encaminhar para Diviso de Sade-UFV;

X. Caso no haja retorno da Vigilncia Epidemiolgica, encaminhar o acidentado para o

7.3 Procedimentos adotados em caso de derramamento de produtos qumicos (txi-

II. Advirta as pessoas prximas sobre o ocorrido;

III. S efetue limpeza aps consultar a ficha de emergncia do produto;

IV. Alerte os farmacuticos sobre a ocorrncia;

V. Verifique e corrija a causa do problema;

POP 001 - Acesso ao laboratrio de bioqumica 11

Universidade Federal de Viosa

Normatizar o acesso de servidores, alunos, professores e visitantes ao Laboratrio de

Docentes, Discentes e Tcnicos do Laboratrio de Bioqumica DEM-UFV.

3.1. Tcnicos do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

Procedimento Operacional Padro (POP)

4.8. Ao voltar para o laboratrio repita novamente todo o procedimento descrito

ANVISA- Resoluo RDC n 302, de 13 de outubro de 2005.

Procedimento Operacional Padro (POP)

Histrico de Alteraes realizadas no POP

Elaborao Reviso Reviso Aprovao

Universidade Federal de Viosa

As exposies laboratoriais podem causar acidentes, mas a existncia de medidas eficazes

Docentes, Discentes e Tcnicos do Laboratrio de Bioqumica DEM-UFV.

3.1. Tcnicos do laboratrio: Execuo das atividades conforme estabelecido neste

Procedimento Operacional Padro (POP)

4.2.5. As unhas devem estar sempre limpas e em tamanho adequado.