Universidad Nacional de Misiones

Facultad de Ciencias Exactas, Qumicas y

Naturales

TRABAJO PRCTICO: BATCH

ALIMENTADO
Ctedra
INGENIERA BIOQUMICA
Responsables:
Barchuk Hector IQ01683
Cabrera Alejandro IQ01706
Gonzalez David IQ01606
Pacheco Jonathan IQ01694
Sokol Sacha IQ01409
Docentes:
Prof. Adjunta: Dra. Mara Alicia Martos
JTP: Bqca Mgter Emilce Roxana Zubreski
Auxiliar docente de Primera: Dra. Ana Paula
Butiuk

-Posadas-
27 de abril del 2017
 OBJETIVO

El objetivo del trabajo prctico es evaluar la produccin de la levadura de panadera

Saccharomyces cerevisiae mediante un cultivo batch Alimentado (BA), utilizando los datos
cinticos y estequiomtricos obtenidos del cultivo batch.

PARTE EXPERIMENTAL

Primera parte: CULTIVO BATCH

Microorganismo: Saccharomyces cerevisiae.

Medio de cultivo: se usar el mismo medio de cultivo que el empelado en el trabajo

practico de cultivo batch.

Inoculo, condiciones de crecimiento: segn gua de Cultivo batch.

Procedimiento:

1. Adicionar, a un Erlenmeyer con salida lateral, los componentes del medio (sales,
extracto de levadura, fuente de nitrgeno, vitaminas), en forma estril (flujo
laminar).
2. Adicionar dicho medio de cultivo (3 L) al reactor.
3. Termostatizar el biorreactor a 30C.
4. Conectar el sistema de aireacin al filtro estril del biorreactor.
5. Conectar el sistema de agitacin del biorreactor. Fijar la agitacin en 600 rpm.
6. Trasvasar, en forma estril, los tres Erlenmeyers de inculo a otro Erlenmeyer con
salida lateral.
7. Sembrar el biorreactor traspasando en forma estril el inculo del Erlenemyer con
salida lateral y aguardar 2 a 3 minutos.
8. Tomar 15 mL de muestra (descartar antes 2 o 3 mL) y tomar el tiempo CERO.
Anotar en cada caso el volumen de muestra y el de descarte.
9. Luego de 12 h, medir sustrato residual, si este es cero, iniciar la alimentacin para el
cultivo BA.

Segunda parte: CULTIVO BATCH ALIMENTADO

Se realizar un cultivo en batch alimentado limitado en carbono (glucosa) de la levadura

Sacharomyces cerevisiae.

El diseo de la alimentacin se realizar del siguiente modo:

a. Fijar las condiciones del inicio de la alimentacin (BA):

Vo = 3000 mL
xo = 1,972 (g/l).

Se toma crit < max obtenido del TP anterior.

El max del trabajo anterior es de 0,24 por ello el que se toma debe ser menor

Yx/s = 0,1 gx/gs

Luego, considerando un volumen de medio de alimentacin de 1000 mL y un tiempo de

BA de aproximadamente 4 hs.

Las condiciones sern:

F: 100 ml/h

SR: 76,8 g/l

b. Anlisis de las muestras

Durante la alimentacin se analizar la glucosa en el sobrenadante del cultivo por un kit

enzimtico. Si da por debajo del lmite de deteccin, el diseo fue el correcto y si da por
encima, se disminuir el caudal para que el cultivo pueda proceder limitado en carbono.

Se proceder de la siguiente manera.

1. Tomar 10 mL en bao de hielo.

2. Medir DO a 620 nm.

3. Centrifugar.

4. Sobrenadante medir: pH, glucosa residual (s).

5. Realizar control de contaminacin por observacin microscpica.

6. Repetir los pasos anteriores cada hora.

7. Finalizado el cultivo, medir el volumen remanente. Con este dato y los de volumen de
muestra y de descarte calcular el volumen de cultivo a la hora CERO, 1; 2, 3; etc.
 RESULTADOS

DO Vol.
Tiemp Vol. DO
Hora 620 pH Ext Vol. (l) Fa (l/h) X (g/l) XV S (g/l)
o (h) (ml) 505nm
nm (ml)
07:05 0 1,115 30 2622 2,622 0,1 1,972 5,172 0 sin glucosa
08:25 0 0 2592 2,592 0 sin glucosa
08:55 0,5 1,15 4,17 30 2642 2,642 0,1 2,050 5,417 0,066 0,54 0,10
7
09:25 1 1,176 4,12 25 2662 2,662 0,1 2,108 5,612 0,086 0,70 0,10
3
10:25 2 1,278 4,04 30 2737 2,737 0,1 2,336 6,393 0,027 0,22 0,09
0
11:25 3 1,388 4 60 2807 2,807 0,1 2,581 7,244 0,135 1,11 0,08
0
12:25 4 1,409 4,13 47 2847 2,847 0,1 2,628 7,481 0,00 0,07
7

Sr(g/l) 76,8
Caudal de alimentacin (l/h) 100
Volumen final (ml) 2800
Glucosa consumida(gr)= 30,72 gr
Biomasa formada(gr)= 2,31 gr
Yx/s= 0,075 grX/grS

8.000
7.000
6.000
5.000
4.000
XV

3.000
2.000
1.000
0.000
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Tiempo

Lo que se puede ver que durante el tiempo que se realizaba el Bach alimentado hubo un
crecimiento de la biomasa en el birreactor. Adems, en el grafico podemos ver una grfica casi
lineal debido a que la biomasa en un Bach alimentado tiene un crecimiento lineal que segn el
balance de biomasa la ecuacin de biomasa en un BA es:

XV = X 0 V 0+ FS RY X /Y t
 0.120

0.100

0.080
Axis Title

0.060

0.040

0.020

0.000
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Tiempo

Lo que se puede ver en la grfica es que mientras trascurra el Bach alimentado fue disminuyendo
porque la misma es inversamente proporcional a la biomasa en el reactor y como la biomasa fue
aumentando al transcurrir el tiempo por ello se produjo la disminucin en la velocidad especifica
de crecimiento. La ecuacin de la velocidad especfica de crecimiento en un BA es:

FS RY x/ s
=
VX

CALCULO DE LA BIOMASA TOTAL

Peso vasito Peso muestra + vasito

Vasito Peso muestra (g) x (g/l) Xmedia
(g) (g)
19 21,6919 21,9105 0,2186 4,372
24 22,0064 22,2170 0,2106 4,212 4,208
25 20,5684 20,7704 0,2020 4,04
Calculo de la masa total producida
masa total
Xmedia*volumen final 11,7824 g
producida