UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

PROTOCOLOS DE PRACTICAS EN BIOTECNOLOGIA

Dr.Sc.Mcblgo.Btcnlgo. CESAR SAMUEL LPEZ LPEZ

PRACTICA 1
GENERACIN DE ORGANISMOS AUXOTRFICOS

A. INFLUENCIA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA

1. Disolver 1 g de levadura comercial en 250 mL de agua destilada azucarada al 20 %

(20 g de azcar por 100 de agua destilada), dejar a temperatura ambiente por 30
minutos y realizar prueba morfolgica (coloracin).

2. De los 250 mL de levadura reactivados tomar 50 mL en vasitos y exponerlos a la Luz

Ultravioleta por los siguientes perodos:
- 24 horas - 48 horas - 72 horas - 96 horas
Asegurarse de cubrirlos con gasa delgada para que no ingresen insectos.
Una porcin de la levadura reactivada en un vasito dejar sin exponer a la LUV
(testigo).

3. Despus de los tiempos de exposicin sembrar las levaduras en placas con Agar
Glucosa, con la glucosa en diferentes concentraciones (0.25 %, 0.5 %, 0.75 % y 1 %
de glucosa). Incubar por 1 - 3 das a temperatura ambiental.

4. Observar el desarrollo de las levaduras sobre las placas de Agar Glucosa resaltando
las caractersticas del crecimiento y contabilizando las colonias desarrolladas. Realizar
coloraciones para determinar la morfologa. Interpretar resultados.

B. INFLUENCIA DE LA COLCHICINA

1. Disolver 1 g de levadura comercial en 250 mL de agua destilada azucarada 20 % (20 g

de azcar/100 mL de agua destilada), dejar a temperatura ambiente por 30 minutos y
realizar prueba morfolgica (coloracin).

2. De los 250 mL de levadura reactivados tomar 50 mL en vasitos y agregar 1 mL (0.5

mL) de solucin de Colchicina al 0.01 % (0.01 g/100 mL) e incubar a temperatura
ambiente por los siguientes periodos:
- 24 horas - 48 horas - 72 horas - 96 horas
Asegurarse de cubrirlos con gasa delgada para que no ingresen insectos.
Una porcin de la levadura reactivada en un vasito dejar sin exponer a la LUV
(testigo).

3. Despus de los tiempos de exposicin sembrar las levaduras en placas con Agar
Glucosa, con la glucosa en diferentes concentraciones (0.25 %, 0.5 %, 0.75 % y 1 %
de glucosa). Incubar por 1 - 3 das a temperatura ambiental.

4. Observar el desarrollo de las levaduras sobre las placas de Agar Glucosa resaltando
las caractersticas del crecimiento y contabilizando las colonias desarrolladas. Realizar
coloraciones para determinar la morfologa. Interpretar resultados.

NOTA: La colchicina se expende en presentacin como tableta de 1 mg, se tomaran 10

tabletas (1 blster), se trituraran y se llevarn a 100 mL de agua bidestilada o solucin
tampn pH 7.2
 Clculo de la intensidad e irradiancia de la L.U.V. recibida

L.U.V.

H H

A
B B

Considerar que el sistema est dentro de una esfera y en dos puntos del arco estn A, B
y B. Donde H es el radio de la esfera y AH es el rea de la esfera (AH = 4*H2)
Considerar el watiaje del foco de LUV que es de 32 W (P R = Potencia radiante), y trabaja a
una eficiencia lumnica del 5 % ( = 5 %) y un ngulo mnimo de 30.
Para calcular la energa recibida (ER), obtener el rea del circulo de la boca del vasito con
levaduras (AreaA y AreaB = *r2).
El tiempo de exposicin es t.

Utilizar las siguientes ecuaciones:

- Para Intensidad Radiante en punto A
IA = PR / AH = PR / 4*H2
- Para Potencia que recibe punto A
PA = IA * AreaA
- La Energa Radiante en punto A
ERA = IA * AreaA / t
- Para punto B
IB PR / AB = PR /4*H2 = PR / 4*H2 x sec2
- Para Potencia que recibe punto B
Considerar AB = AB cos, de donde se obtiene:
IB PR / AB = IB cos = PR / 4H2 x sec3 = PR x cos3 / 4*H2
Reemplazando valores resulta IB = IA x cos3
PB = IB * AreaB
- La Energa Radiante en punto B
ERB = IB*AreaB / t
- Para calcular la Energa Lumnica
EL = *ER punto A: ELA = *ERA punto B: ELB = *ERB