Espermatognesis en invertebrados (ortpteros).

Aplastados y secciones histolgicas de testculo de ortptero. Espermatognesis.

Existe un proceso celular destinado a producir

clulas idnticas genticamente: la mitosis. Por el contrario,
la mayora de los organismos vivos utilizan parte de su vida
o tejidos especializados para producir clulas esencialmente
diferentes de las progenitoras en cuanto a las
combinaciones posibles de su material hereditario. Este
mecanismo celular est enclavado en un proceso especial de
Figura 1. El seor y la seora de divisin celular: la meiosis.
Eyprepocnemis plorans. En organismos superiores la meiosis tiene lugar en
los rganos sexuales tanto masculinos como femeninos, dentro de un proceso general que se
denomina respectivamente espermatognesis y ovognesis. Tanto uno como otro no slo
producen clulas diferentes genticamente, sino que reducen el nmero de cromosomas de
las clulas a la mitad y las modifica para poder ser fecundadas o fecundar dependiendo del
sexo donde se realice.

ESPERMATOGNESIS

Ham, discpulo de Leuwenhoek, observa por primera vez en 1677 en el semen

humano la presencia de unos "animculos" mviles que muchos cientficos de la poca
consideraron como parsitos o simbiontes. En 1780 Spallanzani comprueba que si del semen
eran eliminados estos cuerpos mviles, ste perda su capacidad fertilizante. Pero fue en la
segunda mitad del siglo XIX cuando se concluy que estos "animculos" eran los gametos
masculinos, y se les denomin espermatozoides. De esta forma se estableci que los
espermatozoides se originaban en los testculos y que posean ncleo y citoplasma: eran
clulas.
Desde este momento y hasta nuestros das la morfologa de los espermatozoides y
de las clulas que les dan origen ha sido ampliamente estudiada. En una primera etapa de la
citologa clsica, empleando cortes en parafina, no slo se describen gran cantidad de
formas distintas de espermatozoides, sino que tambin se pone gran inters en el estudio
de los tejidos en los que se originan. Posteriormente, con el avance de la tcnica y la
aparicin del microscopio electrnico, se determina la ultraestructura de los
espermatozoides y de las clulas intermedias en su formacin.

Figura 2. Reconstruccin fotogrfica de una seccin de un tbulo seminfero de saltamontes en el que se observa
la disposicin secuencial de las clulas que cursan la espermatognesis.

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La introduccin de nuevas tcnicas de estudio como pueden ser las citoqumicas

para microscopa ptica y electrnica, la aplicacin de microscopa de barrido, el empleo de
anticuerpos marcados a nivel morfolgico y ultraestructural, la microscopa confocal o
metodologas puramente bioqumicas han ayudado a un mejor conocimiento del proceso de
formacin de los gametos masculinos, la espermatognesis.
Desde antiguo recibi gran atencin el proceso de cmo se formaban estas clulas,
ya que a partir de una clula prcticamente indiferenciada, la espermatogonia, se produce
una complicada y a veces dramtica serie de cambios morfofuncionales que desembocan en
la formacin del espermatozoide: la espermatognesis. Podramos definir la
espermatognesis como el conjunto de cambios que ocurren en una clula prcticamente
indiferenciada, espermatogonia, y que tienen como final la formacin de una clula
altamente especializada, con un nmero n de cromosomas recombinados, una carga c de
ADN y que es capaz de fecundar: el espermatozoide.
Teniendo en cuenta los cambios que se producen en la espermatogonia, y por tanto
los nuevos tipos celulares y los procesos en los que participan, podemos dividir a la
espermatognesis como proceso en las siguientes etapas:

a) Proliferacin.
b) Crecimiento y meiosis: recombinacin, divisin y reduccin.
c) Espermiognesis o histodiferenciacin.

a) Proliferacin. Este perodo comprende el desarrollo de las espermatogonias, las

cuales se dividen no slo aumentando la poblacin celular sino manteniendo la poblacin
troncal existente. Las divisiones de poblacin espermatogonial llegan en algunas especies
hasta ocho. As, partiendo de una espermatogonia inicial, van surgiendo por divisiones
sucesivas grupos de ellas que, normalmente, se encuentran interconectadas por sus
citoplasmas. El nmero final de gonias presentes en un cisto, indicar por lo tanto las veces
que se han dividido a partir de la espermatogonia primordial. De esta forma un cisto con
doscientas cincuenta y seis gonias revela la existencia previa de ocho divisiones mitticas.
En esta fase de divisiones rpidas y continuas es fcil observar el cariotipo de la especie.

b) Crecimiento y meiosis. La meiosis se caracteriza por presentar dos divisiones

sucesivas del material hereditario (Divisin I y Divisin II) precedidas por un nico perodo
S (de sntesis de ADN). La profase de la primera divisin meitica es extremadamente
larga pudiendo durar desde das (en machos) hasta aos (generalmente en hembras). Para
su estudio, se ha dividido en base a la morfologa del ncleo celular en varias etapas:
leptotene, cigotene, paquitene, diplotene y diacinesis.

PRIMERA DIVISIN MEITICA INTERCINESIS SEGUNDA DIVISIN MEITICA

PROFASE I: PROFASE II
- LEPTOTENE PROMETAFASE II
- CIGOTENE METAFASE II
- PAQUITENE ANAFASE II
- DIPLOTENE TELOFASE II
- DIACINESIS
PROMETAFASE I
METAFASE I
ANAFASE I
TELOFASE I

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Durante la prometafase los bivalentes experimentan movimientos de congresin

hasta alinearse finalmente en placa en la metafase. En la primera anafase meitica los
cromosomas homlogos, que previamente se han recombinado, migran completos a polos
opuestos. Tras una interfase muy corta y a veces inexistente denominada intercinesis, se
efecta la segunda divisin meitica. sta es esencialmente igual que una divisin mittica
convencional con la excepcin de que cada clula solamente posee un complemento
cromosmico de la especie ya recombinado. El resultado final es la formacin, por cada una
de las clulas que entr en la profase I, de cuatro clulas con n cromosomas y una carga
"c" de ADN: las espermtidas.

Figura 3. Espermatognesis de Locusta migratoria en cortes de testculo teidos con tricrmico de Masson (I). A.-
Detalle de un tbulo seminfero en el que se aprecia la estructura celular en cistos. B.- Espermatogonia. El
cromosoma sexual aparece marcado (X). C.- Espermatocito en divisin (telofase I) en el que se observa el huso de
microtbulos (cabeza de flecha).

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Figura 4. Espermatognesis de Locusta migratoria en cortes de testculo teidos con tricrmico de Masson (II).
Espermtidas en distintos estados de maduracin. Obsrvese la paulatina condensacin de la cromatina y
modificacin del ncleo y los adjuntos centriolares (cabezas de flecha). A.- Espermtidas tempranas, en las que
an no se detecta el adjunto centriolar. La que se encuentra a la derecha es diploide, aberrante. B.- Espermtida
aberrante, poliploide, con dos adjuntos centriolares. C y D.-Espermtidas redondas y lanceoladas en las que se
observa el adjunto centriolar en la base de la cabeza (cabezas de flecha). Con esta tcnica de tincin se aprecian
los flagelos (flechas).

c) Espermiognesis. Se conoce con este nombre a toda la serie de cambios tanto

citoplsmicos como nucleares que sufren las espermtidas hasta convertirse en
espermatozoides. Estos cambios morfofuncionales son muy variables y dependen de la
especie estudiada. No obstante, y como rasgos generales, podemos decir que se centran en

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la compactacin de la cromatina en el ncleo, la prdida de casi la totalidad del citoplasma,

la gnesis de una vescula acrosmica y la adquisicin de un aparato locomotor por parte de
la clula.

Figura 5. Espermatforos de Locusta migratoria en aplastados teidos con la tcnica de Feulgen. A.- Campo claro,
donde nicamente se ven teidos los ncleos. B.- Contraste de fase, que permite ver los flagelos de las
espermtidas (cabezas de flecha).

DESARROLLO DE LA PRCTICA

En esta prctica se utilizarn dos tipos diferentes de material de trabajo as como

dos metodologas completamente distintas. Por una parte se analizarn las diferentes fases
de la espermiognesis en preparaciones obtenidas mediante la tcnica de aplastado a partir
de testculos de ortpteros fijados en etanol y cido actico en proporcin 3:1. Por otra,
estudiaremos la organizacin de las clulas que cursan la espermatognesis y el tbulo
seminfero en cortes de testculo de saltamontes fijado con Bouin e incluido en parafina.

1.- Aplastados de testculo de ortptero teidos con Feulgen.

Seleccionamos testculos de ortpteros fijados en etanol y cido actico 3:1 al menos

con una semana de antelacin y los colocamos en agua destilada para su hidratacin durante
10 minutos. A partir de este momento conviene realizar todo el proceso en el mismo
recipiente, preferiblemente plstico y no vidrio. No utilizar ningn elemento metlico.
Hidrolizar los testculos en HCl 5N durante 30 min. Transcurrido este tiempo se
lavan abundantemente en agua destilada. Posteriormente se introducen en reactivo de
Schiff durante 30 minutos a temperatura ambiente. Este proceso es preferible realizarlo

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en oscuridad. Se lavan los testculos, que tendrn un color fucsia, en agua sulfurosa y
posteriormente en agua del grifo, donde se almacenarn hasta la confeccin de los
aplastados.
Separamos un par de tbulos seminferos del testculo y los colocamos sobre un
portaobjetos. Sobre ellos se coloca inmediatamente una gota de cido actico al 50% en
agua destilada y se deja un par de minutos (Cuidado, no dejar secar el material!).
Se coloca sobre el tbulo un cubreobjetos y utilizando la punta de un lpiz y con
presin muy suave se dispersa el material.
Con un trozo de papel de filtro se elimina el actico que ha rebosado por los laterales
del cubreobjetos y, con cuidado de no moverlo, se realiza el aplastado presionando
fuertemente con el dedo pulgar sobre una superficie completamente plana.
Observar los aplastados en el microscopio tratando de determinar las diferentes
etapas del proceso meitico, as como las espermtidas en los diferentes estados de la
espermiognesis.

2.- Secciones de testculo de ortptero teido con tricrmico de Masson.

El anlisis de cortes de parafina supone la realizacin de tres procesos: la inclusin

del material en un medio slido, el corte y desparafinado del mismo y la tincin de los
cortes (ver el anexo).
Las secciones de testculo se observarn en el microscopio determinando la
disposicin de los tbulos seminferos en el conjunto, as como las zonas apicales y basales
de los tbulos.

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Figura 6. Clulas del testculo del saltamontes Chorthippus jucundus teidas con orcena lacto-propinica. A.-
Ncleo de una espermatogonia en interfase. El cromosoma sexual ha sido sealado con una X. B.- Metafase
espermatogonial. C.- Ncleo prepaquitnico. Posiblemente corresponde a un ncleo en leptotene. D.- Paquitene
medio. E.- Paquitene tardo. F.- Diplotene. Se ha sealado la posicin de los quiasmas (cabezas de flecha) en un
bivalente monoquiasmtico (M7), en uno con dos quiasmas (M4) y en un tercero que presenta cuatro (L1).

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Figura 7. Espermatocitos de Chorthippus jucundus teidos con orcena lacto-propinica. A.- Diplotene
tardo-diacinesis. B.- Metafase-I. C.- Anafase-I. El cromosoma sexual X migra completo al polo superior de esta
clula. D.- Telofase-I. E.- Intercinesis/Profase-II. La clula de la parte superior de la fotografa posee el
cromosoma X, mientras que la de la parte inferior carece de l.

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Figura 8. Clulas del testculo de Chorthippus jucundus teidas con orcena lacto-propinica. A.- Metafase-II. Se
observa la disposicin radial de los cromosomas. B.- Anafase-II. Las cromtidas estn comenzando a separarse. C.-
Anafase-II. D.- Telofase-II. E.- Espermtidas tempranas. La situada en la parte superior de la fotografa posee el
cromosoma sexual (X), mientras que la de la parte inferior carece de l. F,G,H- Espermtidas en diferentes
estados de maduracin: redondeada, lanceolada, alargada

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Cuestiones.

1.- Qu es una espermatogonia? Dnde se localiza y qu dotacin gentica presenta?

Qu carga de ADN tiene?

2.- Realizar el dibujo de una espermatogonia de saltamontes e indicar cul es la

caracterstica morfolgica que la diferencia del resto de clulas en un aplastado de
testculo de ortptero en el que se ha teido preferencialmente el ncleo. Dibuja una
espermatogonia en un corte de tbulo seminfero de ortptero. Cul es su posicin en el
tbulo?

3.- Dibujar los ncleos de espermtidas de saltamontes en distintas etapas de maduracin

tal y como se observan en un aplastado de testculo teido con la tcnica de Feulgen.
Explica los cambios morfolgicos que observas experimentan y cmo eres capaz de
determinar cul es ms madura y cul menos.

4.- Dibujar y rotular un tbulo seminfero completo de saltamontes indicando las

diferencias entre los extremos proximal y distal.

5.- Qu es un cisto? Dibujar uno y determinar en qu etapa se encuentran los

espermatocitos que lo integran. Cmo has llegado a esa conclusin?

6.- A partir de un corte de testculo de saltamontes, dibujar un cisto en el que estn

presentes espermtidas tanto normales como aberrantes. Por qu eres capaz de
determinar que no son normales?

7.- Qu es un espermatforo? Dibuja uno de saltamontes.

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