UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

NOMBRE:

Andrea Gisselle Lema Cepeda

SEMESTRE:

Tercero A

TEMA:

Fijadores Tisulares con formol y sin formol

ASIGNATURA:

Tcnicas Histolgicas

DOCENTE:

Msg. Ivn Peafiel Mndez

FECHA DE ENTREGA: 20/06/2017

 FIJADORES TISULARES

Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve liquido a 21C, es txico y

con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y en ste estado en concentraciones
entre 35-40% y estabilizado con metanol se denomina formalina pura o formol con la accin
del fro la formalina pura tiende a precipitar y esta situacin suele ser reversible aadiendo
unas gotas de NaOH y concentrando la mezcla. Como agente fijador el formaldehdo se
emplea a una concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta
concentracin se obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en
formacin salina o tampn.

Ventajas: Es el fijador mas barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de
rutina en Anatoma patolgica.

Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular.

Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo
para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.

Provoca escasa retraccin tisular

Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado

Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin
tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.

Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente
de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin
argntica.

El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes modificando
la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa a partir de las 36
horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la formalina es un
fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de histotecnologa.

Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en Anatoma
patolgica.
Inconvenientes: Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y
mucosa nasal.

Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido

frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por
eso con el paso de l tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar este
inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de solucin
neutra o tamponado.

Se incorpora progresivamente al tejido con lo cual se consumen durante el proceso de fijacin

por lo que debe encontrarse en exceso

Es debido a que se incorpora al tejido y que tiene baja presin osmtica provoca la
incorporacin de agua a los espacios intratisulares por lo que el peso y el volumen del tejido
una vez fijado se aumenta de manera notable. Este efecto se puede prevenir utilizando formol
salino o tamponado.

Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen
hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una coloracin verdosa.

Tras la utilizacin prolongada de formalina debido a que se convierte en cido frmico

confiere a las piezas un tinte grisceo y en tejidos que tienen mucha sangre da origen a un
pigmento formlico que es negro o pardo oscuro que precipita en aglomeraciones irregulares
sobre estructuras preexistentes. Este pigmento se puede eliminar sumergiendo los cortes en
alcohol absoluto saturado con acido pcrico compuesta por 10, 12 gramos de pcrico en
alcohol etlico al 95-100% durante 5 minutos. O bien podemos sumergirlo en alcohol
amonacal que es el de 1 a 5 partes de hidrxido amnico en 95 a 99 de alcohol etlico al 70%.
En este caso se tratan los cortes durante 15 minutos, seguidos de dos baos de agua destilada
y despus otro de alcohol al 70% de 5 minutos de duracin cada uno.

Soluciones fijadoras simples que contienen formol: hay 4 tipos:

Formol salino: Se utiliza para prevenir el efecto osmtico que provoca el empleo de
disoluciones de formaldehdo en agua destilada y se prepara disolviendo 9 gramos de cloruro
sdico en 1000 mililitros de formalina al 10%.
Formalina neutra: Se prepara aadiendo a la solucin de formalina al 10% una pequea
cantidad de carbonato clcico insoluble que queda depositado en el fondo del recipiente
neutraliza esta sal el exceso de acido frmico que se produce y aunque puede utilizarse
todava para la formacin de tejidos en la prctica ha sido desplazada por las soluciones
tamponadas.

Formol tamponado: Es la solucin mas empleada hoy en da para prevenir el choque

osmtico que provoca la disolucin de formalina en agua destilada y el depsito de pigmento
formlico que ocurre a un pH inferior a 6. Se preparada la siguiente manera, como
amortiguador se emplea el tampn fosfato calibrado con pH de 7.0 a 7.2 de la siguiente
frmula:

FORMALINA PURA..100.0 ml.

FOSFATO SDICO MONOBSICO.4.0 gr.

FOSFATO SDICO DIBSICO (ANHIDRO**)...6.5 gr.

AGUA DESTILADA....900.0 gr.

Se emplea fundamentalmente para fijar tejidos nerviosos en la preparacin de algunas

tcnicas de impregnacin argntica. Y se prepara aadiendo una parte de cido actico glacial
a 9 partes de formalina al 10% con ello se consigue un pH en torno a 2.

* 4gr: no tiene agua, cogemos 3.5gramos si no pone nada en el bote cogemos 4 gramos.

* Anhidro: hay que hidratarlo despus.

Formol clcico o solucin de Baker: Se emplea como fijador de eleccin en algunas

tcnicas de histoenzimologa y se prepara aadiendo cloruro clcico al 1% a una solucin de
formalina neutra o tamponada al 10%

Mezclas fijadoras: 2 tipos:

Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se encuentra en disolucin al 25%. Mecanismo

de actuacin es el mismo que el formaldehdo y como fijador se emplea en concentraciones
entre el 1 y el 3%.
Ventajas: Es el primer fijador de eleccin para microscopa electrnica porque tienen una
excepcional capacidad para preservar la morfologa celular.

Se emplea para fijacin de animales por perfusin en patologa experimental.

Inconvenientes: Tiene velocidad de penetracin muy baja por lo que los fragmentos de tejido
no pueden tener volumen superior a unos pocos milmetros cbicos.

Posee gran capacidad de retraccin y endurecimiento tisular que impide prolongar el tiempo
de fijacin por encima de las 3 horas.

Tiene osmolaridad muy baja por lo que hay que emplearlo disuelta en soluciones
amortiguadoras.

Tetraxido de Osmio: OsO4: En el comercio se encuentra en forma de cristales amarillentos

solubles en agua, muy voltiles y txicas. Acta igual que el formol y se prepara como agente
fijador al 1% en tampn fosfato.

Ventajas: Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa

electrnica especficamente como 2 fijador.

Inconvenientes: Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo
en recipientes opacos y oscuridad.

Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja

Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su
manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la aparicin
de queratitis.

Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy
poco volumen.

Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar

abundantemente los tejidos tras utilizarlo.

Es que inactiva por completo las enzimas y altera notablemente la composicin antignica
del tejido.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas
mezclas fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus
inconvenientes. Desde un punto de vista general se clasifican en dos grupos:

Aquellas que contienen formol:

Liquido de Bouin: Solucin muy usada como alternativo a la formalina cuando queremos
fijar ciertos Tejidos como piel rganos endocrinos, testculos y tejido embrionario en general.
Sin embargo no est fijado para la fijacin de biopsias renales sobre los cuales provoca una
severa distorsin.

Se prepara de la siguiente manera:

- SOLUCIN ACUOSA DE C. PCRICO

(C. PCRICO AL 1-2% EN AGUA DESTILADA)..750.0 ml.

FORMALINA CONCENTRADA250.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL.50.0 ml.

PH. FINAL2.2

TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas

Fijador de Bouin-Hollander: es una variante del liquido de Bouin especialmente indicado

para la fijacin de los cilindros de biopsia de mdula sea cuando no es posible controlar el
tiempo de fijacin de la muestra en ste lquido, la conservacin, puede incluso conservar las
48 horas sin que se produzca excesivo endurecimiento.

Se prepara de la siguiente manera:

ACETATO NEUTRO DE COBRE.2.5 gr.

C. PCRICO..4.0 gr.

FORMALINA CONCENTRADA....10.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL..1.5 ml.

AGUA DESTILADA..100.0 ml.

Para preparar la solucin se disuelve primero la sal de cobre en el agua destilada luego se
aade el cido pcrico y tras filtrarlos el formol y el cido actico glacial.

Esta solucin se conserva indefinidamente a temperatura ambiente el tiempo de fijacin

oscila entre 48-72 horas y sigue las mismas precauciones que el lquido de Bouin

Bouin alcohlico (fijador de Dubosq-Brasil): Es una alternativa de lquido de Bouin

cuando la pieza que se debe fijar es relativamente voluminosa porque posee una velocidad
de penetracin mucho mas elevada. Se utiliza tambin cuando se precisa una fijacin
especfica de sustancias hidrosolubles como el glucgeno ya que evita su disolucin.

Se prepara de la siguiente manera:

ALCOHOL ETILICO 80%...............................................75.0 ml.

C. PCRICO0.5 gr.

FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.

Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno
a 5 milmetros es de 2 a 3 horas.

Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del
glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por:

SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO

EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.

FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.

El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse
sucesivamente 2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la
adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los
fijadores de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de:

DICROMATO POTASICO2.5gr.

SULFATO SDICO..1.0 gr.

AGUA DESTILADA 100.0 ml.

Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua

corriente durante unas horas.

Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido

nervios. Se prepara de la siguiente manera:

Solucin stock de Orth: idntica a la composicin del fijador de Mller.

Solucin de trabajo: en el momento de su uso se mezclan:

SOLUCIN STOCK..90.0 ml.

FORMULINA CONCENTRADA.10.0 ml.

El tiempo de fijacin de tejido nervioso es de 48 horas y tras el proceso de fijacin los tejidos
han de ser lavados abundantemente en agua y almacenados en alcohol etlico al 70%

Solucin de B-5 y Zenker-Formol (Liquido de Nelly): Ambas mezclas son en esencia casi
idnticas. La denominacin B5 corresponde en realidad a una modificacin de la de Zenker.

La solucin de Zenker-formol contiene dicromato potsico y sulfato sdico. La mayor

utilidad de estos fijadores es que mejoran considerablemente la tincin nuclear, de hecho la
fijacin en una mezcla que contenga sublimado es hoy da prcticamente imprescindible para
el diagnstico morfolgico en las patologas del sistema linfoide y hematopoytico. Es
debido a la gran importancia que se da a la observacin de finos detalles nucleares como es
la presencia o no de hendiduras o repliegues nucleares y del nucleolo para catalogar un tumor
maligno de ganglios linfticos, o de mdula sea (leucemias) como de alto o bajo grado de
malignidad y por tanto recomendar la teraputica ms oportuna. Adems estas soluciones B5
zenker formol son los fijadores de eleccin para el rin, hgado, fibras de tejido conectivo
y para fibrina.

Se prefiere la solucin de B5 porque al no contener dicromato, esto permite una mejor

conservacin de la cromatina nuclear y de la estructura antignica tisular.

Solucin de 35:

*Solucin stock de B5: Esta mezcla es estable durante bastante tiempo pero concentrado en
frasco opaco y oscuridad.

CLORURO MERCRICO... 12.0 gr.

ACETATO SDICO....2.5 gr.

AGUA DESTILADA C.S.P.200 ml.

*Solucin de trabajo de B5: Esta solucin es inestable debido a que el formaldehdo reduce
el sublimado a cloruro mercurioso y mercurio metlico que se depositan en forma de un
precipitado blanco grisceo, por este motivo y por el elevado ndice de endurecimiento que
posee el sublimado, el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor
mximo de las muestras no debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de
la mezcla fijadora. Debido a la aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las
secciones histolgicas antes de ser coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento
especfico mediante soluciones que eliminan estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se
pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al 70-80%

- SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.

- FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.

Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico:

*Solucin stock de Zenker:

- CLORURO MERCRICO5gr.

- DICROMATO POTSICO...2.5 gr.

- SULFATO SDICO 1 gr.

- AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.

* Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos:

- SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml.

- FORMALINA CONCENTRADA...5 ml.

Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas
precauciones que para la de B5

Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin:

Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas
y utilizamos:

*Solucin de LUGOL:

- YODURO POTSICO..2gr.

- CRISTALES DE YODO ..1gr.

- ALCOHOL ETLICO 70-80%................................................100 ml.

*Solucin de tiosulfato sdico:

- TIOSULFATO SDICO..5gr.

- AGUA DESTILADA...100ml.

Despus de la desparafinacin hay que tratar los cortes durante diez minutos con la solucin
yodada a continuacin lavar bien en agua destilada despus decolorar durante dos minutos
en la solucin en agua corriente durante 10 minutos antes de realizar la coloracin.

Aquellas que no contienen formol:

Liquido de Zenker: Trata de combinar los efectos favorables del sublimado y del dicromato
potsico. En la prctica habitual ha sido sustituido por B5. Su empleo ha quedado
prcticamente restringido al proceso de refinacin-decalcificacin a que son sometidas las
biopsias de mdula sea cuando se realiza una fijacin inicial con B5. Se prepara de la
siguiente manera.
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml.

El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca

progresivamente, por lo que debe recomponerse antes de su uso.

El tiempo de fijacin puede ser mas prolongada que con la solucin de b5 porque el cido
actico que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobreasar las
48 horas. Tras la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2
horas.

Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los
hidratos de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin
fijadora es extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo
produce una excesiva retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una
pobre conservacin estructural del ADN. Est compuesta por:

ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.

CLOROFORMO.30.0 ml.

C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml.

El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse
directamente a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar
demasiado la deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por
metanol en la composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular,
y para conservar la pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.

Bibliografa
(2015). Obtenido de http://html.rincondelvago.com/fijadores_procesado-de-tejidos.html

(2017). Obtenido de http://www.bdigital.unal.edu.co/6383/1/598124.2012.pdf

Fontana, A. (2016). Obtenido de

https://www.seap.es/c/document_library/get_file?uuid=6b1aab95-d755-43dd-ab74-
0637c611aa8f