CUENTA DE PLAQUETAS CON CMARA DE NEUBAUER

INTRODUCCIN

El recuento de plaquetas puede hacerse de manera directa y de manera indirecta.

El mtodo directo, a su vez, requiere de un contador electrnico que sea capaz de

hacer el recuento de las diferentes clulas sanguneas (leucocitos, eritrocitos y

plaquetas), o en su defecto, podr hacerse mediante el mtodo manual, en el que

se emplear la cmara de Neubauer y la pipeta de Thoma. El mtodo indirecto es

muy til cuando se tiene dudas sobre los resultados emitidos por cualquiera de los

mtodos directos, y/o como modo de confirmar stos. Esto sucede por ejemplo,

cuando la muestra no fue adecuadamente anticoagulada a la hora de ser tomada,

o cuando se tienen cifras anormalmente altas o anormalmente bajas,

 OBJETIVO

Realizar e interpretar la tcnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la

cmara de Neubauer.

FUNDAMENTO

Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo

hemosttico del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 , de

bordes irregulares, pero pueden tener forma esfrica u ovalada, carecen de ncleo

y son muy frgiles. Provienen de una clula gigante que mide de entre 50-100

de dimetro llamada megacariocito.

Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos

de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detencin) adhirindose entre ellas y a

las paredes de los vasos sanguneos lesionados, para formar as el trombo

plaquetario o tapn hemosttico.

El lquido diluyente puede ser una solucin estril de p-aminobenzoato de

dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este lquido se

provee listo para usar y su conservacin es indefinida en refrigerador (2 - 10 C) o

puede ser tambin oxalato de amonio al 1%. El fundamento del mtodo consiste

en la produccin de hemlisis por la utilizacin de un lquido hipotnico, y el

mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-

aminobenzoato de dietilaminoetilo.
 MATERIAL

Pipeta de Thoma para glbulos rojos (perla roja)

Equipo para venopuncion (Tubo lila)

Boquilla roja

Tubo de goma

Tubos de ensayo

Papel parafilm

Cmara de Neubauer

Cubrehematimetro

Microscopio

Gasas

Caja de Petri

Papel filtro

SUSTANCIAS

Alcohol al 70%

Sangre venosa

Diluyente de plaquetas
 PROCEDIMIENTO

1. Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA.

2. Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el

anticoagulante.

3. Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta

con una gasa.

4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta

(Dilucin 1:100)

5. Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6. Colocar la Cmara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el

cubrehematmetro sobre las mesetas

7. Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la

cmara, depositndola entre la meseta y el cubrehematmetro y dejarla difundir

por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el

lquido hacia los surcos

8. Colocar la cmara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri,

con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporacin, dejar en reposo de

10 a 15 minutos

9. Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glbulos rojos)

las plaquetas que aparecen mucho ms pequeas que los hemates, redondas,

alargadas u ovales, altamente refringentes

10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y est dividido en 16

cuadritos ms pequeos, de tal manera que el nmero total de estos ltimos es de

400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas.

 OBSERVACIONES

Cmara de Neubauer, 10x

Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de

plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las

plaquetas, que desprenden gran brillo

Cmara de Neubauer, 40x

Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayora u ovalada.
Factores de Error en las Cuentas Celulares.

a) Cuando se use sangre capilar se requiera una gota que fluya libremente.

b) Las muestras de sangre anticoagulada se deben mezclar cuidadosamente

invirtiendo el tubo de sangre por lo menos 20 veces. No se debe agitar el
tubo pues se forma espuma que impide medir cantidades exactas. Inclinar
el tubo bien mezclado a un ngulo de 45, o ligeramente mayor, y pipetear
del borde superior del tubo siguiendo las mismas indicaciones que para
sangre capilar.

c) Las pipetas deben estar limpias y secas.

d) Tomar las muestras con la pipeta en forma rpida y precisa. Si se rebasa la

lnea del volumen deseado ligeramente, ajustar tocando un papel
absorbente con la punta de la pipeta,
 e) Limpiar el exterior de la pipeta antes de introducirla en la solucin
disolvente.

f) La cmara se llena por accin capilar, regulando el flujo del lquido de la

pipeta, para que fluya suave y rpidamente, Llenar la cmara
completamente, sin permitir que el lquido rebase los lmites. Esperar de 10
a 20 minutos a que las clulas se asienten en el rea de conteo. Proseguir
con el conteo.

g) La cmara del hemocitmetro y el cubreobjetos deben estar limpios y

secos antes de usarse. Esto evita errores graves que se producen por las
huellas digitales y las superficies aceitosas.

RESULTADOS

Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como

concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de

sangre, que es 1mm3

Despus de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el nmero

obtenido se multiplica por el factor de dilucin de la siguiente manera:

N de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilucin X 10

Dilucin: 1:100

Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la

cmara es de 0.1 mm3

Para calcular el nmero de plaquetas por mm3 de sangre, se aplica la siguiente
frmula:

PLT/mm3 = P x V x D = P x 1000

PLT/mm3: N de plaquetas por mm3 de sangre

P : N de plaquetas contadas en un cuadrado grande
V : Correccin del volumen (10)
D : Correccin de dilucin

Ej. 1.- El nmero de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los clculos quedaron as:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm3, lo que indica un ndice
elevado de plaquetas.

Ej. 2.- El nmero de plaquetas fue de 320, por lo que al realizar los clculos quedaron as:
No. de plaquetas = 320 X 100 X 10= 320 000 plaquetas por mm3, lo que indica un ndice
est en el rango normal de plaquetas.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de clulas/mm3)

Hombres y Mujeres:..150 000 - 450 000

 CONCLUSIN

El recuento de plaquetas es de suma importancia y es parte del recuento celular

de la sangre como prueba de rutina.

El paciente con un trastorno hemorrgico, clnicamente significativo, acude al

mdico con algunos tipos de sntomas hemorrgicos, con lo que se puede indicar

la parte defectuosa del mecanismo de coagulacin, y dentro de estas causas

pueden estar la cantidad inadecuada de plaquetas.

La hemorragia de vasos sanguneos subcutneos en piel intacta se puede ver

como petequias o equimosis. Cuando se encuentran equimosis en gran cantidad

y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Ditesis Hemorrgica y

puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguneos, por la

disminucin en el nmero de plaquetas o por el mal funcionamiento.

La disminucin de plaquetas se denomina Trombopenia o prpura

trombocitopnica y se debe a lo siguiente:

Enfermedades autoinmunitarias (el organismo produce anticuerpos contra sus

propias plaquetas)

Aplasia medular

Radioterapia y quimioterapia por cncer

Leucemia aguda

Coagulacin intravascular diseminada

 Anemia hemoltica microangioptica

Hiperesplenismo

Prpura trombocitopnica idioptica

Prtesis de vlvula coronaria

Transfusin de sangre

Choque anafilctico

Algunas infecciones vricas

Algunos frmacos

Y el aumento se denomina trombocitosis:

Anemia por dficit de hierro

Traumatismos

Tumores

Trombocitosis esencial

Policitemia vera

Leucemia mieloide crnica

Tras esplenectoma

Enfermedad de Kawasaki
 RECUENTO DE PLAQUETAS EN FROTS SANGUNEOS

INTRODUCCIN

El recuento de plaquetas (PLT o PLQ) consiste en la determinacin del nmero

de trombocitos en un volumen determinado de sangre (generalmente, en 1 mm3).

El recuento de plaquetas puede realizarse, de una forma aproximada, contando

los trombocitos presentes en varios campos de una extensin sangunea
observada microscpicamente. Sin embargo, tambien se puede llevar a cabo un
recuento de plaquetas ms exacto, mediante el empleo de una cmara de
recuento o, mejor an, con contadores electrnicos de clulas.

El recuento de plaquetas practicadol mediante el examen de un frotis sanguneo

permite, adems, el estudio de la morfologa de los trombocitos.

Tcnica

1. Observar el frotis sanguneo con el objetivo de inmersin del microscopio.

2. Elegir, para su examen, una zona de la preparacin sangunea en la que las

clulas no estn superpuestas y en la que se observa la morfologa de las
mismas.

3. Contar el nmero de plaquetas presentes en 10 campos microscpicos.

Para cambiar de campo correctamente y evitar contar los mismos trombocitos,

se fija la vista en un punto de uno de los bordes del campo microscpico que se
est estudiando (por ejemplo, el borde derecho) y se desliza el portaobjetos hasta
que ese punto est en el borde opuesto de un nuevo campo microscpico (en este
caso, en el borde izquierdo).

4. Calcular la cifra media del nmero de plaquetas contadas en los 10 campos

microscpicos.
Lectura de resultados

Para cuantificar, de una forma aproximada, el nmero de trombocitos

comprendidos en u1 mm3 de sangre, se aplica la siguiente frmula:

PLT/mm3 = PLT/C x 20.000

PLT/mm3 = Nmero de plaquetas por mm3.

PLT/C = Media del nmero de plaquetas contadas en varios campos
microscpicos (en este caso, en 10).

INTERPRETACIN CLINICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Cuando se observa una extensin sangunea con el objetivo de inmersin, en

condiciones normales, debe haber 1 plaqueta por cada 10-20 hemates.

Esto equivale, aproximadamente, a la presencia, en una zona del frotis donde

los eritrocitos no estn superpuestos, de 5 a 25 trombocitos por campo

Cuando el nmero de plaquetas por mm3 de sangre es inferior a 130.000, se

dice que hay una trombocitopenia o trombopenia, y, cuando es superior a 400.000,
se dice que hay una trombocitosis.

Hoja de trabajo

1. En condiciones normales, cuntas plaquetas por campo microscpico hay en

una zona de un frotis sanguneo donde los eritrocitos no estn superpuestos?
De 5 a 25 trombocitos por campo microscpico.
Resultados obtenidos

CAMPO PLAQUETAS
1 5
2 5
3 7
4 4
5 10
6 14
7 10
8 19
9 11
10 12
97

PLT/C = 97/10 = 9,7 (media del nmero de plaquetas contadas)

PLT/mm3 = PLT/C x 20.000 = 9,7 x 20.000 = 194.000 PLT/mm3

Nmero de plaquetas contadas en 10 campos microscpicos....97

plaquetas.
Media del nmero de plaquetas contadas en 10 campos microscpicos
(PLT/C)....9,7 plaquetas.
Nmero de plaquetas por mm3 de sangre (PLT/mm3)....194.000
plaquetas/mm3.

Valoracin de los resultados

El PLT/mm3 obtenido implica que el sujeto tiene: Un nmero de plaquetas normal.