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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBAL

DE HUAMANGA
(Segunda universidad fundada en el Per)

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE MEDICINA

VETERINARIA

PRCTICA DE INTERNADO EN :(M.V-62 ) Clnica en Camlidos Sudamericanos

ALUMNO : CONTRERAS HUAMANI, Mijal

LUGAR DE PRCTICA : Estacin Experimental Agraria CANAAN-INIA

FECHA DE INICIO : 05 de Julio del 2013

FECHA DE TRMINO : 04 de Agosto del 2013

ASESORA DE PRCTICA : Ing. Zootecnista Mary Luz Naveros Flores

AYACUCHO PER

2013
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NDICE
Pg.
I. INTRODUCCIN...4
1.1. Objetivos......4
II. MARCO TERICO.....5
2.1. Clasificacin y Taxonoma....5
2.2. La Alpaca.......6
2.2.1. Razas de alpacas........6
2.2.1.1. Huacaya......6
2.2.1.2. Suri..7
2.3. La Llama ...8
2.3.1. Variedades de Llamas.8
2.3.1.1. Q'ara..8
2.3.1.2. Ch'aku...8

2.4. Vicua....9
2.4.1. Vicugna Vicugna Vicugna.9
2.4.2. Vicugna vicugna mensalis.10
2.5. Guanaco.10
2.6. Alimentacin de las Alpacas.10
2.7. Requerimientos Nutricionales...12
2.8. Biotecnologa de la Reproduccin . 13
2.8.1 Coleccin de semen en camlidos sudamericanos .... 13
2.8.1.1. Fundas vaginales....13
2.8.1.2. Esponjas vaginales.....13
2.8.1.3. Electroeyaculacin.14
2.8.1.4. Fstula uretral.14
2.8.1.5. Aspiracin vaginal postcoital. ... 14
2.8.1.6. Vagina artificial..15
2.8.1.7. Desviacin de los Conductos Deferentes...15
2.8.1.8. Bulbouretrectoma..16
2.9. Evaluacin de semen16
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2.9.1. Evaluacin Macroscpica..16

2.9.2 Evaluacin Microscpicas.....17
2.10. Los dilutores frecuentemente usados en trabajos de dilucin de semen. ................. 18
2.11. Congelacin y conservacin.19
2.12. Inseminacin Artificial.......19
2.13. Transferencia de Embriones ................... 20
2.14. Fertilizacin In Vitro..21
III. ACTIVIDADES REALIZADAS.. 22
3.1. Coleccin de Semen..22
3.2. Armado de la vagina artificial...22
3.3. Evaluaciones de semen....25
3.3.1. Evaluacin macroscpica...25
3.3.2. Evaluacin microscpica........27
3.4. Concentracin espermtica....... 28
3.5. Evaluacin de espermatozoides vivos, muertos y anormalidades........28
3.6. Espermatozoides con integridad de membrana espermtica....29
3.7. Diluciones de semen.30
3.8. Congelacion.............31
3.9. Congelacin de semen de epiddimos de alpacas post morten.....31
3.10. Fertilizacin in vitro.....33
3.10.1. Coleccin y maduracin de ovocitos (alpacas)......33
3.10.2. Fertilizacin.......36
3.10.3. Tcnica de percoll para seleccin de espermatozoides.....37
3.10.4. Tcnica de Swim up.......38
3.11. Cultivo......39
3.12. Viaje a ccahuaccpampa.....41
3.13. Identificacin de animales........42
IV. CONCLUSIONES... .... 44
V. RECOMENDACIONES......44
VI. BIBLIOGRAFIA.....45
VII. ANEXO......46
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I. INTRODUCCIN

Los Camlidos Sudamericanos (CSA) constituyen la mayor riqueza pecuaria y gentica de

las poblaciones andinas de Sudamrica. Las especies domsticas, alpaca y llama, son fuente
de fibra, carne, y de subproductos como pieles y cuero que tienen mltiples usos industriales
y artesanales, y que son indispensables para la subsistencia de un amplio sector de estas
poblaciones. Incluso el estircol de estos animales se usa como combustible para la coccin
de los alimentos y como fertilizante para cultivos. La llama, por su tamao y fortaleza, se
utiliza tambin como animal de carga y cumple un papel importante en el transporte en las
reas rurales carentes de vas de comunicacin. De las especies silvestres, vicua y guanaco,
la ms importante es la vicua que aporta fibra de excepcional calidad y cuyo
aprovechamiento est regulado.
En el aspecto econmico- social, los ovinos y las alpacas en el Per con certeza es la caja de
ahorro del poblador rural andino dentro de su economa familiar. Siendo parte de sus
costumbres ahorrar en especie animal y el ovino y la alpaca tienen la preferencia por su rpida
comercializacin. La crianza del ovino en el pas en un 70 % se desarrolla para la
comercializacin informal y consumo en carne, lana, pieles y abono. La crianza de las alpacas
en la comercializacin de carne, fibra y animales en pie.
El panorama de ambas especies en el pas se ha mantenido en una crianza complementaria
donde los criadores la han realizado por tradicin de generacin en generacin con poca
transferencia de tecnologa de parte de los entes competentes a nivel de los pequeos
productores.

1.1. Objetivos
Conocer las principales biotecnologas utilizadas en la produccin de alpaca en la que
viene trabajando la Estacin Experimental Agraria CANAAN-INIA.
Participar directamente en las diversas actividades programadas dentro de la Estacin
Experimental Agraria CANAAN-INIA
Contrastar los conocimientos adquiridos en las aulas universitarias con la prctica
realizada.
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II. MARCO TERICO

2.1. Clasificacin y Taxonoma

Reino : Animal
Sub reino : Metazoos
Phylum : Cordados
Sub-phylum : Vertebrados
Clase : Mammalia
Sub-clase : Eutheria
Orden : Artyodactyla
Sub-orden : Ruminantia
Infra-orden : Tylopoda
Familia : Camelidae
Gneros : Lama
Vicugna
Camelus
Especie : Lama glama (llama)
Vicugna pacos (alpaca)
Lama guanicoe (guanaco)
Vicugna vicugna (vicua)
Camelus dromedarius (dromedario)
Camelus bactrianus (camello)
La familia Camelidae est formada por dos tribus: los Camelini y los Lamini (Stanley et al.,
1994; Wheeler, 1995)
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Figura N 01: Clasificacin de los camlidos.

Fuente: (Stanley et al., 1994; Wheeler, 1995)

Los camlidos sudamericanos se dividen en dos grupos:
- Silvestres: guanaco y vicua
- Domsticos: llama y alpaca
2.2. La Alpaca
Nombre cientfico: Lama pacos o Vicugna pacos"
La alpaca es uno de los cuatro camlidos sudamericanos. Este animal no existe en
estado salvaje, al igual que la Llama, es una especie domstica creada por la interferencia del
hombre. Algunos cientficos estiman que es una raza del Guanaco, otros reconocen la
posibilidad que provenga de una especie propia o derivado de la vicua.
.
2.2.1. Razas de alpacas
2.2.1.1. Huacaya
La alpaca huacaya tiene el velln de crecimiento perpendicular al cuerpo, fibras rizadas,
esponjosas, opacas, densas y una gama de 22 colores naturales de fibra (9 a 12 cm de
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longitud anual). La cabeza es ms bien pequeo y el cuello fuerte. Es rstica. Es una raza
que muy resistente a inclemencias del clima, por lo que puede desarrollarse en zonas de
mayor altitud.
Figura N 02: Alpaca huacaya

Fuente: Manual de juzgamiento de llamas y alpacas.

2.2.1.2. Suri
La alpaca suri (suri paqucha o chili paqucha) tiene el velln de crecimiento paralelo al
cuerpo con mechas largas y onduladas que forman rulos (10.4 a 20 cm de longit ud anual);
lustroso y muy flexible. El cuello largo y fino. Se la cra especialmente en Puno la raza Suri
tiene una menor poblacin que bordea el 15% del total nacional. Su hbitat principal es
la puna hmeda y baja.
Figura N 03, 04: Alpaca Suri

Fuente: Manual de juzgamiento de llamas y alpacas.

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2.3. La Llama
La llama Lama glama" es el ms grande de los cuatro camlidos sudamericanos, originario
de los Andes de Amrica del Sur. En realidad la llama, al igual que la Alpaca, es un animal
creado por la mano del hombre. Hace ms de 4500 aos que se domestic yen la naturaleza
no se conoce en estado salvaje. La gran pregunta es si proviene de una especie propia o si es
una raza del Guanaco. Actualmente, gracias al anlisis de ADN mitocondrial, permiten
afirmar con bastante certeza que la actual llama deriva del guanaco.

2.3.1. riedades de Llamas

2.3.1.1. Qara
Pelada=Chuncca=Ccara=Sullo
Es un animal cuyo cuerpo est cubierto de fibra corta, lo que le da el aspecto de encontrarse
pelado; con una capa interna muy corta pero fina y una capa externa formada por pelos
fuertes como los del guanaco.
Es de variada pigmentacin en el pelaje, el cual muda al concluir el ao de edad. Posee un cuello
largo y fuerte, con presencia de pelos ordenados en la regin posterior del cuello, lo que da la
apariencia de "crin de caballo" y una caracterstica distintiva a esta variedad.
Figura N 05: Raza Qara

2.3.1.2. 'aku Lanuda=tapada

Muestra mayor cantidad de fibra en el cuerpo, con un velln denso compuesto por fibras
finas y de mayor longitud. La coloracin del pelaje es muy variada, de manera que se presenta
desde el blanco hasta el negro.
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Figura N 06: Raza Chaku

2.4. Vicua
2.4.1. Caractersticas
Silueta esbelta
lneas armoniosas con osamenta liviana
Tercio anterior cuerpo ms bajo que posterior
Color vello marrn claro (canela)
Pecho, vientre, interior de piernas e inferior de la cabeza son blancos
Mechn pectoral es caracterstico
vicua adulta, 1.15-1.30 m alzada a cabeza y 0.87-0.90 m a la cruz
peso corporal de 35-40 kg, cras 4 a 6 kg
2.4.2. Vicugna Vicugna Vicugna: de mayor tamao y color ms claro que la segunda
subespecie caracterizndose por la presencia de un mechn pectoral blanco y el
color canela tpico.
Figura N 07: Vicugna vicugna vicugna
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2.4.3. Vicugna vicugna mensalis: Que se caracteriza por un marrn ms claro, subiendo
el color blanco ventral hasta la mitad de las costillas y carece del mechn pectoral.
Figura N 08: Vicugna vicugna mensalis

2.5. Guanaco
Es el ms grande de los camlidos silvestres (110-120 cm de altura y 80-100 kg de peso).
Vive en un amplio rango de ambientes, desde el desierto caluroso hasta las zonas fras y
hmedas, as como desde el nivel del mar hasta los Andes y desde el norte del Per hasta la
Tierra del Fuego.
Figura N 09: Guanaco

2.6. Alimentacin de las Alpacas

La alpaca es un rumiante cuyo aparato digestivo presenta varias particularidades y ciertas
ventajas en el aprovechamiento del alimento, sobre los otros rumiantes.
El estmago de los CSA consiste en tres compartimientos C1, C2 y C3, y un estomago
terminal (o estomago verdadero).
Los movimientos de los compartimientos I y II son muy potentes y ms frecuentes que en
otros rumiantes, lo que permite que el alimento se mezcle mejor con los microorganismos
all presentes, permitiendo una buena fermentacin.
La alpaca tiene menor tasa de pasaje de la ingesta comparada con la del ovino.
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La tasa de absorcin de los cidos grasos voltiles (AGV), en el C1 es ms rpido que la del
ovino.
2.6.1. Consumo

Las alpacas y llamas consumen 1.8 2.0% de su peso vivo en materia seca,
Sus necesidades nutritivas son mucho menores que las del ovino, esto por el menor volumen
de los comportamiento C1 y C2 por unidad de peso metablico, comparado al volumen del
retculo rumen de los ovinos y el mayor tiempo de la digesta en el tracto digestivo de los
CSA.
Las alpacas tienen un comportamiento neofbico cuando se les cra para engorde, es decir,
no se adecuan a una alimentacin estabulada, no ganando peso significativamente
El concentrado contena 10% de humedad, 10% de Protena, y 28% de fibra cruda y el agua
era administrada ad libitum
Estudios sobre consumo y tolerancia a la restriccin de agua indican que el consumo de agua
es menor en alpacas y llamas en comparacin al ovino

2.6.2. Digestibilidad

Depende de la digestibilidad del alimento el cual vara de acuerdo a su grado de madurez, de

la capacidad digestiva de la especie y de la edad de los individuos.

La alpaca tiene mayor capacidad que el ovino para digerir la fibra cruda, la cual est
relacionada con el tiempo de retencin del alimento en el tracto digestivo, con la mayor
frecuencia de contracciones y ciclos de rumia y produccin de sustancias buffer de los sacos
glandulares del estmago.
2.6.3. Comportamiento Nutricional
En resumen:
Mayor tiempo de retencin de la fase slida
Mayor poder tamponante de la saliva
Mayor flujo salival
Menor consumo relativo de forraje
Menor requerimiento de protena
Menor requerimiento de energa
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Menor tiempo de rumia, pero mayor frecuencia

Neofobia marcada
Escasa probabilidad de ingerir plantas toxicas
Sistema sensorial del gusto y olfato ms desarrollado

2.7. Requerimientos Nutricionales

2.7.1. Energa
En nutricin animal nos interesa comprender y manejar la transformacin de la energa de
los compuestos orgnicos a travs de los procesos de alimentacin, digestin y metabolismo:
la creacin de nuevos tejidos y productos que sirven de alimento al hombre.
Las condiciones y hbitos alimenticios de los CSA no permiten establecer en forma prctica
los requerimientos de energa en sus diferentes etapas fisiolgicas.
Requerimiento energtico en tuis de 1 ao
EMm = 71Kcal / W0.75 (Flores et al, 1989)
EMg = 5.5 Kcal / g de ganancia de peso vivo.
Cuadro N 01: Requerimiento Energtico para Mantenimiento en Alpacas y Llamas

Fuente: Mendoza 1989

2.7.2 Proteina: Los requerimientos de mantenimiento de nitrgeno digerible y protena
digerible se estiman en: 0,38 y 2,38 g/kg PV 0.75, respectivamente, siendo menor al
requerido por los ovinos y vacunos de carne (2.79)
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El menor requerimiento proteico se debe a la capacidad de reciclar y utilizar la urea corporal

para la sntesis de protena microbial con extrema eficiencia, sobre todo en raciones de pobre
calidad.
Los requerimientos estimados de protena para mantenimiento en alpacas y llamas es de 7.9
y 7.2%.
2.7.3 Minerales: En los estudios realizados sobre los requerimientos de minerales, no hay
unidad de criterios que permitan concluir en algn resultado definitivo. Los estudios
realizados en pastos naturales alto andinos sealaron bajos contenidos de fsforo y cobre,
especialmente durante la poca seca.

2.7.4. Vitaminas: Hay pocos estudios incompletos, sin embargo, se sabe que los
requerimientos vitamnicos son de las vitamina A, D y E. No s a reportados casos clnicos
de deficiencia de minerales ni vitaminas.

2.8. Biotecnologa de la Reproduccin en camlidos sudamericanos

2.8.1. Coleccin de semen en camlidos sudamericanos
2.8.1.1. Fundas
vaginales
El primer ensayo de coleccin de semen en alpacas, utilizando una funda de ltex colocada
intravaginalmente antes de la cpula; despus de la monta se retiraba la funda que serva de
recipiente de semen; con esta tcnica se logr colectar semen, presentaba algunos
inconvenientes, ya que se interfera con la cpula normal y alargaba el tiempo de monta ms
all de los valores normales; la colocacin de la funda dentro del tracto genital y su fijacin
ofreca serias dificultades y con frecuencia provocaban lesiones que inhabilitaban a la hembra
para su uso posterior; existieron otros intentos de colectar semen con fundas vaginales,
realizadas por Palomino, (1962) y Jhonson, (1989). En 1991, Sucapuca, realiz un estudio
de coleccin de semen en alpacas mediante la tcnica del preservativo, obteniendo pequeos
volmenes y bajas condiciones espermticas.

2.8.1.2. ponjas vaginales

Esta investigacin fue realizada por San Martn (1961) el cual usa trozos de esponja que se
introducen en la parte anterior de la vagina y que absorbe el semen y otros fluidos vaginales,
sirviendo como contenedores; el inconveniente de este mtodo es que logra obtener semen
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muy contaminado y mezclado con los fluidos del tracto genital femenino y esto diluye el
semen y lo contamina con bacterias, dificultando as su evaluacin, por lo que no se
recomienda su uso para fines de inseminacin artificial

2.8.1.3. ectroeyaculacin

En 1966, Fernndez-Baca y Caldern reportaron el uso de la electroeyaculacin para la

coleccin de semen de alpacas, utilizando un equipo de fabricacin nacional, con una
intensidad mxima de 40 voltios, se obtuvieron muestras de semen con la ventaja de realizar
la coleccin sin la necesidad de tener hembras en celo, acortar el tiempo de coleccin y
realizarla a lo largo de todo el ao; tambin se utiliz esta tcnica para obtener semen de
vicuas y pacovicuas (hibrido cruce de alpaca con vicua). Los resultados de
electroeyaculacin muestran gran variabilidad entre animales y aun entre el mismo animal,
adems de obtenerse semen muy diluido con las secreciones de las glndulas anexas,
contaminado con semen y baja concentracin espermtica; Jhonson (1989) obtuvo semen de
llamas anestesiadas sedadas, se obtuvo pequeas cantidades (0.1 a 0.5 ml) con alta
concentracin pero no todos los intentos fueron exitosos.

2.8.1.4. Fstula uretral

Este mtodo requiere realizar una fstula quirrgica en la uretra peniana entre el ano y el
escroto; el semen es colectado durante la copula natural, esta tcnica se realiza utilizando
anestesia epidural y anestesia local para colocar un catter plstico en la uretra desde el pene
hasta la vejiga, el cual sirve para guiar la ciruga y ayuda a identificar la uretra; la insicin se
realiza en la piel, el msculo bulbocavernoso aislado y se separa la uretra del cuerpo
cavernoso; este mtodo no interfiere en la copula y las secuelas post operatorias parecen no
afectar al animal.

2.8.1.5. piracin vaginal postcoital

Muestras de semen pueden ser obtenidas por aspiracin del fondo de la vagina despus de
la cpula, ya que una pequea cantidad de semen es eyaculada al momento de llevar el pene
de un cuerno al otro, este mtodo no es invasivo ni tedioso pero la desventaja es que este
semen es incompleto, contaminado y diluido con las secreciones del tracto genital femenino,
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se puede utilizar este semen para realizar la evaluacin de espermatozoides como motilidad,
vitalidad, morfologa; estas muestras frecuentemente se obtienen con residuos
sanguinolentos y se ve de un color rosado ya que el endometrio se encuentra inflamado y
lacerado por la cpula; la tcnica es introducir un especulo por la vulva previamente aseada
y con la ayuda de una fuente de luz se ubica la crvix, inmediatamente se aspira con una
pipeta adosada a una jeringa, la utilizacin de este tipo de semen para evaluar la fertilidad
del macho es muy cuestionada.

2.8.1.6. gina artificial

Esta tcnica fue desarrollada por Sumar y Leyva (1981), para lo cual construyeron un
maniqu en forma de una hembra sentada en posicin de cpula; la vagina artificial fue una
modificacin de la vagina artificial usada para vacunos y ovinos, la cual consista en un tubo
rgido de 7 cm de dimetro por 25 cm. de largo con una funda interna de ltex, un cono de
ltex al que envolva un alambre en espiral simulando la crvix de la alpaca y al final un
frasco de coleccin de semen de ovino un tubo de centrifuga, el agua a 45 se coloca por
una vlvula-espita; los machos aceptaron el maniqu despus de un corto entrenamiento; la
copula se interrumpa cada 10 minutos aproximadamente para renovar el agua caliente, el
semen colectado vari, dependiendo del macho, el color del eyaculado, independientemente
del volumen, fue de un blanco lechoso a blanco claro, este semen no muestra motilidad masal
por lo espeso de su consistencia.

Cuadro N 02: Caractersticas seminales evaluadas con el nuevo diseo de vagina artificial

Vol. Seminal Motilidad Inicial % de Motilidad a

Especie N de colecciones promedio % 5C
Llama 8 2.53 1.08 23.13 11.32 12.17 8.95
Alpaca 7 0.76 0.57 30.71 17.66 12.86 8.59

2.8.1.7. Desviacin de los Conductos Deferentes.- Con el fin de colectar espermatozoides

libres de la secrecin de las glndulas anexas en alpacas, se desarrollaron las tcnicas de la
desviacin de los conductos deferentes y la extirpacin de la prstata; la primera tcnica
intenta colectar espermatozoides directamente de su reservorio, la cola del epiddimo, sin que
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estos tengan contacto con las secreciones de las glndulas anexas, desviando quirrgicamente
los conductos deferentes hacia la regin ventral del animal la cara interna del muslo,
formando una fstula permanente en la piel desde donde se puedan colectar continuamente
sin la necesidad de tener hembra receptiva ni someter a los espermatozoides a la accin de
enzimas proteolticas que intenten licuefactar el cogulo del eyaculado para un mejor manejo
espermtico.

2.8.1.8. Bulbouretrectoma.- Esta tcnica fue desarrollada con la finalidad de obtener

espermatozoides sin la secrecin de las glndulas bulbouretrales, las cuales, segn literatura,
son las encargadas de producir el material viscoso del semen entero, el cual causa gran
dificultad en su manipulacin; las caractersticas del semen obtenido se asemejan e incluso
son superiores a las caractersticas del semen entero obtenido por vagina artificial, pero se
indica una gran dificultad en la tcnica quirrgica por la ubicacin de dicho rgano, lo que
no permiti realizar esta tcnica, optndose por realizar la prostatectoma.

2.9. Evaluacin de semen

2.9.1. Evaluacin Macroscpica.- las caractersticas macroscpicas del semen de
camlidos sudamericanos, entre las cuales se consideran volumen, color, aspecto y pH. Estas
caractersticas del eyaculado dependern del tipo de coleccin y de la manipulacin, as como
de las caractersticas fisiolgicas de cada animal.
Cuadro N 03: Caractersticas de eyaculado en alpacas

Especie Tiempo de eyaculacin Tipo de Volumen Concentracin por

eyaculacin (cc) cc

Alpaca 20- 60 minutos Prob. por fases 1.0 a 3.0 80 a 250 millones

Fuente: Adaptado de Bearden y Fuquay, 1980

El semen colectado se mantiene en todo momento fuero de los efectos de la luz solar, se
evala:
Color.- observado directamente a travs del tubo Falcon y se tiene que observar blanco
(Intervet, 2007).
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Aspecto.-presenta un aspecto limoso (Intervet, 2007)

Volumen.- se observa en el mismo tubo graduado que puede ser de 1 a 10 ml dando un
promedio de 3.5.
Ph.- esta prueba se realiza con un peachmetro digital o tiras reactivas sumergidas en el tubo,
el pH normal est entre 7.2 a 8.8 (Intervet, 2007).
Filancia.- es la mxima resistencia del semen cuando se estira desde una lmina portaobjetos
con una aguja con el bisel hacia arriba, para esta prueba se ayuda con una regla. En los
camlidos el semen es altamente viscoso, siendo muy difcil separar los espermatozoides del
plasma a menos que sea por centrifugacin.

2.9.2. Evaluacin Microscpicas.- Las caractersticas microscpicas ms importantes que

se evalan en el semen son concentracin, motilidad, vitalidad y porcentaje de
anormalidades.
Viabilidad. El porcentaje de espermatozoides vivos en muestras colectadas con maniqu es
de 34.3 4.2 por ciento.

Motilidad masal. Se hace la observacin a un aumento de 40x, se a reportado un porcentaje

de motilidad de 34.2 5.3. Se efecta con una gota de semen en una lmina atemperada.

Motilidad individual. Se hace una dilucin en proporcin de 9 a 1, es decir por un ml de

semen se utiliza nueve de suero fisiolgico. La viscosidad del semen de la alpaca dificulta el
movimiento de los espermatozoides.

Concentracin. Se trata de la determinacin del nmero de espermatozoides por ml o

centmetro cbico. Esto se logra con el uso del hemocitmetro con el mismo procedimiento
que se utiliza para el conteo de glbulos rojos. Se reporta una concentracin de 32.8 4.3 x
104/ml.

Evaluacin de espermatozoides anormales. Consiste en determinar el porcentaje de

espermatozoides anormales presentes en el eyaculado, para lo cual se realizan frotices
coloreados con el objetote observar la morfologa esperrmtica se reporta un porcentaje de
14.9 1.1 en muestras colectadas en maniqu
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Motilidad progresiva
Es lo ms importante ya que fertilidad est altamente correlacionada con el nmero de
espermatozoides mviles en la dosis.
Mayormente se mide en forma subjetiva observando la muestra al microscopio y
determinando la proporcin que se mueve progresivamente, se califica de 10 en 10.
Evaluacin de la concentracin espermtica: No afecta fertilidad si est dentro de los
lmites normales; puede afectar si est por debajo del 50% de lo normal, independientemente
de la tasa de dilucin.
Cuadro N 04: Caractersticas seminales de alpacas y llamas obtenidas mediante vagina
artificial
Variable Llamas Alpacas
Tiempo de coleccin 9.3 3.2 19.7 7.9
Viscosidad (Filancia) 1.3 0.8 -------
Volumen 1.8 1.2 1. 6 1.3
Concentracin 57.3 x 10 69.2 x 10
Motilidad ( %) 62.3 36.2 58.4 31.3
pH 7.6 0.4 7.6 0.8
Fuente: Huanca et al., 2001

2.10. Los dilutores frecuentemente usados en trabajos de dilucin de semen

2.10.1. Tris yema de huevo. La cual se prepara tomando entre sus ingredientes Tris
(Hidroximetil amino metano), cido ctrico y fructosa los cuales son preparados en agua
bidestilada el cual representa un cien por ciento de la solucin A, la que se toma en un 80 por
ciento y la yema de huevo en un 20 por ciento. A dems lleva un antibitico.
2.10.2. Yema citrato. En agua bidestilada se disuelve 2.9 g de citrato de sodio de la cual
se toma el 80 por ciento y se agrega un 20 por ciento de yema de huevo. Se utiliza para una
conservacin hbil de dos a tres das.
2.10.3. Dilutor a base de leche. A base de leche entera o descremada calentada por 10
minutos entre 92 y 95 C filtrada de grasa y nata, cuando llega a una temperatura de 32 a 34
C se utiliza como dilutor.
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2.10.4. Andromed.
AndroMed es un diluyente libre de yema de huevo, desarrollado para la preparacin, tanto
de semen fresco como de semen bovino congelado. No contiene ingredientes de origen
animal y no presenta riesgo de contaminacin microbiolgica. AndroMed (2010)
Otros dilutores probados en semen de alpaca colectado por vagina artificial fueron el PBS,
citrato, tris y lardy + yema, la sobrevivencia de espermatozoides fue de 5, 4.48, 0.0 y 16.62%
respectivamente, el lardy - yema disminuy a 10.35 % a los 45.

2.11. Congelacin y conservacin.

El proceso de congelacin necesita estabilizar la integridad de las clulas espermticas para

que no sean destruidas durante el transcurso de la congelacin, es as que se evaluaron
diversos dilutores para ser usados en la criopreservacion de espermatozoides, encontrndose
que el mejor dilutor para este fin es el tris (hidroximetil amino metano). Es as que en un
intento por mejorar las caractersticas seminales a la congelacin/descongelacin, se evalu
la accin de diferentes concentraciones de yema de huevo y de la glicerina, encontrando
motilidad individual en semen conservado a 5 C de 72.3,73.1,64.7 % con 10,20 y 30 : de
yema de huevo respectivamente en alpacas y de 38, 42.5 y 47.6 % para llamas
respectivamente, estos valores a la descongelacin fueron para alpacas diluido con el 10 %
de yema de huevo ms 2.5, 5.0 y 7.5 % de glicerina fue de 22.5, 27.7 y 34.4 %
respectivamente, con 20 % de yema fue de 31.4, 39.2 y 41.0 respectivamente y con 30 % de
glicerina fue de 32.4, 36.2 y 38.7% respectivamente, mientras que para llamas con 10 % de
yema fue de 20.0, 18.0 y 19.5 % respectivamente, para el 20 % de yema fue de 31.3, 35.8 y
28.2 % y para 30 % fue de 34.6, 43.0 y 24.4 % respectivamente.

2.12. Inseminacin Artificial

La IA con semen congelado es una de las ms importantes tecnologas reproductivas en la

produccin de animales domsticos y combinada con una prueba de progenie, ha contribuido
sustancialmente en el mejoramiento gentico de bovinos lecheros, especialmente cuando fue
posible disponer de semen congelado de toros de alta calidad gentica En camlidos, si bien
existen reportes sobre el desarrollo de la IA y aun cuando puede ser considerada una
alternativa tecnolgica, aun no se han superado las limitantes existentes, como el desarrollo
 20

de protocolos de criopreservacin, limitando por ahora al desarrollo de la Inseminacin

Artificial con el uso de semen fresco, con las consiguientes dificultades para permitir una
amplia difusin de reproductores genticamente superiores.
Los reportes sobre mtodos de coleccin de semen son diversos, desde el uso de sacos
vaginales, esponjas vaginales y electroeyaculacin; con las consiguientes dificultades para
los machos durante la copula y la calidad del semen. Posteriormente se reporta el uso de una
vagina artificial adaptada de ovinos, que si bien mejora la tcnica de coleccin, an presenta
dificultades para mantener una temperatura adecuada durante el largo de la cpula. El uso de
una frazadilla elctrica cubriendo la vagina Artificial, permite algunas mejoras en la tcnica
de coleccin, facilitando el mantenimiento de la temperatura. Igualmente, el uso de un
maniqu o la coleccin con hembra receptiva se presentan como alternativas para la coleccin
de una muestra de semen fisiolgicamente normal; sin embargo, se requiere un entrenamiento
de los animales y no siempre todos los machos llegan a aceptar el maniqu; mientras que el
uso de hembra receptiva genera incomodidades en el operador.

2.13. Transferencia de Embriones

En camlidos, el primer reporte sobre transferencia de embriones fue realizado por Sumar et
al. (1974), posteriormente otros reportes confirman la factibilidad de la aplicacin de la
tcnica pero con una variabilidad en la respuesta ovrica a los protocolos de
superestimulacion, as como la respuesta en nmero y calidad de embriones recuperados.
La ultrasonografa ha contribuido a mejorar el conocimiento sobre la fisiologa ovrica en
especies domsticas y no domsticas; contribuyendo al conocimiento de la dinmica folicular
ovrica en llamas y alpacas. La diferencia sustancial, como ocurre en las especies de
ovulacin inducida, que si no ocurre copula, el folculo dominante ingresa a una fase de
regresin y se produce una nueva onda de crecimiento folicular.
La ovulacin en alpacas y llamas puede ser inducida por la administracin de hormonas
exgenas como la Gonadotropina Corionica Humana (hCG), Hormona Liberadora de las
Gonadotropina (GnRH) o Hormona Luetinizante (LH). La ovulacin ocurre alrededor de las
30 horas despus de la aplicacin de GnRH, LH o por estimulo de monta.
Una primera etapa en el desarrollo de protocolos de Ovulacin Mltiple y Transferencia de
Embriones (MOET) involucra la superestimulacin ovrica, con el propsito de inducir el
 21

crecimiento, maduracin y ovulacin de un gran nmero de folculos. Los protocolos de

estimulacin ovrica aplicados en camlidos incluyen el uso de Hormona Folculo
Estimulante (FSH) o Gonadotropina Corionica Equina (eCG), durante una fase luteal
inducida con la aplicacin de Hormonas hipotalmicas (GnRH); fase luteal artificial con la
aplicacin de progestgenos exgenos y durante una fase de receptividad sexual. Las
respuestas obtenidas son variables, alta incidencia de folculos luteinizados, baja tasa de
recuperacin embrionaria (0 2.3 embriones/ donadora) y de calidad variable.

2.14. Fertilizacin In Vitro

La tcnica de Fertilizacin In Vitro (FIV) se presenta como una de las tecnologas que mayor
desarrollo est experimentando en los ltimos tiempos. La coleccin de ovocitos del folculo
ovrico para la posterior maduracin nuclear y citoplasmtica, es la primera fase en el
desarrollo de esta tcnica. En camlidos existe escasa informacin referida a la coleccin de
ovocitos de ovarios de mataderos y madurados In Vitro. Un estudio realizado con ovocitos
obtenidos de ovarios de matadero y madurados a 38 C y 5 %de CO2, en los que se utilizaron
medios de maduracin de uso en bovinos, reporta una alta tasa de ovocitos en MII (62 %) a
las 32 horas de incubacin.
La obtencin de ovocitos puede ser realizada de ovarios procedentes de mataderos o por
aspiracin transvaginal. En el primer caso, los mataderos no siempre se encuentran cerca a
los laboratorio, por lo que en una primera fase se evaluaron las diferencias en la calidad de
ovocitos obtenidos de ovarios de alpacas y transportados desde el matadero, bajo dos
diferentes temperaturas (4 y 35 C), los resultados sugieren una mejor calidad de los
ovocitos procedentes de ovarios transportados a 35 C, respecto a los 4C. En el segundo
caso, coleccin de ovocitos va transvaginal, utilizando un transductor transvaginal de 7.5
MHZ y aplicado va transvaginal reporta la coleccin de 76 COCs de 134 folculos (57 %),
mientras que la recuperacin de ovocitos via transvaginal en llamas, sometidas a estimulo
hormonal permiti la recuperacin de 10.72.1 y 11.2 2.3 COCs (71 y 74 %).
 22

III. ACTIVIDADES REALIZADAS

3.1.Coleccin de Semen
3.1.1. materiales y equipos
Maniqu
Vagina
Conos ltex
Dilutores: BSA, TRIS, Andromet y Triadhyl.
Semovientes (Machos)
Cables de extensin
Inflador de bicicleta
Papel toalla
Agua oxigenada
Agua destilada o bidestilada.
Bolsas 12x10
Sellador
Cinta masking tape
3.2. Armado de la vagina artificial
Tubo de pvc (vagina), hacer pasar el jebe de ltex por el interior de la vagina (Ltex doblada
se introduce en la vagina artificial).
Imagen N 01: Ltex doblada se introduce en la vagina artificial

Fuente: Elaboracin propia.

 23

Imagen N 02: En el Cono de bolsa fijar el tubo falcn

Fuente: Elaboracin propia.

Imagen N 03: La bolsa con el tubo falcn es fijado al tubo

Fuente: Elaboracin propia.

Antes de echar agua jalar el ltex en el extremo posterior, luego agregar agua de 46 a 50C.
Hacer un ligero jaln antes de echar agua caliente. Fijar con las cinta de jebe.

Imagen N 04: Echar agua de 46 a 50C

Fuente: Elaboracin propia

Colocar la esponja protectora al tubo falcn
Agregar presin de aire por el pitn, para un ligero ajuste en el interior de la vagina.
 24

Imagen N 05: Agregar presin de aire por el pitn

Fuente: Elaboracin propia.

Envolver la vagina armada:
- Una manta pequea
- Frazadilla
- Luego franela grande, siempre manteniendo la temperatura.
Limpiar la zona del perin del maniqu y colocar gel para facilitar la entrada de la vagina
artificial, Colocar la vagina armada al maniqu, siempre manteniendo la temperatura. De
abajo hacia arriba, se fija bien hasta que el cono salga por el hueco de la vagina.

Imagen N 06, 07,08: Limpieza de la zona y colocacin de gel.

Fuente: Elaboracin propia.

Conectar a una corriente continua de 220.
Ofrecer el maniqu al macho entrenado.
Una vez que el macho haya copulado se toma el tiempo de cpula de 12 a 40minutos/macho,
luego retirar la vagina del maniqu. Inmediatamente retirar el tubo falcn protegido, y
empezar con la evaluacin de semen primero macroscpicamente y luego
microscpicamente.
 25

Imagen N 09: Cpula

Fuente: Elaboracin propia.

Recomendaciones
Frazadilla 110v y 220 v (Ojo, utilizar un transformador de 220 a 110 v para evitar quemar la
frazadilla).

3.3. Evaluaciones de semen

3.3.1. Evaluacin macroscpica

Se observa el eyaculado a nivel del campo y/o laboratorio, tratando de evitar el contacto
directo con la luz solar, siendo las siguientes:
Color, se observa directamente en el tubo graduado. (Blanquecino, lechoso, cremoso,
etc).
Imagen N 10,11: Color lechoso del semen

Fuente: Elaboracin propia.

Volumen, se observa directamente en el tubo graduado, se registra el semen y la espuma.
Se pudo observar un volumen de 1.5ml de semen
 26

pH. Se evala del mismo tubo colector, con el pehachmetro (6.2 6.8). En electrodo
colocar y gota de semen, luego esperar para la toma de lectura.
Filancia. En una lmina porta objeto dejar caer una gota de semen, luego levantar con
el bisel hacia arriba el semen y esperar en qu punto se rompe la filancia, registrar.
Imagen N 12: Evaluacin de la filancia

Fuente: Elaboracin propia.

Resultado: El tiempo de copula fue de 15 minutos
Cuadro N 01: Resultado de coleccin de semen
color Blanco lechoso
volumen 2ml
filancia 3
Fuente: elaboracin propia
Al conteo en la cmara de N.B. se observ 150 000 000 /ml con una dilucin de 1 en 10
Imagen N 13: Conteo en la cmara de N.B.

Fuente: Elaboracin propia

 27

En la segunda recoleccin el tiempo de monta fue de 15 minutos, volumen de 2 ml, color

transparente al microscopio no se observ espermatozoides.
Se colecto semen de otra alpaca
Al microscopio motilidad de 90%
Volumen 1.5ml se realiz la dilucin con andromed se conserv a medio ambiente por 1 hora
luego se refrigero para congelar obteniendo 60% de motilidad post descongelacin
Imagen N 14,15: Congelacin de semen de alpaca

Fuente: Elaboracin propia.

3.3.2. Evaluacin microscpica (mantener la temperatura de 37 C).

Motilidad masal
Se colocara una gota de semen fresco sin diluir en lmina porta objeto.
Se observar al microscopio a menor aumento 40X.
Al microscopio se observ una motilidad de 85%
Motilidad Individual
Se toma una gota de semen puro y se procede a mezclar con 09 gotas de suero fisiolgico.
Luego tomar una gota de dilucin en la lmina portaobjeto y observar al microscopio.
Imagen N 16: Observacin de la motilidad

Fuente: Elaboracin propia.

 28

3.4. Concentracin espermtica

a) Agua bidestilada
Con una jeringa de tuberculina, aspirar 0.9 ml de diluyente (agua bidestilada), luego
0.1 ml de semen.
Vaciar el contenido en una mpula y absorber con la misma jeringa varias veces para
dispersar uniformemente los espermatozoides.
Se eliminar las 3 a 4 primeras gotas y las gotas restantes se usar para analizar.
Luego se llenar el semen diluido a la cmara N.B. y se procede con el conteo de
espermatozoides cuando estos se encuentran en reposo.
b) Cloruro de sodio.
Tomar 1980 micro litros de cloruro de sodio y 20 micro litros de semen, homogenizar
vortex, luego tomar una alcuota colorar a la cmara de N.B.
Imagen N 17: Conteo en la cmara de N.B.

Fuente: Elaboracin propia.

Frmula:
C=Nx10x10 000

N: Nmero total de espermatozoides contados.

D: Grado de dilucin.
C: Se determina en mm3.

3.5. Evaluacin de espermatozoides vivos, muertos y anormalidades.

Espermatozoides con endosmosis
Se incubar a 37C 50 micro litros de semen en 250 micro litros de solucin acuosa hipo-
osmtica de fructosa citrato de sodio (50mOsmolar) durante 20 minutos. Al trmino de
la incubacin se detiene la reaccin con el agregado de 60 micro litros de solucin hipo
 29

osmtica formulada. Se cuenta 200 espermatozoides en un microscopio con contraste de

fase (1000x) observndose la presencia o no de patrones de endosmosis en la cola.
Preparacin de soluciones stock:
Solucin acuosa hipo-osmtica de fructosa citrato de sodio (50 mOsmolar):
Citrato de sodio 490 mg, Fructosa 900mg.
Agua desionizada de calidad Milli Q 400ml.
Solucin hipo-osmtica formulada:
Solucin hipo osmtica 100ml.
Formol 0.3 ml.
3.6. Espermatozoides con integridad de membrana espermtica
Coloracin: Evaluar espermatozoides vivos y muertos
Para efectuar la coloracin, se usar la solucin acuosa de eosina al 5% y de nigrosina
al 10%, como medio de contraste (mezcla). Es muy recomendable que antes de que estos
colorantes tomen contacto con el semen sean previamente calentados.
Se tomar con la jeringa de tuberculina, una gota de espermatozoides y una gota de
colorante mezclado y se colocar en lmina portaobjeto, mezclar para luego hacer un
frotis espermtico.
Se dejar secar y se observar al microscopio a mayor aumento. Agregando aceite
de inmersin.
Luego observar espermatozoides muertos que se tornar rojo o violeta y los vivos
color transparentes.
Imagen N 18: Coloracin del semen

Fuente: Elaboracin propia.

 30

Espermatozoides anormales
La misma tcnica usada para observar espermatozoides vivos y muertos. Se usar para
realizar el conteo de espermatozoides anormales.

3.7. Diluciones de semen:

Dilutores para semen
BSA
BSA 0.03 gr.
Glucosa 0.06gr.
Antibitico 0.1 gr.
Agua de transferencia bidestilada 10ml.
TRIS
Tris base 0.36gr.
cido ctrico 0.19gr. (promega).
Fructuosa o glucosa 0.05gr.
Agua bidestilada o transferencia 8.5ml.
Yema de huevo 1.5 ml.
Antibitico (Penicilina, estreptomicina), eritromicina, gentamicina 0.1 gr. o 0.1 ml.
Para diluir el semen se toman en cuenta la proporcin de 1 a 1: 1ml de semen y 1 ml de tris,
5ml dilutor tris y 5 ml de semen: siempre, manteniendo la temperatura.

Para congelar: la solucin dividir en 2 partes iguales.

Solucin A: 5ml de tris.
Solucin B: 4.3 de tris + 0.7 glicerol (7%).
En un tubo falcn de 10ml, agregar 1 ml de semen + 1ml de solucin A, a 37C, esta
mezcla de 2ml llevar a refrigeracin de 5C por 1.5 horas.
De la solucin B tomar 2ml, luego dividir en tres partes iguales:
0.66ml ------------------10 minuto
0.66ml.10minutos
0.66ml.10minutos,
 31

Estas partes agregar a la solucin A, que est refrigera a 5C cada 10minutos, una vez
concluido llevar nuevamente esta mezcla(a y b) de 4ml a refrigeracin a 5C por 1.0 hora.
Evaluar la motilidad, y se prosigue con la congelacin, -20 C/minuto, en 7 minutos -140C,
luego sumergir a nitrgeno lquido.
3.8. Congelacin.
Empajillar el semen en pajillas de 0.5cc.
Colocar en bandeja de agua a 5C.
A la bandeja llenar nitrgeno lquido
Colocar el termocupla: colocar las pilas, conectar el sensor. Luego colocar en la caja
de tecnopor, conectar la extensin con llave de cuchilla, a corriente continua.
Colocar las pajillas en la rendija, esperar que la termocupla llegue a cero, para tomar
el tiempo cada 1 minuto debe bajar la temperatura -20 C, esperar que la temperatura
baje constantemente, cuando se detiene vaporizar el nitrgeno hasta -140C, luego
sumergir las pajillas al nitrgeno.

3.8.1. Protocolo sin plasma

El semen mezclar en partes iguales con el dilutor andromet, llevar a la centrifuga
1,5min/2000rpm.
Luego retirar el plasma, inmediatamente reemplazar la misma cantidad de dilutor
andromet, para que se diluya el conglomerado.
Evaluar la motilidad para luego empajillar y congelar.

3.9. Congelacin de semen de epiddimos de alpacas post morten

3.9.1. Recoleccin y transporte de testculos post morten de alpaca:

Se recolecto testculos de alpacas beneficiados en el camal de Pilpichaca y traslado al

laboratorio de biotecnologa reproductiva de EEA-CANAAN-AYACUCHO.
 32

Imagen N 19,20: Recoleccin de testculos

Fuente: Elaboracin propia.

3.9.2. Lavado y obtencin de espermatozoides:

Una vez en el laboratorio, la cola del epiddimo fueron separados del testculo. Luego se
hicieron cortes con un bistur N 21 a nivel de la cola y posteriormente se lavaron en una
placa petri conteniendo un dilutor (andromed), y son colocadas en tubos falcn a temperatura
ambiente por 15 minutos y luego llevados a refrigeracin
Imagen N 21: Testculos

Fuente: Elaboracin propia.

3.9.3. Capacitacin de espermatozoides:
Los espermatozoides obtenidos fueron capacitados con el mtodo SWIN-UP (nado
contracorriente o nado hacia arriba). Todo esto en un frasco ROUX de 100cc.
El semen refrigerado se centrifugo a 1800 RPM. Por 5 minutos luego se elimin el
sobrenadante y se qued con el pellec a este se le aadi Talp Sper y se volvi a centrifugar
a 1800RPM por 5 minutos se volvi a eliminar el sobrenadante y se aadi Talp Fiv y se
volvi a centrifugar y luego fue llevado a la incubadora con una inclinacin de 45grados por
45 minutos
En la tcnica de "swim-up", el semen se deposita en el fondo de un tubo de ensayo y es
cubierto por una pequea cantidad de medio de cultivo. Los mejores espermatozoides nadan
hacia arriba y consiguen llegar a la superficie del lquido. Despus de un perodo de 30 a 60
 33

minutos, se extrajo el lquido de la superficie que contiene a esos espermatozoides de mayor

calidad.
Imagen N 22: Tcnica de swim-up

3.10. Fertilizacin in vitro

3.10.1. Coleccin y maduracin de ovocitos (alpacas)

Preparacin de medio de transporte (suero fisiolgico al 0,9%)
Se pes en la balanza analtica 0.9g de cloruro de sodio este se diluyo en una probeta de
1000ml de agua destilada, luego en una botella de vidrio estril se llev al autoclave para ser
auto clavado por 15 minutos. La recoleccin se realiz del camal municipal de Pilpichaca
Huancavelica.
Recoleccin de muestras en solucin fisiolgica al 0.9% ms antibitico (gentamicina) 1
ml/1L de Solucin
Imagen N 23: Camal de Pilpichaca

Fuente: Elaboracin propia.

 34

Imagen N 24, 25,26: Beneficio de alpacas

Fuente: Elaboracin propia.

Una vez extrado los ovarios de inmediato es trasladado al termo que contiene solucin salina
fisiolgica ms antibitico el cual est a una temperatura de 37C.
Imagen N 27: Coleccin de alpacas

Fuente: Elaboracin propia.

Terminado la coleccin los ovarios son trasladados desde el camal de pilpichaca al
laboratorio de Biotecnologa Reproductiva de la EEA-CANAAN-AYACUCHO a una
temperatura de 36C
Imagen N 28: Termos para el traslado de ovarios

Fuente: Elaboracin propia.

 35

Una vez llegado al laboratorio se realiza el lavado de los ovarios con solucin salina
fisiolgica a 37C ms antibitico para luego aspirar los folculos mayores de 3 y menores
de 8 cc con aguja N 18 y el lquido folicular se depositado en tuvo falcn de 15 ml el cual
est en bao mara a 37C y esperar de 10 a 15 minutos para la sedimentacin de los ovocitos
eliminar el sobrenadante y quedarse con 2 a 3 ml de precipitado
Imagen N 29,30: Aspiracin de ovocitos

Fuente: Elaboracin propia.

El medio de maduracion debe ponerce en la incubadora 1-2 horas junto con una placa de
30mm que contiene el mismo medio para el ultimo lavado

Rayar la base de la placa para una mejor y rpida seleccin de los ovocitos y aadir 10 ml de
medio de manipulacin y completar con el sedimento del lquido aspirado

Una vez aspirado los ovocitos se colocan en una placa Petri, la seleccin de ovocitos se
realiza con ayuda del estereoscopio y solo se seleccionan ovocitos de categora I y II
Imagen N 31: Seleccin de ovocitos

Fuente: Elaboracin propia.

 36

se realiza el lavado a travs de pasaje de placas dos con medio de manipulacin de 500 ul
cada uno y por ltimo en medio de maduracin para luego depositar en placas multipocillos
(placas multi well) el cual contienen medio de maduracin colocar 25 ovocitos en cada
pocillo.
Imagen N 32,33: Seleccin de ovocitos

Fuente: Elaboracin propia.

Luego esta placa multiposillos es llevado a la incubadora por un tiempo de 30-32 horas a una
temperatura de 37C, 5% O2, 5% CO2
Imagen N 34: Maduracin de Ovocitos en la incubadora

Fuente: Elaboracin propia.

3.10.2. Fertilizacin

Pasada las 32 horas de maduracin se observa la expansin de las clulas de cumulus que
nos indica una buena maduracin de los ovocitos
 37

Imagen N 35: Ovocitos maduros

Fuente: Elaboracin propia.

Observado la expansin de las clulas del cumulus estos con ayuda de una micropipeta se
sacan los ovocitos expandidos y se pasa a otra placa multiposillos que contiene medio de
fertilizacin
3.10.3. Tcnica de percoll para seleccin de espermatozoides
Colocar primero percoll de 90% luego de 45% y centrifugar a 1300 RPM X 20 Minutos
Imagen N 36,37: Tcnica de percoll

Fuente: Elaboracin propia.

Se elimina el sobrenadante y se aade tal esper 2 ul y se vuelve a centrifugar a 1000 rpm x

10 minutos esta operacin se realiza 2 veces. Sacar la placa multi posillos de la incubadora
luego observar la maduracin y cambiar placa multiposillos a otro que contiene medio de
fertilizacin, aadir aproximadamente 1 milln de espermatozoides a cada pocillo
 38

3.10.4. cnica de Swim up

Despus de recuperar los espermatozoides epidimarios con andromed se llevan a
refrigeradora
Para la realizacin de esta tcnica se deposita en un tubo de 10 cc semen ms la misma
cantidad de medio sp-talp
Se centrifuga a 1800rpm por 5 minutos luego se elimina el sobrenadante y el pellet se re
suspender en 2 ml de medio de cultivo fert-talp y se centrifuga por segunda vez a 1800rpm
se elimina el sobrenadante y el pellets es depositado con mucho cuidado en la base y se lleva
a la incubadora en una posicin de 45C por 30 minutos para que los espermatozoides ms
migren luego se toma el sobrenadante aproximadamente 5-10ul para depositar en cada well
Imagen N 38,39: Swim up e inseminacin de ovocitos con semen

Fuente: Elaboracin propia.

Luego se lleva a la incubadora por un tiempo de 24 horas hasta completar la fertilizacin
Imagen N 40: Incubadora

Fuente: Elaboracin propia.

 39

3.11. Cultivo

Pasados las 24 horas de fertilizacin se saca la placa multiposillos que contienen los ovocitos
ya fertilizados de la incubadora para luego remover por pipeteo y eliminar las clulas de
cumulus y este es lavado 2 veces en medio de manipulacin en una placa de 30mm y por
ltimo en otra placa que contiene medio de cultivo para finalmente ser depositado en una
placa multiposillo que contiene medio de cultivo

Imagen N 41: Cultivo de ovocitos

Fuente: Elaboracin propia.

Lugo es puesto a un guante inflado para luego ser llevado a la incubadora por 7 das que dura
el cultivo
Imagen N 42: Cultivo en la incubadora por 7 das

Fuente: Elaboracin propia.

Pasado los 7 das se procede a observar y determinar la cantidad y calidad de mrulas y
blastocisto que existe
 40

Imagen N 43: Evaluacin a los 7 das

Blastocisto
de calidad 1

Fuente: Elaboracin propia.

Resumen
Imagen N 44: Resumen de FIV

Fuente: Elaboracin propia.

 41

1. Colecta de ovocitos por aspiracin folicular haciendo uso de una jeringa 18 G de

ovarios obtenidos de matadero
2. maduracin de ovocitos obtenidos por puncin por 30-32 horas
3. ovocitos maduros inseminados con semen preparado y conservados por un
tiempo de 18-24 horas
4. embriones resultados por FIV cultivados por 7-8 das

Armado de maniqu: Se debe realizar con cuero de alpaca vaca o en celo.

Imagen N 45, 46,47: Armado del maniqu

Fuente: Elaboracin propia.

3.12. Viaje a Ccahuaccpampa
Categorizacin de alpacas en el banco de germoplasma en el cual se pudo determinar los
diferentes colores de alpacas
Imagen N 49, 50,51: Caracterizacin de alpacas

Fuente: Elaboracin propia.

 42

3.13. Identificacin de animales:

Imagen N 52,53: Aretado de alpacas de acuerdo al nmero correspondiente

Fuente: Elaboracin propia.

Imagen N 54, 55,56: Tratamiento de alpaca

Fuente: Elaboracin propia.

Imagen N 55, 56,57: Dosificacin y aplicacin de vitamina, el trabajo se realiz durante
dos das el primer da se dosific a las 175 alpacas hembras y sus cras aplicando
antiparasitario ivermectina sc y ectoline tpicamente el segundo da se dosific a los 75
machos.

Fuente: elaboracin propia

 43

Imagen N 58, 59,60: Aplicacin de vitamina y observacin de la accin de ectoline en

piojos de alpacas

Productos utilizados:
Antiparasitario:
Ivermectina (ivomec al 1%).
Fipronil (ectoline).
Vitaminas:
Catosal
Bigantol.
ADE Forte.

Fuente: elaboracin propia

 44

IV. CONCLUSIONES

Gracias a la prctica realizada se pudo conocer las principales biotecnologas

utilizadas en la produccin de alpacas, tales es as, la coleccin de semen, congelacin
de semen, fertilizacin in vitro en la que viene trabajando la Estacin Experimental
Agraria CANAAN-INIA.
Se realiz actividades de manejo como tratamientos de diferentes enfermedades,
identificacin, aretado y caracterizacin de alpacas.
Se pudo contrastar los conocimientos adquiridos en las aulas universitarias con la
prctica realizada.

V. RECOMENDACIONES

Es necesario que nuestra E.F.P. de Medicina Veterinaria haga convenios con

diferentes instituciones ya sean privadas o pblicas, para que as el estudiante que
salga a realizar sus prcticas no tenga inconvenientes en buscar y realizar sus prcticas
pre-profesionales en dichas instituciones.

LA ESTACION EXPERIMENTAL CANAAN-INIA, es una institucin seria, y

brinda las condiciones para realizar prcticas de internado y conocimientos valiosos.
Razn por la cual recomiendo a los internos realizar prcticas en dicha institucin.
 45

VI. BIBLIOGRAFIA

BUSTINZA, CH. VICTOR 2001 la alpaca 1 edicin, editorial IIPC-FMVZ-UNA-

PUNO.
Fernndez Baca, S. 2005. Situacin actual de los camlidos sudamericanos en Per.
Proyecto de Cooperacin Tcnica en apoyo de la crianza y aprovechamiento de los
Camlidos Sudamericanos en la Regin Andina TCP/RLA/2914. Organizacin de las
Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentacin (FAO).
Manual de empadre controlado de alpacas / Autor: Wlber Garca; Colaboradores:
Ernesto Ccana, Edwin Apaza. Lima: Soluciones Prcticas-ITDG, 2009.
Sumar, J. (1977) Maxilares deprimidos en auqunidos o prognatismo mandibular.
En tercer boletn extraordinario del IVITA (diciembre). Lima Per
Wheeler JC, Russela AJF, Redden H. 1995. Llamas and Alpacas: Pre-conquest breeds
and post-conquest hybrids. J Archaeol Sci. 22: 833-840.
 46

VII. ANEXO

Anexo N 03 y 04: Ficha de evaluacin y certificado de prcticas de internado