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MTODO COLORIMTRICO
Para la determinacin in vitro de hierro en suero o plasma
PRINCIPIO PROCEDIMIENTO
En medio ligeramente cido y en presencia de cloruro de guanidinio se libera el
Fe(III) unido a la transferrina. Posteriormente la hidroxilamina reduce el Fe(III) a
Tcnica BR BPR PR ST
Fe(II).
El hierro divalente forma con el FerroZine un complejo coloreado cuanticable mL mL mL mL
espectrofotomtricamente.
Agua desionizada 0,20 -- -- --
(FerroZine: Hach Chemical Co., Ames, IOWA, EE UU). Estndar -- -- -- 0,20
Una nica prueba de laboratorio no permite establecer un diagnstico. Los resultados Lectura.
se han de evaluar en el contexto de todos los datos clnicos y de laboratorio obtenidos Longitud de onda: 578 nm, 562 nm
Blanco: agua desionizada
REACTIVOS Estabilidad de color: 30 min
Kit 2 x 100 mL. (Ref. 99 13 42). Contiene:
A. 2 x 100 mL Disolucin tampn Ref. 99 06 20 CLCULOS
B. 1 x 20 mL Reactivo de color Ref. 99 04 12
C. 1 x 5 mL Estndar Ref. 99 02 90 Abs. PR - (Abs. BPR + Abs. BR)
x 200 = g /dL
PREPARACIN DEL REACTIVO DE TRABAJO Abs. ST - Abs. BR
Aadir a 40 mL disolucin tampn (Reactivo A), 1,5 mL del reactivo de color
Donde:
(Reactivo B).
Abs. PR: Absorbancia de la muestra
Abs. BPR: Absorbancia del blanco de muestra
El estndar est listo para su uso.
Abs. BR: Absorbancia del blanco de reactivo
Abs. ST: Absorbancia del Standard
COMPOSICIN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Nota: Se incluye un blanco de muestra (BPR) para eliminar la posible interferencia
Las concentraciones en las disolucion reactiva son:
por turbidez de la muestra.
Tampn acetato pH 4,9 200 mM
Clorhidrato de guanidinio 3,4 M Unidades SI
Clorhidrato de hidroxilamina 58 mM (g/dL) x 0,1791 = mol/L
FerroZine 1,5 mM
Conservantes y estabilizantes VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 60 - 160 g/dL
Estndar: Disolucin acuosa de hierro equivalente a 200 g/dL (35,8 mol/L). Mujeres: 37 - 145 g/dL
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus
Los componentes del kit mantenidos a 2-8C son estables hasta la fecha de propios valores de referencia.
caducidad indicada en la etiqueta.
El reactivo de trabajo es estable 3 meses a temperatura ambiente ( 25C) y hasta PRESTACIONES. CARACTERSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
4 meses a 2 - 8C. Las caractersticas de funcionamiento de un producto dependen tanto del reactivo
como del sistema de lectura empleado.
Indicaciones de alteracin de los reactivos: Los resultados siguientes se han obtenido de forma manual.
Presencia de partculas o turbidez. Blanco del reactivo de trabajo > 0,300.
Sensibilidad, como lmite de deteccin: 18 g/dL
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO Linealidad: Hasta 1000 g/dL (179 mol/L). Para concentraciones superiores, diluir la
Material comn de laboratorio muestra con agua desionizada (1+1). Multiplicar el resultado nal por 2.
Espectrofotmetro, analizador automtico o fotmetro termostatizado a 37C Exactitud, como % de recuperacin: 97,3%
Precisin en la serie, como CV%: 2,11%
MUESTRA Precisin entre series, como CV%: 2,39%
Suero exento de hemlisis o plasma Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias
El hierro srico es estable durante 7 das a 2 - 8C signicativas al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
PRECAUCIONES Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo estn disponibles
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. bajo demanda.
Manipular con precaucin.
Se aconseja consultar la cha de datos de seguridad antes de la manipulacin del INTERFERENCIAS
reactivo. No utilizar sueros lipmicos.
La eliminacin de residuos debe hacerse segn la normativa local vigente. Debido a que se trata de una tcnica muy sensible, debe evitarse la contaminacin
por hierro del material a utilizar, por lo que se recomienda el uso de material de
CONTROL DE CALIDAD plstico desechable.
Es recomendable la inclusin de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) Se desaconseja la introduccin de pipetas en el frasco de reactivo, para evitar
y Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85), en cada proceso de medida para vericar los contaminaciones.
resultados. En caso de contaminacin accidental del estndar, se aconseja utilizar como tal un
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de suero valorado, como por ejemplo Seriscann Normal (Ref. 99 41 48).
calidad y los procedimientos de correccin de las desviaciones en las medidas.
BIBLIOGRAFA
AUTOANALIZADORES Stookey L.L., (1970). Anal. Chem., 42, 779 - 781.
Adaptaciones a distintos analizadores automticos, disponibles bajo demanda. Yee, H.Y.and Zin, A.(1971).Clin. Chem. 17, 950 - 953.
Persijn, J.P.y col.,(1971). Clin Chim. Acta. 35, 91 - 98.
Williams J.H.,Johnson D.J. and Haut, M.J. (1977). Clin. Chem. 23, 237 - 240.
Thompsen J.C. and Mottola H.A.,(1984). Anal. Chem. 56, 755 - 757.
PRINCIPLE PROCEDURE
In a slightly acid medium and in the presence of guanidine hydrochloride, iron is
released from transferrin and reduced by hydroxylamine from Fe (III) to Fe(II).
Procedure BR BSA SA ST
Divalent iron forms a coloured complex with FerroZine, quantifiable
spectrophotometrically. mL mL mL mL
(FerroZine: Hach Chemical Co., Ames, IOWA, U.S.A). Deionized water 0.20 -- -- --
Standard -- -- -- 0.20
DIAGNOSTIC USE
Sample -- 0.20 0.20 --
Iron is distributed in the body forming part of hemoglobin and myoglobin.
Low iron concentations are found in infectious diseases and anemia. High levels of Reagent A -- 1.00 -- --
iron are presented in liver disease, hemochromatosis, and at high levels of Transferrin.
Working reagent 1.00 -- 1.00 1.00
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate
clinical and laboratory data. Mix and incubate 10 min at room Temp. (20 - 25C) or 5 min at 37 C
REAGENTS Reading
Kit 2 x 100 mL. (Ref. 99 13 42). Contents: Wavelength: 578 nm, 562 nm
A. 2 x 100 mL Buffer solution Ref. 99 06 20 Blank: deionized water
B. 1 x 20 mL Colour reagent Ref. 99 04 12 Colour stability: 30 min
C. 1 x 5 mL Standard Ref. 99 02 90
CALCULATIONS
WORKING REAGENT PREPARATION
Add 1.5 mL of colour reagent (Reagent B) to 40 mL of buffer solution (Reagent A). SA Abs - (BSA Abs + BR Abs)
Standard is ready to use. x 200 = g/dL
ST Abs - BR Abs
WORKING REAGENT COMPOSITION Where:
The reagents composition is as follows: SA Abs: Sample absorbance
BSA Abs: Sample blank absorbance
Acetate buffer pH 4.9 200 mM BR Abs: Blank reagent absorbance
Guanidine hydrochloride 3.4 M ST Abs: Standard absorbance
Hydroxylamine hydrochloride 58 mM
FerroZine 1.5 mM Note: A sample blank (BSA) is included to eliminate possible interference from
a sample turbidity.
Preservatives and stabilizers
Standard: Aqueous solution of iron equivalent to 200 g/dL (35.8 mol/L). SI Units
(g/dL) x 0.1791 = mol/L
STORAGE AND STABILITY
When stored at 2-8C the components of the kit will remain stable until the expiration REFERENCES VALUES
date stated on the label. Men: 60 - 160 g/dL
The working reagent will remain stable for 3 months at room temperature ( 25C) Women: 37 - 145 g/dL
and for 4 months at 2-8C.
The stated values are for guidance. It is advisable that each laboratory determines its
s Signs of reagent deterioration: own reference values.
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank > 0.300.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
ADDITIONAL EQUIPMENT The performance characteristics depend on the method used. It is recommended
o General laboratory equipment. to calculate these data for each particular test protocol. These results have been
Spectrophotometer or photometer thermostable at 37C. obtained using a manual method.
PRINCIPE TECHNIQUE
En milieu lgrement acide et en prsence de chlorure de guanidinium, lion Fe(III)
li la transferrine se libre. Par la suite, lhydroxylamine rduit lion Fe(III) en ion
Technique BL R BL ESSAI ESSAI TALON
Fe(II). Le fer bivalent forme avec la FerroZine un complexe color quantiable par
spectrophotomtrie. mL mL mL mL
Eau dionise 0,20 -- -- --
(FerroZine: Hach Chemical Co., Ames, IOWA, USA).
talon -- -- -- 0,20
UTILIT DE DIAGNOSTIC
chantillon -- 0,20 0,20 --
Le fer contenu dans le corps se trouve dans lhmoglobine et la myoglobine.
On observe de faibles taux de fer en cas danmie ferriprive et anmie due des Ractif A -- 1,00 -- --
maladies infectieuses. Des taux de fer levs sont observs en cas de maladies du
R. de travail 1,00 -- 1,00 1,00
foie, dhmochromatose et de concentrations leves de transferrine.
Un test de laboratoire unique ne peut pas tablir un diagnostic. Les rsultats doivent
tre valus dans le contexte de toutes les donnes cliniques et de laboratoire Mlanger et incuber pendant 10 minutes temprature ambiante (20 - 25C) ou
obtenus. 5 minutes 37C
RACTIFS Lecture
Kit 2 x 100 mL. (Rf. 99 13 42). Contenu: Longueur donde: 578 nm; 562 nm
A. 2 x 100 mL Solution tampon Rf. 99 06 20 Blanc: eau dionise
B. 1 x 20 mL Ractif de coloration Rf. 99 04 12 Stabilit de la coloration: 30 minutes
C. 1 x 5 mL talon Rf. 99 02 90
CALCULS
PRPARATION DU RACTIF DE TRAVAIL
Ajouter 1,5 mL de ractif de coloration (ractif B) 40 mL de solution tampon (ractif Abs. ESSAI - (Abs. BL ESSAI+ Abs. BLR)
x 200 = g /dL
A). Abs. T. - Abs. BLR
Ltalon est prt lemploi.
O:
COMPOSITION DU RACTIF DE TRAVAIL Abs ESSAI: Absorbance de lssai
Les concentrations dans la solution ractive sont les suivantes: Abs BL ESSAI: Absorbance blanc de lessai
Abs BLR: Absorbance blanc du ractif
Tampon actate pH 4,9 200 mM Abs. TALON: Absorbance de ltalon
Chlorhydrate de guanidinium 3,4 M
Chlorhydrate de hydroxylamine 58 mM Remarque: Il est inclus un blanc dchantillon pour liminer les possibles interfrences
FerroZine 1,5 mM par la turbidit.
Conservateurs et stabilisants
Units SI
talon: Solution aqueuse de fer quivalente 200 g/dL (35,8 mol/L). (g/dL) x 0,1791 = mol/L
H302,H315,H319
P280,P302+P352,P305+P351+P338,P321,P337+P313,P362+P364,P501
ES - HIERRO (FERROZINE), TAMPON
Atencin
Peligro: Nocivo en caso de ingestin. Provoca irritacin cutnea. Provoca irritacin ocular grave.
Precaucin: Llevar guantes/prendas/gafas/mscara de proteccin. EN CASO DE CONTAC-
TO CON LA PIEL: Lavar con abundante agua. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS:
Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si
lleva y resulta fcil. Seguir aclarando. Se necesita un tratamiento especfico. Si persiste la
irritacin ocular: Consultar a un mdico. Quitar las prendas contaminadas y lavarlas antes de
volver a usarlas. Eliminar el contenido/el recipiente segn el punto 13 de la Ficha de Datos de
Seguridad.
Contiene: cloruro de guanidinio
GB - IRON (FERROZINE), BUFFER
Warning
Hazard: Harmful if swallowed. Causes skin irritation. Causes serious eye irritation.
Precautionary: Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protection. IF ON
SKIN: Wash with plenty of water. IF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes.
Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsing. Specific treatment. If eye
irritation persists: Get medical advice/attention. Take off contaminated clothing and wash it befo-
re reuse. Dispose the contents/container according to point 13 of the Safety Data Sheet.
Contains: guanadine hydrochloride,guanidinium chloride
PT - FERRO (FERROZINE), TAMPO
Ateno
Perigo: Nocivo por ingesto. Provoca irritao cutnea. Provoca irritao ocular grave.
Precauo: Usar luvas de proteco/vesturio de proteco/proteco ocular/proteco facial.
SE ENTRAR EM CONTACTO COM A PELE: lavar abundantemente com gua. SE ENTRAR
EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com gua durante vrios
minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se tal lhe for possvel. Continuar a enxaguar.
Tratamento especfico. Caso a irritao ocular persista: consulte um mdico. Retirar a roupa
contaminada e lav-la antes de a voltar a usar. Eliminar o contedo / recipiente de acordo com
o ponto 13 da Ficha de Segurana.
Contm: cloreto de guanidnio
FR - FER (FERROZINE), TAMPON
Attention
Danger: Nocif en cas dingestion. Provoque une irritation cutane. Provoque une svre
irritation des yeux.
Prcaution: Porter des gants de protection/des vtements de protection/un quipement de
protection des yeux/du visage. EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU: Laver abondamment
l'eau. EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX: rincer avec prcaution l'eau pendant
plusieurs minutes. Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent tre
facilement enleves. Continuer rincer. Traitement spcifique. Si l'irritation oculaire persiste:
consulter un mdecin. Enlever les vtements contamins et les laver avant rutilisation. liminer
le contenu / rcipient conformment au point 13 de la fiche de donnes de scurit.
Contient: chlorure de guanidinium
B
ES - HIERRO (FERROZINE), REACTIVO COLOR
GB - IRON (FERROZINE), COLOR REAGENT
PT - FERRO (FERROZINE), REAGENTE COR
FR - FER (FERROZINE), RACTIF COLOR
C
ES - HIERRO ESTNDAR, 200 uG/DL
GB - IRON STANDARD, 200 uG/DL
PT - FERRO STANDARD, 200 uG/DL
FR - FERRO STANDARD, 200 uG/DL