GUA DE MICROBIOLOGA

IDENTIFICACIN DE HONGOS: CARACTERISTICAS

MACROSCPICAS

CARACTERISTICAS MACROMORFOLGICAS

1. ASPECTO DEL HAZ : BLANCO

2. ASPECTO DEL ENVES: BLANCO AMARILLENTO

3. ASPECTO DEL MICELIO: SECO QUEBRADIZO

4. TIEMPO DE CRECIMIENTO: 7 14 DIAS

POR EL TIEMPO DE CRECIMIENTO, ASPECTO DEL MICELIO, HAZ

Y ENVES ES: DERMATOFITO

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CARACTERISTICAS MACROMORFOLGICAS

1. ASPECTO DEL HAZ : COLONIAS REDONDAS, HUMEDAS Y

BLANMQUESINAS

2. ASPECTO DEL ENVES: AMARILLENTO

3. ASPECTO DEL MICELIO: HUMEDO

4. TIEMPO DE CRECIMIENTO: 1 - 7 DIAS

POR EL TIEMPO DE CRECIMIENTO, ASPECTO DEL MICELIO, HAZ

Y ENVES ES: LEVADURA
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CARACTERISTICAS MACROMORFOLGICAS
1. ASPECTO DEL HAZ : ESTRIAS CONCENTRICAS BLANCAS

2. ASPECTO DEL ENVES: ESTRAS CONCENTRICAS ROJISAS

3. ASPECTO DEL MICELIO: ATERCIOPELADO, BLANCO

4. TIEMPO DE CRECIMIENTO: 7 14 DIAS

POR EL TIEMPO DE CRECIMIENTO, ASPECTO DEL MICELIO, HAZ

Y ENVES ES: DERMATOFITO

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DIAGNSTICO VIRAL

1 Examen citolgico de la muestra Citologa.

Papanicolaou
Seller
2 Deteccin de Ag virales.
Tcnica con Ac fluorescente
Radioinmunoanalisis
Elisa
Hibridacin de cidos nucleicos
3 Microscopia electrnica.
4 Serologa viral.
Fijacin de complemento
Neutralizacin
Inhibicin de la hemoaglutinacin
IFI
Elisa
CIE
RIA
5 Aislamiento y Cultivo.
I.- SELECCIN DE MUESTRAS PARA CULTIVOS DE VIRUS:
Garganta y nasofaringe (hisopos).
Hisopos rectales y heces
Orina
Lesiones cutaneas
LCR,otros liquidos esteriles
Ojo.Sec. De la conjuntiva.
Sangre
tejido
II.-TRANSPORTE DE MUESTRA:

Rpido
Congelado-12 horas
Stuart modificado,hanksmodif. O leibovitz-emory.
III.- MEDIOS Y CELULAS USADAS PARA EL AISLAMIENTO DE VIRUS

a) CULTIVOS PRIMARIOS:
Monocapa de fibroblastos humano (HFD)
Monocapa de celulas de rion y mono (RMP)
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b) LINEAS CELULARES CONTINUAS:
Hep-2
Hela
vero
IV.- INOCULACION DE LAS MUESTRAS.
Se inocula 0.25 ml.
Se incuba 35c en tambores giratorios
Se observa diariamente por 10 a 14 das
V.- IDENTIFICACION
Observacin de ACP
Hemoabsorcion / hemoaglutinacin de eritrocitos de cobayo
Inhibicin de la hemoabsorcion
Anticuerpos fluorescentes
Neutralizacin
Labilidad al acido

6 Deteccin del material gentico viral.

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AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE VIRUS

Los virus son agentes infecciosos cuya reproduccin es exclusivamente

intracelular, por lo tanto no se puede cultivar en ningn medio convencional.
Los virus solo pueden ser cultivados en animales, huevos embrionados y clulas.
Existen una afinidad especifica por cada sistema, por lo tanto algunos virus se
pueden cultivar en lnea celular, otros en huevos embrionados o en animales.

Alguno de los virus son de difcil aislamiento en cultivos celulares y las

infecciones causadas por ellos son diagnosticados por otros mtodos.
Por lo que el diagnstico viral se puede realizar por:

Examen citolgico de la muestra.- Es la tcnica ms accesible y rpida

para el diagnstico de ciertas enfermedades virales; mediante esta tcnica se
busca inclusiones virales caractersticas, estas estructuras intracelulares pueden
ser agregados de virus en el interior de una clula afectada o acmulos
anormales de material celular que se producen como consecuencia del
trastorno metablico inducido por el virus. Tambin se puede encontrar
Sincitios, acmulos de clulas que contienen ms de un ncleo. Cuerpos de
negr, inclusiones virales rbicas en el tejido cerebral.

Deteccin de antgeno viral.- El examen directo de los tejidos o exudados

infectados con el virus puede realizarse mediante anticuerpos virales
especficos conjugados con fluorescencia. Mtodos como
inmunofluorescencia indirecta, radioinmunoensayo, ELISA, hibridacin de
cidos nucleicos para la deteccin del material gentico viral en muestras
clnicas.

Microscopia Electrnica.- La ME es til sobre todo para la deteccin de

virus que desarrollan mal o no desarrollan en cultivos celulares, hoy en da se
emplea para detectar rotavirus y otros virus probables agentes de
gastroenteritis.

Serologa Viral.- Ciertos virus, como los de hepatitis A y B, rubola,

sarampin y corona virus; son difcil de aislar en cultivos celulares y las
infecciones causadas por ellos son diagnosticadas por tcnicas serolgicas. Se
recomienda extraer una muestra de suero en el periodo agudo y otra en el
periodo de convalecencia. Los mtodos usados son las pruebas de inhibicin
de la hemaglutinacin, neutralizacin, fijacin de complemento, ELISA, etc.

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Cultivo.- Diversos tipos de cultivos celulares se emplean habitualmente para

el aislamiento de virus. Los cultivos celulares pueden ser primarios, de bajo
pasaje o lneas celulares. Los cultivos primarios, por ejemplo, rin de
embrin de humano o de mono, son sensibles a los virus slo durante uno o
dos pasajes, mientras que los cultivos de fibroblasto diploides pueden
mantener su susceptibilidad durante 20 a 50 pasajes. Las lneas celulares
continuas como Hep-2 son sensibles a los virus aun despus de ms de cien
pasajes. Las muestras se inoculan a las clulas, se incuban y luego el
crecimiento y la identificacin de un virus, se detecta mediante la observacin
de cambios en la monocapa del cultivo celular que se denominan efecto a
accin citoptico (ECP o ACP), estos ECP son cambios en la morfologa
celular, lisis celular, vacuolizacin, formacin de sincitios, cuerpos de
inclusin. Otra forma de identificar en el crecimiento en lnea celular es la
hemoadsorcin/hemoaglutinacin de eritrocitos de cobayo, con frecuencia, la
determinacin del tipo, rapidez y selectividad del ECP o ACP en cultivos
celulares es suficiente para permitir la identificacin preliminar o definitiva de
un aislamiento.

Material
- Suero sospechoso VIH
- Policubetas y recipientes para lavado
- Micropipeta
- Reloj
- Reactivos
- Lminas para la observacin del ACP.

Procedimiento
Inmunoensayo sobre soporte slido para la deteccin de anticuerpos contra de
inmunodeficiencia humana (HIV-1 y HIV-2).
1. Deposite 2 gotas de diluyente de la muestra en cada pocillo a usar:
2. Colocar 100 ul de control negativo, 100 ul de muestra suero problema y 100
ul de control positivo, cada uno en pocillos diferentes.
3. Colocar el peine en cada pocillo, dejarlo reposar por 10 minutos.
4. Lavar
5. Agregar 3 gotas de revelador en cada pocillo y colocar el peine por 10
minutos, lavar y observar.

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Resultado
Muestra reactiva : Repetir por duplicado, si continua reactivo,
confirmar con Western Blot.
Muestra no reactiva : Se presume que no tiene anticuerpo Hiv 1Hiv 2
Leer las lminas y observar ACP del virus.