You are on page 1of 10

Ciencia UANL

Universidad Autnoma de Nuevo Len


rciencia@mail.uanl.mx
ISSN (Versin impresa): 1405-9177
MXICO

2005
Martha Guadalupe Nieto Lpez / Luca E. Cruz Surez / Denis Ricque Marie / Marina
Ezquerra Brauer
TCNICA DE DIGESTIBILIDAD INVITRO EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA
CAMARN
Ciencia UANL, enero-marzo, ao/vol. VIII, nmero 001
Universidad Autnoma de Nuevo Len
Monterrey, Mxico
pp. 65-73
TCNICA DE DIGESTIBILIDAD IN VITRO
EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA
CAMARN

MARTHA GUADALUPE NIETO LPEZ*, LUCA ELIZABETH CRUZ SUREZ*, DENIS RICQUE MARIE*, MARINA EZQUERRA BRAUER*

E
ntre las tcnicas qumicas de evalua- 2204 tobis, TAF-1 anguila de arena, 11858 des-
cin nutricional oficiales existen al- perdicios de arenque, 1986, 1431 mackerel, 2002,
gunas que se pueden aplicar inde- 3664 desperdicios de pescado blanco y A3481
pendientemente de la especie, pero menhaden) y un concentrado proteico (CPSP) que
en otros casos es indispensable que los resultados fueron elaborados bajo diferentes procesos de se-
sean validados con evaluaciones in vivo; sta es la cado y tres harinas de anchoveta elaboradas con
situacin de las tcnicas de digestibilidad, las cua- materias primas de diferente frescura (fresca, mo-
les constituyen un parmetro de calidad muy im- derada y descompuesta).
portante. No hay evidencia de que la metodologa
oficial para determinar digestibilidad in vitro (AOAC Dietas experimentales
1990)1 posea buena correlacin con la digestibili-
dad en el camarn, por otro lado, existen publica- Para obtener una dieta que cumpliera con los re-
ciones (Carrillo, 1994;2 Lazo, 1994;3 Ezquerra, querimientos nutricionales para camarn, publica-
1997b4) que han desarrollado metodologas in vitro dos por Akiyama et al.,5 sta se formul como la de
con enzimas de los propios camarones, pero nin- referencia en el programa Mixit-2 con una harina
guna de stas se ha oficializado por falta de corre- comercial.
lacin con los resultados in vivo, o porque slo se Con las harinas experimentales se elaboraron
pueden aplicar para ingredientes y no para alimen- 16 dietas que contenan 30% de cada una de las
tos. Por ello, en este trabajo se propuso evaluar la harinas y 70% de la dieta de referencia. La digesti-
correlacin de la digestibilidad in vivo en camarn bilidad aparente in vivo para dietas y harinas de
vs. la digestibilidad in vitro, determinada con el pescado se determin mediante el sistema propuesto
mtodo del AOAC, y la metodologa desarrollada por Cho et al.6
para camarn ms eficiente reportada hasta el ini- La composicin qumica de las harinas de pes-
cio de este trabajo (pH-stat), utilizando como sustrato cado y los alimentos se determin de acuerdo a los
15 harinas de pescado de calidad variable, previa- siguientes mtodos: Kjeldahl7 para protena, Soxhlet8
mente evaluadas en salmnidos y en mink, as como para lpidos, AOAC 942.051 para ceniza y AOAC
otros ingredientes y alimentos balanceados termi- 962.091 para fibra. Las prdidas de protena (PP) y
nados. materia seca (PMS) en las dietas, despus de una hora
de inmersin en agua marina (28oC y 35 g L-1), fueron
Material y mtodos determinadas por el mtodo Aquacop9 (tres replica-
dos por dieta). El contenido de protena y cromo en
Harinas de pescado experimentales los alimentos y heces se determin empleando el

Se evaluaron 12 harinas de pescado (F815 aren-


*Programa Maricultura, Facultad de Ciencias Biolgicas, UANL.
que, 539 arenque, 163 arenque, F813 capelin, E-mail: mnieto@ccr.dsi.uanl.mx

CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005 65


TCNICA DE DIGESTIBILIDAD IN VITRO EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA CAMARN

mtodo Kjeldhal, modificado por Nieto et al.10 digestibilidad in vivo en camarn y la digestibilidad
in vivo determinada en mink, salmn y trucha (da-
Bioensayo de digestibilidad tos obtenidos previamente), con la finalidad de de-
terminar si estos resultados se podan utilizar para
El bioensayo cont con tres replicados en el tiempo predecir la digestibilidad en el camarn. En los ca-
para cada dieta, utilizando siete camarones L. sos donde el coeficiente de correlacin tuvo una
vannamei por acuario. El peso promedio de los ca- probabilidad inferior a 0.05 se determin la ecua-
marones utilizados para cada replicado fue de cin de prediccin mediante un anlisis de regre-
0.25, 0.4 y 0.55g. El alimento se distribuy en dos sin lineal.
raciones diarias para sumar el 10% de la biomasa
en el acuario. Una hora despus de alimentar a los Determinacin de digestibilidad in vitro
camarones se colectaron las excretas (dos veces al
da). La colecta se llev a cabo hasta completar Medicin de la tasa inicial de hidrlisis
100mg de heces secas. Posteriormente, las heces
se lavaron dos veces con agua destilada para eli- Para la determinacin del grado de hidrlisis por el
minar el exceso de sales y evitar la interferencia de mtodo de pH-Stat se utiliz como enzima un ho-
stas en los mtodos de anlisis. Las heces fueron mogeneizado del hepatopncreas de L. vannamei.
congeladas diariamente a -12C y liofilizadas para El extracto se realiz a partir de glndulas digesti-
su posterior anlisis. vas previamente liofilizadas, las cuales fueron en
La digestibilidad aparente de la protena (DAPD) seguida trituradas en de buffer TRIS HCl 10mM pH
y de la materia seca (DAMSD) en la dieta se deter- 7.5 a 40C (0.307g en 100 ml), con la ayuda de
min con las frmulas de Maynard y Loosli.11 Los un ultratriturador. El triturado se centrifug durante
valores de digestibilidad proteica (DAPDcor) y de 30 min a 10,000g a 20C. Los lpidos sobrena-
materia seca (DAMSDcor) en las dietas fueron co- dantes fueron separados y eliminados con la ayuda
rregidos por lixiviacin. La digestibilidad aparente de una esptula. Se determin la actividad
de la protena (DAPI) y de la materia seca (DAMSI) proteoltica total y especfica (Kunitz, 1946, modifi-
de las harinas de pescado se determin mediante cado por Clark et al),11 la actividad trpsica (Erlanger
las siguientes frmulas: et al)12 y la determinacin de protenas totales por
el mtodo de Bradford (1976).13
DAPI = [100 * %DAPD * % PDE - (100 - % IP) * El grado de hidrlisis se determin por triplica-
% DAPDRef] / (% IP * % PI ) do, tanto para las harinas como para las dietas; las
muestras fueron molidas a 35 mallas y homogenei-
DAMSI = [100 * DAMSD - (100 - % IP) * % zadas en agua destilada con un ultratriturador (8mg
DAMSDRef] / % IP. de protena/ml) y 10 ml de la suspensin se coloca-
ron dentro del recipiente de hidrlisis; el pH fue ajus-
Donde DAPD = % de digestibilidad aparente de tado a ocho con NaOH al 0.1M. La reaccin se
la protena en la dieta, PDE = % de protena en la inici con la adicin de 2 ml del homogeneizado
dieta, IP = % de inclusin del ingrediente a evaluar enzimtico (con una actividad proteoltica de 6.21
(en base seca en la mezcla de ingredientes), u/mg de protena). El pH se mantuvo en ocho y se
DAPDRef = % de digestibilidad aparente de la pro- midi la cantidad de NaOH 0.1N utilizado para
tena en la dieta de referencia, PI = % de protena mantener dicho pH durante 30 min a 25C.
en el ingrediente a probar (en base seca); DAMSD El grado de hidrlisis de la protena se determi-
= % de digestibilidad de la materia seca en la die- n con la siguiente frmula (Dimes and Haard):14
ta, % DAMSDRef = % de digestibilidad aparente de
la materia seca en la dieta de referencia. DH%= [(B*Nb*1.5/M*(S%/100))/8]*100

Correlacin entre la digestibilidad in vivo de las Donde: B = ml de NaOH 0.1N utilizados para
harinas de pescado y la digestibilidad en otras mantener el pH en 8, Nb = Normalidad del NaOH,
especies 1.5 factor de calibracin a pH de 8 y 250C, M =
gramos de la mezcla, S = concentracin de prote-
Se determin el coeficiente de correlacin entre la na en la mezcla (%) y 8 es el contenido total de

66 CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005


MARTHA GUADALUPE NIETO LPEZ, LUCA ELIZABETH CRUZ SUREZ, DENIS RICQUE MARIE, MARINA EZQUERRA BRAUER

enlaces peptdicos (meq/g) para la protena de tri- de pescado, y seis horas para las dietas. Al final del
go o caseina (Adler- Nissen, 1986). perodo de incubacin se filtraron en un papel
Como una modificacin adicional, el grado de Watman #2 y la protena residual se determin con
autohidrlisis de las muestras se determin mediante el mtodo Kjeldhal en un sistema kjeltec Tecator.
la incubacin de stas en las mismas condiciones La digestibilidad de la protena se calcul me-
de prueba, sin la adicin del homogeneizado diante la frmula del mtodo oficial (AOAC, 1990),
enzimtico. Esto nos permiti estimar el grado de tomando el total de protena presente (frmula A) o
hidrlisis corregidos por la adicin del extracto: corrigiendo mediante la utilizacin de un tercer repli-
cado en el que no se adicion enzima (frmula B).
DH% corr. = [((B-B)*Nb*1.5/M*(S%/100))/8]*100 Una vez estandarizada esta tcnica, se utiliz en
determinar si poda ser empleada para distinguir
Donde B son los ml de NaOH 0.1N utilizados entre la digestibilidad de diferentes ingredientes, y
para mantener el pH en 8.0 durante 30 min 25oC. para otras especies de camarn. Se evalu la di-
gestibilidad in vivo en L. vannamei y en L. stilyrostris de
Mtodo de digestibilidad in vitro con pepsina diferentes fuentes proteicas, as como de dietas pre-
diluida (A.O.A.C., Torry modificado) paradas con stas, utilizando como ingredientes: gluten
de trigo, harina de trigo, pasta de soya, harina de
La digestibilidad con pepsina de las muestras se pluma, harina de camarn, harina de calamar y dos
determin por el mtodo de Torry, empleando una diferentes harinas de pescado llamadas A y B.
solucin de pepsina al 0.0002% (Sigma P-7000, La digestibilidad proteica in vitro, para las hari-
actividad 1:10 0000), como lo describen Olley y nas y dietas, se determin a 24 horas de hidrlisis,
Pirie15 y Olsen,16 con pequeas modificaciones, ya empleando dos replicados por cada muestra y
que las muestras fueron molidas a 35 mallas, se 0.8375 ml de homogeneizado de L. vannamei en
utiliz papel filtro Watman #1, y el mtodo Kjeldahl 50 ml de sustrato (1484.1u) o 0.8499 ml en 50 ml
se llev a cabo en un sistema kjeltec Tecator. de sustrato de un homogeneizado de L stylirostris
La digestibilidad con pepsina se calcul para (1462.5 u).
dietas y harinas con la frmula A, y adicionalmente
para las harinas se calcul la digestibilidad sin co- Anlisis estadstico
rregir por la solubilidad del nitrgeno en cido con
la formula B: Los resultados obtenidos, en los diferentes mtodos
A: % DPep corr =[ (NRI en cido NRI en solu- de determinacin de digestibilidad proteica in vitro
cin con pepsina)/ NRI en cido]*100 para las dietas y harinas, se analizaron estadstica-
B: % DPep =[(N total NRI en solucin con mente mediante un anlisis de varianza de una sola
pepsina)/N total]*100 va, seguido por una comparacin mltiple de me-
Donde: Dpep corr = Digestibilidad con pepsina dias por el mtodo de Duncan a una probabilidad
corregida por la solubilidad de la protena en ci- de 0.05 (SPSS software), para determinar si existan
do, Dpep = Digestibilidad con pepsina sin corregir, diferencias entre ellos.
NRI = Nitrgeno residual insoluble. Los resultados del estudio de digestibilidad
proteica in vivo en camarn fueron correlacionados
Mtodo de digestibilidad in vitro con enzimas con los valores in vitro y analizados estadsticamen-
de camarn (tipo A.O.A.C., Torry modificado) te para determinar sus coeficientes de correlacin.
En los casos donde el coeficiente de correlacin
La digestibilidad se determin empleando dos re- present una probabilidad inferior a 0.05 se llev a
plicados. Las muestras se molieron a 35 malla y se cabo la determinacin de la ecuacin de predic-
utilizaron para todas las muestras: 6.25mg de pro- cin mediante un anlisis de regresin lineal.
tena/ml homogeneizadas en 50 ml de buffer tris
50mM, CaCl2 20 mM, pH 8, se mezclaron con 0.84 Resultados
ml de extracto enzimtico crudo (actividad
proteoltica de 1.48 U/mg de protena). Anlisis proximal de las harinas de pescado
Las muestras se incubaron con agitacin cons-
tante a 30C, por seis y 24 horas para las harinas El contenido de protena y ceniza present un ran-

CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005 67


TCNICA DE DIGESTIBILIDAD IN VITRO EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA CAMARN

go de 63.6 a 74.8% y 10.2 a 19.63%, respectiva- sta. El contenido de ceniza va de 13.10 a 15.65%
mente, encontrndose una correlacin negativa sig- y el contenido de lpidos present un rango de 7.37
nificativa (r=-0.90) entre el contenido de protena y a 13.37%.
de ceniza de las harinas de pescado (HP) experi- La lixiviacin de las dietas fue significativamente
mentales. Para fines de anlisis e interpretacin de diferente y muestra un rango que va de 13.4 a 29%.
resultados, se definieron tres grupos de HP, consi- La prdida ms alta de materia seca (29%) fue ob-
derando su contenido de protena y ceniza en base servada para la dieta basal, probablemente de-
hmeda: bido a su alto contenido de pasta de soya, cuyas
Grupo I. Seis HP con un alto contenido de pro- propiedades mecnicas desfavorecen la estabilidad
tena >72% y un muy bajo contenido de ceniza del pellet. Debido a que esta dieta es utilizada en
<12% (F815 arenque, 539 arenque, 163 arenque, un 70% de inclusin en las dietas experimentales,
F813 capelin, 2204 tobis, TAF-1 anguila de arena) era de esperarse que su lixiviacin fuera tambin
y CPSP. alta; sin embargo, la inclusin de las harinas de
Grupo II. Siete HP con 70-65% de protena y pescado mejor la estabilidad. Existe una correla-
12-15% de ceniza (11858 desperdicios de aren- cin significativa entre lixiviacin y el contenido de
que, 1986 fresca anchoveta, 1431mackerel, 2002, protena soluble de las HP (r=0.60). Las tasas de
moderada anchoveta y descompuesta anchoveta). lixiviacin de las otras dietas experimentales se en-
Grupo III. Dos HP pobres en protena < 64.5%, contraron entre 13.4 y 18.5%.
y ricas en ceniza >18% (3664 desperdicios de pes-
cado blanco y A3481 menhaden). Determinacin de la digestibilidad in vivo
La humedad fue de 5.6 a 11.0%. El contenido en camarn
de lpidos vari entre 6.6 y 11.6; HP A3481
menhaden, 1431 mackerel y 11858 desperdicios El bioensayo in vivo permiti diferenciar la digesti-
de arenque fueron particularmente ricas en lpidos bilidad de las HP, ya que los ANOVA mostraron
(> 10%). diferencias significativas (tabla I, P < 0.0001).
El contenido de protena soluble en cido en la El rango de digestibilidad de la materia seca de
harina de pescado, determinado bajo condiciones las dietas (DAMSD 84.5-75.7%) fue ms pequeo
de cido dbil (150 ml de HCl 0.075 N para 1g de que para las harinas (DAMSHP 84.9-56.0%). La
harina, ver apndice 1), fue muy variable, tres gran- digestibilidad de la protena tambin present un
des grupos de harinas de pescado pueden ser rango ms corto para las dietas (DAPD 94.0-
visualizados: uno con un contenido de protena so- 84.1=9.9%) que para las HP (DAPHP 98.7-
luble de 17 a 22.4% (n=7 HP), con las harinas no- 75.8=22.9%), debido probablemente a que las di-
ruegas de arenque 539/93 y 163/94 presentando ferencias de calidad de las harinas se ven disminui-
los valores ms bajos de protena soluble (17 y das al ser agregadas a un alimento terminado, y
18.3%, respectivamente), lo que refleja que estas esto es ocasionado por los efectos asociativos entre
dos harinas fueron hechas principalmente de torta los ingrediente (Brown et al.).17
de prensa, sin solubles concentrados adicionados. En general, la digestibilidad proteica de la dieta
Un segundo grupo con protena soluble de 24.2 a o HP fue ms alta que la digestibilidad de la mate-
29% (n=7) y un tercer grupo con slo una HP (F813) ria seca, probando que los otros nutrientes eran
con 42%. El CPSP, como se esperaba, tiene ms de menos digestibles que la protena (Akiyama, et al.).18
la mitad de la protena soluble en cido (63.77%), La digestibilidad proteica y de la materia seca
ya que fue previamente hidrolizada. fue generalmente ms baja para los ingredientes
(HP) que para las dietas, salvo para el CPSP y la
Anlisis proximal y lixiviacin de las dietas harina F813, las cuales tuvieron la digestibilidad
ms alta de materia seca o protena, y las dietas
Los contenidos de protena, ceniza y lpidos de las correspondientes tenan las ms altas digestibilida-
dietas se relacionan muy bien con la composicin des. La digestibilidad de la materia seca de estas
de las harinas examinadas. El contenido de prote- dos dietas fue igualada slo por la dieta base
na va de 39.7 a 44.9, con excepcin de la dieta de (84.36%), y las tres tuvieron la ms alta lixiviacin.
referencia que obtuvo un valor de 30.4%, debido a Por lo tanto, aparentemente la digestibilidad fue
la ausencia de harina de pescado experimental en sobreestimada por los nutrientes solubles lixiviados

68 CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005


MARTHA GUADALUPE NIETO LPEZ, LUCA ELIZABETH CRUZ SUREZ, DENIS RICQUE MARIE, MARINA EZQUERRA BRAUER

antes de la digestin. Tabla II. Coeficiente de correlacin (r y r2) entre la


La frescura de la materia prima afecta ligera- digestibilidad proteica de las harinas (DAPHP) en
mente su digestibilidad, esto puede ser atribuido a camarn con mink (n=15), trucha y salmn (n=13)
su alto grado de hidrlisis (lo cual es tambin cierto
para el CPSP), pero tambin a una alta tasa de
lixiviacin, debido a una alta solubilidad de la pro-
tena hidrolizada. Por ello, la digestibilidad no debe
ser el nico criterio de calidad a considerar en el
momento de seleccionar una harina de pescado
para dietas de camarn.

Tabla I. Digestibilidad en camarn de las dietas significativa para el tratamiento A, mientras el co-
e ingredientes de prueba.
eficiente de correlacin con mink fue slo de
r2=0.04, con una p=0.46.
Estos resultados fueron examinados despus de
aplicar dos correcciones: excluyendo las harinas que
presentaban bajo contenido de protena y alto de
ceniza, y calculando la digestibilidad corregida por
lixiviacin, se observ que es posible calcular la
digestibilidad de la materia seca de una HP para
camarn, una vez que se determin la digestibili-
dad de la protena en salmn, siempre y cuando la
harina contenga ms de 65% protena y menos de
15% ceniza, con las siguientes ecuaciones de la re-
gresin:

% DAHP en salmn = 0.33 * % DAMSHP en


camarn + 61
% DAHP en salmn = 0.29 * % DAMSHP lixcor
en camarn + 63.

Determinacin del grado de hidrlisis (DH)


utilizando pH-Stat para camarn

Para todos los parmetros evaluados, la harina Los resultados del DH de las HP y dietas fueron sig-
de pescado 163/94 siempre present los valores nificativamente diferentes (P=0.00001) y presenta-
ms bajos (lo cual tambin puede ser observado en ron un rango de 21.61 a 39.6 y 13.20 a 29.51,
los tratamientos D y E con salmnidos). La gran respectivamente.
diferencia entre esta harina y todas las otras radica Los valores de autohidrlisis de las harinas de
probablemente en el excesivo proceso de secado, pescado fueron de 4.55 a 1.42% y fue muy bajo en
lo cual sugiere que el camarn es muy sensible al el caso del CPSP (0.06%). Estos valores presenta-
deterioro trmico de las protenas de pescado ron una correlacin con el contenido de ceniza de
(Pike).19 las HP (r=0.58), con el contenido de protena de la
HP (-0.51) y con la protena soluble en cido (-0.50),
Correlacin con digestibilidad en otras especies debido probablemente a que las harinas de pesca-
do con poca protena y alta ceniza sean elaboradas
La correlacin entre la digestibilidad proteica in vivo a partir de subproductos de pescado, y poseen
en camarn y la de las diferentes especies de mayor concentracin de enzimas; por otro lado, la
salmnidos (tabla II) fue apenas significativa para protena insoluble puede ser hidrolizada y causar
los tratamientos B, C, D y E (P de 0.02 a 0.11), y no cambio en el pH.

CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005 69


TCNICA DE DIGESTIBILIDAD IN VITRO EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA CAMARN

El DH corr., en las HP y dietas, present un am-


plio rango (13.6 a 35.4 y de 10.2 a 29.4%).
La correlacin de la digestibilidad en camarn
(DAPHP) fue mejor con la Dhcorr que con la no co-
rregida (r = 0.51 vs r = 0.38, respectivamente,
n=16), pero esta correlacin mostr una mejora
cuando las 2 HP con alto contenido de ceniza y
bajo de protena (3664 y A3481) fueron omitidas,
obteniendo una alta significancia (r=0.80,
P=0.0006, n=14)(figura 1a), con la siguiente re-
gresin: Fig. 2. Regresin lineal entre la digestibilidad in vitro con
pepsina diluida (sin correccin por protena suluble) y la di-
% DAPHP en el camarn = % DHcorHP * 1.2965 gestibilidad in vivo (DAPHP).
+ 0.919.

La correlacin entre la digestibilidad de la HP in gura 2). Esto puede ser explicado porque, en am-
vivo y el DHcorHP se determin, posteriormente bos casos, la protena soluble da una
(r=0.88, p = 0.0097), utilizando slo las HP con sobreestimacin de la digestin, sobre todo para
ms de 72% de protena y menos del 12% de ceni- las HP con un alto contenido de protena soluble.
za (figura 1b). La correlacin entre la digestibilidad con pepsina
y la DAPHP no se modific al excluir las HP con
baja protena/alta ceniza de la base de datos.

Determinacin de la digestibilidad in vitro con


enzimas de camarn (Tipo A.O.A.C.)

La digestibilidad proteica in vitro, determinada a seis


horas de hidrlisis para las dietas (DPD-6h) y para
las harinas de pescado (FMPD-6h), muestra un ran-
go que va de 36.8 a 64.16 y de 24.16 a 92.25,
respectivamente; para las HP a 24 horas (FMPD-
Fig. 1. Regresin lineal entre la digestibilidad in vivo (DAPHP) 24h), el rango de digestibilidad va de 42.7 a 94.4.
y DhcorHP; a) sin harinas altas en ceniza/baja protena; b)
Cuando se considera el contenido de protena so-
sin harinas con protena <70%.
luble de las harinas de pescado, la digestibilidad
El DH no fue bueno para predecir la digestibili- corregida (FMPDc-24h) va de 9.5 a 65.71. En to-
dad de las dietas para camarn, ya que no se
correlacion significativamente con los valores de
la digestibilidad in vivo de la dieta.

Determinacin de la digestibilidad con pepsina


(A.O.A.C., Torry modificado)

La Dpep corr da valores muy bajos (de 91.7 a 25.5),


y no se obtiene una buena correlacin con la diges-
tibilidad in vivo; sin embargo, al utilizar los valores
sin corregir (Dpep va de 91.14 a 62.67 para las
dietas y de 98.91 a 42.69 para las harinas), se en-
contr que la correlacin con el estudio in vivo era Fig. 3. Correlacin entre la digestibilidad in vitro de las hari-
nas a seis y 24 horas de hidrlisis y la digestibilidad in vivo,
mucho mejor (r2= 0.67, p= 0.00008, n= 16) (fi- eliminando las harinas con ms de 14.5% de ceniza.

70 CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005


MARTHA GUADALUPE NIETO LPEZ, LUCA ELIZABETH CRUZ SUREZ, DENIS RICQUE MARIE, MARINA EZQUERRA BRAUER

dos los casos se obtuvieron diferencias significati- La digestibilidad in vitro con enzimas de cama-
vas (p< 0.05). rn utilizando el pH-Stat se correlaciona, significati-
Se encontr una correlacin significativa vamente, con DAPHP en camarn para las harinas
(p<0.05) entre las digestibilidades proteicas de las de pescado con contenidos de protena superiores
dietas in vivo e in vitro (r=0.77, r2=0.6, p=0.0005, a 65% y contenido de ceniza ms bajo que 15%.
n=16), as como entre las digestibilidades proteicas La digestibilidad con pepsina diluida (AOAC,
de la harina a seis y 24 horas de hidrlisis (r= Torry modificada), sin corregir los valores por la
0.74, r2=0.54 , p=0.001 n= 16 y r=0.89, r2= solubilidad de la protena en solucin cida, dio
0.8, p=0.000003, n=16, respectivamente), mejo- inesperadamente una mejor correlacin con la
rando para las harinas cuando no se consideran DAPHP en camarn que el mtodo de pH-Stat. Esta
las harinas de pescado de ms de 14.5% de ceniza correlacin altamente significativa no fue afectada
(figura 3) (r=0.8, r2=0.64, p=0.0017, n= 12 y por la presencia de un contenido de ceniza superior
r=0.93, r2=0.86, p=0.00001, n= 12, respecti- a 15%, o un contenido de protena menor de 65%.
vamente). El mtodo de determinacin de la digestibilidad
in vitro con enzimas de camarn (tipo A.O.A.C.) fue
Determinacin de digestibilidad in vitro en otros efectivo para evaluar el resultado del procesamien-
ingredientes to sobre la digestibilidad proteica de un ingrediente
en particular (harina de pescado) o de una formu-
La digestibilidad proteica in vitro para los ingredien- lacin (dietas) para camarn. Este mtodo funcio-
tes (DPI-24h) y las dietas (DPD-24h) con un homo- na mejor cuando las harinas de pescado tienen un
geneizado de L. vannamei mostr un rango que va contenido de ceniza menor a 14.5%
de 19.99 a 85.09 y de 34.51 a 48.98, respectiva- El mtodo de determinacin de la digestibilidad
mente; con el homogeneizado enzimtico de L. in vitro con enzimas de camarn (tipo AOAC) pue-
stylirostris el rango de digestibilidad fue de 9.52 a de ser utilizado para determinar la digestibilidad
80.61 y de 31.31 a 47.91. proteica de ingredientes de origen animal y de die-
Al utilizar el homogeneizado enzimtico de L. tas comerciales.
stylirostris se encontr una correlacin significativa
(p<0.05) entre la digestibilidad proteica de las die- Resumen
tas in vivo e in vitro (r=0.76, r2=0.57, p=0.03,
n=8), pero no entre la digestibilidad proteica de En el presente trabajo se evalu si algunas tcnicas
los ingredientes in vivo e in vitro (r= 0.46, r2=0.21, in vitro o la digestibilidad en otras especies podran
p=0.25 n= 8). Sin embargo, al eliminar la harina ser aplicadas en el control de calidad de harinas de
de trigo, la correlacin se mejora significativamen- pescado, dietas y otros ingredientes utilizados en la
te (r= 0.87, r2=0.75 , p=0.012 n= 7). alimentacin del camarn Litopenaeus vanname.
Las correlaciones entre la digestibilidad proteica Para ello se determinaron los coeficientes de corre-
in vivo e in vitro, para dietas y harinas con el homo- lacin obtenidos en la digestibilidad in vivo en ca-
geneizado enzimtico de L. vannamei, no fueron sig- marn y la digestibilidad in vivo en otras especies
nificativas. Esto puede ser debido a que los valores (salmn, trucha o mink), o con cada una de las di-
encontrados para la digestibilidad in vivo no co- ferentes tcnicas in vitro. En conclusin, la digesti-
rresponden a lo encontrado en literatura (Akiyama).18 bilidad proteica obtenida en salmnidos, trucha o
mink no puede ser un buen indicador para la nutri-
Conclusin cin del camarn, debe ser reemplazada por los
mtodos de digestibilidad in vitro: a) con pepsina
La DAPHP en camarn es afectada fuertemente por diluida (AOAC, Torry modificado) para harinas de
la exposicin a la temperatura en los secadores, pescado, pero no para dietas, b) utilizando extrac-
pero no por la frescura de la materia prima, y se tos crudos de hepatopncreas: pH-Stat, para hari-
incrementa significativamente con el contenido de nas con alta protena/ baja ceniza, o determina-
protena soluble. cin de la digestibilidad in vitro, con enzimas de
La DAPHP en camarn tiene una correlacin muy camarn (tipo AOAC, no corregido) para harina
baja con la DAPHP en salmn, menor con trucha y de pescado, dietas u otros ingredientes de origen
ninguna con mink. animal.

CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005 71


TCNICA DE DIGESTIBILIDAD IN VITRO EN INGREDIENTES Y ALIMENTOS PARA CAMARN

Palabras clave: Calidad proteica, Digestibilidad, cial Feed Industry: REVISED* Proceedings of the
Camarn, Harina de pescado. Aquaculture Feed Processing and Nutrition
Workshop American Soybean Association. 80 -
Abstract 98.
6. Cho C.Y., y Slinger, S., 1979. Aparent
In the present study, was evaluated if some in vitro digestibility measurement in feedstuffs for
techniques or the digestibility in other species could rainbow trout. Finfish nutrition and Feedfish Te-
be used for the quality control of fish meal, diets chnology. Vol. II. 239-247LP.
and other ingredients used in the feeding of the 7. Tecator, 1987. Determination of Kjeldahl Nitrogen
Litopenaeus vanname shrimp. For this were deter- Content with Kjeltec System 1026. Aplication note
mined the correlation coefficients obtained between AN 86/87 (1987.02.18). Kjeltec 1026 Manual,
the in vivo digestibility in shrimp and the in vivo di- Tecator AB, Sweden.
gestibility in other species (salmon, trout or mink) or 8. Tecator, 1983. Fat extraction on feeds with the
with each one of the several in vitro techniques. In Soxtec System HT - The influence of sample
conclusion, the protein digestibility obtained for preparation and extraction media. Aplication note
salmonids, trout or mink cannot be used as a indi- AN 67/83 (1983.06.13). Soxtec System HT Ma-
cator for shrimp nutrition, and should be replaced nual, Tecator AB, Sweden.
by in vitro digestibility methods a) by using dilute 9. Aquacop, 1978. Study on nutritional requirements
pepsin (AOAC, Torry modified) for a large range of and growth of Penaeus merguinensis in tanks by
fish meals but not for diets b) by using an hepato- means of purified and artificial diets. Proc. World
pancreas crude extract: shrimp pH-Stat for high pro- Maricult. Soc. Annu. Meet., 9, 225-234.
tein/low ash fish meals, or determination of the in 10. Nieto Lpez, M.G., Cruz-Surez, L.E. y D. Ricque.
vitro digestibility with shrimp enzymes (AOAC, Type, (1997). Implementacin de un mtodo para la
corrected) for fish meals , diets or other animal in- determinacin de xido de cromo y protena en
gredient. micromuestras de alimento y heces de camarn.
Oral paper presented at the International
Keywords: Protein quality, Digestibility, Shrimp, Fish meals. Conference: VI Reunin de Nutricin Animal,
UANL, Fac. de Agronoma, Monterrey, N.L., Mxi-
Referencias co. Octubre 22-24, 5 pages paper in the
proceedings. p. 211-214.
1. A.O.A.C. 1990. Official Methods Analysis. 12th. 11. Maynard L.A., Loosli J.K., Hintz H.F: and Warner.
Ed. Association of Official Analitical Chemist. R.G. (1981). Nutricin Animal. Cuarta edicin.
Elliam Horritz Ed. Washington, D C. Mc Graw Hill. U.S.A. 640 pp.
2. Carrillo O. F., (1994). Producto multienzimtico 12. Clark J., K.R. Murray, and J.R. Stark. (1986).
del hepatopncreas de camarn: reactivo y su- Protease development in dover sole [Solea solea
plemento diettico. Memorias del Segundo (L)]. Aquaculture, 53:253-262.
Simposium Internacional de Nutricin Acucola. 13. Erlanger B.F., N. Kokowsky and W.Cohen (1961).
Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Au- The preparation and properties of two new
tnoma de Nuevo Len, del 7 al 9 de noviembre. chromogenic substrates of trypsin. Archives of
3. Lazo, J. P. (1994) Evaluation of several in vitro Biochemestry and Biophisics 95, 271-278.
enzime assays for estimating in vivo apparent 14. Bradford, M., (1976). A rapid and sensitive method
protein digestibility by the pacific white shrimp for the quantitation of micrigram quantities of
Penaeus vannamei. Thesis Faculty of the Louisiana protein utilizing the principle of protein-dye-binding.
State University and Agricultural and Mechanical Anal. Biochem., 72:248 -254.
Collage pp. 62. 15. Dimes L. and N. Haard (1994). Estimation of
4. Ezquerra M., F. Garca Carreo, R. Civera, and protein digestibility. I. Development of an in vitro
N. Haard. (1997a). pH-stat method to predict method for estimating protein digestibility in
digestibility in white shrimp (Penaeus vannamei). salmonids (Salmo gairdneri). Comp. Biochem.
Aquaculture 157:249-260. Physiol. 108A:349-362.
5. Akiyama, D., W. Dominy and A. L. Lawrence 16. Olley, J. and Pirie R. 1966. The pepsin digestibility
(1991) Penaeid Shrimp Nutrition for the Comer- method at low pepsin strengths. Int. Fich. News,

72 CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005


MARTHA GUADALUPE NIETO LPEZ, LUCA ELIZABETH CRUZ SUREZ, DENIS RICQUE MARIE, MARINA EZQUERRA BRAUER

5:27-29. 19. Akiyama, D., W. Dominy and A.L. Lawrence (1993)


17. Olsen (1969) Pepsin Digestibility Test (Torry Mo- Nutricin de camarones peneidos para la indus-
dificado). Memorias Seminario Internacional so- tria de alimentos comerciales Memorias del Pri-
bre Calidad de Harinas de Pescado en Nutricin mer Simposium Internacional de Nutricin y Tec-
Animal Acucola y Pecuaria. Vol II, Compilado de nologa de Alimentos para Acuacultura. Facultad
tcnicas de anlisis. Facultad de Ciencias Biol- de Ciencias Biolgicas, Universidad Autnoma de
gicas, Universidad Autnoma de Nuevo Len. 16- Nuevo Len.
17 noviembre. 20. Pike I. H. (1994). Marine products for aquaculture
18. Brown P., E. Robinson, A. Clark and A.L. Lawlence. the future. Memorias del Segundo Simposium
(1989) Apparent Digestible Energy Coefficents Internacional de Nutricin Acucola. Facultad de
and Associative Effects in Practical Diets For Rid Ciencias Biolgicas, Universidad Autnoma de
Swamp Crayfish, Journal of The World Nuevo Len del 7 al 9 de noviembre.
Aquaculture Society Vol.20 (3):122 126.

CIENCIA UANL / VOL. VIII, No. 1, ENERO-MARZO 2005 73

You might also like