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MANUAL DE PROCEDIMENTOS
LABORATORIAIS INTEGRA-CLIMASUL
APLICADO AO MONITORAMENTO DE
PARMETROS ASSOCIADOS QUALIDADE
DA GUA EM CORPOS AQUTICOS
Curitiba
2010
NDICE
C aptulo 1 Monitoramento de
qualidade das guas em corpos aquticos
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momentnea do que estava ocorrendo no ambiente durante uma determinada
amostragem.
Em relao qualidade da gua, a questo da consistncia dos dados de
qualidade e quantidade de gua de grande relevncia na gesto dos recursos
hdricos, por estes serem a base principal para a busca pelas ferramentas
necessrias no suporte de tomada de deciso.
Esta confiabilidade dos dados coletados em campo obtida por meio de
anlises fsico-qumicas realizadas com procedimentos analticos adequados e
executados com rigor, alm da utilizao de sensores calibrados, de modo a
produzir resultados que representem com preciso e exatido as concentraes
existentes na amostra.
A validao dos dados evita que erros sejam propagados e venham a
produzir outros, como no caso da modelagem matemtica de cenrios futuros,
calibrados com valores de concentraes que possuem distores devido a
determinao analtica inadequada ou execuo do procedimento.
Por fim, importante notar que esta pequena introduo um comunicado
de grande importncia deste manual, ao analista que venha a desempenhar o
papel fundamental de comunicar aos demais envolvidos do projeto de pesquisa
que os dados obtidos em campo e em laboratrio, so de alta qualidade e
veracidade frente ao ambiente aqutico estudado.
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POTENCIAL HIDROGENINICO (pH): o pH de uma soluo o logaritmo
decimal negativo da concentrao de ons hidrnio (H3O+, em mol.L-1) e avalia o
carter cido ou bsico da soluo. O pH normalmente determinado por
eletrometria, mas pode ser estimado por titulao ou por papel indicador. A
medio do pH por eletrometria baseia-se na determinao da atividade dos ons
hidrnio pela medio potenciomtrica utilizando um eletrodo de vidro associado
a um eletrodo de referncia.
7
perodo de incubao e a degradao que ocorre neste tempo equivale a cerca
de 70% da concentrao de matria orgnica presente.
Os valores obtidos no teste de DBO com os obtidos nos testes de DQO
podem ser relacionados. Esta relao DQO/DBO indica a biodegrabilidade da
amostra. Quanto mais elevada for esta relao, menor a frao biodegradvel, e
quando menor a relao, maior a atividade de biodegradao da amostra. O valor
da DBO expresso em mg O2.L-1.
8
De acordo com o tratamento trmico efetuado na amostra, pode-se, ainda,
fragmentar os slidos em termos de fixos e volteis, sendo que o primeiro
aplicado ao resduo total, em suspenso ou dissolvido, aps aquecimento e
secagem por um perodo especfico e a uma temperatura especfica. A massa
perdida por ignio chamada de slidos volteis; a determinao dessas
pores no permite distinguir com preciso a matria orgnica e inorgnica, uma
vez que a perda por ignio no envolve apenas a matria orgnica, podendo
ocorrer perdas (pequenas, considerando a temperatura utilizada) na
decomposio ou volatilizao de sais minerais, por exemplo.
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O estado de oxidao dos compostos de nitrognio em corpos aquticos
pode indicar a idade e o grau de poluio. Isto significa dizer, por exemplo, que as
formas reduzidas apontam para um foco de poluio prximo, enquanto a
prevalncia de NO2- (baixa concentrao) e NO3-, ao contrrio, indica que a
influncia de atividades antropognicas, como os lanamentos de esgotos, se
encontram distante, considerando que os estados reduzidos ou oxidados so
funo, principalmente, da concentrao de oxignio dissolvido na coluna dgua.
10
ambiente, resultado este que pode ser aplicado como indicador de condies
como, por exemplo, o grau de trofia.
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A coleta das amostras deve ser realizada de tal forma que seja garantida e
preservada a total integridade de suas caractersticas fsico-qumicas, inicialmente
presentes no ambiente possibilitando obter um retrato do ponto de amostragem.
Para tal, os procedimentos de coleta e armazenamento para posterior anlise em
laboratrio so especficos para cada parmetro. Estes devem ser aplicados
como metodologia modelo para as linhas de pesquisa relacionadas ao trabalho de
campo, no estudo de ambientes aquticos.
A Tabela 1 apresenta um resumo do procedimento para coleta
considerando: estocagem, perodo para realizao do ensaio, procedimentos para
conservao (quando necessrio), volume e frao da amostra utilizada na
determinao dos parmetros associados ao monitoramento de qualidade da
gua de corpos aquticos.
Os procedimentos para preparo, limpeza e descontaminao dos frascos
para amostragem constam no Captulo 4 - Procedimentos para limpeza e
descontaminao de frascos, vidrarias e materiais de uso geral utilizados
nos ensaios laboratoriais.
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Tabela 1 Procedimentos para coleta e armazenagem das amostras para anlise em laboratrio.
Calculado
segundo as
DBO5* PEAD, PP ou garrafa mbar 24h TOTAL
diluies
necessrias*.
10 (digesto
1 semana (4C), acidificar com 1ml fechada)# e 50
DQO PEAD, PP ou garrafa mbar TOTAL
H2SO4 / L amostra (digesto
aberta)
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COLETA PERODO MXIMO PARA FRAO DA VOLUME
PARMETRO
(FRASCO) ANLISE / CONSERVAO AMOSTRA (ml)
NOrgT*** / NINORG**** - - - -
PTP***** - - - -
SDT, SST### PEAD, PP ou garrafa mbar 20 dias (4C), s/ preservao TOTAL E DISSOLVIDA 300#
IF & UV-Vis PEAD, PP ou garrafa mbar 24h para filtrao (4C) Dissolvida 25
Metais trao (Cd, Cr, Cu, Ni, 48h para filtrao (4C), acidificar
PEAD, PP DISSOLVIDA 100##
Zn e Pb) com 2ml HNO3 / L amostra
Metais trao (Cd, Cr, Cu, Ni, 48h para filtrao (4C),
PEAD, PP PARTICULADA 300##
Zn e Pb) s/preservao
Coliformes totais e fecais#### Frascos de vidro (100ml) 24h, s/ preservao TOTAL 100
*Verificar o volume de amostra necessria.
**Amostra filtrada por membrana de acetato de celulose 0,45m.
*** NOrgT quantificado da seguinte forma: NORG = NT - NINORG.
****NINORG quantificado da seguinte forma: NINORG = (N-NO2 + N-NO3- + N-NH3).
*****PTP quantificado da seguinte forma: PTP = PT - PTD.
#
Volume para anlise do parmetro em triplicata.
##
Volume para anlise do parmetro em duplicata.
###
Considera a anlise de slidos fixos e volteis de cada frao (suspensos e dissolvidos).
####
Manter 1/5 do frasco livre de amostra.
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6. Evite reas com muita turbulncia, pois, pode haver muita perda de
constituintes volteis e potencial presena de vapores txicos mais densos
que o ar;
7. Dependendo do tipo de anlise a ser realizada, encha completamente o
recipiente de coleta (p/ a maioria das anlises de compostos orgnicos) ou
deixe espao para aerao, mistura e etc. (anlises microbiolgicas e
compostos inorgnicos);
8. Evite coletar gua da superfcie a menos que leos e graxas sejam
desejveis ou no interfiram na anlise;
9. Exceto para a anlise de compostos orgnicos volteis, deixe um espao
livre de aproximadamente 1% em todas as amostras para permitir expanso
trmica durante o transporte;
10. Identifique todas as amostras especificando inclusive caractersticas fsicas e
qumicas da gua e tambm caractersticas climticas que possam ser
correlacionas com as caractersticas da amostra (utilize caneta com tinta
prova dgua);
11. Ao acidificar amostras tenha certeza de que a diluio proporcionada pela
acidificao desprezvel ou grande o suficiente para que um fator de
correo possa ser incorporado ao clculo das concentraes (usar cido
ultra puro para evitar contaminao);
Alguns fatores importantes que interferem nos resultados das anlises so:
a presena de material em suspenso ou turbidez, o mtodo escolhido para
remover a amostra do recipiente de coleta, e as mudanas fsicas e qumicas
ocorridas devido ao armazenamento ou aerao. Na anlise de elementos trao,
procedimentos detalhados para o processamento das amostras so necessrios,
especialmente para metais e compostos orgnicos. Deve-se definir e considerar
cuidadosamente no plano de amostragem as tcnicas especficas de coleta para
tornar as amostras representativas. Para metais, frequentemente, apropriado
coletar uma amostra filtrada e outra normal para diferenciar entre metal total,
dissolvido e metal particulado, presente na matriz. Deve-se estar atento para o
fato de que alguns metais podem ser parcialmente adsorvidos ao filtro.
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Frequentemente, uma leve turbidez pode ser tolerada se a experincia
mostrar que esta no causar nenhuma interferncia em testes gravimtricos ou
volumtricos e que sua influncia em testes colorimtricos pode ser corrigida,
pois, neste teste que se apresentam os maiores efeitos da interferncia da
turbidez em amostras.
Frascos de coleta
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Dicas de segurana
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maiores, porm, deve-se estar atento ao fato de que quantidades maiores
ficam mais sujeitas a ter o seu prazo de validade expirado antes do trmino
da substncia, gerando maior quantidade de resduo e maior custo para
disposio final e tratamento do mesmo;
2. Utilize primeiro os produtos que esto com seus prazos de validade mais
prximos do vencimento (mais velhos), ou se possvel, adquira-os apenas
no momento da anlise na quantidade ideal;
3. Produtos qumicos vencidos e que no foram abertos, muitas vezes podem
retornar para o fornecedor para serem reciclados ou corretamente
dispostos;
4. De preferncia para mtodos de anlise que utilizem menor quantidade de
reagente, e que estes no sejam perigosos;
5. Evite transformar resduos no perigosos em perigosos atravs de mistura
quando descartados no mesmo local;
6. Transfira produtos que esto armazenados muito tempo para locais onde
outras pessoas possam ter acesso e ento utilizar (sempre com a
autorizao do responsvel pelo laboratrio ou produtos).
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1. PROCEDIMENTOS DE DESCONTAMINAO
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1.3. Srie de Slidos
ATENO: nunca mantenha ou utilize material que foi imerso em banhos de HNO 3 10% para
descontaminao nos ensaios da srie de nitrognio, devido contaminao pelo cido na
deteco das formas do elemento.
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ATENO: no caso da srie de fsforo, se possvel, prefervel manter o material separado para
evitar a utilizao de vidrarias, frascos, dentre outros que tenham sido lavados com detergente
Extran, visto que muito utilizado no laboratrio. A determinao de fsforo acaba sendo muito
sensvel a pequenas contaminaes causadas geralmente pela limpeza com detergente. Fato
este, devido s baixas concentraes, quantificadas na maioria dos casos.
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POP 01 OXIGNIO DISSOLVIDO (OD)
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O indicador desta reao uma soluo de amido (0,5% - 2,5%), com
ponto de viragem da titulao do azul para incolor.
Os resultados para a concentrao de OD presente na amostra so
expressos na unidade de mg O2.L-1.
Equipamentos
No necessita.
Vidrarias
Reagentes analticos
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at o ponto de viragem do azul para o incolor. Calcular a concentrao real
(mol.L-1) do tiossulfato segundo a equao 1:
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1.4. CLCULO DA CONCENTRAO DE OD
OD(mg / L) Vg * 2 * fc (2)
em que:
Vg = volume de tiossulfato de sdio gasto na titulao (mL).
fc= fator de correo do tiossulfato de sdio (Volume prtico / Volume terico).
3. REFERNCIA
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POP 02 DEMANDA BIOQUMICA DE OXIGNIO (DBO5)
Equipamentos
Garrafo para gua de diluio (compatvel com o volume necessrio no
ensaio)
Incubadora termo-regulvel (201C)
Vidrarias
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- 33,4g de fosfato dibsico de sdio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O
p.a);
- 1,7g de cloreto de amnio (NH4Cl p.a)
Transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com
gua destilada.
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Os reagentes utilizados na etapa de quantificao do OD (inicial e final),
atravs da titulao iodomtrica, seguem os mesmos procedimentos de preparo e
padronizao descritos no POP-01 (procedimento para OD).
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2. Anotar o n e o volume do frasco ou porcentagem da amostra adicionada
em uma ficha de controle;
3. Adicionar o volume da amostra ao frasco de DBO preparado evitando a
formao de bolhas e turbulncias;
4. Em um frasco em separado, incubar a semente, adicionando 2ml da
semente preparada, completando o volume com gua de diluio;
5. Completar o volume do frasco com gua de diluio evitando a formao
de bolhas e turbulncias;
6. Medir o ODinicial por meio do mtodo modificado pela azida sdica (ver
POP-01);
7. Levar as amostras de DBO5 para a incubao (201C);
8. Aps 5 dias determinar a concentrao de ODfinal da amostra por meio do
mtodo modificado pela azida sdica (ver POP-01);
Preparo da semente
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ODI = concentrao de OD inicial (mg.L-1)
ODF = concentrao de OD final (mg.L-1)
BI = concentrao de OD no controle da semente inicial (mg.L-1)
BF = concentrao de OD no controle da semente final (mg.L-1)
f = razo da semente diluda na amostra em relao semente de controle
P = frao volumtrica da amostra utilizada (ml)
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1.4.1. EQUIPAMENTOS, VIDRARIAS E REAGENTES
Equipamentos
Garrafas de DBO Oxitop
Bandeja de agitao magntica
Agitador magntico
Incubadora termo-regulvel (201C)
Vidrarias
Pipetas volumtricas
Frascos volumtricos padro
Reagentes analticos
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para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com gua
destilada.
0 2000 mg O2.L-1
3. REFERNCIA
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POP 03 DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO (DQO)
Equipamentos
Chapa de aquecimento contendo condensadores Friedrichs
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Vidrarias
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Reagentes analticos
Padronizao - SFA:
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1. Adicionar 10 ml de dicromato de potssio 0,04167 mol.L-1 em um
erlenmeyer;
2. Completar o volume do erlenmeyer para 100ml, com gua destilada;
3. Adicionar, com um dispenser, 30ml de cido sulfrico;
4. Aguardar esfriar;
5. Adicionar de 3 a 6 gotas de indicador ferrona;
6. Titular com a soluo de SFA 0,25 mol.L-1 at o ponto de viragem do
indicador (verde para marrom);
7. Calcular a Molaridade da soluo de SFA:
v1( K 2 Cr2 O7 )
M ( SFA) * 0,2500
v 2( SFA)
em que:
M (SFA) = molaridade da soluo de sulfato ferroso amoniacal (mol.L-1).
v1 (K2Cr2O7) = volume da soluo de dicromato de potssio (mL).
v2 (SFA) = volume da soluo de tiossulfato gasto na titulao (mL).
Soluo de Sulfato Ferroso Amoniacal (SFA) 0,025 mol.L -1: diluir 100ml
da soluo de SFA 0,25 mol.L-1 em um balo volumtrico de 1000ml e
completar o volume com gua destilada. Padronizar da mesma forma
descrita para o SFA 0,25 mol.L-1, com uma alterao: utilizar a soluo de
dicromato de potssio 0,004167 mol.L-1 no mtodo descrito anteriormente.
DQO(mgO2 / L)
Vb Va ) * 0.1 * fc * 8000 (5)
V
em que :
Vb: volume gasto na titulao do branco (mL)
Va: volume gasto na titulao da amostra (mL)
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V: volume da amostra (ml): 20 para DQO > 50 mg.L-1 e 50 para DQO < 50 mg.L-1.
fc: fator de correo do SFA
Equipamentos
Aparelho digestor - refluxo fechado
Espectrofotmetro UV-Vis
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
Reagentes analticos
0,06
Eq.Reta(1): Conc=(Abs-0,00173)/3,03109E-4
Absorvncia
R = 0,99844 / n = 5
0,04
0,02
Eq.Reta(2): Conc=(Abs+2,11083E-4)/2,8534E-4
R = 0,99953 / n = 4
0,00
0 50 100 150 200 250
-1
DQO (mg O2.L )
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8. Realizar a digesto em aparelho digestor por um perodo de 2h e
temperatura de 150C;
9. Aps completar a digesto, transferir os frascos para um suporte
especfico e aguardar o resfriamento;
10. Realizar leitura no espectrofotmetro, ( = 600nm), sem especificao
de tempo mximo para leitura aps a digesto;
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1.2.4. LIMITE DE DETECO
2. REFERNCIA
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POP 04 CARBONO ORGNICO DISSOLVIDO (COD)
Equipamentos
Analisador de carbono orgnico (marca Shimadzu, modelo TOC V-CPH).
Membrana de acetato de celulose 0,45m de porosidade
Bomba de vcuo
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Frasco plstico (PEAD, PP) para amostra (50ml).
Vidrarias
Reagentes analticos
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para um balo volumtrico de 100ml e dissolver em gua deionizada. Aferir para
100ml. A concentrao terica desta soluo de 1000 mg C.L-1.
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
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3.3. CLCULO DA CONCENTRAO
4. REFERNCIA
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POP 05 SRIE DE SLIDOS
Equipamentos e materiais
Bomba de Vcuo
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Dessecador
Estufa (105 5C)
Mufla (550 5C)
Pina simples metlica ou de madeira e esptula
Porta Filtro
Membrana de filtrao de fibra de vidro
Vidrarias
Reagentes analticos
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1.2. SLIDOS TOTAIS (ST)
ST (mg / L)
P1 P0 *1.000.000 (6)
Vamostra(mL)
(c) Determinao de Slidos Totais Fixos (STF)
1. Aps anotar o valor do peso P1, transferir a cpsula para mufla a 550 5C
por 1 hora e seguir os passos abaixo na sequncia;
2. Esfriar na estufa a 105 5C por 30min seguido de dessecador por 45min;
3. Pesar a cpsula e anotar o resultado em g (P2);
4. Expressar o resultado:
STF (mg / L)
P2 P0 *1.000.000 (7)
Vamostra(mL)
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(d) Determinao de Slidos Totais Volteis (STV)
1. Aps anotar o valor do peso P1, transferir o cadinho para mufla a 550
5C por 1h;
2. Deixar a cadinho esfriar na estufa a 105 5C por 30min seguido de
dessecado por 45min;
3. Pesar a cadinho e anotar o resultado em g (P2);
4. Expressar o resultado:
SSF (mg / L)
P2 P0 *1.000.000 (10)
Vamostra(mL)
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POP 06 UV-Vis
Equipamentos e materiais
Espectrofotmetro UV-Vis
Bomba de vcuo
Membrana de acetato de celulose 0,45m de porosidade
Frasco plstico (PEAD, PP) para amostra (20ml)
Vidrarias
Cubeta de quartzo
Conjunto kitassato para filtrao
Reagentes analticos
No h uso de solues para o preparo e quantificao da amostra.
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NOTA: a leitura no espectrofotmetro pode ser realizada imediatamente aps a
realizao da coleta, em um prazo de 2 dias, considerando a refrigerao da
amostra (< 4C), ou voc pode transferir a frao filtrada para esta anlise para o
frasco especfico e congelar para leitura posterior (6 meses).
0,2
0,0
200 250 300 350
Comprimento de Onda (nm)
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POP 07 SRIE DE NITROGNIO NITRITO (N-NO2-)
Figura 3. Esquema explicativo das etapas de reao de Griess (1879), utilizada como
metodologia analtica na quantificao de N-Nitrito em amostras de gua e de efluentes
lquidos.
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Espectrofotmetro UV-Vis
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Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
Reagentes analticos
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2. PROCEDIMENTO ANALTICO
Absorvncia
0,20 0,20
0,15 0,15
0,10 0,10
Eq.Reta: Conc=(Abs+0,00514)/0,00305
R = 0,99866 / n = 10
0,05 0,05
(a) (b)
0,00 0,00
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
N-NO2- (g.L ) N-NO2- (g.L )
-1 -1
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2.4. LIMITE DE DECTEO
3. REFERNCIA
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POP 08 SRIE DE NITROGNIO NITRATO (N-NO3-)
O
(+)
Cd-Cu
N N
Cd0Cd2+
(-) O O (-) (-) O O (-)
Figura 5. Esquema explicativo das etapas da reduo de N-Nitrato para N-Nitrito atravs
da coluna de Cd-Cu e reao de Griess (1879), utilizada como metodologia analtica na
quantificao de N-Nitrato em amostras de gua e de efluentes lquidos.
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Espectrofotmetro UV-Vis
Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
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Balo volumtrico de 250ml
Pipetas volumtricas ou graduadas
Cubeta de vidro
Conjunto kitassato para filtrao
Tubos de plstico para centrfuga, tipo Falcon (15ml)
Reagentes analticos
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2. PROCEDIMENTO ANALTICO
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Aps ativao da coluna de Cd-Cu, seguir as etapas para a calibrao do
mtodo, descrito na seqncia (considerando solues padres preparadas para
volume final de 50ml):
6. Passar o primeiro padro pela coluna. Descartar, aproximadamente, os
primeiros 40ml da soluo;
7. Coletar, em um tubo de centrfuga aferido (15ml), os prximos 5ml e
transferir para um frasco secundrio;
8. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-
dentro de no mximo 10min;
9. Leitura em espectrofotmetro ( = 543nm) entre 10min e tempo mximo
de 2h;
10. Realizar o mesmo procedimento para as prximas solues padres
preparadas;
11. Passar pela coluna de Cd-Cu provas em branco, seguindo o modo de
preparo para os padres, porm, utilizando apenas gua destilada;
12. Equao da reta, obtida com a plotagem do grfico: absorvncia (eixo
y) X concentrao (eixo x);
13. Verificar coeficiente de linearidade: R > 0,990;
14. Realizar comparao com a curva de analtica apresentada na Figura
6a;
2,0 2,0
Calibrao 1 (R= 0,9996)
Calibrao 2 (R= 0,9988)
1,6 Calibrao 3 (R= 0,9998)
1,5 Calibrao 4 (R= 0,9998)
Calibrao 5 (R= 0,9998)
Absorvncia
1,2
Absorvncia
1,0
0,8
Eq.Reta: Conc=(Abs-0,02655)/0,00234
R = 0,99959 / n = 10 0,5
0,4
(a) (b)
0,0 0,0
0 200 400 600 800 0 200 400 600 800
N-NO3- (g.L ) N-NO3- (g.L )
-1 -1
ATENO: seguindo este procedimento acima, voc estar realizando uma diluio de 10 vezes
de sua amostra, a qual deve ser utilizada posteriormente para correo do valor encontrado
atravs da curva de calibrao. Considerando que uma diluio de 10 vezes pode estourar a
calibrao do mtodo ou ficar abaixo da deteco do mesmo, verificar nova diluio para
-
quantificao de N-NO3 na amostra, como os exemplos a seguir: 25ml de amostra + 10ml de
soluo diluda de NH4Cl - EDTA para volume final de 50ml (diluio de 2 vezes); 1ml de amostra
+ 10ml de soluo diluda de NH4Cl - EDTA para volume final de 50ml (diluio de 50 vezes).
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8. Dando continuidade ao procedimento analtico, aps diluio da amostra,
passar pela coluna de Cd-Cu;
9. Descartar, aproximadamente, os primeiros 40ml da amostra;
10. Coletar, em um tubo de centrfuga aferido (15ml), os prximos 5ml e
transferir para um frasco secundrio;
11. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-;
12. Leitura em espectrofotmetro ( = 543nm) entre 10min e tempo mximo
de 2h;
13. O mesmo procedimento deve ser realizado para as rplicas da amostra e
para outras amostras;
14. Aps a passagem da amostra, seguir o mesmo procedimento para
realizao de testes em branco, utilizando gua destilada;
3. REFERNCIA
H
(+)
N) Na2[Fe(CN)5NO]2H2O
H + OCl- H2NCl + OH-
H H Meio bsico
Figura 7. Esquema explicativo das etapas de reao de Berthelot (1859), utilizada como
metodologia analtica na quantificao de N-Amoniacal em amostras de gua e de
efluentes lquidos.
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Espectrofotmetro UV-VIS
Micropipeta (100 - 1000l)
69
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Papel parafilm
Vidrarias
Reagentes analticos
70
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Soluo reativa 2 (Fenol + Nitroprussiato de sdio): dissolver 10g de
fenol (p.a) e 0,1g de nitroprussiato de sdio (p.a) em, aproximadamente,
80ml de gua destilada. Dissolver e aferir com gua destilada para 100ml,
em balo volumtrico.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C).
* Estvel por 2 meses aps o preparo.
* ATENO: durante o preparo, utilize luvas e culos de proteo e sempre que for manusear o
fenol (reagente ou soluo para N-NH3), trabalhar SEMPRE em capela com ventilao / exausto;
O fenol altamente cancergeno e todos os procedimentos de segurana devem ser adotados na
hora do uso.
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
Absorvncia
0,8
0,6
0,6
0,4
Eq.Reta: Conc=(Abs-0,02894)/4,74999E-4 0,4
R = 0,99757 / n = 10
0,2
0,2
(a) (b)
0,0 0,0
0 300 600 900 1200 1500 1800 2100 0 500 1000 1500 2000 2500
-1
N-NH3 (g.L ) -1
N-NH3 (g.L )
72
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5. Juntamente as amostras, realizar prova em branco utilizando alquotas
de 2ml de gua destilada;
6. Adicionar nesta ordem: 1ml da soluo reativa 1 seguido de 1ml da
soluo reativa 2, para cada alquota (amostra ou branco);
7. Fechar o frasco com papel Parafilm e misturar por inverso;
8. Aguardar 10min para desenvolvimento e estabilizao da cor;
9. Leitura em espectrofotmetro ( = 630nm). Tempo mximo para leitura
de 24h;
ATENO: o mtodo do fenato para quantificao de N-NH3 acaba por gerar um resduo
composto, principalmente, por fenol, devido existncia deste reagente nas etapas de reao do
mtodo. Assim, todo e qualquer material lquido gerado por este mtodo devem ser armazenados
em frascos prprios para o resduo de fenol / N-NH3 (FRASCOS DE VIDRO PARA DESCARTE).
73
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3. REFERNCIAS
74
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POP 10 SRIE DE NITROGNIO NITROGNIO TOTAL
(NT)
O
K2S2O8 / NaOH (+)
N
NT T = 120C;t = 30min (-) O O (-)
O
(+)
Cd-Cu
N N
Cd0Cd2+
(-) O O (-) (-) O O (-)
Figura 9. Esquema explicativo das etapas da oxidao por persulfato das formas de
nitrognio a N-Nitrato, reduo de N-Nitrato para N-Nitrito atravs da coluna de Cd-Cu e
reao de Griess (1879), utilizada como metodologia analtica na quantificao de N-
Total em amostras de gua e de efluentes lquidos.
Equipamentos
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Autoclave vertical
Espectrofotmetro UV-Vis
75
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Vidrarias
Reagentes analticos
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
76
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1. Homogeneizar bem a amostra presente no frasco de coleta;
2. Transferir com o auxlio de uma pipeta volumtrica, 5ml da amostra
para tubos de ensaio com rosca para uso na autoclave;
3. Adicionar ao volume de amostra, 2,5ml da soluo digestora;
4. Fechar bem os tubos para digesto e misturar por inverso;
5. Manter na autoclave, por um perodo de 25min aps atingir a
temperatura de 120C e presso de 14 kg.cm-2. Neste momento, mudar
a chave seletora de mximo para mdio e controlar a possibilidade de
aumento no manmetro de controle. Neste caso, mudar a chave para
mnimo;
6. Aps o trmino da digesto e resfriamento da autoclave, retirar os tubos
e aguardar que atinjam a temperatura ambiente;
7. Aps esfriar, adicionar 1ml da soluo tampo de borato e misturar por
inverso;
8. Transferir o volume presente no tubo de ensaio para um balo
volumtrico de 50ml;
9. Adicionar 10ml da soluo de NH4Cl-EDTA diluda;
10. Aferir o balo volumtrico com gua destilada;
11. Passar a amostra pela coluna de Cd-Cu (ver etapa de ativao da
coluna de Cd-Cu);
12. Descartar, aproximadamente, os primeiros 40ml;
13. Coletar, em um tubo de centrfuga aferido (15ml), os prximos 5ml e
transferir para um frasco secundrio;
14. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-;
15. Leitura em espectrofotmetro ( = 543nm) entre 10min e tempo mximo
de 2h;
ATENO: seguindo este procedimento acima, descrito para NT, voc estar fazendo uma
diluio de 10 vezes da amostra, ou seja, foram tomados 5ml iniciais da amostra, passado pela
digesto e antes de passar pela coluna de Cd-Cu foi diluda para 50ml. Para este exemplo, o valor
77
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obtido para a absorbncia deve ser corrigido com um fator de diluio de 10 vezes, de modo a se
obter o valor da concentrao real.
3. REFERNCIA
78
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POP 11 SRIE DE NITROGNIO NITROGNIO
ORGNICO TOTAL (NOrgT)
em que:
79
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POP 12 SRIE DE FSFORO ORTOFOSFATO (PO43-)
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Espectrofotmetro UV-Vis
Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
Reagentes analticos
80
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de gua destilada. Aferir com gua destilada para 100ml, em balo
volumtrico.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C).
* Estvel por 1 ano (mnimo).
-1
* Concentrao final de 50 mg P.L
81
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- A cada adio de um reagente, promover a homogeneizao da soluo.
- Ao final, na adio do cido ascrbico, uma colorao amarelada bem clara
aparecer, sendo um indicativo que os reagentes do Mix foram bem preparados,
sem influncia de contaminao por fsforo no material utilizado.
- No caso da soluo Mix ficar com colorao esverdeada e azulada, indica
contaminao por fsforo, embora possa ser utilizada devido correo pelo
branco a ser realizado com gua destilada;
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
0,6 0,9
Calibrao 1 (R= 0,9997)
Calibrao 2 (R= 0,9968)
0,5 Calibrao 3 (R= 0,9986)
Calibrao 4 (R= 0,9976)
0,6 Calibrao 5 (R= 0,9983)
0,4
Absorvncia
0,3
0,1
(a) (b)
0,0 0,0
0 200 400 600 800 1000 0 250 500 750 1000 1250 1500
3-
3-
P-PO4 g.L ) -1 P-PO4 g.L-1)
Figura 10. (a) Exemplo de curva analtica de KH2PO4 aplicada calibrao do mtodo
colorimtrico para determinao de Ortofosfato (PO43-) em amostras de gua e efluentes
lquidos e (b) Exemplo comparativo de seis calibraes preparadas em diferentes
perodos (jul/09 fev/10) para anlise de PO43-.
83
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6. Adicionar 2ml da soluo reativa combinada (Mix) em cada alquota;
7. Fechar o frasco e misturar por inverso;
8. Aguardar 10min para o desenvolvimento e estabilidade da cor;
9. Leitura em espectrofotmetro ( = 880nm). Tempo mximo para leitura
de 45min;
3. REFERNCIAS
MURPHY, J.; RILEY, J.P. A Modified Single Solution Method for the Determination of
Phosphate in Natural Water. Anal.Chim.Acta, Vol. 27, pp. 31-36, 1962
84
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POP 13 SRIE DE FSFORO FSFORO TOTAL (PT)
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo e membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Autoclave vertical
Espectrofotmetro UV-Vis
Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
Reagentes analticos
Soluo padro para fosfato (50 mg.L-1): ver POP-12, item 1 (PO43-).
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
0,12
Absorvncia
0,6
Absorvncia
Comparativo com o
3-
padro P2 de PO4
0,06 0,3
Eq.Reta: Conc=(Abs+0,00166)/5,61129E-4
R = 0,99982 / n = 10 Padro P5 (PT) diludo 5 vezes
aps digesto /
tamponamento.
0,00 0,0
0 50 100 150 200 250 300 0 250 500 750 1000 1250 1500
3- 3-
P-PO4 g.L-1) P-PO4 g.L-1)
Figura 11. (a) Exemplo de curva analtica de KH2PO4 aplicada calibrao do mtodo de
digesto / colorimtrico para determinao de Fosfato Total (PT) em amostras de gua e
87
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de efluentes lquidos e (b) Exemplo comparativo entre a calibrao para PO43-, com
ausncia da etapa de digesto, e calibrao para PT com presena da etapa de digesto /
neutralizao.
ATENO: verifique a seguinte etapa da metodologia: ao adicionar 5ml do padro para digesto
e aps a neutralizao, ter aferido para 25ml, voc realizou uma diluio de 5 vezes, ou seja, o
padro deve estar, teoricamente, 5 vezes mais diludo que o valor encontrado para a curva de
calibrao de Ortofosfato (POP n. 12). Um exemplo pode ser observado na Figura 11b.
89
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A quantificao da concentrao de fosfato total, presente na frao
particulada (PTP) pode ser obtida a partir da subtrao da concentrao de fosfato
total dissolvido (PTD) pela concentrao encontrada para fosfato total (PT):
6. REFERNCIAS
MURPHY, J.; RILEY, J.P. A Modified Single Solution Method for the Determination of
Phosphate in Natural Water. Anal.Chim.Acta, Vol. 27, pp. 31-36, 1962
90
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POP 14 CLOROFILA-a (CLa)
Equipamentos e materiais
Bomba de vcuo
Membranas de fibra de vidro ( 0,45m)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Tubos para centrfuga graduados com tampa
Gral e pistilo de porcelana
Micropipeta (100 1000l)
Centrfuga
Espectrofotmetro UV-Vis
Vidrarias
Reagentes analticos
91
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Soluo de acetona 9:1: misture 90 partes de soluo de acetona
(CH3(CO)CH3) com 10 partes de soluo saturada de carbonato de
magnsio.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar a temperatura ambiente.
* Estvel por 6 meses (mnimo).
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
92
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6. Aps este perodo proceder leitura do sobrenadante em
espectrofotmetro UV-Vis, de acordo com a seguinte ordem:
3. REFERNCIA
93
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POP 15 METAIS PESADOS (Cd, Cr, Cu, Ni, Zn, Pb)
Equipamentos e materiais
Espectrmetro de absoro atmica de chama (EAA-Chama)
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Micropipeta (100 - 1000l)
Frasco plstico (PEAD, PP) para solues padres (50ml) e tubos de
centrfuga Falcon (15ml) para as amostras
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Chapa de aquecimento
gua ultra pura (mili-Q)
Vidrarias
Reagentes analticos
H2O2 30%
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
95
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Tabela 2 Procedimento para o preparo das solues padres dos metais Cd, Cu, Cr, Ni, Zn e Pb, utilizados na etapa de calibrao.
Padro
P.I. P.I. Pd-5*** Pd-5 Pd-1 Pd-1 Pd-2 Pd-2 Pd-3 Pd-3 Pd-4 Pd-4
METAL estoque* -1 -1 -1 -1 -1 -1
-1 (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo)**** (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo)
(mg.L )
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cd 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cu 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
3ml padro (2%)
(2%) (2%) (2%)
estoque +
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
97ml HNO3 1,2ml PI +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cr 1000 30 (2%)** 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
100ml (2%)
(2%) (2%) (2%)
(balo
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
volumtrico) 1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Ni 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Zn 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
6ml padro
estoque +
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
97ml HNO3 1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Pb 1000 60 (2%) 10 6ml P.I 2 4,8ml HNO3 4 6 8
HNO3 HNO3 HNO3
100ml (2%)
(2%) (2%) (2%)
(balo
volumtrico)
#
Volume final (ml) 36 36 36 36 36
96
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*Padro certificado, de concentrao conhecida.
**HNO3 (2%): diluir, em balo volumtrico, 20ml de HNO3 65% em 980ml de gua ultra pura.
***Pd: identificao dos padres na tabela Pd-5 (padro 5), Pd-1 (padro 1)...
****Os padres Pd-1, Pd-2, Pd-3 e Pd-4 so preparados a partir de diluies de volumes conhecidos
dos padres intermedirios (PI) em HNO3 (2%) para um volume final de 6ml .
#
Representa a soma do volume de soluo adicionado para cada metal (6+6+6+6+6+6)ml.
97
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3. Filtrar em membrana de acetato de celulose 0,45m. Para cada membrana
utilizada, anotar o valor do seu respectivo peso (P1) e ponto ou rplica
correspondente;
4. Manter as membranas em ambiente livre de contaminao por metais
(temperatura ambiente) para secagem at peso constante (24h);
5. Realizar uma nova verificao do peso e anotar o valor observado (P2);
6. Em erlenmeyers de 50ml, colocar as membranas, seguido de 10ml de HNO 3
1:1;
7. Juntamente, realizar brancos analticos apenas com 5ml de gua ultra pura e
10ml de HNO3 1:1 e seguir todos os passos seguintes das amostras;
8. Manter em chapa de aquecimento por um perodo de 45min, aps atingir a
temperatura de 150C;
9. Retirar da chapa e aguardar o resfriamento dos frascos, mantendo-os na
capela de exausto;
10. Adicionar 5ml de HNO3 concentrado (65% p.a) e retornar os frascos para a
chapa de aquecimento, na temperatura de 150C, por 2h ou reduo do
volume prximo de 3ml;
11. Retirar da chapa e aguardar que os frascos atinjam a temperatura ambiente;
12. Adicionar 2ml de H2O2 (30%) e, novamente, manter sob aquecimento (150C);
13. Aguardar a completa efervescncia da amostra. Se necessrio adicionar
alquotas de 5ml de gua ultra pura, evitando a evaporao total da mesma;
14. Retirar da chapa e aguardar que os frascos atinjam a temperatura ambiente.
Na sequncia, adicionar 10ml de HCl 1:1 e retornar para a chapa, mantendo a
uma temperatura de 180C por um perodo de 1h;
15. Verificar um volume aproximado, abaixo de 5ml e retirar os mesmos da
chapa. Manter na capela de exausto at que atinjam a temperatura
ambiente;
16. Transferir a amostra para o tubo de centrfuga, aferindo com gua ultra pura
no volume de 10ml;
17. Centrifugar as amostras para remoo de particulados residuais do
sobrenadante;
18. Acondicionar em refrigerador (<4C) at o momento da leitura;
19. Realizar a quantificao em espectrmetro de absoro atmica de chama;
98
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20. Caso o tempo para leitura seja superior a 30 dias, mantenha as amostras em
congelador;
99
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4. REFERNCIAS
Method 3050B. Acid Digestion of Sediments, Sludges and Soils. EPA, revision 2, 1996
100
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POP 16 ALCALINIDADE TOTAL
Equipamentos
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Agitador magntico
Vidrarias
Erlenmeyer
Bureta
Pipetas volumtricas e graduadas
Reagentes analticos
101
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Soluo de carbonato de sdio 0,1N: pesar 5,3g de carbonato de sdio,
Na2CO3 (p.a), previamente seco em estufa a 200C por 1 hora. Dissolver em
gua destilada, transferir para um balo volumtrico e aferir para 1000ml.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar a temperatura ambiente.
* Estvel por 6 meses (mnimo).
102
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Vt
Fc= (16)
Vg
em que:
Vt = volume terico (mL)
Vg = volume gasto na titulao (mL)
em que:
Vg: volume (ml) de H2SO4 0,02N gasto com a amostra
Fc: fator de correo do H2SO4 0,02N
Alcalinidade total:
em que:
Vg: volume (ml) de H2SO4 0,02N gasto com a amostra
Fc: fator de correo do H2SO4 0,02N
Alcalinidade metilorange:
3. REFERNCIA
104
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POP 17 FLUORESCNCIA MOLECULAR (IF)
Equipamentos
Espectrofluormetro
Bomba de vcuo
Membrana de acetato de celulose 0,45m de porosidade
Vidrarias
Reagentes analticos
No h uso de solues para o preparo e quantificao da amostra.
105
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314nm e 370nm e modalidade sincronizada (varredura entre 250 e 700nm
com 18nm);
4. Realizar a varredura de fluorescncia desejada para cada amostra;
5. Utilizar gua mili-Q como prova em branco da anlise;
Amostra 6
30
(a)
20
10
0
350 400 450 500 550 600
Comprimento de onda (nm)
30 8
Amostra 1 Amostra 1
Amostra 2 Amostra 2
Amostra 3 Amostra 3
Amostra 4 6 Amostra 4
-1
-1
Amostra 5
IF_370/mg C.L
IF_Sinc/mg C.L
20
Amostra 6 (c)
(b) 4
10
2
( 18nm)
0 0
400 450 500 550 600 300 350 400 450 500
Comprimento de onda (nm) Comprimento de onda_emisso (nm)
Figura 12.
Exemplos grficos de espectros de varredura de intensidade de fluorescncia molecular: (a)
IF (excitao 314nm) (b) IF (excitao 370nm) e (c) IF (sincronizado).
106
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POP 18 COLIFORMES TOTAIS E FECAIS
Equipamentos
Seladora para cartelas colilert
Autoclave vertical
Cmara escura equipada de radiao UV
Incubadora termo-regulvel (352C)
Vidrarias
Reagentes
1. Aps coleta da amostra, transferir 100ml desta para um balo de fundo chato
estril ou o volume correspondente para a diluio pretendida, de modo que o
volume final seja de 100ml;
2. Em cada amostra, adicionar uma cartela do reagente colilert e agitar at
dissoluo completa;
3. Transferir os 100ml para uma cartela colilert estril, colocar sobre o suporte
da seladora e selar a mesma;
4. Manter a cartela em incubadora termo-regulvel a 352C;
5. Aps 24h na incubadora, anotar os valores positivos nos quadrados grandes
(49 espaos) e pequenos (48 espaos). Os valores positivos so aqueles nos
quais uma colorao amarela forte se desenvolveu;
6. O mesmo procedimento deve ser realizado observando-se as cartelas em
uma cmara escura equipada de luz UV, de modo que, para este caso, os
quadrados grandes e pequenos a serem anotados so aqueles que
desenvolverem uma luminescncia azul caracterstica;
7. Os valores anotados pelo item 5 so referentes aos coliformes totais e os
resultados do item 6, os coliformes fecais;
8. Repetir o procedimento dos itens 6 e 7 aps 48h para confirmao dos
resultados;
108
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Por exemplo, em uma anlise que utilizou 100ml da amostra foram
observados 10 quadrados positivos grandes com 15 quadrados positivos pequenos
para coliformes totais e 5 quadrados positivos grandes com 3 quadrados positivos
pequenos para coliformes fecais. Pela tabela, os valores observados so
respectivamente 28 NMP/100ml e 8,2 NMP/100ml. Caso um volume de apenas
0,1ml de amostra tenha sido utilizado e as mesmas observaes obtidas, estes
valores acima devem ser multiplicados pelo fator de diluio de 1000x,
correspondendo a 28 000 NMP/100ml para coliformes totais e 8 200 NMP/100ml
para coliformes fecais.
3. REFERNCIA
109
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