Bioprocesos IV

Profesor: Dr. Roberto Vega Paulino

El Bioreactor continuo
 El Cultivo Continuo en Quimiostato

F S0 F X S P
Balance de clulas
d ( XV )
FX XV
dt
dX F
DX X D
V X dt V
S
P Estado estacionario D

Balance de sustrato limitante

Balance de Producto
d ( SV )
d ( PV ) FS0 FS qs XV
FP q p XV dt
dt
dS
dP D ( S 0 S ) qs X
DP q p X dt
dt
Estado estacionario X Yxs ( S0 S )
qp X
Estado estacionario P
D
 m S
Cintica de Monod
Ks S

DK s
Estado estacionario S
m D

DK s
Por lo tanto, la biomasa en el estado estacionario resulta: X Yxs ( S0 )
m D
En el estado estacionario:
Dcrit es la velocidad especfica
S X=0 S=S0 m S0
Dc de crecimiento mxima real
K s S0 (prctico). M es una asntota

Dcrit M

Conceptualmente Dcrit es diferente a M, aunque

numricamente son muy similares: S0>>Ks
Velocidad de dilucin crtica
D crit X=0
S0 Dcrit es la velocidad especfica
Dcrit M de crecimiento mxima real
K s S0 (prctico). M es una asntota

Dcrit M

Conceptualmente Dcrit es diferente a M, aunque

numricamente son muy similares: S0>>Ks
Isotermas del cultivo continuo terico del cultivo
continuo

=So

X=0
D=m
Dcrit
Productividad Volumtrica de Biomasa Qx
DK s
Qx X DX DYx / s ( S0 )
M D
dQx
0
dD

KS
DM M (1 )
S0 K S

X M Yx / s ( S0 K s K s ( S0 K s ))

QM DM X M
 Mtodo de Lavado

Consiste en aumentar sobre Dcrit el valor de D en un cultivo en estado estacionario de

forma que se produzca el lavado.
Dado que D>Dcrit las clulas crecern a su mxima velocidad M.
lnX

Es aprox. a M, es la
velocidad mxima que
t crece el m.o y se
asume a M.
dX
DX M X
dt
1 dX d ln X
M D . D
X dt dt
 Operacin del Quimiostato

1. Puesta en marcha
2. Tiempo aproximado para alcanzar un estado estacionario

dC
DC
dt
0.05Co t
dC

Co
C
D dt
0

1
t 3.0 3.0
D
 Productividades volumtricas en el estado estacionario
qp X QP PD q p X
P
D
q pQx
QP
D

Asociado al P X
crecimiento So, Qx max
QP QX
X
No asociado al P
So
crecimiento
D
D
QP X

X
Crecimiento
P X
D
mixto
QP Qx X
 CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO (CLA) (FED-Batch)

d (V R ) Ec. (1)
F F
F dt

SF
d ( XV ) XV Ec. (2)
dt
d (SV ) FS XV Ec. (3)
dt F Y
S x/s
d ( PV )
qP XV Ec. (4)
X V dt

P M S Ec. (5)
KS S

SF = Cte

XV X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s SF t Yx/ s SV Ec. (3)

Si Fijamos F constate: cul es el comportamiento del reactor?

Si fijamos un comportamiento en el reactor () cul es el perfil de la
alimentacin?
 CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO (CLA) (FED-Batch)

F dV F Ec. 1
SF dt
dX ( F ) X Ec. 2
S
dt V
X V dS F
( S F S ) qs X Ec. 3
P dt V
dP F
qP X P Ec. 4
dt V
SR
M Ec. 5
SF = Cte K S SR

Si Fijamos F constate se ve el comportamiento del reactor

Si fijamos un comportamiento en el reactor () que perfil tiene la
alimentacin.
Alimentacin Constante (F=cte) CLA-AC
Zona de
Alimentacin Crecimiento
Zona de lineal
Crecimiento
C. Lote
exponencial
m

SV

XV

0 tT Demanda
qs Zona de
Crecimiento Zona de

FSF XV
d (SRV ) exponencial Crecimiento lineal
Oferta
dt Yx/s
Oferta Demanda
cte
Tiempo
De la Ec. (1)
dV F Ec. (1.1)
dt

S F=constante V V0 Ft Ec. (1.2)

 Zona de crecimiento exponencial

S>>Ks Max

t
M t X 0V0e M
De la Ec. (2) y Ec (1.2) XV X 0V0e X Ec. (2.1)
V0 Ft

De la Ec. (3) SV S0V0 FSF t ( X 0V0 XV )

1
Ec. (3.1)
Yx / s
 1 Mt
S0V0 FSF t X 0V0 (e 1)
De la Ec. (3.1) S Y x/ s

V0 Ft

qP X 0V0
De la Ec. (4) PV P0V0 (e t 1) Asumiendo

M

M qp constante

q p M
 S~Ks Zona de crecimiento Limitado

X XV
De la Ec. (3.1) V (S ) S0V0 FS F t 0 0
Yx / s Yx / s

X
S
Yx / s

XV X 0V0 Yx/ s S0V0 Yx/ s FS F t

d ( XV )
Yx/ s FS F XV
dt
FSF Yx/ s

X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s S F t
 KS
S
M

FSF K SYx/ S
S
M (S0V0Yx/ S X 0V0 ) FS FYx/ S FS FYx/ S M t
Ec. (***)
t
PV P0V0 qP ( XV )dt
0

q p
 Para hallar el tT (Tiempo de transicin)

M tT
X 0V0e X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s S F tT Yx/ s SV
Para simplificar: S=0
M tT
X 0V0e X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s S F tT
Si tT=0 se elimina la etapa exponencial y eso se quiere

X V eM tT X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s S F t Yx/ s S (V0 Ftt ) (A)

0 0 T

t 0 S S 0 0

Al reemplazar la Ec. (***) se puede obtener un valor para SF

m S0V0 ( S0Yx / s X 0 )
SF
FYx / s ( K s S0 )
ELIMINAR LA FASE DE CRECIMIENTO EXPONENCIAL
 2) Alimentacin Exponencial

cte Distinto a M, si se quiere cultivar a M trabajar por lotes

S cte S
Ks
M

t
XV X 0V0 e
d (SV ) FS XV XV
De la Ec. (3) F
dt F Yx/ s Yx / s ( S F S )

Reemplazando XV

X 0V0 t
F
( S F S )Yx / s
e t
F F0 e
SF debe ser alto para que F sea menor
De la Ec. (1.1)

dV
F
dt
F0
V V0 (e t 1)

Reemplazando V en la expresin XV

t
X 0V0 e
X
F0 t
V0 (e 1)

 PV t

d ( PV ) d ( PV ) q p X 0V0 e t dt
q p XV P0V0 0
dt
qp
PV P0V0 X 0V0 (e t 1)

 ESTADOS PSEUDOESTACIONARIOS, X=cte

dX
0
dt
d ( XV ) XV V dX
X
dV
XV
dt dt dt

XF XV D
F Ec. (6)
V

Se cumple para cultivo

alimentacin exponencial y
constante
1) Caso de CLA con alimentacin exponencial

Reemplazando en la Ec. (6)

F0 e t Simplificando F0

F0 t D0 Ec. (7)
V0 (e 1) V0

Sustituyendo la expresin para F0 X0

SF S constante
Yx / s
Preparar el medio de cultivo que se
va alimentar con esta concenntracin
de nutriente limitante
Entonces reemplazando en X, la Ec. (7)

t
X 0V0 e
X X X0
F0 t
V0 (e 1)
Limitacin !
Si se quiere cultivar a 30 g/L, la
condicin inicial tendr que ser 30
g/L y puede ser una concentracin
muy alta que no se alcance en el
cultivo por lotes
2) Caso de CLA-AC
2.1) Zona de crecimiento exponencial

De la Ec. (6) o derivando X respecto al

tiempo de la Ec ( 2.1) e igualando a
F F
f (F , t
V V0 Ft
M
cero, se obtiene

Esto es un absurdo, uM es
constante, no es funcin de F y t

Por lo que no hay estado seudoestacionario en

la zona de crecimiento exponencial
 2.2) Zona de crecimiento limitado

X 0V0 S0V0Yx/ S FYx/ s S F t

X
V0 Ft

dX X0
0 S F S0
dt Yx / s

F F X X 0 S 0Yx / s
D f (F , t)
V V0 Ft XV f (t )
Esta es una caracterstica sobresaliente ya que en el estado
seudoestacionario la biomasa est en un estado transiente con su velocidad
especfica de crecimiento bajo control
Si se desea obtener el estado seudo-estacionario desde
el inicio del Lote Alimentado, entonces

t 0 S0 S R 0
F M S0
o
V0 K S S0

M S0V0
F
K S S0
 Resumen Alimentacin constante

tT =0 X=cte, tT =0

m S0V0 ( S0Yx / s X 0 ) X0 M S0V0

SF S F S0 F
FYx / s ( K s S0 ) Yx / s K S S0
Transferencia de Oxgeno en caldos de cultivo
 Relacin de Equilibrio Gas-Lquido

H *
CG CL (Concentracin del O2 en el equilibrio en la fase gaseosa)
RT
 yO 2 PT

H (T )
 Velocidad de consumo de Oxgeno (VCO)

Factores que afectan a VCO:

VCO .X
YO
2

La especie utilizada
La fase de crecimiento
La concentracin de clulas
La naturaleza de la fuente de carbono
La VCO est alrededor de 50 a 100 mmoles de O2/L.h
(1.6 a 3.2 g O2/L.h), demandas sobre 120 mmoles/L.h son valores
altos que resultan difciles de satisfacer en equipos de fermentacin
de diseo estndar y en condiciones de operacin econmicas.
kLa: coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno [1/T]
 Valores Tpicos de VTO y kLa

VTO kLa (h-1)

(m moles/L.h)
Matraz 30-60 200 -400
Fermentado 60 -120 60 500
r laboratorio
Fermentado 70 100 100 - 400
r industrial
 por lotes

dCL
0 y CL CL crtico
dt
 Cultivo Continuo

dCL
0 y CL CL crtico
dt

X Estado
k L a (C CL ) N A
*
L
YO 2 Estacionario
YO 2 k L a *
X (CL CL )
D
YOo2 k L a
X (CL* CL )
mO 2YOo2 D
Garca-Ochoa et al. (2010).
Biochemical Engineering Journal 49: 289-307
10-3 M Cu+2
 Mtodo del Balance de Oxgeno

VL VTO Fg (Cogi Cogo ) VL k L a(Cout

*
CL )

Fermentadores de Laboratorio
Fg (Cogi Cogo )
kL a *
VL (Cout CL )

Fermentadores de gran escala

(Cin* CL ) (Cout
*
CL )
Cin* CL
ln( * )
Cout CL
Ejemplo:
 tiempo (s) [O2] mg/L 1-CL/C* Ln(1-CL/C*)
0 0 1 0
20 2.84 0.645 -0.43850496
40 4.63 0.42125 -0.8645288
60 5.87 0.26625 -1.32331956
80 6.62 0.1725 -1.75735804
100 7.1 0.1125 -2.18480206
120 7.4 0.075 -2.59026717

Determinacin de Kla
0
0 20 40 60 80 100 120 140
-0.5

-1
Ln(1-CL/C*)

-1.5
y = -0.0218x
R = 0.9998
-2

-2.5

-3
kLa=0.0218*3600=78.48 h-1 Tiempo (s)
 Ejemplo
El aire suplementado a un fermentador se cort por un periodo de tiempo breve y luego se
restaur. Un valor para C*L de 7.3 mg/L se ha determinado para las condiciones de
operacin. Use las medidas tabuladas de oxgeno disuelto para estimar la demanda de
oxgeno y el KLa en este sistema.
Tiempo OD
(min) (mg/L)
-1 3.3
Aire off 0 3.3
1 2.4
2 1.3
3 0.3
4 0.1
5 0.0
Aire on 6 0.0
7 0.3
8 1.0
9 1.6
10 2.0
11 2.4
12 2.7
13 2.9
14 3.0
15 3.1
16 3.2
 Tiempo OD
(min) (mg/L)
0 3.3 3.5

1 2.4 3

2 1.3 2.5

C L (mg/L)
3 0.3 2
y = -0.9929x + 3.3
1.5 R = 0.9982

0.5
VCO = NA = 1 mg/L.min
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Tiempo (min)
Tiempo Tiempo OD derivada
(min) (min) (mg/L) derivada +VCO
6 0 0 0.6133 1.6133 3.5

7 1 0.3 0.5547 1.5547 3

8 2 1 0.4961 1.4961 2.5

9 3 1.6 0.4375 1.4375

OD (mg/L)
2
10 4 2 0.3789 1.3789 1.5
y = -0.0293x2 + 0.6133x
11 5 2.4 0.3203 1.3203
1 R = 0.9925
12 6 2.7 0.2617 1.2617
0.5
13 7 2.9 0.2031 1.2031
0
14 8 3 0.1445 1.1445 0 2 4 6 8 10 12
15 9 3.1 0.0859 1.0859 Tiempo (min)
16 10 3.2 0.0273 1.0273
1.7
17 11 3.2 -0.0313 0.9687
1.6

OD (mg/L) 1.5

1.4
kla 8.23045267 min-1 y = -0.1215x + 1.6111
1.3
493.82716 h-1 R = 0.9849
1.2

1.1

1
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
derivada + VCO
 VCO
k L arequerido *
CL CL
 Eficiencia de Transferencia de Oxgeno
Fa N A 22.4 T

V 32 273 P 0.21 60 E
Donde:
Fa/V: Laire/(Liq.*min) (vvm)
E: eficiencia de absorcin de O2 (0.03 0.35)
NA: VCO (g/L.h)
T: temperatura absoluta (K)
P: presin del aire (atm)

Fa N A 22.4 T

NA: VCO (m moles/L.h)

V 1000 0.21 E P 273 60

 Eficiencia de Transferencia de Oxgeno

0.35
E V
0.03

Valores tpicos de vvm

Laboratorio: 1.0 1.5 vvm
Industrial: 0.2 0.7 vvm
 Velocidad Superficial del aire, vs

F vS A

A: rea seccin recta del fermentador

Valores tpicos de Vs: 30 300 cm/min
constante Agitacin y
aireacin
Solo de Variables independientes:

k L a K D Vs N
 Ejercicio de aplicacin
El crecimiento celular es limitado por la velocidad de transferencia de oxigeno y
tambin por la fuente de carbono. Los balances de la fase lquida para X, S y O2
son por lo tanto usados junto con el balance de oxgenos en la fase gaseosa para
determinar la velocidad de suplementacin de oxigeno. Representacin
esquemtica del fermentador aireado continuo.

Gas G, CG
F, So
F, S, X, CL

T=40 C
X S

CL

Aire G, CGo
Balances de Masa
dX
DX X
dt

dS
D ( S o S ) qs X
dt

dCL
D(CLo CL ) qo X k L a (CL* CL )
dt

dCG G VL
(CGo CG ) k L a (CL CL )
*

dt VG VG

m S CL
VG VL
K S S K O CL