Produccin de Enzimas por Fermentacin en estado slido

9.1 INTRODUCCIN

El proceso de fermentacin en estado slido para aplicaciones alimentarias es uno de los

conocimientos ms antiguos disponibles para los seres humanos. Para muchas comunidades es
parte de sus conocimientos tradicionales preparar el alimento fermentado (Hesseltine, 1977). La
forma expandida de palabra japonesa para Koji se relaciona con el crecimiento de moho. Las
fermentaciones tradicionales como Koji, Tofu, miso, salsas, encurtidos, ensilling son la extensin
del conocimiento tradicional de fermentacin explotando las cepas GRAS de hongos y bacterias
para llevar a cabo la fermentacin. Los procesos proporcionan enzimas fngicas extracelulares y
han sido la base para iniciar la produccin de enzimas microbianas por SSF en ambiente industrial.
El proceso koji indudablemente influy en la primera produccin de enzimas microbianas por SSF
a escala industrial. El surgimiento de la industria moderna de enzimas basadas en SSF puede
atribuirse al emprendimiento de Jokichi Takamine y ms tarde a los esfuerzos de Underkofler en la
produccin de enzimas de salvado de moho para la sacarificacin de granos (Bennett, 2001). El
descubrimiento de la penicilina a principios de los treinta y la estreptomicina, el cloranfenicol y la
tetraciclina a principios de los cincuenta tom el brillo del proceso SSF emergente y enfatiz la
fermentacin sumergida. El desarrollo del proceso SSF an estaba en su infancia y se consider
que no era adecuado para muchas de las posibles aplicaciones a gran escala.

Sin embargo, recientemente, con mucho esfuerzo puesto en la adicin de valor de residuos
agroindustriales y publicaciones enfatizando las posibilidades en SSF (Pandey, 1992, 1994, 1999,
2000, 2001, Pandey y Soccol, 2000, Lonsane y Ghildyal, 1992, Babu y Satyanarayana , 1996),
desarrolladas en pases como Japn, India, Estados Unidos y Francia. El xito de la operacin de las
empresas que utilizan el proceso SSF asegur que el proceso recibe la debida atencin y aparte de
las enzimas los productos farmacuticos y otros metabolitos secundarios tambin se fabricaron.

Las principales aplicaciones de la fermentacin en estado slido implican procesos que explotan
sistemas fngicos y, en menor medida, sistemas bacterianos, sin embargo recientemente tambin
se informaron algunos actinomicetos especialmente para la produccin de compuestos bioactivos
usando SSF (Sirta et al., 1998; Saudagar et al., 2006). Los sistemas fngicos son una opcin obvia,
ya que estos sistemas requieren slidas matrices de soporte para su crecimiento bajo
circunstancias naturales. En los hbitats naturales los hongos crecen en la madera, la corteza, las
hojas de la planta, la materia orgnica en descomposicin y otras superficies hmedas. Dada esta
tendencia al crecimiento adherido bajo ambientes naturales, los hongos han sido explotados para
su mxima extensin. Las enzimas producidas por SSF incluyen celulasas, hemicelulasas, pectinasa,
amilasas, alfa- y beta-galactosidasas, cafena, tanasa, proteasas, etc.
 Las principales matrices de soporte son el salvado (trigo, arroz, barly), los pasteles de aceite
(ssamo, soja, oliva, coco, mostaza), bagazo (caa de azcar, yuca, naranja), pulpa de caf y
cscara (Pandey y Soccol, 2000) Sustratos tales como el polvo de semilla de Jackfruit, polvo de
semilla de tamarindo. En el presente captulo, los autores presentan una breve resea de la
evolucin del proceso SSF durante los ltimos cinco aos, ya que los desarrollos anteriores ya
haban sido discutidos en varias revisiones y captulos de libros.

9.2 MiCROORGANISMOS Y MTODOS DE MEJORA DE LA PRODUCTIVIDAD DE LA SSF

Los candidatos potenciales para la produccin de enzimas que utilizan el proceso SSF son bacterias
y hongos. Las bacterias de hbitat diverso han sido aisladas y estudiadas para aplicaciones
fermentativas, sin embargo los hongos mesfilos y tefilos han sido utilizados con ms xito. Un
nmero de enzimas comerciales tales como alfa-amilasa y glucoamilasas, pectinasas,
hemicelulasas, fitasas, xilanasas y proteasas son producidas por hongos. Los sistemas fngicos
utilizados para preparaciones de koji tales como A. sojae, A. oryzae y otros como A. niger se
consideran como cepas GRAS (generalmente consideradas como seguras). Las cepas fngicas tales
como A. terreus, A. tamarii, A. ustus, Rhizopus oryzae, Rhizopus oligosporus y Penicillium sp. Las
cepas tambin se estn explorando con frecuencia para la produccin de enzimas. Aparte de las
cepas de hongos de uso comn, cepas bacterianas tales como Bacillus spp. Son cada vez ms
explotados (Cuadro 1).

La mejora del rendimiento del proceso SSF se ha estudiado principalmente mediante el enfoque
tradicional de seleccin de nuevos cultivos con una produccin mejorada y su optimizacin de
procesos. Sin embargo, tambin se est explorando el enfoque de ADN recombinante utilizando
sistemas genticamente modificados. El enfoque es de importancia potencial dada la capacidad de
modificar el genoma del husped mediante la introduccin de nuevos genes responsables de los
rasgos mejorados. El enfoque de ADN recombinante se ha aplicado con xito para estudiar la
fitasa, amilasa, proteasa y bioqumicos tales como diacetal, folato, riboflavina, manitol y cido
lctico. El enfoque de ADN recombinante se ha aprovechado con xito para la mejora de las
bacterias del cido lctico especialmente para aplicaciones en la industria lctea. Las aplicaciones
incluyeron mejora del sabor, resistencia a bacterifagos, adicin de componentes nutricionales y
estabilidad y estructura de productos finales. Sin embargo, el enfoque recombinante requiere que
las condiciones culturales de los organismos modificados sean examinadas para proporcionar
condiciones que exploten plenamente el potencial aumentado del cultivo. Adems, el proceso de
mejora de la cepa implica la modificacin gentica continua del cultivo, seguida de reevaluaciones
de sus requerimientos culturales (Stanbury et al., 1995) y necesita un entrenamiento especial para
satisfacer estos requerimientos. Los esfuerzos iniciales en las modificaciones genticas se
concentraron utilizando enfoques tradicionales tales como exposicin a agentes mutagnicos tales
como etil metil sulfonato, NNG, NTG y radiaciones UV. Sin embargo, para explotar la produccin
de enzimas, los elementos reguladores metablicos deben modificarse usando enfoques de ADN
recombinante. Este enfoque de la modificacin de la totalidad de las vas de produccin se llama
como ingeniera de vas metablicas. Esto requiere un conocimiento completo de la va y de varios
elementos de control que trabajan en ella.
9.3 SUSTRATOS UTILIZADOS PARA LA PRODUCCIN DE ENZIMAS EN SSF

Los recientes estudios del proceso de SSF han explorado una variedad de sustratos que varan de
los residuos agro-residuales a los desechos de industrias tales como papas fritas, las industrias de
procesamiento de granos, papel y madera procesadas. Los desechos como el polvo de sierra y las
virutas de madera tienen un enorme potencial para la produccin de celulasas y hemicelulasas.
Sustratos como el bagazo de caa de azcar, salvado de trigo, salvado de arroz, salvado de maz,
gramo de salvado, paja de trigo, paja de arroz, cscara de arroz, soja, sagu hampas, polvo de
guarnicin de vid, sierra de polvo, mazorcas de maz, Desperdicios de yuca, desperdicios de molino
de aceite de palma, pulpa de aspen, pulpa de remolacha azucarera, pulpa de sorgo dulce, orujo de
manzana, harina de cacahuete, torta de colza, torta de aceite de coco, torta de aceite de mostaza,
harina de mandioca, El sauce pre-tratado con vapor, el almidn, etc. han sido estudiados para
aplicaciones de SSF. Recientemente se utiliz cscara de gramo verde como un buen soporte para
la produccin de proteasa alcalina (Prakasham et al., 2006). Tambin las tortas de aceite y sus
combinaciones se han explorado recientemente con mucho xito para la produccin de fitasa,
amilasa y proteasa. Los otros desarrollos incluyen el proceso de fermentacin en estado slido
utilizando material de soporte inerte suplementado con medios lquidos definidos qumicamente
para la produccin de enzimas, metabolitos y agentes de control biolgico (Ooijkaas et al., 2000).
El proceso SSF puede tener una aplicacin principal en la produccin de agentes de control
biolgico para aplicaciones de campo a gran escala dado el requisito de agentes de biocontrol a un
precio econmico y la facilidad de usar directamente el medio de fermentacin. Los diversos
estudios ya han informado el efecto del sustrato, su tamao de partcula y nivel de humedad /
actividad de agua en los medios.
9.4 DESARROLLO DEL REACTOR DE SSF

El retraso en SSF que es el modo principal de la fermentacin se puede atribuir en parte a los
biorreactores inicialmente disponibles. Durante las fases iniciales, en su mayor parte, el tipo de
bandeja de fermentadores estaba en uso con un pobre soporte de instrumentacin y tambin, el
calor generado durante el proceso se disip pobremente. Aunque recientemente la investigacin
estuvo dirigida al desarrollo de reactores SSF, sin embargo, el desarrollo de instrumentacin
simultnea ha estado hasta ahora rezagado. Inicialmente, el cultivo automatizado de koji
(bandeja) se aplic con mayor frecuencia (Pandey et al., 1999). Posteriormente, diferentes
configuraciones de biorreactores tales como el fermentador de estado slido de presin peridica
(Tao et al., 1999), el tipo de tambor rotativo de agitacin intermitente (Kalogeris et al., 2003 ) Y un
nuevo biorreactor "PlaFractor" (Suryanarayan, 2003) fueron desarrollados para la produccin de
enzimas, agentes de biocontrol y productos farmacuticos.

Los reactores tipo bandeja tradicionales consisten en bandejas apiladas contenidas en un

recipiente con aire humidificado estril que circula para aireacin y mantenimiento de la
humedad. Sin embargo, estos biorreactores han sido utilizados para estudios de produccin de
enzimas (Pandey et al., 1996, Mitchell et al., 1999), sin embargo, estos reactores sufren de
diferencias de crecimiento, sntesis enzimtica y patrn de esporulacin en diferentes segmentos
de la columna (Pandey Et al., 1996) no pudieron utilizarse para la fermentacin a escala industrial.
Recientemente se hicieron algunos esfuerzos para mejorar los biorreactores de las bandejas
utilizando el biorreactor de lecho brotado. Los estudios sugirieron que el chorro intermitente del
reactor de bandeja con aire alcanz altos niveles de produccin de (~ -amilasa con rendimientos
comparables a los del biorreactor de lecho empaquetado (Silva y Yang, 1998) Tambin se han
encontrado cambios dinmicos peridicos en el aire para controlar la temperatura De agitacin y
rotacin que daan o alteran los micelios fngicos y reducen la porosidad de los sustratos (Chen et
al., 2005).

9.5 FACTORES QUE AFECTAN LA PRODUCCIN DE ENZIMAS EN LOS SISTEMAS SSF

Los diferentes factores que deben ser estudiados para el desarrollo exitoso del proceso SSF
incluyen: un sustrato y un microorganismo adecuados, el requisito de tratamiento para facilitar la
disponibilidad del sustrato al microorganismo, el tamao de partcula del sustrato, el contenido de
agua y la actividad de agua del sustrato, la humedad relativa, la naturaleza De inculo, estabilidad
a la temperatura, disipacin de calor y mantenimiento de la uniformidad, duracin de la
fermentacin (Pandey et al., 1999). Aunque los sistemas SSF han sido conocidos por su simplicidad
y un nivel relativamente bajo de requisitos de instrumentacin, pero para propsitos de
automatizacin de procesos es necesario ms soporte de instrumentacin. Aunque, el
fermentador PlaFractor desarrollado en B iocon India, se ha desarrollado teniendo en cuenta los
requisitos de automatizacin de procesos.

Sin embargo, varios aspectos de los procesos SSF, como el desarrollo de sondas, principalmente
para la medicin de la humedad, el control y la regulacin de las variables de proceso, los
procedimientos analticos a los medios especficos y la medicin del ambiente gaseoso an
necesitan ser explorados (Durand, 2003). Adems, varios problemas de escala como la
compactacin en masa, la contraccin y la reduccin de la transferencia de calor (Durand, 2003),
etc. requieren estudios cuidadosos. Los factores que influyen en el aumento de la fermentacin en
SSF son principalmente la mala eliminacin del calor (Mitchell et al., 2003), lo que conduce a
problemas en el control de la temperatura y la limitacin de oxgeno (dos Santos et al., 2004). El
aire que es conductor pobre del calor no es conveniente para conducir el calor y tambin requiere
mantener cierto nivel de la humedad, que se puede hacer solamente proporcionando el aire
humidificado. Sin embargo, el inconveniente de una pobre eliminacin del calor puede usarse
ventajosamente utilizando organismos termoflicos que requieren temperaturas elevadas
(Kalogeris et al., 2003).

9.6 ENZIMAS PRODUCIDOS POR SSF

Aunque se ha trabajado mucho en SSF para la produccin de enzimas de importancia industrial

tales como proteasas, celulasas, ligninasas, xilanasa, pectinasa, amilasa, glucoamilasa, etc.,
tambin se estn haciendo intentos para estudiar procesos SSF para la produccin de inulinasas ,
Fitasas, tanasa, esterasa de cido fenlico, cuajo microbiano, aril-alcohol oxidasa, oligosacrido
oxidasa, tanino acil hidrolasa, aL arabinofuranosidasa, etc., usando sistemas SSF. En las siguientes
secciones, se discutir un breve informe sobre la produccin de enzimas seleccionadas en sistemas
SSF.

9.6.1 Celulasas y hemicelulasas

La celulosa es una molcula insoluble que consiste en unidades de glucosa que van desde 2000-
10000 residuos, mientras que algunas cadenas pueden ser an ms grandes en tamao. Las
unidades de glucosa se disponen linealmente como ~ B- (1-4) -D-glucopiranosa y forman cristales.
Los enlaces intramoleculares e intra-cadena de hidrgeno mantienen la red. La celulasa tiene
muchos usos como un agente anticake, emulsionante, estabilizador, agente dispersante,
espesante y agente gelificante y tambin tiene capacidad de retencin de agua. Las celulasas
representan un grupo de enzimas capaces de romper celulosa. Comprenden endoglucanasas (1,4-
[3-B-glucano glucanohidrolasas), exoglucanasas o celobiohidrolasas (1,4- ~ -B-glucano
celobiohidrolasas) y ~ -glucosidasas o celobiasis ([3-B-glucosida glucohidrolasas). Las celulasas
tienen diversas aplicaciones que van desde la extraccin y / o aclaracin de jugos de frutas y
verduras hasta el horneado, elaboracin de cerveza, biocolado de mezclilla y desentupcin de
pulpa y papel reciclados.

Trichoderma reesei es el hongo mesfilo ms estudiado y cinco endoglucanasas, dos

celobiohidrolasas y una ~ glucosidasa ya han sido identificadas de esta fuente. Los otros
organismos estudiados incluyen Aspergillus niger, Melanocarpus sp., Scymlidium thermophilum y
Thermoascus aurantiacus. Los estudios de produccin de celulasa en Melanocarpus sp. Y
Scytalidium thermophilum sugirieron que el perfil de expresin de diferentes componentes del
complejo de celulasa en hongos termoflicos, Melanocarpus sp. El MTCC 3922 se regula de forma
independiente mientras que en Scytalidium thermophilum MTCC 4520 est co-regulado (Kaur et
al., 2006). Los residuos de cultivos agrcolas ricos en celulosa tales como paja de trigo, paja de
arroz, mazorca de maz, hojuelas de maz, salvado de trigo, etc. se han utilizado para la produccin
de celulasa.

De forma similar, SSF ha sido ampliamente utilizado para la produccin de hemicelulasas. Las
hemicelulosas son un grupo de carbohidratos complejos que contienen xilanos, cido urnico y
arabinosa. El esqueleto de xilano se construye a partir de restos de xilopiranosilo enlazados con
B1-4. La columna vertebral se sustituye a menudo por residuos de cido 4-O-metil-D-glucurnico,
cido D-glucurnico o cido L-arabinofuranosa, y en algunos casos est tambin esterificado por
grupos acetilo (Biely, 2003). Debido a la heterogeneidad estructural de los xilanos, los sistemas de
enzimas degradantes de xilano incluyen varias enzimas hidrolticas. Las ms conocidas son endo-B-
1,4-xilanasas, que atacan la cadena principal de xilanos, y B-xilosidasas que hidrolizan
xiloligosacridos a D-xilosa (Haltrich et al., 1996). Las xilanasas tienen diversas aplicaciones,
incluyendo la produccin de oligosacridos, coccin, recuperacin de almidn de harina de trigo y
ayuda en la extraccin y clarificacin de jugos de frutas. Las hemicelulasas tambin se aplican en la
industria de piensos para mejorar la digestibilidad de piensos y en la industria de pulpa y papel
para la biopulpa y ayudar a reducir el consumo de cloruros para desarrollar un proceso ecolgico.

La produccin de xilanasa ha sido recientemente reportada de lotes de sistemas fngicos como

Thermomyces lanuginosus, Thermoascus aurantiacus, Aspergillus awamori, A. niger, A. oryzae,
Penicillium canescens, Ceriporiopsis subvermispora, Melanocarpus albomyces, P. thermophila J18
y Trichoderma reesei. Los sustratos utilizados principalmente para la produccin de xilanasa
incluyen salvado de trigo, mazorcas de maz, bagazo de caa de azcar, pulpa de bagazo, licor de
sulfito gastado, paja de arroz, paja de trigo, harina de sorgo y pulpa de eucalipto. Sin embargo, los
materiales lignocelulsicos, especialmente el salvado de trigo, han tenido ms xito en la
produccin, con ttulos ms altos atribuidos a su naturaleza hemicelulosa, degradabilidad
favorable y la presencia de algunos nutrientes en la fuente de carbono (Sonia et al. Adems, se
dice que la paja de trigo es idealmente adecuada para la produccin de xilanasa en cultivos de T.
aurantiacus y Penicillium canescens (Kalogeris et al., 1999, Bakri et al., 2003).

9.6.2 Ligninasas

Las ligninas son polmeros fenilpropanoides tridimensionales, considerablemente resistentes a la

degradacin microbiana en comparacin con polisacridos y otros biopolmeros naturales. Las
ligninasas tienen aplicaciones en la deslignificacin de materiales lignocelulsicos, que pueden ser
utilizados como materia prima para la produccin de biocombustibles, pasta de papel y piensos
para animales. Estos pueden tambin ser utilizados en la pulpa Su afinidad por los aminocidos
hidrfobos es una ventaja para minimizar el amargor en los hidrolizados de protenas. Mientras
que, las proteasas cidas pueden clasificarse en dos grupos en funcin del clima, su actividad
cataltica se asemeja a la renina oa la pepsina. Rennins como enzimas se caracterizan por su
capacidad para coagular la leche y tienen una importancia comercial importante en la fabricacin
de queso. El grupo de proteasas cidas similares a la pepsina incluye pepsina bovina y porcina y
proteasas de cido microbiano principalmente de Aspergilli. Las proteasas cidas microbianas
tienen aplicaciones en la hidrlisis de protena de soja en la fabricacin de salsa de soja, mejora de
roperties de horneado y ayudas digestivas. Las proteasas de tipo pepsina microbiana producidas
principalmente por cepas de Aspergillus y Rhizopus spp. Son activos en pH cido y tienen una
tolerancia moderada a la temperatura.

La fermentacin en estado slido para proteasas ha sido un modo preferido de fermentacin con
sistemas fngicos, debido a la presencia de enzimas extracelulares que facilitan su recuperacin.
Los procesos de SSF por lo general son ms sencillos y pueden utilizarse residuos agroindustriales
ms baratos como el salvado de trigo, el salvado de arroz, la torta de aceite de ssamo, la torta de
aceite de soja, la torta de aceite de coco etc. La recuperacin tambin es ms fcil porque, la
enzima se produce en forma concentrada. Las proteasas neutras y cidas son ampliamente
utilizadas en la industria alimentaria para la maduracin del queso, la ablandamiento de la carne,
en la industria cervecera y para la produccin de hidrolizados de protenas, como ayuda digestiva y
en la fabricacin de pan.

Lipasas

Las lipasas catalizan la hidrlisis de enlaces ster en la interfase entre ster de cido graso
insoluble en agua o fase glicrido y la fase acuosa que contiene enzima. Las lipasas encuentran su
aplicacin en la hidrlisis de grasas y aceites, en transesterificacin, produccin de
biosurfactantes, formulacin de ayuda digestiva, detergentes, separaciones enantiomricas y
transformaciones esteriospecficas. La quiralidad es un factor clave en la eficacia de muchos
frmacos y productos agroqumicos y, por lo tanto, la produccin de enantimeros individuales de
productos intermedios quirales es cada vez ms importante en el tratamiento de las sustancias
quirales. La industria farmacutica.

Aunque, se han producido lipasas de diversos microorganismos, pero las lipasas comercialmente
disponibles son en su mayor parte de Aspergillus niger y Rhizopus oryzae. La lipasa de R. oryzae ha
encontrado aplicacin en la produccin de biodisel (Ban et al., 2001). Se han evaluado
individualmente diversos residuos agroindustriales tales como extracto de torta de aceite de coco,
torta de algodn, torta de soja, torta de aceite de ginga, torta de aceite de oliva, bagazo de caa
de azcar, salvado de cebada, Lipasa. Aparte de los sistemas de hongos como el Aspergillus niger,
el Rhizopus oryzae, el Penicillium restrictum Penicillium simplicissimum, el Trichoderma
versicolour y el T. Hirsuta, tambin se han estudiado recientemente sistemas bacterianos como
Bacillus megaterium para la produccin de lipasa en condiciones de SSF.

Galactosidasas y pectinasas

Ha habido un inters considerable para producir t-galactosidasa (EC-3.2.1.22), -galactosidasa (EC-

3.2.1.23) y polialalacturoanasa (PG, EC-3.2.1.15) en procesos SSF. Estas enzimas tienen aplicacin
en las industrias farmacutica y alimentaria. La galactosidasa (t-D-galactopiransido

galactohidrolasa EC 3.2.1.22) encuentra aplicaciones en industrias que van desde la produccin de

azcar de remolacha hasta la hidrlisis de rafinosa y estaquiosis presentes en la soja, el caup y
otros leguminosos. La presencia de estos oligosacridos es la razn de la diarrea y la flatulencia
causada por el consumo de productos de soja y el pretratamiento con ct-galactosidasa puede
ayudar a sus aplicaciones mejoradas en las industrias de alimentos y piensos. Aspergillus oryzae se
ha utilizado principalmente como fuente de tx-galactosidasa. Aunque recientemente se han
estudiado tambin los actinomicetos para la produccin de ct-galactosidasa, pero la ventaja
relativa de Aspergillus oryzae como una cepa GRAS hace que su enzima sea aceptable para
aplicaciones en alimentos y piensos.

La i-galactosidasa (o lactasa) hidroliza el azcar de la leche, la lactosa, a sus componentes glucosa y

galactosa y as encuentra aplicaciones en la leche y productos lcteos destinados a los pueblos
intolerantes a la lactosa, para la prevencin de la cristalizacin de lactosa en productos lcteos
congelados y condensados. Reduccin de la contaminacin del agua causada por el suero y
tambin para aumentar las propiedades edulcorantes de la lactosa. Aunque, la produccin de ~ -
galactosidasa ha sido estudiada con diversos orgises como Trichoderma reesei, Aspergillus niger,
Bifidobacteria, Lactobacillus acidophilus, Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces lactis,
Kluyveromyces marxianus. Sin embargo, slo Trichoderma reesei y Aspergillus niger han sido
estudiados para la produccin de SSF. Los diversos sustratos utilizados para la fermentacin
incluyen arabinoxilano, salvado de trigo y lactosa, etc. y se desea una mayor explotacin utilizando
SSF.

Las pectinasas, un complejo de enzimas degradantes de pectina, consisten principalmente en

pectina metilesesterasas, endo- y exo-poligalacturonasas, pectinasas y causan desesterificacin,
desdoblamiento de cadena y escisin de enlaces glicosdicos. Han sido ampliamente utilizados por
las industrias de frutas, vino y verduras para diversas funciones como la maceracin, extraccin,
licuefaccin, clarificacin y valorizacin. Aspergius niger, A. carbonarius, A. sojae y Rhizopus sp.
Son los hongos ms utilizados para la produccin de pectinasa a escala comercial. Se han
estudiado individualmente y en combinacin para la produccin de pectinasa una variedad de
sustratos tales como soja y harina de trigo, pulpa de remolacha azucarera, cabeza de girasol
desecada, pomelo de naranja, pulpa de limn, bagazo de naranja y bagazo de caa de azcar.

Glutaminasa

La L-glutaminasa (L-glutamina amidohidrolasa - E.C. 3.5.1.2) es la enzima desamidante de la L-

glutamina y desempea un papel importante en el metabolismo del nitrgeno celular tanto de
procariotas como de eucariotas. La L-glutaminasa es til en la industria alimentaria ya que
aumenta el contenido de cido glutmico del alimento fermentado, impartiendo as un sabor
nico. Adems de su valor alimenticio, la capacidad de esta enzima para provocar la degradacin
de la glutamina lo plantea como un posible candidato para la terapia enzimtica, que puede
sustituir o combinarse con la L-asparaginasa en el tratamiento de la leucemia linfoctica aguda. Sin
embargo, poco se ha informado recientemente sobre la produccin de L-glutaminasa. Los
informes recientes sobre la produccin de L-glutaminasa informaron la explotacin de
Zygosaccharomyces rouxii NRRL-Y 2547, Cryptococcus nodaensis, Beauveria sp y Streptomyces
rimosus, pero slo Zygosaccharomyces rouxii NRRL-Y 2547 y Beauveria sp. Fueron estudiados para
aplicaciones de SSF. Los sustratos tales como el salvado de trigo y la torta de aceite de ssamo han
sido estudiados aparte de soportes inertes tales como poliestireno suplementado con glucosa y L-
glutamina.

Amilasas

Las amilasas pueden clasificarse ampliamente en dos clases principales de alfa-amilasa y

glucoamilasa. La a-amilasa (endo-1,4-t-D-glucano glucohidrolasa, EC-3.2.1.1) escinde
aleatoriamente los enlaces 1,4-aD-glucosdicos entre unidades de glucosa adyacentes en cadena
de amilosa lineal y glucoamilasa o amiloglucosidasa Exo-1, 4-o ~ -D-glucano glucanohidrolasa, EC-
3.2.1.3) hidroliza unidades de glucosa simple de los extremos no reductores de amilosa y
amilopectina de una manera escalonada. Las glucoamilasas son capaces de hidrolizar los enlaces t
~ -1,4 y a-1,6. Las enzimas tienen aplicaciones en las industrias de procesamiento de almidn,
alimentos, fermentacin, textiles, detergentes y papel. Las amilasas se utilizan en la industria de la
panificacin para mejorar la calidad de la masa, en la industria de fermentacin para la produccin
de glucosa para aplicaciones fermentativas, en productos farmacuticos para la preparacin de
jarabes de glucosa y en la industria alimentaria para actuar como una ayuda digestiva. El
Aspergillus oryzae ha sido un organismo preferido para las alfa-amilasas fngicas para aplicaciones
alimentarias y farmacuticas, mientras tanto Apergillus como Rhizopus spp. Se han utilizado para
la produccin de glucoamilasa. Los estudios recientes sugirieron que las tortas / harinas de aceite
como la torta de aceite de coco, la harina de soja tambin se pueden usar de manera eficiente en
la fermentacin del sustrato mixto para la produccin de amilasa. El otro en sustratos caros tales
como grano de labranza, cscara de arroz, copos de arroz, almidn de mandioca, bagazo de caa
de azcar, bagazo de naranja, melaza, salvado de arroz, harina de maz, cereales de mijo, copos de
trigo, salvado de cebada, maz triturado, Trigo tambin se han estudiado en estado slido
fermentacin (SSF). Sin embargo, en la mayora de los estudios se ha encontrado que el salvado de
trigo es el mejor sustrato para la produccin de amilasa en SSE. Dado el requisito de que la
industria de procesamiento de almidn tenga amilasa termotolerante, los esfuerzos se dirigieron a
la identificacin de amilasas termoestables. Se encontr que las amilasas bacterianas y de
actinomicetos tenan propiedades de termoestabilidad. Sin embargo, para las aplicaciones
relacionadas con alimentos, las amilasas de los actinomicetos pueden no encontrar mucho favor.
Se ha encontrado que la alfa-amilasa bacteriana de B. stearothermophilus GRE1, Bacillus subtilis,
Bacillus licheniformis y Geobacillus thermoleovorans es de moderada a altamente termoestable
mientras que la alfa-amilasa de otras fuentes tales como Bacillus cereus MTCC 1305, Bacillus
amyloliquefaciens y sistemas fngicos tales como Thermomyces Lanuginosus tambin se han
estudiado.

La produccin de glucoamilasa fngica ya se ha informado utilizando fuentes de nutrientes baratas

tales como salvado de trigo, residuos de t y torta de aceite de coco. Sin embargo, recientemente
se estudiaron tambin los residuos de procesamiento de arroz (residuos gruesos, medios y finos)
junto con polvo de arroz para la produccin de glucoamilasa. Los diferentes aislamientos
estudiados incluyen Aspergillus sp. HA-2, Aspergius niger, Scytalidium thermophilum, Aspergillus
awamori, Rhizopus oligosporus y Thermomucor indicae-seudaticae. Se inform el molde termfilo
Thermomucor indicae-seudaticae para la produccin de una glucoamilasa termoestable y neutra
ptimamente activa a 40 y pH = 7, cuando se cultivaba en salvado de trigo humedecido con una
solucin salina en una proporcin de 1: 2,5 (p / v) suplementada con 2 % De torta de semillas
oleaginosas de algodn (Kumar y Satyanarayana, 2004).

Fitasa

Las fitasas (mio-inositol hexakisphosphate phosphohydrolase, EC 3.1.3.8) catalizan la liberacin de

fosfato a partir de fitato (myso-inositol hexaksifosfato). Varios granos de cereales, leguminosas y
oleaginosas, etc. tienen su fsforo almacenado en forma de fitato. El fitato de fsforo no es
fcilmente accesible para los animales monogstricos debido a la baja actividad inherente de la
fitasa y pasa en el estircol. Las reas con alta densidad de ganado vacuno y porcino sufren de
contaminacin del agua subterrnea debido al estircol de fsforo alto en fitato. La contaminacin
de los cuerpos de agua debido al estircol con alto contenido de fosfato ha planteado serios
problemas de floracin de agua y crecimiento de los productores de toxinas. Las fitasas parecen
tener un valor significativo en el control eficaz de la contaminacin por fosfatos. Aunque, la fitasa
puede producirse a partir de una serie de fuentes incluyendo plantas, animales y
microorganismos. Sin embargo, las fuentes microbianas son prometedoras para sus explotaciones
comerciales. Las cepas de Aspergillus spp., Principalmente A. ficuum y A. niger se han empleado
con mayor frecuencia para fines industriales. Aparte de ellos se han estudiado Rhizopus
oligosporus, Rhizopus oryzae, Mucor racemosus y Aspergillus ficuum para la produccin de fitasa.
Dada la conveniencia de que la fitasa termoestable sobreviva al proceso de granulacin de pienso,
la bsqueda se ha iniciado ahora para la fitasa termotolerante y ya se han hecho intentos para
utilizar la ingeniera gentica para manipular la fitasa para la termoestabilidad. El enfoque
tradicional que utiliza moldes termoflicos como el Sporotrichum thermophile tambin se ha
evaluado para la produccin de fitasa termoestable. Estudios recientes sugieren que los residuos
agroindustriales como la torta de aceite de ssamo, la torta de aceite de coco, la torta de aceite de
man y la torta de aceite de soja son adecuados como un solo sustrato, as como en combinacin
para la produccin de fitasa en condiciones SSF.

Inulinasa

La inulina es un polifructano de origen natural en plantas que consiste en cadenas lineales de

residuos de fructosa unidos a 13 (2,1) unidos a una molcula terminal de sacarosa. El polisacrido
est ampliamente distribuido en plantas como alcachofa de Jerusaln, achicoria, dalia y
esprragos. Las inulinasas microbianas (fructano-fructanohidrolasa 2,1-13-D (EC 3.2.1.7) son
usualmente enzimas inducibles y exo-actuantes, que catalizan la hidrlisis de la inulina liberando la
molcula de fructosa final.Tresas cepas de Aspergillus, Staphylococcus sp y Kluyveromyces Se ha
estudiado la fermentacin en estado slido para la produccin de inulinasa utilizando torta de
aceite de coco y bagazo de ssugarazana como soporte y fuente de carbono para la produccin de
inulinasa. La suplementacin de nitrgeno en forma de licor de esputo de maz tambin ha sido
estudiada para la produccin de inulinasas. Las condiciones ptimas de fermentacin para la
produccin de inulinasa fueron: 36 ~ y 20% en peso de licor de maceracin de maz utilizando
Kluyveromycesmarxiana (Mazutti et al., 2006). Sin embargo, no se ha informado mucho trabajo
sobre la produccin tarda de inulinasa Aunque los estudios se llevaron a cabo inmovilizando los
conidios de Aspergillus niger 20 Osm produciendo inulinasa extracelular sobre piedras pmez y
esponja de poliuretano para uso en procesos repetidos, slo algunos factores que afectan a la
biosntesis de inulinasa El micelio fueron estudiados. Se observ que la inmovilizacin permiti la
produccin de enzimas repetidas por lotes y hasta seis lotes subsiguientes de 24 h pudieron
fermentarse usando el mismo portador (Skowronek y Fiedurek, 2006). Sin embargo, dada la
importancia de la inulinasa en la produccin de manitol, inulo-oligosacridos ~ oligosacridos de

bajo contenido calrico, bioetanol y tambin jarabe de alta fructosa para aplicaciones
edulcorantes, la produccin de inulinasa mejorada an debe ser explorada por SSE.

Enzimas diversas

Las diversas otras enzimas supuestamente exploradas usando el proceso SSF incluyen tanasa,
quitinasa, invertasa y alfa L-arabinofuranosidasa, etc.

RECUPERACIN DE LAS ENZIMAS

El proceso de recuperacin de enzimas depende de la naturaleza del producto y de su aplicacin

prevista. Las aplicaciones de final superior pueden requerir enzimas ms purificadas, mientras que
las industrias tales como la industria textil, papel y pulpa y pienso pueden requerir las
preparaciones enzimticas brutas. Mientras que la enzima requerida para la sntesis farmacutica
y orgnica puede ser purificada para evitar reacciones secundarias que conduzcan a productos no
deseados. Debido a que la mayora de las enzimas se secretan en el medio, pueden extraerse
simplemente con agua o soluciones tampn despus de mezclar durante 30 minutos a 1 hora y
retirar el micelio por centrifugacin. Dado que la mayora de las industrias desean tener un
proceso descendente rentable y la mayora de las preparaciones enzimticas se han encontrado
tiles incluso en la forma bruta, por lo tanto la extraccin enzimtica es el modo preferido de
recuperacin. La temperatura de extraccin y el pH del agente de extraccin pueden ser a veces
importantes para la estabilidad de la enzima. La purificacin adicional de las preparaciones
enzimticas puede ser llevada por sulfato de amonio o precipitacin cida seguido de
ultrafiltracin y cromatografa en columna. Sin embargo, esto puede conducir a un aumento
general del costo del producto final.

CONCLUSIONES

Se ha encontrado que el proceso SSF es rentable para muchos procesos de produccin de enzimas
frente a SmF. El aumento del costo de los piensos para SmF, la adicin de valor a los residuos
agroindustriales y la facilidad de operacin hacen que el proceso SSF sea ms favorable. Adems,
el proceso SSF requiere menos capital inicial e incurre en bajos costos de operacin y es adecuado
para las economas basadas en la agricultura. La produccin de enzimas industriales por SSF tendr
un papel importante en futuras biotecnologas. El enfoque en la aplicacin de SSF es necesario
para estudiar para el desarrollo de enzimas especficas SSF proceso, el desarrollo de ambientes
especficos de acogida, SSF hongos objetivo y las bacterias y en su mejora gentica para las tareas
deseadas. Las tendencias emergentes tambin sugieren el desarrollo de DPI para los procesos
relacionados con SSF. La SSF ofrece condiciones adecuadas para microorganismos capaces de
crecer a temperaturas elevadas y desarrollos futuros pueden conducir a su mejor explotacin de
organismos y productos termotolerantes por SSE.