E nz irn as

Evllro Hennena

. En un organismo vivo tielren iugar numerosas reacciones qumicas, la mayoria

de las cuales se encuentran funcionah ente rntercoriectaclai, constituyend un
sistema ordenado, intrnseco a la materia viva. Muchas de tales,reacciones no.
ratura hsiolgicos, por,lo
s de naturaleza proteica,
y la velocidad a la que se
;en racctones que requieren energia para
;;: cOrTlo en las que desprenden energia,
de dichas re acciones permite,al organis.
la que, a pesar de su conjil'_.-- .ransfor-
nstante>; es decir, uo esado esf acionario:
Las enzimas no diheren en cuanto a composicin de aminocidos dej resto cie
protenas. A su vez, su accin catalfica depende de la [ormacin de enlaces
o de
interacciones moleculares semejantes a las stabiecidas en 1as reacciones orgnicas
ordinarias entre aminocidos y grupos prostticos. Por ello, el estudio de
las
enzimas no es sino un caso particular. it ae las protenas. cuya estructura
ya
hemos analizado en los captulos anteriores.

1)- ii:L?1,i1i:i1li"iL;1":,""'iffi;J[,::',"i:ii,l;:';;i:.
nstihte- de equilibrio de una reaccin ni las caratersti-
istetna*sino que hace que la reaccin se aproxime ms.
. Es decir, afecta'a Ia velocidad de reaccin...
La uelocidad de uqa .reaccin-se deflne como la cantidad de material inicial,
de compuesto final, producto; lormado
reacciones, el producto de una de ellas
nte, de forma que producto y sustrato
e de ruetabolitos. intertnedios.
. lomo ya se ha mencionado, Ia enzima acta como catalizador de Ia reaccin
ind'-ciend.o)):',un: airE-repto .de-.su velocidad.
Fllo.,ocurre por interaccin entre.
'sustrato,-y.e.nzi.rnq; en.primer lugar, ei sustra.to se.une tempralmente a
la enzima
en:l.dgnorninad -stt de unii rlel sltsrato, constituido po. ,no, cuantos ami.
n que permite a los aminocidos enzim-
oceso cataltico, y localizados en el siro
el lugar.que va a.ser translormado. La
ser covalente y suponer un cambio en la
ima, pero a1 final dei proceso, cuando el
90 lrlQUIi\'llCA

Co
producto de Ia reaccin es liberaclo, Ia clrzjn]a t-ecuperlt su lot'n-la original -\'pLrc(lc
actuar sobre una nueva molcuia de sustralo. El ,(o Ios).rsi,tioisl:d.erruini,nr'al'sruslrrtc ;l

, el sitio catalitico cje Ia enzima constituyen en conJunLo el deno r1/o rrritlc

Lr',;r;',';i q*'l"uri" cieflnir corro un .qn_1rn,i, de caclenas,lateralgs,. 1 strr?
oei- lurrclo
;; J.ia.olcula de enzrma que interaot:anrs-ueon.e[u1r]atoiLan't':ler*Cuanto l)
y unin, como qO. Quanto a transrfom1aci9.16 t'io (f,c
--
"-econocimiento
sirio activo de una erlzima no trenen quc sei :ic
ior aminocidos que constifuyen e1

estar necesarillmente ContlgLlS en Su esttuctura primaria' De hechO, cOl'IlO se t')

en Ia proteica
Ur.rru en Ia gura 5.1, minocidos muy distantescasos ensecue^cia los que el sitio de
apoer
pra.n formar prte del sitio aciivo de Ia enzima. I1ay dile. er
pero en otros, los dos sitios est es de
unin del sustrato y el sitio catalitico coincide, protei.a'
distantes en la molcula de apoei.r
i"r""r por don-rinios dilerentes, inciuso
mentc
especl
JLlDto
confur
cicnti
Er
del su
efect
Sou li
efecto
Son e
se des
me tat

COE
NI
una

cstabl
en el
ahnid
como
mlenl
enzr
proce
papel
rC
rren (
Por e
coeni
lacla
rEACC

CH
E
pued
nes, l
en ia estructura dc la gliceraldelido-3-fosfato deshidrogenasa
de B' steoro-
Figura 5-1. Dominios (Tomado cie
el NAD+'
rhermophilus,con inCicacin del sitio de unin a uno de sus
sustratos,
J'E'' y A"' Nature' Londres' 266:378"
Biesecker, G., Harris, J. l.; Thierry, J C.; Walker' Wonacott'
donC
1917.)
 l_N 7_1 N4
^5 91

,lirlitl y pucdc Ccnviene deflnir otros trminos relacionados con la accin enzimtica;
,n al sustl'ato a) Apoenzinto, se rel'iere slo a Ia parte proteica de la enzima, independientei
iniuado ^si1ro mellte de cualquier otro -qrupo o cotnponente oecesario para que la enzima sea
ie rminotci- luncionalmente activa; suelc carecer de actividad cataltica.
r curnto a su
il Cofaclores, que son molculas orgnicas o inorsnicas de tamao pequc-
o (por ejemplo, un ion metlico), cu)/a presencia es necesaria para que 1a nzima
ro trenen que sea actlva
'ho, como se
c) Grupo prosrtico, que es el componente no proteico unido fertemente a la
ilcla proterca apoenzima. Es frecuente la conlusin entre grupo prosttico y cofactor, pero la
iue el sitio de diferencia radica en la fuerza de su unin a Ia enziina. Cuando el grupo prsttico
s sitios estn es de naturaleza orgnica recibe el nombre de coenzintr, y su-ascialin a la
ie proteina. a-poenzima da lugar ala ltoloenzna, que no es ms que la enzima activa Normal-
mente, al hablar de enzima se esI haciendo referencia a Ia holoenzima, sin
especihcar Ia naturaleza del grupo prosttico. Como veremos ms adelante, esto,
junto con la utilizacin generalizacia de nombres muy diversos, ha llevado a
confusin, obligando a estabiecer unas estnctas normas para ]a nomenclatura
cientfica de las enzimas.
En algunas enzimas hay un tercer sitio, distinto del sitio activo o del de unin
del sustrato, denominado silio alostrico, donde se unen molculas pequeas, los
efectores alostricos,los cuales modican la configuracin espacial e la ,n j^u.
Son las enznas alostric.as, en las que el cambio -onfiguracinal inducido por ei
efector altera la actividad del sitio activo y, en consecuencia, su cficiencia cataltica.
Son enzimas con caractersticas estructurales y frrncionales muy particulares, que
se describirn en detalle en el captulo 7, dado su importante papel en el contiol
metablico.

COENZIMAS
Muchas enzimas slo catalizan la transformacin del sustrato en r:esencia de
wa coenzitzla, molcula de naturaleza orgnica, de bajo p"ro .noi""ular, ms
estable que la enzima a temperaturas elevadas, y que paiticipa junto con aqulla
en el proceso cataltico de dos maneras posibls: a u... la coenzima tien una
alrnidad por la enzima similar a la del sstrato y, de hecho, puede considerarse
como un segundo sustratc (o cosuslralo) de la reaccin cztaliiada por ia enzima;
mientras que en otros casos, la coenzima se encuentra unida covalntemente a 1
enzima en su sitio activo o en un lugar prximo a 1, y participa activamente en el
proceso cataltico. Existen an otros casos en que la coeniima desempea un
papel intermedio entre estos dos extremos.
cuando la coenzima acta como cosustrato, Ios cambios qumicos que ocu-
rren en ella son exactamente ios opuestos a los que tienen lugar n-el sustrato. As,
por ejemplo, en reacciones de oxido-reduccin, mientras el s=ustrato es oxjdado, la
coenzima es reducida, o viceversa- Este es el caso de ia oxidacin del lactato po; la
lactato deshidrogenasa, en Ia que el NAD * (coenzima) acta como cosustrato de la
reaccin:
CH,-CHOH-COO- + NAD. ?r CH3-CO-COO- + N{p--ll+ H*
Fn este ejemplo la coenzima acia como un aceptor de hidrogeniones, pero
puede actuar como aceptor de otros grupos moleculres en otro tipo de reacio-
nes, por lo que cabe generalizar el proceso de 1a siguiente forma:
a de B. seoro-
',(Tcmado de
D-G*CoE:CoE-G+D
'ndres,266:328,
donde D es la molcula dcradora del grupo (G), V CoE, Ia coenzima.
92 llIOQUII\11CA

Sc dan tarrbin casos ell que la coet.izima parLicipa cofiIo ul] trans;<lrtldor I-r
interntcdiario ert un sistem cle reacctones, lacilitando Ia transfe'encia del grupo es tru c
corresltondicte a.un accpL r (A) ltimo. En este caso, ei esquena de Ia reaccirr actr
sera:

D-C \ 7' CoE -lZ-A G

YY
,-, *A'.uu c-\ A

Un ejemplo de este tipo de reacciones es el cataiizado por las .rlnsat'tinascts, en

que el l-oslato de piridoxal (coenzina) participa e1 .la translerencia del grupo
mi,ro de un aminocido a un a-cetocic o (2-oxocido)'
Todas las coenzimas son vitaminas hidrosolubles, cu)os aspectos estructurales
y luncionales se describen en el captulo 8, al que remitimos al lector para ms
nlormacin. Con el [rn de simplicar Ia descripcin de Ias enzimas y su cinetica,
en el presente captulo se har ielerencia a las coenzinras, considerndolas simple -
mente un segundo sustrato de la reaccin. E.

puestr
En el
SITIO CATALITICO Y ESPECIFICIDAD catali
Un ej
La efectividad de la accin catalitica de una ezima radica en la capacidad de gluco
su estruciura proteica para moldearse, Io que es posible de formas muy diversas.
En Ia molcul enzimtica existen hendiduras que constituyen los sitios activos,
a travs de los cuales dilunden otras molculas. Cuando una de estas molculas
(sustrato) rene las caracteristicas necesarias para su acoplamiento con la corres-
pondienre hendiclura (sitio de unin al strstrato), Ia protena <<se cierra>> y coloca
Lna serie de grupos quimicos (cadenas laterales de los aminocidos que constitu-
yen el sitio atlitic) en la disposicin geomtrica adec.uada para laciiitar. su
nteraccn fisicoquimica (accin tataltica). As pues, ia unin del sustrato al sitio
correspondiente de la moicu1a de enzima. desempea un papel lundamental en Ia-
urprririrtocl en,inttca, ya que 1as cadenas lateraies de los aminacidos que
cnsttuyen dicho sitio sio peimiten el acoplamiento de compuestos con determi-
nadas caractersticas estructuraies.
La necesidad de esta interaccion enzima-sustrato determina que una enzima
sea capaz de catalizar nicamente Ia reaccin de unos pocos sustratos, e incluso de
uno soio; o en otros trminc,s. slo determinados compuestos pueden acluar como Asirr
sustra.tog de una enzima. Esta especiftciciad es una caracteristica fundamental de
1( sistemas biolgicos, y constituye 1a clave paa su control. De hecho, Ios E;
cambios en Ia actividad d una enzima afectan a determinados compuestos o vas una i

metablicas, pero no a otros. erlzrtf

La especicidad enzimtica puede relerirse exclusivamente a la naturaleza del una r
sustrato, en cuyo caso depende de la unin enzima-sustrato (E,-S)- En este caso, la rep
la enzima dilerencia un compuesto de su ismero, como la forma I de Ia o de un excep
mismo aminocido, glicer
glicet
o o de ca
I
c-o- C
-o- sltro
mol,
ll-c
I I

'HrN -C - H -NH,* Com

I I

R R del gl
Ios (
l--am inocido ua :minocido
que
 tjN 7_t trl\S e ?
transpo rtad o r
ncia del En otroz casos' la enzima dilerencia un compLresto
-qrupo de otro con caractersticas
de la reaccin estructurales muy semeJantes. Un ejemp)o ., .i
.^ro de la ql,,r:or;;-i-,;;:;,.;i:
acta sobre la r>glucosa pero no sobre'lu >Z
.ro_ialr."rr.
o o
ll

C_H c-ll
il

FI
-C_OH
I
l'
t'tsarntna.tQS, en j
H C_ I]
rcia del grupo HO-C_ H HO C.H
I

H-C-OH }J-C-OH
i

s estructurales I

ctor para ms I{_C_OH II

I

-C-OH
; y su cintica,
I

cHroH I

CH,OH
ndolas simple-
>C lucosa >2-DesoxJglucosa

n, que se refiere a que ur, mismo com_

as, que lo modifican de distinta forma.
d-e la unin E-S, sino de la accin
ccin del sitio cataltico con el sustrato.
capacidad de
es el ti. las enzimas que transforman la
muy diversas.
sitios activos,
tas molculas
con la corres- ogt'rro-st
6-Foslog)uconoIactona
:tt?)) y Coloca dshich

que constrtu- o-fudll

GiLcoso
'a lacilitar su
Glucosu 6-fosfuttsu Clucosa + pi
C I ucosa-6-loslato
strato al sitio
amental en la Ytr#tu!*.-
-=-'-'!:<!,,!!o.," Fructosa-6-los [at o
racidos que
con determi-
Clucosa- l-fos[ato
) una enzlma
;, eincluso de
actuar como
rdamental de Asimetra de la unin enzima-sustrato
'e hecho, los
En la mayora de los casos, el sustr
'uestos o vias a de
una forma asimtrica mediante un m ---
aturaleza del enzima dilerenciar no sio i.o^".or, ,
una misma molcula sirntrica,- puede : ,l:
En este caso, que
ielaodeun la regin de la enzimu qr. ,n. ,l ,;r;
muestra ia molcula de un susrratJll
uede ser presentada al sitio activo de la
en l-glicerol-3-loslato, como un tomo
mismo plano. Si la interaccin entre el

los (-CIlroH) de dicho sustrato, precisamente el

ce la posicip 3. El res.ltaclo es
que en la reaccin catalizada por la glcerolqttirlaso
se forma nicarnente ei
 Llr(x)I,JI1 I('A

I CII ,OH
CI ,otl
gliccrolqLrinlLsl I

I
I

Cllol-l lto-c-ll
I

I cH,ol-1 cIl rO l',o.1

r--Cl rccr tl .l [Lrsf:ttt

Clrccrol

SLtio act.rlo de la enzlma

olquinasa y de Ia unin asir-rltrica

Figura 5.2" Representacin de la reaccin catalizada por la glicer
en un de su sustrato simtrico, el glicerol, al sitio activo de la enzima'
mediante tres Puntos Plano

puede utilizarse para

estereoismero L-glicerol 3-iosfato. EI mismo razonamiento
pticarnente inactiYa, en L-
.*fii.u, la translo"rmacin del piruvato, una molculadeshidrogena'sa'
lactato, y no en D,L-lactato, por accrn de \a lactato

MECANISMO DE LA ACCION ENZIMATIC\

cataltico y unin enzima-sustrato
por Fm,il
El primer modolo de Ia accin cataltica de una enzima fue propuesto
de una interaccin similar a la de
Fischei en 1894, quien consider que se trataba
modelo est descartado,
una llave con su cerdura (fig 5 3i En la actualidad este
que no
ya que suDone una rigidez e n el acoplamiento de la enzima con su sustrato,
las protenas. A pesar de ello, el ntodelo
r.t-puiiUie ccn la?strucrrra iiexible de de las
de la lluue-cerrac{,ra es an til para :orrpiender algunas propiedades,
enzimas, tales como la unin secuenqia! de ms de un sustrato o Ia cintica de

saturacin de Ia enzima frente a un sustrato'

E,n 1963, Koshland propuso una modilrcacin del modelo
de Fischer, denomi-
fue recibido al principio con cierto esceptlcrs-
nado ntodelo del aiuste ndicicto,que
mpliamente reconocido por contar con bastante
*o, p.ro que en 1 aciualidad es
;p;y; exjeriment"i. ;;"deIo implica la flexibilidad del sitio cataltico' d

L\
L,l @

de <<llave-cerradura pro-
Figura 5.3. Rep resen taci n cie una reaccin enzirntica segn el modelo
puesto por Fisher, dondc E es la enzima, S, el sustrato, y P' el producro'
 I:N 7-II.1AS 95

lorma qtle el sustrato piJduce un ca.ntbio conlornracional en la enzima. Dicho

canlbio permite que lzrs cadenas laterale; de determiuados aminorcidor o'.11*
grupos de la molcula enzimtica, o <ie los dos. adquieran la orientacin.rpo.irf
adecuada para la unin del sustrato, para llevar a cabo el proceso catalitico
o
para ambos procesos. Err la figura 5.4 se
de este tipo de interccin. Las cadenas
lenilq!4nqi(Ph-e),- y los grupos cargacl
pl o, aspartato,.AS_p-) p articipar-r e n I a . u*r
el grupo fosf
participan en
del sustrato 'del sitio cataltico se encuentran dislantes entrc s. Cuando aqul
se
aproxima ala enzima, induce un cambio conlormacional en su estructu ra piotei-
:r,dg.modo que dichos radicales se colocan de la lorma apropiada para permirir
la unin del sustrato y la aproximacin a ste de aLninocioi el sitio cataljrico
para llevar a cabo su funcin- Estos cambios espaciales modiiican inciuso
la
orientacin de otras regiones de Ia molcula, y de uhi qu. dos aminocidos que
se
encontraban distantcs, lisina (Lys) y retionina (Met), se aproximen cuan'do
non asmetflca el
r de la enzima
sustrato est unido a la enzima (flg. 5.a)
La secuencia de acontecimientos que tienen lugar en el aj uste inducido permite
comprender tambin^ por qu compuestos anlogos al sustrato pueden causar
ilizarse para algunos cambios c;lformacionales en la enzima e i"ncluso ocupar (omodifrcar) los
actlva, en L- sitios de unin del sustrato, impidiendo la accin cataltrca d^e la'enzima.

Grupos catalticos
Las cadenas laterales de muchos aminocidos proteicos constituyen lactores
cataliticos en las reacciones orgnicas ordinarias. A travs del mismo -m.canismo.
dichos aminocidos participan en la accin cataltica de las enzimas E,ste es el
to por Emil caso de los aminocidos cuyas cadenas laterales pueden ceder o aceptar protones
rilar a la de os radicales de histidina (His), lisina (Lys) y cidos glutmico (Cf u y sprtico
descartado, (Asp)], y que actan de lorma reversible como cidorl.upu.., e ceei prtones)
ato, que no o como bases (capaces de aceptar prorones) (ng. 5.5).
t, el ntodelo Los radicales de otros aminocidos pueden cecler electrones a grupos cu),os
rdes de las orbitales no estn ilenos, actuando com rutclefilos. Este es e1 cas e los ami-
cintica de nocidos con grupos hidroxilo o amino.

:r, denomi-
esceptlcls-
,u bastante
;rltico, de

t
P

;rd u ra pro- Figura 5.4. Representacin del modelo de ajuste inducidor propuesto por Koshiand, que conlleva
un cambio en la cstructura de Ia enzima cuando el sustrato se une a ella.
r'l
r'i
I]IOQL]I;\4 I(]A
96

I NH
Nt1 L--N
I
cH -ctJ,</
U.-t\tl Hi.s
t-v,cn,-1/
-\) II
_ \ + )lil INfl
l- ^ Nlt C:U
I
I
NH
NH
I
I

Lys cu -(cH?). -NH,

cH -(cH,),-Nlli I

C:O
I C:o
I
I
NH
NH I

I
CIu ll -(CH,), -coo-
CH -(CH,): -cooH I

I
NH
NH I
-
I

CH-CI],-COOH Asp cH - cH,- coo

I

Acidos <=---S- Blses

\ F
H ll

cadenas laterales de algunos aminocidos

1-i

Figura 5.5. Intercambio reversibie de protones en Ias lr

de las enzimas
que actan colo SruPos cotalticos en ls molculas )
{

Mecansmo general de la catlisis

Laefectiuidaclcatalticadelasenzimasdependetantodelacapacidaddeunin En una
especfica con el ,ur,.to como de ia presincia de grupos cataliticos'
canzar uni cnfiguracin energtica-
reaccin ordinaria, un compuesto debe al
prru i.i'rransformado. En otras palabras: url compuesto con
mente desfavorabl"
alcanzar un nivel energtico
un determinuo rir5t',i.;;J.;';; oo-r,.],otIdebe en un producto' con un
ms alto (estado cte trans)cin), para ser transformado al inicia] (hg' 5'6)'
inferior
nivelenergrico lln4l (esrado final), que .roi-ut*.rte
es
energtica (energa
La formacin .t J. unr.iOn ,.fi.r.n,a una barrera
"riuo por el entorno para orle la reaccin tenga
rl.e acliuacin/, que debe ser aportada
de ls reaJciones ordinarias sc
Iugar. En ia p.u.t,.r, iu "n.igu de ictivacin
obtiene de un incremnto de l temperatura
o de un cambio de pH' ertte otros
factores' compietamente' La unin de
En presencia de las enzimas, esta sttluacin varia cuando este ltimo se
la enzima con el ,rriru,o alcanza tu ^yot estabilidd Por consiguiente' 1a unin
encuentra en una fr" l"t..media .^ u "n"rga" asi
enzima-sustraro (E:S;'i,;^.orrstituir el estadJde transicin' favoreciendo
que la reaccin tenga lug
energa de activacin nec
tanto, inferior a 1a que se
unin enzima-sustrato (fig'
barreras energticas, que
catalitica. La propia lormacion del
enzima a medida que trene lugar su accin
para su'posterior difusion al
producto y la aaaltacin de_i enzima al nrismo
de transicin' Estos cambios
medio conlleva ja formacin de un esr-ado energtico
 l:\ZlN4AS 9l

Es ta r.io
de transicio
N

l
Ecrciir dc
lrclrvirclon
{sin c;rtalisisl
R clcc i,l n"
-J con c:rtrllisis
c nzrnt il lca
r=

,J
IEP)-
E+S

Estado inicial Tiempo Estado nal

Figura 5.6. Cambios de enersia libre de una reaccin no-catalizada (linea de trazo grucso) y de la
ntisma reaccin con catlisis enz,mtica (l;;r;.r de trazo l-rno). La drl'erencia de enereia libre entrc
r nos aminocidos reactantes y productos es igual en ambas reacciones, pero Ia reaccin catalizada por lzr enzima se
realiza ms fcilmente (e incluso a mavor velocidad) porque la energia de activacin es menor
Ss indican con asteriscos Ios estados de Iransicil correspondientes a los compleos enzinra-sustraIo
(E-S). enzima-compuesto intermed jo tE - I) r enzima-producto (E - P)

se jndican en la ligura 5.6 por medro de asteriscos. aunque lgicamente ello

;idad de unin supone una simplificacin del proceso.
ticos. En una Cualquier reaccin enzimtica se lleva a cabo, por lo menos, a travs de cinco
in energtrca- etapas consecutlvas:
f,mpuesto con
vel energtico
o) Reconocimiento de la enzima (E) por el sustrato (S).
Iucto, con un b) Formacin del complejo enzima-sustrato (E-S).
ricial (fig. 5.6). c) Transforrnacion de este comple.;o en un complejo intermedio de transicin
tica (energa
(E-I)*, en el que se lavorece la accin cataltica de la enzima.
eaccin tenga
d) Formacin del complejo enzima-producto (E - P)
ordinarias se
e) Disociacin de este complejo en enzirna y producto:
i, entre otros
E + S e [ES] [EI]* c [EP] E + P

. La unin de
ste ltimo se
La energa del complelo EI* es superior a la de los complejos ES y EP,
respectivamente, pero las correspondientes energias de activacion que permiten
nte, la unin
convertir ES en EI y EI en EP son inferiores a Ia energia de activacion de la
oreciendo as
misma reaccin en ausencia de enzima (lig. 5.6).
rmbiental. La
Es importanl.e tener en cuenta qLre la presencia de la enzima no modifica lr
;icin es, por
energia del estado flnal de la reaccin. Sin embargo, Ia accin catalitica de las
o lugar dicha
enzimas preenta una serie de ventajas imprescindibles en las reacciones ocurridas
r una serie de
en los seres Yir os.
ionales de la
rrmacin del l. La union especillca dcl sustrato a Ia enzima, adenrs de reduci:'la reaccin
r difusin al a unos cuanros compuestos, [avorece Ia lormacin de un complelo que tiene una
stos cambios conllguracin ms reactiva que la de sus componenLes poi' separado
.r I,

rd llloQt-r lN'l1(lA

nucleolica. de
aqu1, lavoreciendo la accin
I

cil.;s i nLcrcambran Pi-otones con su Protoll'

grLr Po h id roxilo de la Ser, , t,
qu" a. Lsta fonna cede ms lcilmente

DE LAS ENZIMAS
CLASIFICACION Y NOMENCLATURA

A continuacin se Presenta un re
seis clases de enzimas reconocidas
subclases.
de
Clase 1- Oxido-reductasas' Son
las enzimas que catalizan reacciones
S y S':
xido-reduccin entre dos sustratos'
S..du.ido * Si*ia.o
: Soxid"do * S"ta"o

el nombre sistemti-
El sustrato que se oxida es un donador de hidrogeniones;
odor:aceptor xido-reducla-
co de las enzimas de esta clase se.or,rtruy. "oo
 ENZtI\'1AS i03

)a del .sa. El nombre recomendado por la IUB es el de desltidrogerur^ls, aunque puede

)tn. utilizarse alte:nativamente el de reduclasas. Alguna vez se cienominan oxidasas,
pcro slo cuando el aceptor es el oxigeno molecular.
E,stas enzimas catalizan las xido-reducciones de grupos CH-Ol{, CH-CH,
C:O, CH-NII2 y CH:NII, y en funcin de estos grupos se establecen las
correspond ientes subclases:
)or su
:S NO l.i. Actan sobre grupos CH-OH
como donadores de electrones.
ide se 1.2. Actan sobre grupos aldehdo u oxo como donadores de electrones.
j, por t.3. Actan sobre grupos CH-CH como donadores
/.ar la 1.4. Actan sobre grupos CH-NH, como donadores
aliza- 1.5. Actan sobre grupos CH-NI{ como donadorcs.
rten os 1.6 Actan sobre NADH o NADPFI como donadores
1.1 . Actan sobre compuestos nitrogenados como donadores.
re pli-
I B. Actan sobre grupos sullurados como donadores,
mica 1.9. Actan sobre grupos hemo como donadores.
clatu- 1.10. Actan sobre grupos difenoles y sustancias relacionadas como do-
,lmas. nadores.
iecida 1.11. Actan sobre perxido de hidrgeno como aceptor de electrones.
dicho 1.12. Actan sobre hidrgeno como donador de electrones.
c han 1.13. Actan sobre donadores sencillos, con incorporacin de oxgeno mole-
ca de cr-rlar (por ello se denominan oxigenasas).
mpre 1.14. Actan sobre pares de donadores de electrones, con incorporacin de
oxgeno molecular-
en en 1,15. Actan sobre raciicales superxidos como aceptores de electrones.
i sub- 1.16. Oxidan iones metlicos.
entro 1.11. Actan sobre grupos -CH,
: esta 1.18. Actan sobre ferredoxina reducida como donadora de electrones.
como 1.19. Actan sobre flavodoxina reducida como donadora de electrones-
I tipo 1.91 . Subclase formada por otras xido-reductasas no inciuidas en 1as ante-
\ztma 110res.
alza. Algunos ejemplos de esta clase de enzrmas son:
,AD+
)enzt- 1.1.1.6. Glicerol:NAD* xido-t.eductasa (nombre recomendado por la IUB:
,n del glicerol deshidrogenasa). Cataliza Ia siguiente reaccin:
,ztma
ue es
Glicerol + NAD+ : dihidroxiacetona + NADH
odas
runes 1.4.1.2. t-glutantato:NAD* xido-reductasa (nombre recomendado'. glutanta-
mero to deshidrogenasa)'.

t--glutamato + H2O + NAD

* n: 2-oxoglutarato + NH3 + NADH
le las
e las
Clase 2. Transferasas. Son enzimas que transfreren un grlrpo (G) diierente
del hidrgeno de un sustrato (S) a otro (S'):
:s de
S-G +S'S+S'-G
Los grupos transleridos son muy diversos y, de acuerdo con eilos, se han estableci-
do 1as correspondientes subclases:
inti- 2.1. Translteren grupos de un carbono.
tucla-
2.2. Transfleren residuos de aldehdos o cetonas.
I ()4 llloQUIMIcA

2.3 l-ransf;:ren grupos reciben no*b" de aciltransleraszrs)

"l
denominan glucosil translerasas)
; i i.""?n.r., -?;;p"'
7.5. J'rirnsf-teren gruPos s'

2 6 Trlinsfieren gruPos
2-1. Transeren gtupot que contrenen lsloro'
2.8 'fratlserell grupot que contienen azulre'
enzlmas'
Son ejemplos de esta clase las siguientes
23.|.7.Acetil-CoA:Carllilinao-clcetiltransferasa(nombrerecomendado..cTr-
nititta ctcelil transferasa ) "

Acetil-CoA * carntttna CoA * O-acetilcarnitina

2.1.|.1.ATP.r>herosa6-fosforransferasa(nombrerecomendado..hexoqttina-
sa):

ATP + >hexosa ADP * >hexosa-6-fosfato

la ruptura hidroltica de unio-

3. Hidrolasas. Estas enzimas catalizan
Clase
nes C-O, C-N, C-C, anhdridos fosf( ricos'
etc':

A-B+HrOr:A-H+B-OH
Las subclases de 1as hidroiasas son: (
I
3.1" Actan sobre enlaces steres' I
3.2. c1',r:--.iasas (hidrolizan enlaces glucosdicos)'
3.3. Actan sobre eniaces ter'
Actan t";; ;;i;"es peptidicos (pptidos hidrolasas)'
3.4. ^clN
- 3.5. Actan ,;;; ;;1;..t distintos de los peptdicos'
3.6. Actan sobre anhidridos de cidos"
3.'1. Actan sobre enlaces C-C'
3.8. Actan sobre enlaces de haluros'
3.9. Actan sobre enlaces P-N'
3.10. Actan sobre eniaces S-N'
3.1i. Actan sobre enlaces C-P'
Como ejemplos de esta clase tenemos:
3.1.1.8. Acilcolina acilhidrolasa (nombre recomenda
do. co line ster asa )'
Acil-colina + H2O e colina * cido carboxilico

r-a- a sp ar til ( L- d glut am i t ) - p p t ido hidr o I asa (nombre recomendado:

3.4.1r;7. -

antinopeptidasa A):
Pptido t--a-aspartlico * HrO + L-aspartato * pptido

iiberacin de grupos de los

clase 4. Liasas. son enzimas que catalizanla dando_lugl formacin
enraces c_c, c_o, c_N o simares dJ sustrato, 1la
forma inversa'
u oxidacin' De
de dobles enlaces, sin la participacin de hidrlisis
,u-*Uin .utalza 1a inciusin de grupos a los dobles
enlaces:

CX-CYX-Y+C:C; A-BA+ B o D:E+H-IDH-EI

 EN 7-IN,IAS
r05
l nsle rasr.,j)
crsas). Las subclases son:
4.1. Liasas de enlaces C-C.
4.2 Liasas de e nlaces C _ O.
4.3. Liasas de enlace-s C N
-
4.4. Liasas de enlaces C-S
4.5. Liasas de enlaccs C - Haluro.
4.6. Liasas de enlaces p-O.
4.99. Otrasliasas no incluidas en las anteriores su bclases
Como ejemplos de esta clase tenemos.
4'2'l'2' Malato hilroliasa (nombre recomendad o:
ruarcsa ) :
fltnlarato hidratasa o fu-

Malatolumarato+H,O
4'4 1'14' S-adenosil-t--nte tionina ntetiltioadenosina
Iiasa (nombre recomenda-
do: I -ant inocicloproDano_ l_carboxitoto ,r.ioro).'.
unlo-
s-adenosir-l-metionina 1-aminociclopropano_1_carboxirato _r_

+ metiltioadenosina
Clase 5' Isonterasas- Estas enzimas catalizan cambios geomtriccs.
pticos
(ismeros de posicin) de una morcura.
:::::,r^'1*ies
lsomerra que catalizan, pueden denominars
De acuerdo con er ripo de
e racemasas, epinterasas, cis_rrans_iso_
tt|erosos: n.utomerasas, rnurasas o ciclo-ison.terasas.
Las sutclases son:
5.1. Racemasas y epimerasas.
5.2. Cis-trans-isomerasas.
5.3. Oxidorreductasas intramoieculares.
5.4. Transfrasas intramolecuiares.-
5.5. Liasas intramolecuiares.
5'99' otras isomerasas (constituye una subcrase de miscelnea).
Como ejemplos tenemos:
5.1.1.13. Aspartato racemasa (con el mlsmo nombre
recomendad o: asparrato
racemasa),que cataiiza la t ansformacin:

L-aspartato d Daspartato
Maleatc cis-lrons-isomerasa (nombre recomendad
o.. maleato
rasa);

Maleato fumarato
5'4.2.6. p-t-glucosa-t,6-fosfontutasa (nombre recomendado:
p-fosfogrucomu_
tasa ) .-

p->glucosa-1-fosfato a: p->glucosa_6_fos[aro

Clase 6. Ligasas. Catalizan la unin de dos molculas, acoplada a la hidr_

de un enlace pirofosfato perteneciente a una molcula
de ATp o a un
 BIOQtl I i\llCA
t06
enlace
ceso se lorma (o se hiCroliza) un

S SUbCIASES:

ricos.

Como ejemPlos Pueden citarse:

6.3.1.7.t-glutamato.anotloligasa(nombrerecomendado..glu!amato.anlol.llo
ligasa):

ADP * ortofosfato + L-glutamlna

ATP + L-glutamato + NH3
piruuaro
ligasa (nombre recomendado:
6.4.1-1. Piruuato"dixdo cle carbono
carboxilasa)"

+ HCOt ? ADP * ortolosfato * oxaioacetato

Piruvato + ATP

ISOENZIMAS
 EN 7,llr,f AS
107
rl la cc tctrmero fonnado por cios
-:
sL bunida
ro ell
LCCIO-
,sis de
Para
i.t.Ill
se trate:
ra de
s, hay (LDI{_1, o rsoenzrma de1 corazn)
s le ra-
THgH
rJHHM (LDH_2)
IUB HHMM (LDH_3)
so de HMt {M (LDH_4)
rlngl- MMMM (LDH_5, o isoenzima del msculo.)

eso del propio piruvato. De esta lorma el

.aerobio activo, canaliza e1 piruvato
t10nto in completa a CO, y FIrO, vez de

ai en el metabolismo de determinados
nlna rtantes en el diagnstico clnico diferen_
os permite diagnosticar el dao de los
LlLlal o e tema se tratar con ms detalle en el
que, precisamente por sus dilerencias
dentiflcarlas y anaiizarlas. Al poseer
:tato ferente velocidad en un determinaclo
n.iacilidad por electroloresis. Asimisrno,
abilidad al calor, resistencia a agentes
oenzimas o ambos.

as del TEXTOS DE CONSULTA

; uelen

dien- Bernhard, s. A.:,Esrrctura yfuncin de

r
u"r,.;;olii* H. Brume Edit., Madri d, 1977.
ras enzin.tas,
ZIInAS The ,nry^"t vot. t-itx, Academjc p."rr,,_,"ua york y Londres,
.@d.):
o son ,..tT;fi;#.,.tJ.: Methorts of enzyntatic anatysis (vol. I_XII), Vertag
:cuen- Chemie, Weinheim,
rable-
f Biochemistry, Academic press, Inc., Nueva
, pero
se les
H. Freeman and Co., Nueva york, 19g5.
control, Scientific American, 229.52_64,
ct o res
or un Koshlan , G., y Eilmer, D:.Compar]son
rmar-
lClAlO
and
Srere,
Tsou'
p
C'
9f experimental binding data
;L:J:::';#;?:::#,"ffi;,r;,r.#zi;,yr;.ilJ;jl,szi
Ir ntos, active sites"in'some-enzymes, in limited and flexible
molecular
,, , ,.:Ci9lr, ,_TI BS, ocrubre, pgs. 427 _i2q, f SSO.
o con walsh, Ch.: Enzymatic reactions mechanisms, v.
ro un H. Freeman and company, san Francis_
co,1979.
tI ntica enzt n'}tica
E,t'tl-to !{ Exl't< '
 llloQUIN4lcA
I l0
stico clinico y al uso de ias
enzlmas
(vase caPitulo 7)'
ltay que
ul.s d" la cintica enzimtica
comeutan a continuacin'

Y FACTORES O'UE LA AFECTAN

VELOCIDAD DE LA REACCION
Velocidad de la reaccin

o
!

e

!
o
o-

'tl,
ii'
ll
,;l:
,ilr;
til
:li
li
Figura
a cabo
6.'.
con
I:i:1.'ill'?u2:i',:":::T^"li}",:''T
y .nia
.".i.l^^ ri,r g.t", se ha
ffi:Ltr1
representado

,,i reaccin co ^.,"

cl corresPo
 (.INL I ICA EN7-IMA I ICA
Iil
:nzlmas Por otro larlo, tambi. se observa que, r partir de un determinado
momento,
ya no aumenll la crnrid:rd cle produto loimado; ., ..ir, la velocida
reaccill disminuye a parLir cle un cierto momento, llegando a igualarse
" lu
ray que u.".o.-E'
este punto se dice que ra reaccin ha arcanzad.o equiriq. puesto qr.L
velocidad de la reac.cion es mayor cuanto ms elevada es la concentracin
de
sustrato, dicho equilibrio se alcanza anles con concentraciones de
sustrato altas
\N que con concentraciones ba.zrs
Maternticamente, la velocidad de la reaccin se expresa como

_ .l[s] d[P]
cambio '- dr - dr
rrpo. si
:cin y que no es sino la variacin de la concentracin del(de
los) susrrato(s) o del(de los)
So), al producto(s) por unidad de tiempo.
CUfVAS
lnte re-
ado en FACTORES OUE AFECTAN A LA VELOCIDAD DE
icentra- REACC]ON
e accin Efecto de Ia temperatura
eaccin
grnento Dentro de un determinado margen, la velocidad de las
cin de reacciones enzimticas
aumenta al elevarse Ia temperatura. Se deomina coeficiente
,rcional cle t"n prrot*o , o:;,
al incremento producido en dicha velocidad rl au-Jniailu i.*p..atura 10 "C, y

C
:c6
OE

oo
E_
!>
!o
'!

e se lleva
;ial de la Temperatu ra
esen tado
Figure 6-2- Electo de ra tempcratura sobre la verocidad de una reaccin
\
enzimtica.
 I}IOQUIMICA
1r2
\as tartttcrotiLrat (por
como relacin de las velocrdrdes a cada'nl^d.:
se expresa 'j.*",1",r...in a 30 "C/velocicltrd a 20 "C)
l1

ejemplo. velocidacl
"C
Velocidad de la reaccion a 30
Qro : Gro-o.io tlu u 20'c
""ti'.'

sibiemente

Efecto del PH
 CINEl'ICA ENZIMAI-ICA
H3
lLu'e.\' ( por pH primo

enzr rr:r I t-
c
rcidad cn .: o
!-
oduce tr n
: denonri-
i.-
j

lor al del =-
oo
: algunos
xintos a '!
=o

ttura que
ica de las
ntica se
tzlma, un
niento de
rras ms
re llega a
:e actrva.
raliza), y
Figura 6'3' Efecro der pH sobre la velocidad de una reaccin enzimtica.

,::".,::,::.":j?::^:il1e1,erta esrrucr.ura terciaria y cuaternaria

de la mor_
pH del ;iJ,x.* E':T1"::,,1x::':
alejadas . f l.q r;;;;;
;J;.';,'l*r'1
,q:.1 J',1i!l:fllf;".'i#,::";
1";;:,;r;;;;;;lJi
la seme-
sobre Ia de Ia actividad enzimtca
car9a. Un cambi
l:1,,::,y1::'r^Lg.I","o*;;;'i,.,:?;['f.,Y,1.,,T"i,1 onando prdida
j!,#;g:*#:
t)lo, que
: ambas
aquea Papel de los iones metlicos
ocurre a
afecta a
:ando el
ambos
.nuyer la

leremos
oroduce
t posrtr-
* EH,
T -S_M
alto, el M-E-S E_M-S
posltlva Unin al sustrato Unin a la enzima puente entre E y
r, extste S

tig. 6.3) M
r n terac-
E Complejo cclico
ls alto
t14 I]IOQUIMICA

sten en realidad en
s metaloenzimas qP eq
tiene. que lormare
Ieo binario E-M:

v,
E-M * S * E-M-S, S-E-M oE
S

Una misma enzima puede formar uno de estos complejos con.un sustrato La
determinado y un compiejo dilerente con otro sustrato- En cualquiet .caso, los pe
iones metlics, debido tu, .u.u"tersticas fisicoquimicas, pueden participar en la
reI
arlryidad-aruilsfuica a travs {g cualquiera de los mcqqnin'rc conocidos
de
quimicas: .etlitit .o-b^ tar
eleracin de la uelicidad de las reaccioes
in
de
lor
del sustrato. rei
inl
da
EOUILIBRIO DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS di,

Efecto de la concentracin de los reactantes sobre la velocidad CU

de la reaccin y constante de equilibrio 1)
Ile
Eu cualquier rea ;cin qumica, al aumentar la concentracin de 1os reactantes oe
aumenta la irecuencia de clisin entre sus molculas y, por tanto, la velocidad
de
CI(
Ia reaccin. As, para Ia reaccin A + B - AB, al multiplicaMr .dg, 1o vl
concentracin de uno de los reactantes (A o B), se duplica la velocidad de ia CT
reaccin. A Su vez, la duplicacin de los dos reactantes aumentar en cuatro
veces
la probabilidad de colisiu entre e Ia veiocidad d
Esie principio es general para tod quimicas, y en
tambin pra las*catalizadas por e enunciarse c R

uelocidad-de una reaccin es priporciona traciones de las dr

reaccionan. Para la reaccin A + B * AB, la velocidad (v) es proporcional^al
producto Ce las concentraciones de A y B (v [A][B]) P1i" la reaccin A + 2R
'---'
n - Br, v a[A] [g]', y en general pra cualquier l?-c:in con n molculas del pr
reactante V * d.l B: nA + mB * A.B^, v a[A]'[Bl'' (s
Otro concepto importante es la reuei:rsibilidad de las reacciones qumicas' La dr
velocidad hacia uno u otro sentido
respectivas de los reactantes, sino tam tr
paia cada direccin de la reaccin, y f^(,
I

mutua de dichos reactantes- Teniendo l

el signo de proporcionalidad por el de n(
Asi, para Ia reaccin S(

nAfmBdA"B-, d
q
la velocidad hacia la derecha (vo) ser: va : !0,[4]1tBll:yJa velocidad hacia Ia tr
iiqri".au vi : ki[A^B-], donde"'ko y-1c, s-on-l-=coiresponclientes constantes Ce la ll
reiccin ha-cia Ia erecha y hacia la izquierda' d
 CINET1CA ENZIMAI ICA l15

LS CIIZInlAS Cuando Ia velocidad en ias dos direcciones es idntica, el sistema aleanza el

colrplejo equilibrio Es decir, en el equili)-iio: vo : v;, lo cual significa que
nte por Ia
kd[A]"IB]- : k;[A"B".]

y, despejando:

ko_ [A.B-]:K-
qq
ki [A-l^[B]'
n sustrato
- caso, Ios La K.o sc denontina conslanl de
cipar en la pea un papel imPortante en la
ocidos de results obvio, es imPortante dest
.e, catlisis tante)) para una determinada reaccin. Ct
ccronan o i;Ji." {r., "., el equilibrio, la concentracin de ios reactantes del segundo trmino
I enzlma o de la reaccin (1o que normalmente denominamos productos) es superior a la {e
ios del orimer i.ino (sustratos). En este caso decimos que e n el equilibrio la
reaccin est desplazad,.aa Ia derecha>. Y, a la inversa, cuando el valor 9t \.o
tt
inlerior a 1a unidad estamos ante una reaccin que en ei equi[brio est desplaza-
da a la izquierda; por 1 prximo a la unidad' se
dice que 1a reaccin est
pra comprender la g S es importante ten.er en
idad que constante de equilibrio:
cuenta dos cnceptos lundamentales
1) el equilibrio es un estado-dj a que cuando una reaccin
reactantes
llega al'equilibrio, a pesar de no neto en las concentraciones

Iocidad de
de ios sustratos o de los produc e una continua translorma-
,or dos la cin de unos en otros; y i1 tu constante iene un valor numrico que
viene dado por la relacin de las concentraciones de los productos y los sustratos
iciad de la
en e1 equilibrio.
ratro veces
reaccin).
TSECUENCIA,
r sigue: /a Retacin entre la constante de equilibrio y el cambio
lculas que de energa libre en una reaccin
rrcional al t
nA+28 El desplazamiento a Ia derecha o a la izquierda de una reaccin qumica, y su
lculas del propia velocidad, dependen no sio de Ias concentraciones de los reactantes
(susiratos y productoil, tit o tambin del cambio de energa libre (AG) que ocurre
micas. La urunt. la accin. Segn la segunda ley de la termodinmica, son reacciones
)ntraclones espontneas aquellas que cuando se realizan en condiciones adecuadas producen
racteristica trbajo. Es deir, .rundo el valor de AG es negativo, Ia reaccin tiene lugar de
la ahnidad form espontnea, mientras que si es pcsitivo, aqulla no se produce- En este
sustltutrse lrimo cso, la reaccin ocuirir en sentido inverso, que es en el que AG.es
velocidad. nesativo. Si AG es igual a cer^ la reaccin no se produce hacia ninguno de los dos
sentidos, Io cual significa que est en estado de equilibrio-
En una reacci muy simple, A B, cualquier incremento en la concentracin
del susrrato A produce un dsplazamiento de Ia reaccin hacia Ia derecha, hasta.
que se establec un nusvo equilibrio. De igual forma, un incremento en Ia concen-
rd hacia la tracin del compuesto B dai lugar a un desplazamiento hacia Ia izquierda, ha.sta
. nteq rle l&
llegar al equilibrio. Ccmo hemos visto antes, ei valor de AG de una reaccin
deiermina ia direccin en que sta ocurre; resulta obvio, por tanto. que dicho
 BIOQUIMICA
116

de los reactantes Y' Ios Productos

valor depende a su vez de las concentracioneses:
L, **i" que relaciona estos parmetros
rB-l
AC: AG" + nf tnffi

AGo : -RT ln K.o

AG" es el cambio de energia producido
productos se encuentran en condiciones
ccncentraclones son 1 moiar'
y el valor

gtica menor.

ORDEN DE LAS REACCIONES

Y ACTIVIDAD ENZIMATICA

ster:

o o
ll
ll

R-C -o-cH3 + Hro a R--oH + HO-cH]

 CINE'TICA ENZIMAfICA t 11.

prod uctos Estas reacciones se Comportan Como si fueran de primer orden y, en conse-
cuencia, su velocidad aumenta progres/vamente a medida que se eleva la concen-
traci del lactor del cual depende (en nuestro caso, el sustrato)" Grf-rcamente, la
relacin entre la velocidad y el sustrato en este tipo de reaccin es hiperblica
(fig. 6 a). Ello se d-be a que, si se mantiene hja la concentracin de enzima, -\i se va
aentando Ia corcentracin de sustrato, se alcanza q-rl yal9.de'veloerdad'en que*
; el cambio
]a can-!!$a.Q,d,9-enzima ser'hacoi'l"i'fiiit''nrt'#A digh&v;e-lo.eidadrss"jle,denomia
ue'Laci=
,s sustratos .dad ntxuna (V*:J; t elant'e.
,ibre, AG', Existen tambifr , tazl.a?qr-u-.9.1t1,fa,ke,1o se' en las que
r constante la velocidad es,indep'e'n'diite,ll!=fd9:: 'i;s''u'sEr=a;tors; es decit, reac-
ciones en las que la adicin de ms sustrato no modifica la velocidad de su
transformacin en producto. En este caso, ia velocidad de desaparicin del sustra-
to o de lormacin dei producto es constante, independientemente de sus concen-
producido traciones respectivas. E,n estas condiciones, l"acea.r*tidad.,de sus.rat,o),:gue se.tran:sf@;ri-
,el tiempto
ondiciones - ma (o ia cantidad de producto que aparece) vaa*de,,rrrodor'lineal.con
(flg. 6.5); .la pe.4di-e.:L,Le..:.d,e,,.1a-'recta,,oo'.rrosp'olhtiTlf-fjdpes'T{t,':t' acl'ui:dad d*l
, y el valor
e n : int.a que -cataliza'.l a',rieaocin,,
:cin de la La aeti,vidad.de',lairenzim,a,-,ise expresa en unidades (U), que coruesponden ar,J'p,s-B
uctos Y del micrornoles' (rmole).1d,e,,s.8.s-t,ri4[Q,,tra.nsf.om*ad'o:si1;ernr:productor,por minuto en::J.ft*
rnstante de condiciongs- espe
: equilibrio proteinas, ".se,,de
se realiza r-moles,,de,'sustra
rdica nada, na. E s t a ca,n lid a d -.d e. rpro e.ita.ajn o.'co. rre
lepende. de ,todas ias,rp,r.otein4p p-f'9s-.-Ilt9-:<e,ftllr?,,;rnqu*e-E[ria. Cuando se trata de eOzinaS,:pufif-reafr
actlvaclon: das. se.,utiiiza,ni:'1as;e'xpr.e.siones.-con,t a.ntle,:c:oit@];tiica{ac:Liu'idadt'nto:lecular o nnteroade*
de actlva- ':ecambig, euele r,e.figr,e:nra,.l"as:uniidadestrdletactir/iildadrlfot.*lo,lcu1 de'enzima. En
entalmente los casos en que la enzima tiene ms cic un sitio cataltico, la constante catalitica se
, y lavore- expresa en luncin de una subunidad de la enzima y no de la molcula proteica
rrera ener-

nir sta en
e rePresen-
rentes de la
[ ---+ B, la
r el caso de =
na reaccin
'eaccin es
:[A][B]'zY
proporclo-
de segundo
- lo que la
caso de las
e un enlace
tsl

Irigura 6.4. Relacin enrre la concentracin del sustrato [S] y la velocidad de una reaccin enzim-
tica. A concentracin constante de enzima, valores altos de [S] llegan a satutar el proceso. de forma
que se alcanza la velocidad mxima (V.;,)
118 BIOQUIMICA

oo
dO
a
,o
:.4
-o9
: actividad dc la enzima
o .:

oh
o
Oo

Figura 65. Desaparicin del sustrato o formacin del producto en funcin del tiempo, en una
reaccin enzimtica de orden cero. La pendiente de la recta corresponde a la actividad de la enzima.

completa. Para adaptar mejor Ia terminologa enzimtica a la de la cintica

qumica, laJ*U--Ba propuesto la utilizacin de una-.nu:eva"unidad enzirntica, eltr
,k"er:a(ka@+ que ra::lartf-iapsfof,r,nacin-:de't'nroi-de sustrato/segundo. El
,V..lg-rr- de*lr1.ka,tpsSerrr{t::aS;ttpr,igr.:al,.d.e ,una, un'idad-
p_ero existen subunidades
menores: elmilikatal (mkat), que corresponde a 1 x 10-3 katales, elrkatal (pkat),
que corresponde a I x 10-6 katales, y as sucesivamente.

Relacin entre las concentracones de enzima

r la velocidad de la reaccin

Si se aaden cantidades crecientes de enzima a una cubeta de reaccin en la

que se han etablecido las condiciones ptimas de pH y temperatura y en la que
hay cantidad suficiente de sustratos y cosustratos, se observa que la velocidad de
la reaccin es directamente proporcional a Ia cantidad de enzima, establecindose
una relacin lineal entre ambos parmetros. Consideremos ahora que en la cubeta
se encuentran todos los ingredientes necesarios para la reaccin menos la enzima.
Cuando se aade una determinada cantidad de enzima se inicia la translormacin
del sustrato en producto, pero no hay todava molculas de producto que puedan
convertirse en sustrato, en la direccin inversa. En este momento, la reaccin
transcurre a una uelocidad inicial, que es directamente proporcional a le concen-
tracin de enzima. De hecho, si se representa la aparicin del producto en luncin
del tiempo, a distintas concentraciones de enzima (frg. 6.6), Ias velocidades iniciales
vienen dadas por las pendientes de la zona recta de cada lnea. Se observa que la
velocidad aumenta progresivamente a medida que se incrcmenta la concentracin
de la enzima. En todos los casos llega un momento en que se alcanza el equiiibrio;
es decir, en un determinado tiempo deja de aumentar la concentracin de produc-
to [ormado. Este equilibrio se alcanza antes cuanto mayor sea la cantidad de
 CINETICA ENZIMATICA I t9

o
!

E
o
o

!=
o
o-

Tiempo

Figura 6'6' Formacin del producto en funcin del tiempo en una

reaccin enzimtica en la que,
1a manteniendo constante la concentacin de sustrato, ic va duplicando
la de enzima [E]. Se observa
que ias velocidades iniciales (v) varan de igual forma que
a. ae erzia, y qre .l
concentracin
equilibrio de Ia reaccin (momento en que no sigue formndose
ms producto) se alcanza antes
cuanto mayor sea la cantidad de enzima presente.
a
:l
:1 es la siguiente. al orincipio de
S
el sustrato (S), que despus se
t, dejando Ia enzima libre" Las
S:
ii
kr k2 ii
E + S e----+ ES ----iE + p. :ii

k- 1 k-2 ili
.I
sin embargo, esta reaccin puede representarse grobarmente como !,

kr I

E+S_E+P ii
l,

k_2 iil
ill

.k-,Puesto que el complejo ES es normalmente muy pequeo y Ir

y k, son prcticamente iguales, pero de,igro opuls, r.ruttalos valores de rli

qu.: iii
lii
Vr : krtEltsl y y_z: k_rtEltpl lii
'il
De esta forma, la constante de equilibrio global es: ii
lri

K.q _ tEltPl _ iP,l ll

tEltsl tsl
es decir, que ia concentracin de
la enzima no alecta al valor de la
equilibrio de Ia reaccin, concepto ste muy importante, pues constante de
indica que la
 BIOQUTMICA
120
sul
se re]tza medtante
constante de e reaccin es igual tanto si sta ci:
Es dttit'?"#i*^t influyen sobre el curso de la
catlisis enzirn
reaccin,peroSConcentracionesnalesdelasSustanclasteacclo-
brio' que ;;;;;t it de K'o v de AG"' rel
nantes cuando 'utot"s mr
in
SLI

CONCENTRACTON DEL SUSTRATO m

la reaccin
Relacin entre la velocidad de h
y concentracin del sustrato UI
C1

Siguiendo con el planteamiento

anterior' considere d
de
donde se han ,nui todos los pH y la temperat-
componentes q
.-","" del sustrato, y donde el
cantidades Progre.slvame C:
inicial cle la reaccin'(es

il:;'fJ:3,T $lxil'l if
p
n
,.'lJ:t""?1":^';,,1;i':^
cuando la cantidad de
cuando la enzima se ha I 'cir' las mo1cu1as ti
todas enzlma-
sustrato supera la de enzin
d
S
ticas estn ocuPados Po
enzima y sustrato no'lleea a s.er equimolecular' y C

para que sta se

-Jil"ilde sustrato que e_enzima
molculas
activo de 1a enz
,'., ur"quiuiiiaud del sitio
sustrato (Por lo que es ne t
amente alta
;l,t;:';i'::l:"*ril:
en la gr
:L-
n entre concentracin de
Resumiendo,

'I

C
!
2
o

t/
t/
r/
tsl ------->
en una reacclon
Efecto de la concentraclon
del sustrato [S] sobre la veiocidad
Figura 6.7-
enzimtica
 CINETICA ENZIMATICA I2I
rncd ian tc sustrato y velocidad de la reaccin (g. 6.7) existen dos zonas clararnente diferen-
rso de la ciadas: '/
. reicclo- 1. A concentraciones bajas de sustrato (zona A>i), cuando la velocidad de la
,de AG"
reaccin depende de su concentracin (aumenta o disminu"e en funcin cie incre-
mentos o decrementos de la concentracin de sustrato), las variaciones de sta
inducen modiflcaciones en el mismo sentido de la cantidad de enzimd asociada al
sustrato. Es decir, en esta zona, Ia concentracin del complejo ES y, consecuente-
mente, Ia velocidad de la reaccin, dependen de la concentracin de sustrato.
2. Cuando la concentracin de sustrato es alta y Ia velocidad de ia reaccin
ha alcanzado el vaior V** (zona B), prcticamente toda la enzima se encuentra
unida al sustrato. En esta zona, aunque se produzcaun aumento de la concentra-
reacclon cin de sustrato y, por tanto, de la frecuencia de sus colisiones con las molculas
mtica a
de enzima, no hay cambio alguno en la velocidad de ia reaccin, ya que no
\l aadir quedan molculas de enzima libre.
,'elocidad
rando ha Con fines didcticos, en este captulo se considera que las reaccicnes enzimti-
or mxi- cas transcurren con Ia intervencin de un solo sustrato y la formacin de un nico
t alcanza producto, lo que, sin embargo, no una excepcin, dado que en la
tidad de may.or_a de los procesos enzimti dos o ms sustratos y aparece
; enzim- tambin ms de un producto. No Ios planteamientos aqu utiliza-
n entre dos siguen siendo vlidos, ya que tudios cinticos se realizan manteniendo
has ms slo uno de los componentes del proceso como factor limitante y: en consecuen-
lebe slo cia, como si hubiera un nico sustrato.
culas de
rntizar el
io de la ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN
acin de
En cintica enzimtica, al igual que en cintica qumica, la velocidad de las
reacciones se expresa en funcin de la variacin de la concentracin del sustrato.
Por ello, ia ecuacin que def"rna a una reaccin enzimtica debe relacionar estos
dos parmetros. En 1903, Henri propuso una ecuacin para la velocidad de las
reacciones, que fue modificada en 1913 por Michaelis y Menten, y completada
nalmente por Briggs y Haldane en 1925. A pesar de la participain d todos
estos autors, la ecuacin se conoce como ecuacin de Michaelis-Menten, y se basa
en tres suposiciones. La primera, que el complejo ES se encuentre en estado
estacionario. Es decir, que en el transcurso de la reaccin, ia concentracin de
dicho complejo permanece constante a pesar de que, precisamente a travs de 1,
muchas molculas de suslrato estn siendo convertidas en producto. De hecho,
como se muestra en la figura 6-8, mientras que, en el transcurso de la reaccin, las
concentraciones de sustrato y producto disminuyen y aumentan, respectivamente,
la concentracin del complejo ES, una vez formao, permanece prcticamente
constante; es decir, puede considerarse que d[ESlldt :0, siendo l el tiempo. La
segunda suposicin es que bajo condiciones de saturacin, toda la enzima inter-
viene en Ia formacin del complejo ES. En realidad, en la etapa de mxima
formacin de producro, el valor de [E] es muy bajo (fig. 6.8). y ia rercera suposi-
cin es que cuando toda la enzima se encuentr .n forma de complejo E^s, la
velocidad de Ia reaccin (es decir, la de formacin del producto), es la mxima
posible (V*a,).
Bajo estas consideraciones se deriva la ecuacin de Michaelis-Menten corno
a reaccron
sigue. AI poco de iniciarse una reaccin enzimtica, el nmero de molculas de
producto formadas es muy escaso y, por ello, muy poco probable que se transfor-
t22 BIOQUIMTCA

tPl

a
LI
A
05 o
o5o ul
6

t.- tsl

IES]

tEl
0
TiemPo

sistema enzimtico durante el

Figura 6.8. Cambio de concentracin de los componentes de un
de las concentraciones de sustrato [S]
transcurso de una reaccin- Aprciese la distinta magnitud
o a las del complejo [ES]'
o f.oar"to [P], con relacin 1", de enzima libre [E]

qu-e corresponde precisamente a la

men en sustrato' En consecuencia, esta etapa'
ili;-;;I".tad inicial de Ia reaccin, puede escribirse como
k1 k3
E + S.--* ES'--------+ E * P (6. 1)
1.
K

a de formacin de producto' La veloci-

del comPlejo [ES] es

locidad de formacin a
PYenE+S(vYv')'
por tanto:
d[ES] : (vr)
-Vg
+ (v)
(ul) -
dt

Dadoquedesdeunprincipio.hemos'Consideradoq"...:l:Tbiode[ES]conel
respectivos valores e igualamos
tiempo es 0, si sustituim'os las velocidades por sus
a 0, resulta que:
0 : kl[E]tsl kr[ES] - k3[ES]
-
can tidad de
o
(6.2)

la
es iguai a
Por otro lado, Ia concentracin total de enzima [E,] el sustrato
complejo con IES]; es decir:
enzima libre [E] ms la que est formando
[E,]:[E]+tESl
 CINETICA ENZIMATICA t23

o, lo que es igual,

tEl : [E,] - tESl @)

Sustituyendo esre valor de [E] en la ecuacin (6.2), queda:

0 : k,([E,] _ tEsl)tsl _ k,[ES] _ k3[ES]

AI despejar el lactor comn y pasar los trminos con distin,o ,lgn; al otro
miembro, resulta
' k,[tr,][S] : kr[ES][S] + kr[ES] + k.[ES]
y haciendo ahora factor comn a [ES]:

kl[E,][s] : [ES](k,[S] + k, + k.) -

de donde
rante el
rato [S] k1[E,][s]
[ES] :
teala y al dividir numerador y denominador por f.,l-oili.r"
ES -- IE,][S]
(6 3)
(6.1)

veloci-
El factor k, + k.74c, est constituidoni.camente por constantes, por ro que
o sea,
corresponde tambin
rcidad 1y"u constante que recibe el nombre de K_, o'cnstante'de
Michaelis-Menten. As, la ecuacin (6-3) puede escribirse:
I par.a
lversr-
--=\
:Sl es ()) (6.4)
cin a
Y vz), Dado que, como hemos indicado antes, Ia velocidad de la reaccin
es la de
formacin del producto, cuyo valor es v3: k.[ES], de la ecuacin
(6,4) podemos
derivar la siguiente: C Sl
C
(::-
-a c.[c t' '-( 4]'. l-
\ 3 - K3 cr=\
I 'l :" ,: ": . [.'l ,)]r,"
'Y- t.: *lr
.2,.y: Sgrt:r
i
con el ?-> =Y3. O -, tsl+K- c6a>)?Kr,r,".. Kr_.__ V:\./-"
lamos K-j Tambin hemos indicado anter que .no la concentracin Y
del sustrato es
muy alta, la velocidad de la reaccinis mxima (V*r).es
(6"2)
aecll si hacemos en la
ecuacin (6-5) tsr mucho mayor qu,e K- (es decir,'li"sl
constante queda prcticamente anulado (se hace
,, [-, Lt varor de esra
ad de , .i uyo . u : v*,. As:
decir:
, : k.[E,]
fYmx
o sea, Vmx : k.LtE,]
F4 0-; @
s oli -i.,ye n{
t24 rlroQUIMlcA

Al sustituir k,[E,] Pot V.r, cn lzi ecuacin (6'5) res u ll-a:

la
Y. I '. i;', r I <.. a (' la
L)c. ! ^-,. o v*e*[S]
\t
, ( ,1C{r)\a') a-, Li
[S] + K",
F-r

.l
x 6ri
)t

en' orresponde a la de una Ld

que es la ecuacin de dt
va u y [S]' y las constantes
hiprbola (y : a' rlb resentacin grca de la A
y son V-1* y K-, r ,y al
;"1;'d"; ifil"r i" ; de sustrato (trg 6'7)
M
-J*'v
--- !"
lo
m
Evaluacin de la ecuacin de Michaelis-Menten CE
y significado de la K- pl
de ajustarse a ia representacron grfica de la relacin
velocidad-
Adems
de Ivlichaelis-Menten se derivan datos
concentracin de sustrato, de la ecuacin
importantes bajo los siguientes supuestos:
del sustrato es igual al valor de K-
1. Si consideramos que Ia concentracin
(es decir, K- : [S]), dicha ecuacin se
convertlra en:
Vrn*
- 2

ESta expresin nos deltne el valor

:--r
concent;acin de sustrato cuando I
la velocidad mxima. En consecuencla'
+
't k
el valor de K. mediante la representactc 'l^-uf2 o
pue.de deterr
ig. 6.2). si se onoce la V**, ese valor (1i2V-a*), Que, a su vez, corres-
s
sustrato que correspo"J'^, mitad de l(^
Donde al valor de Ia K.'
' 2. Si consideramos que la conce-ntracin del susrrato ([Sl) es muy inferior al
dc Ia +v 3, i-c \ LL
de [S] en eidenominador
valor de K-, entonces puede desprecrars"-.ir^lot
ecuacin de Michaelis-Menten, - V--.;r 1
L=-,-s_
V-a*[S]:t"l..-, V.*
=-x-. K- ,t
V-
Vtrc^*r C)
8.,^
\/ ' -
/<\
L J \
V ^-^
l^

:.i : [:1' ['

strato' ) - t_. -<1 --)
a comentado antes' cuando Ia concentra- t' - ('\lyr-: i'-.
t'i

cindelsustratoesmuchomsaitaqueelvalordeK.,puedeconsiderarsesta :r\- CSf

de Michaelis-Menten; por tanto,
igual a 0 en el denoinador de la ecuacin \ I <> (1 .
e\ Cr^\:io rc
i- ,-. 'r-. .t '. I .'-'--"
 ,l
( ClNlr'ftCA aNZII1A'I-ICA 125

-l t- -l E.lectivarele, en [a figura 6.7 vemos que cuando el valor de [S] es llluy alto,
..i ', \<^)l
.l
la velocidad inicial de la reaccin es la V*'. ./

V - V-'--.., -''r''i' .\ ir i
Linearizacin de la ecuacn de Michaelis-Menten
I i a\
'J!. I,

1< \ ,n..<.:,\ cc tc rz^ - v^-.,r La representacin gr1rca de las velocidades iniciales de una reacein enz.imti-
iones de sustrato requiere de muchos puntos, por tratarse
ulta la determinacin de la V-* y de la K- con precisin.
as requieren concentraciones rnuy altas de sustrato para
ello ha llevado a la transformacin de la ecuacin de
de una recta (y : a * x). Se han propuesto varias
earizacin; de entre. elias, hemos seleccionado tre s de las
n propuestas en principio por Woolf, pero que se cono-
mo ecuacin de Lineweter y Burk, de Hofstee y del
eaDer y Burk se obtiene invirtiendo Ia ecuacin de IvIi-
ivan datos chaelis-Menten.

rlor de K- v' __
v-*[S] I +.5- : __ry_ + KT==
, : [s]V-a*[S] _,
c. /i.r'c.\' . ct a c{q 1,1 ,z.cL\,a). - [S] + K- ' v V**[S] V.a*[S]
i,.$-
(.'. do e \ { rc," +o
\>i \ -><
a\c<^ - ._uy rc. C(o
De aqu resulta:

r> -{<- - C..a c( (. (.-. ,.-,r:.c!'i' u' i'- "!

^11 I 1K-l
:ioLD-'l- i r.i( i--' -\ 4- \ c^ V rx.r ' Vr.,, tS]
furo, ;i;'(tL .<( V-*
la mitad de -T
entalmente que ya es la ecuacin de una recta, donde las variables son 1/v (correspondiente a
tna enZr.Ina la y) y 1/[S] (que corresponde a Ia x), y las constantes l/v.a* (a u ordenada en el
ntracin de origen) y K^/V,* ( o pendiente).
vez, corres-

inlerior al
nador de la

:, bajo estas
,rcional a la
. en la parte
de la K-, la
in depende

la concentra-
iderarse sta
)Or tanto,
10
K-
Figura 6.9. Representacin gri-rca de Lineweaver y Burk
I /t) BIOQUIMICA
v,
Asi, rcpresentando los recprocos de
6.9. Al ser una recta, es posiblc trazarla
de unas cuantas cotrcentraciones de s
iniciales de la reaccin' A st't vez, los
rcspectivamente, a los puntos de intersec qr
y de abscisas. d(
' En el caso de la V*5*' al igualar la absctsa a cero (1/[S] : 0, o lo que es igual' la
de Lineweaver Y Burk
.o"t,"Jo qr. .1 uir de [S] es in[rnito)' de tu .cru.]i la
resulta que al

11K- + 11
es decir:
v V*x V** ' 0' v Vmx

en que.la.recta corta al eje de

Lo que indica que 9!-: l/v cn el punto
valor de
en e1 caso de la K'' si igualamos a
o.d;;;;r".t'irrr;*i.,r- (n* 6'ej'queA
'u ""''
cero Ia ordenada (llv -- 0), resulta
1K-I
"-
'
f\
-
v*r* :
v-, tsl
-
-
-

Lo que es igual a

K-I
: v..'*
V.* tsr

presenta el inconveniente de que, exper

lentracin de sustrato, ms inexacta e

Michaelis-Menten:

dividiendo numerador y denominador

por [S]' resulta
Vrn,
., -
1+5+
' [s]
 CI r -\ E]-ICA EN ZIIllATl CA 171

y, por tanto
de lil figura

'('*fu) :'-*
nicndo slo v
: Vn, o v : ''- K-
velocid ade s v v J K-^ Vrx
L)l
rresporrderl,
: orderiadas que es la ecuuc.in de Hosftee, correspondiente a la de una recta (l : a -l b.-r).
donde v y v[S] son las variables, Y V** y - K- las constantes. Se representa de
lue es igual, la forma indicada en la hgura 6.10, donde V-* eS ia ordenada en el origen y -K-
aver y Burk
la pendiente A su vez, cuando v : 0 (es decir, cuando la recta.corta al eje de
abscisas),

v
0 : V-, - K-
[S]
rta al eje de
igualamos a y, por tanto,

^tm ' :Vm*

K
tsl
Io que es igua1,

V V**
tS] K-
Es decir, el valor de v/[S] en dicho punto corresponde ai de V.ar/K-.
en el punto _-Lz acuacin de Woolf se deriva de la de Lineweaver y Burk:
:2, siendo la
ante de la 11K-l
rcedimientos v V-* V-* tS]
rte se deduce

te los dobles
,in embargo,
ja es la con-
inicial de Ia
'azado de la
lecir, cuanto
r 1/[S] Y rlv,
:ndiente) que
tidades altas
: a proponer

t
Figura 6.10- Represeniacin grfica de Hofstee.
r28 I]IOQUIMICA

Pendiente :

.-,'
0
-K-
/
Figura 6.1l. Representacin gr[rca de WoolI
1:- 'i
_._. ! '::
l:
| -J
I
t
a lr,'i I ! tt' '* -'"
I
'..ft, ,rt',t. I '.1t f "i

r
t)}:v^ +.i
)r.'
multiplicando por [S]: {
\,,tt .,! 'tr
K- U tftt' 'r.
tsl _ tsl r-
Vrn^ Y max f

o lo que s5 iqual, e

[s]:5oJ_trt
V V*x V.x
C

t
que es ya la ecuacin de una recta (y : o * ' x)' cuya representacin grfica se r
muestra en la figura 6.11.

INHIBICION ENZIMATICA
La presencia de ciertas molculas en una reaccin enzimtica pue99 disminuir
la velocidad de la reaccin al interferir con la formacin del complejo enzima-
denominan
sustrato, con su disociacin o con ambos procesos. Estas molculas se
diversa manera' Aqu
inhibidores, y afectan la cintica de ]a reaccin de muy
vamos a revisar los tres ejemplos ms simples y flrecuentes de inhibicin: competi-
tir", .ro-"o*petitiva y acmpititiva, as gomo un tipo de inhibicin particular que
casos llega a ejeicer el propio sustrato (inhibicin por sustrato)'
"rgrro.
lnhi bicin com Petitiva
(I)
Esre_upq _drhibiciq!_9_caracteriza po.r-que-11 estructura del inhibidor
es

normalmente muy t.l1u.tt. ila dqlsu-s1.t& (hg.6.12).-P-or ello, se une a la

 (.I NE ! ?Q
I"] CA EN ZIN4AI'IC.\

I nhibicitrn conlPctitiva

Figura 6.12, Esquema diferencial de las inhibiciones comperitiva y no-competitiva En la

inhibicio
compiten por el mismo sitio de unin a Ia enzima [E]'
copetitiva, el inhibidor [I] y el sustrato [S]
y unen simultneamente a la enzima'
mientras que en 1: .--.ri,,ptitira inhibiJoi sustrato se

enzima en el sitio de unin del sustrato, dando lugar a un complejo E-I, en

vez
aeiqgmplgj_o E-S. Realmente, cuando se encuentran presentes tanto el sustrato
com"ilniUior,los dos compiten por e lmismo sitio de unin en la molcula de
enzima (g. 6.12). IJn caso tpico de sta inhibicin es el producido por el malona-
to sobre la succinato deshidrogenasa. Esta enzima calaliza la oxidacin de la
1 grfica se molcula de succinato en fumaiato, con prdida de dos hidrogeniones:
2H*

ooc -ooc-cH :."cH -coo-

-cH,r-cHr-COO-
-OOC - (inhibidor)
-CH"- COO
: disminuir
jo enzima- El malonato (I) tiene una estructura qumica similar al succinato, por lo que
denominan
nera. Aqu
pr"J.;;*. ut sito cataltico de Ia enzima formando el complejo E-lr y despla-
zando al succinato. Puesto que no hay posibilidad de eliminar dos tomos de
n. compett-
'ticular que hidrgeno de su molcula, ya que quedrian valencias del carbono sin saturar, la
.ri.u"..u".in posible de dich complejo es volver a disociarse en enzima libre e
rrato).
inhibidor. De eita forma, en conjunio, se establecen las siguientes ecuaciones de
equilibrio, con sus constantes respectlvas:
E+S=ES-E+P
+
t
bidor (I) CS Kr 11
ie une a iu EI
 130 BroQUrM\cA

La inllibicin competitiva puede darse tambin entre dos sustratos de una

mir, inzinra, J" lor*u que el .^."to de uno desplaza ai otro de su posible unin
a Ia enzin.ra, y viceversa. b,ste es, por e.emplo, el casg de la.glucosa y la.Inanosa
para la glttcoilttinu.s. La misma enzima cataliza la iosiorilacion de ambas hexosas:

Clucosa + ATP r Clucosa-6-fos[ato + ADP

Manosa + ATP - Manosa-6-fos[ato + ADP

La efectividad cataltica de la enzima para cada uno de sus sustratos depende

de su respectiva K^, pero Ia presencia de los dos hace que disminuya dicha
efectivida (es decir, que aumente aparentemente el vaior de la K- para cad uno
de estos sustratos); y este efecto iobre uno y otro depende a su vez de sus
concentraciones respectivas. El lenmeno puede esquematlzarse asi:

o-4 E6-p,+E
//-/-- donde G es glucosa Y M manosa
v\
-\r

fir{+Pr+E

Tantoel segundo presentan'las mismas caractersticas

cinticas, ya oquinasa,'la glucosa acta como inhibid-or de
la accin de sa, y al revs' Al considerar las caracteristicas
.lneticas que definen la inhibicin competitiva, hay que tener en cuenta que el
intiUiao.li) est copitiendo con el susirato, de forma que en la reaccin normai
de Michaelis-Menten
E+SES*E+P
la enzima libre tambin si une de forma reversible al inhibidor
E+IEI
cie enzima
por 10 que se produce una disminucin de la cantidad de molculas
iibr"s paru formar comPiejo con S.
La constante de discicin de la ecuacin de unin de E e I es

K, : [E]ul
IEI]
Esto hace que aumente la K- de la enzima a un valor de K aparente (K"o)
que es

It'
/ rn\
K"p *-(' * K,,l
i,,
donde [f] es la concentracin del inhibidor y K, Ia consane de inhibicin de la
antes
iitiii dehniria. As pues, ;; ;;;.;;"ia de I, la euacin de Michaelis-Menten
ii:i; enzima se transforma en
r,t r

1,
I v*a*[S]
,ii.

tsl + r-(r
lr
,ti
.,1, +
't'
 CI N IJ'I'ICA TJNZII\4A1 ICA
r3l
lc u ni
u nin o en la lorr,ua linearizada de Lineweaver v Burk:
)
rtnosa
:XOSAS: r_ I K- (, Lrl\ I
v V.*_--llt_v.n^ \' K, ) f Sf

)/ se representa grlicamente como se in

que no hay modificrcin del valor de
rumento del <<valor aparente de la K-.
pende dobles reciprocos aumente la pendienib
dicha corta al cje de abscisas, a medida que a
a uno
le sus
I nhi bicin no-competitiva
Como su nombre indica, en este
entre el sustrato y el inhibidor, que
sustrato, y que se une a la enzima
inhibidor puede unirse tanto a la enzim
enzlma-sustrato: ES + I * IES. E] c
i tlcas IE + P (producto), sino que ha de disocr
or de complejo rendir el producto, p. EI proceso puede
resumirse de la siguiente
;tlcas manera:
ue el
,rmal E +STl ES-51P
+ I

I I
K, 11 nr ^
EI+ S=IES
Asi pues, en prcsencia del inhibidor.
mente y, de hecho, en la inhibin no co
que puede alcanzar una determinada can
su K- permanece inalterado. La disminu
ztrna

Penciiente : *^ (, - [tll\
v.", \' K, )

K"o)

Ot9
:la

tsr
Figura 6'13' Inhibicin competittva: representacin de Lineveaver y Burk
de la cintica de una
enima en ausencia (tll : 0) o .., p,"r.n.i^ de concentraciones crecientes
de inhibidor (rl < zl > rl).
 llloQUIMlcA
ll')
competttr-
comentamos para la inhibicin
iactor (i'+ [I]/K'), donde, al igual .que K' la constante de disociacin de str
va, [l] es la conce,-,t;t;;;-,;;ii"ii* v
enzima; + I = EI' de donde
reaccin de acoplamiento cot-t la

I{ - tElLIl
[Er]
es igual a
Asi pues, dado que la V-1, aparente

, r''/\
V -trr

(rr7)
\
presencia de inhibidor no-competltlvo
se
Ia ecuacin de Michaelis-Menten en
translorma en:
V^a*[S]
rIl\
L',l-.1,
*-(t +
trl
K,) K.)

y realmente, cuando [I]

: 0 la v elocidad inicial (v) SC convlerte en la de Ia
eaccin no inhibida y Burk' en presencla de inhibidor
En el caso de Ia ecuacin de Lineweaver
resulta ,l_

1-:
1 l,*9*f ('*
u -** ' Ki / Yrnx \
\'

lnhibicin acomPetitiva
nl no-
omo su lombre indica' no es comPetltlva al comPlejo
inhibicin, ei-inhibidor se une -sluo- al sustrato
co mPlej o teni-n-al..(que
no transforma
de equilibrio que se establecen es:
."u".iotltt
E+SES*E+P

K,
i
I,|
ESI
 Cl l.l ETI (--A LN ZI N{ATICA r33

Pcndicnrc: ['t] \
*(
-t
T)
I n te rsecci n

t/ ['r]\
_t
--ll+ K')

t I

K_ tsl

l.igrrr:r 6-14. lrrhibicin no-competitiva: representacin de Lineweaver y Burk de la cintica de una

cr/ir:r cn ;ruscncu (U] : 0) o en presencia de concentraciones crecientes de inhibidor (rl < 2I > 3I).

liu cstc crrso. Ia presencia de inhibidor hace que se alteren tanto la Vn.,* como
l:r K,,,. clc lr.rrma que sus respectivos valores apai-'irs son:

v**"p:F+,
\/ -
V-*
K"p
K*

ll( l;l (
( !lllr I

rr r t'. r'l I
l;l l'
(,. H)
l'l \'t'llltrs
l;lt tirll r[('l [)or cllo. ln ecuacin de Lineweaver y Burk se transforma en:

1l \',,,,,,1 "t' 1 (,
I trl\ -, K-
; : v-* \' '
I
I t'l tll';llttt
K,) v." tsl
I ltilt ill('lil\' Y=t+hy
tttlttlrltlttt ' Srr rcprcsentacin grfica se muestra en la figura 6. 15, en la que las pendientes
I ;l lllt'(llrl'l rlc t.rtlirs lrrs lineas son iguales (K-/V*ar), mientras que el valor de sus respectivas
inrcrsccci(\nc's en abscisas y ordenadas aumenta al etevarse el valor de [I]- Las
iurcscccion.s de estas lneas en el eje de ordenadas corresponden a la ecuacin:

y (interseccin) : (, . H)
1l\,1 lll
ll't *
,l r,rtlll\trll\\ \ surepresentaci la indicada en la figura 6. 16, de Ia que se
,tl \tl\ll'l[\r
'll \'\ cl lulor d.' K,, y seccin de esta recta con el eje de abscisas

corrr'spolldai.Il v Ir I -'^',l.
tll\
\' ' K,/
 BIoQUIMIC^

Figura 6.15. Inhibicin acompetitiva: representacin grfica de Lineweaver y Burk de la crnttca

de una enzima en ausencia (tI] : 0) o en presencla de concentraciones crecientes de inhibido
('I <'l . tI . nI).

lnhibcin por sustrato

Existen enzimas que liegan a inhibirse por concentraciones altas del ProPio
sustrato. La relacin entre velocidades iniciales y concentracin dei suotito So
muestra en la figura 6.17, y la representacin de los dobles inversos de esta
cintica (representacin de Lineweaver y Burk) no da lugar_ a una linea recta
(f-rg.6.17).
EI proceso es complejo, y hay casos, como el de la hexoquinasa de cerebro,
que cataliza la siguiente reaccin:

Glucosa-G-fosfato * ADP ATP + gluccsa

trl

Figura6.16. Inhibicin acompeiitiva: representacin grlica de las intersecciones de las rectas de

del
los dobles recprocos c 'n el eje de ordenadas (fig' 6'15) frente a distintas concentraciones
inhibidor [], para l; dcterminacin det valor de K,-
 ('lNl:-l-f (-A LN7-lNlA I-l(-A 135

Figura 6.!?. Inhibicin por el sustrato. representacin grfica de la cinrica diecta (velocidad
lrente ;r coricen trrcin de) sustraro) ;, de los dobles reciprocos

Ic la cintia
de inhibidor
en las que la enzima es incluso inhibible por uno de sus sustratos. En este caso, la
enzima resulta inhibida por la glucosa-6-fosfato slo cuando aqulla se encuentra
librc en el citoplasma, pe.o no cuando est unida a la pared externa de la mitocon-
dria. EI mecanismo por el que se produce este tipo de inhibicin no se conoce,
pero se har, propuesto dos hiptesis. Una de ellas supone que Ia eazirrra tiene dos
sltios distintos de unin para el susrrato. uno correspondiente al sitio catalitico y
otro al de inhibicin. El primero es ms asequible que el segundo, de forma que
a concelttracioues bajas de sustrato, sts se une slo al sitio cataltico, pero a
del propio medida que aumenta su concentracin va encontrando tambi1 sl 5iti. : ^..iriUi-
sustrato se cin (y unindose a l), modicando as la contiguracin de Ia mclcula de enzima
os de esta y haciendo que se inhiba. La segunda hiptesis supone que la enzima puede tener
Inea recte dos conhsuraciones. una activa (E") y otra inactiva (E,), q,.: son.ev.rlibles entre
s. EI sustrato es capaz de unirse indistintamente a una u otra lorma de la enzima,
de cerebro, pero slo es transformado e-n producto cuando se encuentra unido a Ia conf rgura-
cion E,. De lorma esquemtica, las reacciones de equiiibrio correspondientes
seran:

E
Le!,
{E
++
SS
il
P+E.._E"S
11
E,S

CINETICA SIGMOIDE

En el caso de algunas enzimas, la representacin grfica de los cambios de

vclocici*J inicial de Ia reaccion que cafalizan lrente a los de la concentracin del
sustrato no es de tipo hiperblico, de acuerdo con la ecuacin de Michaelis-
Menten, sino siqmoideo (tig. 6.18), como el de la unin del oxigeno a la hemoglo-
bina (cap. 47). Esta relacin indica la unin del sustrato a distintas subunidadeide
la protena que inreractan entre s (cooperan), por lo que el proceso se denomina
; lts rccLrs de cooperatiuitlud. Las en.:intas alostricas presentan este tipo de cintica, y de ellas
rtr:tciorcs del trataremos en el captulo 7. I-a ecuacin que se aplica a estas reaciones de
cinetica srgnro:rJea es:
 IlIo(lLJ l''l I('A
r_16

Pcndiente : rl

Fisura 6.r8- Cintica sigmoidea 'l'

:1:::i:i:"-
la ecrracin d: H.ill
(b)
linerizacin mediante
igual
,part
a t: mirad dc V-..
(Sr,:)
a una velocidad iniciaI
ir.'.orr"rponde "l:"i:,.1J1";:':'i:'Ji:':;"*':;I;TiJil'i"i:

[S]" ' Vn"'

v-[S]"tK'
a
rtc Ilitt' y puecle ser reordenada
que se denomina et'uatitt

\/Y max
-v
-DI

o 1o que es igual'

_; :
v
,r log tsl - Iog K'
log r-.
tm:l x
 ( INI: ll(-i\ LN7_ti\,tA ll(-A l-)/

tsl
Figura 6'19' Clnerica de sirturacir de una enzima, represenla.do
velocidad fiente a susrrato E.
condiciones normles de ensa!,o (N). la cintica es rje
tipo si.'emoideo (A) en presencia de altas
concentraclones de un activador. ([) en presencia de
altas.on..-n,r^.,on.r,1. un inhibrdor

que ya corresp0nde a ra ecuacin de una recta, donde,T es su pendie,te _rog

su ordenada en el ori,qen (fi-e.6.rg). Er parmetro rr.r-.pi.i.o, y K,
coeficiente de Hilt, que depede dei nmero de sitios
y se denomina
de union de
enzima para el sLrstrato, y del nmero y tipo . lni.rac.iones la molcuia de
cie tales sitios.
Cuando rz : l, los sitios de unin actan lna.p."ai.ni.r,.
unos de otros, y
de hecho. 1, ecuacin de Hilr se lransforma ia de Michaelis_Menten. cuando
n > l, signiflca que hav cooperatividad enrre "n los sitios Je unir, d. f;r;;;;.
cuanto ms alto sea er varor de, ms intensa es la
cooperativida, y t,
ms <sigmordea. Cuando < 1. se dice que los
cooperarividad ne,eativa
;i"; de unin presentan
"u.,,a-a,
La constante K'es conlpleja. _y su valor es K, :
concentracin del susrraro, que corresDonde a v : [S,,r]^, donde [S,,,] es la
que^cuando n : l, K'se ccnvierte en la K. de
tlz.il)l:b;;;;;; ;;tli'r;;,
rrto (/), y su tu..uurii'de Michaelis_Menten.
tl dc sLstrato
de estas enzimas alosiricas pueden
e.rpositiuos o negatiuos. El valor de
concentraciones de dichos efectores. Los
n el valor de (S,,,) y la cooperalividad,
:tica tpica de Michaelis-Menien 619. 6.1).
(inhibiriores) (fig' 6'19),
que aumenran el carcter sigmoid." o. i:t".:ttrregativos

TEXTOS DE CONSULTA
Beremeyer. H. U: tVetltrd.r o.f art_.t.ttroric ttnal.t.si.s,
vol. l, Verlag Chemie, Weinheim y
Nueva York, l93l.
Briggs, c E., y Hatdanc. G- B S-: A note on (he kinetics o[enzyme action, Biochent.
I9:318-3_19. 192 j J,
t"rT;j;.u"tvdcn, A.: Fundurtcntor.r oJ ctt:.r.rtra kinetics, gurrerworths,
Londres y Boston,
art,;:.J;::; . P;.rlnre r, C. A.: 6,,_-.r tttc kir.teti<..r, W. B. Saunders Co, triladella
Trr). y