Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM 2017-I

Laboratorio de Citogentica Humana Informe N 3

Evaluacin de la obtencin de cromosomas humanos a

partir de cultivo de linfocitos
TORREJN MALDONADO, Daniel Alcibiades 14100031

Fecha de entrega: 30/05/2017

Resultados
Despus del cultivo y la preparacin de la muestra, se realiz la observacin bajo un microscopio
ptico (Leica DM 400), la bsqueda de cromosomas se procedi bajo una 50x mientras que la
fotografa de estos se hizo a 1000x, seguido de la adiccin de aceite de inmersin. Se obtuvo 8
campos, de los cuales 2 se utilizaron para realizar los cariogramas y 6 para la evaluacin de la
eficacia de nuestro procedimiento de cultivo celular y preparacin citolgica, como aspectos
principales. Antes de descripcin y anlisis de resultados, se menciona que los pasos establecidos
en el protocolo modificado fueron rigurosamente cumplidos.

Como todo procedimiento de laboratorio, la estandarizacin de los protocolos tiene como objetivo
la bsqueda de la maximizacin de la calidad de los resultados en base a la optimizacin del
procedimiento. Ya que la finalidad conclusa de nuestra prctica es la elaboracin de cariogramas,
debemos buscar las mejores condiciones que nos permitan obtener la suficiente cantidad de
cromosomas libres. Es as que se prepararon dos lminas y se escogieron al azar 3 campos de
cada una. La tabla 1 resume los principales variables relacionadas a la preparacin de la muestra
sobre las lminas que se tomaron en cuenta y con respecto al campo (en este caso se refiere a
figura).

Tabla 1. Caractersticas de calidad de lminas preparadas

Los linfocitos son clulas diferenciadas que normalmente no sufren divisin celular posterior; no
obstante, mediante la adicin de un mitgeno como la fitohemaglutinina se estimula la replicacin
del material gentico y la entrada a mitosis. Esta induccin celular se vio reflejada en las dos
lminas preparadas, las cuales contenan una alta densidad celular. Aunque haba una clara
diferencia: la primera, dentro de sus cromosomas libres encontrados, se presenciaba un alto grado
de superposicin y compactacin cromosmica con respecto a la segunda. Ya que preparacin y
evaluacin de las dos lminas no se dio en simultneo, en la segunda lmina se consider el
problema de la alta cohesin de cromosomas visualizada en los campos de la primera lmina. Es
as que para la preparacin de la segunda se dispuso a agregar a la preparacin citolgica unas
gotas de cido actico, con el fin de obtener cromosomas ms separados. Sin embargo, la alta
compactacin cromosmica se redujo, quizs por la acidificacin del ambiente aunque an la
resolucin de los cromosomas era adecuada. Otra solucin a la extensin de los cromosomas fue
la disposicin inclinada de las lminas y una mayor distancia con la pipeta pasteur al momento de
agregar las gotas de clulas, lo cual favorece una mejor dispersin del material nuclear. Lo
mencionado se puede apreciar al comparar en conjunto las figuras 1, 2 y 3 con las 4, 5 y 6.
 Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM 2017-I
Laboratorio de Citogentica Humana Informe N 3

Adems con la solucin hipotnica, proveniente la dilucin de 1 en 10 de suero humano, fue un

tercer factor que facilit la obtencin de cromosomas libres.

No solo fue suficiente la carga celular obtenida, sino tambin el nmero de cromosomas
metafsicos para las dos lminas evaluadas, la calidad y el momento de adicin de la colchicina es
relevante ya que evita la sntesis de fibras del huso y, por lo tanto, para detener la mitosis en
metafase. Adems en todos los campos a simple inspeccin la mayora de los cromosomas libres
estaban bien constituidos y definidos, caractersticos de los cromosomas metafsicos, aunque se
logr evidenciar la no sincronizacin de las etapas del ciclo celular, debido a la presencia de
cromosomas libres de gran longitud como lo muestran las figuras 2,3 y 4 para solucionar este
problema se puede aplicar distintos mtodos de sincrinzacin celular, aunque eso extendera el
protocolo de evaluacin, adems, la cantidad de cromosomas metfasicos es suciente para
proceder a la construccin de los cariogramas.

Con respecto a la tincin con el colorante Giemsa, la primera lmina presenta mayor intensidad
aunque en algunos juegos cromosmicos hay una parcialidad de esta intensidad, como lo muestra
la figura 2 y 3, esto es quizs debido a la no sincronizacin, no de las etapas, sino de los mismo
cromosomas, ya que en la compactacin no es simultnea en todos. Con respecto a la segunda
lmina se debi sumergir bajo el colorante ms tiempo del realizado, debido a una ligera reduccin
de la intensidad, aunque aun as se logra diferenciar a los cromosomas y localizar el centrmero.

Figura 1. (121.0;12.0). Lmina I Figura 2. (120.9;13.5). Lmina I Figura 3. (120.9;13.5). Lmina I

Figura 4. (138.1;11.6). Lmina II Figura 5. (172.5;10.7).

Figura Lmina II
6. (146.4;18.5). Lmina II
Facultad de Ciencias Biolgicas UNMSM 2017-I
Laboratorio de Citogentica Humana Informe N 3