UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD MULTIDISCIPLINARIA ORIENTAL

DEPARTAMENTO DE MEDICINA
SECCION DE BIOQUIMICA

Asignatura: Bioqumica I

Laboratorio N 3
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CITOCROMO OXIDASA EN TEJIDOS
 PREGUNTAS

1. Cul es la razn por la que se utiliza tejido cardiaco en este experimento?

porque la enzima citocromo oxidasa se encuentra en ms altas concentraciones en el
musculo cardiaco de la rata.

2. Por qu se debe procesar rpidamente este tejido?

Porque al morir el animal las enzimas del tejido cardiaco (citocromo oxidasa) pierden su
actividad enzimtica, es por ello que se debe proceder con la mayor rapidez en el
laboratorio.

3. Observa alguna diferencia del color en cada uno de los tubos?

si
si su respuesta es s, explique cul es la diferencia.
* en el tubo color rojo-purpura o purpura con el Cianuro de potasio (KCN) puede ser
demostrada en la preparacin por la oxidacin secundaria de sustancias tales como el
indicador de
oxido-reduccin llamado p-fenilendiamina.

*en el tubo color rojo la p-fenilendiamina compite con el citocromo e reducido en su papel
de donador de electrones para el citocromo oxidasa; ambos son capaces de ser oxidados por
la citocromo oxidasa, pero la oxidacin de la p-fenilendiamina al provocar la coloracin
roja nos sirve de indicador de la actividad del citocromo a + a3
(complejo citocromo oxidasa).

*en el tubo incoloro, se deduce la inhibicin de la enzima por KCN al acoplarse con el
hierro oxidado del citocromo a + a3 y por consiguiente la oxidacin de la p-fenilendiamina
ocurre permaneciendo incolora.

4. En cul de los tubos se evidencia la actividad de la enzima estudiada y por qu?

en el tubo numero 2
Porque, desde el punto de vista qumico, la oxidacin se define como la remocin de
electrones, y la reduccin como la ganancia de estos. La oxidacin siempre es acompaada
de la reduccin de un aceptor de electrones. Este principio de la oxidacin-reduccin se
aplica por igual a los sistemas bioqumicos y constituye un concepto importante para la
comprensin de la naturaleza de la oxidacin biolgica.
5. Cul fue el resultado en el tubo 2 y 3? Explquelo
*en el tubo dos obtuvimos una coloracin purpura con el Cianuro de potasio (KCN) puede
ser demostrada en la preparacin por la oxidacin secundaria de sustancias tales como el
indicador de oxido-reduccin llamado p-fenilendiamina.
se vuelve purpura al oxidarse.

*en el tubo tres no tuvimos ninguna coloracin, se deduce la inhibicin de la enzima por
KCN al acoplarse con el hierro oxidado del citocromo a + a3 y por consiguiente la
oxidacin de la p-fenilendiamina ocurre permaneciendo incolora.

6. Escriba la lista de los reactivos y la funcin que realizan en este experimento cada uno
de ellos.
*Fosfato Di sdico : Reductor
*Cianuro de Potasio: oxidado
*p-fenilendiamina: indicados de la actividad del citocromo

7. Esquematice la cadena transportadora de electrones y seale la ubicacin del

complejo citocromo oxidasa.

p-fenilendiamina p-fenilendiamina

Reducida (incolora) oxidada (color rojo)

e-

Cit. e reducido Cit. a+a3 oxidado H2O

(Fe+3)

e-

Cit. e oxidado Cit. a+a3 reducido O2

(Fe+2)

Citocromo oxidasa reducida

 8. Describa el proceso de fosforilacion oxidativa
La fosforilacin oxidativa es un proceso metablico que utiliza energa liberada por
la oxidacin de nutrientes para producir adenosina trifosfato (ATP). Se le llama as para
distinguirla de otras rutas que producen ATP con menor rendimiento, llamadas "a nivel de
sustrato". Se calcula que hasta el 90% de la energa celular en forma de ATP es producida
de esta forma. Consta de dos etapas: en la primera, la energa libre generada
mediante reacciones qumicas redox en varios complejos multiproteicos -conocidos en su
conjunto como cadena de transporte de electrones- se emplea para producir, por diversos
procedimientos como bombeo, ciclos quinona/quinol o bucles redox, un gradiente
electroqumico de protones a travs de una membrana asociada en un proceso
llamado quimiosmosis. La cadena respiratoria est formada por tres complejos de protenas
principales (complejo I, III, IV), y varios complejos "auxiliares", utilizando una variedad de
donantes y aceptores de electrones. Los tres complejos se asocian en supercomplejos para
canalizar las molculas transportadoras de electrones, la coenzima y el citocromo c,
haciendo ms eficiente el proceso.

Es la transferencia de electrones de los equivalentes reducidos NADH y FADH, obtenidos en la

gluclisis y en el ciclo de Krebs hasta el oxgeno molecular, acoplado con la sntesis de ATP. Este
proceso metablico est formado por un conjunto de enzimas complejas, ubicadas en la membrana
interna de las mitocondrias, que catalizan varias reacciones de xido-reduccin, donde el oxgeno es
el aceptor final de electrones y donde se forma finalmente agua.