UNIDAD 5.

LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR

MEDIDAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS (Laboratorio)

1.1. INTRODUCCIN

Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un compuesto

formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado
por vagones. En el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por
un azcar (desoxirribosa), una base nitrogenada y un grupo fosfato que acta como enganche de
cada vagn con el siguiente1.

La palabra polimorfismo en trminos de ADN hace referencia a un sitio concreto (locus) del
polinucleotido, que puede contener diferente informacin o secuencias en dos individuos
diferentes, incluso si estos son de la misma especie. El polimorfismo de longitud de fragmentos de
ADN (RFLP) se refiere a las variaciones de nucletidos en secuencias diana de las endonucleasas de
restriccin. Estas variaciones afectan el tamao de los fragmentos que resultan del corte. Los RFLPs
se pueden utilizar como marcadores en la construccin de mapas fsicos y de ligamento, estas
variaciones en posicin y numero de secuencias diana se encuentran directamente relacionadas con
la longitud de los fragmentos producto de la digestin enzimatica2, 3.
Se estima que el genoma humano haploide tiene alrededor de 3000 millones de pares de bases. Para
indicar el tamao de las molculas de ADN se indica el nmero de pares de bases (pb), como derivados
hay dos unidades de medida muy utilizadas, kilobase (kb), que equivale a 1000 pares de bases y
megabase (Mb), que equivale a un milln de pares de bases, pero existen otras unidades menos
comunes. El tamao del genoma de los seres vivos se encuentra estrechamente relacionado con el peso
del mismo, es decir, genomas grandes tienen un mayor peso molecular4 (Figura.1.). Las siguientes
abreviaciones son usadas comnmente para referirse a la longitud de una molcula de ADN;

pb = pares de bases (un par de bases mide alrededor de 3,4 ).

kpb (o kb) = mil pb.

Mpb (o Mb) = un milln de pb.

Gpb (o Gb = giga bases) = mil millones de pb.

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Figura.1. Se muestra el tamao del genoma en distintos organismo, incluyendo unicelulares, plantas y
animales5.

Las unidades de peso, que cuantifican el ADN, ms utilizadas son microgramos, picogramos y unidades
de masa atmica.

Microgramo: equivale la milmillonsima parte de un kilogramo y tambin equivale a la

millonsima de un gramo.
1 g = 0,000 000 001 kg = 10-9 kg 1 g = 0,000 001 g = 10-6 g
Nanogramo (ng): Unidad de masa que equivale a una milmillonsima parte de un gramo. Es
decir, mil millones de ng son un gramo.

Picogramo es la unidad de masa del SI, equivalente a la billonsima parte de un gramo. Se

representa con el smbolo pg:

1 pg = 0,000000000001 g = 10-12 g 1 pg = 10-9 mg = 10-15 Kg

Unidad de masa atmica: Equivale a una doceava parte de la masa del ncleo del istopo ms
abundante del carbono: el 12C.

1 uma = 1.67 x10-27 kg 1 g ~ 6 x 1023 uma

Por otro lado el volumen de las molculas de ADN se mide en microlitros (L) y nanolitros (nL). Pero
existen otras unidades dependiendo del sufijo y la equivalencia (tabla.1.).

Nanolitros (L): Unidad de volumen equivalente a la millonsima parte de un litro. Tambin

equivale a 1 milmetro cbico.
1 L = 106 L = 1 mm3
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Nanolitros (Nl): Unidad de volumen equivalente a la milmillonsima parte de un litro,

representada por el smbolo nL. Tambin equivale a 0,001 milmetros cbicos.

1 nL = 10-9 L = 0,001 mm.

Tabla.1. Sufijos y equivalencias del sistema internacional de unidades6.

1.2. OBJETIVO

Definir las medidas empleadas en la cuantificacin del ADN durante los procedimientos y protocolos
durante las actividades del laboratorio de Biologa molecular y la relacin existente entre el tamao del
ADN y los polimorfismos.

2.0. ACTIVIDADES

2.1. En un experimento de gentica poblacional se analizaron individuos de la especie Abra cadabra

(mollusca: bivalvia), encontrndose seis genotipos diferentes para el gen de la tinta (C1C1, C1C2, C1C3,
C2C2, C2C3 y C3C3 ). Cada uno de los tres alelos (C1, C2, y C3) produce fragmentos de restriccin
diferentes cuando son digeridos por la misma endonucleasa. De esta manera se tiene que el alelo C1
produce tres fragmentos de restriccin (100pb)1 y (300pb)2. El alelo C2 produce dos fragmentos de
restriccin (400pb)1 y (300pb)1, el alelo C3 produce dos fragmentos de restriccin (100pb)1 y (600pb)1
respectivamente. Si cada uno de los seis genotipos se digiere y se hace correr en electroforesis con gel
de agarosa ilustre el nmero de bandas y el peso de cada una para los distintos genotipo de la poblacin
(Tenga en cuenta que en la electroforesis, la velocidad de migracin de un fragmento es inversamente
proporcional a su tamao).
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2.2. Del ejercicio anterior:

2.2.a. Deduzca el tamao (en Gpb) del gen evaluado en la poblacin de la especie Abra cadabra.

2.2.b. Deduzca el nmero de dianas para la endonucleasa de restriccin en cada alelo.

2.2.c. Convierta, el tamao del gen evaluado en el estudio, de pares de bases a Mpb.

3.0. Un fabricante de agua desionizada, utilizada en espectofotometra, especifica en la etiqueta del

producto que para obtener una solucin de ADN con una concentracin de 5 ug/ul debe utilizar 100 ul
en 20 ug de ADN, teniendo en cuenta esto, si se quiere preparar una solucin a una concentracin de 30
pg/nl cul es la concentracin de ADN que debe utilizarse en 100 ul de agua ionizada?

3.1. Si el genoma de una ameba es de 686 000 Mb cul es la equivalencia en ?

3.2. El genoma del hongo de la caspa tiene un tamao de 9 Gpb y ocupa un volumen de 650 L, teniendo
en cuenta lo anterior Cul sera el volumen terico que ocupara el genoma de la misma especie si este
tuviera un tamao de 780 000 pb? Exprese este resultado en nL (nano litros).

4.0. Si el gen que codifica para la enzima calmodulina (CAN), encargada del transporte de calcio, es digerido
por determina enzima de restriccin produce siete fragmentos de ADN de 300pb, 23Mpb, 2Kpb, 1Gpd,
100pb, 34Mpb y 150 pb respectivamente. Exprese la longitud total del gen de la CAN en Gpb teniendo
en cuenta la informacin anterior.

4.1. En una prueba de maternidad se utiliz el ADN mitocondrial de la presunta madre y se compar con el
del posible descendiente, los resultados de la electroforesis arrojaron diferentes fragmentos de
restriccin producto de la digestin enzimtica que se realiz en el mismo gen de los implicados en la
prueba este resultado es positivo o negativo para la maternidad de la mujer? Justifique su respuesta.
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Referencias

1. Sergio Ferrer. (2011) El verdadero sentido de la vida. Journal of Feelsynapsis (JoF). ISSN 2254-3651. (1): 119-127.

2. Polimorfismos del ADN | DNA Didactic Blog. (2017). Dnadidactic.com. Retrieved 13 May 2017, from
http://www.dnadidactic.com/blog/tag/polimorfismos-del-adn/

3. Glosario de trminos genticos. (2017). Webs.um.es. Retrieved 13 May 2017, from http://webs.um.es/jalozate/recursos-
docentes/Areas/General/Ayudas_docentes/Glosario/Glosario/52.htm

4. Matthew P Scott, Paul Matsudaira, Harvey Lodish, James Darnell, Lawrence Zipursky, Chris A Kaiser, Arnold Berk, Monty
Krieger (2004). Molecular Cell Biology, Fifth Edition. San Francisco: W. H. Freeman. p. 396. ISBN 0-7167-4366-3.

5. Amparo Latorre, F. (2013). El tamao del genoma y la complejidad de los seres vivos. Revista Mtode. Retrieved 13 May
2017, from https://metode.es/revistas-metode/monograficos/el-tamano-del-genoma-y-la-complejidad-de-los-seres-
vivos.html.

6. Cerro, C. (2011). Unidades de longitud del Sistema Internacional. 5josedelatorreydelcerro.blogspot.com.co. Retrieved 13

May 2017, from http://5josedelatorreydelcerro.blogspot.com.co/2011/02/unidades-de-longitud-del-sistema.html.