I.

INTRODUCCION

La biotecnologa vegetal es serie de tcnicas y procesos que

permitan el cultivo y modificacin en el laboratorio de las plantas o de partes de
ellas (clulas, tejidos u rganos). Esto con el fin de multiplicarlas masivamente,
hacerlas mejores, ms productivas u obtener productos tiles a partir de ellas.
Las dos ramas ms importantes dentro de la biotecnologa vegetal son el cultivo
de tejido vegetales y la Ingeniera Gentica de las plantas. La biotecnologa
vegetal es una de las herramientas ms valiosas que se tienen actualmente para
el mejoramiento y conservacin de las plantas que sostienen la vida humana.

El cultivo de tejidos, como tcnica, consiste esencialmente en aislar

una porcin de la planta (explante) y proporcionarle artificialmente las
condiciones fsicas y qumicas apropiadas para que las clulas expresen su
potencial intrnseco o inducido. Es necesario adems adoptar procedimientos de
asepsia para mantener los cultivos libres de contaminacin microbiana.

Este contexto daremos a conocer un reconocimiento del Laboratorio

de Biotecnologa Vegetal, con sus respectivas instalaciones e funciones de cada
uno, y as mismo los equipos y materiales a utilizar mediante las prcticas a
realizar.

Objetivos

Conocer la organizacin y las funciones de cada rea de un laboratorio

de cultivo in vitro.
Identificar instrumentos y equipos ms importantes en un laboratorio de
cultivo in vitro.
Establecer y seguir las normas de trabajo en el laboratorio.
Conocer y diferenciar los mtodos de esterilizacin de materiales y
medios de cultivo.
 II. REVISION DE LITERATURA

2.1. Laboratorio de biotecnologa

El laboratorio de cultivo de tejidos dispone de un rea destinada al
establecimiento, crecimiento y multiplicacin de las plantas producidas: esta rea
es especialmente necesaria en los laboratorios de investigacin y desarrollo y en
los productos comerciales. Aquellos laboratorios que se dedican a la produccin
y distribucin de materiales de sanidad certificada, por ejemplo, deben incluir
adems facilidades para la cuarentena y para la evaluacin fitosanitaria. ROCA
y MROGINSKI (2003).

2.2. Organizacin de las reas de un laboratorio de Biotecnologa vegetal

Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir

esquemticamente en reas separadas para las diferencias funciones que se
desarrollan, mediante las practicas, sin embargo, algunas de las funciones
pueden desarrollarse en un mismo ambiente.

2.2.1. rea de preparacin

Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero

debe proveer tambin un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de
plstico, y los reactivos qumicos. Este ambiente debe contar con mesas de
trabajo para la preparacin de los medios y para colocar las balanzas, el medidor
de pH, los platos caliente con agitacin, y otros elementos; tambin debe incluir
vitrinas, estanteras y espacio para el equipo de refrigeracin; y para la
incubadora o la cmara de crecimiento(o para ambas.)

2.2.2. rea de lavado y de esterilizacin

Puede estar constituida por dos reas conectadas entre s, o por un

solo ambiente, y puede estar localizada dentro del rea general de preparacin.
 El rea de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con
agua caliente y agua fra y una fuente de agua de alto grado de pureza,
preferiblemente agua doblemente destilada; para el efecto debe usar un
destilador de vidrio o de material no toxico y un desionizador de agua entre el
destilador y el lavadero. Esta rea debe disponer de un espacio para almacenar
agua destilada en botellas de plstico; tambin debe proveer basureros
adecuados para el material vegetal, inorgnico y de vidrio que se deseche.

2.2.3. rea de transferencia

En esta rea se realiza el trabajo de excision, inoculacin y

transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo
demanda lo ms altos niveles de limpieza ambiental, se recomienda la
instalacin de gabinetes de flujo horizontal y vertical de aire filtrado bajo presin,
o la construccin de cuartos de transferencia.

2.2.4. rea de incubacin

Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o

cmaras de crecimiento; estas pueden ser ms eficientes en cuanto al control
ambiental, pero son ms costosas. El rea de incubacin o crecimiento in vitro
debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28C), de la iluminacin
(variable, segn las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la humedad relativa
(70%- 80%).

2.3. reas de investigacin de un laboratorio de biotecnologa

2.3.1. reas de crecimiento

Las plantas que se regeneran en el rea de incubacin se pueden

acondicionar o aclimatar y luego trasplantar en macetas, bandejas o cmaras
apropiadas. Estas operaciones se pueden llevar a cabo en tinglados.

2.3.2. reas de cuarentena y control fitosanitario

Cuando la funcin del laboratorio es la produccin de materiales

elites de sanidad certificada, se hace necesario contar con un rea para la
recepcin de las muestras o plantas destinadas a la limpieza clonal,
generalmente protegida contra insectos. Esta rea debe estar separada del resto
del laboratorio pero cercana al rea de control fitosanitario.

2.3.3. rea de oficina

En esta rea deben ubicar el mobiliario de oficina como escritorios,

archivos y almacenamiento de datos, los libros de referencia y de control del
laboratorio, los catlogos y otros documentos. Tambin se coloca en ella el
equipo de clculo o computacin,

2.4. Instrumentos y equipos en el laboratorio

2.4.1. Centrifuga

Una centrfuga es una mquina que pone en rotacin una muestra

para separar por fuerza centrfuga sus componentes o fases (generalmente una
slida y una lquida), en funcin de su densidad. Utilizacin: Son muy tiles para
precipitar clulas y molculas. Vienen en distintos tamaos y con distintas
capacidades en el manejo de muestras. Este aparato somete la muestra a
fuerzas de aceleracin que obligan a las molculas a concentrarse en el fondo
del envase utilizado, separndolas del medio en que se encuentran. Incluso, bajo
ciertos mtodos se puede generar un gradiente de concentraciones dentro del
mismo tubo, separando distintas molculas a distintos niveles o fases dentro del
tubo. Con ayuda de jeringas, se puede perforar la pared del tubo y extraer del
mismo slo aquella fase donde se encuentren las molculas de inters.

En el laboratorio las centrfugas se utilizan, en general, en procesos

como la separacin por sedimentacin de los componentes slidos de los
lquidos biol- gicos y, en particular, en la separacin de los componentes de la
sangre: glbulos rojos, glbulos blancos, plasma y plaquetas, entre otros, y para
la realizacin de mltiples pruebas y tratamientos. ALFARO (2004).

2.4.2. Cmara de siembra o germinacin

La funcin de la cmara de germinacin es la de facilitar la
germinacin de las semillas elevando su temperatura, un termostato adaptado
en el interior del germinador para obtener la temperatura ptima, un ventilador
distribuye el aire del interior para homogeneizar la temperatura, este tipo de
cmara de germinacin es manual

2.4.3. Voxtex

El agitador de tubos vortex est diseado para ser usado con un tubo
o hasta con mltiples tubos segn se requiera. El equipo consta de tres unidades:
1) superficie de apoyo para un solo tuvo 2) plataforma circular, apropiada para
agitar varios tubos 3) El switch de doble posicin para operacin continua o
manual. No emplear este equipo para otras actividades que no sean para lo cual
est diseado. Agitador incorpora un motor permanentemente lubricado que
permite el manejo del cabezal.

El switch de doble posicin permite que el agitador sea operado de

manera continua o tambin por presin manual del agitador plstico o de la
plataforma de agitacin.

2.4.4. Materiales estriles

Los artculos estriles deben ser almacenados en un rea especfica

y claramente identificada. Dicha rea debe ser libre de humedad, polvo o plagas
(Ej. cucarachas). Las estanteras deben ser lavables y de superficies no
porosas. No se recomienda usar cajas de cartn para almacenar artculos
estriles. Las estanteras para almacenamiento de material estril (en Central
de Esterilizacin) deberan estar a 25 cm del piso, 45 cm del techo y 5 cm de la
pared. Se debe evitar que los artculos estriles estn expuestos directamente
a rayos solares, humedad o calor excesivo. No se debe agrupar varios paquetes
estriles con bandas elsticas. Se debe minimizar la manipulacin de artculos
estriles.
Cuanto mayor sea la manipulacin, mayor ser el riesgo de
contaminacin del paquete (por lo tanto, evitar el conteo rutinario con
manipulacin del paquete en Economatos y otros servicios.)
 2.4.5. Microcentrifuga

Es una mquina centrfuga especializada utilizada en el laboratorio

clnico. sta pone en rotacin una muestra ms pequea para separar por fuerza
rotatoria sus componentes o fases (generalmente una slida y una lquida), en
funcin de su densidad. Esta es de uso para los tubos capilares.
Es muy til para precipitar ADN y otras sustancias que se trabajan
en volmenes pequeos. ALFARO (2004).
2.4.6. PH- metro

El pH-metro es un sensor utilizado en el mtodo electroqumico para

medir el pH de una disolucin.

La determinacin de pH consiste en medir el potencial que se

desarrolla a travs de una fina membrana de vidrio que separa
dos soluciones con diferente concentracin de protones. En consecuencia se
conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio
durante el pH.

2.5. Esterilizacin y desinfeccin

2.5.1. Esterilizacin

La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la

destruccin total de los microorganismos viables presentes en un determinado
material. Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico,
ya que existen muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales
estriles. Entre stos podemos destacar:

La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico

con el propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas,
etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa.
La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes
propsitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o
 personal, anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos,
alimentos, etc.)
La descontaminacin de material utilizado.

2.5.2. Desinfeccin

En este proceso se eliminan los agentes patgenos reconocidos,

pero no necesariamente todas las formas de vida microbianas. Es un trmino
relativo, donde existen diversos niveles de desinfeccin, desde una esterilizacin
qumica, a una mnima reduccin del nmero de microorganismos
contaminantes. Estos procedimientos se aplican nicamente a objetos
inanimados.
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar de ejecucin

La prctica de reconocimiento los equipos e instrumentos y instalaciones
del laboratorio, se realiz en el laboratorio de Biotecnologa Vegetal,
perteneciente a la Universidad Nacional Agraria de la Selva.

3.2. Materiales utilizados

Un bolgrafo
Una libreta de apuntes
El manual de practicas
Cmara fotogrfica

3.3. Metodologa

Para esta prctica, de reconocimiento, primeramente se realiz las indicaciones

respectivas por el docente encargado del curso, lo cual se explic sobre el
mantenimiento y cuidado del laboratorio.

Sucesivamente con la orientacin de la tcnica encargada del laboratorio,

pasamos de 5 en 5 personas, para conocer las instalaciones, asimismo los
equipos ms importantes en el laboratorio.
 IV. RESULTADOS
En el siguiente cuadro se muestra los materiales explicados en reconocimiento del laboratorio, con respeto al
rea donde se encuentra.

Cuadro 1. Materiales del laboratorio de biotecnologa vegetal

MATERIALES SEGN SU AREA

SALA DE PREPRACION SALA DE SIEMBRA SALA DE INCUBACION
Tubos de ensayos cmara de siembra muestras agrcolas
pipetas cmara de siembra manual muestras forestales
aire acondicionado 24C
materiales de laboratorio termostato
vaso precipitado centrifuga
refrigerador microcentrifuga
caja Petri espectrofotmetro
reactivos pH- metro
agitador vortex
 V. CONCLUSION

Se logr determinar y conocer las funciones de dicha rea, como es

la sala de preparacin, donde se preparan los cultivos y en caso de materiales
se encuentra las e vidrio como, el tubo de ensayo, vaso precipitado, pipetas etc.,
es un ambiente.

En la sala de siembra, su funcin es la siembra de cultivos, para lo

cual consta de materiales como; la cmara de siembra, cmara de siembra
manual, termostato, centrifuga, agitador vortex.

Por ultimo en la sala de incubacin se mostr un ambiente de

crecimiento de los cultivos , para lo cual necesita luz , por ende se deja la luz
prendida todo los das del ao, y aire acondicionado a 24C, en esta rea se
encuentra puras muestras.

Se aprendi las normas del laboratorio, la cual consiste, no entrar

con botas, no traer guardapolvos sucios, no ingerir alimentos, etc.
 VI. RECOMENDACIONES

1. Tener cuidado con los reactivos, y materiales de vidrio en la hora de

hacer el reconocimiento.
2. Llevar una cmara digital, para obtener las fotos de los materiales a
conocer.
3. Tener a la mano un bolgrafo y una libreta de apunte
4. Leer la gua de prctica antes de venir a clases para tener informacin
sobre, la prctica a realizar.
5. Tener cuidado a la hora de entrar a la sala de incubacin, de no
apoyarse mucho a las muestras, ya que podemos daar o romper.
 VII. BIBLIOGRAFIA

ALAVARO, V. 2004. Centro de Bachillerato Tecnolgico Industrial y de Servicios.

Operar Equipo y Material de Laboratorio. Investigacin microcentrifuga y
centrifuga.
ITSX. (Instituto tecnolgico superior de Xalapa).2011. Manual de operacin y
mantenimiento de los equipos del laboratorio de qumica y usos mltiples

ROCA, W; MROGINSKI.2003. Establecimiento de un laboratorio para el cultivo

de tejidos vegetales

EN LINEA

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf
http://www.uaa.mx/investigacion/revista/archivo/revista20/Articulo%207.pdf
ANEXOS
Figura1. Materiales de vidrio Figura 2. Termostato

Figura 3. Refrigerador Figura4. Muestra

Figura 5. Camara de sienbra manual Figura 6. Muestras

Figura 7. Camara de sienbra Figura 8. Centrifuga

Figura 9. Muestras en tubos de ensayo Figura 10. Agitador vortex

Figura 11. Pipetas

 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA FORESTAL

RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA

CURSO : BIOTECNOLOGIA FORESTAL

DOCENTE : Ing.Msc. JHINMY LARC HEMERYTH BARTRA

ALUMNO : SANTOS FLORES, Cleide

FECHA DE ENTREGA: 09-06-2017

TINGO MARA, PER

2017