Universidad de Cuenca

Facultad de Ciencias Qumicas - Carrera de Bioqumica y Farmacia

Cuenca-Ecuador

INFORME DE LABORATORIO DE MICOLOGIA

PRACTICA # 4
TEMA: Tcnicas de siembra
INTEGRANTES: Sofa Snchez y Anita Quito
GRUPO # 9A
FECHA: 16/04/2015

OBJETIVOS
Aplicar las tcnicas de siembra en diferentes muestras.
Observar y diferenciar el crecimiento de levaduras y mohos en medios de cultivo en caja y
en tubo.
Conocer las tcnicas de siembra aplicadas en Micologa Clnica.

MARCO TEORICO

Siembra de cultivos: introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo) en un medio

adecuado con el fin de iniciar un cultivo y luego el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento. (Arvalo, 2008)
Tcnicas de siembra:
Zigzag y por agotamiento empleado para muestras liquidas y la tcnica en varios puntos para
muestras secas.(Gua )
Tcnica de Agotamiento
Es un buen mtodo para el aislamiento de colonias (obtencin de colonias aisladas): mediante esta
tcnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inoculo. Para su realizacin se toma la
caja de Petri en la palma de la mano y ligeramente inclinada: con la mano contraria, se manipula el
asa de argolla previamente esterilizada por flameado directo a la llama y con ella se recoge el
material de cultivo, para colocarlo en un rea perifrica de la caja haciendo movimientos circulares
para homogenizar el inoculo; a continuacin se realiza una estra partiendo de la primera y
arrastrando los microorganismos presentes en ella hacia el extremo contrario de la superficie del
agar. Se debe procurar que en cada seccin de la caja las estras queden trazadas con mayor
separacin.(Rojas, 2011)
Tcnica de zig-zag
Depositamos la muestra lo ms alejado de nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag.
De esta forma vamos descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el trozo de
medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al final de la estra tengamos
colonias aisladas es importante que al principio hagamos la estra ms junta y que la cantidad de
muestra tomada en el asa sea la adecuada. (Rojas, 2011)

Tcnica de varios puntos

En profundidad con asa de punta se pica con el asa el cultivo a sembrar y se introduce mediante
puncin en el medio contenido en la parte inferior del tubo. (Seeley, 2006)

MATERIALES Y METODOS
Materiales:

Asas
Cajas Petri con SDA Reactivos para tinciones: ALF y
Gram
Tubos con SDA y SDA con antibitico
Mechero

Muestras
Cultivo en medio liquido con levaduras # 1
Cultivo en medio liquido con bacterias # 3
Vegetal contaminado con hongos

MTODOS:
De siembra:
Tcnica de zigzag
Siembra en varios puntos
Tcnica de agotamiento
De observacin directa:
Tincin de Gram
Azul de lactofenol
PROCEDIMIENTO

MUESTRAS

Escamas de lesin
Muestra 3 Muestra 3a
de sarna de perro
sembrar en: sembrar en: sembrar en:

SDA simple Mycosel SDA + antibitico SDA + antibitico

T. varios puntos T. varios puntos T. zig zag T. por agotamiento

incubar a 25C

tincin de gram.
tincin de lactofenol:
directa y scotch tape

observar al
microscopio

Procedimiento para teir las muestras

 Tincion de gram Azul de lactofenol
colocamos las muestras util para los
tomadas de los cultivos medios con SDA y
en un portaobjetos MYCOSEL

Una gota de azul de

fijamos la muestra lactofenol en la
placa

violeta de cristal 1min y tomar una asada

lavar de la muestra

solucion yodica 1min y

colocar en la placa
lavar

alcohol cetona 30 s observar con el

lavar y secar lente de 40x

observamoscon el
lente de 100x

RESULTADOS:

CARACTERISTICAS SDA + antibitico SDA + antibitico MYCOSEL SDA simple

MACROSCOPICAS
en el tubo en caja petri (en tubo) (en tubo)
Colonia Blanco Blanco Blanca Blanca
Color Reverso Blanco Blanco Amarillenta Blanca
Pigmen No existe No existe Negro Negro
to del
medio
Tamao de la En todo el medio Crecimiento en En todo el tubo En pocas partes
colonia partes
Dimetro 1mm de la colonia 2mm
Apariencia Granuloso Granuloso Algodonosa Cremosa

Grficos

CARACTERSTICAS MICROSCPICAS:
Escamas de sarna de Colonia 1 Colonia 2
perro en Mycosel
Caractersticas Hongo filamentoso Hongo filamentoso
Microscpicas
Micelio: Septado Continuo
Hialino Hialino
Delgado Grueso
Produccin, Tamao y Conidias producidas por No se observaron
Disposicin de las simple separacin de los conidias.
conidias tabiques, de tamao
pequeo.

GRAFICOS

Escamas de sarna de Colonia

perro en SDA simple
Caractersticas Hongo filamentoso
Microscpicas
Micelio: Continuo
Hialino
Grueso
Produccin, Tamao y No se observaron conidias.
Disposicin de las
conidias

GRAFICO

Muestra 3
(SDA +
antibitico)

Caractersticas Levaduras carcter Gram positiva.

Microscpicas Bacilos Gram negativo.
Cocos Gram positivos

GRAFICO
Muestra 3a
(SDA +
antibitico)
Caracterstica Levaduras carcter Gram
s positiva.
Microscpicas Bacilos Gram negativo en poca
cantidad

GRAFICO

CONCLUSIONES

En esta prctica se aprendi las tcnicas de siembra con la finalidad de poder observar
microorganismos en los cultivos realizados.

Es importante seguir todos los pasos para lograr un cultivo adecuado ya que de este depender ver
las caractersticas microscpicas como macroscpicas.

En las muestras de escamas de sarna de perro en SDA simple como en Mycosel se logr un cultivo
en ptimas condiciones ya que tanto para las caractersticas macroscpicas como microscpicas
hubo un crecimiento grande de colonias en la que se pudo observar fcilmente.

En el caso de las muestras 3 y 3a en SDA + antibitico a pesar que el medio contiene antibitico se
presentaron bacterias Gram + y Gram -, presencia que pudo ser por una contaminacin del medio.

Recomendaciones:

Esterilizar correctamente las asas.

Trabajar siempre en un medio asptico.

BIBLIOGRAFIA

Rojas, A. (2011).Conceptos y prcticas de microbiologa general.

Seeley H. W., (2006). Microbios en accin. Laboratorio Manual de Microbiologa. Cuarta Ed.WH
Freeman, Nueva York

Arevalo, A. (2008). Tcnicas de aislamiento. Laboratorio de Microbiologa.

Gua de laboratorio de la Dra. Carmen Lucia Lopez.