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2017 - I
ANALISIS Y TRATAMIENTO DE
AGUAS
MG.ING. FERNANDO
VASQUEZ PERDOMO
1
ANALISIS FISICQUIMICO DEL
AGUA
EL AGUA
El agua es un lquido anmalo porque
Es una mezcla de 18 compuestos posibles derivados de los tres
istopos que presenta cada uno de los tomos que componen su
molcula, H2O.
Su calor especfico es elevado.
Tiene mayor densidad en estado lquido que en estado slido.
Desde el punto de vista qumico debera ser un gas a temperatura
ambiente.
Adems, tiene elevada conductividad trmica fuerte poder ionizante
elevada constante dielctrica (aislante) gran poder disolvente la
propiedad de producir la disociacin electroltica y la hidrlisis.
Es la nica sustancia que se encuentra sobre la Tierra en los tres
estados.
Es el componente mayoritario de los seres vivos en los que juega un
papel fundamental.
Las propiedades anteriores, unidas a su abundancia y distribucin,
hacen del agua el compuesto ms importante de la superficie terrestre.
Otros datos de inters del agua
Es un compuesto esencial para la vida. Se utiliza en la alimentacin de
los seres vivos, en la agricultura, en la industria, etc.
Es el medio en el que se producen la mayora de las reacciones fsicas,
qumicas y bioqumicas que son fundamentales para la vida.
El volumen de agua presente en los seres humanos depende de la
edad y del tipo de tejido. El contenido promedio est en torno al 65%.
El principal factor de riesgo para numerosas intoxicaciones e
infecciones es el intercambio fisiolgico del agua, siempre que sta se
encuentre alterada en sus parmetros fsicos, qumicos o biolgicos
mediante contaminacin.
Dependiendo del uso que se vaya a hacer, es de mximo inters
controlar analticamente la calidad del agua.
Abundancia
El volumen total de agua del planeta equivale a 1400 millones
de km3.
El 90% no es utilizable por los seres vivos por estar
combinada en la litosfera.
El 10% restante se distribuye as:
97.6% en los ocanos
1.9% en los casquetes polares y glaciares
0.5% como agua dulce, la mayor parte (94% en los
acuferos). Por tanto, slo el 0.03% son aguas superficiales
libres en la corteza terrestre.
Cerca de 12000 km3 de agua, la mayor parte en forma de
vapor, se encuentra en cualquier momento en la
atmsfera.
Cada da se evaporan o transpiran 1120 km3 de agua dentro
de la atmsfera.
Las aguas subterrneas representan el 0,47 % de los
ANLISIS FSICOQUMICO DEL
AGUA
Anlisis de control que tiene por objeto
aportar informacin sobre la calidad
del agua y la eficacia del tratamiento
de potabilizacin e incluye tres tipos
de parmetros
Estreptococos fecales
Salmonellas
Enterovirus
Gases disueltos
Oxgeno
Nitrgeno
Dixido de carbono
Metano
cido sulfhdrico
Parmetros fsicos (I)
Color
Es el resultado de la presencia de materiales de origen vegetal tales
como cidos hmicos, turba, plancton, y de ciertos metales como
hierro, manganeso, cobre y cromo, disueltos o en suspensin.
Constituye un aspecto importante en trminos de consideraciones
estticas.
Los efectos del color en la vida acutica se centran en la disminucin
de la transparencia, que provoca un efecto barrera a la luz solar,
traducido en la reduccin de los procesos fotosintticos.
Olor
Es debido a cloro, fenoles, cido sulfhdrico, etc.
La percepcin del olor no constituye una medida, sino una apreciacin
y tiene, por tanto, un carcter subjetivo.
El olor raramente es indicativo de la presencia de sustancias
peligrosas en el agua, pero s puede indicar la existencia de una
elevada actividad biolgica. Por ello, en el caso de aguas potable, no
debera apreciarse olor alguno, no slo en el momento de tomar la
muestra sino a posteriori (10 das en recipiente cerrado y a 20C).
Parmetros fsicos (II)
Turbidez
Es una medida de la dispersin de la luz por el agua por la
presencia de materiales suspendidos coloidales y/o particulados.
La materia suspendida puede indicar un cambio en la calidad del
agua y/o la presencia de sustancias inorgnicas finamente divididas
o de materiales orgnicos.
La turbidez es un factor ambiental importante ya que la actividad
fotosinttica depende en gran medida de la penetracin de la luz.
La turbidez interfiere con los usos recreativos y el aspecto esttico
del agua.
La turbidez constituye un obstculo para la eficacia de los
tratamientos de desinfeccin.
La transparencia del agua es muy importante en las de aguas
potables y en el caso de industrias que producen materiales
destinados al consumo humano.
Slidos en suspensin
Comprenden a todas aquellas sustancias que estn suspendidas en
el seno del agua y no decantan de forma natural.
Parmetros fsicos (III)
Temperatura
La temperatura de las aguas residuales es importante a causa de sus
efectos sobre la solubilidad del oxgeno y, en consecuencia, sobre la
velocidad en el metabolismo, difusin y reacciones qumicas y
bioqumicas.
El empleo de agua para refrigeracin (por ejemplo en las centrales
nucleares) conlleva un efecto de calentamiento sobre el medio
receptor que se denomina contaminacin trmica.
Temperaturas elevadas implican la aceleracin de la putrefaccin,
con lo que aumenta la DBO y disminuye el oxgeno disuelto.
Densidad
Las medidas de densidad son necesarias en aguas de alta salinidad
para convertir medidas de volumen en peso.
Es prctica comn medir volumtricamente la cantidad de muestra
usada para un anlisis y expresar los resultados como
peso/volumen (por ejemplo, mg/L). Aunque ppm y mg/L slo son
medidas idnticas cuando la densidad de la muestra es 1, para
muchas muestras se acepta el pequeo error que se introduce al
considerar que 1 ppm es 1 mg/L.
Parmetros fsicos (IV)
Slidos
Se denominan as a todos aquellos elementos o compuestos
presentes en el agua que no son agua ni gases. Atendiendo a esta
definicin se pueden clasificar en disueltos y en suspensin. En
cada uno de ellos, a su vez, se pueden diferenciar los slidos
voltiles y los no voltiles.
La medida de slidos totales disueltos (TDS) es un ndice de la
cantidad de sustancias disueltas en el agua que proporciona una
indicacin de la calidad qumica. Analticamente se define como
residuo filtrable total (en mg/L).
El trmino slidos en suspensin describe a la materia orgnica e
inorgnica particulada existente en el agua. Su presencia participa
en el desarrollo de la turbidez y el color del agua, mientras que la
de slidos disueltos determina la salinidad del medio, y en
consecuencia la conductividad del mismo.
Conductividad
Es la medida de la capacidad del agua para
transportar la corriente elctrica y permite
conocer la concentracin de especies inicas
presentes en ella.
La contribucin de cada especie inica a la
conductividad es diferente por lo que su medida
da un valor que no est relacionado con el
nmero total de iones en solucin. Depende
tambin de la temperatura.
Est relacionada con el residuo fijo por la
expresin
conductividad (S/cm) x f = residuo fijo (mg/L)
El valor de f vara entre 0.55 y 0.9.
Parmetros qumicos (V)
Cloro y cloruros
El cloro elemental es un gas amarillo-verdoso
altamente soluble en agua que dismuta hidrolizndose
a cido hipocloroso (HOCl) y cido clorhdrico (HCl). A
su vez, el cido clorhdrico se disocia a iones
hidrgeno y cloruro, mientras que el cido hipocloroso,
que es un cido dbil, se disocia parcialmente en iones
hidrgeno e iones hipoclorito (OCl). Las proporciones
relativas de Cl2, HOCl y OCl en equilibrio (cloro libre
disponible) se encuentran controladas por el pH, la
temperatura y la fuerza inica.
El cloro en agua reacciona fcilmente con las
sustancias nitrogenadas para producir compuestos
clorados (cloro disponible combinado).
El cloro que permanece en agua despus de un
tratamiento se denomina cloro residual. El conjunto de
cloro libre y cloro combinado se nombra como cloro
residual total (TRC, total residual chlorine). La medida de
TRC se considera suficiente para definir las toxicidad
sobre los organismos acuticos de agua dulce.
El in cloruro se encuentra ampliamente distribuido en
forma de cloruro sdico, potsico o clcico. El gran
inconveniente es el sabor desagradable que comunica al
agua. Es tambin susceptible de ocasionar corrosin en
las canalizaciones y en los depsitos.
Fluoruros
La mayora de los fluoruros asociados con cationes
monovalentes son solubles en agua y los formados con
cationes divalentes son insolubles
Parmetros qumicos (VI)
Sulfatos
El in sulfato (SO42), muy soluble en agua, es la forma oxidada
estable del azufre. Los sulfatos de plomo, bario y estroncio son
insolubles.
El sulfato disuelto puede:
a) ser reducido a sulfito y volatilizado a la atmsfera como H2S
b) precipitado como sales insolubles
c) incorporado a organismos vivos.
Los sulfatos, en condiciones anaerbicas, son fuente de oxgeno
para las bacterias, convirtindose en H2S.
Se pueden producir por oxidacin bacteriana de los compuestos
azufrados reducidos.
Cianuros
Como cianuros se incluyen una serie de diversos compuestos
orgnicos caracterizados por el grupo CN. Los grmenes
aerobios responsables de la depuracin y los peces son sensibles a
un contenido de 0.1 mg/L
Parmetros qumicos (VII)
Fenoles
Los compuestos fenlicos afectan a las
especies pisccolas de diversas formas: por
toxicidad directa tanto a los peces como a los
organismos que les sirven como alimento y por
disminucin de la cantidad de oxgeno
disponible por la elevada demanda de oxgeno
de estos compuestos.
Haloformos
Son derivados orgnicos de los halgenos (F,
C1, Br, I). Los ms abundantes en el agua son
los trihalometanos, el tetracloruro de carbono y
el dicloroetano
Parmetros qumicos (VIII)
Metales
Compuestos constituidos por los diferentes elementos metlicos.
Sus caractersticas dependen, entre otros factores, del metal que est
incorporado.
Desde la perspectiva de los potenciales efectos perjudiciales que
puedan generar los metales ms importantes son mercurio y cadmio.
El mercurio puede formar numerosas especies, unas bastante solubles
y otras muy insolubles. La concentracin de mercurio en medios
acuosos es relativamente pequea pero de una elevada toxicidad
potencial como consecuencia de los procesos de bioacumulacin.
El cadmio se encuentra en las aguas como ion divalente, formando
compuestos orgnicos e inorgnicos, principalmente cloruros y
carbonatos.
Los carbonatos, sulfuros, e hidrxidos presentan una baja solubilidad
en agua.
La solubilidad del ion cadmio disminuye con el incremento de pH (se
favorece la formacin del hidrxido).
El cadmio presenta una toxicidad elevada con efecto acumulativo.
Parmetros qumicos (IX)
Pesticidas
Segn sus usos, se clasifican en insecticidas, fungicidas, herbicidas,
acaricidas, nematocidas, rodenticidas, etc.
Tambin pueden clasificarse atendiendo a sus caractersticas qumicas: se
usan sustancias minerales como azufre, sulfato de cobre, arseniato de
plomo y, sobre todo, compuestos orgnicos clorados como son los
insecticidas (DDT, lindano, aldrn, dieldrn, etc.) y los herbicidas derivados
de fenoxicidos.
Hay tambin steres fosforados (insecticidas: paratin, malatin, etc) y
compuestos orgnicos u organometlicos, cuyas molculas llevan
incorporadas grupos funcionales muy variados: derivados de la urea, de
las triacinas, carbamatos y ditiocarbamatos, etc.
En el medio acutico, la toxicidad de los pesticidas vara en funcin de su
naturaleza y segn las especies y su estado de desarrollo (huevo, alevn,
adulto).
Para los peces, los insecticidas clorados son 100 veces ms txicos que
los derivados organofosforados. Los herbicidas son mucho menos txicos
que los insecticidas (2000 a 3000 veces menos).
Los pesticidas fosforados son mucho ms txicos para el hombre y los
mamferos que los pesticidas clorados.
Parmetros qumicos (X)
Oxgeno disuelto
Es necesario para la vida de los peces y otros
organismos acuticos. El oxgeno es moderadamente
soluble en agua. Su solubilidad depende de la
temperatura, salinidad, turbulencia del agua y presin
atmosfrica
La solubilidad disminuye cuando aumenta la
temperatura y la salinidad y cuando disminuye la
presin atmosfrica.
La solubilidad del oxgeno atmosfrico en aguas
dulces, a saturacin y al nivel del mar, oscila
aproximadamente entre 15 mg/L a 0C y 8 mg/L a
25C.
Parmetros qumicos de calidad de
las aguas
pH
El pH es una medida de la concentracin de iones
hidrgeno, y se define como
Indicador de K2CrO4 al 5 %
Disolver 5 g K2Cr04 en agua destilada y aforar a 100 ml.
Estandarizacin
Colocar 15.0 ml de la solucin de NaCl
0.01N en un matraz Erlenmeyer de 125
ml. Y agregar 3 gotas de cromato de
potasio. La muestra adquiere un color
amarillo, titular con solucin de AgNO3
hasta que aparezca el vire color rojo
ladrillo.
Calcular la normalidad:
NaCl AgNO3
V1 x N1 = V2 x N2
V1 x N1
N2= ---------
V2
Donde:
V1 = Volumen de la solucin de NaCl
N1 = Normalidad de la solucin de NaCl
V2 = Volumen de la solucin de AgNO3 gastado en
la titulacin
N2 = Normalidad de la solucin de AgNO3
Procedimiento
Colocar 5 ml. de la muestra de agua en un matraz erlenmeyer de 125
ml.
Ajustar el pH entre 7.0 a 8.3 se aaden :
2 gotas de Na2CO3 0.1 N
2 gotas de Fenolftalena (0.25 %), tiene que producirse un color rosa.
Se aaden las gotas de H2SO4 0.1 N necesarias hasta que vire a
incoloro.
Agregar 3 gotas K2CrO4 al 5 %
Titular con AgNO3 0.01 N hasta el vire de amarillo a rojo ladrillo.
Clculos
V X N X 1000
meq/l de Cl = -----------------------
ml de muestra
Donde:
V = ml de AgNO3
N = Normalidad del AgNO3
Determinacin de Sulfatos
Los sulfatos se encuentran en las aguas naturales en un amplio intervalo
de concentraciones.
Las aguas de minas y los efluentes industriales contienen grandes
cantidades de sulfatos provenientes de la oxidacin de la pirita y del uso
del cido sulfrico.
Los estandares para agua potable del servicio de salud pblica tienen un
lmite mximo de 250 ppm de sulfatos, ya que a valores superiores tiene
una accin "purgante.
Los lmites de concentracin, arriba de los cuales se percibe un sabor
amargo en el agua son:
Para el sulfato de magnesio 400 a 600 ppm y para el sulfato de calcio son
de 250 a 400 ppm.
La presencia de sulfatos es ventajosa en la industria cervecera, ya que le
confiere un sabor deseable al producto.
En los sistemas de agua para uso domstico, los sulfatos no producen un
incremento en la corrosin de los accesorios metlicos, pero cuando las
concentraciones son superiores a 200 ppm, se incrementa la cantidad de
plomo disuelto proveniente de las tuberas de plomo.
Almacenaje de la muestra.
Hay que anotar, que si la muestra contiene materia
orgnica y cierto tipo de bacterias (sulfato
reductoras), los sulfatos son reducidos por las
bacterias a sulfuros. Para evitar lo anterior, las
muestras que tengan alta contaminacin, se deben
almacenar en refrigeracin o tratadas con un poco
de formaldehido.
Si la muestra contiene sulfitos, estos reaccionan a
un pH superior a 8.0, con el oxgeno disuelto del
agua y pasan a sulfatos, se evita esta reaccin,
ajustando el pH de la muestra a niveles inferiores a
8.0.
Aparte de los casos especiales mencionados, la
muestra no requiere de un almacenaje especial.
Campo de aplicacin
Este mtodo analiza sulfatos en un intervalo de 0 a 25 ppm,
en muestras de agua de uso domstico, industrial y agrcola.
Si la concentracin de sulfatos es superior a 25 ppm, se
diluye segn sea necesario.
Principios
La muestra es tratada con cloruro de bario, en medio cido,
formndose un precipitado blanco de sulfato de bario, se
requiere de un solvente acondicionador, que contiene
glicerina y alcohol, para modificar la viscosidad de la
muestra y as permitir que el precipitado de BaSO4 se
mantenga en suspensin, produciendo valores de turbidez
estables. La turbidez de este precipitado se mide en un
espectrofotometro a una longuitud de onda de 420 nm y con
una celda de 1 cm.
Na+ ] Na+ ]
K+ ] H+ K+ ]
Ca++ ] SO4= + BaCl2.H20 --------> BaSO4 + Ca++ ] Cl-
Mg++ ] Mg++ ]
Interferencias
En este mtodo las principales
interferencias son los slidos
suspendidos, materia orgnica y
slice, las cuales pueden ser
eliminadas por filtracin antes del
anlisis de sulfatos.
Aparatos
Cualquier espectrofotmetro que se pueda operar a una
longitud de onda de 420 nanometros, con celdas de
1 cm ( Spectronic-20).
Material
1 Matraz volumtrico de 1000 ml
6 matraces volumtricos de 100 ml
7 Matraces Erlenmeyer de 125 ml
1 Cpsula de porcelana
1 Soporte con pinzas para bureta
1 Bureta de 25 ml
1 Pipeta de 5 y 10 ml.
Reactivos
Solucin cida acondicionadora
Aadir 50 ml de glicerina a una solucin que contenga:
30.0 ml de HCl concentrado.
300 ml de agua destilada.
100 ml de alcohol etlico.
75 g de cloruro de sodio.
Reactivo de BaCl2 . 2H2O (tamao de partcula: malla 20 a 30)
Se requieren 0.5 g de cristales para cada muestra.
Solucin patrn de 100 ppm de SO4=
Disolver 0.1479 g de Na2SO4 secados a 110 C durante 2 horas y aforar
a 1000 ml.
Estandarizacin:
Curva de calibracin de sulfatos
Preparar una curva de calibracin con los siguientes puntos: 0, 5, 10,
15, 20 y 25 ppm de SO4=
Se colocan en 6 matraces volumtricos de 100 ml los siguientes
volmenes de solucin estandar de 100 ppm de SO4= : 0, 5, 10, 15, 20 y
25 ml, se afora con agua destilada hasta la marca.
Contine los pasos marcados en el procedimiento, para desarrollar la
turbidez.
Grafique absorbancia contra las p.p.m. de SO4=
Procedimiento Blanco
Preparar un blanco con agua destilada y reactivos y
ajustar la absorbancia a un valor de 0
Muestra
.Colocar 10 ml de la muestra de agua en un matraz
Erlenmeyer de 50 ml.
.Aadir 1 ml de la solucin cida acondicionadora.
.Mezclar bien
.Agregar 0.5 g de BaCl2 . 2H2O
.Agitar durante 1 minuto.
.Transferir la muestra a una celda de 1 cm del
espectrofotmetro y leer la absorbancia a una longitud de
onda de 420 nm dentro de los 2 minutos siguientes.
Clculos
De la curva de calibracin: Obtenga las ppm de SO4 = , de
acuerdo con la lectura de absorbancia de la muestra.
En caso de utilizar diluciones, se multiplica por el factor de
dilucin correspondiente.
( ppm) (dilucin)
Meq./ l de SO4 = -----------------------
PE del SO4
V1 x N1
N2 = --------------
V2
Dnde :
.N2 = Normalidad del EDTA
.V1 = ml de solucin de CaCl2
.N1 = normalidad de la solucin de CaCl2V2 = ml
gastados de EDTA
Procedimiento
* Colocar 5 ml de la muestra de agua en un matraz
erlenmayer de 125 ml
* Agregar 5 gotas de buffer PH 10
* Aadir 3 gotas de eriocromo negro T
* Titular con EDTA (sal disdica) 0.01 N
* Vire de prpura a azul
Clculos
V x N x 1000
meq/l Ca+2 y Mg+2 = -----------------------
ml de muestra
Dnde:
.V = ml gastados de EDTA
.N = Normalidad del EDTA
Clculos para Magnesio:
Reactivos:
a) Solucin indicador mixta: se disuelven 200 mg rojo de metilo en 100
mL de alcohol etlico al 95%. Por otra parte, se disuelven 100 mg de
azul de metileno en 50 mL en el mismo alcohol. Se combinan luego las
dos disoluciones. este reactivo se prepara mensualmente.
b) Solucin indicadora de cido brico: Se disuelven 20 g de cido
brico en agua destilada y se aaden 10 mL de solucin indicadora
mixta. Luego se lleva a 1 L. Se prepara mensualmente.
c) Titulante estndar de cido sulfrico 0,02 N: Se estandariza frente a
una cantidad de Na2CO3, incorporada a la solucin indicadora de
cido brico con el fin de reproducir las condiciones reales de
titulacin de la muestra. 1 mL = 280 mg N.
Procedimiento para muestras lquidas o muestras de fango o sedimento
Destilacin previa:
La destilacin previa es especialmente aconsejable para muestras de
aguas residuales, a fin de evitar las interferencias de aminas
aromticas y alifticas, as como protenas existentes en la muestra.
Materiales:
Aparato de destilacin compuesto de: matraz erlenmeyer de 250 mL,
columna de refrigerante con agua y placa calefactora. el destilado se
recoge sobre una disolucin de cido brico.
Agua destilada libre de amonio.
Disolucin de NaOH 6 N: Se disuelven 240 g de slido en agua
destilada, enrasando a 1 L.
Disolucin de NaOH 0,1 N: Se disuelven 4 g de slido en agua
destilada y se lleva a 1 L.
Disolucin de tetraborato sdico 0,025 N: Se disuelven 9,5 g de
Na2B4O710H2O slido en agua destilada y se lleva a 1 L.
Disolucin reguladora de borato: Se mezclan 88 mL de la disolucin de
NaOH 0,1 N con 500 mL de disolucin de borato 0,0025 N. Se enrasa a
1 L.
Disolucin de cido brico al 2%: Se indica su preparacin en el
Disolucin valorante de cido sulfrico 0,02 N.
Disolucin indicadora de punto final: Se indica su preparacin en el
apartado de reactivos de la seccin mtodo volumtrico.
50 mL de muestra se llevan a pH 9,5 con NaOH y luego se tamponan
con un tampn de borato, para reducir la hidrlisis de los cianatos y
los compuestos orgnicos nitrogenados. Se vierten en el matraz de
destilacin aadiendo tambin 2,5 mL de solucin reguladora de
borato.
Se destila y se recogen, en un vaso de precipitados, unos 30 mL de
destilado sobre 5 mL de disolucin de cido brico al 2%. Se transvasa
a un matraz aforado y se enrasa a 50 mL con agua destilada. A partir
de aqu ya se puede aplicar el mtodo de Nessler.
Para proceder a la valoracin volumtrica, se aaden a los 50 mL 4 o 5
gotas de indicador mixta. Se valora con el cido sulfrico 0,02 N hasta
que el indicador pase de color verdoso a violceo.
Para muestras de fango o sedimento:
A B
mg NH3-N/L (51 mL volumen final) =---------------- * --------
mL muestra C
Donde:
A = mg NH3-N en 51 mL de volumen final
B = Volumen final de destilado obtenido en mL e
incluyendo el absorbente cido.
C= Volumen de destilado tomado para nesslerizar en mL.
Nota: La relacin B/C slo es aplicable en las muestras
destiladas. No se usa en la nesslerizacin directa.
Anlisis de Materia Orgnica
Los compuestos orgnicos presentes en un lquido residual consisten
en una amplia variedad de compuestos orgnicos.
Desde el punto de vista del tratamiento, no es necesaria la
discriminacin de los diferentes tipos. No slo no es necesario, sino
que no existen equipos que permitan su caracterizacin. Es
injustificable desde el punto de vista de la ingeniera, tcnicamente
imposible y econmicamente prohibitivo.
La determinacin del contenido orgnico (cantidades de materia
orgnica, en general, mayores a 1 mg/L) de las aguas residuales se
estima en forma indirecta, mediante diversos mtodos: DBO5, DQO,
COT y Demanda de oxgeno al permanganato.
Estas tcnicas permiten obtener una estimacin de la materia orgnica
contenida en el lquido residual. Los resultados obtenidos para una
misma muestra, dados por las diferentes tcnicas no sern los
mismos. Esto no me permite hablar de valores absolutos de materia
orgnica, dado que se trata de diferentes procesos y diferentes grados
de oxidacin.
Procedimiento para determinacin de metales pesados en
agua potable (Mtodo de Espectrofotometra por Llama)
Objetivo, Aplicacin y Fundamentos
Determinar los metales pesados Cobre (Cu), Hierro (Fe),
Manganeso (Mn), Zinc (Zn), Plomo (Pb), Cadmio (Cd),
Cromo (Cr) disueltos en agua.
Aplicable para la determinacin de metales (Cu, Fe, Mn, Zn,
Pb, Cd, Cr) en aguas de consumo humano.
Se basa en la cuantificacin de los metales por
espectrofotometria de absorcin atmica, determinando la
cantidad de luz absorbida (de una longitud de onda
determinada para cada metal) por el elemento atomizado
por llama.
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica de llama directa.
Quemador de premezclado 5cm.
Gas combustible: Cilindro de gas de Acetileno (C2H2)99% de pureza.
Gases Oxidantes: Aire filtrado (compresor de aire). Oxido Nitroso 99% de pureza.
Placa Calefactora
. Lmparas de ctodo hueco de Cu, Fe, Mn, Pb, Cd, Cr para Espectrofotmetro de
Absorcin Atmica.
Dispensador de volumen de 10 mL, vaso Phillips o vaso de precipitado de 125 a
250 mL, micropipeta 100-1000 uL y pipetas aforadas clase A.
Material volumtrico: Matraz de 1000mL y/o 100mL de clase A. Tubos de plstico
resistente con tapa y graduado. Todo este material debe ser tratado previamente
a su uso lavndolo con HNO3 10% (o similar) para eliminar trazas, luego debe ser
enjuagado con agua desionizada.
Agua grado reactivo.
Acido Ntrico concentrado 65% p.a o de calidad superior.
Acido Clorhdrico 37% p.a. o de calidad superior.
Solucin de HNO3 1:1 con agua grado reactivo.
Solucin Estndar Multielementos de 100mg/L de Metales Pesados. Tomar
alicuotas de acuerdo a tabla 1.
Blanco curva de calibracin: Tomar 1 mL de solucin de HNO 1+1 en un matraz
aforado de 100 mL clase A y llevar a volumen con agua grado reactivo.
Cu Fe Mn Zn Pb Cd Cr
1 Blanco 0 ul 1ml c.s.p.100mL 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
2 1 100 ul 1ml c.s.p.100mL 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10
3 2 200 ul 1ml c.s.p.100mL 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20
4 3 3000 ul 1ml c.s.p.100mL 0.30 0.30 0.10 0.30 0.30 0.30 0.30
5 4 400 ul 1ml c.s.p.100mL 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40
Condiciones del Espectrofotmetro de Absorcin Atmica (Ver tabla 2)
Tabla 2 Condiciones del Espectrofotometro de Absorcin Atmica
Smbolo (nm) % corriente Gases Tipo de seal
lmpara Llama
Enfermedad agente
ORIGEN BACTERIANO
Fiebre tifoidea y salmonela typhi,
Paratifoideas salmonella
Paratyphi A y B
Enterovirus, Adenovirus,
Origen parasitario
Entamoeba histolytica
Disenteria amebiana
Giardia lambia
Cristosporidium
En los pases en vas de desarrollo las
enfermedades producidas por estos
patgenos son uno de los motivos ms
importantes de muerte prematura, sobre
todo de nios. Normalmente estos
microbios llegan al agua en las heces y
otros restos orgnicos que producen las
personas infectadas.
Al hacer el anlisis de las aguas no buscamos tal o cua
microorganismo patgeno, es decir, no aislamos o
identificamos los microorganismos patgenos del agua
sino que averiguamos si esta tiene o no contaminacin de
origen fecal. Criterio sanitario para un agua de consumo
humano.
Mtodos de anlisis:1. Bacterias coliformes y Escherichia
coli (E. coli): UNE EN ISO 9308-1:2000.2. Enterococos: UNE
EN ISO 7899-2:2001. 3. Clostridium perfringens (incluidas
las esporas)4. Enumeracin de microorganismos
cultivables-Recuento de colonias a 22 C:UNE EN ISO
6222:1999.
Otros test complementarios:
Salmonelas
Estafilococos patgenos
Bacterifagos fecales
Enterovirus
Protozoos
Animlculos (gusanos-larvas), Invertebrados bnticos
Medios de cultivo
Anlisis microbiolgico: Bacterias coliformes
Fundamento
Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de
morfologa bacilar, Gramnegativas, aerobias o anaerobias
facultativas, oxidas a negativa, no esporuladas y que
fermentan la lactosa con produccin de cido a 37Cen 24-
48 horas. Del grupo coliformes forman parte varios
gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter.
Escherichia coliproduce dolor abdominal, diarrea,
nauseas, vmitos y fiebre. Klebsiella produce
enfermedades respiratorias. Citrobacter produce
alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal.
Mtodo
El mtodo consiste en desarrollar solo una prueba
presuntiva en el que una reaccin negativa excluye la
presencia del grupo coliforme.
Procedimiento
Inocular caldo de peptona con diluciones decimales de la
muestra de agua, expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3
tubos de lactosa bilis verde brillante (a los que se les
aade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada
dilucin. Incubar a 37C(+/-1C) durante 24 48h.
Lectura e interpretacin
Si se observa crecimiento bacteriano con produccin de
gas las 24h o antes, la presencia de bacterias coliformes
fecales se considerar confirmada, prosiguiendo con el
mtodo del filtro de membrana para conteo.
Mtodo de filtracin de membrana. (UNE EN ISO 9308-1:2000)
Fundamento
Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en
el grupo anterior (coliformes totales), que adems son capaces de
fermentar la lactosa, con produccin de cido y de gas a 44C, en un
tiempo mximo de 24h.
Mtodo
El mtodo consiste en la determinacin del n de coliformes mediante
filtracin de volmenes determinados del agua a analizar por filtros de
membrana e incubacin sobre medio de lactosa enriquecido (agarde
lactosa TTC con heptadecil sulfato de sodio) y una temperatura de
44,5C(+/-0,2C).
Toma de muestra y almacenamiento.
Se utiliza la muestra de agua tomada para el anlisis de coliformes
totales que se encontraba guardada en frigorfico a 4C.
Procedimiento
Colocar un filtro de membrana estril sobre el soporte de filtracin.
Adaptar el embudo y conectar el matraz a una bomba elctrica de
vaco. Filtrar 100 ml de muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml
si se trata de aguas no potables, previamente homogeneizadas. Lavar
con unos 30 ml de agua destilada. Retirar el embudo. Mediante las
pinzas esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de
cultivo contenido en una placa de Petri, de modo que la superficie de
filtracin quede hacia arriba. Cerrar e invertir la placa e incubar a
44C(+/-1C) durante 24h ( +/-2h ).
Lectura e interpretacin
La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias
aparecidas sobre la membrana y el examen de los halos en la capa de
agar subyacente a la membrana. La fermentacin de la lactosa provoca
la formacin de un halo amarillo. Por ello se considera coliformes a
quellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro
naranja (Escherichiay Citrobacter), o halo amarillo con centro rojo
ladrillo (Klebsiellay Enterobacter). La densidad se estima como el total
de coliformes totales por 100ml, utilizando aquellos filtros de
membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no ms de 200.
Anlisis microbiolgico: Enterococos fecales (Norma UNE-EN ISO
7899-2: 2001)
Fundamento
Los Enterococos pueden considerarse como indicadores de
contaminacin fecal. Sin embargo, algunos Enterococos presentes en
las aguas pueden proceder de otros hbitats. Se pueden detectar y
cuantificar las especies: Enterococcusfaecalis, E. faecium, E. duransy
E. hirae. Adems, pueden determinarse ocasionalmente otras especies
de Enterococcusy algunas especies de Streptococcus (en particular S.
bovisy S. equinus). Estas especies de Streptococcus no tienen una
supervivencia larga en agua y probablemente no puedan determinarse
cuantitativamente. Como Enterococos intestinales se consideran
aquellos microorganismos capaces de reducir el cloruro de 2,3,5-
trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina en las condiciones y
sobre unos medios especficos
Mtodo
Se utiliza para la determinacin del nmero de Enterococos intestinales
mediante filtracin de un volumen determinado del agua a analizar a
travs de filtros de membrana e incubacin de los mismos sobre
medios de cultivo a temperaturas adecuadas.
Procedimiento
Se filtran 100 mldel agua a analizar previamente homogeneizada. Se
coloca el filtro de membrana sobre el medio de Slanetzy Bartleyy se
incuban las placas a 37Cdurante 48 h.
Lectura e interpretacin
Tras la incubacin, se consideran como colonias tpicas de
enterococos todas las que muestren un color rojo, marrn o rosado,
en el centro o en toda la colonia, consecuencia de la reduccin del TTC
(incoloro) a trifenilformazn (rojo)
Nota:
Si hay colonias tpicas se realizar un ensayo confirmativo. Para ello,
con ayuda de unas pinzas estriles, se transfiere el filtro de membrana
con las colonias, sin invertirla, sobre una placa con agarbilis-esculina-
azida , precalentada a 44C. Se incuba a 44Cdurante 2 h y se lee la
placa inmediatamente. En este medio, los enterococoshidrolizan la
esculina dando origen a esculetina (6,7-dihidrocumarina) que se
combina con los iones Fe3+formando un compuesto de color marrn a
negro. Por tanto, se considera que todas las colonias tpicas que
muestren un color de marrn a negro, en el medio circundante, dan
reaccin positiva y se cuentan como enterococos.
Anlisis microbiolgico: Clostridium perfringens
(incluidas esporas)
Fundamento
Las bacterias incluidas en el gnero Clostridium tienen
morfologa bacilar, son Gram positivas, anaerobias
estrictas y capaces de formar esporas. La especie C.
perfringens estn normalmente presente en heces. Sus
esporas son resistentes al calor, a los procesos de
desinfeccin y a los tratamientos de depuracin habituales
de las aguas (cloracin), por lo que su supervivencia en
agua es mayor. La diferenciacin de C. perfringens de
otras especies de Clostridium, se basa en su capacidad de
fermentar la sacarosa con produccin de cido, en su
incapacidad de fermentar la celobios a (debido a la
ausencia de -D-glucosidasa) y en la produccin de
fosfatasa cida.
Mtodo
Se utiliza de mtodo de filtracin para la determinacin del
nmero de C. perfringens mediante filtracin de un
volumen determinado del agua a analizar a travs de filtros
de membrana e incubacin de los mismos sobre medios
de cultivo a temperaturas adecuadas.
Procedimientos
Siguiendo el mtodo de filtracin, se filtran 100 ml del agua
a analizar, previamente homogeneizado. Se coloca el filtro
de membrana sobre el medio de m-CP y se incuban las
placas a 44Cdurante 24 h en condiciones de anaerobiosis.
Lectura e interpretacin
Tras la incubacin, se consideran como colonias tpicas de
C. perfringens todas las que muestren un color amarillo
opaco, consecuencia de la acidificacin del medio tras la
fermentacin de la sacarosa, y que cambien a color rosa o
rojo al cabo de 20 a 30 segundos de exposicin a vapores
de hidrxido amnico. En general, el resto de las especies
de Clostridium aparecen de color azul-verdoso si, adems
de fermentar la sacarosa, son -D-g lucosidas apositivas
(hidrolizan el indoxil--D-glucsido) o de color prpura si
no fermentan la sacarosa. NOTA: Aunque no est incluido
en la Normativa se realizar una tincin de Gramde una de
las colonias positivas para observar al microscopio.
Anlisis microbiolgico: Bacterias aerobias UNE EN ISO
6222:1999
Fundamento
Las bacterias aerobias son todas las bacterias
hetertrofas, aerobias o anaerobias facultativas, mesfilas
y psicotrficas capaces de crecer en un medio de
agarnutritivo. Este recuento de colonias es til para
evaluar el estado de los recursos de agua en su origen y la
eficacia del proceso de tratamiento de las aguas
destinadas al consumo humano e indica la limpieza y el
estado de los sistemas de distribucin. De igual modo,
permite detectar cambios anmalos en el nmero de
microorganismos en la red de distribucin. As, todo
aumento repentino del nmero obtenido puede advertir de
la existencia de un foco de contaminacin y requerira su
inmediata investigacin.
Mtodo
Este mtodo se basa en contar el nde colonias desarrolladas en una
placa de medio de cultivo slido, en el que se ha sembrado un
volumen conocido de agua muestra, transcurrido un tiempo y una
temperatura de incubacin determinados.
Procedimiento
Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno. Inocular el
caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua
problema expresados en 10-1, 10-2, 10-3. De cada dilucin depositar 1
ml en cada placa de Petri. Verter 30 ml de medio de cultivo de agaren
cada placa y dejar solidificar (5-10min), invertir las placas y meterlas
en la estufa a 37C (+/-1C), incubar durante 48h. Tambin se emplean
placas con medio agarextracto de levadura en las que se siembra un
volumen conocido de agua, y la incubacin se lleva a cabo a
22Cdurante 72 horas.
Lectura y expresin de resultados
Transcurridos 48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en
cada placa. El resultado se expresar, como n de bacterias totales en
1 ml. Se estima utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-
80 colonias de coliformes y no ms de 200.
GRACIAS