Manual Amostragem e Coleta de Solos

Manual de Procedimentos de
Coleta de Amostras em
Manual de Procedimentos de Coleta de Amostras em reas Agrcolas para

reas Agrcolas para Anlise
da Qualidade Ambiental:
Anlise da Qualidade Ambiental: Solo, gua e Sedimentos

Solo, gua e Sedimentos
A intensificao dos estudos ambientais trouxe, em seu Editores tcnicos

bojo, a necessidade de uma constante melhoria nos
procedimentos e mtodos de amostragem de solo, de gua e de
sedimento. Pela interao de diversos fatores, as amostras Heloisa Ferreira Filizola
provenientes desses componentes da paisagem, para fins de
avaliao de qualidade ambiental, requerem anlises Marco Antnio Ferreira Gomes
diferenciadas, fato que implica em procedimentos de coletas
tambm diferenciados. Para cada situao h tcnicas
Manoel Dornelas de Souza
especficas, que incluem desde a distribuio espacial dos locais
de amostragem, at os procedimentos de acondicionamento e
de transporte das amostras.
O presente manual destinado a todos aqueles que

trabalham com o meio ambiente e tem o propsito de subsidiar
as amostragens de campo, seja da matriz solo, gua ou
sedimentos, com a finalidade de enfatizar os cuidados e critrios
de coleta a serem adotados, para que as amostras sejam as mais
representativas possveis do local a ser amostrado.
Manual de P rocedimentos de
Procedimentos
Coleta de Amostras em reas
Agrcolas para Anlise da
Qualidade Ambiental:
Solo
Solo,, gua e Sedimentos
Repblica Federativa do Brasil
Luiz Incio Lula da Silva
Presidente
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Roberto Rodrigues
Ministro
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Conselho de Administrao
Luis Carlos Guedes Pinto

Presidente
Slvio Crestana
Vice-Presidente
Alexandre Kalil Pires

Cludia Assuno dos Santos Viegas
Ernesto Paterniani
Hlio Tollini
Marcelo Barbosa Saintive
Membros
Diretoria-Executiva da Embrapa
Slvio Crestana
Diretor-Presidente
Tatiana Deane de Abreu S

Jos Geraldo Eugnio de Frana
Kepler Euclides Filho
Diretores-Executivos
Embrapa Meio Ambiente
Paulo Choji Kitamura

Chefe-Geral
Ladislau Arajo Skorupa

Chefe-Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento
Maria Cristina Martins Cruz

Chefe-Adjunto de Administrao
Ariovaldo Luchiari Jnior

Chefe-Adjunto de Comunicao e Negcios
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Manual de P rocedimentos de
Procedimentos
Coleta de Amostras em reas
Agrcolas para Anlise da
Qualidade Ambiental:
Solo
Editores tcnicos
Heloisa Ferreira Filizola

Marco Antnio Ferreira Gomes

Jaguarina, SP
2006
Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na:

Rodovia SP 340 - km 127,5 - Tanquinho Velho
Caixa Postal 69 13820-000 Jaguarina, SP
Fone: 19-3867-8750 Fax: 19-3867-8740
sac@cnpma.embrapa.br www.cnpma.embrapa.br
Comit de Publicaes:
Cludio Cesar de Almeida Buschinelli, Heloisa Ferreira Filizola, Ladislau Arajo
Skorupa (Presidente), Manoel Dornelas de Souza, Maria Amlia de Toledo Leme,
Maria Conceio Peres Young Pessoa, Marta Camargo de Assis, Osvaldo Machado
R. Cabral, Sandro Freitas Nunes.
Reviso de texto Editorao eletrnica

Heloisa Ferreira Filizola Silvana C. Teixeira Estevo
Normalizao bibliogrfica Capa

Maria Amlia de Toledo Leme Manoel Dornelas de Souza
Projeto grfico Fotos da capa

Silvana C. Teixeira Estevo Arquivo Embrapa Meio Ambiente
1 edio
1 impresso (2006): 1000 exemplares
Todos os direitos reservados.

A reproduo no autorizada desta publicao, no todo
ou em parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei n. 9610).
permitida a reproduo parcial do contedo

deste livro desde que citada a fonte.
CIP. Brasil. Catalogao na publicao.
Filizola, Heloisa Ferreira

Manual de procedimentos de coleta de amostras em reas agrcolas
para anlise da qualidade ambiental: solo, gua e sedimentos / editado
por Heloisa Ferreira Filizola, Marcos Antonio Ferreira Gomes e Manoel
Dornelas de Souza. - Jaguarina: Embrapa Meio Ambiente, 2006.
169p. il.
ISBN 85-85771-43-7
1. Solo - Coleta - Amostra. 2. gua - Coleta - Amostra. 3. Sedimento

- Coleta - Amostra. I. Gomes, Marco Antonio Ferreira. II. Souza,
Manoel Dornelas de. III. Ttulo.
CDD 631.417 202
Embrapa Meio Ambiente, 2006

Autores
Adriana Marlene Moreno Pires

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Agrnoma, D. Sc. em Solos e
Nutrio de Plantas, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina,
SP, CEP 13820-000. adriana@cnpma.embrapa.br
Anibal Ramadan Oliveira

Bilogo, M.Sc em Zoologia, Departamento de Zoologia, IB-USP, Caixa Postal
11461, So Paulo, SP, CEP 05422-970. arolivei@carpa.ciagri.usp.br
Heloisa Ferreira Filizola

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Pedlogo, D.Sc. em Cincias da Terra,
Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP 13820-000.
filizola@cnpma.embrapa.br
Jlio Ferraz de Queiroz

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Oceanlogo, D.Sc. em Cincias
Agrrias, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. jqueiroz@cnpma.embrapa.br

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Agrnomo, Dr. em Solos e Nutrio
de Plantas, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. dornelas@cnpma.embrapa.br

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Gelogo, D.Sc em Solos e Nutrio
de Plantas, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. gomes@cnpma.embrapa.br
Marcos Antnio Vieira Ligo

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Eclogo, D.Sc. em Ciclagem de
Nutrientes, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. ligo@cnpma.embrapa.br
Mariana Pinheiro Silveira

Pesquisadora da Embrapa Meio Ambiente, Ecloga, M. Sc. em Ecologia, Rod.
SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP 13820-000.
mariana@cnpma.embrapa.br
Raquel Ghini
Pesquisadora da Embrapa Meio Ambiente, Engenheiro Agrnomo, Ph.D. em
Fitopatologia, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. raquel@cnpma.embrapa.br
Rita Carla Boeira

Pesquisadora da Embrapa Meio Ambiente, Agrnoma, D. Sc. em Cincia do
Solo, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP 13820-
000. rcboeira@cnpma.embrapa.br
Sonia Cludia Nascimento de Queiroz

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Qumica, D. Sc. em Qumica, Rod.
SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP 13820-000.
sonia@cnpma.embrapa.br
Sueli dos Santos Freitas

Pesquisadora do IAC, Microbiologista, D. Sc. em Solos e Nutrio de Plantas,
Av. Baro de Itapura, 1481, Caixa postal 28, Campinas, SP, CEP 13001-
970. sfreitas@iac.sp.gov.br
Vera Lcia Ferracini

Pesquisador da Embrapa Meio Ambiente, Qumica, D. Sc. em Qumica
Orgnica, Rod. SP 340, km 127,5, Caixa Postal 69, Jaguarina, SP, CEP
13820-000. veraf@cnpma.embrapa.br
Apresentao
A Embrapa Meio Ambiente desenvolveu ao longo da ltima dcada

um conjunto de mtodos de anlise ambiental em diferentes condies naturais e
situaes agropecurias. Dada a diversidade das regies brasileiras em que atuou,
tornou-se excelncia em termos de oferta de mtodos e indicadores visando a
qualidade ambiental de reas rurais.
Neste Manual de Procedimentos de Coleta de Amostras em reas
Agrcolas para Anlise da Qualidade Ambiental: Solo, gua e Sedimentos a
equipe de pesquisa da Embrapa Meio Ambiente envolvida com o tema qualidade
ambiental, especialmente de gua e solo, com a colaborao de pesquisadores do
Instituto Agronmico de Campinas (IAC) e do Instituto Biolgico (IB) de So Paulo,
apresenta procedimentos e mtodos para a coleta de amostras de solo, gua e
sedimentos.
O Manual que tem como editores Heloisa F. Filizola, Marco Antnio
F. Gomes e Manoel Dornelas de Souza, pesquisadores da Embrapa Meio Ambiente,
tem o mrito de reunir em uma nica publicao, um conjunto de mtodos,
instrumentos e boas prticas que vo desde o planejamento, escolha do tipo de
amostragem, a coleta, o transporte e o armazenamento de amostras de solos, de
gua e de sedimentos abrangendo uma diversidade de situaes e anlises
ambientais.
Na Parte I do Manual os editores destacam questes gerais como a
importncia da amostragem, a escolha do tipo de amostragem, o seu planejamento
e execuo, as fontes comuns de erros e os processos de contaminao de
amostras.
Na Parte II do Manual, o foco a amostragem de solos, destacando-
se as tcnicas, planejamento, os tipos de amostragem e suas aplicaes. So
dedicados captulos especiais para as particularidades que cercam a amostragem
de solos para a anlise de metais pesados, de nitratos, de agrotxicos e de
parmetros biolgicos.
J na Parte III do Manual, os editores destacam a amostragem de
guas superficiais, a preservao e o transporte de amostras, apresentando para
tanto os procedimentos para fins de anlise biolgica envolvendo parmetros
como fitoplncton, zooplncton, bactrias; anlise de nitratos e metais pesados
e; de agrotxicos, neste caso com recomendaes de procedimentos tambm
para a amostragem de guas subterrneas.
Finalmente, a Parte IV do Manual, destaca as especificidades da
amostragem de sedimentos para anlise de metais pesados em corpos dgua
como rios, riachos, crregos, lagos, lagoas e represas; para anlise de agrotxicos
de sedimentos; para anlises fsico-qumicas de sedimentos de lagos e represas/
tanques de aquicultura; e para anlises biolgicas de sedimentos utilizando-se,
entre outros organismos, os macroinvertebrados bentnicos, as macrfitas, os
fungos aquticos e as macroalgas.
, assim, um Manual bsico de boas prticas de amostragem de
solo, gua e sedimentos, fundamental para pesquisadores, extensionistas rurais,
tcnicos de organizaes no-governamentais, comunidades rurais e mesmo para
o cidados comuns que atuam no dia-a-dia da educao ambiental e do
monitoramento e gesto ambiental em quaisquer regies brasileiras envolvendo
uma diversidade de problemas ambientais originadas de atividades agropecurias.
Paulo Choji Kitamura

Chefe Geral da Embrapa Meio Ambiente
Prefcio
A intensificao dos estudos ambientais trouxe, em seu bojo, a

necessidade de uma constante melhoria nos procedimentos e mtodos de
amostragem de solo, de gua e de sedimento. Pela interao de diversos fatores,
as amostras provenientes desses componentes da paisagem, para fins de avaliao
de qualidade ambiental, requerem anlises diferenciadas, fato que implica em
procedimentos de coletas tambm diferenciados. Para cada situao h tcnicas
especficas, que incluem desde a distribuio espacial dos locais de amostragem,
at os procedimentos de acondicionamento e de transporte das amostras.
O presente manual destinado a todos aqueles que trabalham com
o meio ambiente e tem o propsito de subsidiar as amostragens de campo, seja
da matriz solo, da matriz gua, ou de sedimentos, com a finalidade de enfatizar
os cuidados e critrios de coleta a serem adotados, para que as amostras sejam
as mais representativas possveis do local a ser amostrado.
A seguir sero detalhados procedimentos para as fases de
levantamentos preliminares, localizao dos pontos de coleta, freqncia e formas
de amostragem, acondicionamento, estocagem e transporte dos materiais
coletados. Sero tambm descritos os materiais utilizados, de modo que se consiga,
entre outras vantagens, retardar ou inibir a ao biolgica, assim como a
volatilizao e a hidrlise de compostos, com o objetivo de assegurar as condies
mais prximas possveis daquelas da hora e do local de coleta.
Os editores
Sumrio
Parte I - GENERALIDADES
Captulo 1: A importncia e as formas de amostragem em estudos ambientais
Heloisa F. Filizola, Marco Antnio F. Gomes e
Manoel Dornelas de Souza ........................................................................... 17
1.1. Processos Contaminantes ............................................................ 17
1.2. A Amostragem .......................................................................... 18
1.2.1. O Planejamento da Amostragem ............................................ 19
1.2.1.1. Fontes de Erro ............................................................... 20
1.2.2. Freqncia de Amostragem ................................................... 21
Parte II - SOLOS
Captulo 2: A amostragem de solos
Heloisa F. Filizola, Marco Antnio F. Gomes e
Manoel Dornelas de Souza ........................................................................... 25
2.1. Tcnicas de amostragem .............................................................. 25
2.1.1. Amostragem contnua com tubo .............................................. 25
2.1.2. Amostragem por tradagens sucessivas ....................................... 26
2.2. O planejamento da amostragem ................................................... 27
2.2.1. Avaliao por microbacias ...................................................... 28
2.2.2. Amostragem ao longo de vertentes ........................................... 29
2.3. Plano de amostragem .................................................................. 30
2.3.1. Amostragem por critrios ou determinista ................................... 30
2.3.2. Amostragem aleatria simples .................................................. 30
2.3.3. Amostragem aleatria estratificada ........................................... 31
2.4. Amostras simples ou pontuais ....................................................... 32
2.5. Amostras pontuais mltiplas ......................................................... 32
2.6. Amostras compostas ................................................................... 32
2.7. Amostragem da gua ou da soluo do solo .................................... 33
Capt ulo 3: Amostragem de solos para anlise de metais pesados
Captulo
Heloisa F. Filizola, Manoel Dornelas de Souza e
Marco Antnio F. Gomes ............................................................................. 37
3.1. Como amostrar .......................................................................... 39
3.1.1. Uso contnuo de fertilizantes .................................................... 40
3.1.2. O uso contnuo de lodo de esgoto ............................................. 40
3.2. Locais de amostragem ................................................................. 42
3.3. Freqncia da amostragem ........................................................... 43
Captulo 4: Amostragem de solos para anlise de nitratos

Manoel Dornelas de Souza e Adriana M. M. Pires ....................................... 49
4.1. Determinao do plano de amostragem .......................................... 50
4.2. Coleta das amostras de solo ......................................................... 51
Captulo 5: Amostragem de solos para anlise de agrotxicos

Marco Antnio F. Gomes, Heloisa F. Filizola, Manoel Dornelas de Souza,
Vera L. Ferracini e Sonia C. N. Queirz ...................................................... 53
Captulo 6: Amostragem de solo para anlises biolgicas

Raquel Ghini, Sueli dos Santos Freitas e
Anibal Ramadan Oliveira ........................................................................... 57
6.1. Representatividade da amostra ...................................................... 58
6.2. Coleta das amostras de solo ......................................................... 64
6.3. Transporte e armazenamento ........................................................ 67
6.4. Amostragem para isolamento ou quantificao de microrganismos
rizosfricos ....................................................................................... 70
Parte 3 - GUA
Captulo 7: Amostragem de gua para anlises biolgicas
Mariana Pinheiro Silveira e Jlio Ferraz de Queiroz ..................................... 83
7.1. Amostragem das guas de superfcie ............................................... 83
7.1.1. Rios .................................................................................... 83
7.1.1.1. Localizao dos pontos de amostragem ............................... 83
7.1.1.2. Metodologia de amostragem .............................................. 84
7.1.2. Lagos, lagoas e represas ......................................................... 88
7.1.2.1. Localizao dos pontos de amostragem .............................. 89
7.2. Parmetros biolgicos ................................................................. 89
7.2.1. Fitoplncton ......................................................................... 89
7.2.2. Zooplncton ......................................................................... 94
7.2.2.1 O zooplncton como bioindicador de
qualidade de gua ............................................................ 97
7.2.3 Bactrias .............................................................................. 98
Captulo 8: Amostragem de gua para anlise de nitrato e de metais pesados
Adriana M. M. Pires, Manoel Dornelas de Souza e
Marcos Antonio Vieira Ligo ....................................................................... 103
8.1. Determinao do local e da freqncia de amostragem .................... 105
8.2. Coleta das amostras de gua ...................................................... 105
8.3. Preservao das amostras .......................................................... 106
Captulo 9: Amostragem de gua para anlise de agrotxicos

Sonia C. N. Queiroz, Vera L. Ferracini e Marco A. F. Gomes ...................... 109
9.1. Conservao da amostra ............................................................ 111
9.2. Amostragem ............................................................................ 112
9.2.1 gua superficial ................................................................... 112
9.2.2. gua subterrnea ................................................................ 113
9.3. Extrao em fase slida de amostras in situ ................................... 113
9.4. Identificao e Registro .............................................................. 114
Parte 4 - SEDIMENTOS
Captulo 10: Amostragem de sedimentos para anlise de
metais pesados
Marco Antonio Ferreira Gomes e Heloisa F. Filizola ..................................... 119
10.1. Planejamento da amostragem ................................................... 119
10.1.1. Nmero de amostras e de locais de coleta ............................ 119
10.2. Amostradores ......................................................................... 120
10.2.1. Amostrador manipulado por mergulhador ............................ 120
10.2.2 Amostradores a mbolo ou pisto ........................................ 121
10.2.3. Amostradores vibratrios ................................................... 122
10.2.4. Dragas ........................................................................... 122
10.3. Amostragem de sedimentos em rios, crregos e riachos .................. 123
10.4. Amostragem de sedimentos em lagos, represas e audes ................. 124
10.5. Recuperao e acondicionamento das amostras ............................ 124
Captulo 11: Amostragem de sedimento para anlise de

agrotxicos
Vera L. Ferracini, Sonia C. N. Queiroz e Marco A. F. Gomes ...................... 127
11.1. Amostragem .......................................................................... 128
11.2. Equipamentos de Amostragem .................................................. 131
11.2.1. Amostradores de Garra ..................................................... 132
11.2.2. Amostradores de Ncleo ................................................... 132
11.3. Transporte das amostras ...................................................... 133
11.4. Consideraes finais ........................................................... 133
Captulo 12: Amostragem de sedimentos do fundo de lagos, represas e viveiros
de aquicultura para anlises fsico-qumicas
Julio Ferraz de Queiroz, Rita Carla Boeira e
Mariana Pinheiro Silveira ......................................................................... 137
12.1.Tipos de coletores para sedimentos ............................................... 139
12.2. Local de amostragem ............................................................... 142
12.3. Metodologias de amostragem ..................................................... 144
12.3.1. Procedimento de coleta com o coletor simplificado ...................... 147
12.3.1.1. Amostragem de sedimentos em sries sucessivas com a utilizao do
coletor simplificado .......................................................................... 150
Captulo 13: Amostragem de sedimentos para anlises biolgicas

Mariana Pinheiro Silveira, Julio Ferraz Queiroz e
Rita Carla Boeira ...................................................................................... 153
13.1. Macroinvertebrados bentnicos ................................................... 153
13.1.1. Habitat e vantagens de uso ................................................. 153
13.1.2. Coleta e amostragem ........................................................ 153
13.1.3. Processamento de amostras ................................................ 156
13.2. Fungos aquticos ..................................................................... 158
13.2.1. Distribuio e importncia .................................................. 158
13.2.3. Processamento de amostras ................................................ 159
13.3. Macroalgas Bentnicas e Perifton ............................................... 160
13.3.1. Habitat e importncia ....................................................... 160
13.4. Macrfitas .............................................................................. 164
13.4.1. Distribuio e importncia .................................................. 164
A importncia e as formas de amostragem em estudos ambientais
Parte I
GENERALIDADES
15
Manual de Procedimentos de Coleta de Amostras em reas Agrcolas para Anlise da
Procedimentos
Qualidade Ambiental: Solo
16
Captulo 1
A importncia e as formas de amostragem em estudos

ambientais
Heloisa Ferreira Filizola, Marco Antnio F. Gomes e

1.1. Processos contaminantes
Nas reas agrcolas, os solos e as plantas geralmente recebem

uma grande carga de agrotxicos, seja na forma de nutrientes ou de defensivos
agrcolas, que podem permanecer no solo, ser absorvidos pelas plantas, ser
carreados para as guas superficiais, ou, ainda, lixiviados, atingindo as guas
subterrneas. As guas provenientes de pastos, currais e pocilgas, alm da
contribuio da carga orgnica, tendem a aumentar o ndice de coliformes
fecais e nutrientes nos cursos de gua, lagos ou represas. Como a contaminao
nas reas rurais pode provir de vrias fontes, designada como contaminao
por fontes difusas. Os despejos industriais, que podem ser encontrados tanto
em reas rurais como urbanas, so classificados como fonte de contaminao
pontual.
Os processos contaminantes podem ser separados em eventuais
ou rotineiros. A contaminao eventual aquela causada por um aporte muito
grande, de maneira ocasional, de um produto perigoso vida, no solo ou
diretamente na gua. Este tipo de contaminao de difcil deteco por
meio de programas de monitoramento.
A contaminao rotineira aquela causada por lanamentos
contnuos de produtos potencialmente contaminantes, como os agrotxicos.
O monitoramento da qualidade das guas e dos solos geralmente tem como
objetivo detectar este tipo de poluio. Esse tipo de contaminao geralmente
tende a ocorrer nas reas de atividades agropecurias.
17
Procedimentos
1.2. A Amostragem
A amostragem de importncia fundamental na avaliao e no

controle da contaminao das guas, dos solos, dos sedimentos e dos produtos
agrcolas, no se constituindo unicamente na coleta das amostras a serem
analisadas, mas envolvendo desde o planejamento da amostragem at a
interpretao dos dados que, posteriormente permitiro a tomada de decises
relativas s exigncias de tratamento da rea, caso esteja contaminada, e o
controle das fontes de contaminao.
A amostragem envolve um bom conhecimento do local e seu
entorno, do problema em questo (contaminao por agrotxicos, metais
pesados, etc.), a escolha dos pontos mais representativos e dos equipamentos
mais adequados e os mtodos de preservao das amostras. O objetivo da
amostragem coletar um volume de gua, de solo, de sedimento ou planta
suficiente para as anlises a serem realizadas.
As amostras devero ser identificadas por um nmero ou sigla,
local de coleta, data e hora. Para tanto, devem ser utilizados etiquetas e
marcadores resistentes gua, ao manuseio e estocagem. Registrar em um
caderno informaes sobre o local amostrado, em especial as coordenadas
geogrficas obtidas por meio de GPS, dados sobre o tipo da amostra, o
amostrador utilizado, as condies do tempo, alm dos dados inseridos nas
etiquetas. O volume de 1 litro de gua ou 100g de solo, suficiente para a
maioria das anlises. Deve-se utilizar recipientes separados para anlises
microbiolgicas, de agrotxicos e de metais pesados.
Os frascos para a coleta de amostras de gua devero ser de
vidro de borosilicato, de preferncia escuros, ou de polietileno, e resistentes a
lcalis. Tampas rosqueveis de plstico inerte constituem a melhor forma de
vedao, j que as tampas de borracha podem desintegrar-se ou liberar metais-
trao quando na presena de solventes orgnicos e as tampas de vidro no
so adequadas para solues alcalinas.
Os frascos a serem usados devero ser rigorosamente limpos
com detergentes apropriados, enxaguados com gua bidestilada e, a seguir,
com acetona de alta pureza e serem mantidos sempre vedados.
18
Dependendo do tipo de anlises a serem realizadas, os solos

podero ser acondicionados em vidros, frascos plsticos ou de polietileno de
boca larga ou ainda em sacos plsticos. Os primeiros encarecem o processo
de amostragem, mas certos tipos de compostos podem reagir com o plstico,
impedindo que as amostras coletadas neste tipo de material sejam adequadas.
Para a coleta de solos os frascos utilizados para o
acondicionamento das amostras devem ser previamente tratados, para limpeza
e descontaminao, com cido ntrico 10% por 24hs e enxaguados cinco
vezes com gua deionizada (CASARINI et al., 2001).
Deve-se procurar sempre transportar as amostras do local de
coleta para o laboratrio em recipientes, como caixas de isopor ou caixas
trmicas, que as protejam de luz e do aumento de temperatura. Se o tempo
necessrio para a coleta e o transporte superar algumas horas o uso de gelo
pode ser uma alternativa. Se o tempo for mais prolongado, passando de 12
horas, deve-se usar gelo seco com vedao total da caixa trmica ou caixa de
isopor.
1.2.1. O Planejamento da Amostragem
Em reas agrcolas, a avaliao e o monitoramento em especial

da gua, so geralmente realizados em microbacias, que so consideradas
como unidades elementares da paisagem. De acordo com a situao a ser
avaliada, o monitoramento poder ainda ser executado na escala da vertente,
em parcelas e mesmo ao longo da rede de drenagem da rea. A escolha da
escala de trabalho depender do tipo de contaminao a ser avaliado.
A identificao das possveis fontes de poluio fator
fundamental na localizao dos pontos de monitoramento e na freqncia da
amostragem.
Para a elaborao deste planejamento necessrio o
conhecimento das caractersticas da rea tais como a hidrografia, os solos
(tipos e textura), a geologia, a topografia, em especial a declividade, os
parmetros climticos como a pluviosidade, o regime das chuvas e das
temperaturas, os ventos, sinais de eroso e manejo atual e passado da rea.
19
Procedimentos
Neste ltimo item devero ser levantadas informaes relativas ao uso do

solo, tais como a localizao das reas de mata e de cultura, os tipos de
cultura praticados, as prticas culturais adotadas, os produtos utilizados nas
lavouras, tais como agrotxicos, fertilizantes e corretivos, em que dosagem e
qual a freqncia e datas de aplicao dos mesmos.
importante que a localizao dos pontos de coleta sejam
georreferenciados por GPS, conforme j mencionado anteriormente ou, no
mnimo, com trena e bssola, para a avaliao da distribuio espacial do(s)
elemento(s) contaminante(s). Dessa forma, a localizao das reas com solos
contaminados permitir formular inferncias sobre a possibilidade de
contaminao dos corpos de gua superficiais por carreamento do solo, ou,
ainda, de acordo com as caractersticas do(s) elemento(s) contaminante(s), a
poluio dos lenis freticos por lixiviao.
No caso de solos e soluo do solo, a escolha dos pontos e da
profundidade da amostragem mais eficientes est sujeita ao que est se
procurando (metais pesados, resduos de agrotxicos, nitrato). Por exemplo,
se o agrotxico procurado for pouco solvel e tiver o coeficiente de partio
do carbono orgnico (Koc) alto, a amostragem do solo no precisar ser muito
profunda, j que sua mobilidade baixa. Mas se o solo tiver sido arado aps a
aplicao de um herbicida, a coleta dever ser feita entre 25-30 cm de
profundidade, j que este intervalo corresponde profundidade mdia de arao.
As diferentes formas de planejamento da amostragem sero
discutidas nos captulos a seguir.
1.2.1.1. Fontes de erro
Trs tipos de erro esto associados amostragem: a)

amostragem em si, b) escolha dos locais e c) aos erros analticos. Como
estes erros so cumulativos devem ser levados em considerao no
planejamento da amostragem (DICK et al., 1996).
a) Erros de amostragem: ocorrem porque no possvel analisar
a totalidade da rea e as amostras coletadas representam apenas um pequeno
subgrupo.
20
b) Erros de seleo dos locais: derivam da retirada de amostras

no representativas da rea, como por exemplo, amostras de solo coletadas
em carreadores.
c) Erros analticos: podem resultar da manipulao, do recipiente
de coleta, da estocagem, do preparo e da tcnica analtica.
Aumentando-se o nmero de amostras, aumenta-se a preciso,
diminuindo assim o impacto do erro de amostragem. J o erro de seleo pode
ser reduzido com um bom plano de amostragem.
1.2.2. Freqncia de amostragem
Os perodos de coleta so to importantes quanto a escolha dos

locais e tambm no so fixos, pois esto condicionados ao que ser monitorado.
O processo produtivo nas reas agrcolas pode ser subdividido em vrias etapas:
preparo do solo, que inclui, de maneira geral, arao, gradagem, aplicao de
herbicidas pr-plantio, fertilizao e calagem; plantio; aplicaes de defensivos
agrcolas pr e ps-emergentes ao longo do perodo da cultura e colheita.
Assim, a freqncia de amostragem vai estar subordinada aos contaminantes
a serem monitorados e das etapas citadas acima. A freqncia de amostragem
para cada matriz e possveis contaminantes ser discutida nos captulos a
seguir.
Referncias
CASARINI, D.C.P.; DIAS, C.L.; LEMOS, M.M.G. Relatrio de estabelecimento

de valores orientadores para solos e guas subterrneas no Estado de So
Paulo. So Paulo: CETESB Companhia de Tecnologia de Saneamento
Ambiental, 2001. 246p.
DICK, R.P.; THOMAS D.R.; HALVORSON, J.J. Standardized methods sampling

and sample pretreatment. In: DORAN, J.W.; JONES, A.J. (Ed.). Methods for
assessing soil quality. Madison: Soil Science Society of America, 1996. 410p.
(SSSA Special Publication, 49).
21
Procedimentos
22
A amostragem de solos
Parte II
SOLOS
23
Procedimentos
24
Captulo 2
Heloisa Ferreira Filizola, Marco Antnio Ferreira Gomes

e Manoel Dornelas de Souza
2.1. Tcnicas de amostragem
A escolha das tcnicas de amostragem est condicionada

localizao dos resduos no perfil do solo, do tipo de solo e das propriedades
dos contaminantes que esto sendo monitorados. H uma variedade muito
grande de tcnicas de coleta de solos na zona insaturada. Estas tcnicas podem
ser divididas em dois tipos: coleta de amostra contnua por meio de um tubo
inserido no solo, manualmente ou por meio de um equipamento hidrulico; e
coleta segmentada do solo por tradagens sucessivas.
2.1.1. Amostragem contnua com tubo
Na amostragem contnua de solo no perturbado so utilizados

tubos de no mnimo 50 mm de dimetro para garantir a quantidade necessria
de solo para mais de uma anlise, caso seja necessrio repeti-la. Tubos deste
dimetro, geralmente podem ser inseridos manualmente at uma profundidade
aproximada de 0,5 m. De 1 a 2 m de profundidade necessria a utilizao de
sondas pequenas de impacto e em maiores profundidades deve ser utilizado
equipamento de perfurao convencional. O tubo de amostragem deve ser
cuidadosamente limpo antes da sua insero no solo, conforme o item 1.2.
Esta forma de coleta usada para a coleta de um perfil completo de solo, o
qual, aps a coleta, seccionado nas profundidades de interesse.
Existem dois problemas relacionados a esta tcnica. O primeiro
est relacionado estrutura do solo do horizonte superior. Geralmente a
25
Procedimentos
estrutura solta ou em grnulos, o que favorece o deslocamento destes ao

longo das laterais do tubo, quando este pressionado para baixo, contaminando
assim o solo em maior profundidade. Segundo Norris et al. (1991), uma forma
de evitar este inconveniente congelar o tubo com o solo coletado, abri-lo e
manualmente retirar o material deslocado ao longo do tubo.
Ainda segundo os autores acima, outra forma de evitar o problema
seria coletar o horizonte superior separadamente, alargar o furo de coleta,
forr-lo para impedir que o material de cima se desloque e inserir um novo
tubo a partir desta profundidade.
O segundo problema a possibilidade de compactao ou
expanso do solo dentro do tubo, o que faz com que o comprimento da amostra
no tubo no seja equivalente profundidade coletada. Esta alterao
normalmente est ligada a uma mudana da textura do solo, ou quando a
rocha encontrada.
2.1.2. Amostragem por tradagens sucessivas
a mais utilizada, permitindo que a coleta ultrapasse os 10m de

profundidade sem necessidade de equipamentos pesados ou sofisticados. O
formato da extremidade do trado manual de ao inox a ser utilizado vai
depender do tipo de solo a ser amostrado: normalmente utiliza-se rosca para
materiais coesos (argilosos) e caneco para materiais granulares (arenosos).
Esta forma de coleta no compacta o solo, permitindo que a profundidade
amostrada seja realmente aquela que o trado atingiu. Outra vantagem que
dado o dimetro do trado (entre 7 e 8,5cm) a quantidade de solo retirada,
alm de ser mais do que suficiente para as anlises, ser, dada a quantidade,
mais representativa.
Um aspecto importante o cuidado que o tradador deve ter ao
introduzir o trado no solo para evitar que material de superfcie e de
profundidades menores sejam incorporados aos de maior profundidade.
Os demais equipamentos de coleta so: enxada para limpeza da
superfcie do solo, esptulas de ao inoxidvel para retirada das amostras e
bandejas de polietileno para homogeneizao das amostras, no caso de amostras
compostas.
26
A cada ponto de amostragem, a vegetao, a cobertura vegetal

morta e o material grosseiro da superfcie do terreno devem ser removidos
com a enxada, tomando-se o devido cuidado para no remover uma camada
muito espessa da superfcie do solo. A camada superficial (1 a 5 cm) deve ser
coletada manualmente, com o auxlio de um anel tambm de ao inoxidvel,
com dimetro de 5 cm e a altura de acordo com a profundidade a ser coletada.
Aps cada tradagem, o solo deve ser retirado do trado com o
auxlio de uma esptula e colocado na bandeja de homogeneizao, no caso
de amostras compostas. A poro superior da amostra deve ser descartada,
quando esta no for a coleta dos 10 primeiros centmetros; a poro aderida
ao trado tambm dever ser desprezada, de modo a evitar a contaminao da
amostra com metais originrios da ferramenta, assim como as laterais da
amostra, para eliminar ao mximo qualquer possibilidade de contaminao do
solo acima. As amostras simples devero ser colocadas diretamente no saco
plstico ou no frasco de boca larga, etiquetadas e identificadas.
A quantidade de amostra no precisa ser muito grande, 100g
so suficientes, pois normalmente so utilizados de 10 a 20g de Terra Fina
Seca ao Ar (TFSA), para a quantificao de metais pesados ou de agrotxicos
existentes.
A cada nova amostragem, em maior profundidade, os
equipamentos de campo devem ser tratados com cido ntrico e enxaguados
com gua deionizada (CASARINI et al., 2001).
Aps a coleta das subamostras, o solo coletado dever ser
homogeneizado manualmente, utilizando-se um par de luvas descartveis
especficas para cada bandeja, formando uma amostra composta para cada
profundidade. Esta dever ento ser colocada no frasco ou saco plstico
etiquetado e identificado e acondicionada para o transporte ao laboratrio.
2.2. O Planejamento da Amostragem
Como j dito, em reas agrcolas, a avaliao e o monitoramento

so geralmente feitos a partir de microbacias, mas em funo da situao a
27
Procedimentos
ser avaliada, o monitoramento poder ainda ser executado na escala da

vertente, ou em parcelas.
2.2.1. Avaliao por microbacia
Uma microbacia pode comportar mais de um tipo de solo e de

atividades agrcolas. A variao do solo, quando existir, tem como conseqncia
um funcionamento hdrico diferenciado dentro da microbacia, assim em solos
arenosos a infiltrao vertical da gua mais intensa que em outros tipos de
solos e, deste ponto de vista, seriam os solos que teriam maior capacidade de
lixiviao de agrotxicos para as guas subterrneas, enquanto que, nos solos
argilosos, a tendncia maior seria o retardamento da infiltrao da soluo do
solo com a reteno, pela argila e pelos xidos de ferro, de alguns compostos
orgnicos, ou ainda a mudana de direo do fluxo de gua que pode passar
de vertical a lateral.
As atividades agrcolas so o ponto de partida para a seleo das
molculas/compostos a serem monitorados, sejam elas orgnicas (agrotxicos,)
ou inorgnicas (nitrato, nitrito, amnio e metais pesados) j que mesmo que
existam aqueles comuns a vrias culturas, alguns deles so especficos para
certos tipos de culturas. Assim, nas reas cultivadas com soja, no h razo
para monitoramento do N, enquanto potencial contaminante. Assim, o primeiro
passo delimitar as reas com solo e culturas diferentes. Em seguida, dever
ser feito o levantamento dos agrotxicos utilizados em cada cultura e as
pocas de aplicao.
Os agrotxicos levantados devero ser ento agrupados em
classes segundo seu grau de toxidade, sua meia vida, seu Koc, seu potencial
de lixiviao, que so os parmetros utilizados para a seleo daqueles que
devem ser monitorados e em que matriz solo, soluo do solo ou gua
subterrnea. No captulo 5, estes parmetros sero melhor definidos.
A partir da delimitao dos tipos de solos, da definio dos
agrotxicos que sero monitorados e da poca de aplicao pode-se ento
definir os locais onde o solo dever ser coletado, a profundidade e a
periodicidade das coletas. A profundidade e os perodos de coleta devero
28
estar relacionados s datas de aplicao e de acordo com os parmetros fsico-

qumicos citados acima.
2.2.2. Amostragem ao longo de vertentes (Fig. 1)
Na amostragem ao longo de uma vertente importante o

conhecimento dos solos, dos fluxos hdricos internos ao longo da mesma e da
profundidade e declividade do lenol no tero inferior da vertente. Este tipo de
avaliao muito utilizado quando a microbacia selecionada homognea,
tanto em termos de solos, como em termos de cultura, pois a amostragem
feita ao longo de uma vertente, seria representativa de toda a microbacia.
Permite tambm, a partir dos resultados das anlises, juntamente com os
dados acima (tipo de solo, hdricos e cultura), a formulao de modelos de
previso de contaminao da gua subterrnea.
Em qualquer um dos casos acima, a amostragem dos solos pode
ser feita por amostras simples ou pontuais, por amostras mltiplas, em torno
e prximas a um ponto, que ser considerado o ponto de coleta ou por amostra
composta, cuja coleta feita em vrios pontos da rea ou das parcelas e que
depois so misturadas. Na condio de amostras mltiplas ou de amostra
composta, cada poro amostrada denominada de subamostra.
Fig. 1. Pontos de amostragem ao longo das vertentes de uma microbacia.

Adaptado de Boulet (1990).
29
Procedimentos
2.3. Plano de amostragem
O nmero e os locais de coleta devem ser definidos dentro do

plano de amostragem especfico de cada projeto. Este plano dever ser
preparado em funo do objetivo do projeto. A primeira deciso a ser tomada
para o planejamento da amostragem se a rea dever ser seletivamente
amostrada amostragem por critrios; aleatoriamente amostrada ou dividida
em subreas para amostragem amostragem aleatria estratificada (DICK
et al., 1996).
2.3.1. Amostragem por critrios ou determinista
apropriada para certas situaes onde h claras

evidncias que uma rea representativa do problema, mas depende bastante
da prtica do investigador. Geralmente este tipo de amostragem no
recomendado por que no h maneira de avaliar a preciso/relao dos
resultados j que estes so inteiramente dependentes do julgamento e bom
senso do amostrador.
2.3.2. Amostragem aleatria simples
Este tipo de amostragem evita a subjetividade na

amostragem. Uma das formas de execut-la marcar uma rede ou grade de
pontos (grid) sobre a rea. A distncia, horizontal e vertical, entre os pontos
da rede, no fixa pois subordinada ao tamanho da rea a ser amostrada,
por exemplo, em parcelas experimentais pequenas (100 X 100m), geralmente
a rede de 10 X 10m.
Conforme a rea a ser monitorada aumenta, o tamanho da grade
tambm aumenta. importante que esta grade seja desenhada e referenciada
com as coordenadas de cada ponto de interseco entre as linhas, com piquetes
marcando, no campo, estes pontos. O ideal seria coletar o maior nmero de
amostras possvel, mas dado o custo das anlises e o tempo a ser despendido,
30
normalmente tratamentos estatsticos diversos so utilizados para a

determinao do nmero mnimo de pontos a serem coletados e qual sua
distribuio na rede (Fig. 2).
Fig. 2. Mapa de amostragem aleatria, com as dimenses, em escala, da rea.
Um dos inconvenientes da amostragem aleatria que a mesma

fornece informaes limitadas da distribuio espacial do que est sendo
monitorado.
2.3.3. Amostragem aleatria estratificada
A amostragem aleatria estratificada obtida coletando uma

amostra aleatria dentro de cada subrea como explicado para a amostragem
aleatria simples. As subreas so definidas por suas caractersticas originais
que podem ser identificadas. Estas podem ser: o tipo de solo, a topografia, ou
as diferenas do uso do solo. A vantagem deste procedimento que permite
que o investigador caracterize cada subrea e melhore a preciso para estimar
a rea inteira da amostragem. As desvantagens so: trabalho maior para a
amostragem e custos analticos mais altos. Na Figura 1 pode ser encontrado
um exemplo de delimitao das subreas, tanto por tipo de solo, como por
cultura .
31
Procedimentos
2.4. Amostras simples ou pontuais
A amostragem pontual pode ser realizada de maneira

determinista, aleatria ou em grade de pontos (grid). A amostra simples leva
a resultados pontuais, j que a distribuio dos diferentes elementos no solo
no homognea, podendo estar localmente concentrados ou mesmo no
estarem presentes em outros locais.
Do conjunto dos resultados das amostras simples pode ser
extrada a mdia da quantidade do(s) elemento(s) na rea em avaliao e
saber o mximo e o mnimo de cada um dos elementos presentes, mas como
a amostra simples requer uma grande quantidade de pontos de coleta e de
anlises, para ser representativa, acaba tornando-se mais dispendiosa.
2.5. Amostras pontuais mltiplas (Fig. 3a)
As amostras mltiplas em torno e prximas a um ponto, que ser

considerado o ponto de coleta, tendem a diminuir o erro que a amostra simples
pode induzir. Esta forma de amostragem pode tambm ser feita de forma
determinista, aleatria ou em grade. Definido o ponto de coleta, so retiradas,
em torno deste ponto, de 3 a 5 subamostras que sero misturadas e analisadas
como se fossem a mesma amostra.
2.6. Amostra composta (Fig. 3b)
Para se obter uma amostra composta, a coleta feita em vrios

pontos da rea ou da parcela. O resultado analtico da amostragem composta
a mdia, no matemtica, da quantidade do(s) elemento(s) procurado(s) na
rea ou parcela. Este procedimento de amostragem baseado em uma srie
de operaes para extrair quantidades de solo, que, combinadas e reduzidas a
tamanho apropriado, sero representativas da rea em questo.
Para se obter amostras representativas necessrio levar em
considerao que existe uma grande variedade de condies sob as quais as
amostras sero coletadas; deste modo torna-se difcil estabelecer um
32
procedimento que seja aceito e ideal em todas as situaes. Assim, a anlise

de cada situao a melhor forma de planejar e executar a amostragem.
Fig. 3. a) Amostras pontuais mltiplas. b) Amostra composta.
2.7. Amostragem da gua ou soluo do solo
Para a coleta da soluo do solo, normalmente utilizam-se

extratores de soluo. Estes extratores podem ser comprados no mercado
(Fig. 4) ou mesmo construdos pelo usurio. Amostradores da gua ou de
soluo do solo, tambm chamados lismetros de suco, so usados para
coletar amostras da soluo do solo. Os amostradores so instalados nas
profundidades desejadas e ali deixados, quando no houver problemas de roubos
ou depredao dos mesmos, para serem utilizados nas amostragens peridicas.
Estes amostradores consistem basicamente em uma cpsula ou copo de
cermica porosa e em um tubo ou garrafa de coleta. Uma bomba de vcuo
usada para criar vcuo no amostrador, que extrai a gua da matriz do solo por
meio de uma cpsula porosa.
No caso de extratores construdos pelo usurio, deve-se tomar
cuidado para que o lquido coletado nas garrafas no fique exposto luz e ao
calor. Para tanto deve-se utilizar caixas de isopor com gelo, ou enterrar as
garrafas no solo. Outra soluo fazer o vcuo no final do dia e a coleta das
33
Procedimentos
garrafas de manh bem cedo. Para se ter uma quantidade suficiente da soluo
o ideal instalar vrios extratores nos pontos e profundidades de coleta.
O procedimento consiste em se aplicar uma presso de suco
(vcuo), com o uso de uma bomba de vcuo, para que a gua suba, por
capilaridade, pela mangueira tipo espaguete, at o frasco que encontra-se
fixado na haste (PVC) principal do extrator. O frasco deve ser em vidro mbar
para proteo contra a fotodecomposio do produto amostrado. Em seguida
extrao, a amostra deve ser colocada, imediatamente, em recipiente
refrigerado de preferncia em gelo e conduzido para o laboratrio onde dever
ser guardado em cmara fria a 5C, seguindo os mesmos procedimentos
adotados para as amostras de solo.
Pode-se tambm coletar o solo em campo, 2 a 5kg (dependendo
do estado de umidade do mesmo), e extrair a soluo em laboratrio via panelas
de Richard. Essa no a melhor maneira, pois requer muito material para que
se consiga no mnimo 0,5L de soluo.
34
Fig. 4. Diversos tipos de amostradores de soluo do solo. Cortesia da

Soilmoisture Equipment Corp.
http://www.soilmoisture.com/catalog.html
35
Procedimentos
Referncias
BOULET, R. Organization des couverture pdologiques des bassins versants

ECEREX Hypothses sur leur dinamique. In: SARRAILH, J.M. (Coord.). Mise
en valeur de lcosystme forestier guyanais (Operation ECEREX). Paris: INRA
& CTFT, 1990. p.15-45.
DICK, R.P.; THOMAS D.R.; HALVORSON, J.J. Standardized methods sampling

and sample pretreatment. In: DORAN, J.W.; JONES, A.J. (Ed.). Methods for
assessing soil quality. Madison: Soil Science Society of America, 1996. 410p.
(SSSA Special Publication, 49).
NORRIS, F.A.; JONES, R.L.; KIRKLAND, S.D.; MARQUARDT, T.E. Techniques

for collecting soil sample in field research studies. In: NASH, R.G.; LESLIE,
A.R. (Ed.). Groundwater residue sampling design. Washington, D.C.: American
Chemical Society, 1991. 396p.
36
Amostragem de solos para anlise de metais pesados
Captulo 3
Heloisa Ferreira Filizola, Manoel Dornelas de Souza e

A presena de metais pesados, definidos como os elementos

qumicos com densidade maior que 5g cm-3, em fertilizantes e corretivos tem
sido objeto de muitos estudos devido ao fato destes elementos permanecerem
no solo por um tempo indefinido e, dessa forma, causar perigo sade humana
ou animal ao entrarem na cadeia alimentar, ou de serem carreados por
enxurradas para as guas superficiais ou, ainda, lixiviados para a gua
subterrnea.
Embora a solubilidade dos metais pesados dependa da forma em
que esses se encontrem no solo, o pH uma das caractersticas do solo que
mais afeta a solubilidade. A medida que o pH aumenta, a solubilidade do Cd,
Cu, Hg, Ni, Pb, Zn e do Cr, no estado de oxidao III, diminui, enquanto que
As, Mo e Se tornam-se solveis (BERTON, 2000).
Em geral os metais pesados encontrados nos fertilizantes e
corretivos so: Cdmio (Cd), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Nquel (Ni), Chumbo
(Pb), Ferro (Fe), Cobalto (Co), Mangans (Mn), Molibdnio (Mo), Mercrio
(Hg), Estanho (Sn) e Zinco (Zn). Entre estes, deve-se ressaltar que alguns so
essenciais s plantas (Cu, Fe, Mn, Mo, Ni e Zn), s bactrias fixadoras de
nitrognio (Co) e aos animais (Co, Cr, Cu, Fe, Mn, Mo e Zn).
Apesar da possibilidade de mobilizao dos metais no perfil dos
solos, normalmente os maiores teores so encontrados nos horizontes
superficiais, nos quais tambm ocorre maior acmulo de matria orgnica, o
que possibilita a formao de quelatos, imobilizando-os.
Solos submetidos a cultivos intensivos, por longos perodos de
tempo, tendem a apresentar nveis mais elevados de metais pesados,
37
Procedimentos
especialmente em regies de agricultura baseada em tcnicas modernas e

sem restries econmicas, j que as formulaes NPK e as diversas formas
de fosfato so importantes fornecedores de metais pesados (Tabela 1).
Tabela 1. Teores de alguns metais pesados em corretivos e fertilizantes
A quantidade de metais pesados no solo sem interferncia

antropognica resulta do teor destes na rocha de origem e do grau de
intemperizao que esse material sofreu (Tabela 2).
Tabela 2. Teores de metais naturalmente presentes nos solos no Estado de So

Paulo.
Solos avaliados: Latossolos Vermelhos, Latossolos Vermelho-Amarelos, Nitossolos
Vermelhos, Argissolos Vermelhos, Argissolos Vermelho-Amarelos, Gleissolos,
Neossolos Quartzarnicos, Neossolos Flvicos, Neossolos Litlicos, Organossolos
Hplicos, Cambissolos e Espodossolos
38
A CETESB em seu Relatrio de estabelecimento de valores

orientadores para Solos e guas Subterrneas no Estado de So Paulo
(CASARINI et al., 2001) prope valores de alerta (Tabela 3) com base em
risco e no conceito de preveno contaminao, de modo a evitar que o solo
transforme-se em rea contaminada. Sua funo a de orientar a aplicao
de insumos agrcolas, de lodo de estao de tratamento e avaliao de fonte
de contaminao por deposio atmosfrica de material particulado (ex.:
chumbo secundrio), entre outros.
O valor de alerta (Tabela 3) indica uma possvel alterao da
qualidade natural dos solos e guas subterrneas e, quando excedido, h um
potencial poluidor para esses meios, devendo ser exigido um monitoramento,
efetuando-se um diagnstico de qualidade, identificando-se e controlando-se
as possveis fontes de contaminao, de modo a cessar o aporte de poluentes.
Elevadas concentraes de metais podem ser encontradas naturalmente em
casos especficos, representando uma anomalia natural do solo (Tabela 2).
Tabela 3. Valores de alerta para metais pesados em solo
3.1. Como Amostrar
Para se obter amostras representativas necessrio levar em

considerao que existe uma grande variedade de condies sob as quais as
amostras sero coletadas; deste modo torna-se difcil estabelecer um
procedimento que seja aceito e ideal em todas as situaes. Assim, vamos
analisar algumas situaes e discutir a melhor forma de planejar e executar a
amostragem.
39
Procedimentos
3.1.1. Uso contnuo de fertilizantes
Se o uso de fertilizantes tipo NPK ou fosfatado, em solos argilosos,

for superior a 20 anos, o ideal que a coleta seja feita em duas profundidades,
0-10cm e 80-100cm, principalmente para a deteco do Cd que tem mobilidade
alta. A escolha de 80 a 100cm como profundidade fixa da camada de
subsuperfcie tem como base os estudos preliminares, desenvolvidos no
Instituto Agronmico de Campinas (IAC), em solos tipo latossolos (OLIVEIRA
& PRADO, 1987). Assim possvel a quantificao dos metais pesados
presentes no solo e avaliao da lixiviao dos mesmos. Se o uso recente
(< 10 anos), basta uma coleta de 0-10cm.
Em solos de textura mdia e arenosos, a coleta dever ser feita
nas duas profundidades citadas acima, j que estes solos favorecem a lixiviao.
A U. S. Environmental Protection Agency EPA - (1996) define
a espessura de dois centmetros de solos como aquela onde a contaminao
ocorre predominantemente, mas por causa das perturbaes induzidas pela
arao e gradagem, h necessidade de coleta de amostras abaixo de dois
centmetros de profundidade.
3.1.2. O uso contnuo de lodo de esgoto
Embora contenham quantidades considerveis de nutrientes, os

lodos de esgoto contm tambm metais pesados que so potencialmente
txicos s plantas, animais e ao homem (MORTVEDT, 1996). A periculosidade
desses metais deve-se ao fato de substiturem outros metais constituintes das
enzimas necessrias s atividades metablicas dos seres vivos, prejudicando
ou mesmo suprimindo sua funo vital (LAGERWERFF, 1972). Adicionados ao
solo junto com o lodo, esses metais podem acumular-se no solo e passar para
a cadeia alimentar.
Alm do risco de contaminao do solo, das plantas e dos animais,
os metais pesados contidos no lodo podem sofrer movimentao no perfil dos
solos mediante processos fsico-qumicos ou biolgicos, oferecendo risco de
contaminao das guas subterrneas e superficiais (McBRIDE et al., 1997).
40
Indicao nesse sentido dada por resultados citados por McBride

et al. (1997), que mostram contaminao da gua de poos com cdmio em
reas que receberam lodo de esgoto por longo tempo. Segundo Mortvedt
(1996), taxas de aplicao anuais de lodo e cargas mximas permitidas nos
solos devem integrar os conhecimentos das caractersticas do lodo e dos solos
onde sero aplicados, bem como das culturas a serem plantadas nessas reas.
Nos pases onde o uso agronmico de lodo de esgoto j comum, foram
estabelecidos critrios de aplicao em reas agrcolas. Segundo esses critrios
a dose mxima de aplicao anual ditada em geral pelo teor de N ou P do lodo,
pela exigncia nutricional da cultura para tais elementos e pelo metal pesado que
estiver em teor total mais elevado, sendo que o perodo de aplicao, em anos,
ditado pelas quantidades de metais pesados neles contidos.
No Brasil, as pesquisas sobre o uso de lodo de esgoto na agricultura
desenvolvidas at o momento estiveram voltadas para a avaliao da eficincia
agronmica desses produtos, tendo-se constatado, em geral, sua efetividade
no aumento de produtividade das culturas e como fornecedor de nutrientes
para as plantas (GUIMARES et al., 1982; GUSHI et al., 1982; BETTIOL et
al., 1983; BOARETTO, 1986; SILVA, 1995). O efeito de sua aplicao em
reas agrcolas, em relao ao seu potencial de contaminao do solo, das
guas e das plantas com metais pesados, ainda pouco conhecido. Tambm
as formas qumicas que os metais pesados contidos nos lodos assumem, a
partir do momento que aportam ao solo, so ainda pouco estudadas nas
condies edafoclimticas dos trpicos. Este um aspecto importante do uso
agronmico do lodo de esgoto, pois o movimento dos metais pesados no sistema
solo-gua-planta, est ligado s relaes de equilbrio entre as formas qumicas
encontradas no solo aps a adio desses materiais.
Independente de condies edafoclimticas, os metais pesados
encontram-se no solo sob diversas formas: adsorvidos eletrostaticamente e
especificamente, participando de reaes de precipitao-dissoluo, formando
complexos com a matria orgnica, e na soluo do solo (SPOSITO, 1989).
Resultados de diversos trabalhos conduzidos em regies de clima temperado indicam
que as formas qumicas de alguns metais pesados em solos tratados com lodo de
esgoto modificam-se com o tempo, sugerindo concomitante alterao na sua
41
Procedimentos
solubilidade e mobilidade no sistema solo-gua-planta e na disponibilidade para as

plantas (SILVEIRA & SUMMERS, 1977; KORCAK & FANNING, 1978; MCGRATH
& CEGARRA, 1992; MCBRIDE, 1995). Chang et al. (1982), Sing & Narvall (1984),
Chu & Wong (1987), McLean et al. (1987) e Rappaport et al. (1987) mostram
aumentos nos teores de metais pesados no solo e nas plantas cultivadas em solos
tratados com lodo de esgoto. Esses metais podem permanecer no solo por longo
tempo e apresentar efeitos residuais nas plantas cultivadas. McBride et al. (1997),
avaliando o comportamento de metais pesados em rea de solo argilo-siltoso,
tratado com 240 t/ha de lodo de esgoto h quinze anos, verificaram que Cd e Zn
remanescentes na camada arvel, aps esse perodo encontravam-se ainda em
formas disponveis e provocaram fitotoxicidade em plantas de milho. Os autores
observaram evidncias de lixiviao de Cd, Zn, Cu e Hg da camada arvel do
solo. Brown et al. (1997) tambm verificaram movimento de metais pesados no
perfil do solo, mas somente com doses elevadas de lodo, ou com lodos com altas
concentraes de metais pesados. Segundo os autores, no h indicao de que
os metais pesados se movimentem no perfil do solo em reas que recebam doses
adequadas de lodo.
Os lagos e reservatrios constituem ambientes de deposio para
os metais pesados. A forma de transporte desses elementos , principalmente,
particulada, no caso de contaminao originada de reas agrcolas (ESTEVES,
1983). A relao entre a concentrao de metais pesados nos sedimentos e
dissolvido na gua pode chegar ordem de 1900 vezes, como observaram Esteves
& Tolentino (1986) em represas de So Paulo. Devido ao efeito de acumulao
na cadeia trfica, mesmo pequenas concentraes de metais pesados na gua
podem originar efeitos txicos nas comunidades biticas, e por conseguinte, atingir
o homem caso este venha a utilizar estes recursos.
3.2. Locais de amostragem
Como nas reas agrcolas, a presena de metais pesados

est ligada ao uso de fertilizantes, pode-se escolher entre amostrar a rea
inteira, ou partes desta, se a mesma for homognea. A escolha dos locais de
amostragem pode ser por tipo de solo ou independente do tipo de solo.
42
Por tipo de solo: Delimitada a rea abrangida por cada tipo de

solo, a coleta das amostras poder ser feita a partir de uma grade de pontos,
ou por caminhamento aleatrio ou em ziguezague dentro da rea. O nmero
de pontos de coleta geralmente fornecido pela estatstica, pois estes esto
condicionados ao tamanho da rea a ser avaliada e do tipo de trabalho a ser
executado. Assim, uma rea muito grande necessitar de mais pontos que
uma rea pequena (Fig. 1).
Fig. 1. Amostragem aleatria por tipo de solos.
Independente do tipo de solo: Neste caso a rea a ser avaliada,

repartida em parcelas e subparcelas formando uma grade dentro das quais as
amostras ou subamostras so coletadas.
3.3. Freqncia da amostragem
A freqncia da amostragem para a avaliao dos metais pesados

no solo dependente do tipo de trabalho que est sendo desenvolvido e dos
nveis encontrados. Estes nveis variam de pas para pas e tambm conforme
o uso do solo, estando subdivididos em nvel de referncia (R), nvel de alerta(A)
e nvel de interveno (I), conforme proposio da Casarini et al. (2001),
fundamentada na metodologia desenvolvida pelo Ministrio da Habitao,
Planejamento e Meio Ambiente da Holanda (VROM, 1988 e 1994).
43
Procedimentos
nvel de referncia ou valor de referncia de qualidade R indica o nvel de

qualidade para um solo considerado limpo.
nvel de alerta ou valor de alerta A indica uma possvel alterao da

qualidade natural dos solos, com carter preventivo e quando excedido, requer
monitoramento, identificao das fontes de poluio e seu controle.
nvel de interveno ou valor de interveno I indica o limite de

contaminao acima do qual, existe risco potencial de efeito deletrio sobre a
sade humana, havendo necessidade de uma ao imediata na rea, a qual
inclui uma investigao detalhada e a adoo de medidas emergenciais, visando
a minimizao das vias de exposio como a restrio do acesso de pessoas
rea e suspenso do consumo de gua subterrnea (CASARINI et al., 2001).
No caso de serem encontrados valores acima do nvel de alerta

(A), a fonte de contaminao deve ser identificada e interrompida. Aps esta
etapa, coletas peridicas de seis meses a um ano permitiro que seja observado
o decrscimo ou a manuteno dos valores encontrados, j que os metais
pesados tm comportamentos diferenciados devido s suas caractersticas
(solubilidade em gua, coeficiente de desoro (Kd), forma de complexao),
e s medidas de descontaminao, caso estas sejam tomadas.
Quando os valores encontrados esto acima do nvel de
interveno, o monitoramento da rea dever ser feito em funo das medidas
tomadas para a descontaminao da rea. Neste caso, a freqncia da
amostragem dependente das tcnicas descontaminantes adotadas.
Referncias
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45
Procedimentos
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47
Procedimentos
48
Amostragem de solos para anlise de nitratos
Captulo 4
Manoel Dornelas de Souza e Adriana Marlene Moreno Pires
O nitrato, uma das formas de nitrognio aproveitadas pelas

plantas, resulta da mineralizao do nitrognio orgnico contido no solo, seja
ele nativo ou adicionado por meio de resduos orgnicos. Devido ao fato de
no ser retido pelas partculas do solo, que em geral apresentam carga
eltrica predominantemente negativa, esse nion permanece livre em
soluo. Em funo disso, a quantidade presente no solo que exceda a
capacidade de absoro das razes das plantas fica sujeita lixiviao,
podendo, ao longo do tempo, atingir o lenol fretico e os corpos de gua
por ele alimentados.
O primeiro passo ao se decidir avaliar a contaminao de uma
rea por nitratos formular claramente o tipo de informao que se almeja e
como os dados analticos sero utilizados. Os objetivos podem variar desde
uma simples caracterizao de uma rea sem histrico de contaminao at
um levantamento preciso para determinar o grau e a fonte da contaminao.
A fase de amostragem importante, apresenta uma especificidade muito
grande, devendo ser planejada caso a caso por meio da elaborao de um
plano de amostragem antes de ir a campo.
Desta maneira, a localizao dos pontos de amostragem, a
freqncia da amostragem e o tamanho das amostras so todos dependentes
do programa de anlises proposto. As amostras devem ser as mais
representativas o possvel da rea a ser amostrada. Portanto, em um programa
cujo objetivo avaliar nveis de qualquer poluente no ambiente, essencial
garantir a representatividade e a conservao das amostras at que estas
sejam analisadas (GOULDEN, 1978).
49
Procedimentos
4.1. Determinao do plano de amostragem
O plano de amostragem varia conforme o objetivo da avaliao,

as caractersticas da rea em questo, bem como as caractersticas da fonte
de poluio do nitrognio. Por exemplo, se o objetivo da amostragem de
averiguar se ocorreu contaminao recente em uma rea, pode-se optar por
realizar uma avaliao na camada superficial, identificando a presena e
concentrao das formas em que o nitrognio se apresenta. Por outro lado,
caso esta fonte seja solvel e o solo tenha sido submetido a intensa precipitao
pluviomtrica, pode ser mais interessante o estudo em diferentes profundidades
do perfil do solo. No caso de monitoramentos de reas contaminadas sempre
se recomenda o estudo em diferentes profundidades, para que se possa
identificar a profundidade em que se encontra o pulso de nitrato. A maioria de
nossos solos apresenta predominncia de cargas negativas e como o nitrato
tambm uma molcula de carga negativa, ela repelida das superfcies das
argilas e fica livre na soluo do solo e pronta para lixiviao por ao da
gravidade quando solo recebe muita chuva ou irrigao. Para manter o equilbrio
eltrico do sistema a molcula de nitrato sempre acompanhada por um ction
monovalente como potssio, sdio etc.
Como regra geral em uma rea contaminada recomenda-se fazer
uma malha quadrada de 5m de lado (25m2) e executar uma tradagem para
cada quadrado. Em caso de contaminao linear o ideal uma tradagem a
cada 5m de distncia (IAP, 2004).
Em avaliaes cujo objetivo determinar o grau de contaminao
de uma rea, deve-se inserir no plano de amostragem a coleta de amostras
testemunhas, de um solo com as mesmas caractersticas que o contaminado
e que esteja localizado prximo a este e nas mesmas profundidades. Em muitos
casos, recomenda-se a coleta de solo no cultivado, em reas onde a ao
antropognica mnima.
50
4.2. Coleta das amostras de solo
Deve-se remover a vegetao e outros detritos da superfcie do

solo a ser amostrado e a seguir coletar amostras compostas, para determinar
a concentrao mdia da molcula de interesse. O solo deve ser retirado do
trado com auxlio de uma esptula de ao inox descartando-se a poro externa
da amostra para evitar contaminao das paredes do furo feito pelo trado.
Uma amostra composta formada por pelo menos 3 amostras simples. A
homogeneizao para obter a amostra composta pode ser feita em sacos
plsticos ou em bandejas. Na certeza de contaminao recente a amostragem
pode ser feita prxima superfcie (0-20cm e 20-40cm).
A amostra composta deve ser pelo menos de 500g para ser
enviada ao laboratrio (ALLOWAY, 1995).
Em solos com pedregosidade aparente ou pouco profundos, sugere-
se que a coleta restrinja-se camada de 0 20cm.
A ferramenta de amostragem deve ser o trado com mdulos de
alongamento, pois comum se fazer tradagens at 8m de profundidade.
Fig. 1. Extrator de soluo do solo.
51
Procedimentos
Outro procedimento estudar a concentrao do nitrato na

soluo do solo. Neste caso instalam-se extratores de soluo do solo nas
profundidades determinadas e extrai-se a soluo do solo com auxlio de
extratores de soluo do solo (Fig. 1) e bomba de vcuo. Normalmente estes
extratores so colocados na profundidade de 1m, pois se considera que a
soluo do solo que passou desta profundidade no est mais disponvel para
as razes das plantas, portanto seu potencial para contaminar o lenol fretico
maior.
Referncias
ALLOWAY, B.J. Heavy metals in soils. 2.ed. Glasgow: Blackie A&P, 1995.
368p.
GOULDEN, P.D. Environmental pollution analysis. London: Heyden & Son,

1978. 209p.
INSTITUTO AMBIENTAL DO PARAN (IAP). Manual para coleta e

preservao de amostras de gua, solo, efluentes e animais. Curitiba, 2004.
34p. (Manual Tcnico).
52
Amostragem de solos para anlise de agrotxicos
Captulo 5
Marco Antnio Ferreira Gomes, Heloisa Ferreira Filizola,

Manoel Dornelas de Souza, Vera Lcia Ferracini e
Sonia Cludia Nascimento de Queiroz
Em relao aos agrotxicos, a amostragem de solo deve levar

em considerao o conhecimento das caractersticas fsico-qumicas bsicas
de cada molcula, principalmente para se estabelecer em quais profundidades
existe maior probabilidade de sua ocorrncia.
Assim, recomenda-se que, antes da amostragem, seja realizado
o levantamento e a caracterizao dos agrotxicos usados na rea, priorizando
sempre aqueles de maior interesse para o estudo, j que os custos de anlise
so freqentemente muito elevados.
A caracterizao dos agrotxicos normalmente fundamenta-se
na avaliao do potencial de lixiviao, que pode ser estimado pelos ndices de
GUS, (GUSTAFSON, 1989), GOSS (GOSS, 1992) e LIX (SPADOTTO,
2002), utilizando-se de dados da literatura, pois quase sempre no se dispe
no Brasil de parmetros desses compostos no solo em que est sendo
amostrado. Entre esses parmetros esto a meia-vida (t) e Koc do agrotxico.
importante ressaltar que existem no mercado mais de trezentos ingredientes
ativos (i.a.) de agrotxicos, o que torna oneroso ou at invivel a avaliao
dos dois parmetros acima para cada um deles nos principais solos agrcolas
brasileiros.
Assim, por exemplo, se um agrotxico a ser monitorado tem um
Koc alto ou muito alto, a coleta no dever ser muito profunda; j um agrotxico
com baixo Koc dever ser coletado em profundidades maiores pois seu potencial
de lixiviao maior. A periodicidade dever ser definida em funo da meia
vida dos agrotxicos selecionados.
53
Procedimentos
Existem simuladores, como o Chemical Movement in Layered

Soils (CMLS) entre outros, que auxiliam na escolha das profundidades e da
periodicidade das coletas.
Com a definio do potencial de lixiviao, pode-se ento
estabelecer as profundidades a serem amostradas, com um certo grau de
confiana e com uma possibilidade maior de estar amostrando na profundidade
correta. Nos diversos trabalhos existentes (LUCHINI et al., 2002; OLIVEIRA
Jr. et al., 2001; QUEIROZ & MONTEIRO, 2000; TORNISIELO et al., 1997) a
amostragem de solo geralmente feita em duas profundidades 0-10cm e de
10-20cm. Nos casos em que o agrotxico com alto potencial de lixiviao
aparecer na profundidade de 10-20cm, determina-se outra faixa de
profundidade (20-40cm) para verificar seu possvel deslocamento at essa
faixa.
Nos casos em que o agrotxico apresenta um baixo potencial de
lixiviao, cujo valor pelo ndice de GUS encontra-se entre 1,8 e 2,8
recomenda-se a profundidade de coleta de 0-10cm, podendo-se estabelecer
intervalos de 1 cm ou de 2cm.
J nos casos em que o produto no apresenta qualquer potencial
para lixiviar, com valores de GUS 1,8 por exemplo, recomenda-se um
procedimento de amostragem em superfcie, com identificao dos provveis
caminhos via escoamento superficial (ver tambm Captulo sobre
SEDIMENTOS).
A quantidade de amostra de solo requerida para anlise de
agrotxico bem superior quela para anlise de metais, principalmente porque
devido sua baixa concentrao no solo, normalmente em g/L, h necessidade
de se submeter o solo a diversas extraes para se ter uma concentrao
mnima detectvel por cromatografia, considerando ainda o limite de deteco
de cada equipamento. Na prtica, recomenda-se a coleta de, pelo menos,
1 kg de solo argiloso e 2 kg de solo arenoso. A quantidade maior de solo
arenoso, fundamenta-se na possibilidade do mesmo reter menor quantidade
de agrotxico, o que exigiria nmero maior de extraes para se ter um extrato
mais concentrado.
54
A amostra deve ser acondicionada em sacos plsticos em

ambiente refrigerado, preferencialmente em gelo seco ou comum; o gelo
comum normalmente usado para armazenamento com tempo inferior a 24
horas, uma vez que aps esse perodo quase sempre ocorre o degelo,
aumentando o grau de dificuldade de transporte das amostras. Em seguida a
esse procedimento, encaminhar a amostra o mais rpido possvel para ser
armazenada em cmara fria a 5C. A anlise dever ser feita,
preferencialmente, dentro de 7 dias. Se a previso de anlise for superior a
esse perodo, deve-se congelar a amostra.
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55
Procedimentos
TORNISIELO, V.L.; NASCIMENTO FILHO, V.F.; FURLAN, G.R.; SIMABUCO,

S.M.; REGITANO, J.B.; NAVARRO, A.A.; COSTA, M.A. Uso de cromatografia
de camada delgada em solos e fluorescncia de raios-X para avaliao de
mobilidade do produto Leng 3. Pesticidas: Revista de Ecotoxicologia e Meio
Ambiente, v.7, p.17-24, 1997.
56
Amostragem de solo para anlises biolgicas
Captulo 6
Raquel Ghini, Sueli dos Santos Freitas e

Anibal Ramadan Oliveira
Atividades agrcolas provocam significativos impactos na biota

do solo. Por esse motivo, os organismos habitantes do solo constituem
importantes indicadores de alteraes ambientais. Existe um grande nmero
de variveis biolgicas que podem ser quantificadas em amostras de solo para
estudos de qualidade ambiental em reas agrcolas. Entre as mais utilizadas
esto a densidade, a freqncia, a atividade e a biomassa de organismos.
Essas variveis representam importantes aspectos ecolgicos, como a
distribuio de populaes e a diversidade de espcies, informando sobre
processos biolgicos e interao de organismos nas reas investigadas. Neste
captulo, pelas caractersticas peculiares de seu estudo, os organismos do
solo sero didaticamente divididos em microrganismos, compreendendo algas,
bactrias e fungos do solo, e macrorganismos, ou componentes da fauna do
solo, compreendendo protozorios, nematides, enquitredeos, minhocas,
caros e colmbolos do solo.
Anlises biolgicas podem ser baseadas tanto em pequenas
quantidades de solo mantidas em laboratrio com algum fim especfico quanto
em reas estabelecidas no campo. Embora no primeiro caso todo o solo possa
ser analisado em experimentos laboratoriais, a coleta e a contagem de todos
os indivduos de uma populao ou comunidade presentes em uma determinada
rea no campo praticamente impossvel. Assim, apenas uma pequena parte
dos indivduos, ou uma amostra, pode ser avaliada quanto s variveis de
interesse, permitindo inferncias sobre os resultados para a populao ou
comunidade como um todo. Mesmo no caso de experimentos laboratoriais, o
57
Procedimentos
solo levado ao laboratrio provavelmente deve representar uma rea no campo,

em cuja amostragem geralmente ocorrem falhas. Embora os problemas
relacionados s etapas de coleta, transporte e armazenamento de amostras sejam
freqentemente ignorados, tais atividades influenciam diretamente os resultados.
Conseqentemente, o planejamento da amostragem deve ser cuidadoso, uma
vez que a preciso das estimativas obtidas depende do grau de erro dos
procedimentos analticos e do quo representativas so as amostras.
Quando a distribuio espacial dos organismos visados na rea ao
acaso, os erros de amostragem podem ser mantidos dentro de limites razoveis.
Porm, quando a distribuio no ao acaso, uma acurada amostragem torna-se
mais difcil e os resultados podem ser invlidos. A distribuio de organismos no
solo influenciada por muitos fatores, como alimento, gua, profundidade, razes
e interao com outros organismos, e assim raramente apresenta-se ao acaso.
Inmeras vezes recorre-se anlise qumica de variveis ligadas direta ou
indiretamente presena ou atividade de organismos, como, por exemplo, o
carbono e o nitrognio da biomassa microbiana, a atividade respiratria do solo e
a disponibilizao de alguns nutrientes. Nesses casos, os cuidados com a tomada
de amostras tornam-se bastante semelhantes aos recomendados para as anlises
de fertilidade do solo. Entretanto, tais procedimentos no so adequados em
outros tipos de anlises e algum que se propusesse a definir mtodos especficos
para a amostragem de todos os organismos em cada uma das situaes possveis
teria diante de si uma tarefa extremamente difcil. No entanto, em muitos dos
casos, as amostragens de solo para anlises biolgicas em reas agrcolas
apresentam aspectos comuns, os quais sero abordados neste captulo juntamente
com os problemas referentes a cada procedimento adotado.
6.1. Representatividade da amostra
O primeiro ponto que se pode questionar a representatividade

da amostra em relao rea. Quanto a esse aspecto, do ponto de vista
prtico, a amostragem para fins de anlises biolgicas guarda semelhanas
com a que feita para anlise da fertilidade do solo, como por exemplo, de
nitrognio, assunto abordado em outro captulo deste livro.
58
Deve-se lembrar que quanto mais homognea for a rea que se

deseja representar com uma amostra, mais representativa ser essa amostra.
Assim, uma primeira recomendao ser dividir a rea total de interesse em
subreas semelhantes quanto ao maior nmero possvel de caractersticas
definveis. Para tanto, a obteno de informaes detalhadas a respeito da
rea de coleta indispensvel. Os seguintes fatores biticos e abiticos,
segundo Paul & Clark (1989), so de grande importncia para a diviso da
rea em estudos com microrganismos, podendo tambm contribuir para a
interpretao dos resultados: topografia, tamanho e tipo de partculas, tipo e
material de origem do solo, contedo de nutrientes, histrico de manejo,
histrico da vegetao, cobertura vegetal e produtividade, presena de razes,
adio de matria orgnica, presena de animais, teor de CO2 e O2, teor de
umidade, variao de temperatura, quantidade e distribuio de chuvas.
Microrganismos possuem algumas peculiaridades que tornam a
amostragem um pouco diferente e exigem alguns procedimentos diferenciados
das anlises de fertilidade. Pela extrema sensibilidade microbiana s variaes
ambientais, como a temperatura, a umidade, a concentrao de oxignio e o
valor de pH, a presena de certos grupos de microrganismos pode variar bastante
no espao de alguns centmetros de solo. Por exemplo: Blackwood & Paul
(2003) observaram que diferentes fraes do solo classificadas de acordo
com sua densidade abrigavam diferentes comunidades bacterianas,
provavelmente devido maior ou menor disponibilidade de carbono orgnico
para a atividade microbiana. Num caso extremo, Ellingsoe & Johnsen (2002)
citam o trabalho de Parkin (1987), que observou que, dentro de uma amostra
de 98 g de solo, toda a desnitrificao microbiana ocorria numa subamostra
de apenas 0,08 g.
Tambm os macrorganismos apresentam grande sensibilidade a
fatores biticos e abiticos de variao local, como a disponibilidade de alimento,
umidade, temperatura, porosidade do solo, sombreamento e sistema radicular,
entre outros. Como a distribuio desses fatores raramente homognea, a
maioria dos macrorganismos freqentemente apresenta distribuio espacial
vertical ou horizontal agregada, com grande variao na composio especfica
e no nmero de indivduos no espao de apenas alguns centmetros de solo
59
Procedimentos
(WALLWORK, 1976; BACHELIER, 1978; EDWARDS, 1991). A irregularidade

na distribuio vertical de protozorios e nematides, por exemplo, determinada
mais pela presena de alimento do que de gua, um fator de grande
importncia a ser considerado na amostragem, sendo a maioria de indivduos
geralmente encontrada em camadas de solo com maior quantidade de razes
e matria orgnica (AESCHT & FOISSNER, 1996). Tanto a distribuio vertical
quanto a horizontal agregadas caracterizam as populaes de artrpodes no
solo, tendo, alm da presena de alimento, tambm a disponibilidade de gua
como uma de suas principais causas (USHER et al., 1982, citando o trabalho
de Usher, 1976). Segundo Winter & Voroney (1993), os fatores mais
importantes que determinam a abundncia de microartrpodos no solo,
representados principalmente por caros e colmbolos, so: 1) o tipo e a
quantidade de resduos orgnicos em decomposio e seus efeitos na
microbiota, 2) a estabilidade estrutural do solo e resultante porosidade e 3) a
umidade. Como esses fatores variam localmente, grande quantidade de
indivduos pode estar presente em certas regies do solo, associada a
fragmentos vegetais em decomposio, por exemplo, enquanto pequenas
quantidades ocorrem a apenas alguns centmetros de distncia. Padres de
distribuio espacial de diversos componentes da fauna do solo e os fatores
que os afetam podem ser encontrados nos trabalhos de Phillipson (1971),
Berthet & Gerard (1965) e Usher (1975).
A irregularidade na distribuio de organismos ressalta a
importncia da homogeneidade tanto da rea quanto da amostra de solo na
anlise de micro e macrorganismos. Nesse sentido, medidas que visem atenuar
o efeito da heterogeneidade de microambientes produzida por fatores locais
tambm devem ser consideradas. Conforme a espcie vegetal cultivada, tanto
a distribuio do sistema radicular como o grau de sombreamento do solo,
entre outros fatores, podem variar com a posio da amostra em relao
base das plantas. Para padronizao, a posio da amostra em relao s
plantas nas linhas e entrelinhas pode ser um fator importante a considerar na
determinao dos pontos de amostragem, como foi adotado por Oliveira et al.
(2000). Tomadas as medidas de padronizao, a deciso quanto ao nmero
de subamostras cabe inteiramente ao pesquisador, que levar em conta o
60
mximo de informaes que tiver sobre a rea e sobre o mtodo que utilizar
para determinao daquela varivel. O importante que a amostra em que se
far a anlise seja homognea.
Muitos autores utilizam amostras compostas na coleta de
microrganismos (KLEIN & PASCHKE, 2000), isto , resultantes da mistura de
algumas subamostras, com a finalidade de aumentar a homogeneidade e reduzir
custos, pela anlise de um menor nmero de amostras, porm mais
representativas. O nmero de subamostras varia muito, indo de duas (SALINAS-
GARCA et al., 2002), ou cinco (GONZLEZ et al., 2003) at dez (PANKHURST
et al., 2002). Entretanto, essa abordagem vlida sob determinadas condies:
as amostras devem ser compostas por igual nmero e quantidade de
subamostras e no deve haver interao entre as subamostras individuais que
possa afetar os resultados (WOLLUM II, 1994).
Amostras compostas tambm podem ser utilizadas para alguns
grupos de macrorganismos, como protozorios e nematides (McSORLEY &
WALTER, 1991; AESCHT & FOISSNER, 1996). Embora ferramentas
estatsticas que permitam determinar o nmero de subamostras necessrias
sejam escassas, a maioria dos pesquisadores utiliza entre 10 e 20 subamostras
(AESCHT & FOISSNER, 1996). Amostras compostas, entretanto, geralmente
no so indicadas para a maioria dos outros grupos faunsticos do solo. O
procedimento altera a estrutura do solo e prejudica a remoo posterior dos
indivduos, principalmente por mtodos dinmicos tradicionais de extrao
como funis de Berlese-Tullgren, Macfadyen e Kempson (EDWARDS &
FLETCHER, 1971; ADIS, 1987, 2002; EDWARDS, 1991; OLIVEIRA et al.,
2000), alm de poder destruir organismos delicados pelo efeito abrasivo das
partculas do solo ao se misturarem as subamostras individuais.
Variaes sazonais, juntamente com o desenvolvimento da prpria
cultura vegetal, tambm exercem grande influncia na biomassa e atividade
microbiana, assim como na fauna do solo. Isso resultante da combinao de
fatores como temperatura, umidade e vegetao, alm da modificao dos
efeitos de prticas agrcolas ao longo do tempo, como a reestruturao do
solo, sombreamento e adio de matria orgnica ao solo, entre outros. Uma
forma de se obter uma mais completa caracterizao da biota do solo a
61
Procedimentos
realizao de repetidas amostragens durante o ano, procedimento de grande

importncia para o reconhecimento de variaes sazonais. Embora a exigncia
quanto freqncia de coleta varie conforme os organismos de interesse, no
caso da fauna considerando-se que h limitaes em relao ao nmero de
amostras possvel de ser processado por coleta ou ao longo do estudo
recomendvel que as amostragens representem o maior nmero possvel de
fases da rea investigada. Para uma nica avaliao, a coleta de amostras
no deve ser imediatamente aps um evento climtico extremo, como um
longo perodo de seca, por exemplo.
Todavia, como medida de padronizao, Oliveira et al. (2000)
realizaram coletas dois dias aps o trmino de precipitaes pluviais superiores
a 20 mm em diferentes perodos, permitindo que a umidade nas amostras de
solo estivesse sempre em torno de 25% nas diferentes pocas de amostragem.
Outros fatores, como a adio de fertilizantes minerais ou compostos orgnicos,
tambm podem alterar a atividade microbiana, assim como a fauna do solo.
O pesquisador deparar-se-, inevitavelmente, com a necessidade
da deciso sobre o nmero de amostras do solo a serem coletadas, assim
como de repeties. A obteno de amostras representativas, com anlises
cujos resultados possam ser tratados estatisticamente, extremamente
importante. Na definio quanto ao nmero de pontos a serem amostrados, o
pesquisador dever valer-se do conhecimento da rea e do processo que deseja
medir, considerando a distribuio espacial especfica dos organismos de
interesse na anlise. Geralmente, uma avaliao preliminar auxilia a definio
dos procedimentos de amostragem e evita problemas futuros (VEERESH &
RAJAGOPAL, 1988). Nesse sentido, tcnicas de geoestatstica podem
complementar a estatstica clssica para auxiliar a coleta de dados de campo,
nos casos em que as observaes no so espacialmente independentes.
Baath & Anderson (2003), por exemplo, utilizaram cinco amostras
para representar uma rea de 2500 m2, na avaliao da taxa respiratria de
fungos e de bactrias, separadamente. J Chapman et al. (2003) com
outro objetivo, embora tenham tambm avaliado a respirao, entre outras
variveis dividiram a rea com trs linhas paralelas de 180 m de comprimento
e distantes 50 m entre si. Cada linha foi dividida em dez partes, com onze
62
pontos sobre cada uma. Tomaram amostras em todos os pontos de interseo

dessa malha. Nesse ltimo trabalho, os autores compararam uma srie de
variveis qumicas e microbiolgicas como indicadores de mudanas no manejo
do solo. Os nmeros de amostras em um e outro trabalho esto ligados
diretamente aos objetivos dos autores. Segundo Wollum II (1994), o nmero
depende de quo precisa se deseja a determinao. No se pode esquecer que
um nmero excessivo de amostras demanda mais tempo e mais trabalho,
fatores que devem ser ponderados na definio da quantidade de amostras
tomadas. Ainda de acordo com Wollum II (1994), coletar informaes demais
gasta tempo e recursos; informaes de menos tornam o estudo intil ou
levam a concluses erradas.
No caso da fauna, a deciso quanto ao nmero de amostras talvez
seja a etapa mais crtica no planejamento da amostragem. Devido ao alto grau
de agregao apresentado pela maioria dos macrorganismos, freqentemente
do tipo binomial negativa, o nmero de pontos de coleta geralmente exigido
para uma amostragem representativa bastante alto. Obviamente, a definio
sobre o nmero de amostras necessrio, assim como sobre outros aspectos a
serem considerados na amostragem, deve ser rigorosamente baseada em um
estudo prvio da rea, alm de informaes disponveis da literatura sobre os
grupos faunsticos de interesse. Nesse sentido, Phillipson (1971), Eijsackers &
Bund (1980) e Schinner et al. (1996) oferecem informao sobre
caractersticas das agregaes de diferentes grupos faunsticos, freqncia
de coleta e nmero de pontos de amostragem geralmente adotado para cada
grupo por perodo de coleta (10 amostras no mnimo para protozorios,
nematides e enquitredeos). O nmero adotado para microartrpodos,
principalmente caros e colmbolos, muito varivel. Entretanto,
independentemente do nmero de pontos amostrados, a maioria dos estudos
geralmente enfrenta dificuldade na obteno de amostras representativas.
No caso de caros oribatdeos, por exemplo, uma vez que o nmero de
indivduos coletados em cada ponto apresenta normalmente grande variao,
um nmero muito grande de amostras geralmente necessrio para estimativa
da mdia de indivduos em uma determinada rea, apesar de gerar dificuldades
no processamento das amostras. Como recomendao geral para anlises
63
Procedimentos
faunsticas em solos cultivados, onde a abundncia de indivduos geralmente

baixa, devem ser tomadas amostras do maior nmero possvel de pontos do
solo, levando tambm em conta aspectos prticos como custos, mo de obra,
capacidade de processamento de amostras e caractersticas do mtodo de
extrao a ser utilizado.
6.2. Coleta das amostras de solo
Antes de proceder amostragem, alguns autores mencionam

especificamente a necessidade da retirada da camada de serapilheira,
composta por material orgnico ainda no decomposto e, portanto, possvel
indutora de grandes variaes na atividade microbiana (BAATH & ANDERSON,
2003; CHAPMAN et al., 2003; VOR et al., 2002). Apesar da enorme
diversidade e abundncia de microartrpodos e outros macrorganismos que
podem habitar a serapilheira, apenas a coleta de amostras de solo ser abordada
no presente captulo com relao ao estudo da fauna.
Tanto a quantidade do solo a ser amostrado quanto a profundidade
de amostragem so muito variveis, dependendo dos organismos de interesse
e da finalidade da anlise. A profundidade de coleta em reas agrcolas limita-
se geralmente camada agricultvel do solo (0 a 20 ou 25 cm) ou ao horizonte
que concentra maior quantidade de razes (0-10 cm) (PHILLIPSON, 1971;
FORSTER, 1995; SCHINNER et al., 1996).
Na amostragem de solo para utilizao em anlises qumicas da
presena e da atividade de microrganismos, poucos pesquisadores mencionam
problemas de contaminao, uma vez que esse no seria um fator crtico.
de se supor que, desde que o instrumento no esteja sujo com a amostra
anterior, pequenas partculas eventualmente presentes no representariam
fonte relevante de contaminao de uma substncia qumica a ser analisada
em uma amostra com 50 ou 100 gramas de solo. Mas Blume et al. (2002)
tomaram cuidados para evitar a contaminao do solo da subsuperfcie com o
da superfcie, uma vez que estavam comparando a biomassa microbiana, a
estrutura da comunidade e a atividade metablica nas camadas de 0-20, 70-
90 e 150-170 cm de profundidade, em amostras no perturbadas.
64
O instrumento utilizado para a amostragem do solo foi

primeiramente lavado com gua e depois com etanol, como forma de evitar a
contaminao. Com o mesmo objetivo, descartaram 1 cm do solo em toda a
volta dos ncleos das amostras utilizando uma esptula esterilizada. Assim,
como recomendao geral, os implementos e recipientes devem estar
desinfestados e cuidados devem ser tomados para evitar a contaminao entre
as amostras.
H uma grande variao entre a quantidade de solo a ser
amostrada para as diferentes finalidades em anlises microbiolgicas. Alguns
trabalhos utilizam pequenos agregados de solo para estudos de supressividade
a fitopatgenos (GHINI & NAKAMURA, 2001), outros necessitam de amostras
com 5 a 10 g, como por exemplo, para determinao de atividade microbiana
por hidrlise de diacetato de fluorescena (FDA, BOEHM & HOITINK, 1992).
H tambm os que necessitam amostras maiores, perturbadas ou no,
coletadas com trados grandes. Preferencialmente, entretanto, amostras
similares quanto ao tamanho devem ser obtidas para permitir uma acurada
avaliao entre as amostras.
Para anlises microbiolgicas, os autores so praticamente
unnimes em relatar que o solo deve ser submetido a peneiramento, com a
finalidade de eliminar pedras, razes e material orgnico no decomposto. Na
grande maioria dos experimentos o solo passado por peneira com malha de
2 mm (MENDHAM et al., 2003; MENYAILO et al., 2003; BAILEY et al., 2002;
PANKHURST et al., 2002; BARROTI & NAHAS, 2000; JOERGENSEN, 2000;
KLEIN & PASCHKE, 2000; BARAJAS-ACEVES et al., 1999; CHABOT et al.,
1996). Mas h autores que optam por peneiras de malhas diferentes, como as
de 4 mm (BALOTA et al., 2003; GHANI et al., 2003; LU et al., 2002), 5 mm
(CHAPMAN et al., 2003; KOURTEV et al., 2002; NGUYEN & HENRY, 2002)
e at mesmo 0,149 mm (CRITTER et al., 2001). Nesse caso da malha mais
estreita tratava-se de um trabalho em que o solo fora submetido a estudos de
microcalorimetria na avaliao da atividade microbiana; pelo pequeno volume
de cada amostra empregada o tamanho das partculas de solo era fundamental.
O peneiramento realizado para obterem-se resultados mais
reproduzveis, reduzindo os efeitos da heterogeneidade natural dos solos. Esse
65
Procedimentos
procedimento justificvel para trabalhos que no esto avaliando a

distribuio natural de microrganismos no solo. Tambm deve ser considerado
que o peneiramento, de certa forma, seleciona microrganismos que no esto
associados a partculas maiores ou agregados que sero excludos. Essa
operao tambm pode alterar a composio original da microbiota, j que a
fragmentao da matria orgnica torna-a mais disponvel ao ataque dos
microrganismos e, assim, estimula a atividade microbiana. Um perodo de pr-
incubao, com a finalidade de neutralizar os efeitos do peneiramento,
recomendado.
Existem vrias fontes de informao detalhada disponveis sobre
metodologia de coleta de amostras de solo para anlises faunsticas. As
amostras normalmente so coletadas com o auxlio de ferramentas de
amostragem especficas, denominadas sondas. Embora as sondas sejam
geralmente cilndricas, feitas de ao ou alumnio, so muitos os modelos e
materiais que podem ser utilizados. Simples anis metlicos com uma das
extremidades cortante podem ser empregados na coleta de amostras de at
5 cm de profundidade. Para profundidades maiores do que 5 cm, so
normalmente utilizados tubos metlicos divididos longitudinalmente em duas
partes iguais, que permitem abertura da sonda para remoo do solo. As sondas,
ao serem inseridas no solo, permitem a coleta de amostras com dimenses
definidas. O dimetro das amostras e a profundidade de coleta dependem das
caractersticas das espcies de interesse no estudo, como tamanho dos
indivduos, abundncia e grau de agregao, de modo que o tamanho das
pores de solo amostradas pode variar de 2,5 cm a 1 m de dimetro e de 5
a 50 cm de altura. Para protozorios e nematides usualmente so utilizadas
sondas de cerca de 2,5 cm de dimetro, variando entre 3 e 5 cm. A profundidade
de coleta em reas agrcolas geralmente varia entre 5 e 15 cm da superfcie
do solo. Para enquitredeos, caros e colmbolos, sondas de cerca de 5 cm
geralmente so suficientes, podendo variar entre 5 e 8 cm (PHILLIPSON,
1971; EDWARDS, 1991; SCHINNER et al., 1996). A mais alta concentrao
de indivduos normalmente encontrada prxima superfcie do solo e,
portanto, normalmente suficiente uma amostragem a uma profundidade de
15 cm. Nesse caso, a amostra deve ser separada em camadas de no mximo
66
5 cm antes da extrao dos indivduos, principalmente se forem adotados

mtodos dinmicos tradicionais de extrao como funis de Berlese-Tullgren,
Macfadyen e Kempson.
Para minhocas e artrpodos grandes, devem ser utilizadas sondas
entre 10 e 30 cm, coletando-se a uma profundidade entre 10 a 20 cm da
superfcie do solo (ADIS, 1987, 2002; EDWARDS, 1991; SCHINNER et al.,
1996). Como recomendao geral para a coleta de amostras de solo para
avaliao de microartrpodos, de extrema importncia que o solo no seja
compactado durante a coleta, procurando-se manter as caractersticas naturais
de porosidade das amostras da maneira mais integral possvel.
6.3. Transporte e armazenamento
Uma vez retiradas, as amostras para anlise de microrganismos

devem ser acondicionadas em sacos plsticos, que tm a vantagem de serem
permeveis a gases como O2 e CO2 mas no permitirem a desidratao das
amostras neles contidas (WOLLUM II, 1994). A desidratao do solo pode reduzir
o nmero e alterar a composio da comunidade microbiana. O transporte das
amostras deve ser imediato, logo aps a coleta do solo. No caso de amostras no
perturbadas, deve-se evitar vibrao ou agitao do material.
Para anlise dos macrorganismos, tambm importante que as
amostras sejam acondicionadas em temperatura e recipientes adequados antes
do transporte ao laboratrio. O acondicionamento deve ser feito de maneira a
se promover o menor distrbio possvel nas caractersticas estruturais naturais
do solo, evitando-se compactao. Amostras mais superficiais, isto , retiradas
de at 5 cm de profundidade, coletadas com sondas anelares, no necessitam
ser removidas do interior dos anis coletores, sendo cada unidade amostral
transportada ao laboratrio dentro de uma sonda. Apesar da necessidade de
um grande nmero de anis, uma vantagem desse tipo de sonda que, como
a manipulao da poro de solo amostrada no necessria, afeta-se em
menor grau a porosidade natural, aspecto importante na extrao dos
macrorganismos por mtodos dinmicos como funis de Berlese-Tullgren,
Macfadyen e Kempson.
67
Procedimentos
No caso dessas sondas, com amostras parcialmente protegidas

pelas paredes dos anis, pode-se simplesmente acondicionar cada conjunto
sonda-amostra em um saco plstico ou embal-lo com filme de PVC. No caso
de coletas em maiores profundidades, as amostras devem ser removidas do
interior da sonda tubo metlico dividido longitudinalmente e repartidas em
camadas de no mximo 5 cm de altura, principalmente no caso da utilizao
subseqente de mtodos dinmicos de extrao. Deve-se tomar muito cuidado
no momento de manipular o solo para diviso das camadas, de modo a no
pressionar ou compactar as amostras. Nesse caso, o acondicionamento de
cada camada em pequenas caixas plsticas com tampas mais indicado do
que o uso de sacos plsticos, para evitar compactao. Uma vez embaladas,
as amostras devem ser acomodadas em caixas de poliestireno para proteo
contra o calor e a insolao. Deve-se evitar qualquer tipo de sobreposio de
amostras no interior das caixas que possa causar presso sobre o solo. As
amostras devem ser levadas ao laboratrio o mais breve possvel, protegidas
contra vibrao durante o transporte.
Com relao ao armazenamento de amostras para anlises
faunsticas, o ideal que o processamento das amostras para extrao dos
macrorganismos se inicie assim que cheguem ao laboratrio ou, no mximo,
24 horas aps a coleta (EDWARDS & FLETCHER, 1971; MEYER, 1996),
principalmente se forem adotados mtodos dinmicos, os mais comumente
utilizados para a extrao dos indivduos (EDWARDS, 1991). Se necessrio,
durante o tempo anterior ao processamento, as amostras devem ser mantidas
em temperatura ambiente, ou a 25C. Alguns autores sugerem o
armazenamento de amostras sob refrigerao (EDWARDS, 1991; WINTER &
VORONEY, 1993), mas como seu efeito na extrao dos indivduos,
principalmente dos artrpodos, por mtodos dinmicos ainda no est bem
esclarecido (EDWARDS & FLETCHER, 1971; LAKLY & CROSSLEY, 2000),
melhor que o resfriamento seja evitado.
Quanto aos microrganismos, a questo do armazenamento
tambm um ponto importante a ser considerado. Como raramente se pode
processar todas as amostras ao mesmo tempo, em que condies devem ser
mantidas em laboratrio at que as anlises sejam feitas? A recomendao
68
geral que as amostras sejam mantidas nas mesmas condies fsicas, qumicas
e biolgicas que elas se encontravam in situ, a partir do momento da coleta
at a realizao da anlise, o que impossvel. Do ponto de vista prtico,
quase unnime o armazenamento sob refrigerao. A maioria dos autores
recomenda que as amostras sejam coletadas e colocadas em caixas contendo
gelo e, aps o transporte at o laboratrio, sejam mantidas em geladeira (4C).
Outros acreditam que prefervel manter em temperatura ambiente, com a
finalidade de reduzir os efeitos das alteraes de temperatura nas amostras.
Outra possibilidade interessante preservar as amostras em recipientes
trmicos ou similares. Willians & Gray (1973) sugerem que blocos maiores de
solo podem ser obtidos em campo, levados ao laboratrio e subamostras
retiradas imediatamente antes da anlise. A viabilidade desse procedimento
depende principalmente das caractersticas fsicas do solo e da disponibilidade
de coleta, transporte e armazenamento de todo esse material. O ideal, em
todos os casos, que as amostras sejam utilizadas logo aps a coleta.
Quando h armazenamento em geladeira, o perodo em que podem
ser mantidas a essa temperatura sem que os resultados sejam comprometidos
ainda no est bem definido. Na literatura encontram-se procedimentos
bastante diversificados: Blume et al. (2002) iniciaram suas anlises aps a
coleta das amostras, que ficaram no mximo 48 horas no refrigerador,
enquanto que Raubuch & Beese (1999) mantiveram as amostras a 4C por
at quatro meses e Baath & Anderson (2003), por cinco meses.
Nem sempre, todavia, o laboratrio tem condies de processar
todas as amostras ao mesmo tempo, ou num tempo suficientemente curto
para que as eventuais mudanas determinadas pelo armazenamento no
cheguem a se manifestar nos resultados. Como somente podiam processar
poucas amostras por dia, Kourtev et al. (2002) contornaram esse problema
sorteando as que iriam avaliar diariamente. Embora no seja um procedimento
to comum, uma forma de poder desenvolver alguns estudos. Nesse caso,
a colaborao de um especialista em estatstica ser de grande importncia.
parte o questionamento sobre quanto o armazenamento altera
a microbiota do solo, certo que deve alter-la, em maior ou menor extenso.
Alm disso, quando se considera a variabilidade das comunidades microbianas
69
Procedimentos
no espao e no tempo, dependendo dos variados microhabitats existentes no

solo (BLACKWOOD & PAUL, 2003; ELLINGSOE & JOHNSEN, 2002), o
armazenamento pode produzir, inclusive, resultados diferentes em amostras
do mesmo solo. Por esse motivo, freqente a pr-incubao do solo antes
de se iniciarem as anlises. A pr-incubao consiste na manuteno das
amostras, depois de retiradas da refrigerao, em um ambiente com condies
adequadas de umidade e temperatura para que os microrganismos voltem a
crescer e tenham seu desenvolvimento estabilizado, aps um determinado
perodo. As temperaturas e o tempo pelo qual as amostras so incubadas
variam: Chapman et al. (2003) pr-incubaram as amostras a 21C por uma
semana, enquanto que Bailey et al. (2002) deixaram-nas a 25C por duas
semanas, Vischetti et al. (2002), a 20C por trs dias e Turner et al. (2001),
a 10-15C por uma semana. Como se v, o importante permitir que a
microbiota possa crescer por algum tempo, at atingir o equilbrio permitido
pelas condies fornecidas. As diferentes anlises determinaro os melhores
procedimentos a seguir a partir desse momento.
6.4. Amostragem para isolamento ou quantificao de microrganismos

rizosfricos
De acordo com Hiltner (1904), rizosfera o solo sob influncia

das razes. nessa regio que ocorre a maior parte da atividade microbiana do
solo, pela grande disponibilidade de nutrientes oriundos da exsudao das razes.
tambm a que se registram as interaes de plantas e microrganismos,
sejam elas benficas ou deletrias. Portanto, a rizosfera constitui-se em boa
fonte de isolados microbianos para quem deseja trabalhar com interaes
benficas.
Wollum II (1994) recomenda que se cave o solo em torno do
sistema radicular, de modo a permitir que o maior nmero possvel de razes
seja retirado. O sistema radicular agitado levemente, at soltar o material
mais frouxamente preso a ele. O solo aderido s razes o que ser chamado
rizosfrico. O conjunto razes + solo deve ser colocado em sacos plsticos e
mantido em caixa com gelo at o transporte para o laboratrio. Quando o
70
principal objetivo do pesquisador a obteno de um isolado potencialmente

benfico, as amostras assim obtidas j podero ser utilizadas, uma vez que, a
rigor, no ser quantificada nenhuma atividade. O solo ou os pedaos de
razes devem ser transferidos para um frasco com gua ou com uma soluo
isotnica e os procedimentos de isolamento transcorreriam a partir da.
Nos casos em que o objetivo fazer alguma anlise comparativa
entre solo rizosfrico e no rizosfrico, pode-se juntar solo e razes numa
nica amostra e submeter o conjunto todo a peneiramento. Considerar-se-
solo no rizosfrico o que passar por uma peneira. A utilizao da peneira
indicada para amostras de solo retiradas no campo, principalmente em presena
de gramneas, com sistema radicular fasciculado. Uma peneira com malha de 2
mm, por exemplo, dever separar as razes do volume de solo coletado juntamente.
As razes que ficarem tero solo a elas aderido, que ser considerado rizosfrico;
sero ento lavadas e a suspenso, centrifugada. Dessa maneira, separam-se o
solo rizosfrico e o no rizosfrico (JOERGENSEN, 2000).
Todavia, se a inteno for a enumerao de indivduos de uma
espcie ou de um grupo de espcies, ou, ainda, a avaliao de algumas variveis
em um solo caracteristicamente rizosfrico tambm h alguns procedimentos
a seguir. O prprio conceito de rizosfera pode ser ponderado: em vasos onde
a planta passa semanas ou meses crescendo na mesma poro de solo, as
razes emaranham-se, enovelam-se, de modo a tornar rizosfrico praticamente
todo o solo. Mesmo trabalhando em condies de campo, Kourtev et al. (2002)
definiram como rizosfrico o solo nos primeiros 5 cm de profundidade, regio
com maior concentrao de razes de uma floresta de clima temperado. Para
isso, basearam-se na observao de que a grande maioria das razes estava,
no mximo, a 2 mm umas das outras. O solo abaixo do emaranhado de razes
foi considerado no rizosfrico. No entanto, em condies de campo, aceita-
se normalmente que a rizosfera compreende apenas alguns milmetros em
torno das razes (CARDOSO & FREITAS, 1992). De maneira geral, considera-
se solo rizosfrico aquele que est aderido s razes (JOERGENSEN, 2000;
REID et al., 1984; WOLLUM II, 1994).
Wollum II (1994) recomenda ainda que no se armazene solo
aderido s razes, mesmo em refrigerao, possivelmente considerando o fato
71
Procedimentos
de que, pela presena de alguma exsudao radicular, ainda que diminuda,

possa alterar-se radicalmente a composio da microbiota rizosfrica. A
recomendao tem razo de ser: Shishido & Chanway (1998) pesquisaram
justamente o efeito do armazenamento sobre as comunidades microbianas do
solo e sobre a eficcia de rizobactrias promotoras do crescimento de plantas
(RPCPs). Os tratamentos considerados, em trs solos diferentes, foram o solo
fresco, como testemunha, e solo armazenado por 32 semanas a 4 ou a -10
C, todos peneirados com malha de 2 mm. O interessante que mesmo as
amostras do tratamento testemunha foram mantidas a 4C por duas semanas,
perodo entre a amostragem e o incio das anlises. Observaram que o
armazenamento alterou as caractersticas das comunidades das amostras,
que eram bem semelhantes para os trs solos estudados. Essas alteraes
influenciaram a eficcia das RPCPs estudadas.
Dependendo do objetivo do trabalho e at mesmo dos mtodos
empregados, deve-se estar atento inclusive ao tamanho da amostra. Com o
advento dos mtodos independentes de cultivo, os pesquisadores puderam
conhecer no apenas os microrganismos que crescem em meios de cultura
mas passaram a determinar um nmero muito grande de genomas diferentes
em pequenas amostras de solo, confirmando o fato de que apenas uma pequena
porcentagem dos microrganismos detectada pelos mtodos clssicos. Ranjard
et al. (2001), citados por Kent & Triplett (2002), utilizando mtodos
independentes de cultivo, observaram que as espcies microbianas variaram
com o tamanho das partculas de solo. concluso semelhante chegaram
Ellingsoe & Johnsen (2002), num trabalho em que compararam o efeito do
volume de amostras de solo sobre a estrutura da comunidade bacteriana a
presente. Avaliaram tanto a estrutura heterotrfica medida por mtodos
clssicos de cultivo quanto a estrutura gentica, medida por eletroforese
em gradiente de gel denaturante (DGGE). Observaram que a diversidade entre
amostras foi maior nas amostras de 0,01 e 0,1 g e quase negligvel nas de 1
e 10g, pelos dois mtodos de avaliao. Aventaram a hiptese de que, pelo
pequeno tamanho, as amostras menores tm um nmero limitado de habitats,
o que no aconteceria com as amostras maiores. Os autores concluram que
amostras maiores devem ser utilizadas quando se deseja medir, por exemplo,
72
o efeito de atividades antrpicas sobre a microbiota do solo; no entanto, amostras

menores so mais teis quando se deseja obter isolados novos. No primeiro caso,
a ocorrncia de maior nmero de habitats favorece a deteco de alteraes
oriundas da atividade antrpicas, enquanto que, para isolamento de
microrganismos, no necessariamente a variabilidade de habitats seja importante.
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79
Procedimentos
80
A amostragem de gua para anlises biolgicas
Parte III
GUA
81
Procedimentos
82
Captulo 7
Amostragem de gua para anlises biolgicas
Mariana Pinheiro Silveira e Jlio Ferraz de Queiroz
7.1. Amostragem das guas de superfcie

7.1.1. Rios
Os rios, ou ambientes lticos, so caracterizados pela constante
movimentao das guas. Essa turbulncia freqentemente gera uma
distribuio heterognea de parmetros fsicos, qumicos e biolgicos neste
ambiente. Outra caracterstica marcante dos rios que o seu volume varia
temporalmente. Assim, ao se planejar uma amostragem, preciso contemplar
dois fatores: a amostragem em diferentes sees transversais e longitudinais
do canal estudado, e a amostragem em diferentes pocas do ano, a fim de se
observar as variaes temporais de vazo do rio em estudo. Assim como a
turbulncia, a vazo do rio tambm ter influncia sobre os parmetros fsico-
qumicos e biolgicos da gua.
7.1.1.1. Localizao dos pontos de amostragem
O nmero de pontos de amostragem e a sua localizao

dependero do objetivo da pesquisa. Devem ser levados em conta pelo
pesquisador fatores como o tamanho da amostra e nmero de unidades
amostrais.
Estudos limnolgicos de pesquisa bsica geralmente envolvem a
mensurao de medidas fsicas e qumicas da gua, a determinao da biomassa
e da densidade de populaes aquticas e a variao destes parmetros (fsico-
qumicos e biolgicos) no tempo e no espao.
83
Procedimentos
De maneira geral, quando se quer avaliar o impacto de algum

poluente agrcola, por exemplo, a amostragem deve abranger trs sees do
rio estudado: a regio montante do impacto sofrido, para se avaliar as
condies naturais sem o impacto; a regio afetada diretamente pelo impacto,
ou seja, a regio de origem da fonte poluidora; e a regio a jusante do impacto,
para que se avalie o grau de autodepurao ou de recuperao do rio aps o
impacto sofrido. Entretanto, preciso ressaltar que esta metodologia vlida
apenas para casos de poluio pontual, onde a localizao e a identificao
dos efluentes conhecida. J em casos de poluio difusa, seria mais adequada
a amostragem ao longo de todo o rio (desde a nascente at a foz). A poluio
difusa ou no pontual mais freqentemente encontrada, pois em rios urbanos
ou prximos a cidades so vrias as fontes poluidoras: esgoto domstico,
poluio industrial e agrcola, entre outras. Muitas vezes os efluentes so
liberados nos rios in natura (sem tratamento) e em cargas superiores
capacidade de depurao do rio. Esta mistura de diferentes fontes poluidoras
ainda pode causar efeitos sinrgicos, piorando a situao de poluio e
dificultando a aplicao de medidas mitigadoras.
7.1.1.2. Metodologia de amostragem
Alm das amostras de gua, necessrio medir alguns parmetros

fisiogrficos importantes e influentes tanto nas caractersticas fsico-qumicas
como nos parmetros biolgicos (fito e zooplncton) que caracterizaro com
mais propriedade as amostras de gua. Como exemplo, deve ser considerada
a largura e a profundidade mdia do canal, a velocidade mdia da correnteza
e a vazo.
a) Largura e profundidade
Em rios de pequeno porte, a medio destes parmetros bsicos
requer apenas uma estaca de madeira de 1 metro a 1 metro e meio, milimetrada
com caneta para retroprojetor ( prova dgua). A medio feita colocando-
se a estaca horizontalmente na superfcie da gua, de uma margem outra.
Assim, obtm-se a largura. Ao mesmo tempo em que se marca a largura do
84
canal, a cada metro percorrido coloca-se a estaca na posio vertical, at que

ela toque no leito do canal, obtendo-se a profundidade. Assim, ao final ser
obtido um perfil transversal e longitudinal do rio estudado, com suas respectivas
largura e profundidades (Fig. 1).
Fig. 1. Esquema da seo transversal de um rio dividida em diferentes subsees.

z larguras das subsees; h altura de cada subseo transversal.
J em caso de rios profundos ou grandes rios, a medio pode

ser feita com um ecobatmetro. O princpio deste equipamento consiste em
que um feixe de ondas sonoras (freqncia menor que 18KHz) ou ultra-sonoras
(freqncia maior que 18KHz) seja transmitido verticalmente por emissor
instalado na embarcao, atravessando o meio lquido at atingir o fundo
submerso, e a se reflete, retornando superfcie, onde detectado por um
receptor. O tempo decorrido entre a emisso do sinal e a recepo do eco
refletido do fundo submerso convertido em profundidade, visto que a
velocidade do som na gua conhecida ou determinada. O registrador ento
representa visualmente ou graficamente o perfil transversal da profundidade.
b) Velocidade da correnteza
O molinete um instrumento que mede a velocidade da correnteza
com base no nmero de voltas por unidade de tempo, na medida em que passa
o fluxo de gua.
O mtodo do flutuador tambm pode ser utilizado para calcular a
velocidade da correnteza em rios de pequeno porte, embora seja um mtodo
85
Procedimentos
mais grosseiro. Neste mtodo, uma seo reta do canal selecionada, e

definida uma distncia. O flutuador pode consistir em uma laranja ou bola de
tnis. Ento, o tempo em que o flutuador percorrer a distncia definida
medido vrias vezes. Este mtodo menos preciso do que o molinete porque
a velocidade da gua no homognea ao longo de qualquer seo transversal
ao canal e nem ao longo da profundidade. Deste modo, o mtodo do flutuador
mais adequado para riachos e rios de pouca profundidade.
c) Vazo
A vazo de um rio uma medida de grande importncia na
avaliao da qualidade da gua, pois o volume de gua numa determinada
seo influir na capacidade de autodepurao do corpo dgua. A vazo pode
ser definida como o volume de gua que passa por determinada seo na
unidade de tempo. A sua medida se d pelo produto da rea da seo
transversal amostrada e a velocidade da corrente naquela seo. O fluxo de
gua dado pelo volume na unidade de rea e de tempo.
Q=A.v (1)
em que:
Q = vazo ou descarga de gua;
A = seo transversal;
v = velocidade da corrente.
Em geral, o medidor de velocidade da correnteza se posiciona no

meio da calha do rio, obtendo o valor mdio da velocidade naquele ponto.
Porm, em casos de rios profundos e grandes, pode se dividir a calha do rio
em vrias sees transversais e, de dentro de um barco, medir a velocidade
da gua com auxlio de um molinete, em cada uma das sees estabelecidas.
Assim, possvel obter vrias vazes, uma para cada seo transversal
(Fig. 1). Ao final, faz-se o somatrio das vazes para se obter a vazo total.
Q = Qn = z1h1V1 + ...z6h6V6 (2)
86
Onde:
z = largura da seo transversal;
h = profundidade da seo transversal;
V = velocidade da gua na seo transversal.
d) Coleta de gua
O principal coletor de amostras de elementos dissolvidos da gua
(fase lquida) a garrafa de Van Dorn, cujo funcionamento e estrutura so
semelhantes garrafa de Ruttner (Fig. 2). Esta garrafa possui um dispositivo,
chamado mensageiro, que consiste em um peso metlico que corre ao longo
da corda que sustenta o aparelho para desarmar o mecanismo de trava das
tampas. Podem ser feitas de metal ou material sinttico. As sintticas so
preferveis por serem mais leves e prticas de operar e por no apresentarem
risco de contaminao do zooplncton em caso de estudos ecotoxicolgicos.
Sensores de alguns parmetros fsico-qumicos, tais como: temperatura da
gua, condutividade eltrica, pH e oxignio dissolvido podem ser acoplados na
garrafa de Van Dorn, para medio no campo. Em lagos eutrficos (com grande
quantidade de nutrientes) pode-se usar garrafa de pequeno volume (1 a 2
litros), mas em lagos oligotrficos (com pouca quantidade de nutrientes) so
preferidas as garrafas de maior volume (5 litros) (COELHO, 2004).
Fig. 2. Amostrador de fitoplncton:

Garrafa de Ruttner.
87
Procedimentos
Diferentemente do material dissolvido, o material particulado no

se distribui homogeneamente na coluna dgua. Por isso, existe a necessidade
de um amostrador que colete amostras em diferentes profundidades. Estes
coletores devem percorrer toda a coluna dgua com velocidades constantes
de subida e de descida. Os coletores de material particulado geralmente
consistem de garrafas com sacos plsticos dentro que, aps a coleta, so
removidos.
e) Armazenagem e preservao das amostras

As amostras de gua devem ser acondicionadas em frascos
apropriados, pois o material do qual o recipiente feito pode acarretar em
contaminaes da amostra. Para a anlise de parmetros comuns como
nitrognio, amnia, ortofosfato, dureza, condutividade, as garrafas plsticas
so adequadas. Os frascos de borosilicato ou de polietileno (de preferncia
escuros e resistentes a lcalis) so indicados para as anlises de resduos.
Quando no houver como fazer as anlises em campo, a amostra
dever ser preservada para que no haja alteraes em sua composio fsico-
qumica at o momento da anlise em laboratrio. Em geral, a maioria dos
mtodos de preservao inclui a adio de cidos, de modo que a amostra
preservada atinja um pH de 1-2. Para metais, utiliza-se cido ntrico, que deve
ser destilado antes do uso; o cloreto de mercrio usado na preservao de
compostos orgnicos. J os gases (gs carbnico, oxignio dissolvido) exigem
medidas especiais de amostragem e preservao. Por fim, a preservao de
sedimentos em suspenso demanda apenas resfriamento.
7.1.2. Lagos, lagoas e represas
Uma das caractersticas de sistemas ecolgicos sua variao

no aleatria, resultando na existncia de padres no espao e no tempo. Nos
lagos, lagoas e represas (ambientes lnticos) so comuns as estratificaes
vertical e horizontal. Nessas condies, medidas comparativas entre unidades
amostrais, como similaridade, dissimilaridade e diferenas em diversidade de
espcies, sero dependentes do tamanho das unidades amostrais.
88
Em represas, particularmente, a variao do nvel da gua mais

evidente do que em lagos e lagoas, uma vez que h entrada contnua de gua
atravs de seus tributrios; e h tambm sada constante de gua, por meio
de vazo vertida e turbinada. Essas variaes implicam em mudanas espao-
temporais na concentrao de nutrientes e sedimento na gua do reservatrio.
7.1.2.1. Localizao dos pontos de amostragem
Geralmente, em amostragens no ambiente lntico (de guas

paradas) a coleta feita na rea litornea (das margens) e na rea pelgica
(central).
Em grandes reservatrios, geralmente a coleta feita em braos
e na sua regio central, em reas prximas ao vertedouro, na regio mais
profunda, ou em pontos distribudos ao longo do eixo principal e prximo
desembocadura do(s) rio(s) formador(es). J em pequenos reservatrios,
geralmente se amostra na regio mais profunda, junto ao vertedouro ou nas
reas central e litornea.
Em lagoas costeiras, as reas coletadas costumam ser aquelas
proximais ou distais em relao conexo com o mar e a proximidade de
afluentes.
Em pequenos lagos de inundao, a regio coletada a mais
profunda, a regio litornea junto a macrfitas e a rea de conexo ou de
maior profundidade com o rio. As pocas de coleta so no mnimo quatro:
perodo de estiagem, de enchente, de cheia e de vazante, representando as
variaes estacionais.
7.2. Parmetros biolgicos
7.2.1. Fitoplncton
Em guas interiores, podem ser encontrados representantes de

praticamente todos os grupos de algas. A predominncia de um ou outro grupo
em determinado ecossistema funo, principalmente, das caractersticas
89
Procedimentos
do meio. Como exemplo, nos lagos distrficos (ricos em compostos hmicos),

ocorrem predominantemente as algas Chlorophyta, representada pela famlia
Desmidiaceae. Dentre os grupos principais presentes na gua doce, temos:
Cyanophyta, Chlorophyta, Euglenophyta, Chrysophyta, Pyrrophyta (ESTEVES,
1998).
A comunidade do fitoplncton constitui a base da cadeia alimentar
nos ecossistemas aquticos, e a principal responsvel pela produo de
oxignio dissolvido na gua.
O fitoplncton tambm pode ser bioindicador da qualidade da
gua. Assim, quando a concentrao de nutrientes (principalmente nitrognio
e fsforo) atinge nveis extremos nos ambientes aquticos, ocorre a proliferao
de algas (bloom de algas), em funo da grande oferta de alimento. O resultado
final o decrscimo do oxignio dissolvido na gua, cujo consumo, indicado
pela Demanda Bioqumica de Oxignio DBO, que aumenta muito. A
proliferao demasiada de algas pode levar a morte de peixes e organismos
aquticos atravs da falta de oxignio. Assim, o crescimento descontrolado
do fitoplncton um indicativo de poluio orgnica nos ecossistemas
aquticos.
Algumas algas cianofceas (Anabaenopsis raciborskii) e
diatomceas (Asterionella spp) so indicadoras de eutrofizao. Os gneros
Anabaena e Mycrocystis liberam toxinas (geosmina e microcistina,
respectivamente) comprometendo a potabilidade das guas para
abastecimento. Por isso, a Portaria 1469/01 do Ministrio da Sade recomenda
o monitoramento constante nos mananciais de abastecimento. E ainda, a
proporo da biomassa de Clorophyta/Cyanophyta pode indicar proporo de
N e P nos ecossistemas aquticos.
a) Amostragem
Em geral, as pesquisas com fitoplncton estudam os padres de
distribuio espacial e temporal e a sua correlao com os fatores ambientais
que regulam essas distribuies.
90
Alguns exemplos de amostradores para a comunidade do

fitoplncton so: van Dorn ou Ruttner (Fig. 2). As amostras so ento
processadas pelos mtodos de sedimentao e concentrao que permitem o
aumento do nmero de indivduos a serem enumerados, geralmente em
microscpio ptico convencional, entre lmina e lamnula. A anlise quantitativa
do fitoplncton a nica que permite determinar tanto a biomassa ou densidade
quanto a estrutura taxonmica das populaes.
O mtodo de quantificao das populaes fitoplanctnicas mais
utilizado o de Utermhl (1958). Ele se baseia no uso de uma cmara, no qual
uma subamostra de 5-50 ml colocada e deixada para sedimentar em cmaras
de volume definido e contagem em microscpio invertido. Com este mtodo,
de enumerao dos organismos em campos aleatrios, as estimativas numricas
so mais prximas da populao estatstica. recomendvel, sempre que
possvel, a enumerao de 400 indivduos da espcie mais freqente para um
intervalo de confiana de 95% (LUND et al., 1958), e um coeficiente de
variao de 20% a 30% entre as amostras. Entretanto, isto s possvel
quando ocorrem altas densidades populacionais, como em perodos de floraes.
b) Distribuio espacial e temporal

As populaes do fitoplncton so influenciadas por variaes
nas massas dgua, as quais sofrem constantes alteraes por processos fsicos
de circulao da gua (adveco, conveco, turbulncia, ondas internas,
etc), e por processos biolgicos (taxas de crescimento, herbivoria, mecanismos
de flutuao das algas, etc).
Para a deteco de padres espaciais, segundo Huszar & Giani
(2004), interessante aumentar o nmero de unidades amostrais, reduzindo
a freqncia de coleta; e para detectar padres temporais desejvel aumentar
a freqncia das amostragens em menor nmero de compartimentos do lago.
b. 1) Distribuio vertical
A heterogeneidade vertical da coluna dgua comum em
ambientes termicamente estratificados. Nesses casos, as maiores densidades
populacionais se localizam nas camadas mais superficiais. O nmero de unidades
91
Procedimentos
amostrais depender, ento, do grau dessa estruturao vertical. No Brasil, a

estruturao vertical tem sido avaliada a partir de unidades amostrais coletadas
arbitrariamente na superfcie dos lagos, na metade da coluna dgua e junto ao
fundo ou, ento, a profundidades que correspondem a diferentes intensidades
luminosas (100%, 75%, 50%, 10% e 1% da luz na subsuperfcie). Ambientes
rasos (cerca de 2m) so, muitas vezes, amostrados na superfcie e no fundo
ou apenas na superfcie, supondo ausncia de estruturao vertical (HUSZAR
& GIANI, 2004).
O crescimento repentino e descontrolado de algas, fenmeno
freqente em ambientes eutrofizados, pode ter relao com a migrao do
fitoplncton na coluna dgua. A proliferao sem controle de espcies de
algas dinoflageladas, ocasionado pela disponibilidade de nutrientes em excesso,
foi correlacionado com a migrao vertical da espcie (Gymnodinium splendens),
em um lago no Estado de Washington, nos Estados Unidos (ALBERSTON et
al., 1995).
b.1.1) Amostragem ideal:

A fim de se obter uma amostra mais completa, Huszar e Giani
(2004) sugerem amostragens integradas nos estratos homogneo e
estratificado, em estudos de reconhecimento de padres, ou em zonas euftica
e aftica, para trabalhos sobre produo primria. A vantagem seria a maior
abrangncia da variabilidade no campo, com mesmo esforo de quantificao
das populaes fitoplanctnicas em laboratrio. Segundo estas autoras, em
um mesmo estrato, poderiam ser coletadas amostras a diferentes
profundidades e depois misturadas, ou ser utilizados amostradores que integrem
as pores desejadas da coluna dgua.
A amostragem estratificada ao acaso vem sendo considerada
eficiente por assegurar cobertura mais completa da variabilidade, sem perder
as propriedades da aleatoriedade (IRISH & CLARKE, 1984). Para eficincia
mxima, os estratos deveriam ser internamente homogneos, com variabilidade
mxima entre estratos.
92
b.2) Dimenso horizontal

Em sistemas lnticos, a heterogeneidade horizontal forma
mosaicos, cujo tamanho e durao esto relacionados aos processos fsicos e
intrnsecos comunidade. Tais mosaicos so formados de acordo com padres
de fluxo (advectivo e convectivo), os quais so mantidos pelo tempo em que a
dinmica das populaes, por meio de seus processos de crescimento e perda,
exceda as taxas de eroso em seus bordos. Em regies onde haja algas de
rpido crescimento, assim como regies de maior variabilidade ambiental,
espera-se maior heterogeneidade (HUSZAR & GIANI, 2004).
Na dimenso horizontal, o intervalo temporal de coleta crucial,
pois, dependendo da extenso horizontal, da velocidade de escoamento da
massa d gua e do tempo de gerao das populaes, a variabilidade detectada
tambm pode estar relacionada s mudanas intrnsecas comunidade, e no
somente, aos fatores externos que regulam suas distribuies. Segundo Huszar
& Giani (2004), para a deteco de padres horizontais, desejvel aumentar
o nmero de unidades amostradas, reduzindo a freqncia de coleta e utilizando
amostras superficiais ou integradas.
b. 3) Dimenso temporal
As variaes cclicas de luz e temperatura resultam em variaes
na biomassa e na composio do fitoplncton. Assim, algumas coletas
abrangem um calendrio anual ou interanual. As variaes dirias so abordadas
pelas coletas que acompanhem o comportamento nictemeral dos organismos.
Em um estudo italiano, no lago Di Tovel, Baldi (1941) estudou a migrao
vertical do fitoplncton causada por fototaxia. No vero, este lago apresentava
uma cor avermelhada durante o dia e esverdeada durante a noite. A cor
avermelhada comeava a surgir por volta das 9 horas alcanando seu mximo
s 14 horas. Isto provocado pela migrao da alga dianofcea Glenodinium
sanguineum, que acumula gotculas de lipdeos com carotenides durante esse
perodo do dia, sendo atrada pela luz para a superfcie (fototaxia positiva). A
produtividade tambm afetada pelo horrio. No lago Castanho, na Amaznia,
Schmidt (1973) observou que a produtividade das 14:00 s 18:00 foi
significativamente inferior quela observada no restante do dia.
93
Procedimentos
As coletas devem estar em acordo com o tempo de gerao das

algas planctnicas, que normalmente de 1 a 10 dias. Portanto, amostragens
semanais e quinzenais tm sido recomendadas (PADISK et al., 1993). Coletas
mensais podem ser adequadas em pesquisas de longo prazo, em que as falhas
na variao anual so compensadas pelas longas sries temporais (WILLN &
WILLN, 1978). Entretanto, quando o objetivo conhecer, em detalhe, a
dinmica sucessional da comunidade, devem ser adotadas escalas semanais,
de preferncia, ou quinzenais. Por outro lado, para estudo de processos que
ocorrem em escalas de tempo menores, como a migrao vertical do
fitoplncton na coluna dgua, so recomendadas coletas que acompanhem o
deslocamento das populaes nictemerais. J para estudos de descrio geral
da composio e da biomassa do fitoplncton, a freqncia de coleta pode ser
em intervalos de tempo maiores.
7.2.2. Zooplncton
Coleta
A comunidade do zooplncton composta por consumidores
primrios (herbvoros) e predadores de diferentes nveis trficos. Sua
importncia se deve ao fato de estarem posicionados na base da cadeia
alimentar e, graas ao seu metabolismo, so capazes de influenciar processos
ecolgicos fundamentais, como ciclagem de nutrientes e magnitude da
produo biolgica. Estes organismos vivem em lagos, reservatrios, assim
como em grandes rios, e esto dispersos na coluna dgua. Por isso, sua coleta
quase sempre envolve concentrao prvia por meio de algum tipo de filtragem.
As redes para coleta foram desenvolvidas j no sculo XIX (DE
BERNARDI, 1984). Consistem em redes acopladas a um cone que concentra
a amostra, ao fazer a filtragem. Segundo Coelho (2004), as redes mais
eficientes devem ser dotadas de cone redutor e a rea de filtragem deve ser,
aproximadamente, trs vezes maior do que a rea da boca da rede (Fig. 3).
94
Fig. 3. Rede coletora de zooplncton.
O volume filtrado calculado pela seguinte frmula:
Vf = .r2.d (3)
em que:
Vf = volume filtrado;
r = raio da boca da rede;
d = distncia percorrida.
Normalmente, os programas de amostragem de zooplncton

regulares devem considerar dois tamanhos distintos de poros para o coletor.
Para o microzooplncton (organismos menores do que 200 m), sugere-se a
adoo de redes com malha de 50-65 m e, para organismos
mesozooplanctnicos (>200 m), sugere-se o uso de redes com malha na
faixa de 120-160 m. Alm disso, normalmente as redes obtm maiores
eficincias quando so desenhadas especificamente para o ambiente onde
so operadas. Assim, um lago eutrfico, dominado por pequenos organismos,
poder ser amostrado utilizando rede pequena, com dimetro entre 20 e 40
cm e abertura de malha por volta de 70 micrmetros, desde que os arrastos
sejam relativamente pequenos para que a rede no fique colmatada. J num
lago oligotrfico, dominado por grandes cladceros e calanides, a malha
95
Procedimentos
recomendada de 200 m com dimetro de 60 a 80 cm de abertura (COELHO,

2004).
Como o zooplncton apresenta distribuio irregular na
coluna dgua, e migrao vertical diurna, foram desenvolvidas redes especiais
dotadas de mecanismos que permitem abertura e fechamento do cone coletor
em determinadas profundidades. Na maioria dos casos, esse mecanismo
acionado por mensageiros (descritos anteriormente na coleta de fitoplncton).
As armadilhas de plncton tambm so bastante utilizadas,
pois apresentam preciso do volume filtrado, e possuem um modo de
fechamento especial. Um exemplo a armadilha de Clarke-Juday. A armadilha
de Schindler (Fig. 4) feita de acrlico e tem a vantagem de diminuir o efeito
do mecanismo de fechamento oblquo, alm de ser mais simples e leve. Esta
ltima armadilha til para a captura de coppodes e organismos de grande
porte.
Fig. 4. Armadilha de Schindler para coleta do

zooplncton.
Preservao
A preservao dos organismos pode ser feita com agentes
qumicos (formalina com corante) ou por meio de diferentes processos fsicos
(congelamento com posterior liofilizao), dependendo do tipo de estudo
(COELHO, 2004).
a) Preservao com formalina: a concentrao final deve ser

entre 3% e 4%, adicionando-se uma parte de formol para nove partes de
gua. O tamponamento utiliza brax para obter pH neutro. A adio de sacarose
96
(1:4) na soluo de formalina tambm comum, fornecendo maior resistncia

quitina dos organismos, e preservando-os por mais tempo. O corante utilizado
na fixao o Rosa de Bengala. A adio de corante necessria para facilitar
a contagem e o processo de identificao dos organismos.
b) Os estudos ligados ecofisiologia e bioqumica requerem
fixao do zooplncton sem usar calor ou preservativos qumicos. O
congelamento rpido seguido da liofilizao usado para pesquisas que
requerem determinaes precisas da biomassa e estudos sobre composio
elementar (C, N e P), bioqumica (carboidratos, lipdeos, enzimas, cidos
nuclicos) ou de natureza toxicolgica (metais, traos radioativos, biocidas).
Os organismos podem ser congelados a -18C, utilizando gelo seco (-44C)
ou nitrognio lquido (ponto de ebulio a -195,8C). Aps o congelamento, o
zooplncton liofilizado (secagem a ultravcuo em que a gua sublimada
passando diretamente do estado slido para o vapor).
Contagem
As lminas de contagem podem ser: Neubauer (h = 0,100 mm,
A = 0,0625 mm2), Fuchs-Rosenthal (h = 0,200 mm, A = 0,0625 mm2) ou
Sedwick-Rafter (vol = 1 ml). As duas primeiras so mais adequadas para o
nanoplncton (organismos maiores do que 2 micrmetros). J para o micro e
mezoplncton, a contagem feita com a cubeta de Sedwick-Rafter. Em geral,
a contagem do zooplncton envolve a escolha entre trabalhar com pequenas
subamostras e cont-las em microscpio com grande resoluo ptica ou
trabalhar com grandes subamostras, ou mesmo toda a unidade amostral, e
utilizar estereoscpio com menor resoluo ptica (COELHO, 2004).
7.2.2.1. O zooplncton como bioindicador de qualidade de gua
Estudando o Reservatrio Ibitinga (SP), Gntzel et al. (2002)

verificaram que o gnero Pompholix e as espcies Brachionus calyciflorus,
Euchlanis dilatata e Notodiaptomus iheringi, ocorriam concomitantemente na
poro superior do reservatrio, afirmando o seu papel como indicadores de
condies eutrficas. Por outro lado, espcies do gnero Synchaeta e os
97
Procedimentos
cladceros Bosminopsis deitersi e Moina minuta foram dominantes nos

tributrios dos rios Jacar-Pepira e Jacar-Guau. Estas mesmas espcies
foram encontradas em reservatrios oligotrficos do Estado de So Paulo
(HEREDIA-SEIXAS, 1981, ROCHA & GNTZEL, 1999).
Quanto sensibilidade a pesticidas, tambm h registro de
respostas do zooplncton. Quando os pesticidas temephos, chlorpyrifos e
dursban foram aplicados em reas alagadas de Minnesota (EUA) em
concentraes tpicas observadas no campo, houve a morte de coppodos e
cladceros (HELGEN et al., 1988). Os herbicidas tambm podem aumentar a
dominncia de espcies adaptadas a ambientes abertos (ex: cladceros), uma
vez que a sua base alimentar (algas) aumenta muito aps a reduo do
sombreamento originrio da vegetao aqutica.
7.2.3. Bactrias
O papel da comunidade microbiana nos ecossistemas aquticos

crucial para o seu funcionamento. Os fluxos de carbono e energia esto
fortemente acoplados dentro da comunidade microbiana, e o comportamento
dinmico do elo microbiano , basicamente, resultado de trs processos:
comensalismo (produo de matria orgnica dissolvida pelo fitoplncton e
sua utilizao por bactrias), competio (por nutrientes entre bactrias e
fitoplncton, sendo influenciada pela disponibilidade de substratos) e predao
(por flagelados, ciliados e microzooplncton, que promovem o feedback de
nutrientes e parte da matria orgnica dissolvida) (STOCKNER & PORTER,
1988).
As amostras para anlise de bactrias devem ser coletadas in
natura, utilizando amostrador ZoBell ou frascos de vidro de boca larga
esterilizados (ATLAS & BARTHA, 1993). O uso de garrafas amostradoras
(Ruttner, Van Dorn, etc.) adequado, sendo importante retirar primeiro a
unidade amostral destinada anlise das bactrias, a fim de evitar a
contaminao ou alterao da referida unidade.
98
Vrios fixadores (formaldedo, glutaraldedo, paraformaldedo) em

diferentes concentraes (1%-5%), tamponados ou no, tm sido utilizados
para fixao de bactrias (KEMP et al., 1993). Para ecossistemas de gua
doce, formaldedo 2%-3% (concentrao final) pode ser recomendado. As
unidades amostrais devem ser acondicionadas em frascos escuros, protegidas
da luz e transportadas a baixas temperaturas (4-10C), mas nunca congeladas.
O tempo de armazenagem das amostras ainda no est definido. No entanto,
para unidades amostrais fixadas com aldedos e mantidas a 5C (como para
bactrias), podem ser armazenadas por uma ou duas semanas.
O volume de unidade amostral a ser coletado, geralmente, est
relacionado ao grau de trofia do ambiente (quantidade de nutrientes
disponveis). Segundo Kirchmann et al. (1982), de 100ml a 1L so adequados
para o estudo de bactrias.
O uso de meios de cultura importante nos processos de
contagem de bactrias. Com o mtodo de espalhamento em placa (contagem
de unidades formadoras de colnias UFC) ou pela determinao do nmero
mais provvel (NMP), obtm-se o nmero de clulas cultivveis, que cerca
de duas a quatro ordens de magnitude menor que o nmero total (GOMES et
al., 1998).
O nmero de bactrias do grupo Coliforme bastante comum
para se caracterizar a balneabilidade das guas, sendo um parmetro de
grande importncia na definio das classes de guas estabelecidas pela
Resoluo CONAMA 357/05. H dois tipos: coliformes totais e fecais,
estando presentes em amostras de gua poludas e no poludas. Vale
ressaltar que no existe relao quantificvel entre coliformes totais e
microorganismos patognicos. A desvantagem do uso de coliformes como
indicadores de qualidade de gua a sua curta persistncia no ambiente,
sendo sensveis luz e ao cloro, podendo assim permanecer nas amostras
por apenas 48 horas. Uma alternativa complementar as pesquisas com
bactrias heterotrficas, pois so patgenos e no so exclusivamente de
origem fecal (ex: Pseudomonas aeruginosa), sendo ideais para guas doces
com baixas taxas de indicadores fecais.
99
Procedimentos
A relao entre coliformes fecais e estreptococos fecais (CF/EF)

um bom indicador sobre a origem da contaminao. Quanto maior o valor da
relao CF/EF, considera-se que seja maior a contribuio relativa de origem
humana (VON SPERLING, 1996).
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102
Amostragem de gua para anlise de nitrato e metais pesados
Captulo 8
Amostragem de gua para anlise de nitrato e

metais pesados
Adriana M. Moreno Pires, Manoel Dornelas de Souza e

Marco Antonio Vieira Ligo
8.1. Determinao do local e da freqncia de amostragem
O primeiro passo para amostrar corpos de gua para anlise de

nitrato e metais pesados elaborar o planejamento de amostragem,
identificando o local e a freqncia em que esta dever ser feita. importante
destacar que o conjunto de pontos amostrados deve representar uma zona de
influncia bem definida e que a freqncia de amostragem dever ser
determinada baseada nas variaes temporais da adio do contaminante,
caso a fonte seja conhecida. Se a fonte desconhecida recomenda-se realizar
um plano de monitoramento com o objetivo de identificar estas variaes
temporais.
Em alguns casos, os locais de amostragem podem ser indicados
genericamente, como para a avaliao da qualidade de gua de uma regio.
Em outros casos, os pontos de amostragem precisam ser definidos
precisamente, como, por exemplo, quando so avaliados pontos de captao
em um rio ou o grau de contaminao provocado por uma determinada fonte
de contaminantes (GUAZELLI & OTTA, 1979). Quando a localizao da fonte
conhecida, recomenda-se realizar a amostragem no ponto de entrada (rea
do corpo hdrico que recebe diretamente a fonte de contaminao); no ponto
de montante (acima da posio onde a fonte adicionada ao corpo hdrico)
para determinar os teores antes da fonte e no ponto de jusante (aps o ponto
de entrada dos contaminantes) para determinar os teores aps a diluio do
contaminante no corpo hdrico (IAP, 2004).
103
Procedimentos
Mesmo com um local de amostragem definido, podem existir

variaes espaciais da concentrao de nitrato e metais pesados. As causas
de distribuio heterognea de parmetros de qualidade de gua podem ser
divididas em (GUAZZELLI & OTTA, 1979):
Sistemas compostos por duas ou mais guas que no esto misturadas ou
encontram-se em fase de mistura. Enquadram-se nesta categoria o
fenmeno de estratificao trmica das lagoas e reservatrios e o da
ocorrncia de mistura num rio, logo a jusante do recebimento do efluente.
Sistemas com distribuio no homognea dos contaminantes em um
sistema hdrico homogneo. Por exemplo, quando combinados com alguns
ligantes orgnicos, os metais pesados podem formar compostos orgnicos
de densidades diferentes da densidade da gua. Outro caso, bastante
aplicvel ao nitrato, o da ocorrncia de reaes qumicas e/ou biolgicas
distintas conforme a parte do sistema considerada.
Outro importante fator a variao temporal das concentraes
de nitrato e metais pesados na gua. Quando a fonte conhecida, possvel
pr-determinar esta variao ou, pelo menos, identificar os possveis perodos
em que ocorrero as maiores variaes.
Quando as variaes espaciais e temporais no so conhecidas,
recomenda-se que seja realizada uma investigao preliminar para avaliao
do grau de homogeneidade. Em alguns casos, basta uma inspeo visual para
determinar o ponto de coleta em uma rea homognea. Em caso de dvida,
recomenda-se realizar coleta de dados em diversas verticais e profundidades,
repetindo-se periodicamente este procedimento e utilizando-se modelos
estatsticos para determinar tanto a variabilidade espacial como temporal
(GUAZZELLI & OTTA, 1979).
Para o caso especfico de avaliao de fontes poluidoras como,
por exemplo, efluentes industriais, deve-se considerar que podem ocorrer
variaes significativas e bem caracterizadas quanto ao volume,
concentrao e tipo de poluente em funo do tempo. Estas variaes
podem ser classificadas como: contnuas e uniformes (hora aps hora);
contnuas e no uniformes (minuto a minuto); descontnuas; descontnuas e
em batelada (ex: final da jornada de trabalho de uma indstria) e descontnuas
104
e intermitentes (no existe periodicidade certa em seus lanamentos)

(FEEMA, 1983).
8.2. Coleta das amostras de gua
A coleta de amostras tem papel fundamental na obteno de

resultados confiveis e representativos. Portanto, o indivduo designado para
efetuar a amostragem deve estar devidamente treinado sobre tcnicas de
amostragem e preservao, medidas de segurana, manuseio dos equipamentos
a serem utilizados em campo, alm de saber a localizao exata dos pontos de
amostragem e estar apto para observar e registrar condies atpicas nos
referidos locais (ABNT-NBR-9898).
As amostras de gua podem ser simples ou compostas. A amostra
simples consiste em selecionar um ponto representativo de um corpo de gua
e retirar uma poro diretamente deste. A amostra composta consiste na
mistura proporcional de vrias amostras simples, que podem ser retiradas em
locais diferentes ou no mesmo ponto em tempos diferentes. interessante
lembrar que o mesmo volume de cada amostra simples deve ser utilizado para
formar a composta. Recomenda-se, um volume mnimo de 200 ml de amostra
para a anlise de nitrato (ABNT-NBR-9898) e 500 ml para a anlise de metais
pesados (IAP, 2004).
Os frascos de armazenamento das amostras no devem ser
preenchidos at a boca, pois isto dificulta a homogeneizao, e a tampa s
deve ser retirada no momento da coleta. Para anlise de nitrato, recomenda-
se que as amostras sejam armazenadas em frascos de polietileno ou vidro
borossilicato (inerte) (ABNT-NBR-9898). O armazenamento de amostras para
anlise de metais pesados deve ser preferencialmente em frascos de
polipropileno ou vidro inerte (IAP, 2004). Recomenda-se a utilizao de frascos
e tampas feitos do mesmo material, pois a probabilidade de vazamento maior
quando os materiais so diferentes.
As coletas podem ser realizadas em superfcie ou em
profundidade, de acordo com o objetivo da anlise. As coletas em superfcie
devem ser feitas a aproximadamente 20 cm de profundidade, colocando-se o
105
Procedimentos
frasco em contato direto com a gua, com a boca virada contra a corrente
(FEEMA, 1983). Nos casos em que so adicionados preservativos aos frascos,
como para metais pesados, recomenda-se a coleta da amostra utilizando-se
um frasco de transposio (por exemplo, um balde descartvel), previamente
lavado. Antes de realizar a coleta, o frasco deve ser acondicionado,
enxaguando-o duas vezes com gua do corpo hdrico. Outra opo o uso das
garrafas de profundidade. Caso a amostragem seja realizada a partir das
margens, em locais de difcil acesso, utilizar um frasco de transposio provido
de peso, arremessando-o at um local bem distante da margem e mantendo a
extremidade livre da corda em um ponto fixo (ABNT-NBR-9898).
Para as coletas em profundidade, necessariamente devero ser
utilizados equipamentos especficos, como garrafas e/ou amostradores de
profundidade (amostrador de Zobell J-Z, de Niskin, de Kemmerer, de Van Dorn,
garrafa de Meyer), moto-bomba e coletores com vlvula. No caso do uso da
moto-bomba, aps acoplar as mangueiras e as vlvulas de suco, deve-se
mergulhar a mangueira at a profundidade desejada e ento realizar a coleta
(IAP, 2004). Antes da coleta com garrafas de profundidade, deve-se
acondicion-las, enxaguando-as duas vezes com gua do local de amostragem.
Ao realizar o acondicionamento, tomar cuidado para que o local da prxima
coleta no seja contaminado. Caso a amostra a ser coletada seja proveniente
das camadas mais profundas do corpo hdrico, evitar que a garrafa coletora
toque o fundo, para no suspender o sedimento e, consequentemente,
contaminar a amostra (ABNT-NBR-9898). Lembrar que a profundidade de
coleta sempre deve ser medida (medidores eletrnicos, lastros, entre outros)
e anotada (FEEMA, 1983).
8.3. Preservao das amostras
Para evitar que ocorram alteraes na concentrao de nitrato e

metais pesados nas amostras aps a coleta, medidas de preveno devem ser
tomadas. No caso de nitrato, recomenda-se que imediatamente aps a coleta,
os frascos sejam acondicionados em caixas trmicas com gelo e que a anlise
seja realizada em at 48 horas. Para metais pesados, deve-se adicionar 5 ml
106
de HNO3 concentrado para cada 1000 ml de amostra coletada. No

necessrio nenhum acondicionamento especial para o transporte dos frascos,
entretanto as anlises devem ser realizadas em at 180 dias, com exceo do
mercrio, que deve ser analisado em at 13 dias (IAP, 2004).
Ao preparar a amostra para o transporte, alguns cuidados devem
ser tomados: (i) colocar os frascos em uma caixa de tal modo que fiquem
firmes durante o transporte; (ii) nos casos em que se usar gelo para preservao,
cuidar para que os frascos, ao final do transporte, no fiquem imersos na gua
formada pela sua fuso, o que aumentaria muito o risco de contaminao;
(iii) cobrir a caixa de modo que sua tampa exera leve presso sobre a tampa
dos frascos, impedindo que se destaquem durante o transporte e (iv) evitar a
colocao de frascos de uma mesma amostra em caixas diferentes (ABNT-
NBR-9898).
Fig. 1. Coletor de gua para poos.
107
Procedimentos
Referncias
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS (ABNT). Frum Nacional

de Normatizao NBR-9898 - Preservao e tcnicas de amostragem de
efluentes lquidos e corpos receptores. Rio de Janeiro, 1987. 34p.
FUNDAO ESTADUAL DE ENGENHARIA DO MEIO AMBIENTE (FEEMA).

GOVERNO DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO. Manual de amostragem de
qualidade de gua. Rio de Janeiro, 1983. 32p. (Cadernos FEEMA Srie Tcnica
019/83).
GUAZZELLI, M. R.; OTTA, H. Rede de amostragem e indicadores de qualidade

de gua: critrios e conceituaes. So Paulo: CETESB, 1979. 19p.
INSTITUTO AMBIENTAL DO PARAN (IAP). Manual para coleta e

preservao de amostras de gua, solo, efluentes e animais. Curitiba, 2004.
34p. (Manual Tcnico).
108
Amostragem de gua para anlise de agrotxicos
Captulo 9
Sonia Cludia Nascimento de Queiroz, Vera Lcia Ferracini e

A ocorrncia de agrotxicos e seus produtos de transformao

em sistemas aquticos uma das maiores preocupaes em todo o mundo.
Portanto, o monitoramento da gua superficial e subterrnea, a fim de verificar
se nveis admissveis de agrotxicos esto presentes, de extrema importncia.
A seleo de um procedimento de amostragem a base dos
estudos ambientais. A amostragem deve ser representativa e a quantidade de
gua coletada deve ser suficiente para que represente a variabilidade da
amostra. Em alguns casos, o monitoramento mensal eficiente ao passo que
em outros deve ser feito diariamente ou semanalmente. Outro ponto a
varincia para cada pesticida que deve ser calculada das sub-amostras. A
exatido da amostragem o elemento chave, sendo que em muitos casos
obtida de alguma forma aleatria.
Normalmente, o que se faz obter a amostra composta, por
combinao de amostras simples, que ento analisada. Embora a informao
da amostra individual possa ser perdida h um ganho de informao global de
um ponto de amostragem particular, ou seja, pela combinao de amostras de
gua os agrotxicos so enriquecidos, uma vez que mais volume de gua
analisado e concentraes muito menores podem ser detectadas (BARCEL
& HENNION, 1997).
O elemento inicial e talvez o mais crtico de um programa de
monitoramento de resduos de agrotxicos em gua o plano de amostragem.
Em geral um plano de amostragem deve definir clara e sistematicamente todos
os passos requeridos para que a coleta seja a mais representativa possvel.
109
Procedimentos
Quanto mais especfico for o plano de amostragem menor ser a chance de se

introduzir erros. Em resumo, o plano de amostragem quando completo deve
responder as seguintes questes (BARCEL & HENNION, 1997):
- O que queremos saber?
- Por que necessitamos desta informao?
- O que ser feito com os resultados?
- Que ao dever ser tomada?
Normalmente se considera que a parte analtica, com sua
sofisticada instrumentao e alto custo, seja considerada como o elemento
dominante do programa de monitoramento. Entretanto, de nada adianta ter
equipamentos caros e sofisticados em um laboratrio, se os resultados obtidos
so provenientes de um plano de amostragem equivocado.
Um dos pontos que freqentemente serve como guia em um plano
de amostragem a informao sobre a persistncia e as propriedades fsico-
qumicas do composto que se quer analisar, tais como, solubilidade em gua,
Koc (coeficiente de partio da matria orgnica), Kow (coeficiente de partio
octanol e gua) e presso de vapor.
O histrico das culturas e dos produtos utilizados so tambm
de extrema importncia. Esta informao bsica para se conhecer
quais agrotxicos e metablitos podem ser determinados a fim de
estabelecer o protocolo analtico adequado. Este protocolo deve ser
feito especificamente para resolver problemas particulares associados
ao local de estudo.
Muitos dos problemas que ocorrem so relacionados adsoro
nos tubos de amostragem, frascos, filtros, materiais suspensos e carbono
orgnico coloidal. No caso de frascos, os de cor mbar so utilizados para
evitar a fotodegradao e materiais como o vidro, ao-inoxidvel e teflon so
recomendados. Para traos de agrotxicos e de outros tipos de poluentes
orgnicos deve-se evitar materiais plsticos que usualmente contm ftalatos.
Vidro de borosilicato so amplamente utilizados. A limpeza dos frascos, antes
da amostragem, normalmente feita usando cido concentrado ou detergente
no inico seguido de gua pura e armazenada em um local livre de poeira e
vapores. Antes da amostragem, uma lavagem prvia no mesmo local, com a
110
gua a ser amostrada vrias vezes, requerida, exceto quando utilizado

preservante.
A amostragem de gua para anlise de agrotxicos, seja em gua
superficial ou subterrnea, deve ser filtrada em papel de filtro para evitar que
os resduos orgnicos e demais organismos possam favorecer atividade biolgica
que venha promover a degradao do produto amostrado. Aps a coleta, as
amostras devem ser acondicionadas em caixas de isopor ou trmicas para o
transporte at o laboratrio. Se o tempo de percurso entre o local da coleta e
o laboratrio for maior que algumas horas, o uso de gelo pode ser uma boa
opo.
conhecido que mesmo se levando em conta todas as precaues
necessrias, os frascos utilizados para amostrar e estocar agrotxicos podem
causar perdas por adsoro nas paredes para compostos que tenham valores
de Koc > 104 e 105. Outros aspectos so relacionados aos fatores que afetam
a estratgia de amostragem, como por exemplo a variabilidade temporal e
espacial.
A coleta de gua, seja superficial ou subterrnea, deve
preferencialmente ser feita por meio de um coletor apropriado, normalmente
do tipo tubular de ao inoxidvel, com uma abertura na base para a entrada
da gua. Com o enchimento do coletor, a abertura se fecha automaticamente
devido prpria presso da gua coletada.
9.1. Conservao da amostra
As amostras devem ser preservadas a fim de evitar alteraes

qumicas e biolgicas desde a sua coleta at o momento da anlise.
Quando nas amostras coletadas tiver apenas uma nica classe
de agrotxico, tanto o preservativo quanto o tempo de armazenamento devem
ser observados para salvaguardar a integridade das mesmas. Para amostras
contendo mais de uma classe de agrotxicos, devem ser refrigeradas a 4 0C,
no escuro, com adio de gotas de soluo 0,008% de tiossulfato de sdio
(para reduo de resduos de cloreto) e pH ajustado para a faixa de 6-9 com
NaOH. As amostras podem ser armazenadas por at 7 dias antes da extrao
111
Procedimentos
e 40 dias aps a extrao. Quando as amostras forem extradas no perodo de

at 72 h aps a coleta o ajuste de pH no necessrio (EPA, 2003).
9.2. Amostragem
9.2.1 gua superficial
A composio qumica de um lquido em fluxo, como um rio, pode

variar de acordo com os parmetros temperatura, vazo, distncia da fonte,
dentre outros, sendo que nenhum deles pode ser controlado durante a
amostragem.
A amostragem de gua superficial para fins de anlise de
agrotxicos, deve considerar locais cuja fora hidrulica seja mnima ou com
movimento bastante lento da gua. Aliado a esse aspecto, deve-se tambm
identificar os locais, via escoamento superficial, por onde o produto est
chegando no corpo dgua. A amostra deve ser coletada com a boca do frasco
de coleta contra a corrente, de modo a minimizar o risco de contaminao da
amostra.
De qualquer forma, no se recomenda um monitoramento por
perodos prolongados nessas condies, uma vez que o alto dinamismo desse
ambiente provoca alteraes significativas na composio da gua em espaos
de tempo curtos. Devido a essas condies, costuma-se escolher os lagos,
audes e represas para amostragem. Esses locais tambm apresentam
inconvenientes, principalmente para as molculas de rpida degradao,
principalmente pela ao da luz solar.
A importncia desse tipo de amostragem seria ento somente
nos casos em que houver um evento (derramamento acidental, rompimento
de terraos com aporte considervel de enxurradas para o corpo dgua) com
grandes possibilidades de alterao e/ou contaminao da gua num dado
momento, colocando em risco a sade de pessoas e animais e, em particular,
organismos aquticos.
112
9.2.2. gua subterrnea
Os agrotxicos, dependendo das propriedades fsico-qumicas,

podem percolar atravs do solo, podendo alcanar o lenol fretico. Este
processo lento, mesmo em solos arenosos, requerendo vrias coletas ao
longo do tempo e dentro do perodo chuvoso.
Quando houver poos, sejam eles rasos (cisternas e cacimbas)
ou tubulares profundos (artesianos e semi-artesianos), a coleta pode ser feita
diretamente na boca do poo, com o acondicionamento das amostras
obedecendo aos mesmos princpios adotados para a gua superficial.
Na ausncia de poos, deve-se proceder instalao de tubos
coletores de gua, tipo piezmetros, em locais que sejam favorveis ao fluxo
subsuperficial da gua proveniente da rea cultivada. Normalmente,
recomenda-se a instalao de vrios coletores alinhados e posicionados na
direo de maior declividade da rea.
9.3. Extrao em Fase Slida de amostras in situ
A extrao em fase slida, EFS, tem se mostrado uma tcnica

efetiva para o preparo de amostras de contaminantes orgnicos em gua.
Uma das vantagens prevenir que os analitos sorvidos na coluna se
decomponham, e deste modo possam ser armazenados por um perodo de
tempo maior, sem alterao na concentrao e na identidade (LISKA &
BLIKOV. 1998). A EFS uma das ferramentas mais empregadas para
extrao e/ou pr-concentrao de analitos presentes em matrizes complexas,
permitindo que concentraes a nveis muito baixos (traos) sejam detectadas
pelos instrumentos. Esta tcnica emprega sorventes recheados em cartuchos,
nas formas de barril ou seringa, e os mecanismos de reteno so idnticos
queles envolvidos em cromatografia lquida em coluna.
Esta tcnica possui avanos quando comparada tcnica
tradicional da extrao lquido-lquido, principalmente com relao reduo
da quantidade de solventes e amostras envolvidas em cada extrao. Em geral,
os procedimentos da EFS envolvem cinco etapas: i) ativao do sorvente para
113
Procedimentos
deixar os stios ativos disponveis; ii) condicionamento do sorvente com o

solvente adequado para ajustar as foras do solvente de eluio com o solvente
da amostra; iii) introduo da amostra, quando ocorre a reteno do analito e
s vezes de alguns interferentes; iv) limpeza da coluna para retirar os
interferentes menos retidos que o analito; v) eluio e coleta do analito. A
figura 1 mostra a seqncia de um procedimento de extrao em fase slida
direcionado para a pr-concentrao de analitos e limpeza da amostra
(QUEIROZ, 2001).
Fig. 1. Esquema de um cartucho de extrao em fase slida (EFS) operando no

modo de pr-concentrao seguida de clean-up de amostra. A) ativao e condici-
onamento do cartucho; B) aplicao da amostra, com reteno do(s) analito(s) e
dos interferentes; C) troca de solvente e eluio dos interferentes; D) troca de
solvente e eluio do(s) analito(s).
Esta tcnica pode ser usada em programas de monitoramento

com a vantagem adicional do transporte dos cartuchos ser muito mais
conveniente que o de frascos de vidro.
9.4. Identificao e Registro
Toda e qualquer coleta deve conter informaes que permitam a

rastreabilidade dos dados gerados (EGLI et al., 2003).
114
A ficha de coleta de campo deve conter as seguintes informaes:

- Nmero de identificao da amostra.
- Identificao do ponto de amostragem e sua localizao,
contendo a latitude e longitude. Um mapa pode ser muito til para visualizar
os pontos de coleta.
Adicionalmente, para alguns tipos de amostra, o exato local da
amostragem deve ser especificado, indicando a profundidade ou altura com
relao superfcie ou nvel do mar;
- data e hora da coleta;
- procedncia da gua;
- descrio do mtodo de amostragem, incluindo a tcnica e
equipamento utilizado, tipo de amostras (replicata, espacialmente ou
temporariamente compostas);
- medidas de campo (temperatura, condutividade, nitratos e pH).
Estas informaes so importantes para saber o tipo de gua e como a sua
composio pode afetar a estabilidade dos agrotxicos, durante o
monitoramento;
- eventuais observaes de campo;
- condies meteorolgicas nas ltimas 24 horas que possam
interferir na qualidade da gua;
- indicao dos agrotxicos a serem analisados no laboratrio;
- nome do responsvel pela coleta e
- nome do solicitante, com telefone para contato.
Referncias
BARCEL, D.; HENNION, M. C. Sampling of polar pesticides from water

matrices. Analytica Chimica Acta, v. 338, p. 3-18, 1997.
EGLI, H.; DASSENAKIS, M.; GARELICK, H.; VAN GRIEKEN, R.; PEIJNENBURG,
W. J. G. M.; KLASINK, L.; KORDEL, W.; PRIEST, N.; TAVARES, T. Minimum
requeriments for reporting analytical data for environmental samples. Pure
and Applied Chemistry, v.75, n. 8, p. 1097-1106, 2003.
115
Procedimentos
EPA Environmental Protection Agency. 40 CFR Ch.I, 07/01/2003 Edition,

Part 136, Tabela I e II. Washington, 2003.
LISKA, I.; BLIKOV, K. Stability of polar pesticides on disposable solid-phase

extraction precolumns. Journal of Chromatography.Series A, v. 795, p. 61-
69, 1998.
QUEIROZ, S. C. N. Determinao multiresduos de pesticidas em gua por

cromatografia lquida de alta eficincia com nfase em deteco por
espectrometria de massas e novos sorventes para extrao em fase slida.
2001. 153p. Tese (Doutorado) Universidade Estadual de Campinas, Instituto
de Qumica.
116
Amostragem de sedimentos para anlise de metais pesados
Parte IV
SEDIMENTOS
117
Procedimentos
118
Captulo 10
Amostragem de sedimentos para anlise

de metais pesados
Marco Antnio Ferreira Gomes e Heloisa Ferreira Filizola
A amostragem de sedimento para anlise de metais pesados como

tambm para agrotxicos, requer a seleo de locais, onde a energia do agente
transportador, no caso a gua, muito baixa. Nessas condies, a
sedimentao mais expressiva, com acmulo considervel de sedimento ou
material no consolidado. Trata-se do ambiente ideal para se encontrar
compostos adsorvidos aos sedimentos, oriundos das reas cultivadas.
Assim, a prtica tem mostrado que os lagos, audes e represas
so os melhores locais para a amostragem de sedimentos, normalmente
conduzidos at o fundo via escoamento superficial das partculas de solo, seja
por meio de processos mais lentos (remoo lenta e gradual de partculas do
solo, via eroso laminar, por exemplo), seja por meio de processos mais rpidos
ou catastrficos (rompimento brusco de terraos e curvas de nvel ou mesmo
escorregamentos que do origem a ravinas e voorocas).
10.1. Planejamento da amostragem
10.1.1. Nmero de amostras e de locais de coleta
O nmero de amostras a serem coletadas e os locais de coleta

so determinados pelo tamanho da rea e os objetivos do trabalho, pela
distribuio e concentrao do contaminante a ser avaliado, pelas
caractersticas e homogeneidade dos sedimentos, pelo volume de material
necessrio para as anlises a serem feitas e pelo grau de confiabilidade
desejado.
119
Procedimentos
O nmero de amostras a serem analisadas pode ser determinado

de maneira emprica ou estatstica; independente da escolha, certos princpios
no podem ser esquecidos, tais como:
Quanto maior o nmero de amostras, melhor ser a caracterizao do
padro de distribuio espacial;
Amostras nicas so inadequadas para caracterizar a variabilidade;
A mdia de vrias medidas de cada local menos varivel que uma s
medida (ENVIRONMENT CANADA, 2002).
A amostragem poder ser, como para solos (Captulo 2), por
critrios ou determinista, aleatria simples ou aleatria estratificada, podendo
ser amostras pontuais simples ou pontuais mltiplas ou ainda compostas.
10.2. Amostradores
As coletas das amostras de sedimento normalmente so feitas

por meio de coletores constitudos por um tubo de ao inox ou PVC (Captulo
12) ou por coletores tipo garra (mini-dragas) (Captulo 13). Existem diversos
modelos de amostradores adaptados profundidade da coleta e ao tipo de
sedimento ser amostrado.
10.2.1. Amostrador manipulado por mergulhador
Esta tcnica comporta vantagens como: melhor qualidade de

amostragem para as amostras coletadas a menos de 2m graas ao controle
das condies de penetrao. Os tubos so geralmente de pequeno dimetro
(5cm) e curtos (<1m), mas podem ser utilizados tubos de at 12cm de
dimetro e 1,8m de comprimento (ENVIRONMENT CANADA, 2002). Os tubos
so inseridos manualmente, utilizando-se, em caso de necessidade, um martelo
especialmente adaptado. O tubo dever ser fechado, em sua extremidade
superior, aps a introduo do tubo no sedimento e, aps sua retirada, a
extremidade inferior tambm dever ser tampada.
120
10.2.2. Amostradores a mbolo ou pisto (Fig. 1)
A utilizao deste tipo de amostrador recomendada para

sedimentos coesos, como argila ou silte, e no devem ser utilizados em
sedimentos arenosos. Sua utilizao requer um certo nvel de experincia e
uma avaliao profunda da profundidade da gua, pois o mbolo deve ser
mantido justo acima dos sedimentos (ENVIRONMENT CANADA, 2002).
Estes amostradores so utilizados a partir de uma plataforma
fixa, um barco ou outro tipo de embarcao; o amostrador introduzido nos
sedimentos com a ajuda de um tubo rgido que permite controlar a utilizao
do mbolo por intermdio de um cabo ou de uma haste que passa no interior
do tubo principal. Para amostragens de sedimentos espessos necessrio um
outro tubo externo ao tubo principal, para que o amostrador possa receber as
extenses necessrias amostragem. Alguns modelos mais sofisticados utilizam
gua sob presso para introduzir o amostrador.
Durante a amostragem, o amostrador mergulhado at a
superfcie dos sedimentos e em seguida introduzido no sedimento empurrando-
se a haste manualmente ou com um martelo quando a resistncia do material
a ser coletado for grande.
Assim que o amostrador for iado superfcie, dever ser
colocada uma tampa em sua base antes que o tubo seja retirado da gua, pois
a presso hidrosttica limita a perda de material.
Fig. 1. Ilustrao de um amostrador a PISTO
121
Procedimentos
10.2.3. Amostradores vibratrios (Fig. 2)
O amostrador vibratrio ou vibro-amostrador utiliza uma vibrao

de alta freqncia, a qual permite reduzir o atrito na introduo do amostrador
nos sedimentos, reduzindo os problemas de compactao da coluna de
sedimentos provocada pelos outros tipos de amostradores (MARTIN et al.,
1995). Estes amostradores tambm so utilizados a partir de uma plataforma
fixa, um barco ou outro tipo de embarcao.
Normalmente o peso do amostrador suficiente para a introduo
do mesmo nos sedimentos, podendo chegar at 6m, dependendo do tipo de
sedimentos e da fora do motor.
Fig. 2. Representao esquemtica de um vibro-amostrador em operao.
10.2.4. Dragas (Fig. 3)
As dragas so utilizadas em estudos nos quais a caracterizao

vertical do sedimento no necessria. Nesse caso, este tipo de amostrador
o mais indicado, pois seu emprego mais fcil e a quantidade de amostra
retirada maior do que com os outros amostradores.
A escolha da draga mais apropriada depender do tipo de material
a ser amostrado dragas de Ekman e Petersen para sedimentos lodosos e
dragas de van Veen e Ponar para sedimentos grosseiros. O nvel de
consolidao dos sedimentos, a velocidade da correnteza e o volume a ser
coletado tambm interferem na escolha da draga apropriada. Os sedimentos
consolidados no podem ser coletados com draga.
122
Fig. 3. A) Draga de Ekman; B) draga de Ponar e C) draga de van Veen
Os principais inconvenientes utilizao de dragas so: i)

contaminao dos sedimentos por metal ou pelo revestimento da draga, quando
esta no for de ao inoxidvel; neste caso ou utiliza-se um revestimento em
Teflon ou uma capa em polietileno de alta densidade (HDPE) ou a alquota da
amostra a ser analisada dever ser pega bem no centro da draga, evitando
assim o contato com as paredes em metal; ii) pouca reprodutibilidade da
amostragem; iii) alterao ou deslocamento da camada superficial devido ao
impacto da draga; iv) perda da integridade da amostra dependendo da draga
utilizada e v) dificuldade de utilizao quando a correnteza for muito forte.
Neste caso, o uso de dragas mais pesadas ou de um lastro podem ajudar.
10.3. Amostragem de sedimentos em rios, crregos e riachos
As amostragens de sedimentos em ambientes aquticos de alta

energia requerem a escolha de locais onde essa energia sofre diminuio, ou
seja, em locais imediatamente jusante de onde se verifica a ocorrncia de
escavao natural do leito (local de mxima energia). Os locais em que ocorre
essa queda de energia da gua podem ser identificados pela presena de um
remanso ou pontos de baixa energia hidrulica.
No caso de reas agrcolas, onde a fonte de contaminao
considerada difusa, importante a coleta em pelo menos mais de um ponto a
jusante da rea potencialmente contaminadora. Os pontos de amostragem ao
longo de um curso dgua devero compreender coletas feitas prximas
margem, enquanto a existncia de sedimentos permitir, j que a distribuio
123
Procedimentos
dos sedimentos pode ocorrer em bandas estreitas ao longo do canal e sob a

forma de acumulaes nos locais de baixa energia.
10.4. Amostragem de sedimentos em lagos, represas e audes
As amostragens de sedimentos em ambientes aquticos de baixa

ou de ausncia de energia normalmente so mais bem definidas, uma vez que
possvel estabelecer pontos de coleta em toda a extenso do corpo dgua,
permitindo boa representatividade da amostra. por isso mesmo que os
trabalhos de monitoramento de resduos qumicos quase sempre do respostas
mais consistentes quando envolvem ambientes aquticos pouco dinmicos.
No entanto, o nmero de amostras vai depender de vrios fatores a saber: a)
tamanho do corpo dgua; b) forma do corpo dgua e c) identificao das
fontes potencialmente poluidoras (locais/margem/lado do corpo dgua por onde
chegam os contaminantes).
10.5. Recuperao e acondicionamento das amostras
No caso dos amostradores, preciso medir a profundidade de

penetrao antes da retirada e da diviso em subamostras; antes da
subamostragem, as amostras devem decantar para permitir o depsito de
sedimentos potencialmente mobilizados; as amostras devem ser mantidas em
posio vertical at o momento de serem subamostradas. A retirada das
amostras deve ser feita o mais rpido possvel, respeitando-se o tempo de
decantao, pois h o risco da consolidao das mesmas na parede do
amostrador; a cada subamostra retirada, anotar a profundidade e descrever
cada camada sedimentar (cor, textura, etc.). Quando o tubo do amostrador
for descartvel, o mesmo ser seccionado nas profundidades desejadas.
Uma vez coletadas, as amostras devem ser acondicionadas,
preferencialmente, em sacos plsticos resistentes e encaminhadas ao
laboratrio. Eventualmente, podem ser utilizados frascos ou potes plsticos.
124
Referncias
ENVIRONMENT CANADA. Guide dchantillonnage des sdiments du Saint-

Laurente pour les projets de dragage et de gnie maritime. v. 1. Directives de
planification. Qubec: Environnement Canad. Direction de la Protection de
lEnvironnement, Rgion du Qubec. Section Innovation Technologique et
Secteurs Industriels, 2002. Rapport, 106p.
MARTIN, L.; FLEXOR, J.M.; SUGUIO, K. 1995 Vibrotestemunhador leve:

construo, utilizao e potencialidades. Revista IG, So Paulo, n. 16, p. 59-
66, 1995.
125
Procedimentos
126
Amostragem de sedimento para anlise de agrotxicos
Captulo 11
Vera Lcia Ferracini, Sonia Cludia Nascimento de Queiroz e

Sedimento uma matriz constituda por detritos de rochas e de

material orgnico, de natureza heterognea em relao s suas caractersticas
fsicas, qumicas e biolgicas. Os sedimentos funcionam como reservatrio
para numerosos poluentes que constituem um problema de sade pblica.
Devido a diversos processos, os metais e outros compostos potencialmente
poluentes, ligados ao sedimento, podem ser remobilizados e liberados para
gua causando efeitos adversos nos organismos terrestres e aquticos. Os
efluentes no tratados provenientes de atividades industriais e urbanas (uso
domstico) e de regies agrcolas so as principais fontes de contaminao de
ambientes aquticos.
Os organoclorados, como os resduos de DDT, embora tenham
sido banidos dos Estados Unidos durante os anos 70, isto , h mais de 30
anos, continuam sendo detectados em gua, sedimentos e na biota aqutica.
Alguns pases em desenvolvimento ainda utilizam essas substncias devido ao
baixo custo e versatilidade na indstria, agricultura e sade pblica. Em
conseqncia, os problemas ambientais associados contaminao nesses
pases so preocupantes pois os organoclorados entram para os ambientes
aquticos de diferentes maneiras (MORA et al., 2004).
Os organoclorados, tais como hexaclorociclohexanos (OCPs), DDT
e seus metablitos, so poucos solveis em gua, mas seus resduos podem
persistir no solo, no sedimento e nos organismos por muitos anos aps sua
aplicao. Essas substncias tendem a acumular-se na biota por serem lipoflicas
e altamente resistentes a degradao. Os OCPs tm afinidade com materiais
particulados, podendo estar presentes em sedimentos de rios ou mares. As
bifenilas policloradas (PCBs) tambm tm sido motivo de pesquisas e
127
Procedimentos
monitoramento (BHATTACHARYA et al., 2003; SAPOZHNIKOVA et al., 2004;

BAKAN & ARIMAN, 2004). Esses compostos, liberados para o meio e
depositados ao longo dos anos constituem ainda uma fonte difusa de poluio
e de contaminao do ambiente, apesar da proibio da sua produo e de
controles sobre a comercializao e a utilizao em muitos pases. Vrios
estudos indicam que os PCBs foram detectados em vrias espcies marinhas
ainda em baixas concentraes, o que serve de alerta principalmente devido
sua extrema persistncia e toxicidade e sua utilizao, ilcita ou lcita, em
muitas regies.
11.1. Amostragem
A amostragem de sedimentos a primeira vista parece simples,

mas quando so considerados os diversos fatores que podem influencia-la,
como, profundidade e velocidade de correntes, fundamental a adoo de
equipamentos apropriados. Alm disso, importante que a amostra seja
representativa. A amostragem fundamental para que os resultados das
anlises sejam vlidos.
Devido variabilidade das amostras de sedimentos, as tcnicas
de amostragem devem ser previamente avaliadas e sua escolha depende do:
a) propsito da amostragem; b) local onde ser coletado; e c) das caractersticas
do sedimento. Aps a definio do propsito que se define o plano de
amostragem.
No plano de amostragem deve ser considerada a poca do ano
em que sero feitas as coletas. Em geral, a amostragem feita em condies
de fluxo baixo no inverno e na primavera pela sua praticidade. As variaes
sazonais de depsitos de sedimentos e sua qualidade podem ocorrer devido ao
fluxo alto e a correnteza dos rios, cobertura de folhas, prticas agrcolas, tais
como aplicao de agrotxicos na agricultura ou variaes sazonais em
populaes bentnicas. As propriedades fsicas e qumicas dos sedimentos
podem ser utilizadas como ferramentas para o monitoramento de descargas
de poluentes nos rios ou lagos.
128
Sedimentos compostos de areias (0,06 -2,0 mm) e partculas

maiores so freqentemente minerais de silicatos inorgnicos estveis. Essas
partculas tm menor capacidade especfica e uma superfcie de carga eltrica
mais neutra. Este tipo de sedimento usualmente no est associado a
contaminantes e, portanto, no recomendado para anlises.
Partculas mais finas como silte e argila (<0,06 mm) tm maior
capacidade especfica e possuem maior rea superficial. Essas propriedades
tornam as partculas mais interativas com os contaminantes e so esses os
sedimentos que devem ser amostrados para anlises. Esses tipos de sedimentos
so localizados em guas calmas no fundo da rea de amostragem, nas margens,
obstrues e curvas dos rios. Para amostragem costuma-se escolher os lagos,
audes e represas. Contudo, esses locais podem apresentar inconvenientes,
principalmente para as molculas de rpida degradao devido ao da luz
solar (SAPOZHNIKOVA et al., 2004).
As amostras de determinada localidade devem ser coletadas a
distncias que variam de 20 a 200 metros da margem dependendo do corpo
de gua, no mesmo perodo de tempo, usando o mesmo equipamento e a
mesma tcnica de amostragem. Usualmente, so feitas replicatas para
determinar a variabilidade da amostra em um dado local e em um certo tempo.
No entanto, para fazer comparaes entre locais diferentes a mesma tcnica
de amostragem deve ser utilizada durante todo o estudo (OHIO
ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY, 2001).
Os procedimentos de coleta de amostras de sedimentos
superficiais e profundos so semelhantes, diferindo basicamente no cuidado
necessrio que se deve ter com as amostras destes ltimos, uma vez que
pode ocorrer alguma mistura acidental e mascarar o resultado. Entende-se
como amostragem superficial aquela cuja coleta se faz na profundidade limite
de 30cm (ex. 0-10cm; 0-15cm; 0-20cm; 0-30cm).
Essas amostragens podem ser classificadas quanto localizao
em: a) pontuais e b) no-pontuais. As amostragens pontuais so aquelas
realizadas em torno do equipamento, enquanto que as no-pontuais so aquelas
realizadas por meio do arraste do equipamento de coleta no fundo do leito
(FIGUEIREDO JR. & BREHME, 2000). Por outro lado, as amostragens quanto
129
Procedimentos
ao nmero podem ser classificadas em: a) individuais e b) coletivas, dependendo

para o fim a que se destinam.
Nos frascos que contm as amostras devem ser coladas etiquetas
que contemplem informaes como, data e hora da coleta, local com latitude
e longitude, profundidade da gua, tempo, equipamento utilizado, descrio
fsica da amostra como cor, textura, odor, nome do coletor, entre outros,
para facilitar o rastreamento posteriori (OHIO ENVIRONMENTAL PROTECTION
AGENCY, 2001). As etiquetas devem acompanhar as amostras em todos os
momentos, durante qualquer etapa de anlise, armazenamento e transporte.
Todas essas informaes devem estar contidas em uma ficha
(Fig. 1) a ser preenchida no momento da coleta para facilitar o processamento
dos dados e esclarecer dvidas futuras caso existam.
necessria coleta de uma amostra testemunha que represente
as condies primrias do ambiente ou local, com iseno quanto presena
de supostos compostos ou elementos qumicos introduzidos por meio de
atividades antrpicas. Isso significa coletas bem distantes das reas submetidas
ao uso de poluentes, visando sua representatividade como amostra testemunha
ou padro. Alm disso, a amostra testemunha deve ser coletada em local
onde a deposio de sedimentos e o fluxo energtico da gua sejam similares
quele no qual se quer retirar as amostras do estudo em questo. Isso significa
que as amostras testemunhas devem ter granulao similar aos sedimentos
dos locais de coleta.
Fig. 1. Exemplo de um formulrio de

informaes sobre a amostragem.
130
11.2. Equipamentos de Amostragem
importante ressaltar que os coletores devem ser de ao

inoxidvel, sendo o manuseio das amostras feito por meio do uso de luvas de
polietileno, a fim de se evitar possveis contaminaes. O equipamento de
amostragem (coletor) deve estar limpo antes do uso e aps cada coleta com o
intuito de se evitar problemas relacionados contaminao ou mistura de
amostras de diferentes profundidades, conforme os procedimentos a seguir:
1. Lavar o equipamento com soluo de detergente e enxaguar
com gua;
2. Lavar com soluo aquosa de HCl 1% e enxaguar com metanol;
3. Finalizada a limpeza, passar gua deionizada e deixar secar ao
ar;
4. Embrulhar todo o material com papel alumnio e conservar at
sua utilizao no campo (RMP Field Manual, 1999).
Outro aspecto importante a limpeza dos recipientes nos quais
sero colocadas as amostras, que deve feita com soluo detergente contendo
HCl 1%, seguida de metanol e, por ltimo, com enxge em gua deionizada
(RMP Field Manual, 1999).
Geralmente so utilizados dois tipos de amostradores para a coleta
dos sedimentos:
(1)Amostradores de garra para coletar os sedimentos de
superfcie, quefornecem o material para a determinao da distribuio
horizontal das variveis. Este tipo de amostrador de fcil utilizao e como
a amostra obtida grande, possibilita a avaliao das entradas recentes de
poluentes;
(2)Amostradores de ncleo, para a coleta de um perfil dos
sedimentos em profundidade, fornecem material para a determinao da
distribuio vertical das variveis analisadas. Esses amostradores so utilizados
para registrar a entrada (histrico) de material ao longo do tempo. O tipo de
amostrador a ser utilizado variar de acordo com a finalidade do estudo e ser
definido pelo projeto. Para maiores informaes podero ser consultadas as
seguintes referncias: Ohio Environmental Protection Agency (2001); Plumb
131
Procedimentos
Jr.(1981), Burton & Landrum (1990), Mudroch & MacKnight (1994), Mudroch
& Azcue (1995), Figueiredo Jr. & Brehme (2000).
11.2.1. Amostradores de Garra
Os modelos de amostradores de garra usados geralmente so os

de Ekman e de Ponar, que permitem que a gua flua livremente atravs do
dispositivo durante a descida, reduzindo assim o distrbio do sedimento causado
pela onda na frente do amostrador. Estes amostradores so fceis de usar e
conseguem volumes relativamente grandes do sedimento, porm partculas
de superfcie fina podem ser carregadas pela correnteza da gua.
O tamanho da Garra de Ekman utilizado normalmente de 15 x
15 cm e de ao inoxidvel. Este tipo apropriado para coletar sedimentos que
contenham silte e gros de areia. As partculas maiores como o cascalho e
objetos como fragmentos de madeira, prejudicam a coleta, resultando na perda
do material da amostra.
A Garra de Ponar consiste em um par de maxilas, mantidas
abertas por uma barra do prendedor. A parcela superior das maxilas coberta
com uma tela que permite que a gua flua livremente durante a sua descida
at o sedimento, reduzindo conseqentemente a onda de choque que precede
o amostrador. Este tipo apropriado para coletar partculas pequenas.
11.2.2. Amostradores de Ncleo
Os amostradores de ncleo penetram no sedimento mais

profundamente do que os de garra. Conseqentemente, coletam uma fatia de
seo transversal de camadas dos materiais, fornecendo deste modo
informaes sobre a dinmica de deposio do sedimento. Este tipo de
amostrador consiste em um tubo que penetra no sedimento pela queda livre a
partir de uma altura suficiente.
Embora os amostradores previamente mencionados possam ser
usados com a finalidade de determinar a distribuio completa de partculas,
eles no so instrumentos ideais. Muito dos sedimentos finos so perdidos em
132
conseqncia da onda da presso que precede estes amostradores. Os

amostradores vibratrios evitam grandes perdas de sedimentos j que no
so introduzidos em queda livre. Para maiores detalhes sobre este tipo de
coletor consultar os captulo 10 e 13.
11.3. Transporte das amostras
A logstica de transporte das amostras deve ser cuidadosamente

definida para evitar problemas de conservao.
Dependendo da distncia entre a rea de coleta e o laboratrio, a
amostra deve ser refrigerada o mais rapidamente possvel. O transporte,
portanto deve ser realizado em caixas de isopor e deve ser acompanhado do
emprego de gelo seco ou em gel. No laboratrio, as amostras devem ser
aramazenadas em freezer ou cmaras frias numa temperatura de cerca de
-18 C e em condies de ausncia de luz. As amostras, uma vez congeladas,
devem ser mantidas nesta condio at o momento da anlise. Sucessivas
etapas de congelamento e descongelamento das amostras podem resultar em
degradao no desejada.
11.4. Consideraes Finais
A amostragem de sedimentos envolve desafios e quando realizada

com sucesso permite que vrios parmetros da amostra sejam analisados com
detalhes. Contudo fundamental que o equipamento de amostragem seja
apropriado para o tipo de sedimento e anlise que se pretende realizar. Alm
disso, as amostras sob investigao devem ser representativas.
133
Procedimentos
Referncias
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v.48, p. 10311039, 2004.
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BURTON JR., G. A.; LANDRUM, P. F. ASTM standard guide for collection,

storage, characterization, and manipulation of sediments for toxicological
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PLUMB Jr., R. H. Procedure for the handling and chemical analysis of sediment
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Dredged and Fill Material. Vickburg: U.S. Engineer Waterways Experiment
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134
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sediments and from the Salton Sea, California, USA. Chemosphere,v.55, p.
797809,2004.
135
Procedimentos
136
Amostragem de sedimentos do fundo de lagos, represas e viveiros de
aquicultura para anlise fsico qumicas
Captulo 12
Amostragem de sedimentos do fundo de lagos,

represas e viveiros de aquicultura para
anlise fsico qumicas
Jlio Ferraz de Queiroz, Rita Carla Boeira e

Mariana Pinheiro Silveira
A interao entre a gua e os sedimentos do fundo dos lagos,

das represas e dos viveiros de aqicultura no deve ser ignorada, porque o
manejo inadequado da gua e dos sedimentos pode prejudicar a biodiversidade
desses locais e tambm a sobrevivncia e o crescimento dos organismos
aquticos. A amostragem correta dos sedimentos do fundo dos lagos e dos
viveiros para a determinao de parmetros fsico-qumicos fundamental
para assegurar uma anlise adequada, cujo objetivo avaliar, no s a
qualidade dos sedimentos, como tambm, identificar alternativas para
otimizar a preservao e o manejo dos lagos e represas e, no caso de viveiros
de aquicultura, ainda permitir a elevao dos ndices de produtividade e
rentabilidade, alm de possibilitar a indicao de procedimentos de manejo
mais efetivos. Geralmente, a maioria das anlises de sedimentos pode ser
feita sem problemas nos laboratrios de solo, porm preciso ter
conhecimento de como coletar e preparar essas amostras, antes de envi-
las para os respectivos laboratrios. Nesse sentido, vrios fatores devem
ser levados em considerao para realizar uma coleta adequada permitindo
a obteno de resultados significativos que expressem a situao real das
condies dos sedimentos do fundo dos lagos e dos viveiros de aqicultura
(BOYD, 1995).
A coleta de amostras uma etapa crtica do procedimento e
deve ser executada adequadamente para que se possa obter uma
representao confivel das condies do sedimento do fundo dos lagos e dos
viveiros. Dessa forma, preciso estabelecer mtodos prticos e seguros para
137
Procedimentos
o uso correto dos equipamentos para coleta e processamento das amostras.

A anlise correta dos sedimentos indicar quais so as influncias dos fluxos
das substncias encontradas na coluna d gua sobre os sedimentos, e quais
so os impactos ambientais causados pela atividade, relacionados com a eroso
dos prprios lagos, represas e viveiros, e com as altas concentraes de slidos
em suspenso na coluna dgua.
A caracterizao dos sedimentos tambm importante para
ilustrar a relao entre a espessura dos sedimentos do fundo dos lagos, de
represas e dos viveiros e a reatividade da matria orgnica. Essas informaes
so indispensveis para indicar procedimentos de gesto e monitoramento
dos lagos e dos reservatrios, e tambm fazer recomendaes quanto
localizao, construo e manejo dos viveiros de aqicultura. A
caracterizao dos sedimentos reflete exatamente as condies reais dos
lagos e dos viveiros de produo de peixes e camares com relao
composio dos efluentes e dos sedimentos, evidenciando quais so as
oportunidades existentes nesses locais para a adoo de Boas Prticas de
Manejo (BPM).
Alm disso, a coleta adequada deve permitir a obteno de
resultados que expressem a situao real das condies dos sedimentos do
fundo dos lagos, das represas e dos viveiros de aqicultura. Para isso, devem
ser considerados os seguintes fatores: tipo de equipamento utilizado para
coleta, local de coleta das amostras, espessura das camadas de sedimento
das amostras, nmero de amostras por local (lago, represa ou viveiros),
hora da coleta, tcnica utilizada para secagem das amostras, mtodo de
triturao das amostras, e forma de acondicionamento e armazenamento
das amostras.
Neste captulo, descreve-se de uma maneira simplificada a
metodologia proposta por Boyd (1995) para coleta de amostras de sedimento
do fundo de lagos, represas e viveiros de aqicultura, e tambm da utilizao
do coletor simplificado, visando a sua aplicao prtica nos trabalhos de
pesquisa realizados no Brasil sobre qualidade da gua e dos sedimentos dos
lagos, das represas e dos viveiros de aqicultura.
138
12.1.Tipos de coletores para sedimentos
De maneira geral, a coleta de sedimentos do fundo dos corpos de

gua pode ser feita com dragas de vrias dimenses e caractersticas, sendo
que as mais comuns so a draga de Ekman e a draga de Petersen. Dentre elas,
a draga de Ekman a mais leve, alguns modelos pesam menos de 1,0 kg, e
por esse motivo que ela mais indicada para a coleta de amostras de sedimentos
de lagos, represas e viveiros, cujo fundo menos compacto e mais macio. A
draga de Ekman no foi projetada para penetrar no fundo de locais constitudos
de material mais compacto, duro e com grande quantidade de argila, e alm
disso, essa draga no deve ser utilizada em locais onde existam muitos
fragmentos de rocha, galhos e razes de plantas, os quais impedem o seu
fechamento completo. Para esse tipo de amostragem deve-se utilizar a draga
de Petersen, a qual foi projetada para coletar amostras em local onde o fundo
duro e compacto. A draga de Petersen construda em ao, e muito
pesada (alguns modelos pesam mais de 50 kg), sendo que devido ao seu peso
elevado, ela penetra no solo compactado cortando a amostra desejada.
Entretanto, esta draga s pode ser utilizada se estiver fixa a um barco e
acoplada a um guincho; conseqentemente, a draga de Petersen raramente
utilizada para coletar amostras de sedimento do fundo de viveiros de aqicultura
(BOYD, 1995).
Embora as dragas permitam coletar amostras com um volume
conhecido, o qual pr-determinado em funo do seu respectivo tamanho,
elas no so muito indicadas para coletar sedimentos do fundo de lagos pequenos
e dos viveiros de aqicultura, porque no permitem regular a espessura da
camada da amostra que se pretende coletar. Alm disso, a quantidade de
sedimento coletado pelas dragas depende diretamente da compactao dos
sedimentos.
Para contornar as dificuldades encontradas para obteno de
amostras de sedimentos do fundo de lagos e dos viveiros de aqicultura com
o uso de dragas, foram projetados vrios tipos de coletores que permitem
obter amostras relativamente no perturbadas e consolidadas de sedimentos
nos mais diversos locais, como por exemplo, no fundo de lagos e reservatrios,
crregos, canais e viveiros de aqicultura. Em geral esse tipo de coletor,
139
Procedimentos
denominado core sampler, constitudo de um tubo de PVC transparente com

5 cm de dimetro e aproximadamente 1,5 m de comprimento, e fica inserido
no interior de um tubo de metal de maiores dimenses, conforme descrio de
Boyd (1995).
Esse equipamento possibilita coletar amostras de sedimentos de
uma rea conhecida, em solos compactados e duros. A amostra pode ser
dividida em vrias sub-amostras de camadas uniformes e de mesma espessura,
de acordo com as vrias profundidades. A maioria dos coletores do tipo core
sampler constitudo dos seguintes componentes (Fig. 1A): 1) parte superior
que se resume em apoio para as mos para auxiliar o manuseio durante as
coletas feitas em reas rasas. Para as coletas feitas em reas mais profundas,
a parte superior do coletor mais complexa, porque contm uma vlvula para
sada de gua e um encaixe para acoplar uma extenso; 2) tubo de metal -
normalmente feito de ao inox, e serve como um invlucro do tubo de PVC; e
3) tubo de PVC transparente, normalmente com 5 cm de dimetro e 1,5 m de
comprimento.
O coletor tipo core sampler completo, descrito acima, pode ser
perfeitamente substitudo pelo coletor simplificado (Fig. 1B). Para isso, basta
eliminar alguns componentes do coletor completo, tais como: a) parte superior
apoio para as mos, vlvula para sada de gua, e encaixe para acoplar a
extenso; e b) tubo de metal tubo de ao inox no qual inserido o tubo de
PVC. Conseqentemente, o coletor simplificado constitudo apenas pelo tubo
de PVC e por duas tampas plsticas que se adaptam perfeitamente s
extremidades do tubo. A validao do uso do coletor simplificado j pde ser
comprovada em inmeros trabalhos realizados no exterior e no Brasil (BOYD,
1995; MUNSIRI et al., 1995; BOYD & BOWMAN, 1997; BOYD & TUCKER,
1998; BOYD et al., 1998 e 1999 e THUNJAI et al., 2001).
140
Fig. 1. Representao esquemtica de: (A) coletor tipo core sampler de acordo com
Boyd (1995) e (B) coletor simplificado.
O coletor simplificado mais simples, mais barato e mais leve do

que o coletor completo, porque dispensa a aquisio e o uso dos componentes
de ao inox, que constituem a parte superior e o tubo de metal, no qual deve
ser inserido o tubo de PVC. Alm disso, a utilizao do coletor simplificado
facilita e agiliza o trabalho metodolgico de amostragem de sedimentos em
viveiros, geralmente pouco profundos, por meio da realizao de coletas em
sries sucessivas. Esta forma de amostragem invivel com o coletor completo
devido ao seu peso e complexidade de manuseio; alm disso, no seria possvel
dispor de vrios coletores completos simultaneamente, em funo do seu alto
custo e da dificuldade de seu manuseio no momento da coleta.
141
Procedimentos
12.2. Local de amostragem
De modo geral, o fundo dos lagos, represas e dos viveiros de

aqicultura no apresenta uniformidade na espessura da camada de sedimentos,
na textura ou na composio qumica (Figs. 2 e 3).
Fig. 2. Representao esquemtica do perfil de uma amostra consolidada de solo

de um viveiro de aquicultura (Boyd, 1995)
142
Fig. 3. Sistema proposto para denominao das camadas do perfil dos sedimentos
dos viveiros de aquicultura (Boyd, 1995)
Normalmente, a espessura da camada de sedimentos aumenta das

reas mais rasas para as reas mais profundas, e a textura dos sedimentos
mais fina nas reas mais profundas do que nas reas mais rasas, sendo que
algumas propriedades do sedimento, como por exemplo, teor de matria orgnica,
capacidade de troca de ctions e teor de nitrognio orgnico, freqentemente
apresentam concentraes mais elevadas em direo ao centro dos lagos e dos
viveiros. Alm disso, me smo ao redor de uma rea com a mesma profundidade,
algumas propriedades do sedimento exibem variaes aleatrias entre pontos
diferentes, sendo que essas propriedades tambm podem variar de acordo com a
espessura da camada dos sedimentos coletados.
143
Procedimentos
12.3. Metodologias de amostragem
O objetivo do trabalho de caracterizao dos sedimentos do fundo

dos lagos, represas e dos viveiros, deve ser considerado para a escolha do
mtodo adequado de coleta das amostras. Se o objetivo for determinar qual
a influncia da coluna dgua sobre as propriedades do sedimento de fundo,
as amostras devem ser coletadas ao longo de linhas imaginrias (transeo ou
transecto) (Fig. 4). Assegura-se, assim, que as amostras sejam coletadas ao
longo de toda a extenso dos lagos e dos viveiros, e em pontos nos quais a
estrutura do sedimento do fundo no foi alterada anteriormente pela passagem
da pessoa que est realizando a coleta.
As coletas devem ser feitas a partir das reas mais rasas em
direo s reas mais profundas, ou seja, das bordas em direo ao centro
dos corpos dgua. Portanto, em cada um dos locais selecionados as amostras
devem ser coletadas em pontos distintos que podem variar em nmero de 5 a
10 dependendo da rea do lago, da represa ou e do viveiro, observando-se
constantemente o mesmo espaamento entre os distintos pontos de coleta,
por exemplo, a cada 5 metros de distncia entre eles.
necessrio que, em todos os pontos ao longo da transeo ou
transecto, as amostras coletadas tenham a mesma espessura, eliminando-se,
com este procedimento, a variabilidade devida aos diferentes perfis
sedimentares.
Fig. 4. Representao esquemtica dos transectos (linhas imaginrias) para

coleta de sedimentos em um viveiro de aquicultura (Itupeva, SP, Foto: Julio F.
Queiroz).
144
Por outro lado, se o objetivo do trabalho for somente obteno

de uma mdia dos parmetros fsico-qumicos do sedimento de um determinado
corpo de gua, vrias amostras podem ser coletadas em diferentes pontos do
fundo que devem ser selecionados aleatoriamente. Para isso, as amostragens
freqentemente mais recomendadas so aquelas feitas de acordo com um
padro em forma de S, sendo que os pontos de coleta ao longo desse padro
tambm podero ser selecionados aleatoriamente (Fig. 5). Normalmente,
um sistema com nove quadrantes o mais utilizado para amostrar solos
para estudos agronmicos, sendo que esse sistema tambm adequado
para aplicao em lagos, represas e em viveiros de aqicultura.
Finalmente, o ponto de coleta em cada um dos quadrantes tambm
dever ser selecionado aleatoriamente (Fig. 5). Como mencionado
anteriormente, as amostras devero ser coletadas com a mesma
espessura (BOYD, 1995).
Um estudo realizado por Munsiri et al. (1996) sobre a variabilidade
das concentraes de carbono orgnico, no sedimento de viveiros de 1.000
m2, em Honduras, sugeriu que preciso realizar uma amostragem intensiva
para detectarem-se as diferenas dessa varivel entre os tratamentos. A
concluso desse trabalho indicou que para detectar uma alterao de 0,2% a
0,3% na concentrao de carbono no sedimento, so necessrios no mnimo
trs viveiros por tratamento e oito amostras por viveiro.
Na prtica, para efetuar um manejo adequado dos lagos, represas
e dos viveiros de aqicultura, no necessrio obter estimativas da variao
entre as amostras de sedimentos, entretanto, necessrio obter amostras
representativas e confiveis. Em lugar de analisar todas as amostras, para
obter a mdia da concentrao de uma determinada varivel, pode-se juntar e
misturar completamente volumes ou pesos iguais de cada uma das amostras,
a fim de obter uma amostra composta para anlise. Dessa forma, a anlise da
amostra composta ir fornecer uma mdia da concentrao das variveis
fsico-qumicas do sedimento.
145
Procedimentos
Fig. 5. Representao esquemtica dos quadrantes (A) e do padro em forma de

S (B) para coleta de sedimentos em um viveiro de aquicultura. (Itupeva, SP,
Foto: Julio F. Queiroz).
Devido variao resultante encontrada em reas com

profundidades diferentes nos lagos, represas e viveiros, e tambm das variaes
que normalmente ocorrem em funo da localizao e da espessura da camada
de sedimentos coletados, fundamental incluir pelo menos 10 a 12 amostras,
ou mais, que devem ser coletadas aleatoriamente, para compor a amostra
composta. Normalmente, a espessura da camada das amostras de sedimento
do fundo dos viveiros deve ter pelo menos 20 cm.
Na falta de equipamentos especficos, possvel coletar amostras
de sedimento do fundo dos lagos e dos viveiros de aqicultura com qualquer
lata vazia presa na ponta de um basto de madeira. As amostras de sedimento
dos locais mais rasos e mais prximos das bordas dos lagos e dos viveiros
podem ser coletadas pela escavao manual da superfcie com uma p, ou
ento, pode-se inserir um tubo, ou outro artefato semelhante diretamente no
fundo do lago ou do viveiro. Para os locais mais afastados da borda necessrio
andar ou nadar at alcanar o local desejado para se efetuar a coleta.
Quando os lagos ou os viveiros estiverem vazios, entre um ciclo
de cultivo e outro, possvel coletar o sedimento ainda mido e macio com
uma p pequena de jardim, ou com tubos que podem ser pressionados
diretamente sobre a superfcie do sedimento. No entanto, depois que o
sedimento do fundo desses locais secar e endurecer, aps longos perodos de
exposio ao sol, necessrio usar uma p ou um trado para coletar as
amostras. Esta forma de coleta, no entanto, no permite uma caracterizao
146
apropriada da profundidade da camada amostrada, ou a obteno de amostras

relativamente no perturbadas.
Aps a coleta, as amostras de sedimento devem ser segmentadas
com 2,0 cm de espessura, guardadas, em latas de alumnio, ou sacos plsticos,
etiquetados de acordo com a data de coleta, local de amostragem, e
profundidade da amostra que foi segmentada.
12.3.1. Procedimento de coleta com o coletor simplificado
De modo geral, os lagos, no Brasil, e os viveiros de aqicultura

no so profundos e o coletor simplificado constitudo apenas por um tubo de
PVC, pode ser utilizado sem problemas. O procedimento para a coleta simples,
e se resume nas etapas seguintes:
inserir os tubos de PVC no sedimento do fundo dos lagos e dos
viveiros at a profundidade desejada (utilizar uma pequena prancha de madeira
apoiada na borda superior do tubo de PVC, e exercer uma presso
suficientemente forte com a ajuda do peso do prprio corpo, a fim de que o
tubo de PVC penetre no fundo do lago ou do viveiro) (Fig. 6A);
preencher a parte superior do tubo de PVC com gua do prprio
local, e tampar a sua extremidade superior (utilizar as tampas de plstico
prprias para essa finalidade);
retirar o tubo de PVC do fundo do lago ou do viveiro (fazer uma
srie de movimentos circulares para desprender o tubo de PVC da argila do
fundo), tampar a extremidade inferior do tubo e transportar os tubos, na
vertical, com as amostras de sedimento para a borda dos corpos de gua (Fig.
6B);
sifonar a gua situada logo acima da camada de sedimentos
contida no interior dos tubos de PVC, retirar a tampa da parte inferior do
tubo, posicionar o mbolo de metal na parte inferior do tubo e exercer uma
presso ascendente no sentido vertical para coletar os primeiros centmetros
da amostra consolidada de sedimento (camada oxidada aerbica) (Fig. 7A e
7B);
147
Procedimentos
utilizar um anel com o mesmo dimetro do tubo de PVC (5,0

cm), e com 2,0 cm de altura para permitir a retirada da amostra de sedimento,
tomando sempre o cuidado para que a amostra seja prensada para fora do
interior do tubo corretamente, de modo a evitar a perda de material das
primeiras camadas que sero segmentadas, em funo do seu elevado contedo
de gua (Fig. 7C);
remover totalmente a amostra de sedimento com o anel
colocado sobre a extremidade superior do tubo de PVC, empurrando a amostra
de sedimento para cima com o mbolo, at que o topo da amostra fique nivelado
com a borda superior do anel, de modo a permitir a segmentao da amostra
de sedimento com uma esptula larga, inserida entre a borda inferior do anel
e a parte superior do tubo de PVC
em seguida essas amostras devem ser preparadas (secagem,
triturao e peneirao) de acordo com os procedimentos descritos por Boyd
(1995). Os sedimentos devem ser secos, logo em seguida coleta, para
interromper a atividade microbiana.
Fig. 6. Representao esquemtica das etapas iniciais do procedimento de coleta

com o coletor simplificado: (A) tubo de PVC inserido no fundo do viveiro; (B) tubo
de PVC contendo a amostra dos sedimentos, preenchido com gua do viveiro e
com tampas plsticas colocadas nas duas extremidades.
148
Fig. 7. Representao esquemtica das etapas finais do procedimento de coleta

com o coletor simplificado: (A) retirada da gua do coletor e da tampa inferior; (B)
utilizao do mbolo de ao para deslocar a amostra de sedimento para cima; (C)
utilizao do anel de PVC para segmentar a amostra de 2 em 2cm e (D) anel de
PVC contendo a amostra aps a segmentao com a esptula.
149
Procedimentos
12.3.1.1. Amostragem de sedimentos em sries sucessivas com a utilizao

do coletor simplificado
Para efetuar as coletas de sedimentos em sries sucessivas basta

apenas possuir uma quantidade suficiente de tubos de PVC (no mnimo 20
unidades) e tambm vrias tampas de plstico (pelo menos 50 unidades). Para
isso, basta entrar nos lagos ou nos viveiros carregando os vrios tubos de
PVC, e inserir os mesmos no fundo dos lagos ou dos viveiros de acordo com os
pontos de coleta pr-selecionados.
A metodologia de coleta de amostras de sedimentos do fundo
dos lagos ou dos viveiros com o coletor simplificado mais rpida, e menos
cansativa, do que a coleta realizada com o coletor tipo core sampler, porque
no preciso manusear os pesados componentes de metal do coletor completo
dentro dos lagos ou dos viveiros. Ressaltam-se, assim, as vantagens da presente
metodologia de coleta em sries sucessivas, com o coletor simplificado.
Referncias
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and Hall, 1995. 347p.
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151
Procedimentos
152
Amostragem de sedimentos para anlises biolgicas
Captulo 13
Mariana Pinheiro Silveira, Jlio Ferraz de Queiroz e

Rita Carla Boeira
13.1. Macroinvertebrados bentnicos
13.1.1. Habitat e vantagens de uso
Os macroinvertebrados bentnicos so animais cosmopolitas cujo

habitat natural o leito dos rios, e fundo dos lagos e lagoas. A comunidade de
macroinvertebrados boa indicadora de condies locais. Devido sua natureza
relativamente sssil e padro limitado de migrao, so bastante adequados
para a avaliao de impactos locais especficos. Tambm so caracterizados
por apresentar uma grande biodiversidade, respondendo a diversos tipos de
poluentes e fatores estressantes ambientais. Uma grande vantagem da
utilizao desses organismos o fato de que para sua coleta necessita-se de
aparato tcnico simples e barato, propiciando respostas rpidas e conclusivas
sobre a qualidade da gua avaliada.
13.1.2. Coleta e amostragem
A escolha do coletor utilizado na amostragem de

macroinvertebrados bentnicos em programas de avaliao biolgica de
ambientes aquticos depende principalmente dos objetivos do programa de
amostragem. A partir do estabelecimento desses objetivos, deve-se decidir o
nmero e a localizao das estaes de amostragem, a comunidade ou
organismos que sero utilizados na avaliao e a periodicidade da amostragem,
dentre outros fatores.
153
Procedimentos
A amostra coletada em rios deve ser representativa do trecho

que est sendo avaliado. Em geral, toma-se como base da rea amostral um
trecho de 100m, contando-se no campo visual do coletor 50m a montante e
50m a jusante. O coletor deve se posicionar na regio central do leito do rio
(no caso de riachos, ou rios de pouca profundidade). O tipo de amostra coletada
em um rio varia de acordo com alguns parmetros fisiogrficos do mesmo,
tais como: profundidade, velocidade da correnteza, largura (j descrito no
captulo 7), e natureza do substrato do fundo do leito. Portanto, dependendo
das condies encontradas no ambiente de estudo, deve-se selecionar um
coletor apropriado.
No caso de lagos, lagoas, represas, e grandes rios, a coleta poder
variar conforme a natureza do corpo hdrico. Nos lagos e lagoas, a coleta
feita na rea litornea (nas margens) e na rea pelgica (central). Em grandes
reservatrios, geralmente a coleta feita em braos e na sua regio central,
em reas prximas ao vertedouro, na regio mais profunda, ou em pontos
distribudos ao longo do eixo principal e prximo desembocadura do(s) rio(s)
formador(es). J em pequenos reservatrios, geralmente se amostra na regio
mais profunda, junto ao vertedouro ou nas reas central e litornea. Em lagoas
costeiras, as reas coletadas costumam ser aquelas proximais ou distais em
relao ao encontro com o mar e a proximidade de afluentes.
No caso de lagos, lagoas, represas, e grandes rios, a coleta
poder variar conforme a natureza do corpo hdrico. Nos lagos e lagoas, a
coleta feita na rea litornea (nas margens) e na rea pelgica (central). Em
grandes reservatrios, geralmente a coleta feita em braos e na sua regio
central, em reas prximas ao vertedouro, na regio mais profunda, ou em
pontos distribudos ao longo do eixo principal e prximo desembocadura
do(s) rio(s) formador(es). J em pequenos reservatrios, geralmente se amostra
na regio mais profunda, junto ao vertedouro ou nas reas central e litornea.
Em lagoas costeiras, as reas coletadas costumam ser aquelas proximais ou
distais em relao ao encontro com o mar e a proximidade de afluentes.
Para o uso do Surber, do Hess e do pu, o coletor deve ser
posicionado contra a correnteza, e o sedimento deve ser arrastado para dentro
da rede coletora. O mtodo de coleta do amostrador Hess igual ao do Surber.
154
J a rede de deriva deve ser posicionada contra a correnteza, e fixada nas

margens; aps um intervalo de tempo definido, todo o material que ficar retido
na rede dever ser retirado e guardado.
Para ambientes lnticos ou de guas paradas, como rios de grande
porte, lagos e represas, em geral utiliza-se a Draga de Eckman-Birge, a Draga
de Petersen e a Draga Petit-Ponar (Fig. 2). A amostra coletada de natureza
quantitativa. O sedimento coletado por estes equipamentos em geral lodoso
(Dragas Petersen e Eckman-Birge) ou arenoso (Draga Petit-Ponar), e s vezes
bem compactado, exigindo uma escavao por parte do coletor. O
processamento da amostra de invertebrados bentnicos encontrados em lagos
ou rios com pouca correnteza determinar o tipo de coletor a ser usado em
um local particular. Este, por sua vez, depender das condies locais e do
objetivo do estudo. O equipamento usado ser escolhido de acordo com o
desenho experimental.
Em caso de rios ou lagos com grande profundidade e de difcil
acesso, podem ser utilizados substratos artificiais. Estes consistem em cestos
de material no-biodegradvel, preenchidos de preferncia com substrato
natural originrio do prprio local (na maioria das vezes composto por pequenas
pedras ou folhas de macrfitas). H trs tipos principais de substrato artificial:
saco de nylon com material natural (pedras ou folhas), mltiplas lminas e
cestos de espera (Fig. 3). Em ambos os casos, so utilizadas cordas presas s
margens ou amarra-se o substrato artificial em cordas com pesos no fundo,
para fixao do coletor. Ento, este material deixado durante algum tempo
no ambiente, e retirado periodicamente, para verificao da fauna colonizadora.
A vantagem deste mtodo que ele permite acompanhar a
evoluo da colonizao por parte da biota aqutica em seus diferentes estgios
de sucesso. As maiores desvantagens so que o substrato artificial no deixa
de ser uma coleta seletiva, pois exclui alguns organismos que no conseguem
coloniz-lo, e o coletor (no caso o substrato artificial) fica sujeito ao vandalismo,
quando so rasgados ou retirados, prejudicando o experimento.
155
Procedimentos
Fig. 1. Amostradores para ambiente Fig. 2. Amostradores para ambiente

ltico (com correnteza). lntico (guas paradas).
13.1.3. Processamento de amostras
Aps a coleta, o substrato (tanto natural como artificial) deve

ser acondicionado em sacos plsticos preferencialmente com as seguintes
dimenses: 50 cm x 80 cm (largura x comprimento) e 0,12 cm de espessura.
O material coletado pode ser conservado com gua do prprio local, e no
menor tempo possvel, deve ser levado para o laboratrio. Quando isto no
possvel, a amostra pode ser fixada em etanol a 70% ou em soluo de
formaldedo a 4%.
156
Fig. 3. Amostradores de substratos artificiais. A Saco com pedras; B Cesto

de metal; C Placas mltiplas.
As etiquetas de identificao das amostras de substratos devero

ser confeccionadas com papel-vegetal ou papel-manteiga (resistente gua,
lcool e abraso) e identificadas com lpis ou lapiseira, pois o trabalho com
gua impede o uso de canetas esferogrficas, cuja tinta pode borrar ou
manchar. O tamanho da etiqueta dever ser aproximadamente de 2,5 cm x
5,0 cm.
A etiqueta dever conter os seguintes dados: ponto de coleta;
tipo de substrato amostrado com a identificao de sua pseudo-rplica (A, B
ou C) e data. Para que a etiqueta seja facilmente encontrada dentro do saco
plstico, sugere-se que sejam colocadas dentro de pequenos frascos plsticos
transparentes com tampa (3,0 ml), e s ento colocadas nos sacos.
Exemplo de etiqueta:
- Ponto de coleta Rio Maca 1 (M1)
- Tipo de Substrato: Folhio de Correnteza A (FCA)
- Data: Fevereiro de 2003 (02/2003)
157
Procedimentos
13.2. Fungos aquticos
13.2.1. Distribuio e importncia
A micota aqutica composta principalmente por fungos

zoospricos, hifomicetos aquticos (principalmente em substratos submersos),
alguns representantes de basidiomicetos, ascomicetos, alguns fungos de origem
terrestre e leveduras, os quais so abundantes em guas poludas (SCHOELEIN-
CRUSIUS et al., 2004).
Os fungos desempenham papis importantes no ambiente
aqutico, atuando na decomposio de substratos orgnicos (protenas,
celulose, lignina, quitina, queratina, etc.); na quebra de molculas orgnicas
para consumo por organismos detritvoros e contribuindo para o acmulo e
liberao de nutrientes para o ambiente. Outros agem na absoro e
degradao de poluentes orgnicos, inorgnicos e recalcitrantes, agindo como
depuradores de gua.
Para cada tipo de fungo aqutico tpico, ou seja, de levedura,

fungo zoosprico e hifomiceto aqutico, h tcnicas distintas de coleta e
isolamento. Cada grupo taxonmico possui limitaes inerentes ao ambiente
e ao substrato onde se desenvolvem. Pode-se considerar que a diversidade da
micota aqutica resultante do esforo de coleta de diversos tipos de
substratos, em diferentes ambientes, por determinado perodo de tempo,
associados a mtodos de isolamento diversificados. Para pesquisar a diversidade
de hifomicetos aquticos, geralmente so coletadas amostras de substratos
vegetais, como folhedo e ramos submersos (INGOLD, 1942).
Segundo Schoelein-Crusius e colaboradores (2004), de acordo
com a literatura existente, a representatividade da amostragem para estudo
dos fungos, depende muito mais dos mtodos de observao, de isolamento e
de iscagem a que unidades amostrais so submetidas, do que ao nmero de
amostras, nmero de locais coletados ou periodicidade das coletas. A realizao
158
de ensaios preliminares de fundamental importncia, pois auxilia na avaliao

da eficincia do mtodo de amostragem a ser utilizado, possibilitando as
modificaes necessrias para o desenvolvimento do experimento.
Fungos zoospricos possuem unidades de disperso (zosporos)
e so especialmente adaptados para a vida aqutica, capazes de se
locomoverem procura de fontes de nutrientes e stios de colonizao. Em
razo da mobilidade desses fungos e de seu ciclo de vida efmero, coletam-se
amostras de gua, sedimento e substratos orgnicos, s quais so
acrescentadas iscas celulsicas (celofane, palha de milho), quitinosas (esqueleto
de camaro), queratinosas (pele de cobra), alm de sementes (sorgo ou
cnhamo) e gros de plen, promovendo-se assim, isolamento de maior nmero
de txons. Uma vez colonizadas as iscas, estas so separadas e colocadas em
contato com novos substratos (SCHOELEIN-CRUSIUS et al., 2004).
Os cuidados com a amostragem devem ser redobrados em
sistemas aquticos poludos (COOKE, 1976), onde a proliferao de
geofungos e leveduras pode superar ou at suprimir a presena de outros
tipos de fungos. Os geofungos so de origem terrestre e podem ser carreados
para o ambiente aqutico por meio de ventos, assoreamentos, substratos
orgnicos alctones, etc. Eles utilizam os sistemas aquticos como local de
fixao e disperso.
13.2.3. Processamento de amostras
As amostras iscadas com diferentes tipos de substratos

devem, aps a coleta em campo, ser analisadas num perodo de
aproximadamente trs a cinco dias aps o incio da incubao, a fim de observar
as caractersticas morfolgicas necessrias identificao dos txons. A
identificao de leveduras depende do isolamento de colnias em meio de
cultura e do uso de diversos testes bioqumicos para reconhecimento dos
txons, sendo que esta ltima etapa muito trabalhosa e exige conhecimentos
especficos bastante complexos (HAGLER et al., 1995).
A tcnica de isolamento a ser empregada que delimitar a
amostragem a ser efetuada. Em estudos que utilizam a incubao de folhedo
159
Procedimentos
ou fragmentos de folhas em gua destilada esterilizada, diversas amostras

so trazidas do campo, incubando-se, geralmente, de cinco a dez folhas por
ponto de coleta.
Leveduras e geofungos podem ser quantificados pela contagem
do nmero de esporos presentes em determinados volumes de amostra,
adaptando-se mtodos anlogos ao estabelecimento do nmero mais provvel
de propgulos, que amplamente utilizado no estudo de bactrias (MARTINS
et al., 1989).
Os fungos presentes em determinados sedimentos aquticos
podem ser quantificados indiretamente, medindo-se certos metablitos
produzidos exclusivamente pela micota. Recentemente, tem sido dada grande
ateno ao ergosterol, um esteride produzido por fungos imperfeitos,
ascomicetos e basidiomicetos, como parmetro indicador da produo de
biomassa fngica (GESSNER & CHAUVET, 1993).
13.3. Macroalgas Bentnicas e Perifton
13.3.1. Habitat e importncia
Algas (macroalgas e perifton) so limitadas pela luz, e podem

estar esparsamente distribudas em rios muito sombreados. E uma vez que as
algas possuem curtos ciclos de vida (um a alguns dias), elas respondem
rapidamente a mudanas ambientais. O perifton composto por algas
bentnicas que crescem aderidas ao substrato de fundo tais como rochas ou
plantas aquticas. So produtores primrios e indicadores sensveis de
mudanas ambientais nos ambientes lticos. Devido ao fato de estar aderida
ao substrato, a comunidade do perifton integra distrbios fsicos e qumicos
nos rios. Mudanas na composio de algas entre os habitats so sempre
evidentes como mudanas de cor e textura do perifton. Quanto ao uso do
perifton como bioindicadores, sabe-se que a quantificao de nutrientes e
pigmentos de diatomceas so associados eutrofizao.
160
A tcnica de amostragem de macroalgas bentnicas depender

do objetivo do estudo. Porm, em geral se procura observar dados de
abundncia e distribuio da comunidade no ecossistema aqutico. Para este
objetivo, so utilizadas a estimativa visual da cobertura percentual das espcies
sobre o substrato e sua freqncia (nmero de unidades amostrais com
presena de determinada espcie). A cobertura porcentual um parmetro
semi-quantitativo que fornece estimativa aproximada da biomassa (HOLMES
& WHITTON, 1981).
A escala de amostragem poder variar de milmetros (micro-
habitat de diatomceas) a centmetros (macroalgas). A transeco em rio ou
trecho da margem de um lago estaria no nvel de uma mesoescala.
J a escala temporal pode variar de dias a anos. A determinao
depender basicamente do resultado de interaes entre processos de acmulo
e perda de biomassa, o que depender do regime de distrbios no ambiente
(BIGGS, 1996). A periodicidade mais comum para macroalgas bentnicas a
mensal, com durao de um ano.
O uso do microscpio em campo til para a identificao
preliminar (nvel de gnero) ou no caso da ocorrncia conjunta de duas espcies
do mesmo gnero.
O material usado na amostragem em geral simples e barato,
empregando-se: cordas, estacas, rgua ou trena, visores subaquticos com
fundo de vidro e molduras com a forma geomtrica desejada (quadrado,
retngulo, polgono, etc.). O tempo e a rea amostrada dependero do objetivo
da pesquisa.
Algumas metodologias usualmente empregadas para estudos fito-
sociolgicos de vegetao terrestre foram adaptadas para a amostragem
de macroalgas bentnicas, tais como: transeco, interceptao de ponto,
quadrado e mapeamento. A seguir detalharemos melhor a tcnica de
mapeamento, sendo que as demais podem ser consultadas em Necchi Jr.
(2004). Este autor ressalta que possvel a combinao de tcnicas, ideal
para a otimizao de tempo e recursos, alm de fornecer informaes gerais
161
Procedimentos
sobre a estrutura da comunidade (riqueza de espcies e abundncia

global), e ao mesmo tempo traar um perfil mais especfico de parte da
comunidade. A combinao pode ser: transeco e quadrado (NECCHI
Jr. & MOREIRA, 1995); e interceptao de ponto e quadrado (NECCHI
Jr. et al., 1991).
Segundo Necchi Jr. (2004), a tcnica do mapeamento a que
fornece resultados mais precisos e confiveis sobre a abundncia da
comunidade. Esta metodologia consiste na marcao detalhada
(estaqueamento) do trecho a ser mapeado, de modo que se forme uma rede
com as unidades a serem amostradas. O local adequado para a aplicao
desta tcnica seria os rios com menos de 20 m de largura, que apresentem
boa visibilidade e que permitam andar com segurana sobre o leito. A principal
desvantagem do mapeamento o longo tempo que se leva para sua execuo,
tornando-o por vezes invivel.
A Agncia Ambiental dos Estados Unidos (STEVENSON & BAHLS,
2005), estabeleceu dois protocolos para a coleta do perifton, os quais so
descritos a seguir.
Amostragem multihabitat
1. Definir que trecho do rio ser amostrado;

2. As estimativas visuais ou avaliaes baseadas em transectos
quantitativos podem ser usadas para determinar a porcentagem de cobertura
de cada tipo de substrato e a abundncia relativa de macrfitas, algas
filamentosas e diatomceas;
3. Coletar algas em todos os substratos e habitats (reas de
correnteza, de remanso, margens) disponveis. O objetivo coletar uma nica
amostra composta que seja representativa da comunidade de perifton no
trecho escolhido. A coleta nos habitats deve ser proporcional sua rea de
cobertura. Coletar todos os substratos e habitats (reas de correnteza, poes,
reas prximas s margens) na real proporo de sua cobertura area no
trecho estudado. Em um trecho do rio, a luz, profundidade, substrato e
velocidade da correnteza podem afetar a composio de espcies das
comunidades do perifton. Mudanas na composio de espcies de algas entre
162
habitats so evidentes como mudanas na cor e textura do perifton. Pequenas

quantidades (aproximadamente 5,0 ml ou menos de gua contendo o substrato
colonizado pelo perifton) de subamostra de cada habitat o suficiente;
4. Coletar espcimes de macroalgas com a mo em proporo
sua abundncia relativa no trecho amostrado. Combinar todas as amostras
em uma nica caixa;
5. Colocar as amostras em um recipiente inquebrvel de boca
larga. Uma amostra de 125 ml suficiente (BAHLS, 1993). Adicionar a
quantidade de soluo de Lugol (IKI) recomendada, o fixador M3, formalina a
4% tamponada, glutaraldedo a 2% ou outro conservante (APHA, 1995);
6. Colocar uma etiqueta permanente externamente ao container
com as seguintes informaes: nome do corpo dgua, localizao, ponto de
coleta, data, nome do coletor e fixador usado; e
Transportar as amostras ao laboratrio em isopor com gelo (mant-
los frios e escuros) e estocar as amostras fixadas no escuro at que sejam
processadas. Estocar as amostras de modo que o transporte no as derrame.
Quando preservadas, checar o nvel do fixador a cada duas semanas at que
a avaliao taxonmica esteja concluda.
Amostragem de habitat nico
A variabilidade devida a diferenas do habitat entre rios pode ser

reduzida atravs da coleta do perifton proveniente de uma nica combinao
de substrato/habitat que caracterize o trecho em estudo (ROSEN, 1995). Para
resultados de comparao, a mesma combinao de substrato/habitat dever
ser amostrada em todos os rios estudados. Este tipo de amostragem dever
ser usado quando se quer avaliar a biomassa do perifton.
preciso definir o trecho a ser amostrado. A rea amostrada
para um nico tipo de habitat pode ser menor do que a rea para a amostragem
multihabitat. Podem ser amostradas apenas reas de correnteza ou remanso.
1. A combinao recomendada de substrato/habitat so pequenas
pedras obtidas em reas de correnteza com velocidades de 10-50 cm/seg (o
perifton coloniza pedras, ficando aderidos e crescendo sobre elas). Amostras
deste habitat so geralmente mais fceis de analisar do que habitats de pouca
163
Procedimentos
correnteza porque contm menos quantidade de silte. Tais habitats so comuns

na maioria dos rios. Em rios de baixada onde as regies de correnteza so
escassas, algas em locais escondidos ou em regies de remanso podem ser
coletadas. Substratos arenosos no so recomendados como um substrato
alvo porque a composio das espcies na areia limitada devido ao pequeno
tamanho e natureza instvel do substrato. Em grandes rios ou rios de baixada,
o fitoplncton deveria ser considerado como uma alterntiva ao perifton;
2. Coletar vrias subamostras da mesma combinao de
substrato/habitat e componha-as em uma nica caixa. Trs ou mais
subamostras deveriam ser coletadas de cada trecho ou rio amostrado;
3. A rea amostrada deve sempre ser determinada se a biomassa
por unidade de rea (ex: clorofila) for medida;
4. Se o plano for avaliar amostras para estimar clorofila a, no
preserve as amostras at que elas sejam sub-amostradas.
Os procedimentos de estocagem, transporte e processamento
de amostras so semelhantes aos descritos para a coleta multihabitat.
13.4. Macrfitas
13.4.1. Distribuio e importncia
Macrfitas so plantas aquticas que crescem prximas ou dentro

da gua e podem estar emersas, submersas ou serem flutuantes. Elas so
benficas aos lagos porque fornecem abrigo para peixes e substrato para
colonizao por invertebrados. Tambm produzem oxignio, o qual participa
diretamente no funcionamento do lago, e fornecem alimento para alguns peixes
e outros animais. Crowder & Painter (1991) ressaltam que a ausncia de
macrfitas em um sistema onde elas deveriam ocorrer pode indicar uma
populao de suporte reduzida de peixes e aves aquticas. Alm disso, a
ausncia de macrfitas pode indicar problemas de qualidade de gua como
resultado da turbidez elevada, herbicidas ou salinizao. Por outro lado, uma
superabundncia de macrfitas pode resultar de elevadas cargas de nutrientes
e interferir no fluxo de energia do ecossistema, alm de prejudicar atividades
como nado, navegao e pesca.
164
As macrfitas so excelentes indicadores de qualidade de gua

pelos seguintes motivos: respondem a nutrientes, luz, contaminantes txicos,
metais, herbicidas, turbidez, variao do nvel de gua e salinizao.
As macrfitas so em geral amostradas atravs de transectos

ou fotografia area. O levantamento por meio de sensoriamento remoto
utilizado para classificar e mapear a vegetao aqutica quando grandes reas
esto colonizadas; mas tem a desvantagem de no distinguir entre macrfitas
emergentes ou flutuantes (ABDON et al., 1998) ou discriminar espcies de
macrfitas pertencentes a um mesmo grupo ecolgico (MALTHUS & GEORGE,
1997). J sobrevos em avies ou helicpteros permitem a identificao de
grupos ecolgicos ou mesmo espcies, bem como a rea colonizada (CARR &
CHAMBERS, 1998).
As reas mais rasas e com maiores aportes de nutrientes (como
foz de tributrios, por exemplo) devem ser priorizadas, pois concentram as
populaes de macrfitas. importante que as reas sejam georreferenciadas
com o uso do GPS (Global Positioning System Sistema de Posicionamento
Global). Tais dados sero usados para se estimar as taxas de extino e
recolonizao, para estudos da dinmica das populaes locais, por exemplo
(THOMAZ et al., 2004).
Em caso de espcies que no formam dossel, como Ottelia
brasiliensis e Chara, ferramentas como garras, ganchos ou rastelos so teis
para a coleta; j as plantas flutuantes, emergentes ou fixas com folhas
flutuantes so mais facilmente coletadas.
A metodologia de amostragem depender do objetivo da pesquisa
(determinao da biomassa, produtividade primria, decomposio). Aqui
descreveremos a metodologia para determinao da biomassa segundo Thomaz
et al. (2004), a qual utiliza as transeces, por ser utilizada mais
freqentemente.
165
Procedimentos
Coleta para determinao da biomassa
Em geral, utiliza-se a quantidade de peso seco do material vegetal,

atravs da secagem a 105C durante 24 horas (WETZEL & LIKENS, 1991).
Os compartimentos (ou estandes) amostrados devem ser
previamente mapeados e numerados. Os pontos de coleta podem ser delimitados
por meio de transectos flutuantes (madeira ou PVC) ou no (metlicos). A
amostragem pode ser distribuda ao longo das transeces ou seguir o
delineamento estratificado ao acaso. A rea recomendada dos quadrados
de 0,06 m2 a 0,5 m2 (HARAMOTO & IKUSIMA, 1988; THOMAZ et al., 1998),
sendo a rea de 0,25 m2 a recomendvel para obteno da biomassa (WETZEL
& LIKENS, 1991).
Aps a escolha dos estandes, caso estes sejam homogneos, os
quadrados devem ser lanados dentro de regies representativas quanto
abundncia e biomassa de macrfitas; em caso de estandes heterogneos,
poder se fazer a amostragem estratificada. Outras medidas, tais como a
profundidade e a distncia da margem tambm devero ser tomadas (FORTIN
et al., 1989).
Para a coleta de macrfitas submersas, mergulhadores autnomos
podem fazer a coleta do material (invivel em casos de elevada turbidez da
gua), ou utilizar caixas sem fundo colocadas sobre a vegetao (para locais
rasos, com menos do que 2 m de profundidade). Um terceiro mtodo a
utilizao de dragas semelhantes s usadas para a fauna bentnica (Eckman,
Petersen, Petit-Ponar). importante ressaltar que o uso de dragas depender
de fatores como a arquitetura da planta, por exemplo (THOMAZ et al., 2004).
Ainda que menos utilizadas, as ecossondas tambm so aplicadas para estimar
a biomassa de macrfitas submersas.
O nmero de repeties difcil de ser estabelecido por causa da
heterogeneidade encontrada nos ambientes aquticos. Porm, Symbula & Day
Jr. (1988) consideram adequado um n no qual o erro-padro da mdia no
ultrapasse 5% do valor da mdia, correspondendo a 10 repeties para coleta
com corers com tubo de 7 cm de dimetro. O nmero de repeties tambm
depender do tamanho do quadrado, pois quadrados menores tendero a possuir
maior variabilidade da amostra.
166
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