Artikel penelitian

Peran protektif asam hialuronat pada kerusakan

oksidatif yang diinduksi oleh Cr(VI) pada sel epitel
kornea
Wei Wu,1 Hua Jiang,1 Xinnian Guo,2 Yu Wang,2 Shibo Ying,2 Lingfang Feng,2 Tao Li,2
Hailing Xia,2 Yixiao Zhang,2 Riping Chen,2 Tianhui Chen,2 dan Jianlin Lou2
1 The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou, Zhejiang
310009, China
2 Institute of Occupational Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou, Zhejiang
310013, China
Korespondensi harus ditujukan kepada Jianlin Lou; jianlinlou@163.com
Diterima 20 November 2016; Disetujui 26 Januari 2017; Dipublikasi 27 Maret 2017
Penyunting akademis: Edward Manche
Copyright 2017 Wei Wu et al. Artikel ini adalah artikel yang dapat diakses terbuka yang
didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan,
distribusi, dan reproduksi tidak terbatas dalam media apapun, asalkan karya aslinya dikutip dengan
benar.

Paparan Cr(VI) menghasilkan berbagai senyawa antara dan reactive oxygen

species (ROS), yang keduanya terkait dengan kerusakan DNA. Asam
hialuronat (HA) memiliki fungsi biologis yang mengesankan dan dilaporkan
dapat melindungi sel epitel kornea terhadap kerusakan oksidatif yang
disebabkan oleh ultraviolet B, benzalkonium klorida, dan natrium lauril
sulfat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek protektif HA pada
sel epitel kornea manusia (HCE) terhadap efek toksik yang diinduksi Cr(VI).
Sel HCE dipajankan terhadap K2Cr2O7 pada konsentrasi yang berbeda (1.875,
3.75, 7.5, 15.0, dan 30 M) atau kombinasi K 2Cr2O7 dan 0,2% HA yang
diinkubasi dengan waktu yang berbeda (15 menit, 30 menit, dan 60 menit).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa paparan Cr(VI) dapat menyebabkan
penurunan viabilitas sel, peningkatan kerusakan DNA, dan pembentukan
ROS pada sel HCE. Namun inkubasi dari HA meningkatkan tingkat
kelangsungan hidup sel HCE, penurunan kerusakan DNA dan pembentukan
ROS yang diinduksi oleh Cr(VI) yang tergantung dosis dan waktu. Penelitian
ini melaporkan untuk pertama kalinya bahwa HA dapat melindungi sel HCE
melawan toksisitas Cr(VI), yang mengindikasikan bahwa hal ini akan
menjadi agen terapetik yang menjanjikan untuk cedera kornea yang
disebabkan oleh Cr(VI).

1. Pendahuluan kromium heksavalen [Cr(VI)] dan

Kromium (Cr) dapat ditemukan di kromium trivalen [Cr(III)] yang
beberapa negara bagian, bentuk biasanya ditemukan. Cr(VI) dianggap
Journal of Ophthalmology
lebih beracun daripada Cr(III) karena
dapat dengan mudah memasuki
membran seluler melalui karier anion
nonspesifik. Cr(VI) banyak digunakan
di industri kimia seperti electroplating,
pengelasan, pewarna, pigmen cat,
leather tanning, dan sebagainya.
Banyak penelitian telah melaporkan
bahwa Cr(VI) terlarut merupakan iritan
epitelial kuat dengan sifat pengoksidasi
dan sifat asam kuat, yang
menyebabkan iritasi pada saluran
pernapasan, kulit, dan okular, seperti
batuk, dyspnea, bersin, dermatitis
kontak, ulserasi kulit, mata merah,
berair, fotofobia, dan penglihatan kabur
[1-7].
Telah diterima secara luas bahwa
reduksi seluler Cr(VI) adalah proses
aktivasi yang menghasilkan berbagai
senyawa antara [Cr(V) dan Cr(IV)] dan
reactive oxygen species (ROS) [8-11].
Berbagai senyawa antara yang
terbentuk selama reduksi seluler Cr(VI)
dapat menyebabkan pembentukan
radikal hidroksil yang bertanggung
jawab dalam pemecahan rantai DNA
[12]. Sementara itu, uji komet telah
ditemukan sebagai metode yang sangat
sensitif dan terpercaya untuk mengukur
kerusakan DNA. ROS dihasilkan
sebagai produk dari aktivitas
mitokondria normal dan dibuang atau
dihilangkan oleh sistem antioksidan
dalam sel aerobik. Keseimbangan
antara oksidan dan antioksidan dapat
terganggu oleh pembentukan ROS
yang berlebihan, yang dapat
menyebabkan stres oksidatif seperti
peroksidasi lipid (LPO), menurunkan
viabilitas sel, peningkatan kerusakan
DNA, dan apoptosis [13]. Selanjutnya,
stres oksidatif memiliki peran utama
dalam menginduksi perubahan genetik
dan epigenetik terhadap organisme dan
dikaitkan dengan karsinogenesis [8, 9,
14-16]. Baik penelitian in vivo maupun
in vitro telah melaporkan bahwa
2
paparan Cr(VI) dapat menginduksi
stres oksidatif, yang merupakan salah
satu mekanisme toksisitas Cr(VI).
Namun demikian, terdapat data yang
sangat terbatas yang melaporkan efek
toksik dan mekanisme Cr(VI) pada
mata.
Sel epitel kornea terletak di
lapisan terluar bola mata dan rentan
terhadap kerusakan oksidatif. Pada
industri kimia yang terkait dengan
kromium, paparan kerja meningkatkan
kemungkinan kerusakan pada
permukaan okular seperti kornea.
Sitotoksisitas jaringan okular yang
disebabkan oleh kromium jarang
diteliti. Asmatullah dan Shakoori
meneliti efek Cr(VI) pada mata ayam
dan menemukan bahwa pada kelompok
yang diobati, ditemukan mata yang
cacat dengan kornea, lensa, dan retina
yang tidak berdiferensiasi [17].
Chromium picolinate dapat
menyebabkan bahaya pada kornea dan
lensa termasuk penurunan yang
signifikan pada kadar SOD, GSH, dan
Na+ dan K+-ATPase; Peningkatan kadar
MDA yang signifikan; dan perubahan
morfologis dan histologis yang hebat
[13]. Apel dkk. Melaporkan bahwa
toksisitas kobalt-kromium dapat
menyebabkan disfungsi retina bagian
dalam [18]. Cr(VI) menyebabkan
trauma okular terutama cedera kornea
telah dilaporkan di China [6, 7],
sedangkan toksisitas dan
mekanismenya tidak begitu jelas.
Asam hialuronat (hyaluronan,
HA) adalah rantai polisakarida
nonsulfat linier yang tersusun dari
asam -1,4-glukuronat dengan -1,3-N-
asetilglukosamin secara bergantian
[19], yang termasuk dalam famili
glikosaminoglikan. HA, bahan matriks
ekstraselular yang ada di mana-mana,
terdapat di banyak bagian tubuh
manusia seperti kornea, corpus
vitreous, sendi, dan kulit. Dalam
Journal of Ophthalmology
praktik klinis oftalmologi, HA
memiliki fungsi biologis yang
mengesankan dan digunakan pada obat
tetes mata untuk sindrom dry eye untuk
meningkatkan stabilitas tear film dan
mengurangi gejala subyektif, seperti
iritasi dan sensasi terbakar pada mata
[20]. HA dianggap sebagai antioksidan
yang luar biasa dan scavenger ROS
[21-23]. Dilaporkan bahwa HA dengan
berat molekul tinggi (HMWHA, 1000
kDa) dapat melindungi sel epitel
kornea terhadap kerusakan oksidatif
yang disebabkan oleh ultraviolet B [24,
25], benzalkonium klorida [22],
natrium lauril sulfat [26], dan
seterusnya. Tujuan penelitian ini adalah
untuk menunjukkan apakah HMWHA
melindungi terhadap Cr(VI) yang
menginduksi kerusakan oksidatif pada
sel epitel kornea.
2. Bahan dan Metode
2.1. Kultur Sel dan Pengobatan. Sel
epitel kornea manusia didapatkan dari
Universitas New York. Sel yang
dikultur di DMEM/F12 (Gibco, Grand
Island, NY) dilengkapi dengan 10%
fetal bovine serum (HyClone, USA),
5g/ml insulin (Gibco), 0,1g/ml toxin
cholera, 5ng/ml human epidermal
growth factor (Gibco), dan gentamisin
40g/ml pada suhu 37C dalam
atmosfir yang sangat lembab dengan
CO2 5%. Sel-sel tersebut disubkultur
setiap 2-3 hari. Sel-sel dipajankan
terhadap kalium dikromat (K2Cr2O7,
Sigma, AS) pada konsentrasi 1.875,
3.75, 7.5, 15.0, dan 30 M atau
dipajankan pada kombinasi K2Cr2O7
dan 0,2% HA (1000kDa; Freda
Biopharm Co. Ltd., Shandong, Cina)
selama 15 menit, 30 menit, dan 60
menit.
2.2. Uji CCK-8. Viabilitas sel dinilai
oleh Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
(Laboratorium Dojindo, Kumamoto,
3
Jepang), sesuai dengan deskripsi
penelitian sebelumnya [27]. Secara
singkat, tiga media percobaan
disiapkan untuk setiap sampel
sebanyak 96. Setelah perlakuan, 10l
larutan CCK-8 ditambahkan ke setiap
media percobaan dan diinkubasi pada
suhu 37C selama 1 jam, dan
kemudian, nilai densitas optik (OD)
untuk masing-masing media percobaan
diukur pada panjang gelombang 450
nm pada microplate reader (Tecan
Sunrise, Switzerland). Viabilitas sel
dihitung sebagai berikut:
Dimana OD (experiment) adalah
absorban media percobaan dengan sel
yang diterapi dan CCK-8, OD (blank)
adalah absorban media percobaan
dengan medium dan CCK-8 namun
tanpa sel, dan OD (control) adalah
absorban dari media percobaan dengan
sel yang tidak diterapi dan CCK-8.
2.3. Uji Komet. Uji komet alkali
dilakukan sesuai dengan deskripsi oleh
Singh et al. [28]. Kelangsungan hidup
sel pertama kali dinilai dengan uji
eksklusi pewarna biru trypan.
Kemudian, sel tersebut ditanamkan di
0,65% titik leleh rendah agarose pada
konsentrasi akhir 104 sel/ml; 75l
suspensi seluler ini kemudian
menyebar ke preparat beku yang
sebelumnya telah dilapisi dengan 100l
dari 1% titik leleh normal agarose
(sebagai lapisan pertama). Preparat
direndam dalam larutan lisis yang baru
disiapkan (1% natrium sarkosinat,
2.5M NaCl, 100mM Na2EDTA, 10mM
Tris-HCl pH 10, 1% Triton X-100, dan
10% DMSO) pada suhu 4C selama 1
jam. Kemudian, preparat ditempatkan
pada unit elektroforesis horizontal yang
dilapisi dengan buffer segar (1mM
Na2EDTA, 300mM NaOH pH 13)
Journal of Ophthalmology
selama 20 menit. Elektroforesis
dilakukan selama 20 menit pada sekitar
1,5 V/cm dan 300 mA. Selanjutnya,
preparat dibilas dengan lembut
sebanyak 2 kali dalam buffer netralisasi
(0.4M Tris-HCl, pH 7.5). Setiap
preparat diwarnai dengan 40l etidium
bromida (20 g/ml). Semua langkah di
atas dilakukan di bawah lampu kuning
(580 nm) untuk menghindari kerusakan
DNA tambahan.
Pengamatan dibuat seperti yang telah
dijelaskan sebelumnya [27],
menggunakan mikroskop fluoresensi
(Olympus, BX51) yang dilengkapi
dengan filter eksitasi 530nm, filter
emisi 590nm, dan kamera (Olympus,
DP50). Lima puluh sel dari setiap dua
preparat replikat per sampel dipilih
untuk analisis data, dan perangkat
lunak CASP digunakan untuk
menganalisis komet dan persentase
DNA pada ujung komet tersebut
dihitung [29].
2.4. Deteksi ROS. Pembentukan ROS
pada sel limfoblastoid B pada manusia
diukur dengan metode 2', 7'
dichlorodihydrofluorescin diacetate
(DCFH-DA) [30] berdasarkan oksidasi
yang bergantung pada ROS dari
DCFH-DA 2', 7' dichlorofluorescin
(DCF). Setelah terpapar senyawa
logam, sel dibilas dua kali dan
disuspensikan kembali dengan PBS
(1106 sel/ml). Sel yang telah
disuspensikan diinkubasi dengan
DCFH-DA (5M) pada suhu 37C
selama 30 menit. Intensitas fluoresensi
masing-masing sampel dideteksi
dengan multimode plate reader pada
panjang gelombang eksitasi 485nm dan
panjang gelombang emisi 528 nm.
Akhirnya, rasio antara intensitas
fluoresensi dari setiap sampel yang
diobati dan kontrol negatif dihitung.
4
3. Hasil
3.1. Kelangsungan Hidup Sel. Seperti
ditunjukkan pada Gambar 1, tingkat
kelangsungan hidup sel dari sel epitel
kornea manusia yang terpapar K2Cr2O7
sendiri menurun secara signifikan
(p<0.01) pada konsentrasi 30-60M
untuk kelompok paparan 15 menit, 15-
60 M untuk kelompok paparan 30
menit, dan 1.875-60M untuk
kelompok paparan 60 menit. Namun,
penurunan tingkat kelangsungan hidup
sel yang signifikan (p<0.01) yang
diobati dengan kombinasi K2Cr2O7 dan
0,2% HA hanya diamati pada
konsentrasi 30-60 M, tanpa
memperhatikan waktu pemaparannya.
Selain itu, 30 menit preinkubasi 0,2%
HA dapat secara signifikan (p<0.01)
meningkatkan tingkat kelangsungan
hidup sel relatif dari sel yang diobati
dengan K2Cr2O7 pada konsentrasi
1.875M atau 30M untuk kelompok
paparan 15 menit, 15-30M untuk
kelompok paparan 30 menit, dan
1.875-15M untuk kelompok paparan
60 menit.
3.2. Kerusakan DNA. Gambar 2
menunjukkan hasil kerusakan DNA.
Peningkatan yang signifikan (p<0.01)
pada kerusakan DNA yang diinduksi
oleh K2Cr2O7 pada konsentrasi 7.5-
30M pada ketiga kelompok paparan
(15 menit, 30 menit, dan 60 menit).
Namun, K2Cr2O7 dikombinasikan
dengan 0,2% HA hanya dapat
menyebabkan kerusakan DNA (p<0.01
dibandingkan dengan kelompok
kontrol) pada konsentrasi 30M pada
kelompok paparan 15 menit dan pada
konsentrasi 15-30 M pada kelompok
paparan 30 dan 60 menit. Selanjutnya,
30 menit preinkubasi 0,2% HA dapat
secara signifikan (p<0.05 dan p<0.01)
menurunkan kerusakan DNA yang
diinduksi oleh K2Cr2O7 pada
Journal of Ophthalmology
Gambar 1: Efek Cr(VI) atau kombinasi Cr(VI) dan HA
pada tingkat kelangsungan hidup sel HCE. *p<0.01,
dibandingkan dengan kontrol. **p<0.01, ##p<0.05,
dibandingkan dengan kelompok K2Cr2O7.
konsentrasi 7.5M dan 15M pada
ketiga kelompok paparan (15 menit, 30
menit, dan 60 menit).
3.3. Produksi ROS. Hasil pembentukan
ROS ditunjukkan pada Gambar 3.
Peningkatan kadar ROS yang
bergantung pada dosis dan waktu yang
diamati pada sel yang diobati dengan
K2Cr2O7 saja, terutama pada
konsentrasi 15-30M, 7.5-30M, dan
3.75-30M pada kelompok paparan 15
menit, 30 menit, dan 60 menit
(p<0.01). Preinkubasi 0,2% HA dapat
secara signifikan melemahkan efek
K2Cr2O7 pada pembentukan ROS, dan
perbedaan produksi ROS yang
signifikan secara statistik (p<0.01)
diamati pada konsentrasi 15-30 M,
7.5-30 M, dan 3.75 M pada
kelompok paparan 15 menit, 30 menit,
dan 60 menit.
5
Gambar 2: Kerusakan DNA yang diinduksi oleh
Cr(VI) atau kombinasi Cr(VI) dan HA menggunakan
uji komet. *p<0.01, dibandingkan dengan kontrol.
**p<0.01, ##p<0.05, dibandingkan dengan kelompok
K2Cr2O7.
4. Diskusi
Sebagian besar penelitian sebelumnya
tentang Cr(VI) berfokus pada efek
karsinogeniknya, dan berbagai macam
lapisan sel yang terkait dengan sistem
pernapasan yang digunakan dalam
penelitian in vitro. Namun, efek toksik
Cr(VI) pada permukaan sel okular
jarang diteliti. Sebenarnya, pekerja
yang terpajan pada Cr(VI) memiliki
peluang yang lebih besar untuk
terpajan bahan kimia semacam itu pada
permukaan okular mereka sehingga
mengalami kerusakan pada permukaan
sel okular mereka. Kasus seperti itu
telah dilaporkan dalam literatur China.
Terlebih lagi, sel epitel kornea yang
terletak pada lapisan sel paling luar
dari permukaan okular adalah lini
pertama dalam menghadapi ancaman
lingkungan dan memainkan peran
penting dalam melindungi jaringan
Journal of Ophthalmology
Gambar 3: Cr(VI) atau terapi kombinasi Cr(VI) dan
HA menginduksi produksi ROS pada sel HCE.
*p<0.01, dibandingkan dengan kontrol. **p<0.01,
dibandingkan dengan kelompok K2Cr2O7.
dalam okular. Oleh karena itu,
penelitian ini menyelidiki efek
sitotoksik, kerusakan DNA, dan
pembentukan ROS yang diinduksi oleh
Cr(VI) pada sel epitel kornea manusia.
Selanjutnya, peran protektif HA
terhadap efek toksik yang diinduksi
oleh Cr(VI) juga dipelajari.
Uji komet alkali adalah metode sensitif
untuk visualisasi langsung kerusakan
untai DNA pada tingkat sel tunggal.
Kerusakan DNA telah dilaporkan
dalam banyak studi paparan Cr(VI)
[31]. Pemecahan untai DNA, yang
termasuk dalam salah satu kerusakan
DNA, telah dilaporkan dalam berbagai
jenis sel dengan menggunakan uji
komet [32-36]. Dan diakui bahwa
pemecahan untai DNA disebabkan oleh
reduksi Cr(VI) untuk menurunkan
keadaan oksidasi dan bukan Cr(VI)
[12]. Hasil penelitian ini menunjukkan
6
konsentrasi yang jelas dan peningkatan
kerusakan DNA yang tergantung waktu
oleh Cr(VI), yang konsisten dengan
penelitian sebelumnya yang dilakukan
pada sel limfositoid B pada manusia
oleh Lou et al. [36]. Mekanisme
kerusakan DNA yang diinduksi oleh
Cr(VI) sebagian dapat dikaitkan
dengan produksi ROS.
Hasil penelitian ini menunjukkan
bahwa K2Cr2O7 dapat menginduksi
ROS pada sel epitel kornea manusia
bahkan setelah 15 menit paparan dan
kadar ROS meningkat setelah
pengobatan K2Cr2O7 yang tergantung
waktu dan dosis. Hasil serupa
dilaporkan pada penelitian sebelumnya
yang dilakukan pada sel karsinoma hati
manusia (HepG2) [35] atau pada sel
limfoblastoid B manusia [36], namun,
waktu paparan Cr(VI) pada penelitian
ini biasanya lebih lama dari 1 jam.
Baru-baru ini, Lee et al. [37]
menunjukkan bahwa peningkatan yang
signifikan pada kadar ROS diamati
pada sel HaCaT yang terpapar 15 M
Cr(VI) kurang dari 1 jam, dan sesuai
dengan hasil penelitian ini. ROS
berlebih, yang meliputi superoksida,
hidrogen peroksida, radikal hidroksil,
dan sebagainya, dapat menyerang
biomolekul penting seperti DNA,
protein, dan lipid [38]. Atilano dkk.
Menemukan bahwa hidrogen peroksida
dapat menyebabkan kerusakan DNA
mitokondria pada sel epitel kornea
[39]. Oleh karena itu, kami menduga
bahwa keseimbangan antara sistem
antioksidan dan pembentukan ROS
dihancurkan oleh ROS yang berlebih
yang dihasilkan Cr(VI), yang kemudian
menyebabkan kerusakan DNA.
HA, karena struktur molekuler dan
sifat fisikokimianya yang unik,
memainkan fungsi fisiologis penting di
tubuh, seperti pelumas sendi, mengatur
Journal of Ophthalmology
permeabilitas dinding vaskular,
mengatur difusi dan pengangkutan
protein dan elektrolit, dan membantu
penyembuhan luka. Terdapat literatur
yang melaporkan bahwa preinkubasi
HMW-HA dapat melindungi sel epitel
kornea terhadap kerusakan oksidatif
yang diinduksi oleh ultraviolet B [24,
25], benzalkonium klorida [22, 40],
EDTA [41], natrium lauril sulfat [26]
dan seterusnya. Dalam penelitian ini,
mengkonfirmasi peran protektif 0,2%
1000 kDa HA terhadap genotoksisitas
Cr(VI) pada sel HCE. Preinkubasi HA
secara efektif meningkatkan tingkat
kelangsungan hidup sel relatif dan
mengurangi kerusakan DNA dan
pembentukan ROS yang diinduksi oleh
Cr(VI) pada sel HCE. Hal ini dapat
dijelaskan bahwa HA dapat berfungsi
sebagai scavenger radikal bebas dan
sebagai antioksidan, yang berpotensi
menyerap ROS [22]. Selain itu,
dianggap bahwa HA secara khusus
dapat mengikat beberapa reseptor
permukaan sel, seperti reseptor CD44,
yang telah terbukti diekspresikan pada
sel epitel manusia [22]. Studi mereka
menunjukkan bahwa HA dapat
melindungi membran sel dengan
berinteraksi dengan reseptor CD44.
Kami berpikir bahwa reseptor CD44
bisa menjadi kunci untuk memahami
bagaimana HMW-HA melindungi sel
HCE dari genotoksisitas Cr(VI), dan
kami ingin mempertimbangkan
penelitian semacam itu.
Kesimpulannya, penelitian ini
menunjukkan bahwa Cr(VI) dapat
meningkatkan pembentukan ROS dan
menyebabkan pemecahan untai DNA
pada sel HCE. Sebagai tambahan,
1000kDa HA secara signifikan
mengurangi semua efek sitotoksik yang
diinduksi Cr(VI) yang kami amati.
Sebuah penelitian [22] menyarankan
agar HA 1000kDa bisa membentuk
lapisan sitoprotektif pada membran sel
7
dan dengan demikian mencegah
sitotoksisitas BAK. HA (1000kDa)
mungkin merupakan agen terapetik
potensial untuk cedera kornea yang
disebabkan oleh Cr(VI) dan zat
beracun lainnya. Namun, penelitian in
vitro mungkin tidak mencerminkan
situasi sebenarnya secara in vivo, jadi
studi in vivo lebih lanjut diperlukan
untuk memperkirakan temuan in vitro
ke aplikasi klinis.
Konflik kepentingan
Penulis tidak memiliki konflik
kepentingan.
Ucapan Terima Kasih
Karya ini didukung oleh dana dari
Proyek Teknologi Kesejahteraan Publik
Departemen Teknologi Sains Provinsi
Zhejiang (2015C33115; Hangzhou,
Zhejiang, China), National Natural
Science Foundation of China
(81472960, 81001242, dan 81502794),
Ilmu Pengetahuan Alam Provinsi
Zhejiang (LY13H260002) , Program
Provinsi Zhejiang untuk Budidaya
Talenta Kesehatan Inovatif Tingkat
Tinggi (2014), dan Komite Sains dan
Teknologi Zhejiang (2014F10G,
2015F10013).
Daftar Pustaka
[1] K. K. Das, S. A. Dhundasi, and S.
N. Das, Hexavalent chromium
and its effect on health: possible
protective role of garlic (Allium
sativum Linn), Journal of Basic
and Clinical Physiology and
Pharmacology, vol. 22, no. 1-2, pp.
310, 2011.
[2] H. Lieberman, Chrome
ulcerations of the nose and throat,
The New England Journal of
Medicine, vol. 225, no. 4, pp. 132
133, 1941.
[3] J. B. Meyers, Acute pulmonary
complications following inhalation
Journal of Ophthalmology
of chromic acid mist, A.M.A.
Archives of Industrial Hygiene and
Occupational Medicine, vol. 2, no.
6, pp. 742747, 1950.
[4] H. S. Novey, M. Habib, and I. D.
Wells, Asthma and IgE antibodies
induced by chromium and nickel
salts, The Journal of Allergy and
Clinical Immunology, vol. 72, no.
4, pp. 407412, 1983.
[5] J. M. Olaguibel and A. Basomba,
Occupational asthma induced by
chromium salts, Allergologia et
Immunopathologia, vol. 17, no. 3,
pp. 133136, 1989.
[6] H. Li, Treatment of ocular trauma
induced by sodium dichromate,
Chinese Journal of Ocular Trauma
and Occupational Eye Disease,
vol. 27, no. 9, pp. 697698, 2005.
[7] L. L. Bingguang Liao and D.
Zhao, Sodium bichromate eye
burn in the integrative medicine,
Clinical Journal of Chinese
Medicine, vol. 2, no. 20, pp. 80
81, 2010.
[8] R. Franco, O. Schoneveld, A. G.
Georgakilas, and M. I.
Panayiotidis, Oxidative stress,
DNA methylation and
carcinogenesis, Cancer Letters,
vol. 266, no. 1, pp. 611, 2008.
[9] J. C. Lee, Y. O. Son, P.
Pratheeshkumar, and X. Shi,
Oxidative stress and metal
carcinogenesis, Free Radical
Biology & Medicine, vol. 53, no.
4, pp. 742757, 2012.
[10] K. Salnikow and A. Zhitkovich,
Genetic and epigenetic
mechanisms in metal
carcinogenesis and
cocarcinogenesis: nickel, arsenic,
and chromium, Chemical
Research in Toxicology, vol. 21,
no. 1, pp. 2844, 2008.
[11] R. M. Sedman, J. Beaumont, T. A.
McDonald, S. Reynolds, G.
8
Krowech, and R. Howd, Review
of the evidence regarding the
carcinogenicity of hexavalent
chromium in drinking water,
Journal of Environmental Science
and Health. Part C, Environmental
Carcinogenesis & Ecotoxicology
Reviews, vol. 24, no. 1, pp. 155
182, 2006.
[12] A. Chiu, X. L. Shi, W. K. Lee et
al., Review of chromium (VI)
apoptosis, cell-cycle-arrest, and
carcinogenesis, Journal of
Environmental Science and
Health. Part C, Environmental
Carcinogenesis & Ecotoxicology
Reviews, vol. 28, no. 3, pp. 188
230, 2010.
[13] J. P. Fabisiak, G. G. Borisenko, S.
X. Liu, V. A. Tyurin, B. R. Pitt, and
V. E. Kagan, Redox sensor
function of metallothioneins,
Methods in Enzymology, vol. 353,
pp. 268281, 2002.
[14] A. Galanis, A. Karapetsas, and R.
Sandaltzopoulos, Metalinduced
carcinogenesis, oxidative stress
and hypoxia signalling, Mutation
Research, vol. 674, no. 1-2, pp.
3135, 2009.
[15] D. Ziech, R. Franco, A. Pappa, and
M. I. Panayiotidis, Reactive
oxygen species (ROS)induced
genetic and epigenetic alterations
in human carcinogenesis,
Mutation Research, vol. 711, no. 1-
2, pp. 167173, 2011.
[16] K. Jomova and M. Valko,
Advances in metal-induced
oxidative stress and human
disease, Toxicology, vol. 283, no.
2-3, pp. 6587, 2011.
[17] S. N. Asmatullah and A. R.
Shakoori, Embryotoxic and
teratogenic effects of hexavalent
chromium in developing chicks of
Gallus domesticus, Bulletin of
Environmental Contamination and
Journal of Ophthalmology
Toxicology, vol. 61, no. 3, pp.
281288, 1998.
[18] W. Apel, D. Stark, A. Stark, S.
O'Hagan, and J. Ling, Cobalt-
chromium toxic retinopathy case
study, Documenta
Ophthalmologica, vol. 126, no. 1,
pp. 6978, 2013.
[19] B.WeissmanandK. Meyer,
Thestructure of hyalobiuronic
acid and of hyaluronic acid from
umbilical cord, Journal of the
American Chemical Society, vol.
76, no. 7, pp. 17531757, 1954.
[20] M. E. Johnson, P. J. Murphy, and
M. Boulton, Effectiveness of
sodium hyaluronate eyedrops in
the treatment of dry eye, Graefe's
Archive for Clinical and
Experimental Ophthalmology, vol.
244, no. 1, pp. 109112, 2006.
[21] W. Y. Chen and G. Abatangelo,
Functions of hyaluronan in
wound repair, Wound Repair and
Regeneration, vol. 7, no. 2, pp. 79
89, 1999.
[22] T. Pauloin, M. Dutot, J. M. Warnet,
and P. Rat, In vitro modulation of
preservative toxicity: high
molecular weight hyaluronan
decreases apoptosis and oxidative
stress induced by benzalkonium
chloride, European Journal of
Pharmaceutical Sciences, vol. 34,
no. 4-5, pp. 263273, 2008.
[23] G. M. Campo, A. Avenoso, S.
Campo et al., NF-kB and
caspases are involved in the
hyaluronan and chondroitin-4-
sulphate- exerted antioxidant effect
in fibroblast cultures exposed to
oxidative stress, Journal of
Applied Toxicology, vol. 28, no. 4,
pp. 509517, 2008.
[24] T. Pauloin, M. Dutot, F. Joly, J. M.
Warnet, and P. Rat, High
molecular weight hyaluronan
decreases UVB-induced apoptosis
9
and inflammation in human
epithelial corneal cells, Molecular
Vision, vol. 15, pp. 577583, 2009.
[25] J. M. Li, H. C. Chou, S. H. Wang
et al., Hyaluronic aciddependent
protection against UVB-damaged
human corneal cells,
Environmental and Molecular
Mutagenesis, vol. 54, no. 6, pp.
429449, 2013.
[26] T. Pauloin, M. Dutot, H. Liang, E.
Chavinier, J. M. Warnet, and P.
Rat, Corneal protection with high
molecular-weight hyaluronan
against in vitro and in vivo sodium
lauryl sulfate-induced toxic
effects, Cornea, vol. 28, no. 9, pp.
10321041, 2009.
[27] J. Lou, G. Chu, G. Zhou et al.,
Comparison between two kinds
of cigarette smoke condensates
(CSCs) of the cytogenotoxicity
and protein expression in a human
B-cell lymphoblastoid cell line
using CCK-8 assay, comet assay
and protein microarray, Mutation
Research, vol. 697, no. 1-2, pp.
5559, 2010.
[28] N. P. Singh, M. T. McCoy, R. R.
Tice, and E. L. Schneider, A
simple technique for quantitation
of low levels of DNA damage in
individual cells, Experimental
Cell Research, vol. 175, no. 1, pp.
184191, 1988.
[29] A. R. Collins, A. A. Oscoz, G.
Brunborg et al., The comet assay:
topical issues, Mutagenesis, vol.
23, no. 3, pp. 143 151, 2008.
[30] M. Zhang, X. Li, Y. Lu et al.,
Studying the genotoxic effects
induced by two kinds of bentonite
particles on human B lymphoblast
cells in vitro, Mutation Research,
vol. 720, no. 1-2, pp. 6266, 2011.
[31] K. P. Nickens, S. R. Patierno, and
S. Ceryak, Chromium
genotoxicity: a double-edged
Journal of Ophthalmology 10

sword, Chemico-Biological expression, PloS One, vol. 9, no.

Interactions, vol. 188, no. 2, pp. 9, article e108317, 2014.
276288, 2010. [38] L. Bergendi, L. Benes, Z.
[32] R. D. Snyder, Role of active Durackova, and M. Ferencik,
oxygen species in metal-induced Chemistry, physiology and
DNA strand breakage in human pathology of free radicals, Life
diploid fibroblasts, Mutation Sciences, vol. 65, no. 18-19, pp.
Research, vol. 193, pp. 237246, 18651874, 1999.
1988. [39] S. R. Atilano, M. Chwa, D. W.
[33] T. P. Wakeman, W. J. Kim, S. Kim et al., Hydrogen peroxide
Callens, A. Chiu, K. D. Brown, causes mitochondrial DNA
and B. Xu, The ATM-SMC1 damage in corneal epithelial cells,
pathway is essential for activation Cornea, vol. 28, no. 4, pp. 426
of the chromium[VI]-induced S- 433, 2009.
phase checkpoint, Mutation [40] H. Wu, H. Zhang, C. Wang et al.,
Research, vol. 554, no. 1-2, pp. Genoprotective effect of
241251, 2004. hyaluronic acid against
[34] S. S. Wise, A. L. Holmes, Q. Qin benzalkonium chloride-induced
et al., Comparative genotoxicity DNA damage in human corneal
and cytotoxicity of four hexavalent epithelial cells, Molecular Vision,
chromium compounds in human vol. 17, pp. 33643370, 2011.
bronchial cells, Chemical [41] J. Ye, H. Wu, Y. Wu et al.,
Research in Toxicology, vol. 23, High molecular weight
no. 2, pp. 365372, 2010. hyaluronan decreases oxidative
[35] A. K. Patlolla, C. Barnes, D. DNA damage induced by EDTA in
Hackett, and P. B. Tchounwou, human corneal epithelial cells,
Potassium dichromate induced Eye (London, England), vol. 26,
cytotoxicity, genotoxicity and no. 7, pp. 10121020, 2012.
oxidative stress in human liver
carcinoma (HepG2) cells,
International Journal of
Environmental Research and
Public Health, vol. 6, no. 2, pp.
643653, 2009.
[36] J. Lou, L. Jin, N. Wu et al., DNA
damage and oxidative stress in
human B lymphoblastoid cells
after combined exposure to
hexavalent chromium and nickel
compounds, Food and Chemical
Toxicology, vol. 55, pp. 533540,
2013.
[37] Y. H. Lee, S. B. Su, C. C. Huang et
al., N-acetylcysteine attenuates
hexavalent chromium-induced
hypersensitivity through inhibition
of cell death, ROS-related
signaling and cytokine