MICROSCOPIO LIMPIO

Efecto de la suciedad en la imagen

Mientras ms cerca cualquier suciedad del objeto o del sensor de la cmara, mayor es su
efecto sobre la imagen visual o grabado. Las superficies siguientes son fundamentales:

1. La superficie externa de la lente frontal del objetivo

2. La superficie del sensor de la cmara y su cubierta protectora de vidrio
3. Ambas superficies de la hoja de la cubierta
4. La superficie del portaobjetos
5. La superficie de la ptica de la cmara del adaptador
6. Las superficies de la lente frontal del condensador
7. Las superficies interior y exterior de la lente del ojo del ocular y las superficies de
retculas
8. La superficie exterior del cristal de proteccin que cubre la abertura de salida de
luz del diafragma de campo de iluminacin
9. Otras superficies de vidrio en la trayectoria de la luz, por ejemplo, los blubs de
lmparas de halgeno o de alta, filtros de fluorescencia y divisores de haz, lentes
de coleccin, de contraste y filtros de calor.

Algunas superficies pticas son ms sensibles a la suciedad que otras. La lente frontal del
objetivo es particularmente crtica, por lo que se discute en mayor detalle en este
documento.

Para cualquier objetivo seco, menor ser la distancia de trabajo libre y cuanto menor sea
la superficie de la lente frontal cncava, mayor es el peligro de la lente frontal estar
manchada con medios de incrustacin, lquidos de inmersin o polvo.

La exposicin de la lente frontal del objetivo a cualquier polvo es mayor en el caso de un

microscopio invertido que un microscopio vertical. En particular, todos los objetivos LD
secos, con aumentos de 32x, 40x y 63x deben ser verificados regularmente.

La lente frontal de un objetivo de inmersin debe ser limpiada para eliminar los residuos,
tanto despus de su uso y, adems, antes de la inmersin lquida fresca es aplicada. La
mezcla de diferentes lotes del mismo medio puede dar lugar a imgenes borrosas.

Cmo reconocer la suciedad

 Para reconocer la suciedad de las superficies pticas, usted debe tener una idea del mejor
resultado que puede esperar de un mtodo de microscopa especfico y en una aplicacin
especfica. Si compara su expectativa con la imagen visual en trminos de mxima
definicin, mejor contraste y limpieza, se reconocern de inmediato si su microscopio est
sucio en cualquier lugar.

Si la nitidez o el contraste de la imagen son menores que el ptimo, existe una alta
probabilidad de que la ptica del microscopio no est limpia.

Para localizar el elemento sucio, proceder como sigue:

Gire cuidadosamente los objetivos y las cmaras en una pequea cantidad dentro
de su hilo.
Ver portaobjetos y cubreobjetos moviendo el espcimen mientras se centra en las
superficies superior e inferior en sucesin.
Compruebe el condensador movindola hacia arriba y hacia abajo y si es posible,
ligeramente girando o girar la lente frontal.

La superficie ptica afectada se identifica cuando la suciedad sigue el movimiento del

componente ptico sospechoso. La cmara es la nica excepcin de esta regla: la suciedad
dentro de la cmara no se mueve cuando se mueve la cmara.

Una comprobacin macroscpica de las partculas de polvo ms grandes y araazos en las

superficies pticas puede llevarse a cabo con lupas 3x a 6x, o un ocular a cabo de manera
equivocada arriba.

La suciedad en la lente frontal de un objetivo se detecta fcilmente si nos fijamos en una

superficie uniformemente iluminada
desde el extremo posterior del objetivo.
Los componentes internos de la lente
producen una imagen ampliada del ms
mnimo pedazo de suciedad en la lente
frontal.

La comprobacin final siempre debe ser

una evaluacin de la mejora de la calidad
alcanzada en la imagen.

La imagen izquierda muestra imagen limpia y el lado

derecho suciedad de aceite

Los diferentes tipos de suciedad

 Hay que diferenciar entre las partculas de polvo (vidrio erosionada de preparados
microscpicos, las escamas de la piel del micros copista, la pelusa de la ropa, el polen) y
otros tipos de suciedad (incrustacin de medios de inmersin lquida o seca, residuos de
soluciones culturales de limpieza inadecuados, huellas digitales, grasa)

El polvo o bien puede descansar libremente en las superficies pticas. Otros sucios pueden
ser solubles en agua o necesitandisolventes orgnicos para completar la eliminacin.

Una imagen borrosa no siempre es debido a la suciedad: utilizando un objetivo con una
gran abertura numrica en conjuncin con un cubreobjetos del espesor errneo puede dar
lugar a imgenes borrosas (aberracin esfrica).

Objetivos secos de este tipo tienen normalmente un collar de correccin, que permite la
compensacin de la aberracin esfrica. Gire el collar de correccin (mientras continua el
ajuste del enfoque) hasta que el mejor contraste y nitidez de imagen se consigue.

Muchos objetivos de inmersin son altamente corregidos, tambin requieren

cubreobjetos especialmente seleccionados de un espesor de 0,17 mm, si la mejor imagen
es necesaria.

Objetivos de inmersin slo deben usarse en conjuncin con un lquido de inmersin

adecuado, libre de burbuja. Utilice los objetivos de inmersin en aceite con IMMERSOL de
Carl Zeiss solamente. Para el objetivo del agua c-apocromtico de inmersin, lo ideal es
usar agua destilada o W
IMMERSOL solamente.

El uso recomendado de vez en

cuando de anisol como un medio
de inmersin en los resultados da
prdida de la nitidez y el
contraste. Por otra parte, el anisol
puede atacar el cimiento de las
pticas delanteras, especialmente
de los objetivos de mayor marca.

La imagen borrosa a pesar de la limpieza es causada por la aberracin

esfrica.
Objetivo apocromtico plan de ajustado correctamente (izquierda),
incorrecto (derecha).

Diferentes superficies pticas

 Superficies cncavas o convexas (lentes frontales de los objetivos secos y condensadores
secos, las lentes de los ojos de algunos oculares) deben distinguirse de las superficies
planas paralelas o en avin (lentes frontales de la mayora de los objetivos de inmersin y
condensadores, filtros, gafas de proteccin de los sensores de la cmara o las aberturas de
salida de luz.

Limpie las superficies cncavas o convexas con los hisopos de algodn tal como se describe
ms adelante.

Limpie las superficies planas de fcil acceso con medios similares, o simplemente con el
tejido blando facial.

La ptica del microscopio puede consistir en vidrio ptico, cuarzo fundido o polmeros. Las
superficies de todos ellos estn recubiertas para reducir al mnimo la luz difusa. Algunos
recubrimientos anti reflectantes son resistentes a la limpieza (las lentes de los ojos de
piezas de los oculares), mientras que otros son demasiado blandos para ser capaces de
limpiar. La mayora de los recubrimientos anti reflectantes se componen de capas de
fluoruro de magnesio, y slo se deben limpiar con agentes libres a partir de amonaco y
cidos.

A veces se recomienda el uso de agentes de limpieza de cristales del hogar (Sidolin, brillo,
color azul Windex). Algunos componentes pticos estn rodeadas por las superficies
negras laca anti reflectantes, que son sensibles a los disolventes orgnicos. Las piezas de
plstico y caucho de oculares sern igualmente atacados por algunos disolventes orgnicos
(acetona, cloroformo). Las lentes de los microscopios ms viejos se pegan con cementos
solubles en alcohol. La mayora de los cementos de lentes utilizadas hoy en da son poli
resinas acrlicas sintticas, que no tienen este problema.

Las superficies internas de la ptica del microscopio, los componentes de los conjuntos de
filtros de fluorescencia, cmaras y adaptadores para cmaras nunca deben ser limpiadas
por el usuario, sino por el personal de servicio tcnico. El usuario puede limpiar la
superficie externa del lente frontal objetivo, la lente condensadora frontal; la lente del ojo
de los oculares, filtros de conversin, y la superficie exterior del cristal de proteccin que
cubre la abertura de salida de luz del diafragma de campo iluminado.

ptica limpia (izq.) polvo en la cubierta

de la salida de luz del diafragma de
campo de iluminacin (arriba a la
derecha). Cmara extremadamente sucia (abajo a la derecha). Intestino delgado de una rana con manchas
azan

Agentes y Mtodos de Limpieza

El objetivo es la eliminacin completa del polvo y la suciedad sin dejar ningn residuo del
agente de limpieza y sin daar las superficies.

Los siguientes utensilios y agentes son requeridos:

Palos largos y delgados de madera preferiblemente de bamb (obtenible a partir

de proveedores restaurante chino) o un material similar, no demasiado flexible.
Algodn de alta pureza (algodn hidrfilo), tal como se utiliza en oftalmologa.
Hisopos absorbentes de polister para la limpieza ptica. Se trata de una muy
buena alternativa a las esponjas de algodn y pueden ser reutilizados.
Paos faciales (Kim paos suaves, Kleenex)
Soplador de polvo (disponible de los proveedores materiales de laboratorio o
farmacias)
Solventes para la eliminacin de la suciedad grasienta o aceitosa, tales como la
receta de la casa Carl Zeiss (solucin de limpieza ptica), o de grado analtico n-
hexano. Slo para cubrir las cadas: acetona pura.

Para la limpieza rpida y fcil de superficies planas (la eliminacin de los medios de
inmersin del cubreobjetos o las lentes frontales de los objetivos de inmersin), uso de los
tejidos blandos faciales (Kleenex) empapado en un lquido para lavar plato diluido en
agua destilada.

Precaucin: el tejido del lente comnmente no se destina para la limpieza, pero slo para
el almacenamiento libre de polvo y proteccin de los componentes pticos. Con la nica
excepcin de Whatman tejido del lente 105papel de lentes son demasiado duras para la
limpieza, tambin, que no absorben la suciedad de manera eficiente, o lo suficientemente
rpido.
Para limpiar todas las superficies pticas, use ya sea recin hechos, hisopos de algodn o
hisopos nuevos polister (ITW Texwipe puntas limpias), stas absorben la suciedad a travs
de sus superficies de microfibra.

Preparacin de los hisopos de algodn

1. Lvese las manos (uso de guantes de ltex no son adecuados)

 2. Sumerja el palillo de bamb en la solucin de limpieza (acuoso u orgnico). Esto
hace que las fibras de algodn agarrar mejor al palo.
3. Poner el palo en contacto con el algodn.
4. Gire el palillo para cerrar las fibras de algodn, luego gire mas poco a poco, para
que una de manera uniforme crezcan, aproximadamente con forma elptica de
algodn en la punta.
5. Para mantener la punta de algodn limpio, el palillo debe ser guardado en una
bolsa de polietileno hasta que se utiliza. No toque la punta con los dedos, ya que el
sudor y la grasa de la piel afectar de manera significativa la capacidad de limpieza.
6. Retire la punta de algodn despus de cada trazo y reemplazarlo con un bastoncillo
de algodn recin hecho.
7. El palillo puede ser utilizado durante mucho tiempo. Utilizar palo separado para las
soluciones basadas en agua y disolventes orgnicos.

Procedimiento de limpieza
 1. Sople las partculas de polvo sueltas fuera con un soplador de polvo.
2. Quite toda la suciedad soluble en agua con agua destilada. Si esto no se realiza
correctamente, repita con lquido de fregar diluido. Quite los residuos con un
hisopo de algodn sucio, respira en la primera superficie para generar una pelcula
de humedad. Tenga cuidado de no rociar gotitas de saliva en la superficie.
3. Para quitar la suciedad aceitosa primero utilice lquido lavavajillas diluido. Si el
resultado no es satisfactorio, repita utilizando un disolvente (Carl Zeiss Solucin de
Limpieza)
4. La suciedad grasienta siempre debe ser
removido con un solvente.
5. Despus de limpiar la superficie de la inspeccin
(vase la seccin Cmo reconocer la suciedad)

Coloque los objetivos, oculares y cmaras en una

superficie libre de polvo. Todos los otros componentes a
limpiar deben ser accesibles de la mejor manera posible.

Sumergir el hisopo de algodn o hisopo de ITW Texwipe

Cleantips en la solucin de limpieza y sacuda el exceso
de lquido. Un exceso de lquido en un bastoncillo de algodn fluir por encima del borde
de la lente y atacar el cemento de la lente. Esto puede provocar que los componentes
cementados a desarmarse.

El disolvente debe tomar la suciedad tanto como sea posible. Con el fin de aumentar el
tiempo de retencin de disolventes orgnicos voltiles en la yema de algodn, algunos
usuarios enfran el disolvente (-10 C a -20 C) disolventes refrigerados tienen una
desventaja, ya que Debido a su baja temperatura, la humedad atmosfrica puede
condensarse en la superficie de la lente y dejar un residuo.

Una forma ms adecuada para mejorar el tiempo de retencin de un disolvente es aadir

el isopropanol, por ejemplo.

No todos los disolventes pueden ser recomendados para la limpieza de la ptica del
microscopio. Entre aquellos que limpia muy eficientemente algunos son txicos, otros son
hostiles para el medio ambiente an otros se dejan residuos en la superficie. Residuo
forma particular con el uso de etanol absoluto y xileno y, sobre todo, si la suciedad
contiene componentes solubles en agua.

La acetona se puede recomendar cuando el aceite y la grasa deben ser retirados de

cubreobjetos. La Acetona ataca a la mayora de los tipos de plstico, as como de goma,
por lo que su uso para la limpieza ocular puede ser problemtico. No se puede excluir la
posibilidad de que los ataques de acetona componentes pticos cementados cuando se
utiliza con frecuencia. La acetona tambin puede disolver especiales recubrimientos
orgnicos

Para la limpieza mueva el palillo con

algodn en un movimiento en espiral
desde el centro hasta el borde. Nunca
frote con un patrn de sig sag, ya que esto
slo extiende la suciedad. Con grandes
superficies pticas, primero limpie en un
movimiento en espiral a partir del borde y
avanzando hacia el centro, y luego ejecutar
otro movimiento en espiral desde el centro
hasta el borde. Como regla general, varias
toallitas en espiral sern requeridas.
Recomendamos voltil n-hexano o la solucin de limpieza ptica de Carl Zeiss.

Limpieza de las partes externas del microscopio (sin ptica)

Las superficies pintadas de los microscopios de la gama de Axio estn recubierto de polvo
y extremadamente durable. Se pueden limpiar con un pao de micro fibra muy suave
ligeramente humedecido. El Polvo suelto y otra suciedad pueden eliminarse con un cepillo
de pelo suave usado exclusivamente para ese fin.

Preparacin perfecta

Resultado ptimo en microscopa no slo depende de la limpieza de la ptica del

microscopio, sino tambin en la preparacin del espcimen perfecto. Los siguientes
factores, entre otros:
 Espesor de la seccin histolgica
Intensidad de la tincin
El ndice de refraccin y dispersin del medio de inclusin o inmersin
En microscopa de alta resolucin: distancia de una clula viva de la hoja de la
cubierta
Corregir cubrir espesor de deslizamiento para evitar la aberracin esfrica

Cmo se puede evitar ensuciamiento

Las aberturas de los tubos de visin binocular deben estar siempre cerradas. A menos que
los oculares estn en uso, utilice tapones de polvo. Si ningn tapn de polvo han llegado
con el microscopio, envolver trozos de papel de aluminio alrededor de las aberturas.

El mejor mtodo fundamental contra la acumulacin de polvo es cubrir primero el

microscopio con dos bolsas de plstico, de tamao adecuado y luego con la cubierta anti
polvo suministrado por el fabricante.

En regiones de clima tropical, este mtodo no es recomendable, ya que con frecuencia

puede llevar a la acumulacin de hongos. La contaminacin por hongos mejor puede ser
evitada por aire seco para la habitacin que se produce ya sea por el aire acondicionado o
la instalacin de una lmpara de infrarrojos por encima del microscopio (distancia mnima
de 150 cm o pies 5)

La ptica del microscopio Carl Zeiss estn impregnado con un agente anti fngico
aprobado, sin embargo no existe una proteccin 100% contra los hongos. Adems casi no
hay remedio, una vez haya infeccin por hongos.

Nunca coloque el microscopio en un lugar donde pueda verse afectado por los vapores
corrosivos cidos o alcalinos, en o cerca de un laboratorio fotogrfico qumico hmedo.

Qu tener en cuenta al limpiar la ptica del microscopio

Al empezar a limpiar, no se olvide de usar un soplador de polvo en primer lugar,

excepto cuando los lquidos tienen que ser eliminados.
 Nunca limpie las lentes con hisopos secos o tejido - Esto causar rayas.
No utilice materiales abrasivos como limpiadores de piel secos, trapos de lino o
palos secos de poliestireno segn lo recomendado por algunos fabricantes.
No aplique ningn disolvente antes debe intentar con agua destilada, excepto
cuando la grasa tiene que ser eliminado.
No use etanol, ter di etlico o acetona para limpiar antiguos microscopios.
No utilice bastoncillos de algodn desechables en lugar de hisopos de algodn o de
ITW Texwipe que recomienda en este documento, ya que los primeros no estn
libres de contaminacin.
Los principiantes no deben utilizar en ninguna ocasin barra de metal
recomendados en lugar de los palos de madera, las lentes frontales pueden
daarse fcilmente por los primeros.
No utilice ningn aerosol ptico ya que contienen aire lquido a presin. El aire a
presin procedente de estas latas fcilmente pueden dejar un residuo que es difcil
de eliminar.
Nunca usar cidos o amonaco para limpiar lentes frontales de los objetivos, que
son sensibles a los cidos y vapores alcalinos.
Nunca trate de limpiar las superficies pticas internas, cmaras y ptica de
adaptador.