Nombre

Angie Guale Plua

Nivel
4to Nivel

Carrera
Bioqumica en Actividades Pesqueras

Docente
Blga. Sandra Solrzano
 Tincin de Gram
La tincin de Gram, tambin conocida como
coloracin de Gram, es una tcnica de
laboratorio que se utiliza rutinariamente en
los estudios microbiolgicos de las
bacterias. Fue diseada por Christian
Gram, un cientfico dans, en el ao 1884.
El objetivo de Gram era conseguir una
prueba con la que fuera posible diferenciar
diferentes grupos de bacterias para as
poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se
convirti en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino
tambin para poder identificarlas rpidamente en una infeccin y seleccionar el
antibitico ms adecuado para tratarla.
Se basa en aplicar una serie de colorantes a
una muestra de cualquier origen (esputo,
orina, pus, etctera) que supuestamente
contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tien la pared de las bacterias de
color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Despus de eso
puede que el colorante permanezca en la
pared bacteriana o que se haya ido. En el
primer caso permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram
positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram
negativas.
Tcnicas para realizar una Tincin Gram
1) El primer paso es preparar y fijar un frotis de la siguiente manera:
Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriolgica y esperar que enfre
un poco. - Tomar el asa (previamente flameada) y con sta coger un poco de
muestra. - Una vez obtenida una pequea cantidad de la muestra (con el asa),
hacer que sta tenga contacto con una lmina portaobjetos, la cual servir para
depositar la muestra contenida en el asa.
Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lmina portaobjetos, proceder a
realizar la extensin de la muestra en el portaobjetos mediante movimientos
giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lmina, de tal forma que, al terminar
la extensin, tengamos como producto un espiral en la parte media la lmina.
Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para
fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (slo se pasa
por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfologa celular
de las bacterias a observar. El calor deseable es aquel en el que el portaobjetos
sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.

2) Una vez obtenido el frotis con la muestra, se

procede a teir la misma con violeta cristal o
violeta de genciana, utilizando una cantidad
suficiente de dicho colorante sobre la muestra,
como para lograr cubrirla por completo. Se deja
actuar al colorante por 1 minuto. Esta tincin de 1
minuto est dada para trabajar a una temperatura
ambiente de 25 grados.
3) Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lmina
conteniendo la muestra con agua corriente. Para
realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el
chorro de agua NO debe caer directamente sobre la
muestra, sta debe caer sobre la parte superior de la
lmina que no contiene muestra. El chorro debe ser
un chorro delgado, aproximadamente de medio a un
centmetro de espesor. Tambin el enjuague se debe
realizar poniendo la lmina en posicin inclinada
hacia abajo.

4) Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como

mordiente yodo o lugol durante 1 minuto ms.
El mordiente es cualquier sustancia que forme
compuestos insolubles con colorantes y determine su
fijacin a las bacterias.

5) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente,

el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %,
acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra
ms lquido azul. Para esto se utiliza el gotero del
frasco del decolorante. Se van aadiendo cantidades
suficientes del decolorante, hasta lograr que ste
salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya
no escurra ms lquido azul.
6) Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque
la lmina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma
anteriormente descrita.
7) Una vez que la lmina ya sec, procedemos a teir
nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un
colorante de contraste como por ejemplo la safranina,
dejar actuar durante 1 minuto.

8) Pasado el minuto correspondiente, se procede a

enjuagar la lmina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma
anteriormente descrita.

De esta manera, ya tendremos listo el frotis para su respectiva observacin

microscpica.

Referencias
http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
https://docs.google.com/document/d/1N2uqW1azHNgvL7xs0NEEZ2Isjnbb9PXJ
0rcinEzN0Ac/edit?hl=en_US