Química Analítica Instrumental PDF

Qumica Analtica Instrumental
Tema 1.- Fundamentos de espectroscopa. La radiacin electromagntica. Propiedades

ondulatorias de la radiacin. Aspectos mecanocunticos de la radiacin. Espectroscopa
atmica y molecular.
Tema 2.- Diseo y componentes de los instrumentos espectroscpicos. Fuentes de
Qumica Analtica Instrumental radiacin. Clulas. Selectores de longitud de onda. Detectores. Tratamiento de seales.
Tema 3.- Espectroscopa UV-visible. Sistemas que absorben en el UV-visible. Ley de Beer.
Instrumentacin. Mtodos y aplicaciones.
Tema 4.- Espectroscopa de luminiscencia molecular. Fluorescencia y fosforescencia.
Quimioluminiscencia. Instrumentacin. Aplicaciones.
Tema 5.- Principios de espectroscopa atmica. Espectros atmicos de emisin y
absorcin. Trminos espectrales. Anchuras de lnea. Atomizacin por llama y
electrotrmica. Eleccin de las condiciones ptimas. Atomizacin con fuentes de plasma.
Atomizacin con arco y chispa. Instrumentacin. Aplicaciones.
Tema 6.- Clasificacin de las Tcnicas Electroanalticas. Leyes Generales. Fenmeno
2013 Dr. Jos Mara Fernndez lvarez Electrdico. Lmite de Electroactividad. Montaje Potenciosttico. Electrodos selectivos de
Facultad de Ciencias iones.
Universidad de Navarra Tema 7.- Etapas de la Reaccin Electroqumica: control difusional; capa de difusin;
hiptesis de Nernst; flujo difusional y convectivo; leyes de Fick. Curvas i-E. Potenciales de
equilibrio, mixto y lmite.
Tema 8.- Valoraciones amperomtricas y potenciomtricas. Sistemas autoindicadores.
Sistemas electroqumicos indicadores de reacciones en equilibrio.
Tema 1. Introduccin
La Qumica Analtica es la ciencia que identifica los componentes de una

muestra (anlisis cualitiativo) y que determina las cantidades relativas de cada
1. Fundamentos de la espectroscopa. uno de ellos (anlisis cuantitativo). Generalmente se precisa una separacin
previa del analito de inters.
2. La radiacin electromagntica. Mtodos Clsicos: Qumica por va hmeda (volumetras, gravimetras y

anlisis cualitativo sistemtico)
3. Propiedades ondulatorias de la radiacin.
Mtodos Instrumentales: explotan las propiedades fsicas del analito
para obtener informacin cualitativa y cuantitativa
4. Aspectos mecanocunticos de la radiacin.
Espectroscopa: estudia la interaccin del campo elctrico de la radiacin
electromagntica con la materia mediante fenmenos de absorcin,
5. Espectroscopa atmica y molecular. emisin y dispersin de luz
Algunas modalidades espectromtricas Regiones del espectro electromagntico
1
Regiones del espectro electromagntico Interaccin de la energa radiante con la materia
Interaccin de la energa radiante con la materia Interaccin de la energa radiante con la materia
La luz: radiacin electromagntica La luz: niveles discretos de energa
La luz tiene una naturaleza dual: El principio de quantizacin de la energa implica que slo son
Corpuscular (fotones) posibles ciertos valores discretos de energa.
Ondulatoria (ondas)
Ver Skoog, pag. 135-7
2
La luz y su interaccin con la materia: niveles discretos de energa Onda electromagntica
Frecuencia: nmero de ciclos por unidad de tiempo. Depende de la fuente

emisora y permanece invariante, independientemente del medio que atraviese.
ciclos
[ ] [ ] hertz [ ] s 1
s
Periodo: tiempo empleado en un ciclo completo. T = 1/ [=] s
Longitud de onda, i: distancia entre dos mximos o mnimos sucesivos.
Velocidad de propagacin: vi = i v y son funcin del medio que atraviesan

1 1
Nmero de onda: nmero de ondas por cm. [ ] cm 1 ; K
i vi
En el vaco, la velocidad de la radiacin se hace independiente de la longitud de

onda y alcanza su valor mximo. c = = 3,00108 ms-1
Onda electromagntica Figuras de interferencias
Potencia, P, es la energa expresada en watios que alcanza un rea La amplitud de la onda resultante depende del desfase entre las ondas
determinada por unidad de tiempo individuales
Intensidad, I, es la potencia de la radiacin por unidad de ngulo slido
h c
E h h c h, constante de Planck = 6,6310-34 J s

La P de un haz es directamente proporcional al nmero de fotones por segundo.
Interferencias constructivas y destructivas Superposicin de ondas
A desfase cero, =0, se obtiene la

interferencia constructiva mxima
Para = 180, se obtiene la

mxima interferencia destructiva
Animations courtesy of Dr. Dan Russell, Kettering University
3
Transmisin de la luz a travs de un medio: frenado de onda Curva de dispersin refractiva
Lentes, n cte.
vi = f (i)
ni = f (i)
Prismas
El frenado es funcin de la naturaleza y concentracin de la materia

atravesada.
ndice de c
ni
refraccin vi
Dispersin de la luz (scattering) Dispersin de la luz (scattering)
Centro dispersante La mayora de los fotones

(p.e.: molcula, partcula
dispersados tienen la misma
insoluble o coloidal)
frecuencia que la fuente (dispersin
Haz
Rayleigh); sin embargo, la
incidente
Radiacin frecuencia de algunos fotones
dispersada en (aprox. 1 en 107) ha variado
todas las (dispersin Raman).
direcciones
Rayleigh
Polarizacin Luz polarizada en el plano y luz polarizada circular
Se dice que la radiacin electromagntica est despolarizada cuando los

vectores magntico y elctrico alcanzan la misma magnitud en todas las
direcciones. E = Eocost E = Eoe-t = Eocost + Eo sin t
La luz se dice linealmente polarizada cuando oscila en un nico plano al

moverse por el espacio.
Luz polarizada en el plano Luz polarizada circular
4
Refraccin de la luz: ley de Snell Reflexin de la luz
Cambio abrupto de la direccin de una radiacin al pasar de un

medio a otro con distinta densidad, como consecuencia del cambio
de velocidad de la radiacin en los dos medios.
c
sen 1 n2 v 2 v1 1 1 Principio de Fermat: la
La longitud L de A a B es: luz sigue el camino ms
sen 2 n1 c v 2 2 2 corto (menos tiempo).
v1
Puesto que la velocidad es cte (mismo medio) la ruta de tiempo mnimo es la

Si el medio 1 es el vaco, n1 = 1 de distancia mnima que se puede calcular igualando a cero la derivada.
nvaco = 1,00027 naire
n1 sen 1 n2 sen 2
Reflexin de la luz Reflexin de la luz
Si la rugosidad de la superficie lmite es menor que la longitud

de onda, entonces se produce una reflexin propiamente dicha, Para un rayo que incida
para la cual se cumple la ley de la reflexin (ngulo de incidencia =
ngulo de reflexin). Por lo general se refleja nicamente una parte Ir perpendicularmente a la superficie, la
del rayo incidente, pues la otra penetra en el medio y es refractada. reflectancia viene dada por:
Si la rugosidad de la superficie lmite es comparable a la Ii

longitud de onda del rayo incidente se obtiene una difusin (n2 n1 )2 Ir
(reflexin difusa) y, en general,
(n2 n1 )2 Ii
Si el rayo sobrepasa un ngulo lmite
determinado, se produce la denominada
reflexin total.
Pasar del aire (n=1) a vidrio (n=1,5) supone una reflectancia
de = 0,04 = 4%
Si hay muchas superficies en el camino ptico, se producen

muchas prdidas: stray light
Ver Skoog, pg 133
Ejemplo 6.2
Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas

Difraccin: todo haz paralelo de radiacin electromagntica se curva al BCF DOE
pasar por un objeto puntiagudo o por una rendija estrecha.

CBF
CF BC sen
m BC sen
m : orden de interferencia
DE OD sen
BC DE BC DE
m
OD OE
La difraccin es consecuencia de la interferencia y fue demostrada en 1800 Ver Skoog, pg 129-130

por Young Ejemplo 6.1
5
Radiacin coherente Diagrama simplificado de niveles energticos
Radiacin emitida por una fuente cuando todas las ondas elementales emitidas poseen
una diferencia de fase constante en el tiempo y en el espacio (IUPAC, 1997)
La luz producida por un lser es:

Monocromtica (longitud de onda nica)
Coherente (en fase)
Direccional (cono de divergencia
estrechsimo) E
E = E electr + E vibr + E rot
La lmpara incandescente produce una luz:
Cromtica
Incoherente
No direccional
Fuente de luz monocromtica:

Coherente
No direccional
tomos absorbentes: espectro atmico Absorcin y resolucin espectral
Los dos picos de absorcin surgen

de la promocin del electrn 3s a
los dos estados 3p
Espectros de absorcin Desactivacin radiacional y no-radiacional
6
Emisin atmica y molecular Emisin de un cuerpo negro: continuo de radiacin vs. lneas discretas de RX
1
mx (Wien)
T
W(B ) T 4 (Stefan)
W V 4 (en el VIS)
Tema 2 Instrumentacin general para espectroscopa
1. Diseo y componentes de los instrumentos Selector

de Celda Detector
espectroscpicos.
Fuente Detector y
2. Fuentes de radiacin. registrador de la
seal
3. Clulas.
M t
4. Selectores de longitud de onda.
5. Detectores.
6. Tratamiento de seales.
Instrumentacin general para espectroscopa Diagrama de bloques para absorcin
Absorcin
Fluorescencia
Emisin
7
Diagrama de bloques para absorcin Diagrama de bloques para fluorescencia y fosforescencia
Fuentes de radiacin en EAM Fuentes de radiacin en EAM
Caractersticas relevantes:
1. Distribucin espectral: intensidad a distintas (fuentes de

continuo vs. fuentes de lneas)
Espectro continuo
2. Intensidad
3. Estabilidad
1. Ruido (fluctuaciones a corto plazo)
2. Deriva (fluctuaciones a largo plazo)

Espectro de lneas discretas
4. Coste
5. Tiempo de vida
6. Geometra
I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo
A) Radiacin trmica (incandescencia)

Los slidos calentados emiten radiacin prxima a la radiacin terica del VIS
cuerpo negro.
Comportamiento del 1. Filamento de wolframio encapsulado en un bulbo de vidrio
Cuerpo Negro:
Como W~ T4, cuando se usa Normalmente funciona a unos 3.000C
Se necesita atmsfera inerte para prevenir la oxidacin del filamento
una fuente incandescente se
Es til entre 350-2.200 nm (VIS- IR cercano)
precisa una temperatura Por debajo de 350 nm el vidrio absorbe la mayor parte de la radiacin
constante para que la
emisin sea estable. 2. Lmparas halgenas en bulbo de cuarzo
1 El halgeno sirve para formar haluros voltiles de volframio

mx (Wien)
T Al enfriar la lmpara, el W se re-deposita sobre el filamento
Mayor tiempo de vida.
W(B ) T 4 (Stefan) Pueden funcionar a T ms altas (hasta unos 3.500C)
Proporcionan mayor intensidad lumnica
Elevadas T demandan cuarzo en las paredes de la lmpara.
W V 4 (en el VIS) El cuarzo transmite mejor en el UV.
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B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases

Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un tubo relleno de Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un tubo relleno de
gas. gas.
Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin
Lmpara de H2: 3-5 veces menos intensa que la de Deuterio.

Lmpara de Deuterio
D2 ms pesado que H2 menores prdidas por colisiones
D 2 E elctrica D *2 D' D' ' h

Intervalo de : 180 370 nm
Intervalo de : 160 380 nm Muy adecuadas para el UV
Muy adecuadas para el UV
B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases

Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un tubo relleno de Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un tubo relleno de
gas. gas.
Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin
Para una ms elevada intensidad:

Lmpara de vapor de mercurio
Lmpara de Xenon a 10-20 atm
Ms colisiones: continuo
til para cuando se necesitan

Inconvenientes:
Vida relativamente corta unas pocas lneas muy intensas
Necesita cebado (Fluorimetra)
Arco errante
Potencia dependiente del tiempo
Fuentes en EAM Fuentes en EAM
Para EAM UV-VIS: H2 o D2 en el UV y W para el VIS

(cambio durante el barrido)
Para Espectrofluorimetra con barrido:

lmpara de arco de Xe
Con fluormetros de longitud de onda fija:

lmpara de Hg a baja Presin
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Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation
Laser He-Ne Ratio emisin estimulada/absorcin
R 21(estimulada) N2

R 12 (absorbida) N1
Conclusin:
para lograr emisin
estimulada se precisa una
inversin de la poblacin:
N2 > N1
Mecanismo Laser Laser en accin
Lasing medium
at ground state
Pump energy
Population
inversion
Pump energy
Output Start of stimulated

Feedback mechanism
coupler emission
Pump energy
Stimulated emission
Lasing medium building up
Pump energy
Laser in
High Energy Partially
input full operation
reflectance transmitting
mirror mirror
Energy pumping
mechanism
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Laser: tipos Laser: caractersticas
1) Estado slido La luz producida por un lser es:

a) Laser de Ruby [Al2O3+Cr(III)]. Opera a 694,3 nm bombeado por Monocromtica (longitud de onda nica)
lmpara de arco de Xe. Pulsante (puede ser CW tambin) Coherente (en fase)
b) Laser de Nd/YAG (granate de Y-Al con Nd): 1.064 nm Direccional (cono de divergencia estrechsimo)
2) Gaseosos Intensa
a) tomo neutro: He-Ne: 632,8 nm

La lmpara incandescente produce una luz:
b) Iones: Ar+ o Kr+: 514,5 nm Cromtica
c) Moleculares: CO2 : 10.000 nm (1.000cm-1); N2: 337,1 nm Incoherente
d) Excmeros: gas inerte + F: ArF+ (193 nm); KrF+ (248 nm); No direccional
XeF+ (351 nm)
Fuente de luz monocromtica:
3) Colorante (dye laser). Amplia gama de colorantes que pueden
Coherente
proporcionar una variedad de .
No direccional
4) Diodo semiconductor. Amplia gama de . Continuo.
Sistema de aislamiento de Sistema de aislamiento de
1. Filtros
Absorcin (vidrio, pelcula o disolucin coloreada: solucin ms barata)
Corte
Interferencia
2. Monocromadores
Prisma
Red
Tres enfoques o planteamientos:

1) Bloqueo de la radiacin no deseada: FILTRO
2) Dispersin de la radiacin y seleccin de la banda estrecha de de inters:
MONOCROMADOR
3) Modulacin de las a diferentes frecuencias: INTERFERMETRO
Filtros de absorcin (filtros de paso de banda) Caracterizacin de los filtros
Muestran muy baja transmitancia Dos trminos asociados con los filtros pticos son: 1. Anchura de banda
efectiva medida a la
Presentan un perfil de pico muy ancho mitad de altura de pico.
Pueden usarse 2 ms filtros en serie 2. nominal (450 y 500

nm, en estos casos)
Pueden ser de cuarzo o vidrio
Relativamente baratos
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Filtros de corte (Cut-off filters) Combinacin de filtros de absorcin y de corte
La combinacin de 2 filtros de corte produce el

efecto de un filtro de paso de banda
%T
/ nm
Filtro de interferencia Filtro de interferencia
t
Recorrido entre superficies:
Lminas de cos
Haz incidente vidrio 2t
Reforzamiento: m'
cos
0 cos 1
m ' 2 t
Material dielctrico (CaF, MgF)

En el aire: = n
Capas metlicas
semi-reflectantes Radiacin Longitud de onda transmitida: t
transmitida
2tn

m
Filtro de interferencia Filtro de interferencia vs. filtro de absorcin
Tpicamente, el %T
disminuye con
anchuras de banda
decrecientes.
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Cua de interferencia (wedge) Monocromador: Prisma
White Radiation
Moveable Slit
Glass
Metallic Layer
Dielectric Layer
Monochromatic
Se pueden usar desde el UV hasta el IR
Radiation
El material a emplear depende de la zona del espectro
Son tiles para seleccionar varias bandas de radiacin gracias al Vidrio: en el VIS por encima de 350 nm
movimiento de la radiacin incidente a lo largo del filtro.
Cuarzo: en el UV
Sales cristalinas (NaCl, KBr): en el IR
Las anchuras de banda tpicas son 20 nm
Monocromador: Red Red de escalerilla: interferencia constructiva
En la red de escalerilla (rejilla) se hacen una serie de hendiduras

paralelas (surcos) en una superficie lisa con espaciado diferente en
funcin de la zona del espectro.
m (CD AB)
UV_VIS: 500 a 5.000 lneas por mm
IR: 50 a 200 lneas por mm CD d sen i
AB d sen r
m d (sen i sen r)
Red de escalerilla: interferencia constructiva Monocromador de red
Una red que contiene 1.450 surcos/mm es irradiada con luz policromtica con
un ngulo incidente de 48. Qu longitudes de onda aparecern a un ngulo
de reflexin de +20 y de -10?
m d (sen i sen r)
mm 10 6 nm
d 689,7 nm
1.450 mm
Para r = 20:
= (689,7/m) (sen 48 + sen 20) = 748,4/m nm
(748,4; 374,2; 249,5 nm, etc.)
Para r = -10:
= (689,7/m) [sen 48 + sen (-10)] = 397,9/m nm
(397,9; 199,0; 132,6 nm, etc.)
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Monocromador de red. Montajes Czerny-Turner y Ebert Monocromador: Dispersin
Dispersin angular: cambio en el ngulo de reflexin a medida que

vara la
1 2 A = dr/d
Dispersin lineal: variacin de la en funcin de la distancia a lo largo

y del plano focal.
D = dy/d = F dr/d = F A
F: distancia focal de la lente de enfoque
Dispersin recproca lineal: D-1 = d/dy = 1/F d/dr [=] nm/mm
m d (sen i sen r)
dr m
d
d d cosr D 1 Si r es pequeo, D para
Para r < 20 cos r mF una red- es constante
d d cosr 1
1
D
dy mF
dr dr dn
A menor d le Para un prisma: D NO es constante. D F
corresponde una d dn d
mayor dispersin
angular Variable (ver curvas de
dispersin)
Monocromador: Poder de Resolucin, R Monocromador: Velocidad, f/nmero
El poder colector de luz es una medida de la cantidad de luz que

1 2 alcanza el detector.
R ; ; 1 2
2
F F: distancia focal
f/nmero: 1 -10
Red: 103 - 104
f
d d: dimetro de la lente
Prisma: 101 - 102
Cuanta ms energa radiante llegue al detector, mayor relacin

Orden de Ej.: Si R = 103 y = 500,
interferencia N de rayas seal/ruido se obtendr en la medida resultante.
entonces = 0,5 nm
Rred = mN El poder colector de luz es ~ f -2
Ej.: Calcular la resolucin necesaria para
observar procesos de absorcin a 599,9
y 600,1 nm sin interferencia. Cuanto menor es el nmero ms luz se recoge.
Rprisma = b dn/d
b R = 600 / 0,2 = 3.000 Un monocromador con f/2 recoge 4 veces ms de luz que uno con f/4
Comparacin de prestaciones de los sistemas aisladores de Red de escalera
r i
m 2 dsen
2 d cos
D 1
mF
14
Monocromador de red de escalera Monocromador de red de escalera
Monocromador doblemente dispersante

Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional
Los dos elementos dispersantes son una red

de escalera y un prisma de baja dispersin.
Anchura de rendija y resolucin Anchura de rendija y resolucin
Si la w se ajusta de
modo que ef =
se consigue resolucin
espectral completa.
w
nm
R 1,2 w?
D 1 ef y mm
y
Si y w ef ef
1
(589,6 589) 0,3 nm
2
ef w D 1
ef 0,3 nm
w 0,25 mm
D 1 1,2 nm
mm
Anchura de rendija y resolucin Anchura de rendija y resolucin
Rendijas estrechas
garantizan mejor
resolucin
P
Rendija estrecha
Mejor resolucin: aptas para anlisis cualitativo
Prdida de potencia del haz: no recomendables para anlisis cuantitativo
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Material ptico Celdas para la muestra
Lentes, prismas y celdillas han de ser transparentes a la

radiacin utilizada
En el VIS se puede emplear el vidrio de 350 nm en

adelante
En el UV, el cuarzo es el ms adecuado
En el IR: NaCl, KBr

Cuanto ms pesado sea el tomo ms transparente a radiaciones
alejadas en el IR (mayores ).
Su mayor problema es la posibilidad de absorber la humedad ambiente

que hace que se velen.
Transductores de radiacin (Detectores) Caractersticas del detector ideal
Los primeros detectores fueron el ojo humano y las placas fotogrficas.

Los instrumentos modernos contienen dispositivos que convierten la radiacin
en una seal elctrica. Elevada sensibilidad
Dos tipos habituales: Alta relacin seal/ruido (S/N ratio)
Detectores de fotones
Los detectores fotoelctricos o cunticos poseen una superficie activa capaz
Respuesta independiente de la (o al menos dar una
de absorber radiacin EM
respuesta constante a lo largo de un intervalo amplio de )
En algunos, la radiacin absorbida produce la emisin de electrones
dando lugar a una fotocorriente Tiempo de respuesta corto
En otros, la absorcin de radiacin promueve electrones a la banda de
valencia de un semiconductor posibilitando la conduccin Ausencia de corriente oscura
(fotoconduccin)
Uso comn en instrumentos UV, VIS, IR cercano Seal directamente proporcional a la potencia
Detectores trmicos
Miden el calor inducido por la radiacin incidente
radiante incidente
Uso frecuente en espectroscopa IR
Clula fotovoltaica Fototubo de vaco
h: rotura de enlaces covalentes; creacin de electrones y huecos conductores
Muy sencillo
S = kP
Poco sensible
Fatiga
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Tubo fotomultiplicador (PMT) Tubo fotomultiplicador (PMT)
Muy sensibles a radiacin Vis-UV

Factor limitante: corriente oscura refrigeracin
Se usan para medir radiacin de baja potencia
Detector de diodo de silicio Detector de diodo de silicio (unin p-n)
I0
I1
+ -
h
Se origina una corriente
proporcional a la potencia radiante
R (a. u.)
Depletion layer
Sensibilidad intermedia entre el fototubo
de vaco y el tubo fotomultiplicador
190 1100 nm
Detector de diodo de silicio Serie de fotodiodos (Photodiode array)
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Serie de fotodiodos (Photodiode array) Dispositivo de carga acoplada (Charge Coupled Device, CCD)
Diode Array
Multi-channel
Amplifier
Los detectores de fotodiodos han revolucionado el

diseo de instrumentos VIS-UV al hacer posible la CCD Charge-Coupled Device, "dispositivo de cargas (elctricas) interconectadas
miniaturizacin de los espectrmetros

Los primeros dispositivos CCD fueron inventados por Willard Boyle y George
Smith en 1969 en los Laboratorios Bell.
Dispositivo de carga acoplada (Charge Coupled Device, CCD) Dispositivo de carga acoplada (Charge Coupled Device, CCD)
Determining the brilliance distribution of an astronomical object (star, planet,

galaxie,...) with the help of a CCD is pretty much similar to the measurments of
the quantity of infalling rain on a farm. As soon as the rain stops, collecting
buckets are displaced horizontally on conveyor belts. Then the water content of
the buckets is collected in other buckets on a vertical conveyor belt. The overall
content is sent onto a weighting system.
Pixel Output
register
(a) (b)
(a) (b)
Electrodes Electrons To Output amplification

Impurity (doping)
(a) By changing in a synchronized way the potential of the electrodes, electrons are
The way a CCD works is illustrated by means of a simplified CCD made of 9 pixels, an transfered from pixel to pixel. Charges on the right are guided to the output register
output register and an amplifier. Each pixel is divided in 3 regions (electrodes who serve to (b) The horizontal transfer of charges is then stopped and charge packages at the output
create a potential well). (a) when an exposure is made, the central electrode of each pixel is
register are transfered vertically, one by one, to an output amplifier and then read one
maintained at a higher potential (yellow) than the others ( green) and the charges collecting
process takes place. (b) At the end of the exposure, the electrodes potentials are changed by one. The cycle starts again until all the charges have been read (reading time of about
and charges transferred from one electrode to the other. 1 minute for a large CCD).
18
Mosac of 4 CCDs, containing

each 2040 x 2048 pixels. This
composite detector is about 6 cm
large and contains a total of 16
millions pixels (Kitt Peak Quantum efficiency curves of different types of CCDs as a function of the wavelenght
National Observatory, Arizona). compared to the one of other detectors. We can see on this plot the large domain of
wavelenghts for the spectral response of CCDs.
La medida instrumental cuantitativa Cociente Seal/Ruido (Signal to Noise ratio; S/N): Su estimacin
Todas las medidas instrumentales involucran una seal

Da una idea de la calidad de las medidas instrumentales
Desafortunadamente, todas las seales incorporan ruido S media de la seal x 1

N desviacin estndar s DER
En ocasiones el ruido es grande
DER :Desviacin Estndar Relativa
A veces el ruido es tan pequeo que no se percibe.
x = 0.9
Nt = 1.0 x 10-15 A
x = 0.9 x 10-15
s = Nt/5 = 1.0 x 10-15/5 = 0.2 x 10-15
A menudo el ruido es constante e independiente de la seal S/N = x/s = 0.9 x 10-15/0.2 x 10-15 = 45
Cociente Seal/Ruido (Signal to Noise ratio; S/N) Fuentes de ruido
Ruido Qumico: temperatura, presin, humedad, etc.

Un cociente
S/N bajo Las variaciones provocan fluctuaciones incontrolables
proporciona muy
Ruido Instrumental: debido a los componentes de los
poca fiabilidad
aparatos
para la medida
de seales - Trmico (Johnson noise): movimiento trmico de los
analticas. electrones en los resistores
- Disparo (Shot noise): movimiento de los electrones
El Lmite de
a travs de una unin.
Deteccin suele - Parpadeo (Flicker noise): cualquier ruido que es
tomarse para S/N inversamente proporcional a la seal: 1/f
~23
- Ambiental (Environmental noise): mezcla de
mltiples fuentes de ruido.
19
Ruido trmico (ruido blanco) Ruido de disparo (shot noise)
Vrms: raz cuadrtica media o valor eficaz del ruido de la

tensin que est dentro de una
irms: raz cuadrtica media o valor eficaz de las
f: anchura de banda de la frecuencia del ruido en Hz fluctuaciones de corriente relacionadas con
k: constante de Boltzmann (1,3810-23 JK-1)

i: La corriente continua promedio
T: temperatura absoluta en K
R: resistencia en e: carga del electrn (1,6010-19 C)
Tiempo de ascenso, tr, es el tiempo de respuesta expresado en s

de un instrumento a un cambio brusco de la seal de entrada. f: ancho de banda de las frecuencias consideradas
1
f Se toma como el t necesario para que la seal de salida pase del
3 tr 10% al 90% de su valor final Tambin tiene carcter de ruido blanco
Ej.: tr = 0,01 s ancho de banda = 33 Hz
Ruido ambiental Mejora del cociente S/N
Hardware & software
Hardware:
1. Toma de tierra y proteccin (caja de Faraday)
2. Filtracin analgica y RC
3. Modulacin: conversin de la seal DC a AC de alta
frecuencia y posterior demodulacin
4. Chopping de la seal: disco rotatorio, ayuda a discriminar
seales continuas de las transientes
5. Amplificadores operacionales
Filtro de paso bajo Filtro de paso alto
Deja pasar las seales de frecuencia baja, eliminando el ruido asociado a Elimina el ruido de frecuencia baja (parpadeo y deriva) permitiendo el
frecuencias altas (ruido trmico y de disparo) paso de las frecuencias altas.
Raw Data Raw Data Filtered Data

Filtered Data
High Pass
i Filter 0
Low Pass
Filter
Time Time
til para instrumentos que miden seales analticas de alta frecuencia

til para instrumentos que miden seales analticas de baja frecuencia
20
Filtro de paso de banda Modulacin - desmodulacin
Combinacin adecuada de filtros de paso bajo y alto para dejar pasar La seal se modula hacindola pasar por un chopper (disco rotatorio) de
solamente la(s) frecuencia(s) de inters. modo que pasa de poseer baja frecuencia a ser una seal de alta frecuencia (el
ruido 1/f es menos problemtico a frecuencias elevadas)
A continuacin la seal se amplifica y se pasa a travs

de un filtro de paso alto para eliminar el ruido 1/f
1.0 1.0
Low Pass High Pass Band Pass
0.8 0.8 La seal se demodula y se pasa por un filtro de paso
Relative Signal
Relative Signal
0.6 0.6 bajo para dar lugar a una seal de corriente continua (dc)
Band Pass
0.4
Filter
0.4
amplificada
0.2 0.2
0.01 0.1 1.0 10 100 1000 10,000 0.01 0.1 1.0 10 100 1000 10,000
Frequency, Hz Frequency, Hz
Mejora del cociente S/N Promediado conjunto (ensemble averaging)
Hardware & software 1. Promediado conjunto Registro de sucesivos espectros,

Software: En este algoritmo, sucesivas series de suma punto a punto y promediado
datos (matrices) se recogen y suman n
S
n
1. Promediado conjunto S Si
2
punto por punto como en una matriz i 1
i x
Sx N ( rms noise ) i 1
de la memoria de un ordenador n n
2. Promediado por grupos (COADICIN). Despus de la

coadicin, los datos se promedian Donde:
3. Filtrado digital dividiendo la suma para cada punto Sx = seal promedio (punto)
por el nmero de barridos realizados.
Si = medida individual de la seal
Si la seal en x tiene un valor de Sx,
n = nmero de medidas
Al sumar n series de datos, la suma valdr: n Sx.
Entonces:
La seal del ruido, Nx, contenido en Sx, tambin se sumar pero como las seales
de ruido son aleatorias se acumulan como la n Sx Sx Sx
n
N n n
Por tanto la suma del ruido de x despus de sumar n series de datos es: n Nx S x Si S x Si
2 2
i 1 i 1
S n Sx S n
n x
N n Nx Nx
Promediado conjunto (ensemble averaging) Promediado por grupos (boxcar averaging)
A Single Spectrum
1.5
S N S/N
1.0
0.91 0.289 3.14 Sx S
n 1 Suaviza las irregularidades de alta
Signal
N N1 frecuencia en una onda de ms baja

0.5
frecuencia
0.0
0 100 200 300 400 500 600
Time (s)
Se hace en tiempo real a medida
Average of Sixteen Spectra
1.5 que el ordenador registra la seal
S N S/N
0.90 0.070 12.81
1.0
Signal
0.5 Se emplea para seales complejas

que varan rpidamente con el tiempo
0.0
0 100 200 300 400 500 600
Time (s)
Sx S
n 1 16 3.14 12.56
N N1
21
Sensibilidad Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ)
a) Calibrado S = seal o respuesta del instrumento LOD: mnima concentracin o masa de analito que puede ser detectada por un
Sbl = seal del blanco mtodo instrumental a un nivel dado de confianza (95%)
S = mc + Sbl
c = concentracin de la muestra LOQ: mnima concentracin que puede ser fiablemente cuantificada
m = sensibilidad del calibrado (pendiente
b) Analtica de la curva de calibrado; no tiene en cuenta la
LOD
m precisin de las medidas individuales)
Seal analtica mnima detectable:
sS Sm: Seal mnima detectable
Sm = Savg, bl + ksbl
100
Signal (S )
: sensibilidad analtica m2 Savg, bl: Seal promedio del blanco

80
sS: desviacin estndar de la k: nmero entero (3)

60
medida de la seal sbl: desviacin estndar del blanco
Sm2 40 m1
Concentracin mnima detectable:
+ No depende de los factores de Sm1 20
amplificacin Sm S avg,bl k sbl

cm cm
Sbl 0
0 0 .2 0 .4 0 .6 0 .8 1
+ Independiente de las unidades de m
m
C once ntration (c )
C
medida de S
- Depende de la concentracin [ss = f(C)]
Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ) Intervalo dinmico de linealidad y lmite de linealidad (LOL)
El intervalo dinmico se extiende desde el LOQ hasta el LOL
LOL
Instrume nt Re sponse
LOQ
cm
Dynamic Range
Conce ntration
LOQ
Seal mnima cuantificable: Concentracin mnima cuantificable:
Sq = Savg, bl + 10sbl 10 sbl
cq
m
Tema 3 Espectroscopa VIS - UV
1. Espectroscopa UV-visible.
2. Sistemas que absorben en el UV-visible.
3. Ley de Beer.
4. Instrumentacin.
5. Mtodos y aplicaciones.
160 780
22
Ley de Beer: presupuestos bsicos Ley de Beer: deduccin
1. La radiacin es monocromtica
2. Las partculas absorben de modo independiente
3. Seccin recta y uniforme de absorcin

S
4. Los procesos de absorcin y desorcin de energa han de ser
P0
rpidos
5. La degeneracin de la energa absorbida ha de hacerse por va no
radiacional P
db
6. El ndice de refraccin del medio absorbente debe ser independiente

b
de la concentracin
b = 10 mm
Ley de Beer: deduccin Ley de Beer: terminologa comn
dP N (n de partculas absorbentes) P (n de fotones)
dV = S db; dV [=] cm2 cm [=] cm3
mol 23 tomos
NC 6,02310 dV (L) 10 3 6,023 10 20 S db C
L mol
K'
dP cte N P cte K' db C P K db C P

K
dP
dP K db C P ; K C b S
P P0
P b
dP P
P
K C db ; ln K C b
P0 P
P0 0 db
P K P b
log bC log log T Abs
P0 2,303 P0
b [=] cm
a = , absortividad molar; [=] L mol-1 cm-1
Abs = a b Ley de Beer
C c [=] mol/L
Ley de Beer: Absorbancia, Transmitancia y Absorcin Ley de Beer: Prdidas de potencia radiante
T = P/Po
%T = (P/Po) x 100
A = -log T= abc
%Absorcin = 100 - %T
23
Ley de Beer: Correccin de prdidas Ley de Beer
En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la

longitud de paso ptico
P Muestra P1
P P P1 P1 P P1
P Blanco P0 Potencia
b c b1
P P0 10
P
celda
P' P P' P
Treal 1 ; Tmedida 1 1 ; Abs logT log 0
P' P0 P' P1
P1
Experimentalmente se miden slo potencias salientes
b1
b
Ley de Beer Ley de Beer
En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la
longitud de paso ptico concentracin.
P P1
P P1 C1
Potencia Potencia
b c b1
P P0 10 P P0 10 b c
P P
celda
P P2
P1
P C2
P2
P1 b2
P2 P2
b1 C1 C2
b2 b C
Ley de Beer: Ejemplos Ley de Beer: ejemplos

-4
Parsol 340 (10 M in MEOH)
2
Abs b C
1.8
1.6 Se pueden encontrar valores elevados de
Absorbancia
1.4
Absorbance
1.2 hasta 105 L mol-1 cm-1 para la constante de

1
0.8
proporcionalidad.
0.6
0.4
0.2
0
220 270 320 370 420
Concentracin
Wavelength/nm
T vs [P340] y = 0.9224e-30498x Beer-Lambert plot for Parsol 340 in ethanol O

0.5
R2 = 0.9995
max~45.000
SO 3H
HO3S 0.4
0.6 1.6
y = 13245x + 0.0351
0.5 1.4 O
R2 = 0.9995
Absorbance
0.3
1.2 UVA UVA
absorbance
0.4 1
0.2
0.3 0.8
T
0.2 0.6
HO 3S 0.1
0.4 O
0.1 0.2 O
SO 3H
0
0 0 200 250 300 350 400
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04 0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04
Mexoryl SX W avelength/nm
[P340]/M [P340]/M
24
Ley de Beer: aditividad Ley de Beer: desviaciones
Propias a la Ley Dependencia de respecto de n

ATotal A1 A2 A3 ...... An
Interacciones moleculares
Las absorbancias
ATotal 1b1c1 2b2c2 3b3c3 ...... nbn cn son siempre Procesos no absorbentes
aditivas
Elucidacin de muestras binarias o

ternarias de componentes absorbentes Qumicas Equilibrios en disolucin
' : A' M '
b [M] N' b [N] Disolvente

Impureza de reactivos
'' '' Presencia de interferencias absorbentes
' ' : A' ' M b [M] N b [N]
Instrumentales Radiacin policrmatica

Radiacin parsita o dispersa
Ruido instrumental
Abs745 745
Cu2
[Cu2 ] Bi
745
3 [Bi
3
] 745
CuY 2
[CuY 2 ] BiY
745 745
[BiY ] 4 [Y
Y
4
] Anchura de rendija
Ley de Beer: desviaciones Ley de Beer: desviaciones
Propias a la Ley A no tiene limitacin con respecto a b Propias a la Ley A no tiene limitacin con respecto a b
Se pueden emplear celdillas pequeas para analitos Se pueden emplear celdillas pequeas para analitos
concentrados y celdilla ms largas para muestras ms concentrados y celdilla ms largas para muestras ms
diluidas. diluidas.
Si A = 0,410 en una celdilla de 1,0 cm, entonces: Si A = 0,410 en una celdilla de 1,0 cm, entonces:
Si b = 2,0 cm, A = 0,820 Si b = 2,0 cm, A = 0,820
Si b = 0,1 cm, A = 0,041 Si b = 0,1 cm, A = 0,041
Concentraciones > 0,01 M alteracin del proceso de absorcin individual Concentraciones > 0,01 M alteracin del proceso de absorcin individual
Ley de Beer es una ley lmite Ley de Beer es una ley lmite
Un aumento de la concentracin del buffer o del disolvente tiene un efecto Un aumento de la concentracin del buffer o del disolvente tiene un efecto
similar similar
Si la modificacin de C implica cambio de n, entonces vara Si la modificacin de C implica cambio de n, entonces vara
(n) = [n/(n2 + 2)2] (n) = [n/(n2 + 2)2]
Ley de Beer: desviaciones Ley de Beer: desviaciones
Reacciones del compuesto absorbente Ejemplo: si Ka = 10-4

HIn H In
provocan el incumplimiento de la ley de Beer. color 1 color 2
HIn H In
CHIn [HIn] [In-]
color 1 color 2
Qumicas
10-5 8.5x10-7 9.2x10-6
Expected
10-4 3.8x10-5 6.2x10-5

Actual
10-3 7.3x10-4 2.7x10-4
C
HIn
Estudiar el ej. 13.1 de las pginas 326-7 del Skoog
25
Ley de Beer: desviaciones. Punto isosbstico Ley de Beer: desviaciones.
Se observa un punto isosbstico cuando dos especies absorbentes en Efecto de la radiacin policromtica
equilibrio, X e Y, tienen la misma absortividad molar a una longitud de onda. Si
En la prctica, el monocromador deja pasar una banda de radiacin.
X e Y estn en equilibrio, para la longitud de onda del punto isosbstico, la
absorbancia total es independiente de las concentraciones relativas de X e Y.
0.9
0.8
A = b ([HIn] + [In-])
0.7
Rojo fenol
0.6
0.5
El punto isosbstico puede
Absorbance
0.4
0.3
llegar a ser una longitud de La absorbancia medida Am es:
0.2 onda analticamente til
0.1
ya que, a esta longitud de
0
400
-0.1
450 500 550 600 650
onda, se obtiene una curva
de calibracin lineal sin
Wavelangth (nm)
Instrumentales
controlar las condiciones de Slo cuando las absortividades molares
la disolucin (disolucin no son iguales a las dos longitudes de
tamponada). onda, y , la expresin anterior se
simplifica a:
Ley de Beer: desviaciones. Ley de Beer: desviaciones.
Efecto de la radiacin policromtica

Efecto de la radiacin parsita (scattered light)
Dos factores relevantes:
Luz que no habiendo atravesado la muestra alcanza
Posicin de la banda
del haz incidente con el detector, incrementando la seal y produciendo
respecto al mximo de desviaciones negativas en la absorbancia.
absorcin del analito.
Anchura de banda del
haz.
La luz parsita es
ms relevante
cuanto ms
concentrada sea la
muestra y cuanto
Instrumentales Instrumentales ms larga sea la
celda, pues ambas
situaciones
implican una
La ley de Beer se cumple cuando la anchura de paso de banda del menor P
monocromador es <1/10 de la anchura de semipico de absorcin.
Error fotomtrico Error fotomtrico
A b C; - log T b C (1) La indeterminacin en la medida de T afecta a C Contribucin de los distintos tipos de ruido
Corriente oscura (%T) 0,01%T
0,434 dT Precisin en la lectura (analgica) 0,5%T (1-3% error en la evaluacin de C)
0,434 ln T b C; Diferenciando: b C (2) Ruido de disparo (especialmente por encima del 95%T)
T
Parpadeo (a altas transmitancias)
0,434 dC C 0,434 Incertidumbre en la posicin de la celda (no es factor relevante)
Dividiendo (2) : (1) dT ; Escrito en incrementos finitos: T
T log T C C T logT
Category Characterized by Typical Sources Likely to be Important in
El error relativo en la determinacin de C, C/C, es funcin de T Case I Limited Readout resolution Inexpensive photometers and spectrophotometers having small
meter scales
ST = k1
El error ser mnimo cuando T logT sea mximo:

Heat detector Johnson noise IR and near-IR spectrophotometers and photometers
d 1
(T lnT) T ln T 0 - ln T 1 2,303 log T 1 2,303 A Dark current and amplifier noise Regions where source intensity and detector are low
dT T
Case II Photon detector shot noise High-quality UV-visible spectrophotometers

1 C Abs de 0,2 a 0,8 ST k 2 T 2 T
A 0,434 100 2%
2,303 C %T de 65% al 15% Case III Cell positioning uncertainties High-quality UV-visible and IR spectrophotometers
ST = k3T
%T = 36,8% Source flicker Inexpensive photometers and spectrophotometers
26
Error fotomtrico Especies absorbentes
* y n* alta energa, bajas
- * < 185 nm (UV de vaco)
Tomadas en conjunto estas - n* = 150 250 nm

fuentes de ruido se concluye que
la mejor zona para trabajar es - Difciles de medir
la que corresponde a
transmitancias intermedias. n * y * 200 700 nm
- Son las transiciones ms

importantes y tiles en
espectroscopa Vis-UV
- Absortividades molares ():

n * 101 102 L cm-1 mol-1
* 103 104 L cm-1 mol-1
Especies absorbentes Especies absorbentes
Chromophore Example Excitation max, nm Solvent
Formaldehdo
C=C Ethene * 171 15,000 hexane
CC 1-Hexyne * 180 10,000 hexane
n * 290 15 hexane
C=O Ethanal
* 180 10,000 hexane
n * 275 17 ethanol
N=O Nitromethane
* 200 5,000 ethanol
Methyl
C-X X=Br n * 205 200 hexane
bromide
X=I n * 255 360 hexane
Methyl Iodide
Cromforos comunes Cromforos comunes
En la Tabla anterior se puede observar:
1. Las bandas de absorcin intensas ( 104) representan transiciones de

mayor probabilidad (bandas *), mientras que las de baja intensidad
corresponden a transiciones n * (menos probables).
2. Cada grupo funcional posee bandas de absorcin caractersticas, como lo

son tambin las intensidades de las bandas (medida por el valor de ). La
absorcin de radiacin Vis-UV es debida a los Cromforos ms que a la
molcula en su conjunto (IDENTIFICACIN DE GRUPOS
FUNCIONALES en base a su y ).
3. La conjugacin de cromforos aumenta la intensidad y origina cambios

drsticos en la max de absorcin del cromforo.
27
Cromforos comunes Cromforos comunes
La mayora de los espectros de compuestos

orgnicos son complejos
Transiciones electrnicas, vibracionales y/o

rotacionales superpuestas
Bandas de absorcin generalmente anchas
El anlisis detallado e inequvoco no es

posible, si bien se puede hacer una estimacin
del tipo de enlaces involucrados
Los efectos del disolvente y de los

substituyentes complican la situacin (y
tambin pueden aportar informacin)
Cromforos y auxocromos Nomenclatura
Cromforos: Grupos funcionales que absorben radiacin visible o del UV prximo ( >
200 nm) cuando se hallan enlazados a una cadena orgnica saturada no absorbente.
Auxocromos: Grupos funcionales que poseen electrones de valencia no-enlazantes, n,

que no absorben a > 220nm, pero muestran absorcin intensa de radiacin en el UV
lejano (180-200 nm), debido a transiciones n *. Ej. -OH; -NH2; -Cl, etc.
Si un grupo auxocromo se asocia a la cadena de un cromforo se exalta el color del

mismo, lo que en trminos espectroscpicos significa que la banda de absorcin del
cromforo se desplaza a mas largas (Efecto Batocrmico o Desviacin hacia el
Rojo) a la vez que aumenta su intensidad (Efecto Hipercrmico).
Efecto Hipocrmico: Cuando disminuye la intensidad de una banda.
Si se desplaza la del mximo de absorcin de un cromforo a ms cortas (ej. al
cambiar a un disolvente ms polar) se ha producido un Efecto Hipsocrmico o
Desviacin hacia el Azul.
La conjugacin de varios cromforos en una molcula produce un desplazamiento
Batocrmico o Desviacin hacia el rojo de la del mximo de absorcin. Ej.
Conjugacin de cromforos La relevancia de la conjugacin de cromforos
Naturaleza del Trmino

desplazamiento descriptivo
La multiplicidad de La conjugacin produce A mayores Batocrmico
grupos cromforos tiene deslocalizacin de electrones , A menores Hipsocrmico
escasa influencia en , estabilizando *, por lo que la A mayor absorbancia Hipercrmico

pero incrementa seal se desplaza a mayores
A menor absorbancia Hipocrmico
notablemente (menor energa)
28
Algunos grupos cromforos y auxocromos Substituyentes en los compuestos aromticos
Benceno:
Los compuestos aromticos poseen tres
184 nm ( ~ 60.000)
conjuntos de bandas debido a transiciones
Banda E2 a 204 nm ( = 7.900)
*.
Banda B a 256 nm ( = 200)
Efecto del disolvente Disolventes ms frecuentes. Influencia de la polaridad
Cada banda tiene una estructura fina CH3CHO

asociada a transiciones vibracionales
que se reduce e incluso desaparece-
en disolventes polares.
Un incremento de la polaridad del

disolvente:
n*: desplazamiento hipsocrmico
n*: desplazamiento hipsocrmico
*: desplazamiento batocrmico
1,2,4,5-tetracina
Disolventes no polares respetan mejor
la estructura fina del espectro
Pigmentos orgnicos naturales Lantnidos y actnidos
LYCOPENO Los metales de las series 4f y 5f absorben

merced a transiciones que involucran a los
electrones f
Apenas se nota efecto alguno por parte del

disolvente y de posibles ligandos, puesto que
se trata de electrones de capas internas que
estn protegidas.
-CAROTENO Los espectros de absorcin muestran seales

agudas y bien definidas.
29
Color de los iones sencillos Color de los metales de transicin
La mayora de los cationes de los metales de transicin presentan color en disolucin.
La absorcin de radiacin en el visible se debe a transiciones que involucran electrones d

en orbitales d incompletos.
Las capas d son ms externas y estn ms expuestas que las f. Sus espectros son ms
anchos y la mx se ve influenciada por el disolvente y/o los ligandos.
Efecto del campo ligando Absorcin por transferencia de carga
Involucra la presencia de un aceptor (in

metlico) y de un donor (ligando) de e-.
La absorcin de la radiacin hace que se

transfiera un e- desde el orbital del donor al
orbital del aceptor.
Se origina un estado excitado en el que ha

tenido lugar una reaccin redox.
Absortividades molares elevadas ( > 10.000)
Ej.: Fe(SCN)2+ + h Fe2+ + SCN0
Instrumentacin Instrumentacin
Doble haz resuelto en el espacio

Cuatro tipos bsicos de diseos instrumentales
Haz simple
Doble haz resuelto en el espacio
Doble haz resuelto en el tiempo
Multicanal
Haz simple
Puede ser de unicanal o de barrido
Las seales de la celdilla de muestra y de la celdilla de referencia se miden

simultneamente y se sustraen.
Se precisan 2 detectores coste elevado
30
Instrumentacin Instrumentacin
Doble haz resuelto en el tiempo Multicanal
Es el diseo comercial ms frecuente

Puede hacer un registro (barrido) completo del espectro en 0,1 s
Ventajas del doble haz frente al monohaz: Promedia la seal durante 1 s ms, para mejorar la S/N
Corrige las variaciones en la intensidad de la fuente Pocos componentes pticos: mnima prdida de potencia del haz
Compensa la deriva del detector y del amplificador (resuelto en el tiempo)
Lmpara de D2 y resolucin (ancho de banda) de 2 nm
Compensa la variacin de potencia del haz con la longitud de onda
Instrumentacin: fuentes ms utilizadas en el VIS-UV Instrumentacin: fuentes ms utilizadas en el VIS-UV
Lmpara de Deuterio y su espectro
Un filamento calentado
recubierto de xido proporciona
electrones
Lmpara de
filamento de
Wolframio y su
espectro
Instrumentacin: celdillas ms comunes en el VIS-UV Instrumentacin: detectores
b = 10 mm Volumen (L): 160, 100 or 50
31
Instrumentacin: instrumentos tpicos Instrumentacin: Fotmetro (VIS)
Fotmetros
Instrumentos sencillos que usan filtros para seleccionar la
Solo pueden hacer medidas secuenciales a cada
Escasa disminucin de la potencia del haz (ptica escasa) buena S/N
Baratos
Espectrofotmetros
Emplean un monocromador o un elemento dispersivo para seleccionar la
Pueden hacer barridos de registro de espectros
ptica ms compleja peor S/N
Caros
Instrumentacin: Fotmetro (UV) Instrumentacin: Espectrofotmetro (VIS)
Detector muy comn en HPLC
Emplea una lmpara de Hg y con un filtro se aisla la lnea a 254 nm Econmico: 450 2500
Intervalo: 380 800 nm
Prctico para cuantificar sustancias Resolucin: 8 20 nm
orgnicas que absorben a 254 nm.
Fotmetro de sonda
Utiliza fibra ptica y un espejo para

proyectar el haz a travs de la muestra.
Es habitual en instrumentos de campo.
Elimina la necesidad de celda.
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de haz simple y doble Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble haz
Normalmente emplean lmparas intercambiables de W y D2

Coste: 3000 8000 (monohaz); 4000 15000 (doble haz)
Resolucin: 0,5 8 nm (monohaz); 0,1 3 nm (haz doble)
32
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble haz Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble dispersin
La luz pasa dos veces por el sistema dispersante mejorando mucho la resolucin.
Caro: > 10.000
Ancho de banda: 0,07 nm
Luz dispersada o errtica: 0,0008%
Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV de doble dispersin Instrumentacin: Espectrofotmetros VIS-UV con fotodiodos
Pueden llegar a ser muy compactos en tamao

Registro de espectro muy rpido: 0,1 s
Ancho de banda: 2 nm
Coste: 3.000 - 20.000
Instrumentacin: Espectroscopa diferencial con escala expandida Mezclas de substancias absorbentes
' : A' M '

b [M] N' b [N]

''
' ' : A' ' M b [M] N'' b [N]
Las absorbancias son siempre aditivas
33
Determinacin de estequiometras: Ordenada de Job Determinacin de estequiometras: Ordenada de Job
Disoluciones del catin y del ligando con idnticas concentraciones formales

se mezclan en distintas proporciones de volumen, de tal modo que el AJ = MLn [MLn] + M[M] + L[L] sin corregir. Introduciendo la correccin:
volumen total de cada mezcla sea igual. CM = [M] + [MLn]
CM + CL = cte AJ = MLn [MLn] + M[M] + L[L] - (MCM + LCL) = CL = [L] + n [MLn] =
M 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 mL
L 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 mL
= MLn [MLn] + M[M] + L[L] - M[M] - M [MLn] - L[L] - L n [MLn]
mol
xmL C 10 x mL C mol
L C mol
AJ = (MLn - M - nL) [MLn] = K[MLn]
L
10mL 10mL L
AJ
MLn
XM 0........0,1........0,5........0,9........1
XL 1........0,9.......0,5........0,1.........0
XM + XL = 1 AJ
0 0
En el mximo: x ; x
Se mide la absorbancia de cada disolucin a una apropiada y se corrige por
0 XL 1
cualquier absorbancia de la mezcla si no se hubiese producido reaccin.
1 XM 0
Determinacin de estequiometras: Ordenada de Job Determinacin de constantes de complejacin: mtodo de Job
JOB
Kd
[M] [L]n
; K d [ML n ] [M] [L]n En el mximo de Aj:

K d [ML n ] [M][L]n
0
M + nL
C nC
MLn
C(1-)
[ML n ] x x
MLn C 1 1
Kf
x : fraccin molar de L [L]libre xC n[ML n ] M Ln C (nC ) n nC n
1-x: fraccin molar de M [M]libre (1 x)C [ML n ]

AJ

(1 x)C [MLn ]xC n[MLn ]n (1 c) [MLn ] xC n[MLn ]n (1 x)C [MLn ]nxC n [MLn ]n1C n [MLn ] 0
x x x AM
0 0
AS
C xC n [ML n ] n xC n [ML n ] C (1 x) C [MLn ]

n n 1
xmax n Esteq.
xC n [MLn ] n (1 x) C [MLn ]
0,5 1 ML
xC n [MLn ] n (1 x) C n [MLn ]
0 X L 1
x n (1 x).Luego en el mximo : 0,66 2 ML2
x max 1 XM 0
n
1 x max 0,75 3 ML3 AM AS Lo que se ha disociado
Lo que debera haberse formado
AM
Determinacin de estequiometras: mtodo de las relaciones molares Determinacin de constantes de complejacin: mtodo de las relaciones molares
Consiste en la medida de la absorbancia de disoluciones con una concentracin M + nL MLn Kf

MLn
constante de metal y una concentracin creciente de ligando, y su C nC C(1-) M L n
representacin frente al cociente CL/CM.
AM = MLnCMLn = MLn CM; AS = MLn[MLn] Dividiendo:
A CM
A S ML n
ML n
A AM CM
AM [M] = CM - [MLn]
Substituyendo,
AS se obtiene Kf
[L] = CL - n [MLn]
n
CL/CM
Partiendo de disoluciones isomolares, basta con mezclar un volumen constante de la AM AS Lo que se ha disociado
Lo que debera haberse formado
disolucin de metal y volmenes crecientes de la del ligando, midiendo a la a AM
CL/CM
que absorbe el complejo.
34
Determinacin de constantes de equilibrio Determinacin del grado de disociacin
Kd
In H HIn [H ] [In ] [HIn] HIn In H
Kd ; pK d pH log c 2 2 c 2
Kf [HIn] [In ] Kd
Kd
c(1 ) c c c(1 ) 1
Se miden las absorbancias de una disolucin de concentracin analtica (CT)
conocida a tres pH diferentes.
1. pH cido (HIn) A3 = HIn[c(1-)] + In- (c) = HInc HInc + In-c

A1 = HIn CT HIn
2. pH bsico (In-)
A3 = A1 + (In- c HIn c) = A1 + (A2 A1)
A2 = In- CT In-
3. pH intermedio (HIn + In-)
A 3 A1
CT = [HIn] + [In-] [HIn]
A3 = HIn [HIn] + In- [In-] [In-] A 2 A1
Midiendo el pH de la disolucin y
sustituyendo se obtiene Kd
Aplicaciones: anlisis cualitativo Aplicaciones: anlisis cuantitativo mediante valoraciones fotomtricas
Anlisis de grupos funcionales (complemento de IR y RMN)

Control de calidad: Ciertos productos tienen que ser transparentes al VIS-UV
Ej.: El alcohol etlico de 96 puede contener benceno y debe purificarse A (analito) + T (valorante) P (producto)
hasta no absorber.
Elucidacin de ismeros. Ej.: bifenilos cis-trans
Ej.: Tautomera ceto-enlica del acetilacetato de etilo Abs745 745

Cu2
[Cu2 ] Bi
745
3 [Bi
3
] 745
CuY 2
[CuY 2 ] BiY
745 745
[BiY ] 4 [Y
Y
4
]
O O
275 nm
H3C C C C OC2H5
H2 = 20 Lmol-1cm-1
OH O
245 nm Esta forma posee dobles enlaces conjugados
H3C C C C OC2H5
H = 18000 Lmol-1cm-1
Aplicaciones: anlisis cuantitativo Aplicaciones: determinacin de macrociclos
A class of biological molecules containing a ring of seven, fifteen, or any arbitrarily

A. DIRECTO: Componente absorbente en el VIS-UV: Compuestos orgnicos large number of atoms
Important class is porphyrins which include the heme group and Chlorophyll a
heme has a -* transiton in the blue region at 400 nm. Chlorophyll a -*
B. INDIRECTO: Mucho ms comn en Inorgnica transiton in the 650 nm region to give it its green color
B.1) M + R P coloreado (complejacin y redox principalmente)
M + n L MLn.
Eleccin de L condicionada por: Selectividad, Sensibilidad y Solubilidad
B.2) M + Sistema coloreado Decoloracin ~ C
35
Aplicaciones: determinacin de aminocidos y nucletidos Aplicaciones: estudios conformacionales
Muy til para caracterizar la conformacin de cidos nucleicos y protenas
DNA melting: Hypochromism:

Substance pH
(nm) (L/cmmol) Decrease in upon formation of double helix (H-bond)
max
Phenylalanine 6 257 200
Tyrosine 6 275 1.300
Tryptophan 6 280 5.000
Adenosine-5-phosphate 7 259 15.000
Cytidine-5-phosphate 7 271 9.000
Uridine-5-phosphate 7 262 10.000
Guanosine-5-phosphate 7 252 14.000 Binding of a lanthanide

complex to an
oligonucleotide
Changes from
form I to form II
Recta de calibrado con patrones o estndares Recta de calibrado por adiciones estndar
Se emplea en los casos en que los analitos se encuentran en matrices complejas en las
que es fcil que surjan interferencias.
1. Preparar varias alcuotas idnticas, de un volumen Vx, de la muestra desconocida

2. Aadir a cada muestra alcuota un volumen creciente, Vs, de una disolucin
estndar de concentracin conocida, Cs, del analito a medir.
3. Enrasar todas las disoluciones a un volumen idntico, Vt.
4. Hacer la medida instrumental de cada disolucin.
5. Trazar la recta de calibrado
6. Calcular la concentracin del analito, Cx, en la muestra.
m = y/ x
Instrum ent Response ( S )
b = y-intercept S mVs b
(V s ) 0
http://www.unav.es/quimicayedafologia/quimanal/monografias/estadistica/ Vs
Recta de calibrado por adiciones estndar Recta de calibrado por adiciones estndar
La expresin que nos da la seal analtica para cada adicin estndar es: Combinado las dos expresiones:
kVsC s kVx C x
S mVs b S
kV C kV C Vt Vt
S s s x x
Vt Vt
Donde:
S seal analtica
k constante de proporcionalidad
Vs volumen de estndar aadido
Cs concentracin del estndar
bCs
Vx volumen de la muestra alcuota
Cx
Cx
Vt
concentracin del analito en la muestra
volumen total de las disoluciones diludas
mVx
36
Recta de calibrado por adiciones estndar: Ejemplo Recta de calibrado por adiciones estndar: Ejemplo
Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de adiciones Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de adiciones
estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos matraces de estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos matraces de
100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un estndar de 22,1 100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un estndar de 22,1
ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos hasta el enrase con ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos hasta el enrase con
agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia, calcular la concentracin de agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia, calcular la concentracin de
As en la muestra problema. As en la muestra problema.
Arsenic Standard Addition
Muestra (mL) Estndar (mL)
Estndar (mL) Absorbancia Muestra (mL) Estndar (mL)
Estndar (mL) Absorbancia Adiciones estndar con concentraciones
0.45
10,00 0,00 0,156 0.40

m = 0.00818 10,00 0,00 0,156 0,35
b = 0.1554
0.35 0,3
sm = 0.000119
10,00 5,00 0,195 0.30 sb = 0.001463 10,00 5,00 0,195 0,25
Absorbance
0.25 0,2
Abs
10,00 10,00 0,239 10,00 10,00 0,239
0.20 0,15
10,00 15,00 0,276 0.15 10,00 15,00 0,276 0,1

0.10 0,05
10,00 20,00 0,320 0.05 10,00 20,00 0,320 0
0.00
0 1 2 3 4 5
0 5 10 15 20 C (ppm)
Volume Standard (Vs )
5,00 mL 22,1g
1,105 g mL-1
100 mL mL A 0,1554 0,0370C Para A = 0: C 4,2 ppm
b Cs (0,1554)ua(22,1)g/mL
Cx 41,98 g/mL Teniendo en cuenta la dilucin 10:100, la
m Vx (0,00818)ua/mL(10)mL concentracin en la muestra es: 42 ppm
Standard Addition Method (spiking the sample)
- used for analytes in a complex matrix where interferences in the UV/Vis for the
(3) Dilute each solution to an equal volume, Vt.
analyte will occur: i.e. blood, sediment, human serum, etc..
- Method:
(1) Prepare several identical aliquots, Vx, of the unknown sample.
(4) Make instrumental measurements of each sample to get an

instrument response, IR.
(2) Add a variable volume, Vs, of a standard solution of known
concentration, cs, to each unknown aliquot.
Note: This method assumes a linear relationship between instrument response and sample
concentration.
Estimacin de las concentraciones por adiciones estndar Estimacin de las concentraciones por adiciones estndar; Ejemplo
Una alcuota de 25,00 mL de una disolucin acuosa que contiene quinina fue diluida a
1. Preparar dos disoluciones con alcuotas idnticas del problema.
50,00 mL y su absorbancia a 348 nm fue de 0,416 con una celdilla de 1,00 cm. A una
2. Hacer una adicin del estndar a una de ellas segunda alcuota de 25,00 mL de disolucin problema se le aadieron 10,00 mL de una
3. Llevar a volumen las dos disoluciones y medir disolucin de 23,4 ppm de quinina. Despus de diluir a 50,00 mL la absorbancia result de
0,610. Calcular la concentracin de quinina en la celda.
0,65
S S1 m Vs La adicin realizada supone, tras 0,60
la dilucin, una concentracin de 0,55
Quinina de: 0,50
S2 0,45
0,40
0,35
10 mL 23,4 g
348
4,68 g mL-1 0,30

Abs
S1 50 mL mL 0,25
0,20
0,15
0,10
Vs S1Cs Vs (0,416) (23,4)(10) 0,05
Cx 20,07 ppm
S2 S1 Vx (0,610 0,416)(25) 0,00
-13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5
S1C s Vs -1
Cx [Quinina] / g mL
S 2 S1 Vx
37
Mtodo del estndar interno Mtodo del estndar interno: Ejemplo
El Ca puede cuantificarse por espectroscopa de emisin. Al preparar la recta de

Esta metodologa intenta corregir fluctuaciones operacionales e
instrumentales calibrado, se aadi Sr a todos los patrones de Ca y a la disolucin problema, de modo
que todas las disoluciones contienen 2,50 g Sr mL-1. Se midieron las intensidades de
Se aade una concentracin fija de un estndar (interno) de una sustancia distinta de
la analizada, tanto a los patrones del analito como a la muestra problema. emisin del Ca a 422,7 nm y las del Sr a 460,7 nm. En funcin de los datos, calcular la
concentracin de Ca en la muestra problema.
El comportamiento del estndar interno debe ser similar al del analito.
Ca (g mL -1) I (422,7 nm) I (460,7 nm) I(422,7)/ I(460,7)
Su seal no debe interferir en la seal del analito. 2,00 16,6 21,5 0,772
La respuesta instrumental debida al estndar interno debera ser constante y las

4,0
4,00 37,8 24,7 1,53
posibles desviaciones se asumen que son las mismas que sufre el analito. 3,5 6,00 43,2 18,6 2,32
I (422,7 nm) / I (460,7 nm)

3,0 8,00 68,7 22,3 3,08
Se representa el cociente de seales analito/estndar interno, como en un calibrado 10,00 95,2 24,6 3,87
2,5
normal.
2,0 Muestra problema 36,3 19,4 1,87
1,5
Sanalito/Sest int 1,0 100
80
0,5
60
0,0
2 4 6 8 10
4,85 40
-1
Ca (g L ) Sin estndar interno
20
Concentracin del analito 2 4 6 8 10
Tema 4 Espectroscopa VIS - UV
1. Espectroscopa de luminiscencia molecular
2. Fluorescencia y fosforescencia
3. Quimioluminiscencia
4. Instrumentacin
5. Aplicaciones
160 780
Emisin de radiacin Fluorescencia y Fosforescencia
Incandescencia emisin de luz por parte de un cuerpo a elevada T
Luminiscencia
Fotoluminiscencia previa absorcin de luz IR, UV-Vis

NO + O3 NO2* + O2
Quimioluminiscencia NO2* NO2 + h (= 600 - 2800 nm)
Bioluminiscencia
Electroluminiscencia descarga elctrica en un gas ionizado
38
Transiciones involucradas en la fluorescencia Reglas de seleccin
Mecanismos de excitacin y relajacin Procesos y escala de tiempos
Singlet excited states Triplet excited states
Internal Vibrational Intersystem

S2 conversion relaxation crossing
S1
T1
Energy
Internal
and
external
conversion
Absorption Fluorescence Phosphorescence
S0
Ground
state 2 1 3 4
Bandas de absorcin y emisin Transiciones y energa
39
Procesos y escala de tiempos Diagrama de energa de Franck-Condon
Excitacin vibracional: Principio clsico de Franck-Condon
La transicin
tiene lugar con el
ncleo
estacionario.
Las transiciones
ms probables
tienen lugar
cuando la lnea
vertical toca la
curva superior.
Franck-Condon principle Bandas de absorcin y emisin electrnicas
De acuerdo con este principio, la absorcin de un fotn es un proceso
instantneo. James Frank se dio cuenta de lo obvio: los ncleos son
enormemente pesados en comparacin con los electrones. Durante la absorcin
de la radiacin, los que se pueden mover son los electrones, pero no los
ncleos. El ncleo atmico, mucho ms pesado, no tiene tiempo de reajustarse
durante la absorcin misma, pero s lo puede hacer despus, y esto es lo que
produce las vibraciones.
Desplazamiento de Stokes Espectros de absorcin y de emisin de la Quinina
Es la diferencia de energa entre el pico de absorcin de menor energa

y el de emisin fluorescente ms energtico.
Stokes Shift is 25 nm
Fluorescnece Intensity
Fluorescein
molecule
495 nm 520 nm
Wavelength
40
Reglas generales del espectro de fluorescencia Transiciones fluorescentes
Para una substancia pura presente en disolucin en una nica forma,

* rara vez conduce a
fluorescencia pues Eexc es
su espectro es invariable e independiente de la fuente de excitacin tan elevada que favorece Kd y
Kpd
El espectro de fluorescencia se encuentra a longitudes de onda
*: ms probable y til
para fluorescencia. El cruce
superiores al de absorcin intersistema S*1 T*1 no es
muy probable debido a una
diferencia notable de
El espectro de fluorescencia viene a ser la imagen especular de la
energa.
banda de absorcin de menor energa

n* tambin pueden
originar procesos
(especialmente si la molcula es rgida y no sufre equilibrios de disociacin en el estado excitado) fluorescentes.
Rendimiento cuntico Rendimiento cuntico
fotones emitidos kr
= =
kr + knr
fotones absorbidos
kf

k f k isc k ec k ic k pd k d
Tiempo de vida de la fluorescencia ()
Tiempo que transcurre entre la absorcin y la emisin
1
=
kr + knr
Factores que afectan a la fotoluminiscencia Fluorescencia y aromaticidad
Proceso de absorcin eficiente (elevada absortividad) Las molculas con

alto grado de
Fluorescencia aromaticidad tienden
a presentar
fluorescencia
Diferencias elevadas de energa entre el singlete y triplete excitados
Diferencias energticas relativamente altas entre el singlete

fundamental y el excitado como para prevenir desactivaciones por va
no radiacional
Fosforescencia
La rigidez estructural
previene la prdida
Pequeas diferencias energticas entre singlete y triplete excitados de energa por
Baja probabilidad de transicin no radiacional entre el triplete desactivaciones
rotacionales y
excitado y el singlete fundamental
vibracionales
41
Estructuras fluorescentes Efecto de la rigidez estructural
No fluorescen La rigidez molecular tiende a inhibir la conversin interna y por tanto

favorece la fluorescencia
Cruce intersistema muy favorecido
Fluoreno Bifenilo
Fluorescen
Fluorescena
Fluorescena Fenolftalena
Efecto de la rigidez estructural Fluorescencia: heterotomos y substituyentes
Reacciones que incrementan (o disminuyen apagan-) la fluorescencia Compuesto Frmula F (nm) IF relativa
Benceno C6H5 270-310 10
pueden tener utilidad analtica como, por ejemplo, las reacciones de Tolueno C6H5CH3 270-320 17
Propilbenceno C6H5C3H7 270-320 17
complejacin de metales con ligandos orgnicos. Fluorobenceno C6H5F 270-320 10
Clorobenceno C6H5Cl 275-345 7
Bromobenceno C6H5Br 290-380 5
Yodobenceno C6H5I --- 0
Fenol C6H5OH 285-365 18
Fenolato C6H5O- 310-400 10
Anisol C6H5OCH3 285-345 20
Anilina C6H5NH2 310-405 20
Anilinio C6H5NH3+ --- 0
cido benzoico C6H5COOH 310-390 3 Probabilidad de pre-disociacin
Benzonitrilo C6H5CN 280-360 20
Nitrobenceno C6H5NO2 --- 0
O
Substituyentes deslocalizadores de e- : incrementan F
N Zn
Substituyentes de primer orden (dirigen a o-p-) donan e- al anillo: F crece (-OH, -OCH3, -CH3)
2
Substituyentes de segundo orden (dirigen a m-) retiran e- del anillo: F disminuye (-NO2, -COOH)
Efecto del tomo pesado Amortiguacin (quenching) de la fluorescencia
Disminucin de la Fluorescencia por favorecimiento del

cruce intersistema o conversiones externas
Efecto del tomo pesado

Los tomos pesados favorecen un fuerte acoplamiento spin/orbital y
por tanto un cambio de spin.
Especies paramagnticas
El O2 disuelto es un fuerte inhibidor de la

fluorescencia por favorecer el cruce intersistema (al
igual que cualquier substancia paramagntica)
42
Ecuacin de Stern-Volmer Amortiguacin (quenching) de la fluorescencia
M* M + h Fluorescencia
M* + Q M + Q + Calor Quenching
La concentracin del quencher est relacionada con la intensidad

fluorescente por medio de la ecuacin de Stern-Volmer
F0
1
F
F0
1
F
[NaI]
Amortiguacin de la Fluorescencia del triptfano 0,1 mM en

presencia de concentraciones crecientes de NaI
Efecto de la T y del disolvente Efecto del disolvente
Estado excitado
Un incremento de la T provoca una disminucin de IF Franck-Condon
E Geometra de equilibrio del estado
Un disolvente menos viscoso disminuye la IF excitado
En ambos casos se acenta la posibilidad de una conversin externa

A F
Estado fundamental Franck-

Condon
CBr4 , C2H5I : disolventes que desactivan la fluorescencia y E

Geometra de equilibrio del
favorecen la fosforescencia estado fundamental
Es = f (polaridad de los estados fundamental y excitado)
n*: estado fundamental ms polar. polaridaddisolvente: F

*: estado excitado ms polar: polaridaddisolvente: F
Efecto del pH Efecto de la adsorcin (inmovilizacin)
El pH afecta tanto a la max como al F OH

pK = 10
O + H+
Colorante ANS (8-anilin-naftalen sulfonato)
SO3-
F ~ 0 en disolucin acuosa
max: 285-365 nm 350-400 nm
F : 0,18 0,09 F = 0,98 cuando est enlazado a regiones hidrofbicas
NH de proteinas y membranas
H H H + H H H H
N N F = 16 ns, max = 454 nm
N+
: Anilina: tres formas resonantes
-
* ms bajo, menor E, mayor : se Bromuro de etidio
- ve fluorescencia en el VIS
H2 N NH2 F ~ 0 En disolucin acuosa
H
H H +
+ N Unido a cidos nucleicos
N
CH2CH3 F ~ 1, F = 26,5 ns
In anilinio: una sola forma resonante
Br-
No se observa fluorescencia en el VIS
Necesidad de tamponar disoluciones patrn y muestra
43
Efecto de la concentracin Autoabsorcin
P Auto-amortiguacin (self-quenching)
F K' (P0 P) Beer : 10 bc F K' P0 (1 10 bc ) * Colisiones entre las molculas excitadas.
P0
Desactivacin no-radiacional aumentada
Auto-absorcin
(2,303 b c)2 (2,303 b c)3
F K' P0 (1 10 bc ) Maclaurin K' P0 2,303 b c (inner cell effect, inner filter effect)
2! 3!
Solapamiento de las bandas de absorcin y
de emisin: radiacin fluorescente que no
abandona la celda.
Si 2,303 b c < 0,05 Si b c > 1,5
Trabajar con muestras diluidas (absorcin mx: 0,1)
F K' P0 2,303 b c 10 bc 1 F K' P0 K P0
Si P0= cte:
Existe un valor lmite

FK c superior para la F
Fluorescencia retardada Extincin de la luminiscencia
O O
R2
Luciferase Spontaneous
Luciferin + O2 O C C R2 CO2 + O C* Light Fluorescencia
R1
1
R
Rpida (10-8s)
Fosforescencia
Lenta (mss). Los procesos
colisionales competitivos
pueden eliminarla
completamente a no ser
que se eviten totalmente
(p.e. en un vidrio)
Extincin de la fluorescencia Time-resolved fluorimetry
La F sigue una cintica de primer orden (en ausencia de otros procesos)

Las medidas fluorimtricas estn limitadas por los blancos
Disolventes e impurezas presentan corrientes de fondo 2 ns

Se puede definir el tiempo de vida de la
fluorescencia, f , como el tiempo que ha de La seal del analito es discernible midiendo a tiempos ms largos.
trancurrir, desde que se apaga la fuente de
excitacin, para que la F se reduzca a 1/e
(0,368) de la F original
F F0 e k f t
F0
f : F0 /e; F0 e k f f ; e e k f f
e
1
ln e k f f f
kf f
44
Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin
Tiempo de vida elevado >500 s

Gran desplazamiento Stokes
Perfiles de picos de emisin finos
La F est basada en procesos de transferencia de energa del ligando al catin central.
Seguimiento de una reaccin enzimtica Marcadores fluorescentes
Green Fluorescent Protein (GFP)

procedente de las medusas es la ms
utilizada para seguir la expresin de genes.
naftilamina
Fluorforos tpicos Compuestos naturales fluorescentes
Compuesto (nm) Compuesto (nm)
Hidrocarburos aromticos Esteroides

O N O
Naftaleno 300-365 Aldosterona 400-450
+
-O S
3 SO3- N O N Pireno 370-460 Colesterol 600
Antraceno 370-400 Cortisona 570
TDI
N N
+ 1,2-benzopireno 400-450 Testosterona 580
O
= 630 nm O
Compuestos Heterocclicos Vitaminas
Cy5 HN
Quinolina 385-400 Riboflavina (B2) 565
O N O O = 630 nm
NH2 S TMR Sulfato de quinina 410-500 Cianocobalamina (B12) 305
7-hidroxicumarina 450
= 514 nm Tocoferol (E) 340
O 3-hidroxi-indol 380-460 Frmacos

HN Tintes Aspirina 335
H2N C N Fluorescena 510-590 Codena 350
N
N NH Rodamina B 550-700 Estrgenos 546
tryptophane eGFP DAPI C NH2 Azul de metileno 650-700 LSD 365
Coenzimas, cidos nuclicos, pirimidinas Fenobarbital 440

= 280 nm = 488 nm = 355 nm
Adenina 380
Adenosina trifosfato (ATP) 390
Dinucletido de la nicotinamida adenina (NADH) 460
45
Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)
FRET es una interaccin dependiente de la distancia entre los estados

excitados de dos molculas. La transferencia resonante de energa tiene lugar
cuando las molculas donora y aceptora estn a menos de 100 una de la
otra.
FRET vara con la potencia 1/6 de la separacin intermolecular, por lo que

funciona muy bien a distancias similares a las dimensiones de macromolculas
biolgicas.
FRET puede utilizarse para desplazar espectralmente la emisin fluorescente

de una combinacin molecualr.
El espectro de absorcin del aceptor debe solaparse con el espectro de

emisin del donor.
Molculas cercanas pueden transferirse energa entre ellas.
Esto sucede cuando el espectro de emisin de una solapa con el de La transferencia de energa es por va no radiacional, es decir, el donor no
absorcin de la otra. emite un fotn que es captado por el aceptor.
La transferencia de energa de resonancia puede tener lugar cuando los

compuestos donor y aceptor estn prximos (< 100 )
D* + A D + A*
Donor Aceptor
Molecule 1 Molecule 2
Fluorescence Fluorescence
DONOR ACCEPTOR
Absorbance
Absorbance
Wavelength
La FRET puede ser til para lograr un espectro de fluorescencia
desplazado a superiores.
La velocidad de transferencia est predicha por la teora de Frster

R = 1 - 10 nm
h FRET h
1
1 R0
6
2Q J ( ) 6
~ 1/R6 kT R0 9.78 10 3 D 4
D r n
Punto crtico: encontrar la pareja donor-aceptor adecuada
46
triptfano - max F = 350 nm dansilo - max Abs = 340 nm

max F = 510 nm
Ensayo de ruptura peptdica
proteasa
La ruptura del pptido supone la prdida

+
de FRET, desapareciendo la F del aceptor
El grupo dansilo es muy apropiado para FRET con protenas que contienen triptfano.
Puede unirse covalentemente a la proteina.
Bioluminiscence Resonance Energy Transfer (BRET) Luminiscencia en medios micelares
Sodio dodecil sulfato, SDS
47
Luminiscencia en medios micelares Luminiscencia en medios micelares
Concentracin micelar crtica (CMC) Concentracin micelar crtica (CMC)
Solubilizacin micelar Solubilizacin micelar
48
Fosforescencia Fosforescencia y cruce intersistema
Espectros de absorcin y emisin Fosforescencia a temperatura ambiente (RTP)
Quimioluminiscencia Qumica forense
A + B C* C + h
Deteccin de sangre con luminol

NH2 O NH2
C COO-
NH O2/OH-
+ h + N2 + H2O
NH
C
COO-
O
Barras luminosas con ester fenil oxalato
49
Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
Determinacin de agentes oxidantes Cl2, HOCl, OCl-, H2O2, NO2 Aplicaciones emergentes
Determinacin de reactivos gaseosos en reactores
Anlisis de contaminantes en el aire
Estudios atmosfricos
Indicacin del punto final en valoraciones en fase gas
Determinacin de metales traza
Determinacin de reactivos orgnicos y bioqumicos
Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia
Bioluminiscencia Bioluminiscencia
O O
R2
Luciferase Spontaneous
Luciferin + O2 O C C R2 CO2 + O C* Light
R1
R1
N
S
510-670 nm
S
HO
N
O
HO
Plantas emisoras
Gen luciferasa clonado en plantas
50
Instrumentacin: fluormetro de filtros simple Instrumentacin: fuentes
Buena estabilidad Buena estabilidad

Haz espacialmente difuso Continuo desde 300 1.300 nm
Baja intensidad Alta intensidad
Instrumentacin: espectrofluormetro Instrumentacin: espectrofluormetro
Emission
Instrumentacin: celdillas Instrumentacin: medida de la fosforescencia
51
Money (helps?) world go round! Tema 5
1. Principios de espectroscopa atmica
2. Espectros atmicos de emisin y absorcin
3. Trminos espectrales
4. Anchuras de lnea
5. Atomizacin por llama y electrotrmica
6. Eleccin de las condiciones ptimas
7. Atomizacin con fuentes de plasma
8. Atomizacin con arco y chispa
9. Instrumentacin
10. Aplicaciones
Espectrometra Atmica Diagramas de energa atmico y molecular
Emisin Atmica (EA, AE)
Kirchoff y Bunsen pioneros, s XIX E2 E2
1957: Ramrez Muoz y Burriel Mart, Flame Photometry. A Manual of

Methods and Applications primer libro sobre fotometra de llama
Absorcin Atmica (AA) E1 E1

UV-VIS UV-VIS
60: Walsh (Australia) publica los primeros trabajos en absorcin atmica
apoyado por Alkemade y Milatz en Holanda E E v2
v1
IR
Fluorescencia Atmica (FA, AF) v0
r2
r1
r0
1964: West y Winefordner comienzan a trabajar en FA con Zn, Hg y Cd E0 E0
Tipos de espectroscopias atmicas Niveles de energa de Na atmico y del in Mg(II)
Modelos similares entre tomos,

Atomic Emission pero diferente espaciado
Spectroscopy (AES)
El espectro inico es diferente al
atmico
Atomic Absorption
Spectroscopy (AAS)
Las separaciones se miden en
eV
Atomic Fluorescence
Spectroscopy (AFS) 1eV =1.602x10-19 J
= 96. 484 kJ mol-1
A medida que crece el nmero
de electrones, el nmero de
Na Mg+ niveles se incrementa y los
espectros de emisin se hacen
ms complejos
Li 30 lneas, Cs 645 lneas, Cr 2277

lneas
52
Niveles de energa de Mg atmico Espectro de emisin del Na atmico
Espectros atmicos Espectros atmicos o de lneas
Espectros de lneas: transiciones electrnicas puras

Anchura de pico: Las posiciones de las lneas estn bien definidas y son caractersticas para cada elemento
Anchura expresada en unidades de frecuencia cuando la magnitud de la seal En espectroscopa atmica es factible hacer anlisis cualitativo
es la mitad de la mxima
Valores tpicos: centsimas de
Ejemplos:
carbono
oxgeno
nitrgeno
Espectro de emisin de salmuera Ensanchamiento de las lneas atmicas
1. Incertidumbre (ensanchamiento natural de lnea)

1 h
t ; t 1; t h h; t E h; E
t
h h 1
t E ; t h
2 2 N
2 t
Relativamente pequeo (~10-4 )
2. Efecto Doppler (agitacin trmica de los tomos que varan su posicin respecto del
observador)
u 0 : frecuencia de la radiacin observada

1
c V cuando la fuente se mueve respecto al
; 0 1/ 2 detector
n u 2 V=c/n : velocidad de la radiacin en un medio
1 dado
V u : velocidad del movimiento de la fuente
lumnica (tomo) hacia el detector
53
Efecto Doppler Ensanchamiento de las lneas atmicas
u
Si los tomos se D 0 u Temperatura, masa-1
mueven hacia el
c
detector, las ondas
estn ms compactas, T
mayor frecuencia, D 0 ; D T1/2 ; D 100 N
ms corta. m
Buena aproximacin para explicar la zona central de la lnea
3. Ensanchamiento Lorentz (efecto de la presin; colisiones entre los tomos

emisores y otras partculas presentes)
Si los tomos se alejan
del detector, las ondas L P P: presin total del gas en cuyo seno se hallan los tomos del analito
se descomprimen,
frecuencia ms baja, Buena explicacin de lo que sucede en las alas de la lnea
ms larga.
4. Efecto de los campos magnticos (Zeeman) y elctricos (Stark)
Espectros de bandas de especies moleculares Espectroscopa de absorcin atmica

Fuente
P0 P
Selector Detector Procesador de la seal
de
Chopper
Muestra
Tipo Mtodo de Atomizacin Fuente de radiacin
atmica (llama) aspiracin de la muestra Lmpara de ctodo

a la llama hueco (LCH, HCL)
atmica (sin llama) disolucin de muestra HCL

evaporada y calcinada
absorcin R-X no es necesario tubo de RX0
Espectroscopa de emisin atmica Espectroscopa de fluorescencia atmica
P
Fuente Monocromador Detector Procesador de la seal P0 P
Selector Detector Procesador
de de la seal
90o
Fuente
Muestra
Muestra
Tipo Mtodo de atomizacin Fuente de
Tipo Mtodo de Atomizacin Fuente de
Radiacin
radiacin
arco arco elctrico
muestra
atmica (llama) muestra disuelta muestra
chispa arco de alto voltaje muestra
aspirada a la llama
plasma de Ar muestra calentada en un plasma de Ar
muestra
atmica (sin llama) muestra disuelta muestra
llama disolucin de la muestra aspirada a la llama evaporada y calcinada
muestra
fluorescencia RX no es necesario muestra
emisin de RX no es necesario; muestra bombardeada con e- muestra
54
Mecanismos de fluorescencia atmica Radiaciones fluorescentes resonante y normal del Tl
Resonancia Lnea directa Por etapas

normal normal
a f a f a f
Resonancia Lnea directa Anti-Stokes activada

activada activada trmicamente
trmicamente trmicamente
Desactivacin no-radiacional
a f a f a f
t t
Componentes instrumentales bsicos Absorcin atmica de una lnea de resonancia
Fuente de Sistema Sistema de Sistema de

excitacin atomizador seleccin deteccin Para que se cumpla la ley de Beer, la
espectral electrnica anchura de la lnea de la fuente ha de
ser menor que la anchura de la lnea
de absorcin por parte del vapor
atmico
Absorcin atmica de una lnea de resonancia Atomizadores utilizados en espectroscopa atmica
55
Introduccin de la muestra Introduccin de la muestra
Nebulizadores neumticos: convierten la muestra en una niebla de finas gotculas

(spray) que son portadas por el gas hacia el atomizador.
a) Tubo concntrico: gas a

elevada presin que arrastra la
muestra que sale del capilar
b) Flujo cruzado: el aerosol se
produce por un flujo transversal
al final del capilar
c) Frita cermica: bombeo del
lquido sobre un disco de frita
cermica a travs del cual fluye
el gas; produce una niebla ms
fina.
d) Babington: el lquido incide
sobre la superficie esfrica
hueca que contiene un orificio
por el que fluye el gas.
Nebulizadores ultrasnicos: la disolucin es nebulizada sobre una superficie

piezoelctrica produciendo una niebla densa y homognea.
Vaporizadores electrotrmicos:
depsito de la muestra slida o lquida sobre la superficie de un resistor
el paso de corriente a travs del resistor produce la evaporacin de la muestra
un gas (Ar) fluye a travs del resistor y porta la muestra gaseosa hacia el
atomizador
la seal obtenida es transiente en lugar de contnua
Add
NaBH4
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2
SbH3,
AsH3
Sample
Generacin de hidruros:
til para As, Sb, Sn, Se, Bi, Pb
Reaccin modelo:
3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O
56
Introduccin de muestras slidas Descarga luminiscente como fuente de plasma inico
Directa
Vaporizacin electrotrmica
Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser
Descarga luminiscente
100g min-1
Introduccin de la muestra Instrumentacin bsica tpica en AA de llama (Flame Atomic Absorption)
Chopper
Sistema atomizador: llama Sistema atomizador: llama
Nebulizador: transforma la muestra aspirada en una

neblina de gotas finsimas (spray)
Mechero: genera la llama en cuyo seno se vaporiza,
atomiza y excita la muestra.
Dos tipos fundamentales de llamas:

TURBULENTAS
Es el componente ms importante y crtico LAMINARES O PREMEZCLA (Premix)
El spray de muestra que llega a la llama sufre :
vaporizacin, atomizacin y excitacin de los tomos
El atomizador de llama consta de 2 componentes:
NEBULIZADOR Y MECHERO
57
Mecheros Mecheros de premezcla
Consumo total Premezcla Velocidad de

aspiracin:
~5 mL/min
Eficienica de
nebulizacin:
~5%
Llama turbulenta, ruidosa Llama laminar, silenciosa

Gran sensibilidad Gran selectividad
Pobre selectividad Poca sensibilidad (3% aspirada)
Aspiracin de la muestra Procesos durante la atomizacin en llama
Procesos durante la atomizacin en llama Composicin de las llamas
58
Estructura y temperatura de una llama Distribucin de metales en llama rica y pobre (lean) en combustible
Max
temperature
location about
1 cm above
the primary
combustion
zone. Optical
focus to this
region
Zona primaria: 2 C2H2 + 2 O2 4 CO + 2 H2

Zona secundaria: 4 CO + 2 H2 + O2 4 CO2 + 2 H2O
Efecto de la altura de observacin en la llama Efecto de la altura y de la velocidad de flujo
Ag (no fcilmente oxidable)

Crecimiento contnuo con la altura de la
llama
Cr (forma xidos estables)

Seal contnuamente decreciente
Predomina la formacin del xido
Mg
Compromiso entre atomizacin y formacin
de compuestos moleculares Perfil de la llama para la lnea del Ca en una llama
ciangeno-oxgeno para diferentes caudales de muestra.
Eleccin juiciosa de la altura de llama
adecuada en cada caso
Lmpara de ctodo hueco (HCL) Seccin transversal de una HCL
nodo: W, Ni, Zr
V 300 V; I = 5 20 mA
A mayor V, se obtiene intensidades ms elevadas
Inconveniente: autoabsorcin
Lmparas mixtas: Cr, Co, Cu, Fe, Mn, Ni

Ca, Mg, Al
Fe, Cu, Mn
Cu, Zn, Pb, Sn
59
Compartimento para las lmparas Lmpara de descarga sin electrodos (EDL)
0,1 5 torr til en Fluorescencia Atmica

2450 MHz
Disponible para:
Tiempo de vida > 50 h
10 veces ms intensa que HCL As, Bi, Cd, Cs, Ge,
Hg, K, Pb, Rb, Sb,
Se, Sn, Ti, Tl, Zn
Inconveniente: inestabilidad
requiere enfriamiento
Lmpara de gradiente de temperatura (TGL) Interferencias en espectroscopas atmicas
Interferencias comunes a las tres
Intensidad: Espectrales
TGL EDL > HCL Fsicas
Qumicas
1/ 2 TGL 0,001nm 1/ 2EDL
Variaciones en la T
Ionizacin
Interferencias en AA y FA:
Corriente relativamente elevada: 0,5 A
Dispersin de luz incidente (scattering)
V 30 V TGL y EDL :
se usan para As y Se
Ar: 1-5 torr < 200 nm Interferencia tpica de FA:
Filamento recubierto de xido de Ba, Ca, Sr Amortiguacin de la fluorescencia (quenching)
Interferencias Interferencias espectrales
Espectrales: solapamiento de lneas.

Interferencia espectral : proximidad de lneas < 0,1
Ms crtico en EA. Casi inexistente en AA y poco comn en FA
Fsicas: variacin de viscosidad y tensin superficial que afectan a la nebulizacin.

Anlisis de Al: 3 082,15 , 3 092,7
Afectan por igual a las tres tcnicas
Variacin de T en el atomizador: supone una modificacin del nmero de El V tiene una lnea a 3 082,11 interfiere la cuantificacin del Al?
tomos excitados.
Afecta especialmente a la EA
Ciertamente, NO
Ionizacin: disminucin de la seal analtica por produccin de iones en lugar de
tomos
M0 M+ + e- (especialmente en alcalinos y alcalinotrreos y en llamas
calientes)
Alternativa: supresores de ionizacin
60
Interferencias espectrales: correccin con dos lneas Interferencias espectrales: correccin con fuente continua
Se usa como referencia una segunda lnea procedente de la fuente

que est muy prxima a la lnea de absorcin del analito. El analito
no debe absorber a la longitud de onda de la lnea de referencia.
Cualquier absorbancia observada para la lnea de referencia se asume que

se debe a la dispersin/absorcin de especies moleculares (fondo). Restando
este valor del obtenido en la lnea del analito, obtenemos la absorbancia
corregida debida nicamente a la especie atmica de inters.
La lnea de referencia puede ser:

Impureza de la lmpara
Lnea del gas de relleno de la lmpara
Lnea no resonante del propio elemento constitutivo de la lmpara
Esta modalidad de correccin no se usa con mucha frecuencia debido a la

dificultad de encontrar una lnea de referencia adecuada.
Efecto de la T en la espectrometra atmica Efecto de la T en la espectrometra atmica
La temperatura modifica el nmero de tomos en los estados fundamental y excitado La absorcin atmica se produce en La emisin atmica tiene lugar al
la transicin desde el estado pasar de un estado excitado al
fundamental a un estado excitado fundamental
Boltzmann Equation: (E* - E0)

= La emisin estar ms afectada por variaciones de la temperatura, pues el
-E
N* = g* e kT porcentaje de tomos en el estado excitado depende fuertemente de la T
N0 g0 Temperature
in K
Ej.: Calcular el cociente N*/No para un tomo que tiene 2 niveles de energa (ambos
1.38x10-23 J/K
Number of
atoms at each Boltzmann monodegenerados) que se diferencian en 3,9710-19 J/tomo que est expuesto a una
energy Number of constant llama a 2.500 , 2.510 y 6.000 K.
levels at each
energy
(degeneracy)
2.500 K: N*/N0 = 1.01x10-5
2.510 K: N*/N0 = 1.05x10-5 (4% ms en el estado excitado para un incremento de 10 K en la T)
6.000 K: N*/N0 = 8.27x10-3
Interferencia de ionizacin Interferencia de ionizacin
Este problema se puede minimizar por la adicin de supresores de ionizacin,

que son sustancias ms fcilmente ionizables y que producen una elevada
concentracin de electrones en la llama que retrotraen o impiden la ionizacin
del analito.
Ej.: el K es un buen supresor para la determinacin de Sr.
61
Interferencias qumicas Interferencias qumicas
1. Formacin de compuestos poco voltiles Ca (PO43-, SO42-); Mg(Al) 2. Equilibrios de disociacin MO M O

Ciertos componentes de la muestra perjudican la eficiencia de la atomizacin del analito Alcalinos: xidos poco estables predominio de lneas atmicas
Alternativas: T y uso de agentes liberadores y protectores
Alcalinotrreos: xidos relativamente estables predominio de bandas
Ej.: PO43- y SO42- dificultan la atomizacin del Ca2+
NaCl Na Cl
Solucin: aadir un agente liberador o protector
VOx V Ox
AEDT: se une preferentemente al Ca2+, pero no impide la
atomizacin (protector)
AlOx Al Ox
Llamas ricas en combustible
La3+: reacciona preferentemente con el PO43-, liberando el Ca2+ TiOx Ti Ox

(liberador)
Scattering (AA y FA) Efecto de la concentracin (EA)
Una nebulizacin deficiente puede permitir que lleguen gotas gruesas a la V S h wat
B N 2 A 20 b 2
llama, que producen dispersin de radiacin, que resulta en: 4 m st
Disminucin de la potencia del haz radiante h
N 2 g 2 kT
Seales falsas (espreas): absorciones inespecficas e
N2 at*/m3 N0 g0
h
h g 2 kT wat
Quenching (AA y FA) d B A 20 b e N0 2
4 g0 m st
b
Desactivacin por va colisional con las molculas de los gases que se queman F
N 0 3 1021 C Winefordner
en la llama. Ar, N2 y gases nobles no amortiguan o apagan la fluorescencia. TQ
F: Flujo de muestra lquida aspirada (mL/s)
Alternativa: purga con Ar fondos muy bajos. B d I (wat/m 2 ) C : eficiencia en la vaporizacin

: eficiencia en la atomizacin
Q: flujo de desaparicin del vapor en la llama
T: temperatura absoluta
C: concentracin analtica de la disolucin
Efecto de la concentracin (AA) Instrumentacin: monohaz
En AA tanto la luz procedente de la LCH como de la llama alcanzan el detector

- medida de una seal pequea en el seno de un fondo grande
0 , I0 I
Lmpara Abs = K b N0 = K b C - necesidad de restar el fondo (continuo) de la llama para recoger slo la
b seal analtica procedente de la lmpara (P/P0)

Modulacin de la fuente
Efecto de la concentracin (FA) Doble haz
V S
IF
d
I F I 0 f F b N 0 C P Llama + fuente
4
I0
d
Llama sola
f: fuerza del oscilador de la transicin implicada
b tiempo
: depende de la geometra del atomizador (llama, filamento..)
F: rendimiento cuntico de la fluorescencia. Marcada La corriente oscura se anula con un obturador
dependencia de los gases de la llama (pueden quenchar) El 100%T se ajusta con un blanco aspirado a la llama
62
Instrumentacin: doble haz Ventajas de la llama como sistema atomizador
Sistema dinmico de altas T
Tremendamente estable, reproducible, fiable
Pocos efectos memoria
Combinando adecuadamente combustible y comburente se logran intervalos de T
muy amplios y se logran elevados grados de atomizacin
Atomizador barato y duradero

El haz de referencia corrige las posibles variaciones en la intensidad de la lmpara
Elevadas prestaciones en cuanto a sensibilidad y selectividad para ms de 70
El haz de referencia no atraviesa la llama. Posibles prdidas de potencia causadas por
absorcin o dispersin de la llama quedan sin compensar.
elementos medidos entre 200 - 800 nm
Desventajas de la llama: 1.- Prcticas Desventajas de la llama: 1.- Intrnsecas
Volumen mnimo de muestra lquida relativamente elevado (1,5 2 mL) Disolucin y expansin de la muestra en el caudal grande (hasta 10 L/min) de
gases que pasan por la llama: dilucin y prdida de sensibilidad
Hay que mantener la cmara de premezcla llena para garantizar un rgimen

estacionario Escaso rendimiento de atomizacin para los elementos que muestran avidez
por el O2 para formar xidos refractarios, que se suma al escaso tiempo de
residencia del analito en la llama
En disolucin acuosa la menor tensin superficial hace que el rendimiento de
la nebulizacin sea bajo (se prefieren disolventes orgnicos; adems se
mejora la combustin y se aporta calor a la llama con la consiguiente mejora Existe un margen de maniobra para modificar la proporcin de oxidante, pero
en sensibilidad) siempre habr necesidad de comburente
Gotas gruesas que llegan a la llama: absorciones inespecficas
No se pueden introducir slidos

Necesidad de trabajar con gases embotellados (riesgo relativo)
Ventajas de los atomizadores sin llama Primeras y rudimentarias Alternativas a la llama
Navecilla de Tntalo Tantalum boat (1968) : abandonado por falta de

1. Incremento de la sensibilidad. (>103) reproducibilidad
Los tomos no se expanden
Ausencia de O2 (purga con Ar) Copa de Delves (Ni) Delves cup: primer intento de confinamiento del vapor
atmico en el paso ptico. Determinacin de Pb en sangre
2. Posibilidad de usar micromuestras (5, 10, 20 L)
Atom trap: cilindro de cuarzo refrigerado (recoge
3. Anlisis de muestras slidas, sin ataque previo tomos) - calentado (desorbe tomos)
LCH D
4. Disminucin de absorciones inespecficas, facilitado por la purga con gas
noble, aunque no siempre es as
5. Seales transientes
63
Alternativas a la llama: generacin de hidruros Alternativas a la llama: vapor fro de Hg
Apropiado para grupos IV, V, VI B:

Hg: nico metal conocido que a T ambiente tiene una tensin de
Ge, Sn, Pb, As, Sb, Bi, formadores de hidruros
gaseosos y muy voltiles a T ambiente vapor tan elevada que forma vapor monoatmico como los
3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O
gases nobles (ni siquiera N2 u O2 lo hacen)
Add
NaBH4 Gran sensibilidad: no se
pierde nada de analito. No hace falta llama: el Hg0 se arrastra en estado atmico
Mtodo absoluto
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2 Estos elementos en la Mejora de la sensibilidad: Fluorescencia

llama tienden a formar
compuestos, no tomos
SbH3, AsH3 Sus lneas de
resonancia (190 nm)
Sample caen en la fuerte
Ruta alternativa
absorcin del fondo de
la llama (<200 nm) Hg0 ascarita
Gran importancia
bioinorgnica
Atomizadores electrotrmicos Atomizadores electrotrmicos
Fundamentados en trabajos
iniciales de Lvov
Introduccin de la muestra
Massmann: primer modelo con (solido, lquido, gas, lodo -slurry-)
posibilidades de comercializacin
Temp
Seal de tiempo
absorcin
Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito
Mediante purga con Ar se evita la oxidacin del C.

Necesidad de refrigeracin.
64
Operaciones en el horno de grafito Etapas de calentamiento
0-20 mL muestra (disolucin o lodos); mg de slido (anlisis directo de slidos)

Es comn utilizar un modificador de matriz que estabiliza el analito o induce la volatilidad de la matriz
Las muestras estn habitualmente acidificadas (para minimizar la adsorcin sobre los recipientes;
Para muestras lquidas:
Introduccin muestra 30-45 s secado suave
Secado (~ 100 oC) 30-60s pretratamiento trmico(charring)
5 s (rampa vertical de temperatura)
Pirlisis (hasta cenizas)
10 s ciclo de limpieza (eliminacin de cualquier resto de la matriz)
(500 - 700 C)
Paso de Ar
Atomize
Atomize analyte
Temperature (CO)
2500-2700C
Thermal
pretreatment, ash
or Char 1,000-2000 K/s
Atomizacin
(2000 - 2800 C) 500-700C
Remove matrix or promote reactions in ETA
Dry
110C Desolvate
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
50 A, 20 s
Time (s) typical
Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito Automatizacin
3600 w; 10-12 V; 400-500 A
Rampas de calentamiento: hasta 1000 C/s
Vida limitada: 200-300 firings
Posibles efectos memoria
Automatizacin sencilla:
automuestreadores
Reproducibilidad exige usar

tandas de tubos
Sensibilidad: LOD >103 AA
Equipo de AA en Quimedaf Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito
Composicin tpica del horno: Grafito

GFAAS: Graphite Furnace Atomic Absorption Spectroscopy
Longitud: 18 - 28 mm
Volumen de muestra: 5 - 100 L
Vida del horno: 200 - 1000 ciclos
Temperatura mxima: 3000C para evitar descomposicin del grafito
El C puede actuar como reductor de iones metlicos
Flujo de Ar: evita oxidacin del C graftico
Otros materiales: Ta, W, Pt

Se requiere alto punto de fusin
No debern emitir radiancia a alta temperatura (desventaja del W y Ta)
65
Atomizadores electrotrmicos vs. llama Filamentos
+ Sensibilidad: mejores lmites de deteccin (elevados tiempos de residencia Filamento de West Mini-Massmann.
del vapor atmico en el atomizador) Nube atmica no confinada (Geometra cerrada)
+ Menor volumen de muestra
+ Amplia gama de estados de muestra
+ Menor dependencia de la seal de las caractersticas fsicas de la muestra

(viscosidad, tensin superficial y densidad) LCH
LCH
+ La purga con Ar disminuye la probabilidad de formacin de xidos y
facilita una mayor poblacin de vapor atmico
Paso ptico
Donega & Burgess
- Serios efectos de matriz, de formacin de compuestos interelementales y Navecilla de Ta +
-
de memoria (Geometra abierta)
- Reproducibilidad inferior ( 5- 10%)
vaco
- Tiempo de anlisis ms largo
Son, por su geometra, ms adecuados para Fluorescencia que para Absorcin.
- Elevado coste; necesita ms mantenimiento
Filamentos Atomizadores electrotrmicos vs. llama
Filamento con cpsula para lograr confinamiento del vapor atmico
Horno de grafito: interferencias Efectos de matriz detectadaos por adiciones estndar
Qumicas
Causadas por la muestra
Volatilizacin de analito como sales voltiles
Disminucin de la eficiencia de atomizacin
Causadas por el aparato o por el mtodo
Formacin de carburos
Condensacin
Formacin de nitruros
Efectos memoria
Espectrales (Fsicas)
Emisin de luz por parte del grafito incandescente
Absorciones no especfica:
Dispersin de la radiacin
Formacin de especies moleculares
Formacin de haluros estables
66
Eliminacin de los efectos de matriz Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982)
1. Adicin de modificadores de matriz

Sustancias que ayudan a que el proceso de atomizacin tenga lugar del
modo ms homogneo posible y en el momento adecuado.
Aditivos que modifican las propiedades fsico-qumicas de la muestra para
favorecer la vaporizacin y atomizacin
Recetas especficas para elementos y matrices particulares
Ej.: NH4NO3, voltil, facilita la eliminacin de la matriz durante la calcinacin

y ayuda a homogeneizar la nube atmica
Calentamiento de la
NH4H2PO4, retenedor de sustancias que pueden irse en la etapa de muestra por radiacin y
charring
no por contacto.
O2 se adsorbe en las paredes del tubo y favorece una buena atomizacin
(adems de ayudar a quemar la materia orgnica restante)
2. Superficie del horno

Uso de grafito piroltico, menos poroso, que facilita atomizaciones
ms reproducibles
Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982) Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982)
Corte transversal del horno y plataforma
La muestra se coloca en la plataforma
La plataforma se calienta ms lentamente que la

pared del tubo de grafito
La vaporizacin de MX
colocado en la plataforma
se retrasa hasta que la
pared y el gas estn
suficientemente
calientes para atomizar MX
Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982) Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982)
Tatomizacin
Approx
gas temp
seen by
analyte
Tpirlisis
tiempo Appearance
temperature
La muestra situada en la plataforma solo se atomiza cuando

la pared se calienta suficientemente para producir tomos
67
Correccin de fondo con lmpara de Deuterio Correccin de fondo mediante el efecto Zeeman
Zeeman normal: el
La dispersin o absorcin por parte de la matriz (fondo) ser el principal campo magntico
causante de la disminucin de la potencia radiante cuando se ilumina con la Lneas difieren ~0,01 nm produce
fuente de continuo. desdoblamientos
idnticos en los
estados
fundamental y
excitado
Niveles
energticos
Transicione
s
Espectros

- +
Sin Campo magntico Con Campo magntico
Ingle and Crouch,

Spectrochemical Analysis
Correccin de fondo mediante el efecto Zeeman Zeeman vs. Deuterio
+ Corrige muy bien el fondo por realizar la correccin prcticamente a la misma del analito
+ Corrige absorciones de fondo de hasta 2 unidades de absorbancia
+ Corrige interferencias espectrales cuyas lneas estn separadas al menos 0,02 nm
+ No requiere alineamiento ni ajuste entre las dos fuentes de radiacin
+ Es particularmente til en el anlisis de muestras slidas
- Puede presentar lecturas dobles (para concentraciones altas puede dar la misma absorbancia que para concentraciones
bajas)
1. Luz no polarizada procedente de la LCH (A) pasa a travs del polarizador rotatorio (B) - Prdida de energa del sistema ptico debida a los polarizadores (prdida de
sensibilidad)
2. El haz se desdobla en componentes perpendiculares y paralelos (C)
3. La luz entra en el horno sometido a un campo magntico, dando 3 picos de absorcin (D) - Coste elevado y manejo complicado
4. El analito solamente absorbe radiacin polarizada paralela al campo magntico, mientras que el - El sistema de introduccin de muestras en la cmara debe estar automatizado
fondo molecular absorbe siempre (E)
5. El resultado es un modelo cclico de absorcin (F) - Hay elementos que presentan efecto Zeeman normal (Cd, Zn), pero la mayora
6. La diferencia entre la absorbancia durante el semiciclo paralelo y el perpendicular proporciona presentan Zeeman anmalo, con muchos componentes, reducindose la sensibilidad en
el valor corregido con respecto al fondo. la determinacin del elemento en un 10 - 50%
Correccin de fondo Smith-Hieftje Smith-Hieftje vs. Deuterio
+ Puede trabajar en la zona del VIS-UV sin necesitar otro tipo de

Auto-inversin con lmpara
auto-absorcin
+ Corrige hasta tres unidades de absorbancia
+ El equipo es ecnomico y de sencillo manejo
- Peor sensibilidad (30 - 40% menos)
Smith-Hieftje vs. Zeeman
+ No proporciona lneas dobles de los calibrados

+ No pierde energa por el empleo del polarizador
+ Es mucho ms econmico
+ Puede utilizarse en llama y en cmara de grafito
+ Presenta muy buenos lmites de deteccin
Cualquier absorbancia observada durante el pulso de corriente elevada se
asume que es debido al fondo y se resta de la seal analtica
68
Anlisis de muestras slidas Introduccin de muestras slidas
Directa
+ Se elimina -o minimiza- el tratamiento de las muestras Vaporizacin electrotrmica
+ No tiene lugar la retencin de analitos en los residuos insolubles Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser
+ Se minimiza la posibilidad de contaminacin de la muestra
Descarga luminiscente
+ Se evita el uso reactivos qumicos
- Posibles prdidas de muestra y/o contaminacin durante la

transferencia al atomizador
- Hay que pesar cada rplica independientemente
- Calibracin ms complicada
- La accin de los modificadores no es tan eficaz debido a la menor

interaccin entre modificador y analito ocluido en el slido
- Es prcticamente imposible diluir la muestra slida
Introduccin de muestras slidas Introduccin de muestras slidas
Directa Directa
Vaporizacin electrotrmica Vaporizacin electrotrmica
Ablacin por Arco o Chispa Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser Ablacin por Lser
Descarga luminiscente Descarga luminiscente
Atomic Fluorescence Spectroscopy Atomic Fluorescence Spectroscopy
A. Instrumentation The fluorescence signal can be saturated so that it no longer depends

upon the source intensity.
Atomizer
Source Needs to be high intensity; Wavelength
usually EDL or laser. Selector This is the desired situation because source fluctuations will not affect the
Detector fluorescence signal.
Chopper modulation used the
remove source beam Chopper
B. Interferences same as AAS
scatter.
Source C. Applications
Atomizer most commonly flame;
also ETA, glow Commonly used for metals in complex matrices such as oils, seawater,
discharge, or ICP. biological systems, etc..
Wavelength Selector grating monochromator (Dispersive) but not always Detection limit normally 1 50 ppm.
necessary (Nondispersive).
Detector Photomultiplier tube or a diode array
69
Espectroscopa de Emisin Atmica Espectroscopa de Emisin Atmica
La relajacin casi instantnea de las especies excitadas viene

acompaada de la emisin de radiacin UV-Vis a longitudes de onda
Comienzos S XIX: llama de alcohol (Brewster, Herschel, Talbot, Foucalt)
discretas (lneas) tiles para el anlisis cualitativo y cuantitativo.
Mediados S XIX: Descubrimiento de Cs, Tl, In, Ga por espectroscopa La fuente de excitacin para promover las especies qumicas
a sus correspondientes estados excitados puede ser:
atmica (Bunsen, Kirchoff) Plasma
Llama
1877: Gouy disea el nebulizador neumtico Descarga elctrica (arco y chispa)
Descarga luminiscente (glow discharge)
1920s: Uso de arcos y chispas para AES Ablacin por lser
1930s: Primer espectrmetro comercial (Siemens-Zeiss) En Emisin Atmica (EA, AES), medimos la emisin de luz procedente
de la desactivacin radiacional de los tomos excitados, cuya
1960s: Fuentes de plasma (comercializados en los 70) intensidad es proporcional a la concentracin de los tomos en el
estado excitado alcanzado, que a su vez- es proporcional a la
concentracin de tomos en el estado fundamental.
Espectros de Emisin Atmica Emisin atmica en llama (Flame Atomic Emission Spectroscopy, FAES)
Numerosas interferencias espectrales
Lneas: Bandas:
Reacciones de recombinacin:
LOD en llama (FAES, FES) Arcos y Chispas
Funda negativa (e-)

alrededor del nodo
Barato
Limitado en prestaciones V
Plasma neutro entre
Muy til para alcalinos y los electrodos
Rarc
alcalinotrreos
Temperaturas bajas para Funda positiva alrededor

del ctodo
lograr la atomizacin de
Muestra
otros muchos elementos
Arco: Descarga elctrica entre dos

Claramente desplazada por electrodos conductores (1-30 A)
la absorcin atmica Chispa: Descarga intermitente de
alto voltage (pocos s)
70
Arcos y Chispas: espectros de emisin Potenciales de ionizacin
A) Contnuo: procedente de la radiacin trmica
B) Bandas: grupos de lneas muy prximas entre s, que se acumulan en una

zona de mxima intensidad (cabeza de banda), causadas por emisin
radiacional de molculas excitadas elctricamente (ej.: OH, ciangeno CN,
SiO, CaF2)
C) Lneas: Emisin por parte de tomos elctricamente excitados.
Potencial de resonancia de arco: potencial que es necesario aplicar para

alcanzar el primer estado excitado: E1 E 2 /h
Potencial de excitacin (en eV) es el potencial que hay que comunicar a
un electrn para que por choque con el tomo lo lleve al primer estado
excitado.
Lneas ms intensas: lneas persistentes o rayas ltimas
Arcos y Chispas: espectros de emisin Arcos y Chispas: espectros de emisin
lneas de arco: todas las comprendidas entre el potencial de

Conclusiones prcticas
resonancia y el potencial de la primera ionizacin. Son las que
Los espectros obtenidos dependern de:
corresponden al espectro atmico (tomo neutro)
A) Naturaleza de la especie excitada
lneas de chispa: todas las comprendidas entre el potencial de
B) Naturaleza de la fuente de excitacin elctrica
la primera ionizacin y el de la segunda ionizacin. Son las que
corresponden al espectro inico monovalente (M+)
Pionizacin, Presonancia arco, riqueza de lneas
Atomizador Tipo de espectro

Bunsen: Li, Na: 2 lneas; K: 3 lneas; Rb: 4 lneas; Cs: 6 lneas
Llama Atmico (alcalinos y
alcalinotrreos)
Arco Atmico Arco y chispa (10 eV): capacidad de excitar tomos con potencial de
Chispa Inico excitacin inferior a 10 eV (70 elementos)
Plasma Inico
Emisin con Arco Emisin con Chispa
Muestra en polvo situada en la copa de grafito Elevado voltaje (~kV)

Baja Intensidad (~mA)
Bajo potencial (~ 40 V) Seal intermitente (s - ms)
Alta intensidad (~ 10 A) Temperatura hasta 40.000 C
Arco continuado hasta consumicin de la muestra El potencial elevado origina un espectro

fundamentalmente inico
La baja energa de excitacin origina espectros atmicos

El movimiento de la chispa sobre la superficie de
la muestra proporciona un muestreo
representativo con buena precisin (0,1-1%
Precisin baja debida al movimiento errtico RSD), pero pobre sensibilidad (LD ~0,01%)
La volatilizacin de diferentes metales tiene lugar de modo Mucho ruido elctrico

diverso, luego la cuantificacin mltiple es difcil La seal ha de integrarse a lo largo del tiempo
71
Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin
Comparativa de caractersticas analticas Aplicabilidad
Sensibilidad
300 nm 400 nm
AA, FA EA, AA, FA EA
seal AA ruido AA
103 103 Fuentes principales de ruido:
seal FA ruido FA
sputtering de la lmpara
Selectividad oscilaciones de la llama

shot noise del detector
AA FA > EA
FA: Hg, Zn, Cd, Pb, Pt, Ta, txicos En FA no se percibe el ruido de la lmpara.
y los ms voltiles El ruido limitante es el shot noise. Se
puede incrementar la potencia de la AA: Precisin < 1% a nivel de trazas (ppm)
EA: Alcalinos y alcalinotrreos
lmpara lo que se desee: mejor
EA: Precisin 2 - 5 %
AA: el resto sensibilidad.
FA: Precisin 2 -3 %
Emisin atmica en un plasma Inductively Coupled Plasma (ICP)
Plasma: mezcla gaseosa neutra a elevada temperatura con gran densidad de

Una chispa de una bobina Tesla ioniza el gas Ar y
partculas cargadas positivamente (cationes) y negativamente (electrones) Iones forzados a
moverse en un
cuyas propiedades estn fuertemente afectadas por su ionizacin. produce electrones libres
espacio cerrado;
la resistencia al
moviemiento Los electrones son acelerados por el campo de
produce el
calentamiento
radio-frecuencia
Los electrones acelerados colisionan con los

tomos transfiriendo su energa a toda la mezcla
gaseosa
El plasma se mantiene a unos 6 000 10 000 K

gracias a la absorcin por parte de los iones y
electrones de la energa de la bobina de induccin
Generacin de plasmas:
Los iones y electrones interaccionan con el campo
Acoplamiento inductivo (ICP) magntico fluctuante y describen recorridos anulares
Corriente continua (DCP) cerrados
Microondas (MIP) El flujo tangencial de Ar enfra las paredes

interiores de cuarzo y centra radialmente el plasma
72
Inductively Coupled Plasma (ICP): Ventajas Inductively Coupled Plasma (ICP): Consumo de Argon
Tiempo de residencia ~largo (2-3 ms) desolvatacin y volatilizacin eficientes

Zona analtica (azul)
Elevadas temperaturas atomizacin ms completa y excitacin ms efectiva
Atmsfera inerte de Ar previene formacin de xidos, alargando el tvida del analito Zona de radiacin inicial (roja)
Pequea zona de emisin intensidad ms elevada y ausencia de autoabsorcin
Ionizacin relativamente grande susceptible de acoplamiento con MS Fuente de RF: 1-2 kW a 27 MHz
Bobina Zona de induccin

refrigerada
por agua
Antorcha
de cuarzo Ar que forma y sostiene el plasma (10-20 L min-1)
Flujo de gas auxiliar (0,5 L min-1)

Flujo axial del aerosol que arrastra la muestra (1 L min-1)
Introduccin de la muestra en el Plasma (ICP) Prestaciones del ICP
Puede identificar y cuantificar todos los elementos (excepto Ar)

Capaz de un verdadero anlisis multielemental simultneo en poco tiempo (30 s)
en unas condiciones de atomizacin-excitacin uniformes para todos los elementos
Permite la determinacin de elementos que tienden a formar xidos refractarios
(altamente resistentes a la descomposicin trmica) como B, P, W, U, Zr y Nb
Se pueden determinar elementos no-metlicos como Cl, Br, I y S (aunque <180
nm)
Amplios intervalos lineales de calibracin (hasta 6 rdenes de magnitud) gracias a
una T relativamente uniforme en la seccin del plasma que evita el fenmeno de
1 mL min-1 autoabsorcin
Interferencias qumicas mnimas gracias a las altas T
Interferencias espectrales evitables con uso de lneas alternativas
Diferentes posibilidades para la introduccin de la muestra
Ms sensible que la FAA y comparable a GFAAS
Diversos grados de automatizacin posibles
Cubre intervalos espectrales mayores (190 900 nm)
ICP: modus operandi ICP: interferencias fsicas
Preparacin de la muestra: similar a AAS Asociadas a los fenmenos de nebulizacin y transporte de la muestra
Determinacin de elementos: se pueden determinar casi todos los elementos Cambios de viscosidad y tensin superficial pueden originar resultados muy
imprecisos, especialmente en
Sin embargo, hace falta un espectrmetro de vaco para medir B, N, P, S y muestras con slidos disueltos
C, pues sus lneas de emisin caen por debajo de 180 nm donde absorben muestras con elevada concentracin de cidos
los componentes del aire. Formacin de sales en la punta del nebulizador, que afecta a la nebulizacin y
al flujo del aerosol
Las condiciones ptimas para la mayora de los metales no sirven para los
Remedios
alcalinos: las lneas ms prominentes de Li, K, Rb y Cs estn en el IR
Dilucin de la muestra
cercano
Uso de una bomba peristltica
Seleccin de lnea: no siempre la lnea ms intensa es la ms apropiada Recurrir a un patrn interno

Usar un nebulizador mejor (ultrasonidos)
Precisin: 0.3 3% LOD: ppt
73
ICP: desventajas ICP: instrumentacin secuencial
2400 surcos/mm: 160-380 nm

Espectros complejsimos (cientos a miles de lneas) 1200 surcos/mm: 380-850 nm
Elevado nmero de variables experimentales a
optimizar (mtodo simplex)
Componentes pticos de alta resolucin y calidad
Instrumentacin cara y personal muy especializado
ICP: instrumentacin secuencial ICP: instrumentacin con deteccin simultnea
ICP: instrumentacin con deteccin simultnea ICP: instrumentacin multicanal con PMT
Y
La curvatura corresponde a la Crculo de Rowland PMT
curva focal de la rejilla cncava
Las diferentes frecuencias son

dispersadas por la rejilla y
enfocadas hacia las rendijas y los
PMT posicionados a lo largo del
crculo de Rowland
Las rendijas se configuran de

modo que transmitan lneas de un
elemento especfico
74
Monocromacin con red de escalera ICP: instrumentacin multicanal con CCD
Monocromador doblemente dispersante

Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional
Los dos elementos dispersantes son una red

de escalera y un prisma de baja dispersin.
Sensibilidad comparada en espectroscopa atmica Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica
Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica: LODs Comparacin de caractersticas analticas en espectroscopa atmica: LODs
Nmero de elementos detectados a concentraciones de:
Mtodo < 1 ppb 110 ppb 11100 ppb 101500 ppb > 500 ppb
Emisin ICP 9 32 14 6 0
Emisin atmica de llama 4 12 19 6 19

Fluorescencia atmica de llama 4 14 16 4 6
Absorcin atmica de llama 1 14 25 3 14
Las tcnicas de absorcin atmica y de emisin por ICP son

mas bien complementarias que competitivas.
75
GF-AAS vs. ICP-AES Plasma DCP (Direct Current Plasma)
GF-AAS ICP-AES Se alcanzan temperaturas de 10 000 K
Bajo coste Coste moderado-alto

El plasma se forma tambin con Ar
Monoelemental Multielemental
Consume menos Ar y la fuente DC
es ms simple y menos cara
Interferencias de Interferencias espectrales
atomizacin
Bajo procesamiento de Elevado procesado de Hay que cambiar los electrodos de

muestras muestras grafito cada pocas horas;
comparativamente, el ICP requiere
menos mantenimiento
Entre las dos tcnicas se pueden determinar unos
70 elementos por debajo de las ppb
Acoplamiento ICP-MS Acoplamiento ICP-MS
Acoplamiento ICP-MS: control de calidad y sensibilidad Tema 6.
1. Clasificacin de las Tcnicas Electroanalticas.
2. Leyes Generales.
3. Fenmeno Electrdico.
4. Lmite de Electroactividad.
5. Montaje Potenciosttico.
6. Electrodos selectivos de iones.
76
Clasificacin Campos de aplicacin emergentes
Potenciometra con electrodos metlicos

Tcnicas
Estticas Potenciometra con electrodos de membrana
Difusin pura
Hidrodinmica
Voltametra Polarografa
Tcnicas de redisolucin
Potenciostticas
Culombimetra potenciosttica
Cronoamperometra
MTODOS Tcnicas
ELECTROQUMICOS Dinmicas
DE ANLISIS Potenciometra electroltica
Galvanostticas Cronopotenciometra
Culombimetra galvanosttica
Tcnicas conductimtricas
Tcnicas
no electrdicas
Tcnicas electroforticas
Analizador automtico Electrodos para voltametra. Electrodos de carbono
Electrodo de gotas de mercurio Leyes generales de la electrolisis
Primera ley de Faraday

Q QM
Ox + n e Red NOx (moles) ; mOx (gramos)
nF nF
Segunda ley de Faraday

La masa de sustancia electrolizada es proporcional a su peso
equivalente (M/n).
Cuando i cte.: Q idt
0
Cintica:
dQ dN dNOx
i nF Ox nFA nFA nFA
dt dt Adt
[ ] mol cm 2 s 1[ ]
77
Reaccin electrdica Mecanismos y regmenes de transporte en celdas electroqumicas
Ox ne Red
Transferencia de masa
Transferencia electrdica en la superficie del electrodo
Reacciones qumicas precedentes y subsiguientes
Transporte de la sustancia hacia el electrodo Electrodos ideales
dC d
D uC Cv Nernst-Planck
dx x 0 dx x 0
DgradC uCgrad Cv
Flujo difusional, Migracin inica Transporte

por gradiente de convectivo
concentracin.
u= zFD/RT: movilidad de la especie inica

grad =: intensidad del campo elctrico
v: velocidad hidrodinmica del fluido
Electrodos ideales Interfaz del electrodo
78
Potenciales en la interfaz I.P.E.: Capacidad de la doble capa
Ventanas de electroactividad Montaje clsico
Montaje potenciosttico de tres electrodos Potenciostato de tres electrodos
79
Electrodos selectivos de iones Electrodos selectivos de iones
Membrana Propiedades de las membranas Membrana Propiedades de las membranas

No cristalinos No cristalinos
Vidrio Vidrio
Lquido La sensibilidad y selectividad inherentes a las Lquido La sensibilidad y selectividad inherentes a las
Lquido inmovilizado membranas son debidas a: Lquido inmovilizado membranas son debidas a:
Cristalinos Cristalinos
Baja solubilidad Baja solubilidad
Monocristal Monocristal
Policristal o mezcla de cristales Cierta conductividad elctrica: Policristal o mezcla de cristales Cierta conductividad elctrica:
migracin de iones sencillos cargados migracin de iones sencillos cargados
en su interior. en su interior.
Reactividad selectiva con el analito: Reactividad selectiva con el analito:

intercambio inico intercambio inico
cristalizacin cristalizacin
complejacin complejacin
Electrodos de membrana lquida Electrodo selectivo de calcio
Transporte a travs de la membrana Electrodo de membrana lquida vs. vidrio
80
Respuesta nerstiana Lmites de respuesta ideal
Ion Selective Electrodes (I.S.E.) Ion Selective Electrodes (I.S.E.)
Membrana de gases Respuesta de una sonda de gases
CO 2 (ac) CO2 (g) CO 2 (ac)

dis. externa membrana dis. interna
Cte.
CO 2 (ac) H2O HCO 3- H
Global : CO 2 (ac) H2O H [H ]int [HCO3 ]int

HCO
-
3 K

int [CO 2 ]ext
dis. externa dis. interna
[H ]int K
K 1 [H ]int K1[CO2 ]ext
[CO 2 ]ext [HCO3 ]
E vidrio L 0,059 log K 1 [CO 2 (ac) ]ext

L'0,059 log [CO 2 (ac) ]ext
81
Sensores de gases Sensores de gases: cintica de los equilibrios
Desventaja de los
electrodos de gases:
tiempo de respuesta
relativamente largo:
1-7 min de equilibracin
Sensores de gases: ejemplos Biosensores
"Un biosensor es una herramienta

o sistema analtico compuesto por un material
biolgico inmovilizado (tal como una enzima,
anticuerpo, clula entera, orgnulo o
combinaciones de los mismos), en ntimo
contacto con un sistema transductor adecuado
que convierta la seal bioqumica en una seal
elctrica cuantificable"
Potentiometric biosensor Electrodos enzimticos: sensor de urea
(NH2 )2 CO 2H2O H 2 NH4 HCO 3

NH4 NH3 H
82
Electrodos enzimticos: sensor de urea Transduccin potenciomtrica vs. amperomtrica
Biological specificity of enzyme catalyzed reactions Electrodo de membrana cristalina
Electrodo de membrana cristalina Crystalline membrane electrode
Fluoride Electrode
- LaF3 crystal doped with EuF2 Usually ionic compound
- mechanism similar to pH electrode with potential developing at two Single crystal
interfaces of the membrane from the reaction:
Crushed powder, melted and formed
LaF3 LaF2+ + F- Operation similar to glass membrane
Solid Solution F electrode

(membrane surface)
Ionic strength adjustment
The side of the membrane with the lower aF-
becomes positive relative to the other
surface:
Total Ionic Strength
Adjustment Buffer (TISAB)
5<pH<8
Eind = L+ 0.0592 pF
83
Electrodo de membrana policristalina
AgCl; AgBr: ion Ag+ mvil. Fotosensibles.

Alternativa: Ag2S
Ag2S
+ AgX
Ag2S + AgX (Cl-, Br-, I-)
Ps AgX > Ps Ag2S ( 10-52)

AgX Ag+ + X- dis
Ag2S
+
Ag2S + MS (Cu2+, Pb2+, Cd2+) MS
MS S2- + M2+ dis
Mtodos Coulombimtricos
Two main electroanalytical methods based on electrolytic oxidation or reduction of an

analyte for sufficient period to assure quantitative conversion to new oxidation state:
1. Constant-Current Coulometry 2. Electrogravimetry
In the first, quantity of electricity needed to complete the electrolysis serves as

measure of amount of analyte present. Total charge, Q, in coulombs passed during
electrolysis is related, according to Faradays law, to the absolute amount of
analyte:
Q=nFN
n = # mol of electrons transferred per mol of analyte
F = Faradays constant = 96485 C mol-1
N = number of mol of analyte
Coulomb = C = Ampere second = As
For electrogravimetry, product of electrolysis is weighed as a deposit on one of the

electrodes.
Coulombimetra a corriente constante Coulometric Methods:

The current is kept constant until an indicator signals completion of the analytical
reaction. Three electroanalytical methods based on electrolytic oxidation or
The quantity of electricity required to attain the end point is calculated from the
magnitude of the current and the time of its passage. reduction of an analyte for sufficient period to assure quantitative
Controlled-current coulometry, also known as amperostatic coulometry or coulometric conversion to new oxidation state:
titrimetry
When called coulometric titration, electrons serve as the titrant.
1. Constant-Potential Coulometry
2. Constant-Current Coulometry
Controlled-current coulometry, has two advantages over controlled-potential coulometry:
3. Electrogravimetry
First, using a constant current leads to more rapid analysis since the current does not
decrease over time. Thus, a typical analysis time for controlled current coulometry is In first two, quantity of electricity needed to complete the
less than 10 min, as opposed to approximately 30-60 min for controlled-potential
coulometry. electrolysis serves as measure of amount of analyte present.
Second, with a constant current the total charge is simply the product of current and
time. A method for integrating the current-time curve, therefore, is not necessary.
For electrogravimetry, product of electrolysis is weighed as a
Other necessary instrumental components for controlled-current coulometry is an deposit on one of the electrodes.
accurate clock (a digital clock provides accurate measurement of time, with errors of 1
ms) for measuring the electrolysis time, te, and a switch for starting and stopping the
electrolysis.
84
I. Coulombimetra a E = cte. I. Coulombimetra a i = cte.
I. Reactivo Karl Fischer
I. Coulometry
Mezcla disuelta en CH3OH de: Based on the same reaction as volumetric

Karl Fischer Titration:
I2 C 5 H5 N SO2
1 : 10 : 3 H2O + I2 + SO2 + RN + ROH (RNH)SO4R + 2(RNH)I
+ - + -
- Iodine reacts with water 1:1
N I2 + N SO2 + N + H2O 2 NH I + N SO3
- The solvent methanol is involved in the reaction.
- A suitable base keeps the pH 5 - 7
Se hace en medio metlico:
+ - + - But iodine will be produced just in time from iodide:
N SO3 + CH3OH NHCH3OSO3
Para evitar:
2 I- I2 + 2 e-
N SO3 + H2O NHSO4H Anodic Oxidation
85
I. Iodine Production
+ Anode
Resolution: 0.1 g water
Iodine production by oxidation
- +
2 I- I2 + 2 e - Detection limit: 5 g water
for 5 g sample 1 ppm
Cathode
Hydrogen production by reduction Measuring range:
+
10 g - 100 mg water/sample
2 H + 2 e- H2 1 ppm - 5 % water
H+ H Side reaction:
-
Reduction of sulfur components.
- After 1 - 2 weeks, smells like mercaptans.
I- I
Change catholyte every week!
86
I. Electrogravimetra
Coulometric Titrations:
Uses titrant that is electrolytically generated by constant current.
Advantage: eliminate problems with preparation, standardization,

and storage of standard solutions
Potential sources of error:

1) Variation in current during electrolysis
2) Departure from 100% efficiency
3) Error in measuring current
4) Error in measuring time
5) Difference between equivalence point and end point
I. Electrogravimetra
Tema 7.
1. Etapas de la Reaccin Electroqumica: control difusional
2. Capa de difusin
3. Hiptesis de Nernst
4. Flujo difusional y convectivo
5. Leyes de Fick.
6. Curvas i-E.
7. Potenciales de equilibrio, mixto y lmite.
Procesos Faradaicos y No Faradaicos Transporte de la sustancia hacia el electrodo
dC d
D uC Cv Nernst-Planck
dx
x 0 dx x 0
DgradC uCgrad Cv
Q QM
NOx (moles) ; mOx (gramos)
nF nF
Flujo difusional, Migracin inica Transporte
por gradiente de convectivo
concentracin.
u= zFD/RT: movilidad de la especie inica

grad =: intensidad del campo elctrico
v: velocidad hidrodinmica del fluido
87
Control difusional Capa de difusin de Nernst
Hiptesis de Nernst Difusin pura en funcin del tiempo
Corriente lmite de difusin Control difusional
La velocidad de la reaccin electroqumica es funcin del flujo de sustancia que llega al

electrodo por unidad de tiempo y de superficie:
C dC
D ; difusin plana : D dx Primera Ley de Fick
x x 0 x 0
La Segunda Ley de Fick expresa la variacin de la concentracin con respecto del tiempo,
para cada distancia al electrodo. 2
C C
D 2
t t x
El perfil del gradiente de concentracin en la interfaz, se obtiene integrando esta
expresin, y resulta:
C C* Sustituyendo en la expresin de i:

x x 0 Dt
C* D1/2
i nFAD nFAC * 1/2 1/2 kt 1/2 Cottrell
Dt t
Disolucin en reposo; E constante; geometra plana
88
Corriente lmite de difusin Corriente lmite de difusin
Es aquella que se obtiene para un flujo mximo de sustancia. i

CRed(x 0) CRed nd (i 0)
*
i Red
C(x 0) C*
D
C
D
C * C(x0) ; cuando C 0 : nd
COx(x0) COx
*

i
(i 0)
(x 0) ndOx
x Las corrientes mximas de oxidacin y reduccin se escribirn:
C* D iRed ndRedCRed
*
; iOx ndOx COx
*
mx D id nFAmx nFA C*
Sustituyendo CRed(x=0) y COx(x=0) y operando:
Para valores intermedios de i:
RT DRed RT (i iOx ) Curva i-E cato-andica
E E0 ln ln
nF DOx nF (iRed i)
i nFA C * -C(x 0) ndC * -C(x 0)
D
RT DRed RT i
E E0 ln ln Curva i-E andica
nF DOx nF (iRed i)
FAD D Constante de velocidad de
d ; : K D [ ] cm s-1 transferencia de masa.

RT DRed RT (iOx i)
E E0 ln ln Curva i-E catdica
nF DOx nF i
Curva i-E andica Curva i-E andica
Cuando E>>E0, i iRed Cuando E<<E0, i iOx
iOx
100 100 i
nF
1 exp (E E0 )
50 50
RT
i /u.a.
i / u.a.
0
nF 0
iRedexp (E E 0 )
RT
-50 i -50
nF
1 exp (E E0 )
-100
RT -100
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
E/V E/V
Curva i-E cato-andica Curvas i-E: representacin conjunta
nF
iRedexp (E E0 ) iOx
i RT
nF
1 exp (E E0 ) 100 0
E = 0,8 V
100
RT
50
50
i / u.a.
0
i / u.a.
-50
-50
-100
-100
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 E/V
E/V
89
Curvas i-E reversibles en rgimen convectivo Flujo difusional vs. convectivo
*
RT COx
E eq E ln * ; i 0
0
nF CRed
i
RT COx(x0)
E el E0 ln ; i0
nF CRed(x 0)
Potencial de semionda Oxidacin andica de un metal
Aquel potencial para el que la intensidad es la semisuma Mn n e - M ; EM0 n /M

de las intensidades lmites de oxidacin y reduccin.
i i
CMn (x 0) CM* n
RT DRed RT (i iOx ) iRed iOx ndMn ndMn
E E0 ln ln i
nF DOx nF (iRed i) 2
RT RT i
iRed iOx E EM0 n /M lnCMn (x 0) EM0 n /M ln
iOx nF nF ndMn
RT DRed RT 2
E1/2 E0 ln ln
nF DOx nF i iRed iOx
Red
2
iRed iOx
RT DRed RT 2
E0 ln ln
nF DOx nF iRed iOx nF
i ndMn exp (E EM0 n /M )
2 RT
RT DRed
E0 ln E0
nF DOx
Potenciales de equilibrio, mixto y lmite Tema 8.
100
50
Potencial de equilibrio Potencial mixto

i / u.a.
1. Valoraciones amperomtricas y potenciomtricas.

-50
2. Sistemas electroqumicos indicadores de reacciones en

-100
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
E/V equilibrio.
Potencial lmite
3. Coulombimetras
90
Montaje para volumetras con indicacin electroqumica Curvas i-E en el transcurso de una volumetra
100
50
2H2O 4 e O2 4 H
i / u.a.
0
-50
2H 2e H2
-100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3 Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
2 3
Fe - 1e Fe
-
E 0,3V
0
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+
Fe2+ Fe3+,Ce3+
-50 -50
Inicio Pre-equivalencia
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
2 3
Fe - 1e Fe
-
E 0,3V
0
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+ Fe3+
Fe3+,Ce3+ -50 Ce3+ -50
Pre-equivalencia
Equivalencia
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
91
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V Deteccin Amperomtrica y Potenciomtrica
100 Amperometra (E = 0,6 V)

100
50
i / u.a.
0
50
Punto equivalente
-50
-100
i / u.a.
0 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V mL Ce4+
Potenciometra (i = 0) Potenciometra (i 0)
Fe3+
Ce3+,Ce 4+ -50
0,5 1,2
Post-equivalencia E E
-100 Error por defecto
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

0 0,3
E/V
mL Ce4+ mL Ce4+
2 3
Fe -
- 1e Fe E 0,3V
0
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+ Fe2+
-50 Fe3+,Ce3+ -50
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+ Fe2+
Fe3+,Ce3+ -50 Fe3+,Ce3+ -50
Pre-equivalencia Pre-equivalencia
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
92
Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V Fe 2 - 1e - Fe 3 E 0 0,3V
100 100
Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe3+ Fe3+
Ce3+ -50 Ce3+,Ce 4+ -50
Equivalencia Post-equivalencia
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
Deteccin Amperomtrica y Potenciomtrica Deteccin Potenciomtrica a i0

100 100
Amperometra (E = 0,6 V) Potenciometra (i 0; nodo)
50
i 50
1,2
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Punto equivalente E
-50 -50 Error por defecto
-100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2

-100
0,3
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V mL Ce4+ E/V
mL Ce4+
Amperometra (E = 0,1 V) Potenciometra (i 0; ctodo)
Potenciometra (i = 0)
mL Ce4+
0,7 0,3
i E E No hay indicacin
Punto equivalente
0,3 -0,2
mL Ce4+ mL Ce4+
2 3 3 4 2 3
Fe -
- 1e Fe E 0,3V;
0
Ce 1e Ce E 0,8 V
0
Fe -
- 1e Fe E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+ Fe2+
-50 Fe3+,Ce3+ -50
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
93
2 3 3 4 2 3
Fe -
- 1e Fe E 0,3V;
0
Ce 1e Ce E 0,8 V
0
Fe -
- 1e Fe E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe2+ Fe2+
Fe3+,Ce3+ -50 Fe3+,Ce3+ -50
Pre-equivalencia Pre-equivalencia
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
Fe 2 - 1e - Fe3 E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V Fe 2 - 1e - Fe3 E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100 100
Ce4+
50 50
i / u.a.
i / u.a.
0 0
Fe3+ Fe3+
Ce3+ -50 Ce3+,Ce 4+ -50
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
Deteccin Amperomtrica y Potenciomtrica Deteccin Potenciomtrica a i0
100
Amperometra (E = 0,6 V)
100
Deteccin Potenciomtrica a i0 Potenciometra (i 0; nodo)
50 50
0,8
i
i / u.a.
i / u.a.
0 0
E Error por defecto
-50
Punto equivalente -50
0,3
-100 -100
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
mL Ce4+ mL Ce4+

Potenciometra (i = 0)
mL Ce4+ 0,3
0,5
E E No hay indicacin
i
Punto equivalente
0,3 -0,2
mL Ce4+ mL Ce4+
94
Fe 2 - 1e - Fe3 E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V Fe 2 - 1e - Fe3 E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V
100 100
Ce4+ Ce4+
50 50
0 0
i / u.a.
i / u.a.
Fe3+ -50 Fe3+ -50
Ce3+ Ce3+,Ce 4+
-100 -100
-150 -150
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
2 3 3 4 2 3
Fe - 1e Fe -
E 0,3V; Ce
0
1e Ce E 0,8 V
0
Fe - 1e Fe -
E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E 0 0,8 V
100 100
Ce4+
50 50
0 0
i / u.a.
i / u.a.
Fe3+ -50 Fe3+ -50
Ce3+,Ce4+ Ce3+,Ce4+
-100 -100
Post-equivalencia Post-equivalencia
-150 -150
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V E/V
Deteccin Amperomtrica Deteccin Potenciomtrica a i0
Potenciometra (i 0; nodo)
100
Amperometra (E = 0,6 V)
100
50
50
Punto equivalente
0,8
0
i / u.a.
i
i / u.a.
-50
-100
-50 E Error por defecto
mL Ce4+ -100
-150
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 0,3
E/V -150
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V
mL Ce4+
mL Ce4+
0,8
E Error por exceso

i No hay indicacin
0,3
mL Ce4+
95
Potenciometra a intensidad constante con dos electrodos indicadores de la misma naturaleza Potenciometra a intensidad constante con dos electrodos indicadores de la misma naturaleza
150
Ag0 - e Ag+
100
Ag0 - e + Y4- AgY3-

50
i (u.a)
-50
AgY3- + e Ag0+ Y4-
-100
Ag+ + e Ag0
2H+ + 2e H2
-150
-0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8
E/V
96
3AsO 33 BrO3 3 AsO 34 Br
Cuando todo el AsO33- ha reaccionado, el exceso de BrO3- reacciona con el Br- :
BrO3 5 Br 6 H 3 Br2 3 H2O
Reactivo Karl-Fischer Dispositivos automatizados comerciales para la Coulombimetra Karl-Fischer
Mezcla, disuelta en CH3OH, de:
I2 C5H5N SO2
1 : 10 : 3
+ - + -
N I2 + N SO2 + N + H2O 2 NH I + N SO3
Se hace en medio metlico:
+ - + -
N SO3 + CH3OH NHCH3OSO3
Para evitar:
N SO3 + H2O NHSO4H
Coulombimetra Karl-Fischer Coulombimetra Karl-Fischer: generacin de Yodo
Based on the same reaction as volumetric

Karl Fischer Titration: +
Anode
Iodine production by oxidation
H2O + I2 + SO2 + RN + ROH (RNH)SO4R + 2(RNH)I
2 I- I2 + 2 e -
- Iodine reacts with water 1:1 Cathode
- The solvent methanol is involved in the reaction. Hydrogen production by reduction
- A suitable base keeps the pH 5 - 7
But iodine will be produced just in time from iodide:

2 H+ + 2 e- H2
H+ H Side reaction:
-
Reduction of sulfur components.
2 I - I2 + 2 e- I -
-
I
After 1 - 2 weeks, smells like mercaptans.
Anodic Oxidation
Change catholyte every week!
97
Coulombimetra Karl-Fischer: Adicin de la muestra de H2O Coulombimetra Karl-Fischer: Celda con diafragma
Resolution: 0.1 g water

- +
Detection limit: 5 g water
for 5 g sample 1 ppm
Measuring range:
10 g - 100 mg water/sample
1 ppm - 5 % water
Coulombimetra Karl-Fischer: Celda sin diafragma Coulombimetra Karl-Fischer: deteccin Bipotenciomtrica
i
2 CH3OH 2 e 2 CH3O H2
ia
ic E
2 CH3OH 2 e 2 CH3 O H2
Potenciometra a intensidad constante con dos electrodos indicadores de la misma naturaleza
Determinacin del exceso de I2

en una volumetra indirecta de
un agente reductor
98
Valoracin amperomtrica con dos electrodos indicadores a diferencia de potencial constante Valoracin amperomtrica con dos electrodos indicadores a diferencia de potencial constante
Fe 2 Ce 4 Fe 3 Ce 3
Valoracin amperomtrica con dos electrodos indicadores a diferencia de potencial constante Fe 2 - 1e - Fe 3 E0 0,3V; Ce3 1e Ce 4 E0 0,8 V
100
50
0
i / u.a.
-50
Curvas i-E tericas en el
transcurso de la valoracin
-100 de Fe2+ con Ce4+
x <1
-150
-0.2 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
E/V
99
Ojo: criterio de signos invertidos. No

importa, pues se miden valores
absolutos de corrientes
100

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Qumica Analtica Instrumental

Tema 1.- Fundamentos de espectroscopa. La radiacin electromagntica. Propiedades

La Qumica Analtica es la ciencia que identifica los componentes de una

2. La radiacin electromagntica. Mtodos Clsicos: Qumica por va hmeda (volumetras, gravimetras y

Algunas modalidades espectromtricas Regiones del espectro electromagntico

La luz: radiacin electromagntica La luz: niveles discretos de energa

Ver Skoog, pag. 135-7

Frecuencia: nmero de ciclos por unidad de tiempo. Depende de la fuente

Velocidad de propagacin: vi = i v y son funcin del medio que atraviesan

En el vaco, la velocidad de la radiacin se hace independiente de la longitud de

Onda electromagntica Figuras de interferencias

Intensidad, I, es la potencia de la radiacin por unidad de ngulo slido

La P de un haz es directamente proporcional al nmero de fotones por segundo.

Interferencias constructivas y destructivas Superposicin de ondas

A desfase cero, =0, se obtiene la

Para = 180, se obtiene la

Animations courtesy of Dr. Dan Russell, Kettering University

El frenado es funcin de la naturaleza y concentracin de la materia

Dispersin de la luz (scattering) Dispersin de la luz (scattering)

Centro dispersante La mayora de los fotones

Polarizacin Luz polarizada en el plano y luz polarizada circular

Se dice que la radiacin electromagntica est despolarizada cuando los

La luz se dice linealmente polarizada cuando oscila en un nico plano al

Luz polarizada en el plano Luz polarizada circular

Cambio abrupto de la direccin de una radiacin al pasar de un

Puesto que la velocidad es cte (mismo medio) la ruta de tiempo mnimo es la

nvaco = 1,00027 naire

Reflexin de la luz Reflexin de la luz

Si la rugosidad de la superficie lmite es menor que la longitud

Si la rugosidad de la superficie lmite es comparable a la Ii

Si hay muchas superficies en el camino ptico, se producen

La difraccin es consecuencia de la interferencia y fue demostrada en 1800 Ver Skoog, pg 129-130

La luz producida por un lser es:

Fuente de luz monocromtica:

tomos absorbentes: espectro atmico Absorcin y resolucin espectral

Los dos picos de absorcin surgen

Espectros de absorcin Desactivacin radiacional y no-radiacional

Tema 2 Instrumentacin general para espectroscopa

1. Diseo y componentes de los instrumentos Selector

4. Selectores de longitud de onda.

Instrumentacin general para espectroscopa Diagrama de bloques para absorcin

Fuentes de radiacin en EAM Fuentes de radiacin en EAM

1. Distribucin espectral: intensidad a distintas (fuentes de

1. Ruido (fluctuaciones a corto plazo)

2. Deriva (fluctuaciones a largo plazo)

I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo

A) Radiacin trmica (incandescencia)

1 El halgeno sirve para formar haluros voltiles de volframio

B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases

Lmpara de H2: 3-5 veces menos intensa que la de Deuterio.

D 2 E elctrica D *2 D' D' ' h

I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo

B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases

Para una ms elevada intensidad:

til para cuando se necesitan

Fuentes en EAM Fuentes en EAM

Para EAM UV-VIS: H2 o D2 en el UV y W para el VIS

Para Espectrofluorimetra con barrido:

Con fluormetros de longitud de onda fija:

Laser He-Ne Ratio emisin estimulada/absorcin

Mecanismo Laser Laser en accin

Output Start of stimulated

1) Estado slido La luz producida por un lser es: