UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y METALURGIA

Departamento Acadmico de Ingeniera Qumica

ESCUELA DE FORMACION PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA

ASIGNATURA: QU-144 QUIMICA ORGANICA

PRACTICA N 05

CROMATOGRAFIA

PROFESOR DE TEORIA: Ing. Alcira Crdova Miranda

PROFESOR DE PRACTICA: Ing. GARCA BENDEZ, Anbal Pablo

ALUMNOS: Samaniego Quispe, Eder J.

Das de prcticas: jueves Hora: 7-10 am

Fecha de ejecucin: /06/2012 Fecha de entrega: /06/2012

AYACUCHO PERU

[Escriba texto] Pgina 1

 CROMATOGRAFA

I.OBJETIVOS:
Conocer el procedimiento para elegir el eluyente ms adecuado para

separar una mezcla de carotenos por cromatografa en columna.

Conocer y comprender los fundamentos de la cromatografa.

Utilizar las diferentes tcnicas cromatografas para identificar y

purificar compuestos orgnicos.

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y
que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas
sntesis).

Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad

analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas son

pequeas.
Comparar la cromatografa con los procesos unitarios utilizados

anteriormente en cuanto a la eficiencia como mtodos de separacin y

purificacin.

II.REVISIN BIBLIOGRFICA

La cromatografa es un mtodo fsico o de separacin para la caracterizacin

de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia

y la fsica. Es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin

selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,

permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una
fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que

UNSCH FIQ Pgina 2

arrastra a la muestra a travs de una fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido. Los componentes de la mezcla

interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los

componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van

separando. Despus de que los componentes hayan pasado por la fase

estacionaria, separndose, pasan por un detector que genera una seal que

puede depender de la concentracin y del tipo de compuesto.

Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como

resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una
separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada

componente de la mezcla.

II.a) Cromatografa de gases

En cromatografa de gases (GC), la muestra se volatiliza y se inyecta en la

cabeza de una columna cromatogrficas. La elucin se produce por el flujo

de una fase mvil de un gas inerte, y a diferencia de la mayora de los tipos

de cromatografia, la fase mvil no interacciona con las molculas del analito;

su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la columna. Existen

dos tipos de cromatografa de gases:

- la cromatografa gas-lquido (GLC).

La cromatografa gas - lquido tiene gran aplicacin en todos los campos de

la ciencia y su denominacin se abrevia normalmente como cromatografa de

gases (GC).
- La cromatografa gas slido
Se basa en una fase estacionaria slida en la cual se produce la retencin de
los analitos como consecuencia de la adsorcin fsica. La cromatografia gas -

slido ha tenido una aplicacin limitada debido a la retencin

UNSCH FIQ Pgina 3

semipermanente de las molculas activas o polares y a la obtencin de picos
de elucin con colas (una consecuencia del carcter no lineal del proceso de

adsorcin), de modo que esta tcnica no ha encontrado una gran aplicacin

excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo peso

molecular.

- Cromatografa slido-lquido: la fase estacionaria es un slido y la

mvil un lquido.

- Cromatografa lquido-lquido: ambas fases son lquidos y en la

estacionaria el lquido se ancla a un soporte slido.

UNSCH FIQ Pgina 4

III.MATERIALES, EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO Y
REACTIVOS QUIMICOS UTILIZADOS

Pinzas de 3 dedos c/nuez

Esptula
Tubos de ensayo

cmara cromatografica
luna de reloj

Papel filtro
Mortero

Mechero de bunsen
Cuentagotas

Probeta
Pro pipeta

Reactivos y algunos materiales que se va a utilizar:

Hexano

Acetona
Tolueno

cloruro de metileno
cloroformo

acetato de etilo
metanol

Extracto de espinacas

Lpiz

UNSCH FIQ Pgina 5

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Cromatografa en papel
- Primeramente colocamos hojas deshidratadas de espinaca en el

mortero.
- Luego machacar en un mortero las hojas deshidratadas de espinaca en

varios mL de acetona hasta obtener una solucin verde oscura,

dejamos que decante.

- Luego en un papel trazar una lnea con un lpiz de 1 cm de altura.

- Con un capilar sembrar la clorofila bruta.

- Verter en el cmara cromatografa ms o menos 1 m L de tolueno.

Dejamos saturar por 20 minutos e introducir el papel.

UNSCH FIQ Pgina 6

 - Luego cuando el frente se encuentre a 0,5 cm de la terminacin del
papel, retirar el cromatograma.

Clorofila B: Verde amarillento

Clorofila A : Verde azulado

Xantofila: Amarillo
Caroteno: Anaranjado

- Una vez seco el cromatograma, medir las distancias alcanzadas por

cada pigmento a partir del lugar de siembra y medir tambin la

distancia que ha recorrido el solvente.

- Finalmente calculamos Rf (rate factor) para cada pigmento.

2. Cromatografa e placa fina

- En una placa cromatografa marcar ligeramente con lpiz de grafico

una lnea base, a una distancia de 0,3 a 0,5 cm de la base de la placa.

- Luego aplicamos la muestra del extracto de espinacas con un capilar

sobre la lnea base de la placa cromatografa, procurando que la

aplicacin no se corra ms de un milmetro de dimetro.

- Luego dejamos secar el disolvente de la muestra aplicad e introducir la

placa en una cmara cromatografa (o en sustitucin de esta usar un

UNSCH FIQ Pgina 7

 vaso de precipitado de 50 mL y taparlo con un vidrio de reloj) que
contenga como eluyente cualquiera de los siguientes disolventes:

cloruro de metileno, cloroformo, hexano, metanol o acetato de etilo

(se sugiere que cada equipo de trabajo utiliza un disolvente diferente).

- Luego dejamos que suba o corre el disolvente hasta que llegue a

0,15 cm antes del extremo superior de la placa.

- Luego sacamos la placa de la cmara, marcamos ligeramente con lpiz

del grafico la lnea hasta la marca del disolvente en la placa y dejamos

secarla.
- Marcamos el contorno de las manchas y hacemos un dibujo de la

placa.

- Finalmente determinamos el Rf de cada mancha.

IV.OBSERVACIONES, DATOS, RESULTADOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS,

ECUACIONES QUMICAS CLCULOS Y/O GRFICOS (SEGN LOS CASOS).

1+2,1
= 2
= 0,238
6,5

2,1+2,1
= 2
= 0,323
6,5

UNSCH FIQ Pgina 8

 2,1+1
= 2
= 0,238
6,5

1+0,5
= 2
= 0,1153
6,5

Anaranjado = 0,1

Amarillo = 2,7

Verde azulado = 1,1

Verde amarillento = 0,4

V.CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

La cromatografa es la tcnica ms eficiente al compararla con destilaciones,

cristalizacin, o extracciones, esto porque es aplicable a la gran mayora de

las sustancias. La cromatografa en columna, nos permite usar una gran

cantidad de la sustancia a separar, y la cromatografa en capa fina, nos

permite realizar separaciones mltiples, al mismo tiempo, y sometidas al

mismo proceso separativo.

Por medio de esta prctica, logramos extraer de la espinaca, los carotenos; estos
junto con las xantofilas son los que le proporcionan el color naranja a las

UNSCH FIQ Pgina 9

 espinacas ya que son los pigmentos vegetales que las constituyen; sin
embargo para la finalidad de esta prctica se separaron las xantofilas de los

carotenos para despus por medio de cromatografa separar y determinar

cualitativamente los 3 tipos de carotenos que existen: , , y . Y como estos se

contienen en diferentes proporciones.

VI.CUESTIONARIO
1. Mencione las propiedades fsicas, qumicas y toxicolgicas de:

Hexano, cloroformo, cloruro de metileno, metanol y acetato de etilo.

- El hexano o n-hexano es un hidrocarburo aliftico alcano con seis

tomos de carbono. Su forma qumica es C6H14.Existen varios ismeros

de esta sustancia, siendo la ms conocida e importante la del n-

hexano:

CH3 - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - CH3

- Otros ismeros son: 2-metilpentano (o isohexano), 3-metilpentano,

2,2-dimetilbutano (o neohexano) y 2,3-dimetilbutano.

- Se trata de un lquido incoloro, fcilmente inflamable y con un olor

caracterstico a disolvente. Es poco no polar o combinable con el agua,

pero se mezcla bien con los disolventes orgnicos apolares como el

alcohol, el ter o el benceno. Es muy poco polar por lo que su

momento dipolar es casi nulo y su fuerza de elucin es muy baja

(=0,01).
- El cloroformo, triclorometano o tricloruro de metilo, es un

compuesto qumico de frmula qumica CHCl3. Puede obtenerse por

cloracin como derivado del metano o del alcohol etlico o, ms

UNSCH FIQ Pgina 10

 habitualmente en la industria farmacutica, utilizando hierro y cido
sobre tetracloruro de carbono.

- A temperatura ambiente, es un lquido voltil, no inflamable, incoloro,

de olor dulzn.

- Se descompone lentamente por accin combinada del oxgeno y la luz

solar, transformndose en fosgeno (COCl2) y cloruro de hidrgeno

(HCl) segn la siguiente ecuacin:

2 CHCl3 + O2 2 COCl2 + 2 HCl

Por lo cual se aconseja conservarlo en botellas de vidrio color mbar y lejos

de la luz.

Cloruro de metileno

Apariencia: Lquido voltil, sin color, olor penetrante a

ter.

Gravedad Especfica (Agua=1): 1.320

Punto de Ebullicin (C): 39.8

Punto de Fusin (C): -97

Densidad Relativa del Vapor (Aire=1): 2.930

Presin de Vapor (mm Hg): 355

Viscosidad (cp): 0.430 / 20C

PH: N.R.
Solubilidad: Soluble en alcohol y ter. Ligeramente

soluble en agua.

El compuesto qumico metanol, tambin conocido como alcohol metlico o

alcohol de madera, es el alcohol ms sencillo. A temperatura ambiente se

UNSCH FIQ Pgina 11

presenta como un lquido ligero (de baja densidad), incoloro, inflamable y
txico que se emplea como anticongelante, disolvente y combustible. Su

frmula qumica es CH3OH (CH4O).

b.- Acetato de etilo (CH3COOCH2CH3)

Es un lquido incoloro, con olor a frutas, menos denso que el agua y

ligeramente miscible con ella. Sus vapores son ms densos que el aire.

Peso molecular: Punto de Peso especfico

88.1 ebullicin: 77 C (agua=1): 0.90220/4

Peso especfico Punto de fusin: - Lmites de explosividad

(aire=1): 3 83 C (% vol. en aire):
2.5 - 11.5

B. Investiga la polaridad de cada uno de los disolventes mencionados

anteriormente y ordnalos de mayor a menor polaridad.

TABLA DE DISOLVENTES UTILIZADOS EN EL LABORATORIO

DISOLVENTES Formula/semidesarrollada Pe DENSIDAD

C

Acetato de etilo CH3-C-O-CH2-CH3 77 0,902

Hexano CH3-CH2-CH2-CH2-CH2- 69 0,659

CH3

Metanol CH3-OH 65 0,791

Cloroformo CHCl3 61 1,492

Cloruro/de/metileno CH2Cl2 40 1,325

UNSCH FIQ Pgina 12

C. Qu sustancia pueden utilizarse como relevadoras en la
cromatografa de capa fina?

En la cromatografa en capa fina, CCF o TLC ("thin-layer chromatography, en

la terminologa inglesa) se puede utilizar como soporte cualquier sustancia

que pueda dividirse en partculas finas y distribuirse uniformemente en forma

de lminas. Esto incluye sustancias inorgnicas (gel de slice, xido de

aluminio, tierra de diatomeas, silicato de magnesio, etc) y orgnicas (celulosa,

poliamida, polietileno, etc). La utilizacin de soportes hidrfobos facilita la

separacin de compuestos no polares (lpidos, por ejemplo). En la CCF, la fase

estacionaria es una lmina de 0,25-0,50 mm de espesor, extendida de forma

uniforme sobre la superficie de una placa de vidrio o plstico. Aunque

muchas casas comerciales suministran placas ya preparadas, stas pueden

hacerse en el laboratorio con aparatos especiales que permiten extender

sobre la placa de vidrio o plstico la papilla formada por la suspensin del

material en un disolvente adecuado (generalmente agua). La placa ha de

dejarse secar antes de su utilizacin.

D. Cmo se calcula el valor de Rf?

La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la

posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide
la retencin de un componente. Se define como: RF= A/B

Distancia recorrida por la sustancia

=
Distancia recorrida por el solvente

E. Cules son los carotenos se encuentran en las espinacas? Escribe

las formulas y estructuras.

Solo se obtuvieron 5 variaciones de carotenos porque el cambio desfase

mvil en la columna arrastro rpidamente a distintas fases, el cloroformo que

UNSCH FIQ Pgina 13

estaba abajo del extracto de espinaca retena el desplazamiento de los
carotenos razn por la que bajaron todos en conjunto y complico la

recoleccin de cada fase.

Las espinacas radican en su alto contenido en vitaminas y minerales. En

concreto, este alimento aporta una gran cantidad de cido flico y de

vitamina C, y cantidades inferiores de vitamina E, B6, niacina, tiamina.

Las espinacas tambin aportan cantidades importantes de beta-carotenos,

compuestos que adems de transformarse en vitamina A en nuestro

organismo (provitamina A), desempean acciones antioxidantes y

estimuladoras del sistema inmune, por lo que su ingesta elevada se ha

relacionado con un menor riesgo de cncer y enfermedad cardiovascular.

Las espinacas tambin aportan cantidades importantes de beta-carotenos,

compuestos que adems de transformarse en vitamina A en nuestro

organismo (provitamina A), desempean acciones antioxidantes y

estimuladoras del sistema inmune, por lo que su ingesta elevada se ha

relacionado con un menor riesgo de cncer y enfermedad cardiovascular.

Asimismo, contienen gran cantidad de otros carotenoides sin actividad pro

vitamnica A como la lutena y la zeaxantina, que se encuentran en el

cristalino humano y la retina.

F. Qu precauciones se debe de tener al empacar una columna

cromatografica?
Al agregar la suspensin de slica-gel es una mezcla de hexano:acetato

de etilo 1:1 hay que golpear ligeramente con los dedos para que el
empacado sea uniforme.

Mantener un goteo uniforme en la llave de salida del disolvente, pero

hay que tener cuidado de no dejar la slica-gel sin disolvente.

UNSCH FIQ Pgina 14

 Mantener siempre el nivel del eluyente 0.5cm por arriba del nivel del
adsorbente.

La columna se llena hasta tres cuartas partes de su capacidad.

G. Elabora una diagrama de bloques del procedimiento experimental

Cromatografa en placa fina.

Ligeramente con lpiz de grafito

traza una lnea en la base, a una
distancia de 0,3 a 0,5 m de la base
de la placa

Una muestra del extracto de

espinacas con un capilar sobre la
lnea base de la placa
cromatografica.

Dejar secar el disolvente e

introducir la placa en una cmara
cromatografica, que contenga
como eluyente cloroformo.

Dejar subir el disolvente hasta que

llegue a 0,5 cm antes del extremo
superior de la placa, dejarla secar.

Determinar el Rf de cada mancha.

UNSCH FIQ Pgina 15

H. Por qu fue necesario eluir las placas cromatograficas con los
diferentes disolventes?

Para poder seleccionar el mejor disolvente de los carotenos en nuestra

muestra de extracto de espinaca y tener un ptimo resultado en el

experimento de cromatografa por columna.

I. Cul fue el disolvente ms adecuado y por qu?

El metanol CH3-OH (disolvente usado) es un disolvente industrial

principalmente usado para remover tintas, tintes, resinas, adhesivos y

aspartamo.

J. Cules son las aplicaciones de la cromatografa?

La cromatografia de gases constituye el mejor mtodo analtico ideado para

la separacin de gases, lquido o slidos que pueden pasar fcilmente al

estado de vapor o transformndolos previamente en otros estados voltiles

Ej. Metilacin de cidos grasos en el anlisis de aceite y a resuelto problemas

de muy difcil solucin para la qumica analtica empleada hace una dcada.
Por eso su utilizacin es indispensable en anlisis industriales, forenses

bromatolgicos, toxicolgicos, clnicos y de contaminacin ambiental.

UNSCH FIQ Pgina 16

VII.BIBLIOGRAFIA
1. Chang, Raymond. (1998). Qumica. Mxico: McGraw-Hill. Sexta Edicin.

2. BROWN, T. L., H.E. Y BURSTEN, B.E. (1993) .Qumica la ciencia central.

3. http://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080921213455A

A3Dzc
4. http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20100308073055AA

P9dw
5. http://html.rincondelvago.com/quimica_22.html

UNSCH FIQ Pgina 17