RECOLECCIN DE CLULAS

PROGENITORAS
HEMATOPOYETICAS

1 Presentation title, Month #, Year. Confidential

Objetivos:

Entender las variables relacionadas al

paciente en el proceso de recoleccin

Conocimiento general del proceso de

recoleccin de clulas progenitoras de
sangre perifrica

Entender el impacto que el operador

tiene en el proceso de recoleccin y del
producto.
Temas:

Historia
Hematopoyesis
Indicaciones y uso de trasplante de
Clulas Progenitoras
Movilizacin
Momento para iniciar la colecta
Variables de la Colecta de Clulas Madre
Perifricas
Colecta de clulas progenitoras
Antecedentes

El concepto de una clula

precursora, fue propuesto
por primera vez por:
Arthur PappenHeim
(1870-1916).

En 1961,
 Antecedentes

En 1961, Till y McCulloch,

demostraron la existencia de esta
clula precursora en ratones,
mostr que la transferencia de
clulas de MO y de Bazo en
receptores radiados, originaba
colonias macroscpicamente
visibles en el Bazo, compuestas de
clulas eritroides, granulocticas y
megacariocticas
 Antecedentes
La primera vez que se document el
uso del trasplante autlogo de
clulas madre hematopoyticas para
tratar el cncer se remonta a la
dcada de 1890, pero no fue hasta
1978 cuando se document la
curacin en pacientes con una
neoplasia maligna despus de un
ensayo clnico llevado a cabo en
National Cancer Institute (Estados
Unidos)
Hematopoyesis
STEM CELLS:
Auto renovacin - Las Stem Cell son capaces
de reproducir otras clula idnticas a si
misma, manteniendo un nmero constante
de cada tipo celular.

Diferenciacin - Las Stem Cell son capaces

de generar una o mas subclases de clulas
maduras que pueden eventualmente
evolucionar en glbulos rojos, blancos o
plaquetas.
Hematopoyesis
Diferenciacin de las clulas progenitoras
Medula sea generadora de clulas progenitoras
Anclaje de las clulas progenitoras

Las clulas del estroma en la

medula, producen la quimiocina
SDF-1 factor derivado de las
clulas mdre, molcula
importante que interviene en la
proliferacin, la migracin y el
arraigo del injerto de las clulas
madre.
ANCLAJE

SDF-
1A

MEDULA
OSEA

Estroma de M.O.

12 Presentation title, Month #, Year. Confidential

Anclaje de las clulas progenitoras

las clulas madre expresan el

receptor de quimiocinas, el
CXCR4 que es responsable del
anclaje de las clulas madre al
microambiente de la mdula
sea.
ANCLAJE

Clulas
madre
MEDULA
OSEA
CXC-
R4

14 Presentation title, Month #, Year. Confidential

Anclaje de las clulas progenitoras

la prdida de actividad del

SDF-1, favorece la
liberacin de las clulas
madre en la circulacin
perifrica.
MOVILIZACIN DE CPH

Clulas
madre

CXC-
MEDULA R4
OSEA
SDF-
1A

Estroma de
M.O.
MOVILIZACIN DE CPH

Clulas
madre

CXC-
R4

Estroma de
M.O.
MOVILIZACIN DE CPH

SANGRE
PERIFERICA

Estroma de
M.O. MEDULA
Colecta Manual de Sangre

Trasplante Clulas Progenitoras

Hematopoyeticas
 TRASPLANTE DE CLULAS
PROGENITORAS HEMATOPOYTICAS

se utiliza en forma rutinaria para numerosas

enfermedades.
El trasplante de CPH es un
tratamiento que actualmente se
utiliza en forma rutinaria para
numerosas enfermedades.
TIPOS DE TRANSPLANTE
Fuente de Clulas Progenitoras
Hematopoyticas

Medula Osea (Puncin)

Sangre Perifrica ( Movilizacin)
Sangre de Cordn Umbilical.
Fuente de Clulas Progenitoras
Hematopoyticas

Ventajas y desventajas
de los mtodos de
obtencin de clulas
madre hematopoyticas

23 Presentation title, Month #, Year. Confidential

24 Presentation title, Month #, Year. Confidential
SECUENCIA DE TRANSPLANTE
ALOGENICO
TRANSPLANTE ALOGENICO

ALOGNICO: Las clulas progenitoras proceden de un

donante gentica e inmunolgicamente diferente al
receptor, pero con compatibilidad del sistema HLA, el
mayor o menor grado de compatibilidad entre donante y
receptor es factor clave en el xito del procedimiento.

Lo ideal es que el donador sea un pariente HLA idntico

(hermano).

La posibilidad de histocompatibilidad entre hermanos es de

25%.

El TMO de donante emparentado se asocia con una

mortalidad en los primeros 100 das de 20% y en donante no
emparentado de 30 a 40%.
TRASPLANTE DE MDULA SEA ALOGENICO
INDICACIONES
1. ENFERMEDADES NO MALIGNAS

Adquiridas
a. Anemia aplsica
b. Mielofibrosis
c. H.P.N.
Congnitas
a. Inmunodeficiencias
Combinada grave
Wiscott-Aldrich
b. Alteraciones hematolgicas
Talasemia
Anemia de Fanconi
Enf. Granulomatosa crnica
Neutropenia congnita
c. Osteo petrosis
d. Mucopolisacaridosis
e. Mucolipidosis
TRASPLANTE DE MDULA SEA ALOGENICO
INDICACIONES

2. ENFERMEDADES
MALIGNAS
A. L.A. Mieloblstica

B. L.A. Linfoblstica

C. Leucemia Mieloctica Crnica

D. Linfomas No Hodgkin

E. Enfermedad de Hodgkin

F. Sndrome Mielodisplsicos
CONSEJO EUROPEO
COLECTA DE CELULAS PROGENITORAS DE
SANGRE PERIFERICAO EUROPEO

Protocolo de Movilizacin
Timing de la colecta de CPH
Equipamiento y Tcnica
Criopreservacin
Transplante
Arraigo
Secuencia del transplante de celulas progenitoras
Metas de Colecta de CPH

Colectar un producto con:

Mxima cantidad de Stem Cell
Baja contaminacin celular.
Bajo volumen de colecta
En el menor nmero de procedimientos
posibles:
Reducir costos
Aumentar confort del paciente
Garantizar la seguridad del paciente.
OBJETIVO DE LA QT y RT DE ACONDICIONAMIENTO

Erradicar la enfermedad en la MO del receptor

Erradicacin del sistema inmune del receptor

Proporcionar espacio para el injerto

MOVILIZACION
 MOVILIZACIN DE CPH

En condiciones normales, la fraccin de CMN contiene aprox 0.05%

de clulas madre (CD34+). La MO contiene 1 a 2 % de clulas
hematopoyticas.

CD34+ es la nomenclatura para el marcador de protena de superficie

(antgeno) linfocitaria reconocido por los anticuerpos CD34. Este
marcador identifica una cierta poblacin de CMN, en la cual la CPH es
una subclase y es determinado por citometra de flujo.
Guidelines of the American Society
for Blood and
Marrow Transplantation

Filgastrim: G-CSF, es el preferido como factor de

estimulacin (PBSC), en donantes adultos.
Dosis: 10ug/kg/ diario
Es la citoquina mas utilizada y con mejor
movilizacin.

Sargamostrim: GM-CSF,
Efectos adversos ms frecuentes: fatiga, dolor de
cabeza, dolor de huesos
Costos mas altos.

Plerixafor: pobres movilizadores est siendo

utilizado.

Factores aumentan mas 100 veces el # CD34

 MOVILIZACIN DE CPH

Las citocinas exgenas son por ejemplo el

filgrastim y el lenograstim CSF.

El CSF estimula la movilizacin de las clulas

madre hematopoyticas mediante la disminucin
de la expresin del gen SDF-1 y a la vez que
aumenta las proteasas que pueden romper las
interacciones entre las clulas madre
hematopoyticas y el ambiente de la mdula sea.
MOVILIZACIN DE CPH

Clulas
madre
CSF (Filgastrin)
Disminuye al SDF-1
CXC- Y aumenta las proteasas
R4

Proteasas
Rompe el enlace

Estroma de
M.O.
MOVILIZACIN DE CPH

SANGRE
PERIFERICA

Estroma de
M.O. MEDULA
Anclaje de las clulas progenitoras
Reacciones adversas frecuentes asociados con los agentes
movilizadores
CONDICIONAMIENTO DEL PACIENTE

El grado de movilizacin del paciente

depende de :

Condicin del Paciente:

Edad, sexo
Diagnstico
Tratamientos previos con QT y RT.
Infiltracin medular y actividad de la
enfermedad

Protocolo de Movilizacin:
Dosis del factor de crecimiento
Factor de crecimiento/quimioterapia vs
solamente factor de crecimiento.
Colecta de CPH

El momento adecuado para iniciar la

recoleccin evita:
Procedimientos de colecta innecesarios
Procesamiento innecesarios de CMN.
Reduce costos
(procedimientos, congelamientos, factor de
crecimiento)
Economiza espacio en el freezer.
Economiza tiempo del paciente, malestar.

42 Presentation title, Month #, Year. Confidential

Cintica de la movilizacin de leucocitos y de clulas
CD34+ en la sangre perifrica despus de quimioterapia
y administracin de citocinas
Consideraciones
Anticoagulacin
ACD-A ( 1:11 max 1:15)
Heparina + ACD-A (1:25 a 1:30)

Acceso Venoso (flujo de 10 a 150 ml/min)

Volumen de sangre procesado

Flujo bomba de colecta (estndar 1

ml/min)

Control adecuado de la interfase.

Colecta de CPH
Equipamiento y Tcnica
Partes principales de equipo
Funcionamiento del sistema Spectra Optia
Funcionamiento del sistema Spectra Optia

Leyenda:
1. Plasma
2. Hemates concentrados
3. Capa leucoplaquetaria
4. Plaquetas
5. Linfocito
6. Granulocito
7. Monocito
SPECTRA OPTIA

PARA OBTENCION DE
CELULAS
PROGENITORAS POR
CAMARA DE COLECTA
(CMN)

50 Presentation title, Month #, Year. Confidential

51 Presentation title, Month #, Year. Confidential
Descartable para CMN
53 Presentation title, Month #, Year. Confidential
54 Presentation title, Month #, Year. Confidential
Control del procedimiento
SPECTRA OPTIA

PARA OBTENCION DE
CELULAS
PROGENITORAS
CONTINUAS
(CMCNC)

56 Presentation title, Month #, Year. Confidential

57 Presentation title, Month #, Year. Confidential
Funcionamiento del sistema Spectra Optia

2
1

4
Dosis para Trasplante CPH

El nmero de clulas en el producto final

depende del nmero de clulas CD 34+ en
la sangre perifrica y del nmero de
volemias sanguneas procesadas
Resultados

CD34/ul. x Vol. De Prod. En CC. x 1000

CD34+x106/Kg. = --------------------------------------------------------
Peso del Paciente en Kg.

Se considera mnima una concentracin de 2 x 106 de

clulas CD34+/kg de peso corporal.

Se consideran ptimas las concentraciones de 5 x 106

de clulas CD34+/kg para un trasplante nico
Statistically calculated Prediction Algorithm
Based on a data analysis

1. Divide total CD34+

collected by liters of WB
2. Get the CD34+ collected
per liter of WB
3. Plot (using Excel) CD34+/
liter WB against pre-
CD34+ (see next slide)

61
Collection Efficiency 2 (CE2)

Based on CD34+ pre-count only. The most widely used

worldwide:

CE2 = Total CD34+ collected .

WB Volume x pre-CD34+

Since it assumes that CD34+ concentration in peripheral blood is

constant throughout the procedure (not true), CE2 is not close to the
Actual CE.
In general, CE2 < CE1, but if there is CD34+ recruitment intra-
procedure, the opposite happens.
The more blood is processed, the lower the CE2 (the assumption
about CD34+ cells going through the device gets worse)
Simple Prediction Algorithm
Based on a median CE%

It doesnt require statistical knowledge

CE% = Total collected CD34+

WB liters x pre-CD34+

Tot coll CD34+ = CD34+/Kg x Kg

WB liters = CD34+/Kg x Kg .
CE% x pre-CD34+

It is safer to process an additional 15% more

64 Presentation title, Month #, Year. Confidential
Complicaciones comunes de la afresis
Criopreservacin
 Criopreservacin

Al finalizar la afresis, se aslan las clulas madre de los

eritrocitos y los leucocitos y se colocan en bolsas de
Infusin para su crioconservacin y almacenamiento.
En muchos centros existen laboratorios de crioconservacin que
mantienen las clulas madre recogidas en nitrgeno lquido hasta
el momento de su trasplante al paciente.

Un crioconservante habitual utilizado es el dimetilsulfxido

(DMSO). mantiene la viabilidad celular evitando la formacin de
cristales de hielo en el interior de las clulas durante su
almacenamiento.
Criopreservacion reacciones adversas
 Transplante
El da de la infusin de las
clulas madre se retira del
depsito de nitrgeno
lquido, se descongela y se
prepara para su
administracin al paciente
por va parenteral
 ARRAIGO

El objetivo de un trasplante, es la
infusin de clulas madre para que
maduren y se transformen en
componentes sanguneos
funcionales, como neutrfilos y
plaquetas.
Los primeros signos de arraigo y
recuperacin consisten en un
aumento del recuento absoluto de
neutrfilos y la cifra de plaquetas
GRACIAS
LUIS ALOSILLA N.
Especialista de producto
Luis.alosilla@terumobct.com