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ASIGNATURA:
1. INTRODUCCIN
El presente informe rene, describe, compara y discute con las informaciones existentes y
los resultados obtenidos a partir del frotis de un material inflamatorio ensayado en los
cuyes, para observar la reaccin de las clulas inmunes frente al cuerpo extrao.
2. OBJETIVOS
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Estudiante de Inmunologa y Virologa; Medicina Veterinaria Sede Marangani; UNSAAC
Marangani; 27 de Julio de 2017
crishuaHC@gmail.com
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3. REVISIN BIBLIOGRFICA
El organismo animal puede concentrar sus mecanismos innatos de defensa en los lugares
de invasin microbiana en el complejo conjunto de reacciones que denominamos
inflamacin. Durante el proceso inflamatorio, los cambios o daos en los tejidos
producidos por la invasin microbiana dan lugar a un incremento del flujo sanguneo y a la
acumulacin de clulas que puede atacar y destruir al patgeno. Estas clulas, llamadas
neutrfilos y macrfagos pueden destruir a la mayora de organismos invasores y as evitar
su diseminacin a lugares no infectados del organismo. El organismo tambin utiliza
enzimas que son activadas por la presencia de un patgeno y que van a dar lugar a la
destruccin microbiana. Algunos de las clulas involucradas en la inflamacin tambin
pueden reparar los tejidos daados una vez los patgenos han sido destruidos. En una
reaccin inmune innata las principales clulas involucradas en la respuesta inflamatoria
dependen del tipo de infeccin. Neutrfilos (infeccin bacteriana, fungal, etc.),
macrfagos, eosinfilos, basfilos, clulas cebadas, clula endoteliales, clulas dendrticas
(clulas que mejor ilustran las vas que comunican con la inmunidad adaptativa) entre otras
(Tizard, 2009; Gutirrez, 2010).
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A diferencia de la inmunidad innata, hay otra respuesta inmunitaria que son estimuladas
por la exposicin a los microorganismos infecciosos, cuya magnitud y capacidad defensiva
crece con cada exposicin sucesiva a un microorganismo concreto. Dado que esta forma de
inmunidad aparece como respuesta a una infeccin y se adapta a ella, reciben el nombre de
inmunidad adaptativa. Su caracterstica exquisita es la especificidad frente a diversas
molculas y la propiedad de recordar las exposiciones repetidas al mismo microbio para
responder con mayor energa. El sistema inmunitario adaptativo tiene la capacidad de
reconocer un gran cantidad de sustancias microbianas y no microbianas y de reaccionar
frente a ellas. Adems, posee unas dotes extraordinarios para distinguir entre los distintos
microorganismos y molculas, incluso los muy afines entre s, y por esta razn reciben el
nombre de inmunidad especfica. Asimismo, a veces se le adjudica el nombre de
inmunidad adquirida para poner de relieve que las potentes respuestas protectoras se
adquieren por la experiencia. Los principales componentes de la inmunidad adaptativa son
unas clulas llamadas linfocitos y sus productos de secrecin como los anticuerpos. En
cambio, las sustancias ajenas que suscitan una respuesta inmunitaria especfica o que
constituyen el blanco de tales respuestas son los antgenos. Las respuestas inmunitarias
innata y adquirida son los ingredientes de un sistema integral encargado de defender al
husped, en el que funcionan numerosas clulas y molculas de modo conjunto. Los
mecanismos de la inmunidad innata suministran una primera defensa eficaz contra las
infecciones (generalmente en las respuestas inflamatorias agudas). Sin embargo, muchos
microorganismos patgenos han evolucionado hasta ser resistentes a la inmunidad innata
(en agudas pasando a las inflamaciones crnicas) y su eliminacin exige aquellos
mecanismos potentes de la inmunidad adaptativa. Asimismo, la respuesta inmunitaria
innata a los microbios tambin estimula las respuestas inmunitarias adaptativas e influyen
sobre su naturaleza. La inmunidad adquirida tarda al menos varios das en ser eficaz, pero
a pesar de que se desarrolla una respuesta adquirida frente a un patgeno, las posibilidades
de una infeccin exitosa se reduce considerablemente, y de hecho el animal puede ser
completamente inmune (Abbas et al, 2008; Tizard, 2009).
Una diferencia clave entre la inmunidad innata y adquirida reside en el uso de los
receptores para reconocer microorganismos invasores extraos. La inmunidad innata
utiliza receptores pre-existentes, por el contrario, las clulas de la inmunidad adquirida
producen de forma aleatoria un enorme nmero de receptores estructurales nicos. Estos
receptores pueden combinarse con una ingente serie de molculas extraas. Existen dos
tipos de respuestas inmunitarias adaptativas, llamadas inmunidad humoral e inmunidad
celular, en las intervienen componentes diferentes del sistema inmunitario y que sirven
para eliminar microbios de distintos tipos. La inmunidad humoral cuenta con unas
molculas presentes en la sangre y en las secreciones mucosas, que reciben el nombre de
anticuerpos, producidas por unas clulas denominadas linfocitos B. Los anticuerpos
reconocen los antgenos microbianos, neutralizan la infecciosidad de los microorganismos
y los marcan como una diana para su eliminacin por diversos mecanismos efectores. La
inmunidad humoral es el principal mecanismo de defensa contra los microbios
extracelulares y sus toxinas, debido a que los anticuerpos segregados pueden unirse a ellos
y contribuir a su destruccin. La inmunidad celular queda a cargo de los linfocitos T. Los
microbios intracelulares como los virus y algunas bacterias sobreviven y proliferan en el
anterior de los fagocitos y de otras clulas del husped donde los anticuerpos circulantes no
los tienen a su alcance. La defensa contra estas infecciones corresponde a la inmunidad
celular, que fomenta la destruccin de los microorganismos residentes en los fagocitos o la
desaparicin de las clulas infectadas. Las principales clulas del sistema inmunitario son
los linfocitos, clulas presentadoras de antgenos y las clulas efectoras (linfocitos B,
linfocitos T, macrfagos y otros leucocitos) (Tizard, 2009; Abbas et al, 2008).
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Figura 1: Evolucin de la inmunidad innata y adquirida. Las barreras de superficies
proporcionan una proteccin inmediata. Los mecanismos innatos proporcionan proteccin
rpida que mantienen a los invasores microbianos acarralados hasta que la inmunidad
adquirida pueda desarrollarse. La inmunidad adquirida puede tardar das o semanas en ser
eficaz (Tizard, 2009).
En muchos casos para un estudio citolgico se puede aprovechar las clulas que exfolian,
lquidos corporales (sangre), raspados, materiales inflamatorios, etc. Por lo que la citologa
dentro del diagnstico veterinario se considera, una herramienta til por sus ventajas y por
la informacin que se obtiene (De Arger, 2001; Fernndez et al, 2003). La interpretacin
de muestras citolgicas requiere conocimientos sobre la normal morfologa celular y
tisular, reconocer las limitaciones de la citologa, y experiencia. La correlacin de los
hallazgos citolgicos con la informacin clnica y del laboratorio como as tambin los
conocimientos acerca de la ubicacin, apariencia general y comportamiento de las lesiones
permiten obtener la mxima informacin til posible de una muestra. Es necesario
categorizar la muestra citolgica como inflamatoria o no inflamatoria, distinguir entre
hiperplasia y neoplasia, diferenciar entre tumores benigno y maligno y distinguir entre la
hemorragia y la contaminacin con sangre. Los cambios citolgicos en los procesos
inflamatorios son idnticos en cualquier localizacin, se caracterizan por la presencia de
numerosas clulas inflamatorias y el tipo de stas indicar si se trata de un proceso de
curso agudo o crnico. En los procesos agudos encontramos abundantes leucocitos
polimorfonucleares y algunos macrfagos, mientras en el crnico predominan las clulas
mononucleares, principalmente linfocitos, clulas plasmticas y macrfagos. El tipo de
infiltracin tambin depende del agente etiolgico involucrado, por ejemplo, en los
procesos bacterianos entraremos predominio de leucocitos polimorfonucleares (figura 3)
(Radin y Wellman, 1998; De Arger, 2001).
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A B
C
Figura 3: Lminas citolgicas de las clulas inflamatorias. A) Grupo de macrfagos
reactivos rodeados de neutrfilos. B) Efusin pleural de un gato, los neutrfilos poseen una
morfologa normal. C) La inflamacin piogranulomatosa es evidente en este aspirado de un
ndulo en la oreja de un perro (De Arger, 2001; Radin y Wellman, 1998).
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5. PROCEDIMIENTO
Tabla 3: Para introducir material extrao.
Paso 1: Para introducir el material extrao al
tejido subcutneo fue necesario realizar una
pequea ciruga a nivel abdominal craneal al
ombligo. Se hizo un raspado del pelo hasta
obtener piel desnudo para evitar una extra
infeccin. Siempre usando detergente con
bactericida que disminuye la irritacin de la
piel.
Paso 2: Anestesiamos al cuy con droga
Ketamina con una dosis de 2 ml. Obteniendo
su dosis a partir de la siguiente ecuacin:
200mg de Ketamina para 1 kg
X para 0.5 kg
X= X=100 mg de ketamina
Entonces:
De 500mg de Ketamina en 10ml en frasco
100mg Xml
X= X=2ml
*Para primer cuy.
Paso 3: Luego 10 minutos se llev a una
mesa simple del laboratorio de histologa.
Colocamos dorsoventralmente al cuy en la
mesa estirando sus cuatro patas para mayor
comodidad. En realidad no se sigui al
protocolo de ciruga por motivos de sus
objetivos. Tambin esterilizamos los
instrumentos de ciruga (equipos de
diseccin) con alcohol yodado.
Paso 4: Desinfectamos la piel con alcohol
yodado y procedemos la diseccin cortando
solo un pequeo segmento de la piel. Luego
de la diseccin introducimos una lmina
cubreobjetos no desinfectado
cuidadosamente por la pequea abertura de la
piel.
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Paso 6: Terminado la ciruga llevamos al cuy
a su caja, posteriormente inyectamos 1ml de
Diclofenaco (antiinflamatorio). No se inyecto
ningn tipo de antibitico con el fin de
obtener mejores resultado sobre la reaccin
de las clulas inmunitarias frente a los
patgenos y al material extrao.
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Paso 5: Tincin N 1 un fijador; fijamos
a las clulas extraendo el agua de las
clulas durante 2 minutos. Tincin N 2
baamos con la tincin cida al
extendido durante 2 minutos luego
lavamos con agua destilada (tie al
citoplasma). Tincin N 3 baamos el
extendido con una tincin bsica durante 2
minutos y lavamos con agua destilada.
Paso 6: Finalmente secamos las lminas
portaobjetos con la muestra teida. Luego
llevamos a los microscopios pticos y
procedemos a examinar las caractersticas
citolgicas de ambas muestras.
6. RESULTADOS Y DISCUSIONES
6.1. Resultados
Descripcin Imagen
Lamina 1: (Del segundo cuy)
Macrfagos
Neutrfilos
Linfocitos
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Lmina 2: (Del primer cuy)
Linfocitos
6.2. Discusin
Segn las lminas observadas en la tabla 5 existen diferencias significativas entre los dos
tipos de lminas caracterizando especialmente en la morfologa de las clulas. En la
lminas de 1 que pertenece al segundo cuy preparado e introducido el material extrao
antes de 4 das de prctica realizada muestra una evidente diferencia con las lminas de 2
que se ha introducido el material extrao hace una semana. Las caractersticas que
presentan las imgenes de la lmina 1 son claras, donde muestra diferentes clulas, dentro
de ellos se puede identificar una clula polimorfonuclear de morfologa irregular, algunas
redondeadas con citoplasma aparentemente agranular pero que en realidad presenta
grnulos ricos en enzimas (Tizard, 2009). Tambin se puede encontrar macrfagos que se
caracteriza por tener una forma citoplasmtica irregular con numerosas lisosomas aunque
normalmente debe tener una morfologa redondeada y su ncleo es bien voluminoso
redondeado irregularmente (Tizard, 2009). La presencia de estas clulas indica una
reaccin inflamatoria aguda participando los componentes de la inmunidad innata como
defensores primarios. Sin embargo, la tercera imagen muestra un posible linfocito por la
forma que presenta esta clula; circular redondeada con poco citoplasma. Como mencionan
Gutirrez, (2010) y Kumar et al, (2008) una inflamacin se desencadena por alguna lesin
que puede ser de naturaleza traumtica, infecciosa, isqumica, txica o autoinmune
producindose las primeras respuestas inmunitarias. En esta fase aparecen las clulas de la
inmunidad innata que posiblemente hayan desencadenado muchas molculas provocando
la migracin de los leucocitos y macrfagos dirigidas mediante la quimiotaxis de muchas
molculas y su posterior activacin para la fagocitosis, es as que la extravasacin de estas
clulas incluido la plasma sangunea al sitio de infeccin demuestra la presencia de los
leucocitos y macrfagos en la lmina. Normalmente una inflamacin aguda suele ser de
acontecimiento rpido, y de corta duracin de unos pocos minutos a varios das. Y una
inflamacin crnica puede durar das hasta aos y generalmente en esta fase inicia la
respuesta de la inmunidad adquirida, una razn por el que aparecen los linfocitos en esta
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fase (inicia la respuesta de la inmunidad adquirida). Sin embargo, la presencia de los
linfocitos es muy abundante en la lmina 2. Esta lmina se caracteriza por la presencia de
las clulas linfocitarias y una suciedad abundante que es por el exudado probablemente
fibrinopurulenta. Esto evidencia que es una inflamacin crnica en fases iniciales, ya que
el animal tena al material extrao hace una semana en el tejido. Sealan Radin y Wellman,
(1998) y De Arger, (2001) que en una inflamacin crnica predominan los linfocitos,
clulas plasmticas y tambin los macrfagos producindose una infiltracin de estas
clulas a causa de los productos de las clulas inflamatorias en la respuesta inmune innata.
Las clulas de la inmunidad adquirida son los linfocitos, clulas plasmticas y sus
productos de secrecin son los anticuerpos segn Abbas et al, (2008) y Gutirrez, (2010).
Las cuales interactan con las sealizaciones de la inmunidad innata. En la inflamacin
crnica participa la inmunidad adquirida y eso no significa que la inmunidad innata no
acta, ms que eso ambos siguen la defensa con el fin de eliminar al agente extrao, con la
diferencia que en este caso la respuesta de la inmunidad adquirida es relevante frente al
dao. Esta inflamacin se produjo debido a la persistencia de la lmina cubreobjetos y la
presencia de muchas bacterias saprfitas, oportunistas que hayan ingresado a la herida y
dominaron a la inmunidad innata (no hay resolucin de la inflamacin aguda).
Producindose un exudado fibrinopurulento lleno de linfocitos, no se observa a los
macrfagos que pertenecen a la inmunidad innata (en esta fase los macrfagos difieren con
la aguda por ser multinuclear gigantes por la fagocitosis (Gutirrez, 2010).
7. CONCLUSIN
Las inflamaciones tienen un proceso de evolucin que puede llegar a una resolucin o
pasar a una inflamacin crnica, en el cual interactan diversas molculas inmunitarias y
clulas inmunitarias desencadenndose bajo dos procesos como inmunidad innata e
inmunidad adquirida, todo esto con el fin de eliminar al agente causal del dao. Las
defensas inmunitarias son impresendibles en la supervivencia de los seres vivos que
protegen de cualquier agente daino.
8. BIBLIOGRAFA
Abbas, A., Lichtman, A., & Pillai, S. (2008). Inmunologa celular y molecular. Madrid:
Elsevier Saunders; sexta edicin.
Barreno, & Pedro. (2008). Inflamacin. Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fis.Nat, 102(1), 91-159.
De Arger, N. (2001). Citologa diagnstica veterinaria . Mxico-Bogot : El manual
moderno .
Fernndez, C., Jimnez de la Puerta, J., & Aguilar, A. (2003). Citologa cutnea
veterinaria. Rev. AVEPA, 23(2), 76-87.
Gutirrez, J. (2010). Inmunologa veterinaria . Mxico: Editorial El Manual Moderno.
Kumar, Abbas, Fausto, & Mitchell. (2008). Rubbins patologa humana . Elsevier; 8a.
edicin .
Martnez, A., & Ortega, J. (2011). Manualde laboratorio de Inmunologa Bsica y Clnica.
Mxico: REDVET.
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Radin, J., & Wellman, M. (1998). Interpretacin de la citologa canina y felina. Argentina
: Nestle Purina Pet Care Company.
Tizard, I. (2009). Introduccin a la inmunologa veterinaria . Barcelona-Espaa : Elsevier
Espaa .
9. ANEXOS
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