Informe Laboratorio #1
Ricardo Andrs Arias Castillejo 1018469188
Universidad Central. Facultad de Ingeniera, Ingeniera Ambiental, Biogeoqumica
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Columna de Winogradsky
Winogradsky column
Resumen
El propsito de este experimento es la
caracterizacin y seguimiento de la columna de
Winogradsky elaborada en el laboratorio con
diferentes materiales orgnicos e inorgnicos
fundamentales para el ptimo desarrollo durante el
tiempo determinado. Los desechos orgnicos e
inorgnicos fueron recolectados en el Rio Soacha.
Luego de realizar el montaje, se hicieron diferentes
determinaciones del a partir de los factores de
sedimentacin, aspecto, colores y olores presentes
acorde a la evolucin semanal de la columna,
donde se encontraron diferencias significativas
debido a la actividad microbiana y a las condiciones
ambientales generadas en este sistema.
Abstract
The purpose of this experiment is the
characterization and monitoring of the Winogradsky
column elaborated in the laboratory with different
organic and inorganic materials fundamental for the
optimum development during the determined time.
The organic and inorganic wastes were collected in
the Rio Soacha. After the assembly, different
determinations of the sedimentation factors,
appearance, colors and odors were carried out
according to the weekly evolution of the column,
where significant differences were found due to the
microbial activity and the environmental conditions
generated in this system.
Palabras clave
Ecosistema, Aerbia, Microaerfila, Anaerbia,
reductor, fermentador, metabolismo,
microorganismos, fotosntesis, sulfuros.
Keywords
Ecosystem, Aerobic, Microaerophilic, Anaerobic,
reducer, fermentor, metabolism, microorganisms,
photosynthesis, sulfides.
Introduccin
Todas las formas de vida existentes en la Tierra
dependen de reacciones de oxidacin y reduccin
que operan mediante transferencia de electrones
(Fernndez M, 2017). En los sistemas vivos, las
reacciones redox aparecieron originalmente en
microorganismos procariotas y forman en la
actualidad un sistema complejo dentro de la
biosfera. Para mantener este sistema vital a nivel
planetario se necesita que las sustancias oxidantes
y las reductoras estn de algn modo conectadas,
permitiendo la continuidad del metabolismo global
(Fernndez M, 2017).
La oxidacin de la superficie terrestre es anloga a
la ordenada formacin de capas microbianas que
se forma en una columna de Winogradsky de abajo
hacia arriba. En ella se desarrollan estructuras
espacialmente organizadas que representan la
evolucin secuencial del metabolismo microbiano y
que parecen recapitular los estados de oxidacin
biogeoqumica. En este sistema, los
microorganismos de las capas microbianas se auto-
organizan y cada grupo se sita en la columna
acuosa a lo largo del potencial redox y de productos
generados, como el oxgeno, dixido de carbono,
gases nitrogenados y azufrados o el hidrgeno.
Mientras que en una columna de Winogradsky el
fenmeno ocurre a escala local y en poco tiempo, lo
mismo ha sucedido a escala global a lo largo de los
tiempos.
En el metabolismo microbiano se realizan una serie
de procesos fisicoqumicos al interior de los
microorganismos y con su entorno, permitiendo una
regulacin de las necesidades biolgicas,
obteniendo as la energa suficiente para sobrevivir
(lvarez S, 2016).
La columna de Winogradsky es un sistema acutico
en el que los microorganismos se establecen en
regiones diferenciadas segn su metabolismo y
constituye un modelo de ecosistema, similar a los
tapetes microbianos que se hallan en aguas dulces
o saladas, donde proliferan microorganismos del
medio acutico y de los sedimentos (Prada J,
2011). Es un instrumento que sirve para estudiar
las relaciones entre microorganismos, comunidades
mixtas y metabolismos energticos variables.
La columna de Winogradsky presenta diferentes
estratificaciones. En la zona inferior, en ausencia de
oxgeno, se desarrollan microorganismos
anaerbios de actividades fermentativas
produciendo como subproductos de su
metabolismo alcohol, cidos orgnicos, cido microbianas:
sulfhdrico, metano, hidrgeno y cidos grasos que
sirven como sustrato para el desarrollo de bacterias
reductoras de sulfato. Los subproductos liberan
productos sulfurados que se expanden a la capa
superior creando intercambios de sulfuro de
hidrgeno en diferentes concentraciones en cada
capa; luego las bacterias rojas (bacterias rojas del
azufre), prpuras y verdes (bacterias verdes del
azufre), se estratifican de acuerdo a su tolerancia al
sulfuro de hidrgeno, en el medio de esta zona se
ubican bacterias rojas y verdes no del azufre. En la
zona media, Microaerfila, se hallan bacterias
oxidado-reductoras aerobias y bacterias
fotosintticas que usan los compuestos qumicos
para su metabolismo. Una capa superior, pueden
hallarse organismos aerbicos como algas verdes
eucariotas y cianobacterias que liberan oxgeno y
mantienen esta zona de la columna aerbica,
dichos organismos crecen rpidamente en esta
capa de la columna (Moreno,2012) (Santos, 2009)
La columna de Winogradsky presenta un enfoque
sobretodo, al ciclo del azufre, pero se podra
desarrollar igualmente a la reproduccin de otros
ciclos biogeoqumicos equivalentes para carbono,
hidrogeno y otros elementos. Es un sistema
complejo, y autnomo mantenido por energa
lumnica.
Materiales y Mtodos
Este experimento se ha realizado en diferentes
etapas que consisten en:
Primer etapa, montaje: Se recolecto una cantidad
de suelo determinada (500g) provenientes del Rio
Soacha, calculando una capacidad 1/3 de volumen
total para ocupar un envase plstico, se tritur 1g
de cascaras de huevo, que fueron adicionados a la
cantidad de suelo junto con dos tipos de sales
determinadas por el docente (CaSO4, KHPO4),
papel finamente cortado y yema de huevo
desmenuzada para luego generar una mezcla
homognea ocupando la capacidad de 1/3 del
envase plstico. Luego, dentro del sustrato
homogenizado se enterraron dos tornillos de hierro
y se aadi agua hasta llegar a una altura de 10 cm
por debajo del borde del envase marcando el limite
sobre el envase para luego sellarlo con papel
vinipel. Es importante agitar levemente la solucin
con una varilla de vidrio para eliminar las burbujas
de aire (Gmez R, 2017).
Segunda etapa, recuento de poblaciones
Se Marcaron diferentes cajas Petri y tubos de
ensayo de NaCl con marcador, indicado las
diluciones a cultivar y los dems datos del montaje.
Se extrajeron 10 mL de la columna de Winogradsky
y fueron diluidos en 90 ml de NaCl (0,85%) en el
Erlenmeyer esto fue mezclado. Esta suspensin
representa la dilucin 10-1, posteriormente se tom
1 ml de la suspensin anterior con el pipeteador y
se agreg a uno de los tubos de 9 ml de NaCl. Se
agitaron los tubos de cada dilucin una vez
realizada. Posteriormente se realiz el mismo
procedimiento hasta llegar a la dilucin 10-4 . De
las ltimas dos diluciones se tomaron de cada una
100 l sembrndolos de forma masiva en una caja
Petri agar SPC que se utiliza para el crecimiento de
bacterias y se repiti el procedimiento sembrando
de forma masiva en agar PDA utilizado para el
crecimiento de hongos y levaduras es importante
resaltar que el tiempo transcurrido entre la
realizacin de las diluciones y la siembra de las
muestras no excedi los 15 minutos para evitar la
contaminacin de las muestras, luego se dej que
la muestra se absorbiera con las cajas tapadas
durante aproximadamente 15 minutos a durante siete das para los hongos en el agar PDA.
temperatura ambiente antes de invertir, finalmente (Gmez R, 2017).
se Invirtieron las cajas e incubaron a 37 2 C
durante 48 h para las bacterias en el agar SPC y
Resultados y Anlisis

Tabla 1. Seguimiento de los cambios presentados semanalmente en la columna de Winogradsky

Semana Columna Observaciones

1 Durante la primera semana se realiz el montaje

con todos los materiales y el orden indicado por la
docente.
Las caractersticas principales que se pueden
describir son:

En este montaje inicial se observa que la muestra

de suelo se sedimento, que al agregar el agua una
parte del agua se mezcl con el suelo y por este
motivo se vea turbia de lo que estaba
principalmente debido a que el agua fue tomada del
Rio Soacha, cabe resaltar que ya viene con una
carga de microorganismos.
Al finalizar el montaje se marc y almaceno la
columna en el laboratorio a temperatura ambiente, y
con presencia de luz solar.

2 En la segunda semana, se puede evidenciar poca

turbidez en el agua, debido al estado de reposo en
este periodo de tiempo. Tambin podemos
evidenciar que el nivel del agua supero el lmite
marcado anteriormente, debido a la actividad de
microorganismos fototrficos diferentes procedentes
del agua o del barro utilizado. La superficie del barro
puede presentar en esta zona un ligero color
castao. Esta es la parte de la columna ms rica en
oxgeno y ms pobre en azufre (UNAM, 2010).
Semana Columna Observaciones

3 Durante la tercer semana de evolucin, pudimos

observar el cambio del color del agua debido a que
se torna de un color amarillento, tambin se
evidencia actividad biolgica activa. Segn la UNAM
(2011) la actividad biolgica se da debido a la
degradacin de la celulosa contenida en las tiras de
papel, este proceso de fermentacin se debe a
bacterias del tipo Clostridium, bacterias
estrictamente anaerobias.

4 Durante la cuarta semana de evolucin se evidencia

un cambio muy notorio en la coloracin del agua, ya
que pasa de un color amarillo claro a color negro
intenso, esto se debe a que las bacterias reductoras
del azufre utilizan los productos de la fermentacin
generando grandes cantidades de H 2S que
reaccionara con el hierro presente en la zona
anaerobia para producir sulfuro ferroso (UNAM,
2011).

Tambin es importante resaltar que en el borde

superior en la columna se presenta una formacin
colonial de color rojo- naranja, este tipo de
caracterstica se atribuye a las bacterias reductoras
no del azufre.
Semana Columna Observaciones

5 Durante la quinta semana de evolucin se evidencia

claramente el crecimiento abundante de una capa
de color verde, esto se genera debido a la presencia
de cianobacterias (organismos fotosintticos). El
olor caracterstico durante esta semana es muy
fuerte caracterstico de la presencia de azufre.

6 En la semana 6 de evolucin, se puede evidenciar

un cambio de la capa aerobia en relacin a la
estructura que se evidenciada anteriormente en la
semana 5, al borde del envase se puede observar la
presencia de un color purpura, segn Prez, J
(2008) la pigmentacin naranja se debe a la
presencia de bacterias del genero Rhodospirillum y
Rhodopseudonomas que no se desarrollan
completamente en presencia de H2S. El olor
caracteristico en esta semana no es muy fuerte.
 8 Se presenta un mayor desarrollo referente a la
composicin de la capa verde caracterstica de la
actividad biolgica de organismos fotosintticos
(cianobacterias) presentes en la zona aerobia de la
Columna. Debido al movimiento generado durante la
manipulacin de la columna para el debido
seguimiento, se not la presencia de un olor fuerte
caracterstico del azufre. La presencia de burbujas
en la imagen se debe a la presencia de H2S
necesario para las bacterias del genero
Amoemobacter (Salazar A, 2014)

9- 10 Durante las semanas 9 y 10, no se presenta un

cambio notorio referente a la semana anterior con
respecto a la actividad biolgica presente en la capa
orgnica caracterstica de la zona aerobia.

El olor caracterstico del azufre desaparece

considerablemente, este fenmeno se debe a la
baja concentracin de H2S elemental para el
metabolismo de las bacterias de genero beggiotoa y
Thiobacillus(Salazar A, 2014).
 11 En esta semana, se presenta una capa orgnica
ms slida y de mayor grosor la actividad biolgica
presente en la zona Microaerofila y anaerobia es
muy escasa debido a la ausencia de colores
caractersticos de los gneros bacterianos
presentes en cada una de las fases presentes en las
zonas mencionadas, el olor presente en la columna
es caracterstico del agua estancada. La presencia
de olores fuertes es nula.

12- 14 Durante estas semanas de finalizacin

experimental, se pueden presenciar un cambio
drstico en la capa orgnica de la columna, esta
condicin puede ser factor de movimiento generado
por la manipulacin del experimento. Aunque, se
puede resaltar que este sistema tiende a estabilizar
su actividad biolgica en presencia de los elementos
qumicos esenciales para el metabolismo de los
microorganismos, en este caso a la presencia de O2
para organismos fotosintticos presentes en la zona
aerobia.

No se percibieron olores al retirar el plstico

protector del envase y el nivel del agua permanece
en su punto de origen sin presentar cambios en su
coloracin y en la sedimentacin de la columna.
Evidencia de microorganismos

Tabla 2. Cultivo y seguimiento de poblaciones microbianas presentes en la columna de Winogradsky

SPC CONCENTRACION 10^-4 OBSERVACIONES

Forma circular, puntiforme

Borde elevado

Presenta elevacin plana

SPC CONCENTRACION 10^-3 OBSERVACIONES

Se presenta crecimiento abundante (forma de la

colonia).

Borde ondulado

Elevacin plana
PDA CONCENTRACION 10^-3 OBSERVACIONES

Forma circular, puntiforme

Borde filamentoso

Colonias aterciopeladas, color verde, blanco(hongos)

Colonias color crema y color rojo en menor cantidad

PDA CONCENTRACION 10^-4 OBSERVACIONES

Forma puntiforme

No presenta borde

Presencia de hongos aterciopelados( verde, blanco)

Colonias de color rojo( organismos unicelulares

Conclusiones

La ausencia de luz es un factor columna de Winogradsky-

indispensable en la evolucin durante la
fase de experimentacin, por este motivo
los procesos presentes en cada una de las
zonas de la columna eran ms lentos y la
por ende, la actividad de microorganismos
fotosintticos no fue de gran desarrollo.
La manipulacin generada en el proceso de
experimentacin pudo alterar algunas fases
durante la evolucin, pero el sistema
demostr que a lo largo del tiempo puede
llegar a estabilizarse nuevamente.
La estratificacin en la columna de
Winogradsky es un factor que depende
directamente de las condiciones
ambientales presentes en cada una de las
zonas, estas condiciones son
fundamentales en el metabolismo y
desarrollo de cada uno de los gneros
bacterianos existentes en el sistema, ya
que el ciclaje de los elementos presentes
sern el producto para la aparicin de
nuevas especies de microorganismos y por
consiguiente, el sistema seguir
evolucionando.
http://www.colmayor.edu.co/archivos/110an
lisis_del_metabolismo_de__pe30g.pdf
UNAM, Practica 9. Estudio de la diversidad
microbiana en un ambiente-
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
DiversidadMicrobianaColumnaWinogradsky
_21554.pdf
Mecias N (2011), Columna de
Winogradsky-
https://es.slideshare.net/nelson1704/column
a-de-winogradsky?next_slideshow=1
Salazar A ( 2014), Columna de
Winogradsky-
http://www.academia.edu/8201405/COLUM
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Malajovich A (2009), Analisis de la columna
de Winogradsky-
https://bteduc.com/guias_es/28_Analisis_de
_la_columna_de_Winogradsky.pdf

La columna de Winogradsky es una

demostracin que explica la adaptacin
de microorganismos en espacios altamente
especficos de acuerdo con interaccin con
el medio ambiente y sus necesidades para
la supervivencia de las diferentes especies.

Bibliografia

Gacto M (2017), la Columna de

Winogradsky- http://www.um.es/acc/la-
columna-de-winogradsky/

Prada J (2011), informe columna de

Winogradsky-
https://es.scribd.com/doc/211319139/COLU
MNA-DE-WINOGRADSKY-INFORME-docx
Alvares R (2016), anlisis del metabolismo
presente en microorganismos de la