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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE TLAXCALA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


LICENCIATURA EN QUMICA CLNICA

MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO

INMUNOLOGA II

OTOO 2017
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE TLAXCALA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LICENCIATURA EN QUMICA CLNICA

Directorio UATx
Mtro. Rubn Reyes Crdoba
Rector

Dr. Luis Armando Gonzlez Placencia


Secretario Acadmico

Mtra. Mara Samantha Vias Landa


Secretaria De Investigacin

Lic. Edilberto Snchez Delgadillo


Secretario De Extensin Y Difusin Cultural

Mtro. Efran Ortiz Linares


Secretario Administrativo

M.C. Jos Antonio Durante Murillo


Secretario Tcnico

Maestra Elvia Ortiz Ortiz


Coordinador De La Divisin De Ciencias Biolgicas y de La Salud

MSP. Carlos Braulio Cruz Nava


Director De La Facultad De Ciencias De La Salud

Dr. Juan De Dios Pedraza Molina


Secretario De La Facultad De Ciencias De La Salud

Dr. Olaf Molina Garca


Coordinador De La Licenciatura En Qumica Clnica

MCSP Mara Guadalupe Moctezuma Ayala


Responsable De Academias De LQC

QFB. Benito Cuaquentzi Hernndez


Responsable De Tutoras De LQC

Dra. Rosala Cruz Lumbreras


Responsable De Investigacin De LQC

Lic. Abimmael Vzquez Barrientos


Responsable Del rea Administrativa LQC

Elabor y corrigi
Dra. Argelia Garca Elizalde
M.C. Fabiola Fabin Tzompantzi
Tec. Rosalba Zempoalteca Meneses
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REGLAMENTO GENERAL PARA EL ACCESO, USO, PERMANENCIA Y SEGURIDAD


DE LOS LABORATORIOS DE LA LICENCIATURA DE QUMICA CLNICA

INTRODUCCIN
El estudiantes de la licenciatura en qumica clnica al formar parte de la comunidad en el rea de
las ciencias biolgicas y de la salud, es imprescindible que posea el conocimiento, la sensibilidad y
la capacidad interpretativa, sobre las implicaciones que tienen sus decisiones al desenvolverse
en un laboratorio, pues afectarn su integridad fsica, a la de sus semejantes y la del ecosistema,
por ejemplo, al desechar de forma incorrecta material qumico y biolgico.
Por lo antes mencionado, como prembulo de las actividades de laboratorio debe comprenderse
perfectamente las normas contenidas en este REGLAMENTO y en su caso realizar sugerencias
para mejorarlo.
Se enfatizan las normas bsicas, por lo que no est dems informarse sobre las particularidades
de las sustancias, tejidos, equipos y materiales involucrados en las diversas actividades de
laboratorio, acordes a la asignatura particular.

NORMAS DE SEGURIDAD

1. El estudiante deber portar el uniforme completo, de preferencia con calzado que sea
adecuado para proteccin contra accidentes y/o derrames.

2. Deber portar bata blanca de algodn, manga larga, abotonada y limpia.

3. Las estudiantes mujeres debern llevar el cabello recogido

4. Todos debern mantener las uas recortadas y sin pintar.

5. Se utilizar material de proteccin tales como guantes, cubrebocas, goggles, cofias, etc.
(dependiendo de la prctica).

6. Debern contar con un kit de limpieza: solucin de cloro (250 ppm), un pao para limpiar
mesas, jabn detergente lquido para lavar material, jabn para las manos, una esponja, un
escobilln, etiquetas blancas, marcador o lpiz para vidrio etc.

7. Queda estrictamente prohibido tomar alimentos en las instalaciones, fumar o maquillarse.

8. No correr, jugar o establecer charlas innecesarias y escandalosas

9. No utilizar el telfono celular o cualquier equipo electrnico o tecnolgico durante la sesin


(ipods, tablets, laptops, etc.) y/o conectarlo en la instalacin de laboratorio, a menos que el
docente lo autorice.

10. No pipetear los reactivos lquidos directamente con la boca.

11. No utilizar guantes para trabajar con el microscopio, para evitar contaminacin cruzada.

12. No colocar mochilas u objetos personales en las mesas de trabajo.

13. No sentarse sobre las mesas de trabajo.


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14. No trabajar solos en el laboratorio.

15. Queda estrictamente prohibido el acceso al rea de los anaqueles de reactivos para cualquier
estudiantes, a menos que el docente as se los indique.

16. Si el (los) alumno(s) inciden en algn aspecto de los anteriores, se le pedir abandonar el
laboratorio en ese momento y la calificacin de la prctica ser reprobatoria.

17. Durante el desarrollo de la prctica deber seguir las indicaciones del docente.

18. Cumplir con el hbito de lavarse correctamente las manos al inicio y final de la prctica,

19. Las mesas de trabajo debern desinfectarse antes y despus de la sesin de trabajo.

20. Antes de usar un reactivo leer los datos de etiqueta e indagar los datos desconocidos para su
manejo correcto (propiedades fsicas, qumicas y toxicolgicas).

21. Todo el manejo de sustancias qumicas deber realizarse con esptulas.

22. Todo compuesto que desprenda vapores deber manejarse en rea ventilada.

23. Toda solucin preparada o sustancia separada de su frasco original debe de estar rotulada
acorde con las normas de etiquetado.

24. Para preparar soluciones con cidos, el cido debe aadirse lentamente al agua nunca al
revs no le des de beber a un cido dado que la reaccin es exotrmica y puede proyectarse
violentamente.

25. No someter los disolvente inflamable a flama o a calentamiento directo, para ello usar baos
mara, parrillas de calentamiento o mantas de calentamiento.

26. No mezclar sustancias incompatibles que pudieran generar un accidente.

27. No debe mirarse dentro de un tubo o matraz en reaccin o calentamiento

28. Las soluciones concentradas de cidos o lcalis deben ser neutralizadas antes de verterse en
el desage.

29. Para evitar la contaminacin de los reactivos; no deber cambiar las pipetas de uso de cada
frasco, no mezclar reactivos a propia decisin para evitar reacciones txicas, detonantes o
corrosivas y desechar los lquidos a llave abierta, cuando le sea indicado.

30. Si se derrama algn lquido, colorante o solucin cida o bsica, es su obligacin y la de sus
compaeros de equipo lavar completamente el rea afectada y/o desinfectar (para residuos
biolgico infecciosos).

31. No dejar picetas con agua corriente (agua del grifo).

32. Es obligatorio elaborar un vale de material para cada prctica, as como dejar una credencial,
que ampare la extraccin de dicho material, este deber ser entregado con anticipacin.
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33. El material deber ser regresado en buenas condiciones, as como lo recibieron, evitando
dejar material de cualquier superficie.

34. Antes de lavar el material con residuo biolgico infeccioso es importante que se inactive el
contenido de todo el material, colocando una bandeja de agua con cloro (al 10%) y
sumergiendo el material por 15 min como mnimo.

35. No tirar material de cristal a la basura ya que el recurso es poco y debemos cuidarlo.

36. Todo el material de cristal deber ser lavado y secado sin excepciones.

37. En caso de destruccin o extravo de material, ser repuesto por el equipo en la siguiente
semana, para tener derecho a la calificacin de la prctica con las siguientes
recomendaciones.

a. 1a vez Reposicin de material ( a la siguiente sesin)

b. 2a vez Reposicin doble

38. En caso de dao, sustraccin, extravo, destruccin a las instalaciones y/o equipo de
laboratorio, ser responsabilidad de todos los alumnos que cursen o tengan acceso al
laboratorio, con las siguientes indicaciones:

a. 1a vez Reparacin del dao antes de la siguiente sesin.

b. 2a vez Suspensin definitiva de prcticas para el equipo

c. 3a vez Suspensin de prcticas al grupo

39. Depositar la basura en los recipientes correspondientes. Con respecto a esto mismo, manejar
correctamente los residuos segn su clasificacin de acuerdo a la NORMA Oficial Mexicana
NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental - Salud ambiental - Residuos
peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y especificaciones de manejo.

TIPO DE CONTENIDO RECIPIENTE


RESIDUO

Basura municipal Guantes, papel, bolsas, cubrebocas, envolturas de papel o Bolsa negra
plstico que no contengan sangre. Frascos de orina y
excremento y torundas de algodn que no estn
empapadas de sangre.

Punzocortantes Agujas vacutainer sin capuchones, capilares, navajas, Rgido rojo


lancetas, bisturies, agujas de jeringas,

Tubos con Tubos rojos, morados, azules, Bolsa roja


sangre

No anatmicos Cartuchos de pruebas, tiras reactivas, jeringas sin aguja, Bolsa roja
pipetas desechables y puntas de plstico con sangre o algn
fluido.
Hisopos, gasas, algodn, aplicadores, material de curacin
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que estn empapados de sangre, esputo o alguna


secrecin altamente infecciosa.

Cultivos y cepas Cajas petri con siembras, cepas bacteriolgicas y pruebas Bolsa roja
bioqumicas.

Patolgicos Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven Bolsa y/o
durante las necropsias, la ciruga o algn otro tipo de recipiente
intervencin quirrgica, que no se encuentren en formol. Las hermtico
muestras biolgicas para anlisis qumico, microbiolgico, amarillos
citolgico e histolgico, excluyendo orina y excremento. Los
cadveres y partes de animales que fueron inoculados con
agentes enteropatgenos en centros de investigacin y
bioterios.

NOTAS:
1. Por ningn motivo se debern mezclar los desechos en contenedores que no les
corresponden.

2. Los portaobjetos deben ser inactivados, lavados y reciclados para su posterior re-
utilizacin.

3. Los cubreobjetos se deben tirar en un contenedor para cristal previamente inactivados.

4. Las muestras de orina y excremento debern ser inactivadas con cloro al 10% previamente
a su desecho en basura municipal.

5. El material de plstico puede desecharse en la basura comn, siempre y cuando sea


inactivado previamente.

6. No se deber tirar material de cristal por ningn motivo, a menos de que ya no tenga vida
til.

7. Los tubos de cristal utilizados para pruebas bioqumicas debern ser inactivados y lavados
enseguida del trmino de la prctica, para evitar el crecimiento microbiolgico y la
contaminacin del laboratorio.

8. Todo el material de curacin o no anatmico que NO EST EMPAPADO de sangre o


fluidos deber ser eliminado en basura comn.
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PRIMEROS AUXILIOS

En caso de accidente en el laboratorio, hay que comunicarlo inmediatamente al docente. En


cualquier situacin que se describen a continuacin deber mantener la calma, no corro, no grito,
no empujo y no trato de recuperar mis pertenencias.

A. En caso de cortaduras: Lave la herida con agua abundante. Trtela luego con un algodn
impregnado en un lquido antisptico (agua oxigenada, iodo) y luego cubra la herida con una
banda estril. Cualquier trozo de vidrio debe ser eliminado inmediatamente. Un pedazo de
plastilina podra ser utilizado para recoger los trozos de vidrio muy pequeos.

B. En caso de incendio: aljese rpidamente y permita que se apague con el extinguidor. Si


esto ya no es posible, salga del laboratorio. Si el fuego afecta a algn compaero, trate de
quitarle las prendas y retrelo de la zona de siniestro.

C. En caso de quemaduras pequeas, dejar correr agua abundan te sobre la zona afectada y
luego aplicar un medicamento apropiado o aloe. En caso necesario, proteger la piel con gasa
y acudir al servicio mdico.

D. En caso de explosin: salga inmediatamente del laboratorio y, si le es posible, ayude a sus


compaeros afectados. Avise al resto del personal de laboratorio para que presten auxilio.

E. Si se salpica con cidos: lave con abundante agua y una solucin de bicarbonato de sodio y
en los ajos con agua y solucin de brax[1] (botiqun).

F. Si ingiere cido fuerte consuma Melox.

G. Cuando se ingiere una base neutralice con jugo cido de limn, naranja, uva o vinagre.

H. Al ingerir sustancia venenosa provoque vmito con emticos.

I. Nunca usar emticos si la persona se encuentra: inconsciente o convulsiona. Incapacitado


para deglutir. Lastimado por haber ingerido un veneno corrosivo.

J. Para contrarrestar un veneno debe usarse un antdoto, antdoto universal dos partes de
carbn activo, una de xido de magnesio y una de xido de tnico. Se homogeniza y se
guarda en seco. Para usar se disuelven 15 g en medio vaso de agua caliente.

BOTIQUN DE PRIMEROS AUXILIOS:

Gasas, Alcohol,
Apsitos, Agua oxigenada,
Torundas, Merthiolate [2],
Hisopos, Violeta de genciana [3],
Tela adhesiva, Benzal [4]*,
Tijera, Vinagre,
Pinza de diseccin, Bicarbonato de sodio,
Vendas, cido brico,
Material para torniquete Melox
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COMO PREVENIR UN ACCIDENTE?

1) CORTADURAS:

No utilice material astillado o en condiciones imperfectas.


Nunca forc o aplique excesiva presin con las manos a uniones o vlvulas, etc.
Jams trate de aflojar uniones de vidrio golpendolas con martillos o herramientas similares.
Nunca someta el material de vidrio a cambios bruscos de temperatura.
Remate siempre con fuego los extremos de los tubos o varillas de vidrio.
Protjase las manos cuando intente insertar o sacar tubos de vidrio o termmetros dentro de
tapones de corcho o goma; siempre es recomendable lubricar previamente el agujero del tapn
con agua jabonosa o glicerina.
El transporte del material de vidrio es siempre peligroso, utilice una caja u otro medio, nunca
llevarlo con la ayuda del cuerpo o los brazos.

2) QUEMADURAS:

No trate de agarrar un utensilio caliente sin usar guantes o pinzas apropiadas.


Nunca coloque o deje una pinza de material o aparato caliente sobre el mesn sin colocar una
nota que lo indique.
Asegrese antes de calentar, que el recipiente no est cerrado ya que el exceso de presin por el
calor pueda explotar.
No aplique calor con el mechero en una sola zona del recipiente (puede producir salpicaduras).
Cuando calientes lquidos viscosos cercirese que el recipiente est completamente seco (el
agua produce salpicaduras violentas), utilice careta de seguridad.

QUEMADURAS POR CIDOS Y/O BASES:

Cuando mezcle cidos realice esta operacin en un sitio donde los derrames sean fcilmente
eliminados.
Coloque las botellas de cidos concentrados perfectamente cerradas alejadas del fuego y de los
bordes de la mesa del laboratorio.
En caso de derrames lave la zona con abundante agua y neutralice con solucin de bicarbonato
de sodio.
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LIMPIEZA DEL MATERIAL DE VIDRIO

El cuidado del material en cuanto a su limpieza y conservacin tiene gran importancia en


cualquier laboratorio.
Es necesario extremar la limpieza del material y de los aparatos para tenerlos en perfectas
condiciones de uso, pues un material defectuoso puede echar a perder cualquier anlisis.
Limpiar perfectamente todo el material inmediatamente despus de su uso es una regla de oro
en todo laboratorio.
De no hacerlo as, los restos de las sustancias manipuladas pueden dejar manchas que luego
son casi imposibles de eliminar.
Para la limpieza del material de vidrio suele ser suficiente el empleo de un detergente suave,
teniendo la precaucin de enjuagar luego perfectamente con agua.
Se recomienda utilizar escobillas para remover las adherencias. Cuando se trata de manchas
ms resistentes, la mezcla crmica es el sistema ms empleado (100 g de dicromato potsico en
1 litro de cido sulfrico diluido en proporcin 1:4).
El ltimo paso aconsejable en la limpieza es enjuagar el material con agua destilada desionizada
dos o tres veces.
Cuando la forma del material dificulte su secado espontneo (las pipetas, por ejemplo), se
aconseja aadir un poco de acetona; posteriormente se eliminar totalmente cualquier resto de
agua en la estufa.
Una recomendacin final concerniente a los aparatos en general: la limpieza se debe limitar a su
parte externa, ya que el mantenimiento del interior lo debe efectuar personal debidamente
cualificado.
Los productos orgnicos oleosos se limpian con acetona.
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INTRODUCCIN
La inmunologa es una rama relativamente nueva de la medicina, sin embargo las observaciones
sobre fenmenos inmunolgicos, se presentaron desde hace varios cientos de aos. Los conceptos
del contagio y la teora de la infeccin por grmenes, se atribuyen a Girolamo Fracastoro, colega de
Coprnico, en la Universidad de Padua, quien escribi en l546 que el contagio es una infeccin que
pasa de una cosa a otra. En l798 Edward Jenner extendi el concepto de contagio al estudio de la
inmunidad producida en el receptor en el caso de la viruela, al observar que las ordeadoras que
padecan la viruela de la vaca, resistan la enfermedad de la viruela humana. En l880 Luis Pasteur
contribuye de una manera excepcional al estudio de la inmunologa con sus vacunas atenuadas,
comprobando que si a un microorganismo se le inducan cambios en su estructura mediante el
aumento de temperatura, este disminua su virulencia. Por esa poca se dio el advenimiento de una
gran cantidad de informacin sobre el estudio de que microorganismos producan enfermedad y como
contrarrestarlos, como los postulados de Koch, que estableca que para comprobar la enfermedad,
esta tena que originarse a partir de un cultivo del microorganismo, e inocularlo en un animal sano. En
ese tiempo las investigaciones dieron luz a los elementos inmunolgicos como la fagocitosis por
Metchnikkof, los anticuerpos por Nuttal, el complemento por Bordet,y ya a principios del siglo veinte
los grupos sanguneos por Landsteiner. Actualmente la inmunologa tiene un lugar importante en la
medicina, ya que se han derivado ramas de la medicina como: la alergia, inmunohematologa ,
inmunoterapia ,inmunogtica, etc. Uno de los principales retos de la ciencia mdica moderna es la
integracin de los adelantos bsicos de la inmunoqumica, la inmunobiologa y la inmunogentica en
procedimientos de diagnstico y teraputica que sern de utilidad en la prctica de la inmunologa
clnica. La mayor parte de este trabajo, se realiza en el laboratorio de inmunologa Los alumnos de la
licenciatura de qumica clnica en el laboratorio comprueban muchos de los conceptos tericos,
adems inician su aprendizaje en la investigacin de los fenmenos biolgicos, con conceptos
bsicos. Las prcticas de laboratorio de inmunologa, estn elaboradas para que coincidan con el
aprendizaje terico, cada uno de los temas seleccionados, tiene sus objetivos, que servirn de gua,
tanto de profesores como de alumnos.
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PRACTICA No. 1
REACCIONES FEBRILES
La aglutinacin de clulas bacterianas con antisueros es una de las pruebas serolgicas mas
antiguas de la inmunologa practica. se inicio como un mtodo para el diagnostico de las infecciones
bacterianas y fue propuesta por Widal en 1896. Las pruebas de aglutinacin bacteriana tienen dos
aplicaciones principales en el diagnostico; las clulas bacterianas desconocidas pueden identificarse
por medio de anticuerpos conocidos o bien, utilizando bacterias conocidas pueden identificarse los
anticuerpos en el suero del paciente. La identificacin bacteriolgica completa del agente patgeno es
un proceso que lleva tiempo (3 o ms das), mientras se intenta el reconocimiento del agente es
posible la identificacin serolgica. En la aglutinacin de los antgenos bacterianos con sus
anticuerpos producen un agregado microscpico.

Objetivos

Que el alumno conozca el fundamento de la reaccin febriles


Que el alumno tenga la capacidad de analizar y discutir el resultado de un estudio.

Material y equipo

Muestras de sueros sanguneos.


Placa de vidrio para aglutinaciones
Pipetas graduadas de 0.2 ml
Reactivos de antgenos para pruebas febriles
"O" de Salmonella typhi
"H" de Salmonella typhi
Salmonella enteritidis paratyphy A
Salmonella enteritidis paratyphy B
Proteus OX-19
Brucella abortus

Procedimiento

1. En una placa de vidrio perfectamente limpia marcar los zonas de reaccin para identificar la
muestra y la reaccin que se llevara a cabo.
2. Se depositan 0.08 ml del suero problema en cada una de las 6 zonas de reaccin.
3. Se agrega una gota de cada antgeno respetando el orden y mezclar las dos gotas con un palillo
diferente.
4. Agitar suavemente la placa por dos minutos y observar la aglutinacin con ayuda de un
microscopio.
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5. Si aparece aglutinacin con alguno de los antgenos, continuar con el siguiente paso.
6. De las reacciones que presentaron aglutinacin se depositan 0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml de suero
problema.
7. Agregar una gota de antgeno seleccionado, se mezclan perfectamente con un palillo y se
observa la presencia de aglutinacin.

Interpretacin:
Los volmenes de suero empleados corresponden respectivamente a diluciones 1:20, 1:40,
1:80, 1:160 y 1:320.
El titulo de anticuerpos del suero problema se reporta como el reciproco de la mxima dilucin
que muestra aglutinacin (por ejemplo: positivo con 0.04 ml, titulo igual 1:40, positivo con
0.005 ml, titulo igual a 1:320)
La mayora de los ttulos mayores de 160 son presuntivos de infeccin.
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PRCTICA No. 2
PROTENA C REACTIVA
Introduccin
En 1930, Tillet y Francis observaron que el suero de pacientes que sufren de enfermedades
inflamatorias precipita con un extracto de pneumococo no proteico, llamado polisacarido C. La
protena que causa este tipo de reaccin fue lIamada Protena "C" Reactiva. La protena C reactiva
(PCR), es una protena que se forma en sitios donde hay inflamacin o degradacin tisular. Se
compone de cinco polipptidos idnticos unidos en forma no covalente y dispuestos como un
pentmero cclico alrededor de una cavidad fijadora de Ca2+. Puede reconocer patrones, como
molculas de fosforilcolina en las membranas de microorganismos y activar al complemento por la va
clsica, para inducir la opsonizasin por C3b.
Como un fenmeno no especfico el incremento en la concentracin de PCR se puede presentar en
cualquier proceso inflamatorio agudo (ya sea infeccioso o no infeccioso). La concentraci6n de PCR
generalmente se encuentra por debajo de 6 mg/L en el suero de adultos sanos y en enfermedades
inflamatorias estos valores frecuentemente se incrementan en un lapso de 4 a 8 horas, despus de
presentarse un evento agudo alcanzando niveles aproximadamente de 20 a 500 mg/L.
Varios mtodos de inmunoprecipitacin se han desarrollado para la deteccin de PCR. EI principio
del procedimiento presentado involucra una reacci6n inmunolgica entre la PCR (como antgeno) y el
anticuerpo correspondiente adsorbido a las partculas de ltex (ltex sensibilizado con Anti-Proteina
"C" Reactiva).

Objetivos
Qu el estudiante conozca las bases para comprender la actividad de la protena C reactiva.
Qu el alumno sea capaz de manejar un equipo comercial para determinar la Protena C
Reactiva y comprender las aplicaciones de esta prueba.

Material y Reactivos

Suspensin de partculas de ltex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana, pH 8,2. Acida
sdica 0.95g/L.
Suero Control Positivo con una concentracin de PCR >20mg/L. Acida sdica 0.95g/L.
Suero Control Negativo. Acida sdica 0.95g/L.
Muestra sangunea problema (suero). Las muestras con restos de fibrina debe ser
centrifugadas antes de la prueba. No utilizar muestras hemolizadas o lipmicas.
Placa de reaccin
Pipeta de 50L.
Palillos de madera.
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Mtodo 1.

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50l de la muestra a ensayar (suero problema) y una gota de cada uno de los controles
Positivo y Negativo, sobre crculos distintos de la placa de reaccin.
3. Mezclar el reactivo de PCR-ltex suavemente antes de usar. Depositar una gota (50L) junto a
cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del
circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Continuar agitando manualmente durante dos minutos. El exceso de tiempo puede originar la
aparicin de falsos positivos.
6. Resultado Positivo Presencia de agregados macroscpicos (aglutinacin comparable al control
positivo). La presencia de aglutinacin indica una concentracin igual o superior a 6mg/L.
7. Resultado Negativo Ausencia de agregados microscpicos (sin aglutinacin, comparable al
control negativo) o una ligera aparicin de granulocidad que exceda a la observada en el control.

Mtodo semicuantitativo

1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 0.9%.


2. Proceder para cada dilucin como en la prueba cualitativa.
3. Lectura e interpretacin: Examinar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin
inmediatamente despus de retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinacin indica una
concentracin de PCR igual o superior a 6mg/L (Verificar grado de sensibilidad analtica del
reactivo).
4. El titulo se define como la dilucin mayor que da resultado positivo.
CLCULOS: La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene con la
siguiente frmula: 6 * Nmero de ttulo positivo de PCR = mg/L

Bibliografa

Roitt, I.M. Inmunidad Innata. Inmunologa: Fundamentos. 10a ed. Panamericana. Laboratorios
Licon Manual del equipo. 2006 Manual de equipo Laboratorio SPINREACT 2013.
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PRACTICA No. 3
FACTOR REUMATOIDE
Los factores reumatoides son anticuerpos dirigidos contra los determinantes antignicos de la regin
Fc de las IgG. En personas sanas, estos anticuerpos pueden hallarse en baja concentracin, sin
embargo se encuentra aumentado en la mayora de los pacientes con artritis reumatoide. La
determinacin del factor reumatoide se lleva a cabo con partculas de ltex cubiertas de IgG.

Objetivos

Que el alumno conozca el fundamento de la reaccin de la prueba de factor reumatoide.


Que el alumno determine en qu casos se utiliza el estudio.

Material y equipo

Tubos vacutainer rojos sin anticoagulante


Muestra de suero
4 tubos de ensaye pequeos limpios y secos
Pipetas graduadas
Aplicadores de madera
Reactivo de ltex FR
Centrfuga
Gradilla
Solucin amortiguadora de glicina

Procedimiento

1. Extraer con el sistema vacutainer una muestra de sangre de un paciente con artritis reumatoide.
2. Una vez coagulada la sangre centrifugar los tubos a 3500 rpm por 10 min.
3. Separar el suero de las muestras.
4. Colocar en una placa de reaccin una gota de suero (aproximadamente 50 l)
5. Colocar una gota de reactivo de ltex y mezclar con aplicador de madera.
6. Poner la placa de reaccin en un agitador automtico o en su defecto mover con movimientos
circulares manualmente.
7. Observar si existe aglutinacin, si as fuera proceder a realizar diluciones como indica el inserto
del reactivo.
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PRACTICA No. 4
ANTIESTREPTOLISINAS
Las estreptolisinas son enzimas hemolticas producidas por la mayora de los estreptococos del grupo
A, destruyen la membrana de los eritrocitos ocasionando la hemlisis. Este producto bacteriano es
una de las muchas toxinas extracelulares y enzimas producidas por los estreptococos. En particular
la estreptolisina O recibe este nombre debido a que es sensible al oxgeno, solo posee actividad en
estado reducido, razn por la cual se le incorpora un reductor (el hidrosulfito de sodio)
inmediatamente antes de usarla. En el laboratorio las antiestreptolisinas pueden determinarse por una
reaccin serolgica de neutralizacin, en la cual si el suero del paciente contiene anticuerpos contra
la enzima (antiestreptolisinas) neutralizarn su capacidad hemoltica y ocurrir inhibicin de la
hemlisis.

Objetivos

Que el alumno conozca el fundamento de la reaccin de las antiestreptolisinas


Que el alumno determine mediante tcnica rpida los ttulos de las antiestreptolisinas.
Que el estudiante conozca una de las tcnicas de antiestroptilisinas con eritrocitos.

Material y equipo

Muestras de sueros sanguneos


Suspensin de eritrocitos al 5%
Amortiguador para ASO (fosfatos pH 6.5)
Estreptolisina O
Bao Mara
Centrfuga
Pipetas graduadas
15 tubos de ensaye

Procedimiento

1. Preparar a partir del suero problema las siguientes diluciones:

Tubo A Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Solucin
0.980 ml 0.6 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
amortiguadora

Suero 0.4 ml del 0.5 ml del 0.5 ml del 0.5 ml del 0.5 ml del
20 l
problema tubo A tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE TLAXCALA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LICENCIATURA EN QUMICA CLNICA

2. Antes de pasar la muestra al siguiente tubo, mezclar perfectamente en un vortex.


3. En el ultimo tubo (tubo 5) tomar 0.5 ml de la dilucin realizada y desecharla.
4. Despus de realizar cada dilucin agregar 0.25 ml de estreptolisina a cada tubo.
5. Mezclar suavemente e incubar a 37C por 15 min en bao Mara.
6. Pasados los 15 min agregar 0.25 ml de una suspensin de eritrocitos al 5%, mezclar e incubar a
37C por 45 min en bao Maria, agitando ocasionalmente.
7. Pasados los 45 min se centrifugan los tubos a 1500 rpm por 2 min y hacer la lectura.
8. Realizar los clculos correspondiente para obtener las UI/ml y reportar

Interpretacin:

La presencia de hemolisis es prueba negativa de la presencia de antiestreptolisinas y se


reporta como 50 UI/ml.
La ausencia de hemolisis (formacin de un botn) es prueba positiva, se reporta de acuerdo al
titulo encontrado.
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LICENCIATURA EN QUMICA CLNICA

PRACTICA No. 5
PRUEBA INMUNOLGICA DE EMBARAZO
Las pruebas de laboratorio para el diagnostico del embarazo se basan en la determinacin de la
gonadotropina corinica humana (hGC), hormona producida por la placenta y que puede detectarse
tanto en el suero como en la orina. La excrecin de hGC alcanza su mximo durante la duodecima a
decimocuarta semana de gestacin y a partir de entonces desciende de nivel. Hasta los aos 60, las
pruebas de embarazo eran bioensayos en las cuales la presencia de la hGC en el suero o en la orina
se demostraba por su efecto en animales. Actualmente estas pruebas han sido sustituidas por
pruebas inmunolgicas. Las pruebas inmunolgicas dependen del anticuerpo anti-hGC. La presencia
de hGC en el suero u orina se demuestra por un sistema indicador.

La prueba inmunolgica de embarazo (conocida como PIE) es una prueba muy fcil de realizar, ya
que se realizan con microcasets pre-fabricados, que arrojan resultados en muy poco tiempo.

Objetivos

Que el alumno conozca el fundamento de la prueba de embarazo


Que el alumno determine cul es el mejor momento para el diagnostico de embarazo.
Que el estudiante conozca mediante el estudio de la gestacin el comportamiento hormonal.

Material y equipo

Suero sanguneo de paciente embarazada (10 ml)


Equipo de diagnostico de hGC
Pipetas serolgicas de 1 ml

Procedimiento PRUEBA RPIDA

1. Obtener la muestra de la paciente por puncin venosa, dejar coagular y centrifugar a 4500 rpm por
5 min.
2. Sacar el microcaset de su envoltura con la pipeta que viene integrada en el equipo de diagnostico.
3. Colocar 2 o 3 gotas del suero de la paciente en el compartimento que tiene el microcaset para tal
objetivo.
4. Dejar correr 5 min y observar el resultado.
5. Interpretar y reportar el resultado.
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PRACTICA No. 6
PRUEBAS CRUZADAS
El uso creciente de transfusiones de sangre ha hecho que la hemaglutinacin sea una de las
pruebas serolgicas de mayor empleo y de gran importancia. El objetivo de una transfusin es el
proporcionar al paciente (receptor) el tipo preciso de sangre. Por supuesto este objetivo es difcil de
lograr, pero es posible aproximarse mucho si se realizan las pruebas correctas de hemaglutinacin.
En primer lugar, debe determinarse con exactitud los antgenos de los grupos sanguneos principales:
el grupo ABO y el Rh del paciente, sobre la base de estos grupos se selecciona la unidad de sangre
de grupo ABO y Rh compatible y se procede a efectuar las denominadas pruebas cruzadas mayor y
menor. La prueba cruzada mayor, denominada prueba de compatibilidad, se realiza mezclando el
suero del receptor con los eritrocitos del donador. Si se produce hemaglutinacin, esta sangre no
puede darse al receptor porque tiene anticuerpos capaces de reaccionar y destruir la sangre
administrada. En la prueba cruzada menor, los eritrocitos del receptor son incubados con suero del
donador y se observa si hay aglutinacin. Si se produce hemaglutinacin , la sangre del donador no
debe administrarse.

Objetivos

Que el alumno conozca el fundamento inmunolgico de la pruebas cruzadas


Que el alumno comprenda en que momentos se lleva a cabo una prueba cruzada.
Que el estudiante desarrolle habilidad para la realizacin de la tcnica.

Material y equipo

2 tubos vacutainer rojos sin anticoagulante


12 tubos de ensaye limpios y secos
6 pipetas Pasteur
Centrfuga
Gradilla
Bao Mara
Solucin salina isotnica
Albumina
Reactivo coombs

Procedimiento

1. Extraer con el sistema vacutainer un tubos de sangre a un receptor y dos donadores


(preferentemente de grupos sanguneos diferentes) e identificar los tubos perfectamente.
2. Una vez coagulada la sangre centrifugar los tubos a 3500 rpm por 5 min.
3. Separar el suero de todas las muestras y pasarlas a tubos limpios previamente identificados
como receptor (R), donador 1 (D1) y donador 2 (D2).
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4. Posteriormente trasladar en un tubo limpio 1 ml (aproximadamente) de eritrocitos del fondo del


mismo tubo, del receptor y los donadores y lavar los eritrocitos con solucin salina (SSI) por tres
ocasiones.
5. De los glbulos rojos obtenidos, se prepara una suspensin al 5 %.
6. Marcar un tubo como auto-testigo (AT), 2 tubos como fase Mayor donador 1 (MD1) y fase Mayor
donador 2 (MD2).
7. Marcar otros 2 tubos como fase menor donador 1 (mD1) y fase menor donador 2 (mD2).
8. Se agregan en cada tubo los siguientes reactivos en el orden indicado:

Fase Mayor (M) Fase menor (m) Auto-testigo (AT)

2 gotas de suero del 1 gota de glbulos rojos al 2 gotas de suero del


receptor 5% del receptos receptor

+ + +

1 gota de glbulos rojos al 2 gotas de suero del 1 gota de glbulos rojos al


5% del donador donador 5% del receptos

9. Mezclar perfectamente y centrifugar a 3400 rpm por 30 seg y observar si existe aglutinacin (fase
salina).
10. Posteriormente agregar 1 gota de reactivo de albumina e incubar a 37C por 15 min.
11. Pasado el tiempo de incubacin centrifugar las muestras por 30 seg a 3400 rpm y observar la
aglutinacin (fase albumina).
12. Lavar los eritrocitos con SSI por tres ocasiones, centrifugar a 3500 rpm por 1 min y desechar el
sobrenadante.
13. Al termino del ltimo lavado decantar todo el sobrenadante.
14. Agregar 2 gotas de reactivo Coombs, mezclar y centrifugar a 2000 rpm por 1 min.
15. Observar la presencia de aglutinacin (fase coombs)
16. Reportar.

Interpretacin:
Si existe la presencia de aglutinacin en cualquiera de los tubos, sera indicativo de que hay
incompatibilidad entre el posible donador y el receptor ( paciente). Si no la hay, las sangres
son compatibles.
Bibliografa

Stites; Stobo; Wells. Inmunologa Bsica y Clnica. Banco de Sangre e Inmunohematologa . 6.


Edicin. Edit. El Manual Moderno 1988 Pags. 302-312
Rojas Espinoza. Inmunologa (de Memoria), 2 Ed. Edit. Panamericana, 2001
Noel,R .,Friedman H. El laboratorio en Inmunologa clnica 2 Ed. Edit. Panamericana l984. pag
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Rojas Montoya W. Inmunologa 8 Ed. Edit. CIB. l900 pag.219-222