TRABAJO DE INVESTIGACIN

BIOGEL DE QUITOSANO A PARTIR DE LA DESACETILACIN

TERMOALCALINA DE CONCHAS DE CAMARN PROPUESTA PARA EL
TRATAMIENTO DE LA ESTOMATITIS SUBPROTSICA

Dubraska Surez* Carlos Garca** Gladys Velazco*** Reynaldo Ortiz**** Anajulia Gonzlez***
* Ctedra de Investigacin Social. Departamento de Investigacin. ** Centro de Investigaciones
Odontolgicas. *** Laboratorio Integrado de Biologa Molecular y Celular (LIBCEM). Facultad de
Odontologa. **** Laboratorio de Electroqumica Fundamental y Aplicada. Facultad de Ciencias.
Universidad de Los Andes. Mrida, Venezuela. E-mail: dubraskitasuarez@gmail.com

RESUMEN
La Odontologa se ha orientado a la elaboracin de propuestas para producir nuevos bio-
materiales, con el n de prevenir y tratar enfermedades bucales catalogadas como problemas de sa-
lud pblica an no erradicados. La estomatitis subprotsica (ESP) es uno de ellos y la problemtica
derivada de su tratamiento conlleva a plantearse nuevas terapias a partir de biomateriales como el
quitosano, biopolmero derivado de la quitina con propiedades para disminuir la adhesin de Can-
dida albicans a las bases de las prtesis totales, y con capacidad para regenerar tejidos. El objetivo
de esta investigacin fue la elaboracin de un gel de quitosano como propuesta teraputica para la
ESP, aplicando una metodologa diferente ms simplicada para la obtencin del hidrogel que
consisti en obtener quitosano por desacetilacin termoalcalina de exoesqueletos de camarones y
su posterior transformacin en gel va templado cido en medio acuoso. El resultado fue un gel
de color turbio, que sicoqumicamente es un biopolmero til para su posible aplicacin como
acondicionador de los tejidos en pacientes con ESP. Adems, este proceso representa una alternati-
va tecnolgica para el tratamiento de los desechos del camarn, porque se reduce la contaminacin
ambiental generada por su disposicin y se obtiene quitosano de amplia aplicacin en otras reas.

Palabras clave: estomatitis subprotsica, biomateriales, exoesqueletos de camarn, quito-

sano, geles, desacetilacin termoalcalina

BIOGEL OF CHITOSAN SINCE THE THERMOALKALINE DESACETYLATION

OF THE SHRIMP SHELLS AS A PROPOSAL FOR THE SUBPROSTHETIC
STOMATITIS TREATMENT

ABSTRACT
Dentistry has been oriented to the production of new biomaterials, in order to prevent
and treat oral pathologies classied as public health problems that are not yet eradicated. The
subprosthetic stomatitis (SP) is considered as one of these cases and the problematic derived from
its treatment, implies to think in new therapies since biomaterials as chitosan, a biopolymer, by-
product of chitin, with antimycotic properties that reduce the adhesion of Candida albicans to the

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total prosthesis bases, and being able to regenerate severely damaged tissues. The aim of this study
was the elaboration of a chitosan gel as a therapeutic alternative for SP treatment. Thus, a dier-
ent methodology was studied more simplied than the procedure to obtain hydrogel that lies
in chitosan extraction by thermoalkaline desacetylation from the shrimps exoskeleton and lately,
and its subsequent transformation into a gel by tempering in an aqueous solution. The result was
a turbid gel, whose physicochemical properties have made it a useful biopolymer as a tissue condi-
tioner in patients with SP. So, this process represents a technological alternative for the treatment of
shrimp wastes, because it reduces the environmental pollution due to its disposition and produces
chitosan that have a wide application in dierent areas.

Key words: subprosthetic stomatitis, biomaterials, shrimps exoskeleton, chitosan, gel,

thermoalkaline desacetylation

Introduccin

La estomatitis subprotsica (ESP) se un polmero hidroflico obtenido de la desace-

ha convertido en un problema de salud bucal
pblica, ya que la inmunidad del paciente se ve
afectada debido a las limitaciones relacionadas a
la adhesin, permanencia del material en la base
protsica y la quimioresistencia a los tratamientos
habitualmente empleados para tratar dicha
afeccin, en los que se utilizan antimicticos,
desinfectantes como clorhexidina, compuestos
derivados del fenol como Listerine e hipoclorito
de sodio , o se incorporan drogas antimicticas
a los acondicionadores de tejido (1).
Ante esta problemtica, se han desarro-
llado biomateriales con base en componentes
netamente naturales y de sistemas biolgica-
mente activos. Este es el caso del quitosano,
poco conocido en la ciencia odontolgica aun
cuando algunos estudios (2) reeren que este
biopolmero es altamente til para combatir
entes patgenos y lesiones inamatorias y ulce-
rosas en cavidad bucal. Es considerado como un
biomaterial de bajo costo y de origen natural; es
tilacin de la quitina y se ha comprobado que
tiene excelentes propiedades biomdicas y anti-
biticas, por consiguiente, se aplica en diversas
reas, principalmente en medicina (3). Este
biopolmero se ha utilizado como membrana de
hemodilisis, sutura biodegradable, sustituyente
articial de la piel, agente cicatrizante en que-
maduras, sistema liberador de frmacos, para
la liberacin de insulina, transporte de agentes
anticancergenos, tratamiento de tumores (leu-
cemia), control del virus del SIDA, entre otros
usos en el rea mdica.
Por otra parte, se ha reportado la utili-
dad del quitosano en el desarrollo de sistemas
mucoadhesivos para la liberacin controlada de
frmacos (nifedipina, propranolol e insulina) a
nivel de la mucosa gstrica y bucal (4). Ade-
ms, se ha demostrado la capacidad del quito-
sano para favorecer el paso de macromolculas
hidroflicas a travs de un modelo de mucosa
bucal (cultivos celulares TR 146) a concentra-

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ciones a las cuales el polmero result ser no Materiales y mtodos

citotxico. Por todo lo anterior, se concluye que
este polmero tiene un futuro prometedor en el Esta investigacin de tipo transversal y di-
desarrollo de sistemas mucoadhesivos destina- seo experimental, comprendi los siguientes
dos a la liberacin de molculas activas a nivel procesos de laboratorio: desmineralizacin,
de las mucosas gstrica y bucal (4). desproteinizacin, desacetilacin (tratamien-
Existe un sistema para elaborar ge- to qumico de la materia prima), puricacin
les de quitosano mezclados con gluconato y ltrado, polimerizacin y prueba del gel. El
de clorhexidina al 0.01 y 0.02%, aislando la procedimiento se llev a cabo de la siguiente
Porphiromona gingivalis y evaluando la capa- manera:
cidad bactericida del mencionado sistema. Se
observ claramente que la adhesividad del qui- Seleccin de la materia prima: 1 kg de ca-
tosano a la supercie gingival de los animales marones Pleuroncodes planipes, a los que se les
de experimentacin fue bastante alta, y se po- extrajo los exoesqueletos que luego se sometie-
tenci altamente la accin de la clorhexidina ron a la limpieza en el Laboratorio de Polme-
acompaada del quitosano (5). ros de la Universidad de Los Andes de Mrida,
En consecuencia, existe evidencia utilizando cepillos de cabezal corto nmero 2 y
cientca que indica que el quitosano es bio- una solucin no jabonosa con base en O2 y sin
compatible, biodegradable y no txico, por cloro (Vanish) para evitar contaminaciones de
s mismo posee actividad antimicrobiana y la materia prima (Figura 1).
antifngica (2,6). En Venezuela, y espec-
camente en Mrida, no existen antecedentes
de estudios que reporten la aplicacin del
quitosano en Odontologa. En vista del poco
conocimiento que se tiene de esta sustancia,
cabe destacar que es probable que sea uno
de los polmeros ms compatible que hasta
ahora se conoce. Partiendo de estas conside-
raciones, el objeto de esta propuesta investi-
gativa consisti en formular un gel con base
en quitosano, para su posible aplicacin en
el tratamiento de la ESP. Figura 1. Exoesqueleto de camarn

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Posterior al lavado, los exoesqueletos utilizando HCl a una concentracin 1 N. La

se transportaron en una bandeja envuelta en
papel de aluminio para someterse a un seca-
do continuo por 24 horas en una estufa marca
GCA/Precisin Scientic, Modelo 2 a 100C;
posteriormente los exoesqueletos debieron
ser molidos y tamizados en un molino Tomas
Witley Mill modelo ED5 (Figura 2).
relacin seleccionada en esta experiencia fue
1:5, es decir, por cada gramo de materia prima
5ml de HCl. La relacin entonces fue estableci-
da como se observa en la ecuacin 1, correspon-
diente al clculo para la desmineralizacin de la
materia prima en relacin al peso:
Des = ~63 gr x 5ml HCl = 315 ml HCl

En un baln de 400 ml se coloc la

materia prima y se procedi a agregar los 315
ml HCl, a su vez, el baln se coloc en una
plancha a 37C para ser sometido a una agita-
cin constante durante cuatro horas como se
observa en la Figura 3.

Figura 2. Polvo de exoesqueletos de camarones

Obtenido el polvo de los exoesquele-

tos, se procedi a un pesaje de la materia prima
en una balanza electrnica marca SCIENTE-
CH ZSA 210 con la nalidad de realizar los
clculos para determinar las concentraciones
necesarias.

Tratamiento qumico de la materia Figura 3. Desmineralizacion de la materia prima

prima para la obtencin de quitina: comenz
con la desmineralizacin de la materia prima

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Cuatro horas despus se realiz el la-
vado de la muestra en una centrfuga a cien
revoluciones por minuto (100rpm) y con agua
ultra pura durante tres sesiones para eliminar
completamente el HCl remanente y evitar pr-
dida de materia prima, slo eliminando el so-
brenadante como se observa en la Figura 4.
Figura 4. Lavado y centrifugado para la obtencion
de quitina
El pH en este momento es cido, por
lo que se modic hasta la neutralidad utilizn-
dose NaOH al 50% concentrado, gotendose
y midindose progresivamente con un pH me-
tro. Los exoesqueletos sometidos al procedimien-
to descrito pasan a ser quitina biopolmero tipo
polisacrido, considerado a menudo como un
derivado de la celulosa, la diferencia se encuentra
en el grupo hidroxilo del carbono 2, el cual en la
quitina ha sido sustituido por el grupo acetamida
y cuyo monmero es:2-2acetamido-2-deoxi--
D-glucosa; caracterizndose por ser blanca, dura
e inelstica. La obtencin de quitosano se reali-
za por medio de un tratamiento con lcali con-
centrado y caliente, con el n de retirar la mayor
cantidad de unidades acetilo de la estructura del
polmero (Figura 5).
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Figura 5. Tratamiento termoalcalino y desacetila-
cin de la quitina
La desacetilizacin de la quitina se rea-
liz en un baln de 500 ml desde el sedimen-
to hasta su aforo con NaOH al 27%, por 24
horas, a una temperatura de 30C. El polmero
resultante es bsico debido al grupo amino libre
en su estructura, lo cual le proporciona ciertas
caractersticas qumicofsicas de gran inters m-
dico y odontolgico. El producto se puric por
ltrado en un embudo Buchner, realizando lava-
dos con agua destilada, hasta lograr eliminar la
alcalinidad del medio.
Con la nalidad de determinar la calidad
del quitosano y potencialidad para convertirse en
un hidrogel, se procedi a preparar las muestras de
quitosano por disolucin en una mezcla compues-
ta de cido actico 0,1 M y cloruro de sodio 0,2 M
con agitacin constante. En este procedimiento se
pudo observar la disolucin paulatina del quitosa-
no y su paso a gel (Figura 6).
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Figura 6. Biogel de quitosano
Resultados y discusin
Se obtuvieron dos biopolmeros
intermedios, la quitina, producto de la
desacetilacin primaria de la materia prima
(polvo de exoesqueletos), y el quitosano,
resultante de la desacetilacin termoalcalina
exhaustiva de la quitina.
Algunos investigadores han obtenido
quitosano con caractersticas similares, median-
te desacetilacin termoalcalina de la quitina
con hidrxido de sodio al 50% a 100C (7);
mientras que en el presente estudio se realiz
con hidrxido de sodio al 27%, por 24 horas, a
30C, disminuyendo la alcalinidad en el medio
para facilitar la puricacin del producto y re-
duccin de los costos e insumos, as como una
reduccin del riesgo laboral en el trabajo de la-
boratorio. Sin embargo, existen quienes dieren
del proceso preriendo realizar la desacetilacin
NaOH al 70% a 105C (8).
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El producto nal consisti en un gel,
con pH neutro, de color turbio (amarillento),
con atributos similares al gel esperado y caracte-
rizado previamente por otros investigadores. El
mencionado color amarillento puede deberse a
trazas de elementos protenicos constituyentes
del exoesqueleto de los camarones en su proceso
de descalcicacin y desproteinizacin, ya que
no se utilizaron solventes como el xileno para
la decoloracin de las conchas por ser una sus-
tancia fuerte, y para no utilizar concentraciones
mayores de lcali en el medio. En este sentido,
este estudio diere del procedimiento usado
por otros investigadores empleando xileno en
concentraciones no reportadas, para decolorar
el polvo de los exoesqueletos de camarones (8).
Ahora bien, en este particular, este estudio co-
incide con la desproteinizacin y desminerali-
zacin del polvo de materia prima molida y la
posterior desacetilacin de la quitina sin pasar
por la decoloracin (7).
El proceso planteado en esta investiga-
cin tambin diere de otros estudios, ya que
el lavado se realiz en una centrfuga con el n
de eliminar el sobrenadante (desecho), evitar la
prdida exagerada de materia prima, conferirle
una mayor especicidad y sensibilidad a este
mtodo y reducir el porcentaje de error en los
productos obtenidos; en este sentido, se reco-
mienda lavar con agua destilada y recoger las
impurezas con papel ltro (7).
Finalmente, las concentraciones de los
reactivos qumicos, temperaturas y tiempo de
reaccin empleadas en esta investigacin, die-
ren de los resultados reportados (6,7,8,9), de-
bido a que la muestra de exoesqueletos de ca-
marones, fue diferente en cuanto a especie del
crustceo, peso y cantidad de materia prima,
y tiempo de unin del exoesqueleto al cuerpo
del camarn mucho mayor que el obtenido en
las camaroneras como desecho inmediato.
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Conclusiones

Se elabor un gel de quitosano a par-

tir del exoesqueleto del camarn langostino
(Pleuroncodes planipes) como propuesta tera-
putica a la ESP, de grado tcnico, puricado
con propiedades para ser utilizado como pro-
bable biomaterial. El protocolo de obtencin
del gel para este estudio es diferente a otros,
ya que su nalidad radic en obtener el qui-
tosano para aplicar en cavidad bucal y con un
procedimiento ms corto y sencillo de reali-
zar, experiencia que se puede repetir en poste-
riores estudios en el rea odontolgica.
De acuerdo a los resultados obtenidos,
es posible inferir que las caractersticas sico-
qumicas del gel del quitosano dependern del
proceso de puricacin al cual sea sometido y
del protocolo adoptado, as como tambin de la
nalidad a la que se destine su procesamiento.
El mtodo de dilucin parcial e hinchamiento
en cido actico permiti la identicacin de
gel de quitosano acorde con los valores repor-
tados que en esta investigacin es turbio (ama-
rillento), pigmentacin que puede responder a
trazas de elementos protenicos constituyentes
del exoesqueleto de los camarones en su proce-
so de descalcicacin y desproteinizacin.
Una formulacin en forma de gel de qui-
tosano, limitar el problema de la solubilidad y
permitir la liberacin controlada de frmacos,
o de sus componentes intrnsecos regeneradores
de queratocitos, broblastos, y estimulador de
otras clulas mediadores de la inamacin, as
como su accin antibitica, biocompatibilidad
y escasa citotoxicidad, perlan a este hidrogel
como el candidato de eleccin para el trata-
miento de la ESP y de otras patologas inama-
torias en Odontologa, y una serie de potencia-
les usos, que, sin duda alguna, simplicaran el
tratamiento del paciente odontolgico.

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