La Granja | 3
Caracterizacin fitoqumica
de la especie Ilex guayusa Loes.
y elaboracin de un prototipo
de fitofrmaco de inters comercial
Matteo Radice
Giovanni Vidari
Universit degli Studi di Pavia
Italia
Introduccin
De los 17 pases megadiversos del
mundo cuatro de ellos se ubican en
la zona andina y concentran el 75%
de la diversidad en especies de ani-
males y plantas, estos son: Colom-
bia, Per, Venezuela y Ecuador (Es-
trella et al. 2005). La Amazona
ecuatoriana representa una de las
reas con mayor biodiversidad del
planeta y por su enorme variedad de
plantas se convierte en una fuente de
investigacin de inters permanente,
especialmente para el desarrollo de
nuevas materias primas del mercado
farmacutico, cosmtico y alimenta-
rio. Al inters comercial se unen
tambin el cientfico y el antropol- todas las propiedades curativas que la
gico, sobre todo cuando se trata de
recuperar una de las plantas sagradas
de las nacionalidades indgenas que
habitan en la regin amaznica ecua-
toriana conocida con el nombre ver-
nculo de guayusa (Ilex guayusa
Loes.) y que es usada tradicional-
mente por los Achuar y mestizos en
forma de infusin.
Dentro de este contexto, es funda-
mental aclarar que el conocimiento fi-
toqumico de la guayusa es limitado y
la literatura cientfica es escasa, razn
por la cual es necesaria una profunda
investigacin cientfica con el fin de
evaluar su actividad biolgica o farma-
cutica y los posibles usos comerciales.
Actualmente, los pocos datos fitoqu-
micos de esta planta solo revelan datos
de su contenido en cafena, as como la
presencia de triterpenos y cidos cloro-
gnicos (Rosero Gordn 2006-2007);
por lo tanto, an no se pueden explicar
tradicin popular le atribuye. As, los
objetivos de esta investigacin fueron:
1. Desarrollar un fitofrmaco con ba-
se en Ilex guayusa Loes. que acte como
un coadyuvante en el tratamiento de
manifestaciones sintomticas como gri-
pe, jaqueca y fiebre.
2. Identificar las familias qumicas
presentes en Ilex guayusa Loes.
3. Desarrollar la preparacin de un
extracto adecuado a la formulacin fi-
nal.
4. Desarrollar un mtodo de croma-
tografa lquida de alta resolucin
(CLAR) para la dosificacin de la ca-
fena en el producto final.
5. Establecer los parmetros de cali-
dad del producto transformado.
6. Realizar un proceso productivo
apto a las condiciones tecnolgicas
locales.
El enfoque de la investigacin se
puede resumir en nueve etapas prin-
cipales (Figura 1), las cuales deben
ser completadas con el desarrollo de
un prototipo sometido a estudios
preclnicos y clnicos, pruebas indus-
triales y finalmente, el producto de-
sarrollado debe tener un plan de co-
mercializacin.
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Figura 1. Etapas de la investigacin farmacognstica de Ilex guayusa Loes. para obtener un fitofrmaco.
Datos ecolgicos de Ilex guayusa
Loes.
El gnero Ilex est presente en las re-
giones tropicales y subtropicales del
continente americano e incluso en
Oceana, se calcula que posee ms de
500 especies. El subgnero Euilex es
el ms extenso, puesto que incluye
varias especies en el neotrpico distri-
buidas en Colombia, Ecuador, Brasil,
Uruguay, Paraguay y el norte de Ar-
gentina (Brcher 1989).
En el Ecuador, de acuerdo a los re-
gistros del Herbario de Loja (LOJA),
la guayusa est presente en las provin-
cias de Sucumbos, Napo, Pastaza,
Morona Santiago y Zamora Chinchi-
pe; sin embargo Jrgensen y Len-Y-
nez (1999) tambin registran indivi-
duos en las provincias de Pichincha y
Tungurahua. La distribucin de la es-
pecie es desde el nivel del mar hasta
los 1.500 msnm (Jrgensen y Len-
Ynez 1999).
Datos taxonmicos de Ilex
guayusa Loes.
Ilex guayusa Loes. pertenece a la fami-
lia Aquifoliaceae y es reconocida con
el nombre castellano de guayusa en la
mayora de localidades de Ecuador. Es
un rbol perenne nativo de la regin
amaznica, donde es silvestre, pero
tambin est presente en ciertos luga-
res subtropicales de la regin andina
en estado cultivado (Jrgensen y
Len-Ynez 1999). En general, los in-
dividuos de esta especie alcanzan un
tamao promedio de hasta 10 m de
altura, poseen un dimetro a la altura
del pecho (DAP) de 50-80 cm, tienen
una copa irregular y presentan un fo-
llaje denso (Garca Barriga 1992). En
la localidad de San Luis ubicada cerca
de Sevilla Don Bosco (provincia de
Morona Santiago), se ha reportado la
existencia de un bosque natural de r-
boles de guayusa con individuos que
alcanzan una altura de 20 m y tienen
un DAP de 80 a 90 cm.
El tronco tiene un fuste a menudo
bifurcado a la altura del pecho, corte-
za blanca y textura lisa. Las ramas son
extendidas y flexibles. Las hojas son
coriceas, verde-olivceas, enteras,
oblongo-elpticas, simples, alternas,
coriceas, dentadas, glabras o subgla-
bras en el haz y envs, pice acumina-
do, base aguda, 15-21 cm de largo, 5-
7,5 cm de ancho, pecolo corto de 1
cm de largo (Schultes 1972; Garca
Barriga 1992). El fruto es una baya
globosa de casi 1 cm de ancho y verde.
La flor posee una corola blanco verdo-
sa con ptalos obtusos, estambres en
igual nmero que los ptalos, anteras
oblongas, ovario ssil subgloboso y
usualmente con 4-6 cavidades (Garca
Barriga 1992).
Propiedades y usos de la guayusa
De los cuatro gneros de la familia
Aquifoliceae, el gnero Ilex es el de
mayor importancia econmica, ya que
un gran nmero de especies se em-
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plean como plantas ornamentales y
medicinales. Las especies que se desta-
can como fuente de varias preparacio-
nes ricas en cafena y teobromina son:
Ilex vomitoria Aiton (yaupon), Ilex pa-
raguayensis A. St.-Hil. (yerba mate) e
Ilex guayusa Loes. (guayusa).
El investigador colombiano Patio
(1968 citado en Correa y Bernal
1989) relata que en una carta del je-
suta granadino Juan Lorenzo Lucero
con fecha 23 de agosto de 1683, diri-
gida al Virrey del Per, Melchor Nava-
rra y Rocafull, describe una excursin
realizada en 1682 por la cuenca del ro
Santiago o Parosa, un afluente del
margen izquierdo del ro Maran, re-
gin habitada por los indios Jbaros.
En este documento, Lucero describe
que los indgenas durante sus actos
mdicomgicos usaban plantas, y re-
lata lo siguiente:
Ellos colocan juntas estas hierbas
demonacas (Datura, Banisteriopsis y
otras plantas narcticas) con guausa
y tabaco, y las dejan hervir hasta que
la poca cantidad sobrante del zumo
llega a ser la quinta esencia con la
creencia de que aquellos que la beben
son premiados por el diablo con el
fruto de la maldicin y para la desgra-
cia de muchos.
En la cosmovisin indgena el ri-
tual tiene un significado de purifica-
cin, induccin de pequeos sueos cies estn presentes por tradicin co-
para adivinar si la expedicin de caza
ser exitosa y tambin se consume co-
mo bebida de buen presagio. Es as,
que en los rituales es consumida en
concentraciones altas para soar y po-
der ver el futuro, destacndose que el
empleo tradicional de la guayusa entre
las nacionalidades indgenas de la ama-
zona ecuatoriana es muy antiguo
(Acosta-Sols 1972; Schultes 1972;
Spruce 1996); por ejemplo, los Achuar
del sur de Ecuador se han acostumbra-
do y an lo practican, a tomar infusin
de guayusa antes de
salir a sus expedi-
ciones de cacera o
de pesca. Estos
hechos de uso
ancestral de la guayusa demuestran
que se deben intensificar los estudios
farmacuticos, porque indican diferen-
tes empleos de esta planta en la etno-
medicina y que requieren ser ms pro-
fundizados con pruebas fitoqumicas.
Usos comerciales de la guayusa
El uso del gnero Ilex es muy difun-
dido en Sudamrica y algunas espe-
mo parte de las bebidas locales. La
infusin de Ilex guayusa Loes. se pue-
de considerar como el mate ecuato-
riano, porque es muy consumida en
la regin oriental amaznica, donde
se la sirve caliente en copas con el de-
sayuno y, sorprendentemente, a pesar
de su alto contenido de cafena tam-
bin se acostumbra a tomarla en la
noche.
En algunas cafeteras de la ciudad
de Macas (Amazona ecuatoriana) se
sirve la guayusa con hueso, esto es
una mezcla de infusin de guayusa y
un macerado alcohlico localmente
conocido como chuchuhuaso que se
obtiene de la especie Maytenus kruko-
vii A.C. Sm.

Figura 2. Estructura de una molcula de cafena.

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La cafena y sus propiedades te- por aumento de elementos contrcti- Mtodos de investigacin
raputicas les del msculo.
5. Antagonizar los receptores de ade-
La cafena es la sustancia psicoactiva
ms popular del mundo y, sin duda,
una de las ms aceptadas y toleradas a
nivel social. Este alcaloide es aceptado
legalmente, y es culturalmente admiti-
do en todas las sociedades del mundo,
siendo la fuente de consumo ms co-
mn el caf y diferentes productos he-
chos con base en ste que son muy po-
pulares. Adems, a lo antes citado se
debe agregar la existencia de un sinn-
mero de bebidas gaseosas con cafena
con lo cual queda claro el porqu esta
sustancia psicoactiva es la ms consu-
mida del mundo.
La cafena favorece la
diuresis y acelera el ritmo
cardaco. La cafena est
presente en muchas formu-
laciones farmacuticas aso-
ciada a otras substancias
como: cido acetilsaliclico,
cido ascrbico, codena y
paracetamol.
Desde el punto de vista qumico,
la cafena es un alcaloide xantnico
(1, 3, 7 trimetilxantina) y su accin
farmacolgica se expresa principal-
mente a nivel de los sistemas nervio-
so central, cardiovascular y respirato-
rio, as como de la funcin renal por
actuar como diurtico. Los principa-
les efectos de los alcaloides xantni-
cos son:
1. Inhibir las fosfodiesterasas y con
ello incrementar el campo intracelular.
2. Afectar la concentracin del cal-
cio intracelular.
3. Actuar de modo indirecto en la ci-
fra del calcio intracelular por hiperpo-
larizar la membrana celular.
4. Desacoplar el calcio intracelular
1. Preparacin de la droga: Una
nosina.
El conjunto de los efectos causa-
dos por los alcaloides xantnicos se
reflejan en diferentes acciones a nivel
del msculo liso del sistema nervioso
central, aparato cardiovascular y
msculo estriado, puesto que la cafe-
na acta como excitante cortical esti-
mulando el estado de vela y dismi-
nuyendo la sensacin de cansancio al
favorecer la diuresis y acelerar el rit-
mo cardiaco.
La cafena est presente en mu-
chas formulaciones farmacuticas
asociada a otras substancias como:
cido acetilsaliclico, cido ascrbico,
codena y paracetamol. Dos ejemplos
de medicinas del mercado ecuatoria-
no que contienen cafena, en asocia-
cin con otros frmacos, son Tono- tres experimentos diferentes con el
pan (Novartis) y Tempra Plus (Bris-
tol-Myers Squibb) que sirven para el
tratamiento sintomtico de manifes-
taciones dolorosas y febriles debidas a
diferentes causas como infecciones,
estados inflamatorios o malestares
como jaqueca, gripe y dolores mens-
truales, entre otros.
La cafena es un txico en dosis ex-
cesivas, pues ms de 1 g en el cuerpo
produce en el ser humano nervios,
irritabilidad, insomnio, arritmia car-
daca y palpitaciones. Advirtindose,
que una dosis superior a 10 g puede
ser mortal. La absorcin de la cafena
y de las xantinas en general es rpida
en caso de administracin oral, rectal
o parenteral. La cafena posee una vi-
da media plasmtica entre tres y siete
horas, la cual aumenta en mujeres en
las ltimas etapas del embarazo o con
el empleo continuado de anticoncep-
tivos orales. La cafena se metaboliza
en el hgado por desmetilacin y por
oxidacin en la posicin 8, causando
en los seres humanos la formacin de
paraxantina que produce metabolitos
que pueden ser eliminados en la orina.
muestra de Ilex guayusa Loes. compues-
ta de una rama con flores y secada al
ambiente fue enviada al Herbario Na-
cional del Museo Ecuatoriano de Cien-
cias Naturales (QCNE) para la identi-
ficacin botnica. La droga se obtuvo
secando hojas frescas, sanas y lavadas,
usando un secador industrial ventilado
a una temperatura de 40C, la prdida
de peso del material fresco fue del
80%. Las hojas secas fueron molidas
con un triturador manual de acero.
2. Identificacin de los componen-
tes qumicos de la planta: La identifi-
cacin de las familias de los compo-
nentes qumicos de la guayusa se reali-
z por el mtodo de tamizaje fitoqu-
mico. Es as, que a partir del mismo
lote de planta seca se pesaron tres por-
ciones de 50 g cada una para realizar
mismo extracto. Las tres muestras se
pusieron a macerar dos das con ter
de petrleo, agua y etanol; luego, se
filtraron y cada extracto se someti a
un ensayo qumico que permiti iden-
tificar diferentes grupos qumicos de
acuerdo a la variacin de coloracin o
formacin de precipitados.
3. Preparacin del extracto de gua-
yusa: Las tcnicas de extraccin de
metabolitos de una planta son varias y
se aplican de acuerdo a las caracters-
ticas de cada especie. En el caso de la
guayusa, no existe informacin biblio-
grfica y se opt por usar un solvente
hidroalcohlico al 70% con relacin
droga/extracto 1,2 p/v, porque es el
ms comn para especies que contie-
nen alcaloides.
La tcnica de la percolacin se eli-
gi por ser efectiva y de fcil aplica-
cin, se us un percolador en acero
Inox AISI 304, apto para uso alimen-
tario y fitofarmacutico. La percola-
cin se desarroll en tres fases de
acuerdo al procedimiento sugerido
por Pelle:

a. Humectacin: La droga seca y
molida obtenida exclusivamente de las
hojas fue embebida en una cantidad al
70% p/v de solucin hidroalcohlica
y mezclada suavemente para obtener
una masa vegetal homognea que se
dej descansar durante una hora.
b. Maceracin: La muestra humec-
tada fue percolada, prensada suave-
mente para obtener una masa homo-
gnea y se le agreg una cantidad de
solvente suficiente para cubrirla hasta
superar un nivel de 3-4 cm, luego
permaneci en maceracin durante
24 horas.
c. Percolacin: La muestra sometida
a percolacin pasa por un proceso len-
to, este consiste en un constante flujo
de solvente a travs de la droga que
baja goteando y se enriquece siempre
ms de principio activo, porque rem-
plaza desde arriba al solvente fresco
que se vuelve a extraer y optimiza el
proceso cada vez que lo hace.
Las diferentes farmacopeas indican
varias modalidades de percolacin, el
presente estudio se ha desarrollado si-
guiendo la FUI que propone 20 gotas
por minuto por kg de droga. En gene-
ral, se separan los primeros 850 ml de
solvente por cada kg de droga y esta
cantidad se denomina primera fraccin,
la percolacin sigue y separa otra canti-
dad de lquido denominado segunda
fraccin que se concentra a un volumn
igual o inferior a 150 ml, se agrega a la
primera fraccin para llegar al volumen
de 1.000 ml por kg de solvente (rela-
cin peso D/volumen E = 1/1). Si es
necesario, se utiliza esta ltima fraccin
para extraer solvente por repercolacin
y se concentra al rotavapor.
El extracto que se obtiene se deja
descansar 3-4 das a 4C, se filtra y se
agrega al producto terminado extracto
de cascarilla (Cinchona officinalis L.)
por sus cualidades antifebrfugas.
4. Cuantificacin de la cafena por
cromatografa lquida de alta reso-
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lucin (CLAR): La CLAR es una taciones dolorosas y febriles debidas a
tcnica de separacin verstil para diferentes causas como infecciones, es-
anlisis de extractos. Se separa una tados inflamatorios o malestares co-
muestra estndar de 1.000 ppm de munes como jaqueca, gripe y dolores
cafena disuelta en agua y se inyecta menstruales. La dosificacin del prepa-
cuatro veces una primera muestra del rado tendr que ser profundizada con
estndar en concentracin de 200 el respaldo de ulteriores pruebas de ac-
ppm. Posteriormente, se analiza la tividad; sin embargo, se ha decidido
composicin del extracto total y de poner una cantidad de cafena de 40
dos muestras. 1 mg de cafena por 100 g de produc-
to. En algunas tabletas presentes en el
La muestra se somete a una dilu-
mercado local cada dosis contiene en-
cin del 1 al 50 de extracto de gua-
tre 30 y 40 mg de cafena como es el
yusa en una solucin de etanol al
caso de Tonopan (Novartis) y Tempra
70%, se agregan 2 ml de una solu-
Plus (Bristol-Myers Squibb).
cin al 35% de hidrxido de amonio
y se extrae dos veces con 4 ml de clo- La primera formulacin del produc-
ruro de metileno. La fase orgnica se to planea una dosificacin baja hasta
lleva a volumen con cloruro de meti- obtener datos de la actividad biolgica.
leno en un matraz de 25 ml. Las me- La solucin azucarada se prepar si-
didas han sido desarrolladas con una guiendo la Farmacopea Ufficiale Italia-
variante de CLAR acoplada con un na y los textos de tcnicas fitofarmacu-
PC Dell Optiplex Gx 110 compati- ticas. La preparacin disuelve a caldo
ble. El equipo consiste de un mdu- 665g de sacarosa en 335g de agua des-
lo LC Prostat con un lup de 20 L y mineralizada. La presencia de esta solu-
un detector UV-VIS Prestar/Dyna- cin azucarada permite conseguir la
max, la longitud de onda utilizada consistencia densa tpica del jarabe y un
fue de 273 nm y la columna C18 tu- aroma dulce, pero la funcin principal
vo una variante de 250 x 4,6 mm. La es la de proteger la frmula de la conta-
composicin de la fase mvil utiliza- minacin microbiana actuando sobre la
da fue metanol, agua y cido actico actividad del agua. La solvatacin de las
glacial (69/28/3), estabilizada a un molculas de sacarosa produce una con-
ph 3,0. Los anlisis se hicieron a dicin osmtica desfavorable para el de-
temperatura ambiente y con un flujo sarrollo de colonias de microorganis-
de 0,6 ml/min. El agua utilizada pa- mos (Muestra A, Tabla 1). La presencia
ra todos los estudios se destil con
un aparato Millipore y es ultrapura
18 S/cm y en todas las soluciones La cafena es un txico en
dosis excesivas, pues ms
fue desgasificada por medio de ultra-
sonido. El estndar de cafena es de
de 1 g en el cuerpo produ-
Sigma (Quito).
ce en el ser humano ner-
Desarrollo del producto fitofar- vios, irritabilidad, insom-
nio, arritmia cardaca y pal-
macutico
La forma farmacutica propuesta se pitaciones.
considera jarabe o elixir y es muy tra-
dicional en la experiencia de las formu- de glicerina se justifica por su capacidad
laciones galnicas. La frmula pro- de detener la cristalizacin del azcar,
puesta es un prototipo natural de va- problema que se puede presentar en la
rias especialidades farmacuticas aptas fase de desarrollo de estas frmulas far-
al tratamiento sintomtico de manifes- macuticas (Muestra B, Tabla 2).
8 | La Granja

Tabla 1. Frmula preliminar del jarabe con base en Ilex guayusa Loes. de la Muestra A.

Cdigo Ingredientes Actividad %

A Jarabe FUI Excipiente 69,50

C Extracto hidroalcohlico de Cinchona officinalis L. 1:1 Febrfugo/antimalrico 25,00
D Extracto hidroalcohlico de Ilex guayusa Loes. 1:2 Estimulante 5,00
E Aceite esencial de Citrus x limon (L.) Burm. f. Aroma 0,50
TOTAL 100,00

Tabla 2. Frmulas preliminares del jarabe con base en Ilex guayusa Loes. de la Muestra B.

Cdigo Ingredientes Actividad %

A Jarabe FUI Excipiente 59,50

C Extracto hidroalcohlico de Chinchona officinalis 1:1 Febrfugo/antimalrico 25,00
D Glicerina USP Excipiente 10,00
E Extracto hidroalcohlico de Ilex guayusa 1:2 Estimulante 5,00
F Aceite esencial de Citrus x limon Aroma 0,50
TOTAL 100,00

Parmetros de calidad y estudios de los parmetros de calidad dentro mula determinando una previsin del
de estabilidad del producto de los rangos requeridos para su co- tiempo de caducidad y la fecha de
El desarrollo de un producto fito- mercializacin. Los estudios de esta- vencimiento (Tabla 3).
farmacutico planea la determinacin bilidad permiten convalidar la fr-

Tabla 3. Ensayo de estabilidad preliminar aplicado al jarabe con base en Ilex guayusa Loes.

Tipo de estudio Condiciones Tipo de resultados

Estabilidad preliminar 40C para 2 meses Estabilidad de la frmula y

(acelerada) compatibilidad con el envase.

Los datos del tamizaje fitoqumico
permiten evidenciar que el extracto
etreo es obviamente rico en alcaloides
y presenta cantidades importantes de
esteroides, terpenos y compuestos lac-
tnicos o cumarinas. Los otros dos ex-
tractos, el acuoso y el etanlico, son
an ms interesantes e importantes
porque son muy similares al extracto
hidroalcohlico que se usa como in-
grediente del fitofrmaco. En el pri-
mer caso, se destaca la presencia de sa-
poninas, fenoles, taninos, azcares re-
ductores y por supuesto alcaloides. En
el segundo caso, se evidencia otra vez
la presencia de alcaloides, fenoles, ta-
ninos, azcares reductores, esteroides,
terpenos, compuestos lactnicos a los
cuales se suman flavonoides y quino-
nas. La comparacin de los datos evi-
dencia la solubilidad neta de las sapo-
ninas en el extracto acuoso y su ausen-
cia en el etanlico, en el caso de que
estudios posteriores evidencien una
actividad biolgica de las saponinas se
debera tomar en cuenta la concentra-
cin en el extracto hidroalcohlico.
Los tres extractos evidencian la ausen-
cia de grasas y catequizas, as como la
presencia de muclagos y compuestos
cardenlicos en bajas concentraciones.
Los resultados demuestran que
Ilex guayusa Loes. es una especie con
un fitocomplejo muy rico y que se
debe profundizar la investigacin en
sus grupos qumicos encontrados,
porque se podran explicar mejor las
propiedades conocidas en la medici-
na tradicional y que no se pueden
atribuir solo a la cafena. Se puede
admitir por hiptesis que la presencia
de flavonoides permite una accin
antioxidante y que la presencia de an-
tocianidinas podra agregar a las acti-
vidades de los alcaloides el efecto va-
soprotector, extremadamente til si
el producto final es indicado para fie-
bres paldicas. Al mismo tiempo, el
producto fitofarmacutico que con-
tiene una gran cantidad de compues-
tos producto de los extractos de gua-
yusa y cascarilla necesita ms estudios

de su actividad, especialmente para
averiguar si existen sinergias negati-
vas o efectos adversos.
Desarrollar la preparacin de un
extracto adecuado a la formula-
cin final
La presente investigacin postula to-
dos los pasos de transformacin de la
guayusa, desde la recoleccin hasta la
estabilidad preliminar del fitofrma-
co, proponiendo la implementacin
de un proceso para la preparacin de
un jarabe.
Las operaciones de preparacin
(seleccin, lavado y secado) de las ho-
jas y la produccin de la droga molida
no evidenciaron dificultades. Aclarn-
dose, que en las primeras pruebas el
proceso de percolacin mostr dificul-
tad en la fase de humectacin al evi-
denciar una elevada absorcin de sol-
vente por parte de la droga y proble-
mas de precipitacin en la fase de con-
centracin al rotavapor. Por esta ra-
zn, se opt por seguir una variacin
del mtodo para producir un extracto
diluido una a dos a partir de 500 g de
droga, es as que se decidi ocupar so-
lo la primera fraccin recogiendo 850
ml y completando con solvente fresco
el volumen de un litro. Este mtodo
produce un extracto diluido, pero re-
duce el riesgo de problemas de preci-
pitacin que podran perjudicar la es-
tabilidad del fitofrmaco.
El extracto obtenido fue hidroal-
cohlico al 70% con relacin droga
D/E = 1/2 y de ste se utiliz solo la
primera fraccin que no mostraba
problemas de precipitacin. La deci-
Tabla 4. Parmetros de calidad del jarabe con base en Ilex guayusa Loes.
Parmetros
Olor
Aspecto
Color
Sabor
Porcentaje de azucares
pH
Rotacin especfica
Densidad relativa
ndice de refraccin
Contenido alcohlico
sin de utilizar la primera fraccin del
extracto de guayusa se debe a los resul-
tados analticos, porque con los mto-
dos de extraccin utilizados se obtuvo
un extracto que contiene 8,13 mg de
cafena por ml, el cual se utiliz como
ingrediente del producto final porque
la concentracin de activo es suficien-
te para el desarrollo del fitofrmaco.
Es posible que con mtodos de extrac-
cin diferentes se pueda optimizar el
rendimiento de extraccin.
En el caso del extracto de Cinchona
officinalis L. se siguieron los mismos
mtodos anteriores, pero el producto
fue un extracto con relacin a la droga
de D/E = 1/1 que no dio problemas de
precipitacin. Sin embargo, no fue po-
sible cuantificar los alcaloides de Cin-
chona officinalis L. y el desarrollo del
extracto fue experimentado con base
en datos de la literatura. Por lo tanto,
se sugiere realizar ms experimentos
que contribuyan a la optimizacin de
los mtodos de extraccin.
Desarrollar un mtodo de CLAR
para la dosificacin de cafena en
extracto de guayusa
El extracto de guayusa dio un resulta-
do de 8,13 mg por ml de cafena. As,
la aplicacin del mtodo analtico per- Establecer los parmetros de cali-
miti confrontar los siguientes croma-
togramas:
1. Extracto total de Ilex guayusa
Loes.
2. Muestras de extracto de cafena
del extracto de Ilex guayusa Loes.
3. Mezcla de estndar de cafena y
teofilina.
El extracto total muestra un pico
Valor
Caracterstico, agradable
Uniforme, opaco, no translcido, sin precipitacin
Caf-rojizo oscuro
Inicialmente dulce, amargo y desagradable al final
57,3%
4,8
No determinable, el jarabe no permite el paso a la luz
1,2091
1,4349
19,5
La Granja | 9
ms significativo de los dems al tiem-
po de retencin 10.264, pero el pico
no est bien resuelto por la presencia
de otros compuestos con tiempo de re-
tencin similar; por lo tanto, se desa-
rroll un mtodo de extraccin de la
cafena. Las dos muestras evidenciaron
un solo pico que sale en tiempos de re-
tencin de 10.225 y 10.085, pero este
resultado no confirma que el pico ma-
yor del cromatograma del extracto es la
cafena. Adems, los resultados permi-
ten proponer un mtodo de extraccin
de la cafena por el extracto y cuantifi-
carla; sin embargo, an se necesitan
ms pruebas para validarlo.
El anlisis de una muestra estndar
de teofilina y cafena demuestra que el
tiempo de retencin es respectivamen-
te de 6.852 y 9.254. Estos datos per-
miten admitir como hiptesis que se
podra excluir la presencia de teofilina,
porque no constituye una posible in-
terferencia en el anlisis de CLAR.
Adems, se debe decir que no fue po-
sible ejecutar la misma prueba con un
estndar de teobromina, pero s se
puede pensar en un resultado similar
cuando la diferencia de basicidad de
las xantinas influye sobre el tiempo de
eluicin en columna.
dad del jarabe de guayusa
Los anlisis sobre el prototipo de jara-
be con base en Ilex guayusa Loes. per-
miten establecer los parmetros de ca-
lidad del producto terminado (Tabla
4). Las muestras A y B han sido estu-
diadas al tiempo 0 y despus, a una
estabilidad acelerada de 40C.
10 | La Granja
Los datos encontrados en la litera-
tura indican que un porcentaje de
azcares superior al 50-55% permite
una buena estabilidad microbiolgica,
situacin que fue confirmada con los
resultados del control microbiolgico
del jarabe con base en Ilex guayusa
Loes. (Tabla 5).
Tabla 5. Calidad microbiolgica del jarabe con base en Ilex guayusa Loes.
Anlisis Valor
Aerobios totales < 10 ufc/g
Mohos y levaduras < 10 ufc/g
Coliformes totales < 2 ufc/g
Escherichia coli fecal Ausencia
Las normativas ecuatorianas para
los productos fitofarmacuticos no in-
dican los lmites permitidos y por esto
se ha utilizado los lmites de la norma-
tiva interna del Centro de Investiga-
cin y Valoracin de la Biodiversidad
(CIVABI) de la Universidad Politcni-
ca Salesiana. Sin embargo, los resulta-
dos demuestran una buena calidad
microbiolgica de la frmula.
Por lo que se refiere al sabor del
jarabe, es importante evidenciar que
tiene una sensacin tannica similar a
la de algunos vinos tintos pero que se
siente ms intensa y amarga. De este
modo, se recomienda el aumento de
aceite esencial de limn porque po-
dra solucionar el problema; sin em-
bargo, antes de resolver el problema
del sabor se requiere profundizar en
los estudios de actividad para poder
establecer cul es la concentracin
ptima de fitocomplejos.
Lmite permitido
1 x 105
1 x 103
1 x 103
Ausente
Desarrollar una tecnologa de
produccin apta para las condi-
ciones de Ecuador
La produccin de los extractos, los
mtodos analticos y los experimen-
tos fitoqumicos fueron desarrollados
en los laboratorios del CIVABI. Las
tecnologas y mtodos utilizados se
pueden implementar en el departa-
mento de produccin de fitofrma-
cos de la Fundacin Chankuap, la
que ya posee una red de proveedores
que reciben asistencia tcnica en el
manejo de cultivo y recoleccin de
Ilex guayusa Loes.
El abastecimiento de material que
proviene de Chinchona officinalis L. es
posible en ciertas pocas del ao,
puesto que existen restricciones por la
explotacin predatoria a la que fue so-
metida en el pasado esta especie. Los
estudios de actividad y el afinamiento
del desarrollo del producto pueden ser
desarrollados con el apoyo de labora-
torios locales, inclusive se puede afir-
mar que con una correcta inversin fi-
nanciera el desarrollo local del pro-
ducto fitofarmacutico y su produc-
cin se podran realizar en la provincia
de Morona-Santiago si se cuenta con
el apoyo de la Fundacin Chankuap.
Desarrollar un prototipo fitofar-
macutico de guayusa con po-
tencial comercial
El presente estudio permiti el desa-
rrollo de un prototipo de jarabe de Ilex
guayusa Loes. que podra tener uso co-
mercial; sin embargo, son necesarias
pruebas analticas y de actividad que
comprueben la estabilidad, seguridad
y eficacia del producto.
El paso siguiente despus de esta
investigacin con el producto termi-
nado, es la experimentacin que de-
muestre una actividad biolgica
coadyuvante en el tratamiento sinto-
mtico de manifestaciones dolorosas
como gripe, jaqueca y estados febri-
les. Sin embargo, el conocimiento fi-
toqumico de la especie Ilex guayusa
Loes. es todava muy limitado y otras
investigaciones podran sugerir nue-
vos usos medicinales de la planta, los
cuales pueden ser diferentes a los re-
gistrados en este estudio.

Las futuras pruebas de actividad
biolgica pueden confirmar las hip-
tesis de este estudio respecto a los pro-
cesos de produccin de los extractos y
los mtodos de cuantificacin de los
principios activos y del fitocomplejo.
Adems, las investigaciones posterio-
res deben asegurar que el conjunto de
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riana de Estudios Ecolgicos
(EcoCiencia), INIAP, MAE y
extractos naturales no provocan reac-
ciones adversas, confirmar que el pro-
ducto tiene estabilidad y garantizar un
estricto control microbiolgico.
En general, se puede colocar que
este estudio se desarroll con tecnolo-
ga bsica que fue acorde a la realidad
Ediciones Abya-Yala. Quito,
Ecuador. 116 pp.
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La Granja | 11
local, pero se debe enfatizar que la
produccin y comercializacin de un
producto fitofarmacutico necesita la
implementacin de las buenas prcti-
cas de manejo (BPM) en la infraes-
tructura y personal de la Fundacin
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