Introduccin

En esta ocasin vamos a realizar un mtodo de control de calidad denominado: Mtodo de

conteo de bateras coliformes en placa, lo cual, podemos deducir que es una prctica de
microbiologa basada en el cultivo de bacterias.

Las bacterias coliformes son microorganismos parecidos en su estructura a la de una bacteria

comn que se llama Escherichia coli y que es transmitida por medio de los excrementos.
La Escherichia animales es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del
hombre y en el de otros. Hay diversos tipos de Escherichia; una parte de ellas no es daina
para el cuerpo y otra, puede ocasionar la muerte. Algunas de las enfermedades provocadas
por estos microorganismos son: clera, fiebre tifoidea y hepatitis A. El mtodo de conteo en
placa se utiliza para definir por medio de un clculo matemtico las unidades formadoras de
colonias.

Para esta prctica utilizaremos el agar verde rojo violeta bilis, un agar compuesto por extracto
de levadura, peptona, sales biliares, lactosa, cloruro de sodio, agar, rojo neutro y cristal
violeta. Este, nos servir como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias coliformes.

El lugar donde se van a cultivar las bacterias son 4 cajas de Petri con agar, 1 ser la caja
blanca que usamos para observar si no estn contaminadas por el medio ambiente, las otras
3 tendrn muestras diluidas de queso, tomando en cuenta las proporciones debe de ser 1-10,
1-100 y 1-1000.

Las prcticas microbiolgicas deben de hacerse con sumo cuidado e higiene para asegurar la
inocuidad de un alimento, pero, Qu es la inocuidad de un alimento? es la garanta de que
los alimentos no causarn dao al consumidor cuando se preparen y/o consuman de acuerdo
con el uso a que se destinen. Desde hace ya algunos aos la Organizacin de las Naciones
Unidas para la Agricultura y la Alimentacin (FAO) y la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS) vienen planteando la necesidad de un cambio de enfoque para afrontar importantes
problemas relacionados con la inocuidad alimentaria

La presencia de bacterias coliformes en la mermelada puede indicarnos un mal manejo a la

hora de realizar nuestro proceso o bien, la implementacin de materias primas de baja
calidad, portadoras de dichas bacterias, ya sea el agua o la fruta. Como el producto que
elaboramos requiri una esterilizacin, se emplearon las prcticas de higiene necesarias para
la elaboracin de producto para el consumo humano y la materia prima que se us es de
calidad, la presencia de dichos microorganismos debe ser nula,
Objetivo:
Realizar una prctica microbiolgica inocua para poder determinar la cantidad de UFC
(Unidades Formadoras de Colonias) de bacterias coliformes presentes en una muestra de
galletas.

Materiales, equipos y reactivos:

Esptula de acero Vaso de pp de 50 ml
Tela de asbesto Pizeta
Varilla de vidrio Pipeta de 1 ml
Probeta graduada de 100ml Gradilla
4 Tubos de ensaye 2 Mecheros Bunsen
2 Matraces Erlenmeyer de 250 ml Guante
4 cajas Petri Cloruro de sodio
2 pipetas de 10 ml Peptona de casena
Perilla Agar bilis y rojo violeta RVBA

Procedimiento:

Da uno: esterilizacin.

1. Recibimos los materiales pedidos con anticipacin.

2. Prepararemos el agua fosfatada de trabajo, primero, se prepara la solucin
concentrada suspendiendo 34 g. del medio por L de agua, posteriormente, tomar 1.25
ml de agua concentrada, pasar a un matraz y agregar 1 L de agua. Se pasan 500 ml a
un matraz Erlenmeyer, se empaqueta y se esteriliza.
3. Todo lo que sea material de cristalera se envolver en papel de estraza.
4. Tubos de ensaye, matraces Erlenmeyer, y pipetas se taparn sus orificios con algodn
(a los matraces con reactivo se cubrir el algodn con una gasa).
5. Colocaremos en la autoclave todos los materiales a esterilizar a una temperatura de
121C y 15lbs de presin durante 15 min.
6. Se sacan los materiales del autoclave pasada 1 hora despus de su esterilizacin.

Da dos: preparacin de muestras y plantado en cajas.

1.Comenzaremos por preparar el agar bilis y rojo violeta con 41.5g. del medio por 1
litro de agua.
 2.Colocaremos dos mecheros en la mesa para inocular el medio y as asegurarnos de
que la contaminacin presente sea menor.

3.Prepararemos las muestras de la siguiente manera:

I. En un vaso de pp de 250 ml colocamos 10 g de la muestra (galletas) y 90 ml
de agua fosfatada de trabajo para hacer la dilucin de 1-10
II. Para la dilucin de 1-100 se tomar 1 ml de la dilucin 1-10, se colocar en 1
tubo de ensaya y se le agregarn 9 ml de agua fosfatada.
III. En otro tubo de ensaye colocaremos 1 ml de dilucin 1-100 y 9 ml de agua
fosfatada para realizar la dilucin 1-1000.
2. Comenzaremos a plantar el agar y el medio de cultivo en las cajas de la siguiente
manera:
I. En una de las cajas de Petri previamente esterilizada se colocar 1 ml de
muestra 1-10.
II. Se repetir lo anterior con las dems muestras (1-100 y 1-1000).
III. En las 4 cajas se colocarn de 12 a 15 ml de medio de cultivo y se taparn
inmediatamente.
IV. Se agitarn levemente las cajas con muestra para dispersarla por toda la caja.
V. Despus de que se solidific el agar en las cajas, se vuelve a colocar otra capa
de agar.
3. Apagamos los mecheros y esperaremos a que solidifique el agar por segunda ocasin.
4. Empaquetamos las cajas Petri y las colocaremos en la incubadora a 35C de manera
invertida durante 72 horas.
5. Lavamos y entregamos material que ya no necesitamos.
6. Transcurridas las 72 horas sacaremos las cajas de la incubadora y haremos el conteo
de colonias.

Resultados:
Caja Blanca:
Limpia.

Todas las cajas quedaron limpias, lo cual, indica un producto de calidad microbiolgica apta
para el consumo humano. De acuerdo a la norma, no debe a tener presencia de ninguna
colonia de coliformes totales en placa.
Conclusin:
La NMX-F-006-1983 nos indica la calidad y los resultados que debe tener el alimento denominado
como galletas para ser considerado apto para el consumo humano. Aqu nos dice que no debe de tener
presencia de ni una unidad formadora de colonias, ya que esto significara un mal manejo a la hora
de la produccin del producto.

Las bacterias que conseguimos cultivar con el agar rojo violeta bilis fueron bacterias
anaerobias, porque le colocamos una capa extra de agar y as quitar el oxgeno presente en
las cajas.

Trabajar con todos los aditamentos de seguridad e higiene necesarios, guardar el orden dentro
del laboratorio, leer la prctica con anticipacin y estudiar cada uno de sus puntos adems de
escuchar al instructor cuando da la explicacin y siempre poner atencin son algunas de las
razones por las cuales la prctica tuvo un resultado satisfactorio.

Bibliografa:
www.colpos.mx/bancodenormas/nmexicanas/ NMX-F-006-1983

http://www.esmas.com/salud/home/conocetucuerpo/596367.html

http://itramhigiene.wordpress.com/2013/03/07/bacterias-coliformes-que-riesgos-pueden-tener-para-
la-salud/
 COLEGIO DE ESTUDIOS CIENTFICOS Y
TECNOLGICOS DEL ESTADO DE MICHOACN.
PLANTEL GUACAMAYAS

BACHILLERATO: QUMICO BIOLGICO

ESPECIALIDAD: PRODUCCIN INDUSTRIAL DE

ALIMENTOS

MDULO V: PROCESA Y ANALIZA ALIMENTOS A PARTIR

DE CEREALES U OLEAGINOSAS CON CALIDAD E
INOCUIDAD.

SBMODULO 1: REALIZA LOS ANLISIS FSICOS Y

MICROBIOLGICOS

PRACTICA No. 9
DETERMINACIN DE BACTERIAS COLIFORMES EN PLACA

NOMBRE: HEBER ULISES MORENO ARREOLA

GRUPO: 624-A EQUIPO: 3

PROFESORA: ADRIANA LIZETH LPEZ ARANA

FECHA DE REALIZACIN: 15 DE JUNIO DE 2015