Objetivos

Aislar los microorganismos que sern utilizados en las diferentes practicas del
laboratorio
Purificar y mantener viables las cepas aisladas
Emplear el mtodo ms adecuado para aislar y purificar las cepas en funcin del
tipo de muestra que ser utilizado

Introduccin
Los microorganismos ms utilizados a escala industrial son los hongos y algunas
bacterias, especialmente el gnero Streptomyces.
Los microorganismos industriales son especialistas metablicos capaces de ser
manipulados en cultivos a gran escala para producir uno o ms compuestos con un
alto rendimiento[1].
Los productos de mayor inters para su produccin en masa: los propios
microorganismos como las levaduras, que se utilizan en la industria panadera y para la
produccin de cerveza; antibiticos, como la penicilina o la tetraciclina; esteroides como
la cortisona; enzimas, muy utilizadas en la industria alimentaria para mltiples
aplicaciones; productos qumicos especializados y aditivos alimentarios; productos
qumicos genricos baratos como por ejemplo el etanol y el cido ctrico; vitaminas,
como la B12 y la riboflavina (B2) [2].
Uno de los retos de los microbilogos industriales es desarrollar procedimientos para
obtener metabolitos y existen 5 diferentes pasos[1].
1. Screening para la produccin de nuevos aislados o mtodos de prueba.
2. Modificacin qumica de sustancias microbianas conocidas.
3. Biotransformacin
4. Fusin interespecfica de protoplastos
5. Clonacin de genes

Aspergillus niger: es el hongo de los hongos ms comunes en el medio ambiente, se

desarrolla mayormente en un ambiente hmedo, ctrico y templado. Sus caractersticas
ms comunes se pueden observar en la imagen 1, son cabezas conoidales de tonos
negro a negro grisceo, negro caf, negro purpura o negro carbn, son globosas,
radiadas o divididas formando columnas de cadenas de conidios irregulares o bien
definidas. Los conidiforos son de color hialino a caf

tpicamente lisos o en pocas especies ligeramente granulares, de paredes robustas,

quebradizas, dividindose longitudinalmente al ser trituradas [3].
 Imagen 1.Estructura microscpica de hongo Aspergillus niger

Saccharomyces cerevisiae: su aislamiento se realiza a partir de muestras ricas en

azucares. Saccharomyces cerevisiae que se puede apreciar en la imagen 2 es un
organismo unicelular, de forma ms o menos redondeada. Las clulas de la levadura
se multiplican rpidamente por gemacin, una forma asimtrica de reproduccin
asexual: a partir de una clula se origina una protuberancia que va creciendo y acaba
dando lugar a otra clula, en condiciones ptimas, este tipo de reproduccin dura unas
dos horas y permite la colonizacin total de los mostos en cuestin de horas o das[4].

Imagen 2. Estructura microscpica de la levadura Saccharomyces cerevisiae

Leuconostoc mesenteroides: Leuconostoc mesenteroides es un estreptococo lctico

heterofermentativo osmoflico se puede observar en la imagen 3, esto significa que es
capaz de crecer en concentraciones de sacarosa iguales o mayores al 10%. Tiene gran
tolerancia para desarrollarse en concentraciones azucaradas de hasta 55 a 60%, lo
que permite su desarrollo en jarabes, caramelo lquido, crema de helado, etc. Produce
gran cantidad de muclago en medios que contienen sacarosa, esto es deseable
cuando es necesaria la produccin de dextrano (polisacrido gomoso), sin embargo,
en otros casos representa un contratiempo, sobre todo en la elaboracin u obtencin
de alimentos ricos en este disacrido, como por ejemplo en la extraccin de azcar a
partir de caa o remolacha azucarera[5].
 Imagen 3. Estructura microscpica de bacteria Leuconostoc mesenteroides

Metodologa
A) Aislamiento de Aspergillus niger

Cortar en rodajas el limn y

colocar sobre la cama de
Colocar algodn hmedo
algodn, agregar un poco
dentro de la caja Petri.
de tierra sobre la
superficie.
Observar el crecimiento, la
Exponer al medio ambiente
cual se verificara al obervar
durante 3-4 das
un color negro

A.1) Realizacin del cultivo puro de Aspergillus niger

Observar crecimiento y
Tomar una asada del hongo y
realizar preparacin en fresco
sembrar por estra en PDA Incubar a 28 C por 24-48 h
con azul de metileno para
inclinado
observar al microoscopio

B) Aislamiento de Saccharomyces cerevisiae y Leuconostoc mesenteroides

De la muestra 1:100 tomar

Tomar 1 mL de muestra y
aadirlo en la solucin
salina, sta se etiquetara
como (1:1)
Preparar AN, PDA y
soluciones salinas con
anterioridad Tomar 1 mL de muestra y
coloque en la caja Petri y
aada el AN o PDA segn
corresponda, a esta caja la
etiquetar como caja
muestra
nuevamente 1 mL y
Tomar 1 mL y agregar a la
agregar a la solucin
caja Petri con su PDA o AN
Del tubo 1:10 tome 1 mL salina, marcar como
para agregarlo a la (1:1000)
siguiente solucin salina,
esta se marcara como
Agite este tubo y tome 1 Agarrar 1 mL de la muestra
(1:100)
mL de muestra, aadirlo al 1:100 y aadirla a una caja
siguiente tubo de solucin Petri con su AN o PDA
salina, sta ser (1:10) correspondiente
Tome 1 mL de muestra de
1:10 y coloque en una caja
Tome 1 mL del tubo 1:1 y Petri, aadir el AN o PDA
aadalo a la siguiente caja
Petri, virtiendo el PDA o
AN correspodiente
 B.1) Realizacin de cultivo puro Saccharomyces cerevisiae y Leuconostoc
mesenteroides

Tomar una asada del cultivo
Fundir el PDA o AN y dejar
correspondiente e inocule por
enfriar
estra o picadura
Incubacin:
Tincin de Gram para bacteria
Saccharomyces cerevisiae: 28
y tincin simple para la
C / 3 das
levadura y observar al
Leuconostoc mesenteroides: microscopio
37 C / 24-48 h

Resultados y discusin

Aspergillus Niger
Observaciones macroscpicas
Como se puede observar en la imagen 4 se puede notar un hongo filamentoso con 5 das
de crecimiento, en un medio ctrico, hmedo y con tierra; con apariencia algodonosa de
color blanco. Que en comparacin con la literatura se puede ver en la imagen 5 que es una
foto compartida por Pinterest de colonias inicialmente blancas hasta negro-verdoso en un
medio de agar malta.

Imagen 4. Aspergillus niger en un medio preparado con rodajas de limn, tierra y agua (5 das de crecimiento).

Imagen 5. Aspergullus niger crecimiento en agar malta.

Observaciones Microscpicas.
En la imagen 6 se puede observar algunos conidiforos y conidios de Aspergillus Niger a
40x con una tincin simple de azul de metileno.

Imagen 6. Aspergillus Niger a 40x

Para las observaciones en el microscopio a 100x en la imagen 7, se pueden ver todas las
partes de la estructura asexual del hongo filamentoso los conidios, la fialide, la vescula que
conforman la cabeza aspergilar y el conidiforo respectivo a Aspergillus Niger con una
tincin simple de azul de metileno.

Imagen 7. Aspergillus Niger a 100x

Con las imgenes anteriores a 40x y 100x y las imgenes 8 y 9, se puede apreciar que
efectivamente se obtuvo el hongo Aspergillus niger, ya que las estructuras de reproduccin
asexual coinciden con la literatura como su cabeza aspergilar donde se observa el
conidiforo, vesculas, filides y cadenas de fialoconidias.
Imagen 8.Estructura de Aspergillus niger Imagen 9. Estructura de Aspergillus niger

Levadura
En el caso de la levadura en la imagen 10 se pueden ver Saccharomyces cerevisiae en un
medio de agar de patata dextrosa, donde se obtuvo estos medios de aislamiento por el
mtodo de dilucin y siembra en placa: concentrado y diluciones.

Imagen 10. Saccharomyces cerevisiae en un medio de agar de patata dextrosa

Para una mejor apreciacin de la morfologa de la levadura, se realiz el procedimiento de

siembra por estra. En la imagen 11 se inoculo Saccharomyces cerevisiae por mtodo de
aislamiento por estra en agar sabouraud dextrosa. Para el otro caso del tubo inclinado de
la levadura en caldo CSD se pudo apreciar en la imagen 12 cepas coloreadas blancas
caractersticas.

Agregar imgenes
Saccharomyces cerevisiae en las siguientes imgenes a 4x, 10x y 100x, se pueden
observar cepas heterotlicas se compar con la literatura con la imagen 16 por lo que
coincidi con nuestros resultados.

Imagen 13 Saccharomyces cerevisiae a 4x Imagen 14. Saccharomyces cerevisiae a 10x

Imagen 15. Saccharomyces cerevisiae a 100x Imagen 16. Saccharomyces cerevisiae a 40x reportado en la literatura.

Bacteria
En el caso de la bacteria en la imagen 17 se puede observar Leuconostoc mesenteroide en
un medio de agar nutritivo, donde se obtuvo estos medios de aislamiento por mtodo de
dilucin y siembra en placa: concentrado y diluciones.

Imagen 17. Leuconostoc mesenteroide en un medio de agar nutritivo.

Para el caso de la bacteria de igual manera se inoculo en un tubo inclinado por estra en
agar nutritivo, en la imagen 18 donde se puede observar cepas coloreadas blancas.
Tambin se realizo el procedimiento por picadura pero ahora en CDS como se puede ver
en la imagen 19.

Agregar imgenes
Imagen 18. Tubo inclinado de Leuconostoc mesenteroide mtodo de aislamiento por estria en agar nutritivo.
Imagen 19. Leucnonostoc mesentetoide mtodo de aislamiento por picadura en CDS.

Para el caso de la bacteria Leuconostoc mesenteroide en la imagen 20 y 21 a 4x y 10x, se

puede observar una cepa de bacilos gram negativos, se comparo con la literatura con la
imagen 22 donde se observan bacilos pero gram positivos uniformes.

Imagen 20.Tincin Gram Leuconostoc mesenteroide a 4x Imagen 21.Leuconostoc mesenteroide a 10x

Imagen 22. Leuconostoc mesenteroide gram positiva.

 Conclusiones

Se prepararon medios naturales a partir de tierra y limones en un ambiente hmedo,

aguamiel y uvas, para aislar los microorganismos Aspergillus niger, Saccharomyces
cerevisiae y Leuconostoc mesenteroides, los cuales fueron aislados e inoculados en medios
de cultivo apropiados (agar nutritivo, agar sabouraud dextrosa y CDS). Adems
caracterizados mediante morfologa macroscpica y microscpica. Con la finalidad de
utilizarlos en prcticas posteriores de produccin de sustancias de inters industrial.
Cabe mencionar que para tener una mejor identificacin de los microorganismos es
necesario realizar pruebas bioqumicas.

Referencias

[1] Garca Gmez N.A., Almaguer Cant V., Garza Gonzlez M.T., Manual
de prcticas de Laboratorio de Procesos Microbiolgicos Industriales.
Ediciones Internas, UANL, 2011. pp. 7-16

[2] Desconocido. (22 de Julio de 2012). Omicrono. Recuperado el 28 de

Agosto de 2017, de
http://omicrono.elespanol.com/2012/07/microorganismos-a-nuestro-servicio-
la-microbiologia-industrial/
[3] Sez Vega A., F. V. (2002). Caracterizacin de una cepa nativa de
Aspergillus niger y evaluacin de la produccin de cido ctrico. Universidad
EAFIT, 34-36.
[4] CSIC. (s.f.). La levadura de la cerveza y... del laboratorio. Obtenido de
Consejo Superior de Investigaciones Cientficas (CSIC):
http://seresmodelicos.csic.es/llevat.html
[5] FQUIM-UNAM. (21 de junio de 2007). Microorganismos de alteracin o
deterioro. Obtenido de
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/4Alteracion_6541.pdf