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ACTIVIDAD CITOTOXICA Y ANTIMICROBIANA DE HYPTIS

CAPITATA
Alexander Puentes Parra

Departamento de Qumica, Estudiantes de la Universidad de la Amazonia


Florencia, Caquet, Colombia

Resumen

Se determin la actividad citotxica y antimicrobiana de un extracto etanolico de hyptis


capitata una especie perteneciente a la familia de las lamiaceae conocida como botn negro,
usada principalmente como antisptico y cicatrizante en ulceras varicosas, eczema y
afecciones cutneas de tipo inflamatorio y alrgico. Para evaluar la actividad
antimicrobianas se utilizaron cepas de Escherichia Coli utilizando el mtodo de Kirby Bauer
de difusin en agar con discos impregnados que se basa en la susceptibilidad bacteriana
frente a drogas especficas, para la actividad citotxica se utiliz el mtodo de letalidad de
los nauplios de Artemia Salina.

Palabras claves: antimicrobiana, citotoxicidad, Hyptis Capitata, Escherichia Coli, Kirby Bauer,
Artemia Salina.

Abstract

The cytotoxic and antimicrobial activity of an ethanol extract of hyptis capitata, a species
belonging to the lamiaceae family known as the black button, was used mainly as antiseptic
and cicatrizant in varicose ulcers, eczema and inflammatory and allergic skin conditions. To
evaluate the antimicrobial activity strains of Escherichia coli were used using the Kirby
Bauer method of diffusion in agar with impregnated discs that is based on the bacterial
susceptibility towards specific drugs, for the cytotoxic activity was used the method of
lethality of the nauplii Of "Artemia Salina".

Keywords: antimicrobial, cytotoxicity, Hyptis Capitata, Escherichia Coli, Kirby Bauer,


Artemia Salina.
INTRODUCCION

Hyptis es un gnero tropical en una Desde la antigedad han sido empleadas


familia que crece principalmente en las plantas para diferentes fines ya sean en
lugares templados, las Lamiaceae. Son el rea de alimentos (condimento), en la
especies que tienen flores pequeas en cosmetologa y en la mdica
cabezuelas; adems son aromticas, como principalmente enfocados a curar o
muchas especies de la familia. prevenir diversas enfermedades.2 Los
productos naturales tales como los
extractos de plantas y/o sus compuestos
puros proveen oportunidades ilimitadas
para el desarrollo de nuevas drogas que
puedan ser utilizadas para el control
microbiano.

La citotoxicidad celular se define como


una alteracin de las funciones celulares
bsicas que conlleva a un dao que puede
ser detectado. Diferentes autores han
desarrollado bateras de pruebas in vitro
para predecir los efectos txicos de drogas
Grafica 1Hyptis capitata
y compuestos qumicos, utilizando como
Hyptis es un gnero de 300 especies de las modelos experimentales cultivos
regiones calidad del nuevo mundo, primarios y rganos aislados como lneas
especialmente Brasil, con unas pocas celulares establecidas.3
especies representativas en el viejo
mundo.1 Hyptis capitata es una maleza
muy comn en los trpicos de Amrica, METODOLOGIA
desde Mxico hasta Colombia y
Venezuela y el oeste del Per y ecuador. Citotoxicidad bioensayo general de
Est distribuida ampliamente en toda letalidad en Artemia salina.
Colombia Los nauplios utilizados en el bioensayo
La citotoxicidad celular se define como fueron proporcionados por el profesor
una alteracin de las funciones celulares Jhon Ironzi Maldonado.
bsicas que conlleva a un dao que puede Se prepararon dos concentraciones de la
ser detectado. Diferentes autores han muestra para evaluar la citotoxicidad 100
desarrollado bateras de pruebas in vitro ppm y 1000 ppm disueltas en una solucin
para predecir los efectos txicos de drogas salina al 3.5 % y en DMSO. Se utilizaron 5
y compuestos qumicos, utilizando como mL de la muestra depositados en un tubo
modelos experimentales cultivos de ensayo, como control se utiliz
primarios y rganos aislados como lneas solucin salina al 3.5 %, se adicionaron 10
celulares establecidas.4 nauplios a cada tubo de ensayo y se
tomaron lecturas cada 30 min de la posteriormente observar los halos de
cantidad de nauplios vivos y los muertos. inhibicin.

ANALISIS Y RESULTADOS

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Citotoxicidad


MTODO KIRBY BAUER.
Lectura de nauplios
Se prepararon dos concentraciones de la
muestra de 100 ppm y 1000 ppm
respectivamente utilizando como 100 ppm 1000 ppm control
disolvente agua y DMSO. Tiempo Vivos Vivos Vivos
Para la evaluacin de la actividad 30 min 10 10 10
microbiana se utiliz una cepa bacteriana 60 min 10 10 10
de Escherichia Coli proporcionada por la 90 min 10 10 10
universidad de la amazonia. Se prepar 120 min 10 10 10
un patrn de Mc Farland 0,5 para esto se 150 min 10 10 10
tom una muestra de nuestra bacteria y se 180 min 10 10 10
inoculo en un tubo con solucin salina, 210 min 10 10 10
hasta observar la solucin un poco turbia. 240 min 10 10 10
El patrn de Mc Farland 0,5 contiene 270 min 10 9 10
1,5x109 unidades formadoras de colonias 300 min 10 9 10
por mililitro 330 min 10 9 10
360 min 10 9 10
En una caja de Petri con el medio ya 390 min 10 9 10
solidificado (Agar Mueller Hinton) se 420 min 10 9 10
sembr el microorganismo con la ayuda 450 min 10 9 10
de un hisopo estril utilizando el mtodo
de siembra por estras (figura 2).

% = 100

Donde TM = nauplios muertos,

TV= total de nauplios iniciales

100 ppm 1000 ppm


% Letalidad 0% 10%

Grafica 2 sembrado estra mltiple Se observa que para la concentracin de


100 ppm el porcentaje de letalidad es 0%,
Se coloc en la superficie del agar tras 7 horas 30 minutos no se observ
inoculando los discos de papel filtro ningn nauplio muerto, a esta
previamente impregnados con la muestra, concentracin no se observa actividad
como control positivo se utiliz penicilina citotxica en el extracto etanolico de
y ampicilina. El cultivo inoculado se Hyptis capitata, a 1000 ppm el porcentaje
incubo a 37C durante 24 horas para de letalidad es del 10% se observ al cabo
de 7 horas, 30 minutos 1 nauplio muerto, CONCLUSIONES
siendo una actividad citotxica
El extracto etanolico de hyptis capitata a
moderada.
una concentracin de 100 ppm no
Actividad antimicrobiana presente ninguna actividad citotxica, sin
embargo a una concentracin de 1000
ppm se observ un porcentaje de letalidad
del 10% dando como resultado una
actividad citotxica moderada

Para la actividad antimicrobiana aunque


no se observa inhibicin alguna del
crecimiento de la cepa microbiana es
necesario realizar de nuevo el bioensayo
por duplicado o triplicado para poder
hablar con ms certeza de la actividad
Grafica 3 Cultivo microbiano Escherichia Coli
antimicrobiana, se recomienda realizar
No se observ ninguna actividad estos ensayos en condiciones aspticas
antimicrobiana en ninguna de las dos para evitar contaminaciones, y de igual
concentraciones utilizadas en el bioensayo manera se recomienda utilizar diferentes
las cuales eran de 100 ppm y 1000 ppm, sin tipos de bacterias tanto Gram positivas
embargo las cepas de la bacteria no como Gram negativas.
crecieron como se esperaba pues se
observa que la confluencia es AGRADECIMIENTOS
relativamente baja, tambin se observa Agradecer a la universidad de la
que al parecer las cepa de Escherichia Coli amazonia de la ciudad de Florencia
que se inocularon se contaminaron pues Caquet por permitir realizar estas
se observa en el cultivo otra clase de pruebas en sus laboratorios y por
bacterias. El control positivo de igual
equiparnos con todos los materiales y
manera no muestra una actividad
reactivos necesarios para tal fin, a las
inhibitoria y esta no se puede observar
auxiliares del laboratorio que estn
claramente debido a la poca confluencia
siempre pendientes y disponibles ante
de la cepa en el cultivo. Para mayor
cualquier necesidad y principalmente al
certeza se recomienda realizar el ensayo
Doctor Jhon Ironzi Maldonado quien es la
por duplicado con un mejor cultivo. Esta
persona encargada de dirigir dichas
poca confluencia que se observ en el
cultivo tambin la atribuimos a que tal vez actividades y de despertar en nosotros un
el patrn de Mc Farland fue menor de 0,5 inters demasiado grande en la ciencia y
y por lo tanto las unidades formadoras de sobre todo en la parte de productos
colonias eran menores. Es necesario naturales haciendo ver de esta una
realizar pruebas con bacterias Gram materia demasiado hermosa e importante
positivas pues algunos extractos no son de para entender ciertos fenmenos
amplio espectro naturales y su importante en el futuro del
planeta.
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