S.E.P.

TECNOLGICO NACIONAL DE MXICO

INSTITUTO TECNOLGICO DE
TUXTEPEC
REPORTE DE PRCTICA N4
CROMATOGRAFA DE PAPEL, DE
CAPA FINA Y EN COLUMNA
MATERIA:
ANLISIS INSTRUMENTAL
ELECTROMAGNETISMO
PRESENTAN:
LUISA ALEJANDRA CORTS CID
ARIANA GONZLEZ GARGA
YAZMN FARIDE MNDEZ SANTIAGO
NANCY CASTRO SIERRA
ANA BERENICE ZAMUDIO REYES

CARRERA:
INGENIERA BIOQUMICA

ASESOR:
M.C. MARTHA PATRICIA VALENCIA PREZ

4TO. SEMESTRE A

4 UNIDAD

San Juan Bautista Tuxtepec Oaxaca a

Martes 24/Mayo/2016
 INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica de separacin que presenta distintas variantes, en toda
separacin cromatogrfica hay dos fases (slida, lquida o gas) una mvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo.
La muestra se introduce en la fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen
entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un
tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si
un componente est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve
rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto
queda retenido y su salida es mucho ms lenta.

MARCO TERICO

La cromatografa ha sido el mejor mtodo de separacin de materia y ha tenido un papel

relevante en todas las ramas de las ciencias. Actualmente, se considera como una tcnica de
separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes. En cada una de
ellas, dividimos todos los materiales de trabajo en dos fases: una fase mvil, en la cual los
componentes de la muestra se encuentran alojados, y la fase estacionaria, encargada de
retener los mismos en su estructura (ya sea slida o un lquido fijado en un slido) al
arrastrar o interactuar con la fase mvil, separando el analito deseado de la muestra
original. De acuerdo al tipo de fase estacionaria, las tcnicas cromatogrficas se dividen en:
Cromatografa en papel: es una tcnica muy utilizada para realizar anlisis
cualitativos debido a que es sencilla de realizar y no requiere equipamiento
complejo. Desde el punto de vista terico se clasifica como cromatografa lquido-
lquido.En esta tcnica, la fase estacionaria se constituye por una tira o circulo de
papel filtro, mientras que la fase mvil acta como un eluyente que ayuda a
disolver la muestra. El procedimiento consiste en colocar una disolucin de la
muestra en un extremo del papel filtro en forma de pequeas gotas. El papel se
somete ya sea por goteo o por aadimiento del lquido que actuar como fase mvil
en ese extremo del papel, Al dejarse por un tiempo, la fase mvil asciende por
capilaridad, y esto genera un arrastre dela muestra, manifestndose de manera
visible en el papel con su color caracterstico.
 Cromatografa en placa fina: la fase estacionaria se sita sobre una placa de
vidrio). La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa,
uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Se
clasifica en cromatografas slido-lquido. La fase mvil es lquida y la fase
estacionaria consiste en un slido. La fase estacionaria ser un componente polar y
el eluyente ser por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que
los componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos polares.
Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente: hidrocarburos < olefinas
< flor < cloro < nitro < aldehdo aldehdo < ester < alcohol < cetonas < aminas <
cidos < amidas.
Cromatografa en columna (la fase estacionaria se sita dentro de un tubo o
columna). sta es un proceso de separacin donde la mezcla fluye hacia debajo de
una columna rellena con absorbente. Se clasifica en cromatografas slido-lquido.

En todos los casos la separacin que se produce mediante esta tcnica, es con frecuencia
comprobable con la obtenida en la cromatografa de capa fina.
En este caso la fase mvil se llama eluyente, que es el que nos ayudar en la separacin de
componentes de una mezcla y este se selecciona segn su polaridad.
El requerimiento bsico para la cromatografa en columna es disponer de un cilindro hueco
(preferentemente de vidrio, un reservorio que contenga el solvente revelador, un buen
adsorbente y los medios mediante los cuales los componentes separados se puedan recoger
a medida que aparezcan en el fondo de la columna.

OBJETIVOS
Manejo de las ctcnicas de separacin, o sea, los tres mtodos
Separacin de los componentes de uns muestra de colorantes
Revisar conceptos relacionados con polaridad y separacin por cromatografa
Aprender a realizar montajes sencillos para separar por cromatografa en papel, los
componentes coloreados de una mezcla
Conocer los criterios de seleccin de fases mviles considerando las diferencias de
polaridad de compuestos de una mezcla
 Separar los componentes coloreados de un extracto obtenido de una fuente vegetal.
Comprender en los principios generales de la separacin en cromatografa.

METODOLOGA DE CROMATOGRAFA DE PAPEL

Reactivo y muestra Materiales

Alcohol etlico al 96 Pliegos de papel filtro de 20 x 20 cm
Tintas de bolgrafos de diferentes colores Cmara de vidrio
(morado, verde y rojo)
Cinta adesiva, guantes, tijeras, lpiz y regla

1. El pliego de papel filtro se recorta, con guantes, un cuadro de 20 cm x 20 cm,

realice un trazo con el lpiz en forma horizontal a tres centmetro de su extremo (a
esta se le conoce como Origen).

2. De esta manera, realice otro trazo en el extremo opuesto del origen igual a tres
centmetros del borde del papel (a este se le llama frente).

3. Despus, marque ligeramente debajo el origen (en direccin al borde del papel) 3
puntos separados (esto ayudar a diferenciar el origen del frente), esto ser para que
ah coloquemos la gota de nuestras muestras.

4. Mientras, en la cmara de vidrio, aada el eluyente en este caso , el alcohol etlico,

que actuar como fase mvil hasta una altura de 0.5 cm (que no supere al origen).

5. Rapidamente, introduzca el papel filtro (el origen debe estar en la parte inferior) en
posicin diagonal y de frente para visualizar el corrimiento.

6. Tape o cierre bien la cmara de vidrio para evitar la evaporacin del eluyente.

7. Deje actar a la fase mvil por largos minutos hasta que ascienda por capilaridad
totalmente (debe visualizarse el corrimiento de las tintas).

8. Por ltimo, recoja, con guantes, el papel filtro y deje secar a temperatura ambiente
en la estufa por un periodo de tiempo muy corto.

9. Obtenga las mediciones de la distancia recorrida de las tintas y el eluyente para

realizar los clculos correspondientes.
 RESULTADOS
Inmediatamente, el alcohol etlico al entrar en contacto con el papel filtro, ascendi
rpidamente por capilaridad, provocando el corrimiento de las tintas de forma ascendente.
Las 3 tintas experimentaron corrimientos provocados por la fase mvil pero no de la misma
manera, esto se debe a que cada una de la muestra presenta una afinidad distinta con
respecto con la fase mvil. Esto se debe a que cada tinta es un vehculo de naturaleza
lquida que transporta diversos tipos de pigmentos y aditivos y por tanto, la afinidad de los
mismos por otros compuestos es muy variada.
La tinta que present un mayor corrimiento fue la roja, presentando un corrimiento de 12.3
cm. Esta tinta se compone principalmente de eosina, un compuesto cido que presenta
afinidad con los compuestos alcalinos, por eso el alcohol etlico disolvi de manera
favorable la eosina presente en la tinta, provocando su solubilizacin y corrimiento sobre el
papel debido a la alta afinidad que posee con respecto a la fase mvil, provocando que haya
una dispersin incluso casi al final de la distancia recorrida solo por el eluyente.
La siguiente tinta en correr fue la morada presentando un corrimiento de 12.1 cm con
respecto a la lnea de origen. Esta tinta se compone de trifenilmetano azul, pero cabe
destacar que este compuesto al ser una patente, no se tiene informacin concisa con
respecto a sus propiedades. Sin embargo, el componente original, Trifenilmetano, comparte
ciertas caractersticas, entre ellas su alta polaridad. La afinidad de este compuesto con la
fase mvil permite su corrimiento y su separacin con respecto al punto de origen.
La ltima tinta en correr fue la verde, presentando un corrimiento de 11.9 cm con respecto a
la lnea de origen. El componente principal de la tinta verde es ftalocianina, un colorante
que se estable a condiciones extremas como calor y luz.
En esta separacin, realiza un corrimiento muy lento debido a la poca afinidad que tiene
con la fase mvil, provocando que su separacin sea ms lenta a comparacin de las otras
tintas.
De hecho fueron muy parejas las medidas, no hay mucha diferencia entre ellas.
 TABLAS DE RESULTADOS

Frmula para sacar el Factor de Retencin: Rf =

Distancia Distancia Factor de Retencin

Tinta recorrida por el recorrida por el (Rf)
compuesto (cm) disolvente (cm)
12.3 cm
R f roja = = 0.984
Roja 12.3 12.5 12.5 cm

12.1 cm
R f azul = = 0.968
Morada 12.1 12.5 12.5 cm

11.9 cm
Rf verde = = 0.952
Verde 11.9 12.5 12.5 cm

Al calcular estos parmetros, podemos verificar que hay un mejor tiempo de respuesta entre
ms alto sea el Rf. Los compuestos que presentaron mayor corrimiento tuvieron un Rf ms
alto debido a su naturaleza apolar, permitiendo que reaccionarn de manera inmediata con
el alcohol etlico, logrando as
un desplazamiento ms rpido
de manera ascendente hacia el
frente del papel, indicando que
estos son separados ms rpido
gracias a la afinidad que
tuvieron con la fase mvil. Los
compuestos que presentan
menor corrimiento tienen un
Rf ms bajo, esto se debe a que
posee una baja afinidad con la
fase mvil debido a que los dos
son de naturaleza polar y por
ende su tiempo de respuesta es
menor, logrando separarse
lentamente.
 METODOLOGA DE CROMATOFRAFA DE CAPA FINA

Reactivo y muestra Materiales

Alcohol etlico al 96 Placa de vidrio
Tintas de bolgrafos de diferentes colores
Cmara de vidrio
(morado, verde y rojo)
Cal, licuadora, guantes, tijeras, lpiz y regla

1. Se licua la cal con un poco de agua hasta tener una mezcla homognea; se le agrega
a la placa de vidrio con mucho cuidado, tiene que formarse una placa muy fina y se
pone a secar. Realice un trazo con el lpiz en forma horizontal a unos centmetros
de su extremo (a esta se le conoce como Origen).

2. De esta manera, realice otro trazo en el extremo opuesto del origen a unos
centmetros del borde de la capa (a este se le llama frente).

3. Despus, marque ligeramente debajo el origen (en direccin al borde de la capa) 3

puntos separados (esto ayudar a diferenciar el origen del frente). Luego, marque
con las tintas (morada, verde y rojo) sobre cada punto (dentro del origen).

4. Mientras, en la cmara de vidrio, aada el eluyente que fue alcohol etlico que
actuar como fase mvil hasta una altura de 1 cm (que no supere al origen).

5. Despus, introduzca la placa cya en forma de capa fina (el origen debe estar en la
parte inferior) en posicin diagonal y de frente para visualizar el corrimiento.

6. Tape la cmara de vidrio para evitar la evaporacin del eluyente.

7. Deje actuar a la fase mvil por largos minutos hasta que ascienda por capilaridad
totalmente (debe visualizarse el corrimiento de las tintas).

8. Por ltimo, recoja la capa fina y obtenga las mediciones de la distancia recorrida de
las tintas y el eluyente para realizar los clculos correspondientes.

RESULTADOS

Nos dimos cuenta que el alcohol etlico al entrar en contacto con la placa de capa fina,
ascendi solo que no muy rpido como en el caso del papel filtro, esto se debe a que por las
propiedades de la cal se tard en absorber el disolvente pero si provoc el corrimiento de
las tintas. Las 3 tintas experimentaron corrimientos provocados por la fase mvil pero no de
la misma forma; y como en el mtodo anterior, de la cromatografa en papel filtro, la tinta
roja tuvo mayor corrimiento fue de18.6cm., el segundo fue la tinta morada de 18.3 cm y el
tercero fue la tinta verde con 17.9cm de corrimiento.

TABLAS DE RESULTADOS

Frmula para sacar el Factor de Retencin: Rf =

Distancia Factor de Retencin

Tinta Distancia recorrida por el (Rf)
recorrida por el disolvente (cm)
compuesto (cm)
18.6cm
R f roja = = 0.958
Roja 18.6 19.4 19.4 cm

18.3 cm
R f morada =
18.3 19.4 19.4 cm
= 0.943
Morada
17.9 cm
Rf verde = = 0.922
Verde 17.9 19.4 19.4 cm

Al igual que en la cromatografa de papel filtro, el caso de los compuestos que presentaron
mayor corrimiento (tinta roja y azul) tuvieron un Rf ms alto debido a su naturaleza apolar,
permitiendo que reaccionarn de manera inmediata con el alcohol etlico.

En el caso de la tinta verde, tuvo el Rf ms bajo, esto se debe a que posee una baja afinidad
con la fase mvil debido a que los dos son de naturaleza polar y por ende su tiempo de
respuesta es menor.
 METODOLOGA DE CROMATOGRAFA DE COLUMNA

Reactivos /disolventes y muestras Materiales

Hexano Soporte, pinzas para bureta, bureta
Arena Vasos de precipitado
Slica en forma de bolitas Pipetas , mortero, matraces erlenmeyer
Colorantes naturales de hojas verdes, Cuchillo, sernidor
zanahoria, extracto de naranja, flor de
bugambilia

1. Montar el equipo adecuado ensamblando la bureta con la pinza.

2. Comprobar que la llave de la columna est cerrada, aadir como 2 cm de arena
al interior de la bureta, luego 15 cm de silica y de nuevo otros 2 cm de arena y
compactarlo (fase estacionaria).
3. Agregar el disolvente (fase mvil) y abrir la llave para que este valla bajando poco a
poco, hay que dejarlo fluir y moje toda la fase estacionaria. Si es necesario, ir
agregandole ms disolvente si es que ste se acaba o ya es absorbido o tambin de
lo que se obtiene de la columna durante esta parte del proceso se puede
reutilizar. NOTA: a lo largo del proceso cromatogrfico la columna nunca
debe secarse, es decir, la fase estacionaria debe encontrarse en todo
momento cubierta por la fase mvil, ya que de lo contrario la fase estacionaria se
contraera y agrietara.
4. Una vez compactada la columna se proceder a sembrar, depositar, 1 ml de
la mezcla de los colorantes naturales sobre la superficie de la fase estacionaria ya
mojada con el disolvente.
5. Finalizada la adicin de la muestra se abre la llave de la columna y se eluye
hasta que la muestra sea absorbida y el nivel del lquido quede
aproximadamente 1 mm por encima de la superficie del absorbente.
6. Si la pared interna de la columna se ha manchado con la muestra al
depositarla, se lava dejando gotear por ella un poco del eluyente(con la ayuda de
la pipeta)
7. Se eluye de nuevo hasta que el nivel del lquido vuelva a quedar 1 mm por
encima de la superficie del absorbente.
8. Finalmente se aade 1 ml de hexano y se eluye de nuevo hasta que el nivel del
lquido vuelva a quedar 1 mm por encima de la superficie del absorbente.
9. Adicionar, con la ayuda de una pipeta Pasteur y lentamente, 10 ml de
hexano en la parte superior libre de la columna.
 10. Abrir la llave para permitir el flujo del etanol a travs de la almina. A
medida que evoluciona el cromatograma se observa que el azul de metileno
eluye a lo largo de la columna, formando una banda de color azul bien
diferenciada que se desplaza hacia la parte inferior de la misma, mientras que
el naranja de metilo queda retenido en la parte superior. Si es necesario se
aadir ms etanol a la columna durante el proceso de elucin.

RESULTADOS
En esta prctica los resultados dieron negativos, pues influy mucho la silica que
utilizamos ya vena con colorantes, adems no se formaron los anillos ya que qued a
medias la prctica.
CONCLUSIN
En el desarrollo de esta prctica se comprendi que la movilidad de los componentes de
una muestra que se desee separar, depende de la afinidad que tenga con la fase mvil y la
polaridad que presente est ltima, ya que es el factor crucial para que pueda realizarse una
separacin cromatogrfica apta.. El papel filtro por ejemplo, pueden existir inconvenientes
que alteran los resultados de la misma, ya sea sobre la distribucin de las muestras sobre el
papel (en este caso, afectando a otras tintas en su corrimientos) o los factores ambientales
(ejemplo calor) que afectan a la fase mvil, disminuyendo su cantidad al vaporizarse o el
deterioro de la fase estacionaria. Sin embargo, controlando estos factores, esta tcnica
puede desarrollarse y arrojar resultados favorables., ya sea en el sector clnico, industrial e
investigacin
BIBLIOGRAFA

LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA APLICADA. (2001).

CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA Y EN PAPEL DETECCIN DE LOS
COMPONENTES EN MEZCLAS. De bib.uia Sitio web:
www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa001.pdf

Facultad de Qumica Analtica Instrumental II. (2007). Tcnicas Cromatogrficas.

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Gennaro, A.R. Remington: Farmacia. 20. edicin. Volumen 1. Mxico: Editorial

Mdica Panamericana. 2003. Pp. 686-689.

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