Biosntesis de nanoparticuas metlicas de efluentes residuales a

partir de microalgas
Basto, J.J1. Salinas, J. R2. Castro, N, D3
Universidad Jorge Tadeo Lozano
Departamento de ingeniera qumica
Jhonj.bastov@.edu.co1
joser.salinass@utadeo.edo.co2
nicolasd.castrop@utadeo.edu.co3

Asbtract. al finalizar el reporte y entre 100 y 150 palabras se explica el proyecto realizado

Introduccin metales pesados que se derivan de aguas

Las microalgas son seres vivos fotosintticos
(utiliza la luz como fuente de energa) capaces de
usar compuestos orgnicos e inorgnicos para su
metabolismo; como algunos metales pesados,
fosfatos, dixido de carbono (disminucin de este
gas de efecto invernadero) y amonios, con el fin
de producir oxgeno y biomasa en forma de
lpidos; adicionalmente crecen muy rpido en
efluentes ricos de estos compuestos inorgnicos y
en este momento tiene varias aplicaciones a nivel
planta piloto.
Estos seres vivos en los ltimos aos han tenido
una alta aplicacin para diversos fines como salud
humana, cosmetologa, tratamiento de aguas,
industria farmacutica, acuicultura, produccin de
pigmentos, entre otros. Adema que tambin
funcionan como alimento humano por su alto
poder proteico y sin efectos no txicos [1]. Pero
muchos de estos empleos se encuentra en estudios
de investigacin para la implementacin a escala
industrial, estudios de los que destacan biodiesel a
partir de biomasa que producen en forma de
lpidos, tambin se encuentra tratamientos
terciarios en aguas residuales para su
descontaminacin porque tienen la capacidad de
desarrollarse en diversos entornos acuosos (agua
dulce, residual y salada), usando sustancias que
se encuentran en el medio para su metabolismo;
de esta forma disminuyen la cantidad de
compuestos inorgnicos y mejoran la calidad del
efluente [2]. Esto va muy entrelazado con la
biosntesis de nanoparticulas porque muchas de
las aguas residuales estn contaminadas con
industriales o de minera; el papel fundamental de
algunos microrganismos tales como microalgas,
hongos y algunas bacterias es realizar biosntesis
de nanoparticulas debido a que estos seres vivos
metabolizan los metales como parte de su
alimento o como desecho. La biosntesis de una
nanoparticula para formar un nanomaterial
depende mucho del tipo de microrganismo, el
tamao su adaptacin del medio [3].
El problema del porque no se ha podido adaptar a
escala industrial es por varios factores que son por
la escasez de informacin para su escalamiento
industrial, la dificultad del monocultivo consumen
muchos nutrientes de forma rpida y se debe tener
un control muy riguroso y el costos elevado que se
genera para recoleccin de la biomasa de este ser
vivo [4].
Justificacin.
Es evidente el aumento de contaminacin del agua
en el pas debido a la cantidad de desechos que
son vertidos en ella. Uno de los principales
responsables es el sector industrial, que vierten
varias toneladas de los residuos contaminados y
cargados de componentes txicos que daan el
agua del medio que lo rodea. Segn el Estudio
Nacional del Agua, que se realiza cada cuatro
aos el Instituto de Hidrologa, Meteorologa y
Estudios Ambientales (IDEAM), la mayor parte
del sistema hdrico andino colombiano se ha
alterado debido al transporte de sedimentos y
sustancias txicas, con una incidencia marcada de
los corredores industriales ubicados en las cuencas
de los corredores BogotSoacha, Medelln
Itag, CaliYumbo, SogamosoDuitamaNobsa,
BarranquillaSoledad y CartagenaMamonal, lo
que afecta gravemente la calidad del lquido en los
ros Magdalena, Medelln, Bogot y Cauca. [5]
La industria, como por ejemplo el curtido en
Colombia vierte aguas residuales altamente
contaminadas en metales pesados principalmente
cromo y en pequeas trazas plomo adems se
generan compuestos como alumbre,
formaldehidos, fenoles en el circuito de desecho
de ste tipo de industria. Ya que las pieles se
descomponen por accin bacteriana, es necesario
adicionar compuestos conocidos como agentes
curtientes, que le brinden la resistencia y
durabilidad necesarias frente a los factores
ambientales sin que las pieles sufran algn dao.
El crecimiento de este sector industrial, indica una
mayor facilidad para la adopcin de tecnologas
mejoradas en el procesamiento de las pieles y una
mejor calificacin en los indicadores establecidos
dentro del Sistema de Referenciacin Ambiental
SIRAC, aumentando la competitividad con
curtiembres de otras regiones y pases,
promoviendo el cuidado del medio ambiente. A
pesar de este avance, la cantidad de
microempresas y empresas familiares con
procesos artesanales, sigue siendo
considerablemente alta y su subsistencia no
permite que el desarrollo competitivo sea mayor.
De la informacin recolectada para el ao 2004,
Distribucin del tamao de las industrias del
curtido de pieles en Colombia Figura 1. [6]
Figura 1. Distribucin del tamao de las
industrias del curtido de pieles en Colombia. [6]
En Colombia, la normatividad aplicable para el
sector de las curtiembres y otras industrias se
divide en leyes, resoluciones y decretos para uso
del agua y liberacin de vertimientos lquidos,
emisiones gaseosas y gestin de residuos al igual
que la gestin de las licencias ambientales y las
tasas retributivas.[2] Pero muchas de las
microempresas de curtido en Colombia, no
cumplen con todos los requerimientos que se
solicitan, ni aplican la normatividad que se rige,
vertiendo varias metros cbicos de desechos
cargados altamente en metales de cromo al
vertedero. Colombia tiene una oferta natural de
agua de 2.200 km3 por ao. Nelson mar Vargas,
profesional especializado de la Subdireccin de
Hidrologa del IDEAM, explica que es una gran
cantidad para un pas que solo demanda 35 km3
anuales, de los cuales nueve se pierden por
ineficiencias en los sistemas de riego, en los
procesos industriales y en los acueductos; no
obstante, muchas regiones sufren por el acceso
limitado al recurso y la mala calidad. [5] Segn
la Empresa de Acueducto y Alcantarillado de
Bogot (EAAB), la Planta de Tratamiento de
Aguas Residuales (PTAR) El Salitre recibe en
promedio mensual 10,35 millones de metros
cbicos (m) de aguas residuales de la capital.
Entre enero y junio de 2013, la PTAR El Salitre
ha incrementado en un 8% el tratamiento de agua,
debido al aumento del caudal, que est asociado al
rgimen de lluvia en la cuenca. Con un mayor
caudal tratado, mejora la calidad del agua del ro
Bogot, que recibe las aguas de los ros urbanos
de la capital del pas. [7]
Figura 2. Aumento de agua tratada en el primer
semestre de 2013 por la PTAR El Salitre [7]
Con esto, se puede llegar a que el aumento de
agua tratada aumente, implementando cultivos de
microalgas con el fin de que capten partculas
contaminantes, reduciendo as, los niveles de
compuestos txicos y recuperar las sustancias de
estos procesos industriales para recircularlos de
nuevo o usarlos como materia para otro sistema.
Chlorella vulgaris se ha usado eficientemente para
evaluar el efecto de hidrocarburos aromticos
policclicos (HAPs), al respecto, se han observado
efectos negativos en su estructura celular debido a
la exposicin a fluoranteno, as como dao
oxidativo de las algas por exposicin a
concentraciones inferiores a 10 mg/l de naftaleno
no obstante, no se conocen reportes de toxicidad
de fenantreno en C. vulgaris. Chlorella vulgaris es
un alga verde unicelular, frecuentemente utilizada
como bioindicador debido a su alta sensibilidad a
sustancias txicas y a su facilidad de cultivo en el
laboratorio. Adems, es muy sensible a los
cambios en su entorno, presenta un ciclo de vida
corto facilitando la evaluacin de los efectos
txicos sobre varias generaciones. Sumado a
esto, C. vulgaris ha sido identificada como el alga
ideal para realizar pruebas de inhibicin del
crecimiento con bioensayos de duracin de 72 h,
segn las normas de la Organizacin para la
Cooperacin Econmica y el Desarrollo (OECD,
2011). [8]
Estado del arte
La biosntesis de nanoparticulas a partir de
microalgas expuestas en efluentes residuales
industriales, para recuperar posteriormente la
partcula metlica, adems como este
microrganismo reacciona en este tipo de aguas
para ser usado como tratamiento; se encuentran
estos dos estudios que son muy entrelazados en
investigacin; como en el presente estudio que se
encarg de evaluar la cantidad de biomasa que se
obtuvo a partir de dos especies de estos seres
fotosintticos Chlorella vulgaris y Scenedesmus
acutus con el objetivo de remover nutrientes y
acumular lpidos expuestos en varios tipos de
aguas residuales. Estos organismos fueron
sembrados en agua residual cruda (ARC), tratada
(ART) y enriquecida con un fertilizante comercial
(AE) para realizar una comparacin entre los
medios; los resultados en los que se present
mayor biomasa fue el ARC seguido del AE y
finalmente el ART para las dos especies, adems
la mayor remocin de nutrientes fueron fosfatos,
nitrgeno orgnico y algunos metales en solucin
(mercurio); esto indica que las microalgas
posiblemente pueden ser eficientes en el
tratamiento de aguas pero como un sustituto
terciario [9]. En comparacin se realiz un
anlisis de la importancia de las microalgas en el
tratamiento de aguas; mostrando la consideracin
de estos seres en este proceso que se puede
realizar en conjunto con bacterias que degraden
compuestos orgnicos mientras que ellas se
encargan de algunos inorgnicos. Para el
desarrollo del estudio, se propusieron parmetros
para aumentar la eficiencia en este proceso como
el tipo en efluente, la carga orgnica, la
temperatura, la intensidad luminosa, el gnero de
micro algas y el tipo de cultivo (monoalgal y
mixto) para buscar una mayor eficiencia [2].
Han y colaboradores [10], realizaron un estudio
con una microalga de genero Chlorella miniata
para remover el cromo hexavalente y se encontr
que lo grupos amino en el microrganismo adsorba
el metal, mientras que los polisacridos lo
reducan a cromo trivalente y luego lo liberaba al
medio. En otro estudio realizado por Deng [11], se
encontr que la presencia de otros iones si afecta
la capacidad de adsorcin de cromo impidiendo la
mayor remocin de este metal por tal motivo se
busca mejorar la eficiencia de este microrganismo
cuando se expone a estas condiciones. En otro
estudio se prob por tcnicas por medio del SEM
la presencia de cromo en citoplasma de la
microalga; para tal fin se realiz un cultivo de este
microrganismo para efluentes con cromo III y
mezclas de Niquel cromo ya que la idea es
recuperar este metal a partir de una biosntesis que
se demostr posteriormente. [12]
Metodologa
Cultivo del micro alga:
Se realiz un cultivo de Chlorella Vulgaris a partir
de una poblacin inactiva de microalgas, que se
encuentra almacenada en el laboratorio de
nanotecnologa de la universidad Jorge Tadeo
Lozano. Para la activacin de la microalga e
incorporacin de la misma a un nuevo cultivo, se
prepar un medio denominado Bold's Basal
Medium adecuado para el ptimo desarrollo de la
Chorella Vulgaris en un baln aforado de 1 litro
usando una micro pipeta para evitar
contaminacin delos reactivos o nutrientes de este
microrganismo. La composicin del medio se
especifica a continuacin:
Tabla 1 Componentes necesarios para preparar
un medio acuoso para el cultivo de la microalga
Chlorella Vulgaris. Tomado de (University of
Waterloo, Canadian physycological culture
centre) [13]
Para la elaboracin de la traza de metal en
solucin se puede utilizar varias opciones de
soluto. Algunos ejemplos y sus proporciones se
muestran en la siguiente tabla.
Tabla 2 Soluto en gramos por litro de solucin
para preparar diferentes trazas de metal para el
medio de cultivo de Chlorella Vulgaris.
(University of Waterloo, Canadian physycological
culture centre) [13]
Luego que se prepar el medio para las
microalgas, se midi su pH con papel indicador,
puesto que se debe garantizar un pH adecuado
para el desarrollo de Chlorella Vulgaris que debe
ser 6,8. Luego de preparar el medio, el pH se
encuentra por encima o por debajo del adecuado
se debe corregir adicionando unas gotas cido
sulfrico (H2SO4) o hidrxido de potasio (KOH)
correspondientemente, con las proporciones que
se muestran en la tabla 1
Por ltimo, se procedi a realizar 3 cultivos en
erlenmeyers de 250 mL tapados con corchos,
incorporando 40 mL de las microalgas inactivas
con 210 mL del Bold's Basal Medium. Para
incorporar oxgeno (O2) y dixido de carbono
(CO2) a la solucin y brindar los componentes
necesarios para la fotosntesis de la Chlorella
Vulgaris se instal una bomba de aire similar a las
usadas en las peceras para airear constantemente
el cultivo. A continuacin se muestra la estructura
de los cultivos realizados:
Figura 3. Montaje de los 3 cultivos de Chlorella
Vulgaris.
Para iniciar la biosntesis de las nano partculas de
cromo (Cr) es necesario esperar a que las micro
algas se activen completamente y se hallan
reproducido en una cantidad significativa con el
fin de garantizar que los cultivos sean capaces de
soportar el estrs qumico que el cromo (Cr) en
solucin producira al incorporarse en el medio.
Una manera de saber si el cultivo est listo o no
para soportar medios contaminados con metales es
identificar si la biomasa generada es significativa.
A continuacin se muestra como estimar la
biomasa generada.
Cuantificacin de biomasa
se pretende realizar un curva de biomasa con
datos experimentales tomados para mirar el
crecimiento exponencial de las microalgas, su
adaptacin y su fase estacionaria y que cantidad
de biomasa se produce y como se desarrollan en
efluentes con cromo; para tal motivo se pretende
tomar datos cada tres das para la cuantificacin
de las mismas

Caracterizacin de las nanoparticulas

se va usar SEM para comprobar que la microalga

si realiza la biosntesis de la nanoparticula Figura 4. Chlorella Vulgaris observada con
encapsulndola en su citoplasma para luego microscopio ptico y lente de 4X de aumento.
retirarla con EDTA y comprobar la presencia de
cromo luego de la separacin con alguna tecnica

Anlisis de resultados

Control y observacin de la Chlorella Vulgaris:

Para garantizar los mejores resultados en la

biosntesis, es primordial que las microalgas
siempre se encuentren en condiciones ptimas.
Para ello, se realizaron controles peridicos del
cultivo tres veces por semana para mantener
constante el volumen del medio (250 ml), Figura 5. Chlorella Vulgaris observada con
observar la coloracin de los cultivos, identificar microscopio ptico y lente de 10X de aumento.
la biomasa presente y controlar el pH de los
ensayos. Los cambios de coloracin en el cultivo
son indicios de que algn factor del medio no es
adecuado y posiblemente el cultivo este muriendo.
La tonalidad de la solucin debe mantenerse en
verde Kelly ( ).

Para en anlisis de biomasa presente en el cultivo

se pueden usar dos alternativas. Una es la
observacin del ensayo a travs de un microscopio
ptico usando lente de 10X o 40X de aumento
para identificar de manera visual la densidad
poblacional del cultivo de Chlorella Vulgaris. Las
siguientes figuras proporcionadas por el
microscopio ptico muestran la poblacin de
microalga luego de 3 das del cultivo:
Figura 6. Chlorella Vulgaris observada con
microscopio ptico y lente de 40X de aumento.
La otra opcin consiste en tomar una alcuota del
cultivo de volumen constante y medir su masa.
Para ello se puede usar una filtracin con ayuda de
una bomba de vaco para pesar la masa de micro
alga atrapada en el filtro o tambin es posible
deshidratar la alcuota con altas temperaturas para
pesar la Chlorella Vulgaris de manera directa.
Realizando estas mediciones de biomasa de
manera peridica es posible conocer la tasa de
natalidad o crecimiento poblacional del cultivo y
as determinar el momento adecuado para
incorporar el agua cromada y dar inicio a la
biosntesis.
Cuantificacin de biomasa y anlisis del
SEM en este tem se publicara resultados y se
pretende realizar una buena discusin para la
tercera entrega del formato los resultados
faltantes se evidenciaran en este artculo.
Referencias
[1] Medina, A., Valdez, P., Nieves, F., Arzola, J.,
Guerrero, I., la importancia de las microalgas.
CONABIO. Vol 103. Pag 1-5. 2012.
[2] Salazar, M., Aplicacin e importancia de las
microalgas en el tratamiento de aguas residuales.
Contacto. vol 59, 64-70. (2006).
[3] Vega, J., Len., Sntesis de nano partculas
metlicas a partir de microrganismos. Pag 1-10.
(2016).
[4] Hernndez, A., Vzquez, R., Snchez, M.,
Serrano, L., Martnez, A., Biodiesel a partir de
micro algas. Bio tecnologa. vol 13. Pag 38-61.
(2009).
[10] L. Deng, Y. Q. J. Zhang, X. Wang y X. Zhu,
Biosorption of Cr(VI) from aqueous solutions by
nonliving green algaeCladophora albida,
Minerals Engineering, vol. 22, p. 372377,
(2009).
[11] X. Han, Y. S. Wong, M. H. Wong y N. F.
Yee Tam, Biosorption and bioreduction of
Cr(VI) by a microalgal isolate,Chlorella miniata,
Journal of Hazardous Materials, vol. 146, p. 65
72, (2007).
[12] esta referencia es el poster del laboratorio de
nano que se me olvido copiar y que no encontr
en internet Biosynthesis of metalic nanoparticles
from fitting industry effluents prelmnary
studies.
[13] University of Waterloo, Canadian
physycological culture centre, Bolds basal
medium (modifies), recuperado de:
https://uwaterloo.ca/canadian-phycological-
culture-centre/cultures/culture-media/bolds-
basal-medium.

[5] Isis B., El 50% del agua en Colombia es de

mala calidad. UN Peridico. Vol 141. (2011).

[6] Ardila, l., Medicin de la capacidad de

Chlorella vulgaris y Scenedesmus acutus para la
remocin de cromo de aguas de curtiembre.
Universidad Nacional de Colombia pp. 13-25.
(2012).

[7] Zapata I.M. Cunta agua residual se trata en

Bogot? Boletn No. 17, (2013).

[8] Otero, P. A., Cruz P. E. And Velazco YM.

Evaluacin Del Efecto Del Hidrocarburo
Fenantreno Sobre El Crecimiento De Chlorella
Vulgaris. Scielo. Vol 18, No. 1, (2013).

[9] Sacristn, M., Luna, V., Cadena, E., Alva, A.,

Produccin de biodiesel a partir de algas y una
cianobacteria cultivada en diferentes calidades de
agua. Agrociencia. vol 48. pag 271-284. (2014).