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FACULTAD DE INGENIERIA

CURSO BSICO

Laboratorio de Qumica Orgnica (QMC 200)

PRACTICA: 4
TEMA:
CROMATOGRAFA
NOMBRE:
UNIV. MAMANI LIMACHI CHRISTIAN ELIAS
DOCENTE:
ING.MARCOS CHAMBI YANA
CARRERA:
INGENIERIA QUMICA
FECHA DE REALIZACION: 19 DE JULIO DEL 2017
FECHA DE ENTREGA: 20 DE JULIO DEL 2017

LA PAZ-BOLIVIA
1. OBJETIVOS:

1.1 OBJETIVO GENERAL


Realizar, observar y analizar que la cromatografa es una tcnica
muy til para la separacin de mezclas, ya sean simples o
complejas.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS


Utilizar las tcnicas de cromatografa en papel y capa fina.
Observar la importancia de la eleccin del solvente en un
proceso de cromatografa, ya que de esta depende la eficiencia.
Analizar, calcular y deducir los valores del Rf para cada solvente
con cada indicador.
Determinar la Fase Mvil y la Fase Estacionaria.

2. FUNDAMENTO TERICO
En 1906 Tswett defini la cromatografa
como: el mtodo en el cual los componentes
de una mezcla son separados en una
columna absorbente dentro de un sistema
afluyente. En el cual los componentes son
distribuidos en dos fases, una de las cuales
es estacionaria, mientras que la otra es
mvil. La fase estacionaria puede ser un
slido o un lquido soportado en un slido o
en un gel (matriz). Mientras que la mvil es
solvente.

La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen


mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros
y que puedan ser usados posteriormente.
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla. En este caso,
las cantidades de material empleadas son pequeas.
La cromatografa comprende un conjunto de tcnicas que tienen como
finalidad la separacin de mezclas basndose en la diferente capacidad de
interaccin de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste
en pasar una fase mvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene
el compuesto deseado en el disolvente) a travs de una fase estacionaria fija
slida. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra,
de forma que los componentes la atraviesan a diferentes velocidades y se
separan en el tiempo. Cada uno de los componentes de la mezcla presenta un
tiempo caracterstico de paso por el sistema, denominado tiempo de retencin.
Cuando el tiempo de retencin del compuesto deseado difiere del de los otros
componentes de la mezcla, ste se puede separar mediante la separacin
cromatogrfica.
.
Fase
Tipos Fase estacionaria
mvil
Cromatografa
Lquido Papel de celulosa.
en papel
Cromatografa
Lquido Gel de slice o almina.
en capa fina
Columnas capilares de slice fundida, con
Cromatografa recubrimientos internos de varios tipos de siloxanos
Gas
de gases enlazados, columnas empaquetadas con tierras
diatomeas hechas de tubos de vidrio o metal.
Cromatografa
Lquido Relleno de siloxano de octilo o siloxano de
lquida
(polar) octadecilo.
en fase reversa
Cromatografa Lquido Relleno de slice, almina o un soporte al que se
lquida (menos unen qumicamente grupos polares (ciano, amino,
en fase normal polar) etc).
Cromatografa
lquida Lquido
Resinas de intercambio inico.
de intercambio (polar)
inico
Cromatografa
Relleno de pequeas partculas de slice o polmeros
lquida Lquido
con red de poros uniforme.
de exclusin
Cromatografa
lquida Lquido Partculas finamente divididas de slice o de almina.
de adsorcin
Cromatografa
Columnas abiertas de slice fundida con
de
Lquido recubrimientos internos de varios tipos de siloxanos
fluidos
enlazados y de enlaces cruzados.
supercrticos
A. Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana
o sobre un papel. Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los
laboratorios para realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no
ser una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de
equipamiento.
La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de
papel filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando
pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente. Luego
el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender
por capilaridad. Luego se coloca la tira de papel verticalmente y con
la muestra de abajo dentro de un recipiente que contiene fase mvil
en el fondo.
Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o
ha llegado al extremo se retira el papel y se deja secar. Si el
disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio
se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los
componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos
de revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una
cromatografa eficaz: la eleccin del disolvente y la
del papel de filtro.
Un ejemplo podra ser que utilices un pedazo de
papel y le hagas puntos de colores con plumones
permanentes y le pongas un lpiz del lado donde no
estn los puntos de colores (esto te servir como
soporte), despus en un vaso pon alcohol y coloca
la tira de papel con el lpiz horizontalmente en la
parte de arriba para que el papel no caiga y tienes
que esperar para que el alcohol haga efecto en el
papel, lo que suceder es que a los puntos de
colores se les harn unas pequeas lneas hacia
arriba.

Cromatografa en capa fina (CCF) es una tcnica


cromatogrfica que utiliza una placa inmersa verticalmente. Esta
placa cromatogrfica consiste en una fase estacionaria polar
comnmente se utiliza slice gel adherida a una superficie slida. La
fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido
sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte.
Los productos a examinar se disolvern, cuando sea posible, en un
disolvente orgnico que tenga un punto de ebullicin lo
suficientemente bajo para que se evapore despus de la aplicacin,
lo ms comn es usar acetona. Frecuentemente se emplean
disoluciones al 1%, de manera que al aplicar 2 ml resulta en la carga
20 mg de producto slido. Muchos reactivos de revelado llegan a
detectar 0,1 mg de material; por esto con esta carga puede llegarse a
observar un 5 % de impurezas.
Existen una gran variedad de micro pipetas y micro jeringuillas para
realizar el proceso de siembra de la muestra a analizar. Tambin
pueden usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza
tocando con la punta del capilar (micro pipeta, etc) sobre la placa
preparada. Dejando una distancia al borde inferior de un centmetro
aproximadamente. El punto de aplicacin de la muestra se denomina
toque.
Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente,
de forma que en la placa solo quedar la muestra a analizar. se
anota en el cuaderno la identidad del eluyente o solvente y la relacin
de los dos, o ms que se hayan utilizado.
La eleccin del eluyente depende del componente que se va a separar
y del material en que la separacin se lleva a cabo. Un mtodo que se
emplea para la seleccin del eluyente es una cromatografa en capa
fina con distintos disolventes y unas muestras patrn.
Principales eluyentes en orden creciente de polaridad:

ter de petrleo
ter dietlico
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Acetato de etilo
Piridina
Cloroformo
Diclorometano
Benceno
Etanol
Metanol
Agua
cido actico
En la eleccin del eluyente influyen varios factores:

Precio.
Pureza.
No utilizar mezclas de eluyentes a menos que se conozcan las proporciones
de los disolventes que conformen la mezcla (reproducibilidad).
No utilizar compuestos muy voltiles.
Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).
La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez ms polares.
Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir utilizando la
misma placa para aplicar otros eluyentes ms polares, hasta dar con el ms
apropiado.
Otra tcnica para realizar la eleccin del eluyente consiste en sembrar varias
muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos
eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada eluyente
radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el eluyente con el cual la
separacin se realiza de una manera ms eficaz.
El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el
mtodo ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa
casi en vertical, por la accin de la capilaridad. La cromatografa se realiza en una
cubeta. Para conseguir la mxima saturacin posible de la atmsfera de la
cmara, las paredes se impregnan del eluyente.
Generalmente el eluyente se introduce en la cmara una hora antes del desarrollo,
para permitir la saturacin de la atmsfera. El tiempo de desarrollo, por lo general,
no llega a los 30 minutos. El tiempo de una cromatografa cualitativa suele ser de
un par de minutos, mientras que el tiempo de una cromatografa preparativa puede
llegar a un par de horas.
B. Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una
columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
cromatografa lquida, tambin conocida como cromatografa de
lquidos, es una tcnica de separacin y no debe confundirse con una
tcnica cuantitativa o cualitativa de anlisis. Es una de las tcnicas
analticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar fsicamente
los distintos componentes de una solucin por la adsorcin selectiva
de los constituyentes de una mezcla. En toda cromatografa existe un
contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria,
y una mvil (fase mvil) que fluye constantemente durante el anlisis,
y que en este caso es un lquido o mezcla de varios de ellos. La fase
estacionaria por su parte puede ser almina, slice o resinas de
intercambio inico que se encuentran disponibles en el mercado. Los
intercambiadores inicos son matrices slidas que contienen sitios
activos de carga electrosttica De esta forma, la muestra se fija al
soporte slido por afinidad electrosttica. Dependiendo de la relacin
carga/tamao algunos constituyentes de la mezcla se retendrn con
mayor fuerza sobre el soporte slido que otros, es decir sern
adsorbidos, lo que provocar su separacin.

Mtodo Abreviatura Mecanismo predominante

Lquido, slido o
LSC Adsorcin sobre la superficie
de adsorcin

Reparto entre fases lquidas, una mvil y la otra


Lquido LLC
estacionaria.

Reparto y / o adsorcin entre las fases mvil y


Fase enlazada BPC
enlazada.

Uso de la estructura de ligantes inmovilizados para


Afinidad --
unir bioselectivamente la protena deseada.
La cromatografa de absorcin opera mejor en la separacin por clases
de compuestos o para la separacin de compuestos isomricos. La
tcnica de cromatografa lquido lquido es mejor para la separacin de
homlogos. Los grupos funcionales que son capaces de formar enlaces
de hidrgeno fuertes se retienen mucho en cromatografa de adsorcin;
sin embargo la CLL (Lquido lquido) proporciona una alternativa para la
separacin de estos compuestos; estas sern las muestras que tienen
polaridad media

9.

Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y


diversos momentos a lo largo de la elucin:
1. Muestra depositada sobre el lecho cromatogrfico
2. La muestra penetra en el lecho
3. Se aade fase mvil
4. Comienza la separacin de los componentes de la muestra
5. Eluye el primer componente
6.. Eluye el segundo componente

Cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la


muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas
inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no
interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de
transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases: la cromatografa gas-slido y
la cromatografa gas-lquido, siendo esta ltima la que se utiliza ms
ampliamente, y que se puede llamar simplemente cromatografa de gases.
En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en
ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este
proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este
tipo de cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del
analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de
elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies
gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria
molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de
diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de
muestra, la columna generalmente dentro de un horno, y el detector.
Cromatografa de reparto

Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la fase


estacionaria caso de la cromatografa de gases, o diferentes solubilidades
de los componentes en las fases mvil y estacionaria caso de la
cromatografa lquida.

Ejemplos: en cromatografa plana, la F.E. es el agua o disolvente asociados


a la celulosa (papel) o al soporte slido que forma la capa fina; en columna,
como F.E. se usan tierra de diatomeas, gel de slice, celulosa en polvo...

Cromatografa de intercambio inico

Diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes de la


muestra. Qu significa intercambio de iones? La F.E. posee carga
elctrica y por ello interacciona con los componentes de la muestra que
tienen carga opuesta.

Intercambio aninico: F.E. con carga positiva, une aniones, bien los del
disolvente (F.M.) o bien los de la muestra (de ah la palabra intercambio).
Intercambio catinico: F.E. con carga negativa, une cationes, bien los
del disolvente (F.M.) o bien los de la muestra.

Ejemplos de grupos funcionales intercambiadores unidos covalentemente a la F.E.


slida:

intercambiadores catinicos intercambiadores aninicos


carboxilato
sulfonato dietilaminoetilo (DEAE)
fosforilo dietil-(2-hidroxipropil)aminoetilo
carboximetilo (CM) polietilenimina
sulfopropilo (SP)

La F.E. suele llamarse resina de intercambio inico.


Cromatografa de exclusin

Tambin se llama de exclusin molecular. Estrictamente, se basa en diferencias


de tamao, forma o carga entre las molculas de los distintos componentes de la
muestra, pero lo ms habitual es aprovechar las diferencias de forma y tamao.
En este caso, se la llama tambin cromatografa de exclusin por tamao,
de filtracin en gel, de permeacin en gel o de tamiz molecular.

Esquema de la separacin de
molculas de distinto tamao
durante una cromatografa de
exclusin.

Haciendo clic sobre la imagen


de la columna a la derecha se
mostrar el aspecto en detalle
del relleno ilustrando el
diferente acceso a los poros
de las molculas dependiendo
de su tamao.

Valor de Rf:
La constante Rf es simplemente una manera de expresar la posicin de un
compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un
componente.
Se define como: RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del
eluyente desde el origen.

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de


la mancha, los clculos se simplifican si el denominador es 10. Para que
los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones Espesor de
la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra. El mximo valor
de RF que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7.
Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma
placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan
los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del
mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden
ser iguales o no.
Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma
placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una
separacin mnima. En este caso no se pueden usar reveladores qumicos, ya que
alteraran los compuestos, sino indicador ultravioleta.

Rf = Distancia recorrida por el compuesto /


Distancia recorrida por el disolvente

3. DATOS RECOPILADOS:

CROMATOGRAFIA EN PAPEL:

En una gradilla se colocaron 6 tubos de ensayo para esta parte de


la prctica, en las cuales se usaron como solventes:
SOLVENTES CANTIDAD
Etanol con agua 50:50
Acetona Cloroformo y 50:50 , 1 gota de
propanol propanol
Las muestras que se usaron fueron las tintas de los bolgrafos en
colores: negro, azul y rojo. Adems de marcadores de color: Azul,
naranja y lila.
Las distancias recorridas desde la siembra hasta el frente, fueron:
SOLVENTE MUESTRA(COLOR) DISTANCIA DISTANCIA
MUESTRA(cm) SOLVENTE(cm)
Etanol con agua Azul 5.6 7.5

Etanol con agua Naranja 6.5 8.2

Etanol con agua Lila 7 9.2

Acetona, cloroformo y Negro 11 14


propanol
Acetona, cloroformo y Rojo 10.1 10.7
propanol
Acetona, cloroformo y Azul 13 13.8
propanol
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:

Con ayuda de un mortero molimos las hojas de espinaca con dos


solventes distintos:
SOLVENTE CANTIDAD
Metanol Absoluto Lo ms mnimo posible
n-Hexano con Etanol 50:50
Luego de juntar las hojas de espinaca con los solventes
mencionados, se obtuvo una solucin verdosa; esta misma la
filtramos con el objetivo de obtener un lquido ms puro.
Depositamos las soluciones obtenidas por filtracin en un tubo de
ensayo y aadimos agua, con el objetivo de obtener dos fases y
decantar una de ellas.
A la fase orgnica aadimos sulfato de sodio como agente
desecante, para eliminar el agua que quedaba.
Con ayuda de un capilar de punta delgada, (VER *), tomamos un
poco de la muestra y la introducimos en la capa fina.
Como solvente para realizar la cromatografa utilizamos; metanol
absoluto.
Esperamos a que las sustancias asciendan por la fase estacionaria
y se obtuvieron los siguientes alcances, desde la siembra hasta el
frente del solvente:
SOLVENTE MUESTRA DISTANCIA DISTANCIA
MUESTRA(cm) SOLVENTE(cm)
Metanol Absoluto Hojas de espinaca 5 5.2
con metanol
absoluto.(molido)
Metanol Absoluto Hojas de espinaca 3 3.5
con n-Hexano y
Etanol.(molido)

(*).- Para lograr obtener un capilar con punta delgada y fina, procedimos a calentar
con un mechero una de las puntas. Una vez caliente con ayuda de una moneda
jalamos la punta, evitando que se rompa; luego se la enfri para que quede de la
forma requerida.
4. CLCULOS

a) Cromatografa en papel.-
Con ayuda de la tabla en la parte de datos recopilados calcularemos los
valores de Rf, con la siguiente relacin:

=

DISOLVENTES MUESTRA(COLOR) Rf
Etanol con agua Azul 0.75

Etanol con agua Naranja 0.79

Etanol con agua Lila 0.76

Acetona, Negro 0.79


cloroformo y
propanol
Acetona, Rojo 0.94
cloroformo y
propanol
Acetona, Azul 0.94
cloroformo y
propanol
b) Cromatografa en Capa Fina.-
Con ayuda de la tabla en la parte de datos recopilados y con la relacin:

=

DISOLVENTES MUETRAS Rf
Metanol Absoluto Hojas de 0.96
espinaca con
metanol
absoluto.(molido)
Metanol Absoluto Hojas de 0.86
espinaca con n-
Hexano y
Etanol.(molido)

5. OBSERVACIONES

Durante todo el proceso se pudo observar y confirmar que la cromatografa


es un proceso de separacin de sustancias. Esto sucedi porque la
separacin se basa en que las sustancias investigadas se reparten de
modo diferencial entre una fase estacionaria y una mvil.
El procedimiento no era tan sencillo como pareca, ya que tuvimos un
inconveniente con algunos solventes voltiles y txicos es por eso que
tuvimos que hacer el experimento rpidamente para no perder sustancias.
El uso del solvente adecuado es muy importante, porque depende de este
la ascensin de la fase mvil respecto a la fase estacionaria; si habramos
elegido el disolvente inadecuado el rendimiento no sera mucho.
Es muy importante tomar en cuenta la distancia entre la siembra y el
solvente, cando se lo introduce a un tubo de ensayo; este no debe estar
por debajo del solvente sino por encima para que haya una mejor
ascensin.
Para la cromatografa que realizamos no necesitamos de luz ultravioleta u
otros agentes detectores; esto porque los indicadores ya tenan un color
definido y se los pudo observar.
6. CONCLUSIONES

Se pudo verificar experimentalmente que la cromatografa es una


tcnica muy til para la separacin de mezclas, ya sean simples o
complejas. Aprendimos a poder aplicar las tcnicas de cromatografa en
papel y capa fina.
Es importante la eleccin del disolvente ya que de esta depende
obtener una cromatografa eficiente.
Calculamos los valores de Rf para cada muestra que tenamos,
apoyndonos en la teora.
Se debe realizar la siembra no por debajo del solvente sino por encima
de este, para que la cromatografa sea mucho mejor.
Tener cuidado con los solventes voltiles y txicos.

7. BIBLIOGRAFIA
Guia de Laboratorio de Quimica Organica
Quimica Organica/Lidia Galadovski
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_fonament.htm
l
http://quimica.laguia2000.com/general/cromatografia-en-capa-fina

8. CUESTIONARIO Y UN PASO MS

1) Defnase y descrbase cada uno de los siguientes compuestos:


Desarrollo, elucin, filtracin, adsorcin, adsorbente,
coadyuvante de filtracin, fluorescencia, resina.
Resp.-
Desarrollo.- Es la etapa donde la muestra es arrastrada por el
solvente (fase mvil), el cual se distribuye sobre la placa por medio
de capilaridad.
Elucion.Extraccin de una sustancia absorbida desde un lecho poro
so o columna de cromatografa mediante un chorro delquido o gas o
mediante la aplicacin de calor. El trmino se aplica tambin a la ext
raccin de anticuerpos otrazadores radiactivos de los eritrocitos.
Filtracion.- La filtracin es un mtodo de separacin de mezclas en
la cual se separan los slidos de los lquidos utilizando paredes o
capas porosas, cuyos poros dejan pasar el lquido y dejan pasar el
lquido y retienen los slidos.
Adsorcion.- La adsorcin es un proceso por el
cual tomos, iones o molculas de gases, lquidos o slidos
disueltos son atrapados o retenidos en una superficie,en
contraposicin a la absorcin, que es un fenmeno de volumen. Es
decir, la adsorcin es un proceso en el cual, por ejemplo, un
contaminante soluble (adsorbato) es eliminado del agua mediante el
contacto con una superficie slida (adsorbente).
Adsorvente.- Un adsorbente es un slido que tiene la capacidad de
retener sobre su superficie un componente presente en corrientes
lquidas o gaseosas. Se caracterizan por una alta superficie
especfica y por su inercia qumica frente al medio en el que se van a
utilizar.
Coadyuvante de filtracin.- Existen casos en que los slidos a
filtrar son muy finos y forman una torta densa e impermeable,
obstruyendo rpidamente cualquier medio filtrante que sea
suficientemente fino para retenerlos. La filtracin prctica de estos
materiales exige que la porosidad de la torta aumente de forma que
permita el paso del lquido con una velocidad razonable. Esto se
realiza aadiendo un Coadyuvante de filtracin, tal como tierra de
diatomeas, perlita, celulosa de madera purificada u otros materiales
porosos inertes a la suspensin antes de la filtracin. El coadyuvante
de filtracin puede separarse despus de la torta de filtracin
disolviendo los slidos o quemando el coadyuvante. Si la torta no
tiene valor, se desecha junto con el coadyuvante.
Fluorescencia.- La fluorescencia es un fenmeno por el cual
algunas sustancias tienen la capacidad de absorber luz a una
determinada longitud de onda, por lo general en el rango ultravioleta,
y luego emiten luz en una longitud ms larga. Dicho de otra manera,
absorben fotones con una determinada energa, y liberan fotones
con menor energa. Este proceso es casi inmediato, la luz es recibida
y vuelta a emitir en millonsimas de segundo, por lo tanto podemos
decir que la fluorescencia dura tanto como el estmulo, ya que
cuando ste cesa, tambin cesa el fenmeno de fluorescencia.
Resina.- La resina es una secrecin orgnica que producen
muchas plantas, particularmente los rboles del tipo confera. Es
muy valorada por sus propiedades qumicas y sus usos asociados,
como por ejemplo la produccin de barnices, adhesivos y aditivos
alimenticios. Tambin es un constituyente habitual de perfumes
o incienso.

2) Piensa que un colorante desconocido pueda ser azul de


metileno. Cmo se podra comprobar esta suposicin
utilizando un procedimiento con base en una tcnica
cromatogrfica?
Resp.-P o r m e d i o d e l a separacin de las

diferentes fases adems de utilizar los disolventes


q u e s e a n l o s m s adecuados para disolver este colorante por
medio de cromatografa en capa fina identificando el nmero
de fases correspondiente al azul de metileno y si stas
fases corren igual al ser comparadas con un testigo de azul de
metileno, podra tratarse de la misma sustancia.En otras palabras
calculando el Rf de ambas.
3) Cules son algunos de los mtodos que se pueden emplear
para la localizacin de las bandas de adsorcin, cuando una
mezcla de componentes incoloros se somete a una
cromatografa de este tipo?
Resp.- Aunque los compuestos incoloros pueden formar bandas bien
definidas en una columna de adsorcin cromatografica se necesita la
utilizacin de mtodos especiales para la localizacin de las bandas
de los productos adsorbidos y para poder separarlos
convenientemente. Para la localizacin de las bandas de los
productos adsorbidos se emplea generalmente una lmpara
ultravioleta.

Para la localizacin de las fracciones de una mezcla adsorbida se


pueden emplear tambin mtodos puramente empricos por ejemplo
en la columna se puede diluir con una seria de disolventes de
polaridad gradualmente creciente y el filtrado (eluato) se recogen
pequeas fracciones. La eliminacin del disolvente en cada de una
de estas se administrara el compuesto orgnico que ha sido eluido
en ella , una vez identificado el compuesto mediante un punto de
fusin o alguna otra propiedad se puede mezclar con los productos
idnticos obtenidos en las fracciones prximas.
4) Indquese algunas de las aplicaciones de la cromatografa de
adsorcin en columna.
Resp.-
Las aplicaciones ms relevantes en medio ambiente son:
Anlisis de plaguicidas (insecticidas, herbicidas,
funguicidas..) en aguas suelos,e t c . S u e l e n
empelarse distintos detectores segn la
naturaleza de los compuestos. Es frecuente el
anlisis de pesticidas organoclorados empleando
e l detector de captura electrnica. Para el compuesto
con tomos de P y N se emplea el detector selectivo
NPD. Si contienen S puede usarse el fotomtrico de
llama. A n l i s i s d e d i s o l v e n t e s o r g a n o c l o r a d o s e n
a g u a s e m p l e a n d o e l d e t e c t o r d e captura electrnica.
Anlisis de compuestos orgnicos en general, para los que
se e m p l e a e l d e t e c t o r F I D . A d e m s l a c r o m a t o g r a f a
de gases es muy til para el a n l i s i s d e g a s e s
inorgnicos en muestras de aire. En este caso
casi sin preparacin de la muestra. Para estos
gases suele usarse cromatografa gas-slido (es
uno de los escasos ejemplos). Los slidos
e m p l e a d o s s u e l e n s e p a r a r l o s gases en funcin del
tamao molecular. Como detector suele usarse el de
conductividad trmica

5) Qu significan los trminos hidrfilo y lipfilo?,Por qu los


componentes ms hidrfilos de una mezcla son retenidos ms
fuertemente sobre una columna de gel de slice o de celulosa
que los componentes ms lipfilos, cuando se utiliza Butanol
como disolvente?
Resp.-
Hidrfilo de la palabra griegahydros(agua) yphilia (amistad); es
el comportamiento de todamolcula que tiene afinidad por
el agua. En una disolucin coloide, las partculas hidrfilas
tienden a acercarse y mantener contacto con el agua. Las
molculas hidrfilas son a su vez
lipfobas, es decir no tienen afinidad por los lpidoso grasas y no
se mezclan con ellas.
Lipfilo es el comportamiento de todamolcula que tiene
afinidad por los lpidos. En una disolucin coloide, las partculas
lipfilas tienden a acercarse y mantener contacto con los lpidos.

Porque el gel de slice son especialmente sensibles al contenido


de la humedad pueden ocasiones actuar como catalizador acido,
la disminucin de la actividad o poder adsorbente frente a
muchas orgnicas se debe a que numerosos sitios activos de su
superficie estn bloqueadas por molculas de agua. Puede servir
para adsorber prcticamente a todas las molculas que
presenten algn grupo funcional, adems por ser blancos
permiten distinguir las zonas donde se localizan los compuestos
luego del desarrollo y revelado
9. UN PASO MS
Investigue Qu son las isotermas de adsorcin?
Una isoterma de adsorcin (tambin llamada isoterma de sorcin) describe
ele q u i l i b r i o d e l a adsorcin d e u n m a t e r i a l e n u n a superficie
lmite) a temperatura constante. Representa la cantidad de material unido
ala superficie (el sorbato) como una funcin del material presente en la fase
gas o en la disolucin. Las isotermas de adsorcin se usan con frecuencia
como modelos experimentales, que no hacen afirmaciones sobre los
mecanismos subyacentes y las variables medidas. Se obtienen a partir de
datos de medida por medio de anlisis de regresin.
Qu es una resina de intercambio aninico y que una de intercambio
catinico?
El intercambio inico es un proceso donde una solucin de un electrolito se
pone en contacto con una resina de intercambio inico y los iones activos
de la resina son remplazados por las especies inicas de carga similar del
analito. Ocurre un intercambio de iones de signo igual entre una solucin y
un slido esencialmente insoluble en contacto con la solucin. Las resinas
cambiadoras de iones estn constituidas por una red tridimensional de
cadenas polmeras entrelazadas con cadenas cortas que tienen grupos
funcionales ionizables. Se tiene una fase insoluble con sitios inicos fijos de
una sola carga, muestra que las especies de carga contraria se mueven
libremente a su alrededor se pueden sustituir por otros iones de la misma
carga, a condicin de que se mantenga la electroneutralidad. Una resina
tpica se prepara por polimerizacin de estireno y divinilbenceno.
Cambiadores catinicos
. Los grupos funcionales cidos se pueden introducir fcilmente, tienen el
protn disociado, pero no libres para abandonarla resina, excepto cuando
se sustituyen por otros iones positivos.
Cambiadores aninicos
. Si se introducen grupos funcionales bsicos, la resina intercambia
aniones.Los cambiadores aninicos se preparan con aminas, obtenindose
in grupo amonio, y por tanto, un medio bsico.
Cules son los criterios que se adoptan para seleccionar un solvente
a utilizarse para separar una muestra de diferentes componentes por
cromatografa?
La eleccin correcta de los solventes, es vital para el xito del proceso
separativo, la mezcla a separar se siembra a partir de una solucin, muy
concentrada, es decir, disuelta en un solvente donde es muy soluble.
Cuando se siembra en placa, se deja evaporar el solvente de siembra. El
solvente de desarrollo puede ser, o no, el mismo de siembra, en general no
lo es. Cuando se utiliza la tcnica de columna, la siembra puede efectuarse
con un solvente que ser tambin el primer solvente de desarrollo y de
elucin. Si no lo es, debe recurrirse a la tcnica de sembrado en pastilla. En
columna siempre los solventes de desarrollo se utilizan como eluyentes. El
primer solvente de elucin puede utilizarse para separar ms de un soluto
de la mezcla inicial, pero, generalmente se recurre a una secuencia de
solvente de elucin, con polaridades crecientes. Una secuencia general de
solventes, basadas en su polaridad creciente, es decir, mayor poder
eluyente .Si el solvente es muy polar, ser fuertemente absorbido por los
grnulos de fase fija y el desplazamiento o desorcin de los componentes
absorbidos ser inmediato. El resultado de esta desorcin indiferenciada
ser que la mayora de los solutos corrern con el frente del solvente, y no
se lograra separacin alguna. Por lo tanto, es una condicin general
empezar el desarrollo de la columna con solventes de baja polaridad, para
luego aumentarla lentamente. Aun solventes poco polares logran eluir a
sustancias ms polares que ellos, debido a que el eluyente siempre est
presente en gran exceso con respecto a la muestra y compite con ella por
los sitios activos. Es fundamental, adems, que se utilicen solventes
anhidros y miscibles entre s, de lo contrario, se afecta la resolucin y las
experiencias resultan no reproducibles
Cules son las fases estacionaras ms utilizadas en cromatografa?
Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de cromatografa
es la silica tratada con RMe2SiCl, dnde la R es una cadena alquil tal
como 18 37 o 8 17 . El tiempo de retencin es mayor para las molculas
de naturaleza apolar, mientras que las molculas de carcter polar eluyen
ms rpidamente.

Algunos tipos de intercambiadores inicos son: i) Resinas de poli estireno,


ii)intercambiadores inicos de celulosa y dextranos (geles) y iii) Silica
porosa o vidrio de tamao de poro controlado.

Algunos tipos de intercambiadores inicos son: i) Resinas de poli estireno,


ii)intercambiadores inicos de celulosa y dextranos (geles) y iii) Silica
porosa o vidrio de tamao de poro controlado.

El gel de slice, se utiliza para separar sustancias ms polares (alcoholes,


aminas,cidos carboxlicos).

Cules son algunos criterios que deben tenerse en cuenta en la


eleccin de un adsorbente en una separacin cromatogrfica
determinada?
Debe cumplir lo siguiente:
Que no sea toxico.
Que reaccione con el compuesto a separar.
Insoluble en el disolvente.
No debe reaccionar con el soluto.
No debe actuar como catalizador
10. ANEXOS

EN PAPEL

REACTIVOS A UTILIZAR
PREPARACION DE INSTRUMENTOS A UTILIZAR

PREPARACION DEL PAPEL FILTRO


SIEMBRA DESARROLLO CALCULO DE Rf

CAPA FINA

MOLIDO FILTRADO DECANTADO SIEMBRA

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