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Generalidades:
K = Cs / Cm donde
Los gases mas frecuentes empleados como fase movil son: helio, hidrogeno,
nitrogeno, argon, y una mezcla importante, argon/metano. Para su eleccion,
fundamentalmente debe tenerse en cuenta la columna y la naturaleza del detector
que se va a utilizar. Por ejemplo, para una columna capilar, se escogera por lo
general helio y para un detector de conductividad termica se eligira helio o
hidrogeno; frente al nitrogeno, este detector muestra baja sensibilidad. Un
detector de captura de electrones, requiere de una mezcla de argon-metano. El
gas debe ser INERTE, SECO y PURO.
Permite introducir la muestra sobre el flujo del gas portador, para ser transportada
a la columna. Esta parte de la columna esta construida en acero inoxidable, lo
cual puede producir degradacin de la muestra. En algunos diseos, se usan
pequeas tuberas de vidrio (glass-line), con lo cual se garantiza la estabilidad de
la muestra.
5. Columna:
La columna es una de las partes importantes del cromatgrafo; existen dos clases
de columnas, las empacadas y las capilares. Consisten de un espacio geomtrico,
generalmente un tubo de metal o vidrio, el cual contiene un soporte inerte
recubierto con la fase liquida estacionaria (GLC). All tiene lugar la separacin de
la muestra en sus diferentes componentes.
Los materiales pueden ser: acero inoxidable, aluminio, cobre, vidrio o teflon; los
mas usados osn vidrio y acero inoxidable, considerandose el vidrio como el mejor,
por ser inerte, impermeable, y resistir la temperatura de trabajo; tiene la
desventaja de ser muy fragil. Es el material de eleccion para el analisis de
pesticidas y de esteroides. La forma y las dimensiones de la columna son muy
variadas. Las columnas empacadas tienen un diametro interno de 1/4 a 1/8 de
pulgada y una longitud de 6 a 20 pies. Las capilares tienen un diametro de 0.01 a
0.02 pulgadas y una longitud hasta de 30 metros.
a. Cromatografia Gas-Liquido:
Fase Estacionaria:
Gran rea superficial por unidad de volumen, facilidad de manejo para el llenado
de la columna, tamao y forma de partcula uniformes, preferentemente esfrico,
inerte por naturaleza o por desactivacin y buena resistencia mecnica.
Los soportes solidos mas ampliamente usados son: la tierra de diatomceas, las
esferas de vidrio y el tefln.
Las esferas de vidrio se usan para compuestos muy polares y se recubren con
pelculas muy delgadas de fase liquida.
El tefln, es uno de los polmeros usados como soporte slido, es difcil de recubrir
y no debe usarse mas del 10% de fase liquida para su recubrimiento.
Fase Liquida:
- Baja Volatilidad.
- Punto de ebullicion por lo menos de 100C por encima del punto maximo de
operacion de la columna.
- Buena estabilidad termica.
- Quimicamente inerte
- Presentar propiedad solvente frente a los compuestos que se van a separar.
Existen por lo menos 200 fases liquidas conocidas y la eleccion adecuada es dificil
de lograr. En terminos generales, debe escogerse una fase liquida cuyas
caracteristicas fisicoquimicas sean semejantes a la de la muestra que se va a
analizar y debe ser compatible con el soporte solido.
Hidrocarburos: - Escualeno
- Apiezon L
El porcentaje de fase liquida usada para el recubrimeinto del soporte solido, varia
entre el 3 y el 10% para columnas analiticas y puede llegar hasta el 25% para
columnas preparativas. El porcentaje esta dado en peso, respecto a la proporcion
del soporte solido.
Para lograr columnas eficientes, es neceario que esten bien empacadas con un
soporte solido uniforme recubierto con una pelicula delgada y uniforme de fase
liquida. Peliculas gruesas, disminuyen la eficiencia y las peliculas delgadas la
aumentan, cuando aumenta el flujo de la fase movil.
La de Golay van recubiertas en su interior con una pelicula delgada de fase liquida
y las de Scott llevan una capa fina de soporte solido recubierta de fase liquida. En
estas columnas la fase movil puede fluir libremente, lograndose una caida de
presion notoria. Se usan para el analisis de trazas.
Las columnas nuevas, deben ser acondicionadas por lo menos durante 48 horas,
para lo cual se asegura la columna a la salida del inyector, pero no se asegura la
detector. Se hace circular la fase movil a un flujo aproximado de 17 ml/min. Y se
calienta la columna a una temperatura 50 grados por debajo del valor maximo
indicado para cada columna. Como norma de seguridad, debe hacerse circular la
fase movil antes de empezar el calentamiento de la columna. Nunca debe
suspenderse el paso de la fase movil, antes de enfriar la columna.
6. Detectores:
Entre mas liviano sea el gas portador, es mejor conductor de calor (helio,
hidrogeno). Una vez estabilizada la senal llega al detector la fase movil mas las
moleculas del compuesto separado por la columna, ocasionando un desequilibrio
en la senal electrica, por aumento de la temperatura, debido a que las moleculas
del compuesto separado son mas pesadas que las del gas portador, dificultandose
su interaccion con el filamento. La senal generada (aumento de la resistencia) es
proporcional a la concentracion de la muestra.
Ar + B Ar+ + e-
CH4 + B CH4+ + e-
7. Aplicaciones:
X: compuesto en estudio.
n: parafina con n atomos de carbono.
n + 1: parafina con n + 1 atomos de carbono.
A = h max x W b / 2
A=h x Wh
a. Curva de Calibracion
Existen otras modalidades para la cuantificacion, pero talves las mas usadas son
las senaladas anteriormente.