TIPOS DE CROMATOGRAFIA

Actualmente los mtodos cromatrograficos han demostrado tener una aplicacin muy amplia
en la separacin, purificacin e identificacin de sustancias ya sea orgnicas e inorgnicas
as como sustancias biolgicas de alto peso molecular.

Una de las particularidades de las tcnicas cromatograficas, es que es ms prctica en

comparacin de otras mucho ms costosas y complicadas. Los resultados ms relevantes se
han alcanzado en el campo de los pigmentos vegetales y productos naturales, pero hoy da la
cromatografa es de empleo cotidiano en todos los laboratorios e industrias a nivel mundial
para logra separaciones elegantes y prcticas de mezclas.

CROMATOGRAFIA

Es un mtodo fisicoqumico de separacin de los componentes de una mezcla. Se basa en la

diferente velocidad con que se mueven cada uno de los componentes a travs de una fase
estacionaria o inmvil, transportados por un disolvente o fase mvil, dicho de otra forma, la
separacin de los compuestos se logra por dos fases que intervienen por lo que el
fundamento se basa en el principio de distribucin de fases.

Los mtodos cromatrograficos se clasifican de acuerdo a:

La naturaleza de la fase estacionaria

La naturaleza de la fase mvil

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

Cromatografa de papel

Como su nombre lo indica la separacin se realiza sobre tiras u hojas de papel filtro. El principio
de esta separacin est basado en un reparto liquido-liquido. Es cromatografa L-L porque la fase
estacionaria es el agua contenida en la celulosa del papel. Cuando la fase mvil (solvente
orgnico) pasa sobre la fase estacionaria, el compuesto problema se reparte entre ambas fases.

Ventajas:
 Es barata (se ocupa papel filtro)
til para sustancias muy polares
Es una tcnica eficaz para separar pequeas cantidades de material soluble en agua

Desventajas

Los cromatogramas son lentos (algunos requieren de 16 a 24 horas)

Tcnicas

Cuando la inmigracin es hacia abajo: hay un revelado descendente

Cuando el movimiento de la fase mvil es hacia arriba: revelado ascendente
Cuando es hacia afuera partiendo de un punto central: circular

RF

Es una constante caracterstica de cada compuesto, siempre y cuando la determinacin se

efecte bajo las mismas condiciones. El RF se define como la distancia recorrida por un
compuesto desde su origen hasta su porcin final, dividida entre la distancia recorrida por el
eluyente desde el origen de la mezcla hasta la altura mxima alcanzada por el frente de
dicho solvente.

Cromatografa en capa fina

A pesar que la cromatografa sobe papel es muy verstil, y que sus mtodos se emplean con
mucha frecuencia en todos los campos de la Biologa y la Qumica; el uso de celulosa como
fase estacionaria para las separaciones, representa para ella una gran limitacin tcnica.

Por ser el papel insatisfactorio para todas las separaciones se vio en necesidad de buscar
otras maneras de emplear los adsorbentes, as despus de varios ensayos se desarroll y
adopto mundialmente la tcnica de la cromatografa en capa delgada. Esta tcnica consiste
en la fabricacin de capas finas de adsorbentes sobre placas de vidrio; estas capas se
denominan cromatoplacas o simplemente placas.

Preparacin de las placas

El primer paso es hacer una papilla de adsorbentes (usualmente con agua) y luego se aplica
sobre el soporte rgido. Los soportes originales, y aun los ms usuales son las placas de vidrio
las cuales deben estar bien lavadas con agua y detergente y muy bien secadas. Si se van a
utilizar posteriormente, se conservan en una solucin fuertemente concentrada de
carbonato sdico. La papilla es esparcida sobre la placa procurando que la capa a formar sea
uniforme.

Bosquejo general del mtodo

Los pasos generales son los siguientes:

Preparacin de la placa cromatografica que incluye la preparacin de la papilla, el

extendido de la misma sobre un soporte rgido (inerte) , el secado y activado (por
calentamiento)
Aplicacin de la muestra
Desarrollo del cromatograma
Localizacin e identificacin de la sustancia separada

La fase mvil: seleccin del disolvente

La seleccin depender de la naturaleza del compuesto que se va separar y del material en

que la separacin va a llevarse a cabo. Una regla general es comparar la polaridad de este
con la sustancia que se desea separar. Si un disolvente puro no realiza bien la separacin, se
ensayan mezclas de disolventes.

Cromatografa en columna
Dentro de esta categora se agrupan los principales mtodos de cromatografa donde se
utiliza una columna empacada con algn solido (fase estacionaria o soporte de la misma) a
travs de la cual pasa un lquido (fase mvil) .Los mtodos se agrupan de acuerdo a los
sistemas fsicos involucrados, pero lo comn en ellos es lo prctico de la tcnica empleada.

Las separaciones pueden realizarse por reparto, si el slido implicado acta como soporte
para la fase estacionaria; por adsorcin o intercambio inico, si la fase estacionaria es el
mismo slido.

La cromatografa de gel, aunque es un principio de separacin muy distinto a los de

adsorcin, o de reparto, emplea los mismos mtodos de la cromatografa en columna por lo
que se le puede ubicar dentro de esta.

Bosquejo general del mtodo

Dentro de una columna (de material y dimensiones escogidas) se empaca un slido (seco o en
papilla) que ser la fase estacionaria o el soporte para la misma, cubrindolo con un
solvente (fase mvil). Una pequea cantidad de muestra se coloca en la parte superior del
empacado; cuando el solvente fluye a travs de la columna, se produce la separacin de los
diferentes componentes de la muestra de acuerdo a los diferentes principios de los distintos
tipos de cromatografa. Las fuerzas que actan en la separacin en columna pueden ser
fuerzas de Vander Waals o fuerzas electroestticas.

Tcnica de separacin

Las tcnicas ms utilizadas son:

Elucin simple
Elucin fraccionada
Gradiente de elucin

Localizacin y revelado

Los procedimientos empleados para revelar las placas son anlogos a los utilizados en la
cromatografa en papel. La aplicacin de los reactivos se hace por rociado no por bao, ya
que las placas se estropean fcilmente. El revelado se puede llevar a cabo con agentes
corrosivos, como los cidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, cuando se
trata de compuestos orgnicos.

Otro reactivo de localizacin es el yodo. La placa es expuesta a los vapores de yodo en un

recipiente cerrado, que contiene unos pocos cristales de yodo, por un corto tiempo. El yodo
tiene a concentrarse en los sitios donde estn los compuestos, por lo que aparece una
coloracin violeta con los compuestos insaturados y una coloracin marrn o caf con las
sustancias saturadas (en caso de compuestos orgnicos) dichas coloraciones desaparecen
rpidamente al exponer la placa a la atmosfera. A pesar de no ser un buen agente revelador,
tiene la ventaja de que muchas sustancias no reaccionan qumicamente con l. Otros
mtodos que no afectan a los productos del revelado son la fluorescencia y la radiactividad,
muchas placas llevan sustancias fluorescentes como aparicin de manchas no fluorescentes.
Adems muchas veces los compuestos a separar adsorben la luz ultravioleta apareciendo
como manchas fluorescentes de diferente color al del medio.

Identificacin y valores de RF

La identificacin de las sustancias separadas en capa fina es mejor llevarla a cabo por medio
de agentes qumicos de revelado y por reducciones de coloracin. Los valores de RF son un
poco menos valiosos en cromatografa en capa fina de lo que son en cromatografa de papel,
porque existen factores adicionales variables que influyen en el proceso cromatografico:

La naturaleza del adsorbente

El disolvente
La actividad del adsorbente
El espesor de la capa
La temperatura
El equilibrio dentro de la cmara cromatografica